EA016955B1 - Аминодигидротиазиновые производные в качестве ингибиторов bace для лечения болезни альцгеймера - Google Patents

Abstract

Изобретение предлагает ингибиторы β-секретазы или β-сайта фермента, расщепляющего белок-предшественник амилоида (BACE) формулы Iспособы их применения, а также промежуточные соединения и способы их получения.

Description

способы их применения, а также промежуточные соединения и способы их получения.

Настоящее изобретение относится к области лечения болезни Альцгеймера и других заболеваний и расстройств, в которые вовлечен амилоид-в(Ав)-пептид, нейротоксический и сильно агрегирующий пептидный фрагмент белка-предшественника амилоида (АРР). В частности, настоящее изобретение предлагает эффективные ингибиторы β-секретазы или β-сайта фермента, расщепляющего белокпредшественник амилоида (ВАСЕ). Было показано, что полное или частичное ингибирование ВАСЕ оказывает значительное влияние на связанные с образованием бляшек и зависимые от образования бляшек патологии в моделях на мышах, позволяя предположить, что даже небольшое уменьшение уровней Ав может привести к длительному значительному уменьшению массы бляшек и синаптических нарушений, таким образом обеспечивая достижение значительного терапевтического эффекта.

Известные на сегодняшний день из уровня техники ингибиторы ВАСЕ представляют собой пептидомиметические аналоги переходного состояния, обычно включающие фрагмент гидроксиэтила. Хотя многие из данных соединений представляют собой эффективные ингибиторы ВАСЕ, их высокий молекулярный вес и низкая способность проникать через мембрану делают их неперспективными в качестве лекарственного средства. Поэтому от больших пептидомиметических молекул переходят к малым молекулам, таким как разнообразные гидроксиэтиламиновые каркасы, а также включающие гетероциклы каркасы. См., например, ПигНат и 8йерйегб, Сиггеп! Θρίπίοπ ΐη Игид В18еоуегу & Иеуе1ортеп1, 9(6), 776791 (2006). Некоторые аминотиазиновые соединения были описаны как ингибиторы ВАСЕ в 0О 2007/049532.

Необходимы ингибиторы ВАСЕ, которые действенны и более эффективны, чтобы обеспечить лечение опосредованных Ав-пептидом расстройств, таких как болезнь Альцгеймера. Настоящее изобретение обеспечивает новые действенные и эффективные ингибиторы ВАСЕ.

Настоящее изобретение предлагает соединения формулы I

К¹ представляет собой пиримидинил, пиразинил, необязательно замещенный хлором или фтором, или пиридинил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из хлора, фтора и С₁-С₃-алкокси;

К² в каждом случае независимо выбран из хлора и фтора;

К³ представляет собой водород или С₁-С₄-алкил, необязательно замещенный гидроксилом; и

К⁴ представляет собой водород или С₁-С₃-алкил; или их фармацевтически приемлемую соль.

Настоящее изобретение также предлагает способ лечения болезни Альцгеймера у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I.

Настоящее изобретение дополнительно предлагает способ предотвращения прогрессирования легкого когнитивного нарушения в болезнь Альцгеймера у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I.

Настоящее изобретение дополнительно предлагает способ предотвращения прогрессирования болезни Альцгеймера у пациента, имеющего риск ее развития, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I.

Настоящее изобретение также предлагает способ ингибирования ВАСЕ у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I.

Настоящее изобретение также предлагает способ ингибирования опосредованного β-секретазой расщепления белка-предшественника амилоида, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I.

Настоящее изобретение дополнительно предлагает способ ингибирования продукции Ав-пептида, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I.

Настоящее изобретение также предлагает фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.

Более того, настоящее изобретение предлагает соединение формулы I для применения в терапии, в частности для лечения болезни Альцгеймера или для предотвращения прогрессирования легкого когнитивного нарушения в болезнь Альцгеймера. Настоящее изобретение также предлагает применение соединения формулы I для производства лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера. Настоящее изобретение дополнительно предлагает применение соединения формулы I для производства

- 1 016955 лекарственного средства для предотвращения прогрессирования легкого когнитивного нарушения в болезнь Альцгеймера. Настоящее изобретение также предлагает применение соединения формулы I для производства лекарственного средства для ингибирования ВАСЕ. Настоящее изобретение дополнительно предлагает применение соединения формулы I для производства лекарственного средства для ингибирования продукции Ав-пептида.

Дополнительно, настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, пригодную для лечения болезни Альцгеймера. Более того, настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, пригодную для предотвращения прогрессирования легкого когнитивного нарушения в болезнь Альцгеймера. Настоящее изобретение также предлагает фармацевтическую композицию, пригодную для ингибирования ВАСЕ.

Более того, настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, пригодную для ингибирования опосредованного β-секретазой расщепления белка-предшественника амилоида. Настоящее изобретение также предлагает фармацевтическую композицию, пригодную для лечения состояния, возникшего в результате избыточных уровней Ав-пептида, содержащую соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями.

Основные химические термины, используемые в формулах соединений, упомянутых выше, имеют обычные значения. Например, термин С^С^алкил относится к метилу, этилу, пропилу и изопропилу. Термин СгСф-алкил относится к фрагментам метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, втор-бутила и трет-бутила.

С₁-С₄-алкил, необязательно замещенный гидроксилом, представляет собой С₁-С₄-алкильную группу, в которой один из атомов водорода заменен на молекулу гидроксила.

Термин С₁-С₃-алкокси представляет собой С₁-С₃-алкильную группу, связанную с атомом кислорода, и относится к метокси, этокси, пропокси и изопропокси.

Термин защитная группа азота означает группу, которая стабильна в предполагаемых условиях реакции, а также которую можно избирательно удалить реагентами и условиями реакции, при которых регенерируется амин. Такие группы хорошо известны специалисту и описаны в литературе. См., например, Сгеепе и ШиК Рго1есйуе Сгоирз ίπ Огдашс 8упШе818, третье издание, глава 7, .1оКп ШПеу апб 8опз 1пс. (1999).

Термин ингибирование продукции Ав-пептида в данном описании означает снижение уровней Ав-пептида ίη у1уо у пациента до нормальных, если они избыточны, или ниже нормальных уровней, при необходимости.

Термин эффективное количество соединения формулы I в данном описании означает дозу или дозы соединения формулы I, необходимые для достаточного ингибирования ВАСЕ, чтобы снизить уровни Ав-пептида ΐη у1уо у пациента до нормальных или ниже нормальных уровней.

Термин лечение включает замедление или купирование прогрессирования указанного заболевания у пациента.

Легкое когнитивное нарушение определено как потенциальная предшествующая фаза деменции, связанной с болезнью Альцгеймера, на основании клинического проявления и прогрессирования у пациента легкого когнитивного нарушения в деменцию Альцгеймера с течением времени. (Могпз, е! а1., Агсй. Ыеиго1., 58, 397-405 (2001); Ре1егзеп, е! а1., Агсй. Ыеиго1., 56, 303-308 (1999)). Термин предотвращение прогрессирования легкого когнитивного нарушения в болезнь Альцгеймера включает замедление, купирование или обращение прогрессирования легкого когнитивного нарушения в болезнь Альцгеймера у пациента.

Для специалиста должно быть очевидно, что соединения формулы I могут существовать в таутомерных формах, изображенных на фигуре (1). Если в настоящем описа.нии указан один из отдельных таутомеров соединений формулы I, следует понимать, что упоминание включает обе таутомерные формы и все смеси указанных форм.

Ν ΝΗ

Фигура (1)

- 2 016955

Для специалиста должно быть очевидно, что соединения формулы I состоят из ядра, которое включает по меньшей мере один хиральный центр:

Фигура (2)

Хотя настоящее изобретение охватывает все отдельные энантиомеры, а также смеси энантиомеров указанных соединений, включая рацематы, соединения с абсолютной конфигурацией атома, помеченного 1, показанного на фигуре (2), представляют собой предпочтительные соединения формулы I.

Фигура (3)

Дополнительно, при подходящем замещении соединения с абсолютной конфигурацией атома, помеченного 2, показанного на фигуре (3), представляют собой предпочтительные соединения формулы I.

Дополнительно, для специалиста должно быть очевидно, что можно создать дополнительные хиральные центры в соединениях согласно настоящему изобретению путем выбора некоторых переменных. Настоящее изобретение охватывает все отдельные энантиомеры или диастереомеры, а также смеси энантиомеров и диастереомеров указанных соединений, включая рацематы.

Для специалиста также должно быть очевидно, что обозначения Кана-Ингольда-Прелога (К) или (8) для всех хиральных центров будут изменяться в зависимости от картины замещения конкретного соединения. Отдельные энантиомеры или диастереомеры можно получить с помощью хиральных реагентов или с помощью стереоселективных или стереоспецифичных методик синтеза. В качестве альтернативы, отдельные энантиомеры или диастереомеры можно выделить из смеси с помощью стандартных методик хиральной хроматографии или кристаллизации в любой удобный момент при синтезе соединений согласно настоящему изобретению. Отдельные энантиомеры и диастереомеры соединений согласно настоящему изобретению представляют собой предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения.

Соединения согласно настоящему изобретению представляют собой амины, и они соответствующим образом реагируют с любой из множества неорганических и органических кислот с получением фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты. Фармацевтически приемлемые соли и обычная методика их получения хорошо известны в данной области техники. См., например, Р. 8!аИ1, е! а1. НапбЬоок о£ РйагтасеиДеа1 8аЙ§: Ргорегйез, 8е1есйоп апб Изе, (УСНЛ/Ш11еу-УСН, 2002); 8.М. Вегде, е! а1., Рйагтасеийса1 ЗаИз, 1оигпа1 о£ Рйагтасеийса1 8с1епсе8, уо1. 66, Но. 1, бапиагу 1977. Предпочтительные фармацевтически приемлемые соли представляют собой такие, которые образованы с хлористоводородной кислотой.

Хотя все соединения формулы I представляют собой полезные ингибиторы ВАСЕ, некоторые классы соединений являются предпочтительными. Ниже описаны такие предпочтительные классы:

a) К¹ представляет собой пиримидинил;

b) К¹ представляет собой пиразинил, необязательно замещенный фтором;

c) К¹ представляет собой пиридинил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, в каждом случае независимо выбранными из хлора, фтора или метокси;

б) К¹ представляет собой пиридинил, необязательно замещенный фтором или метокси;

е) К¹ представляет собой пиридинил, необязательно замещенный фтором;

ί) К² представляет собой фтор;

д) К² представляет собой хлор;

И) η представляет собой 0;

ι) η представляет собой 1;

|) η представляет собой 2;

k) К³ представляет собой водород;

l) К³ представляет собой метил, необязательно замещенный гидроксилом;

т) К³ представляет собой метил;

η) К³ представляет собой изопропил, необязательно замещенный гидроксилом;

o) К⁴ представляет собой водород;

p) К⁴ представляет собой метил;

- 3 016955

ς) соединение формулы I имеет абсолютную конфигурацию (8) в хиральном центре, расположенном рядом с атомом азота в аминотиазиновом кольце;

г) соединение формулы I представляет собой свободное основание;

§) соединение формулы I представляет собой фармацевтически приемлемую соль;

1) соединение формулы I представляет собой хлористо-водородную соль.

и) соединение формулы I представляет собой дихлористо-водородную соль.

Предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям формулы I, где К¹ представляет собой пиримидинил, пиридинил, необязательно замещенный одним или двумя заместителя, в каждом случае независимо выбранными из хлора, фтора или метокси, или пиразинил, необязательно замещенный фтором; К² представляет собой хлор или фтор; К³ представляет собой водород, метил, метил, замещенный гидроксилом, или изопропил, замещенный гидроксилом; К⁴ представляет собой водород или метил и η представляет собой 0, 1 или 2; или к фармацевтически приемлемой соли указанных соединений. В указанном варианте осуществления предпочтительно, чтобы абсолютной конфигурацией хирального центра, расположенного рядом с атомом азота аминотиазинового кольца, являлась (8) или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.

Другой предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям формулы I, где К¹ представляет собой пиримидинил, пиридинил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, в каждом случае независимо выбранными из хлора, фтора или метокси, или пиразинил, необязательно замещенный фтором; К² представляет собой хлор или фтор; К³ представляет собой водород, метил, метил, замещенный гидроксилом, или изопропил, замещенный гидроксилом; К⁴ представляет собой водород и η представляет собой 0, 1 или 2; или к фармацевтически приемлемой соли указанных соединений. В указанном варианте осуществления предпочтительно, чтобы абсолютной конфигурацией хирального центра, расположенного рядом с атомом азота аминотиазинового кольца, являлась (8) или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.

Более предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям формулы I, где К¹ представляет собой пиримидинил, пиридинил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, в каждом случае независимо выбранными из хлора или фтора, или пиразинил, необязательно замещенный фтором; К² представляет собой хлор или фтор; К³ представляет собой водород, метил; К⁴ представляет собой водород и η представляет собой 0, 1 или 2; или к фармацевтически приемлемой соли указанных соединений. В указанном варианте осуществления предпочтительно, чтобы абсолютной конфигурацией хирального центра, расположенного рядом с атомом азота аминотиазинового кольца, являлась (8) или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.

Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям формулы I, где К¹ представляет собой пиримидинил, пиридинил, необязательно замещенный фтором или метокси, или пиразинил, необязательно замещенный фтором; К² представляет собой фтор; К³ представляет собой водород или метил; К⁴ представляет собой водород; и η представляет собой 1 или 2; или к фармацевтически приемлемой соли указанных соединений. В указанном варианте осуществления предпочтительно, чтобы абсолютной конфигурацией хирального центра, расположенного рядом с атомом азота аминотиазинового кольца, являлась (8) или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.

Наиболее предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям формулы I, где К¹ представляет собой пиримидинил, пиридинил, необязательно замещенный фтором, или пиразинил, необязательно замещенный фтором; К² представляет собой фтор; К³ представляет собой водород или метил; К⁴ представляет собой водород и η представляет собой 1 или 2; или к фармацевтически приемлемой соли указанных соединений. В указанном варианте осуществления предпочтительно, чтобы абсолютной конфигурацией хирального центра, расположенного рядом с атомом азота аминотиазинового кольца, являлась (8); или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.

Особенно предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям формулы I, где К¹ представляет собой пиримидинил; К² представляет собой фтор; К³ представляет собой водород; К⁴ представляет собой водород и η представляет собой 2; или к фармацевтически приемлемой соли указанных соединений. В указанном варианте осуществления предпочтительно, чтобы абсолютной конфигурацией хирального центра, расположенного рядом с атомом азота аминотиазинового кольца, являлась (8) или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.

Дополнительный особенно предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения, относящийся к соединениям формулы I, представляет собой

или его фармацевтически приемлемую соль.

- 4 016955

Другой особенно предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения, относящийся к соединениям формулы I, представляет собой • Ν.

Ν ΝΗ.

или его фармацевтически приемлемую соль.

Соединения формулы I представляют собой ингибиторы ВАСЕ. Таким образом, настоящее изобретение также предлагает способ ингибирования ВАСЕ у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в указанном лечении, ингибирующего ВАСЕ количества соединения формулы I. Предпочтительно, чтобы пациентом, которого лечат введением соединений формулы I, являлся человек.

В качестве ингибиторов ВАСЕ соединения согласно настоящему изобретению пригодны для подавления продукции Άβ-пептида, а следовательно, для лечения расстройств, возникших в результате избыточных уровней Άβ-пептида вследствие чрезмерной продукции и/или пониженного клиренса Άβ-пептида. Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой применение соединения формулы I для производства лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, которое можно улучшить или предотвратить ингибированием ВАСЕ. Соединения формулы I, следовательно, считают полезными для лечения или предотвращения болезни Альцгеймера, легкого когнитивного нарушения, синдрома Дауна, наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, церебральной амилоидной ангиопатии, других дегенеративных деменций, таких как деменции смешанного васкулярного и дегенеративного происхождения, деменция, связанная с болезнью Паркинсона, деменция, связанная с прогрессирующим надъядерным параличом, связанная с деменцией кортико-базальная дегенерация и тип болезни Альцгеймера с диффузными тельцами Леви.

Соединения согласно настоящему изобретению можно получить множеством способов, известных в данной области техники, некоторые из которых показаны на схемах ниже. Для специалиста в данной области должно быть очевидно, что отдельные стадии на следующих схемах можно изменить, чтобы получить соединения формулы I. Конкретный порядок стадий, необходимых для получения соединений формулы I, зависит от конкретного синтезируемого соединения, исходного соединения и относительной неустойчивости содержащих заместители фрагментов. Продукты каждой стадии на схемах ниже можно выделить с помощью обычных способов, включая экстрагирование, выпаривание, осаждение, хроматографию, фильтрацию, растирание в порошок и кристаллизацию.

Некоторые стереохимические центры остаются точно не определенными, и некоторые заместители были исключены из следующих схем с целью ясности, и они не предполагаются ограничивающими идею схем каким бы то ни было образом. Более того, отдельные изомеры, энантиомеры или диастереомеры можно разделить в любой удобный момент при синтезе соединений формулы I с помощью таких способов, как хиральная хроматография.

Дополнительно, промежуточные соединения, описанные на следующих схемах, содержат множество защитных групп азота. Переменная защитная группа может быть такой же или отличной при каждом появлении в зависимости от конкретных условий реакции и конкретных преобразований, которые нужно осуществить. Условия введения и снятия защитных групп хорошо известны специалисту и описаны в литературе. См., например, Сгеепе и Ши1х, Рго1есйуе Сгоирз ΐπ Огдашс 8уп1йе818, выше.

На схемах ниже все заместители, если не указано иначе, представляют собой определенные ранее заместители. Должно быть очевидно, что соединения формул (1а)-(1е), (2) и (3) можно легко получить с помощью способов, которые хорошо известны и общеприняты в данной области техники, включая способы и методики, аналогичные описанным в настоящем изобретении. Необходимые исходные вещества либо коммерчески доступны, либо их можно получить из коммерчески доступных веществ с помощью способов, хорошо известных специалисту.

- 5 016955

Схема I

На схеме I изображена реакция подходящего соединения любой из формул (1а)-(1е), где К⁵ представляет собой защитную группу азота, такую как ацетил, бензоил или трет-бутоксикарбонил, с подходящим соединением формулы (2) или формулы (3) с получением соединения формулы I после снятия защитных групп с промежуточного соединения (4).

Соединение любой из формул (1а)-(1е) вступает в реакцию сочетания Сузуки с соединением формулы (2) с применением подходящего палладиевого реагента, такого как хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия(11), тетракис-трифенилфосфинпалладий, РбС1₂ или ацетат палладия(11), в присутствии подходящего основания, такого как карбонат цезия, карбонат натрия или карбонат калия. Такие реакции проводят в подходящем растворителе, таком как 1,2-диметоксиэтан, вода, этанол, ацетонитрил, диметилформамид или диоксан или их смеси.

В качестве альтернативы, соединение любой из формул (1а)-(1е) вступает в реакцию сочетания Стилла с соединением формулы (3) с применением подходящего палладиевого реагента, такого как хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия(11), РбС1₂ или тетракис-трифенилфосфинпалладий, в присутствии подходящего вспомогательного вещества, такого как хлорид лития или фторид цезия. Такие реакции проводят в подходящем растворителе, таком как толуол или диметилформамид (ДМФА) или их смеси.

На необязательной стадии фармацевтически приемлемую соль соединения формулы I можно получить путем взаимодействия подходящего свободного основания формулы I с подходящей фармацевтически приемлемой кислотой в подходящем растворителе при стандартных условиях. Дополнительно, получения такой соли можно достичь одновременно со снятием защитной группы азота. Получение такой соли хорошо известно и общепринято в данной области.

Соединения формулы (1а) можно получить двумя способами. На схемах II и III изображены стадии синтеза, начиная с подходящего соединения формулы (ΐ), с получением соединения формулы (1а), где К⁶ представляет собой метил или этил и К⁵ представляет собой подходящую защитную группу азота, такую как ацетил, бензоил или трет-бутоксикарбонил.

Схема II

Ο'-⁸'ΝΗ₂

Τί(ΟΕΙ)₄

1. НС1

2. Восстановление

1. ΒζΝ€3

2. Н+ [I,

3. Введение защитной группы

На схеме II соединение формулы (1) вступает в реакцию с амидом 2-метилпропан-2-сульфиновой кислоты в присутствии Τΐ(ΟΕΐ)₄ в подходящем растворителе, таком как ТГФ, с получением соединения формулы (ΐΐ). Соединение формулы (ΐΐΐ) получают путем добавления п-ВиГ1 к диизопропиламину в подходящем растворителе, таком как ТГФ. Добавляют подходящее ацетатное соединение, а затем избыток триизопропоксида хлортитана. Соединение формулы (и) добавляют к раствору соединения формулы (ΐΐΐ) с получением соединения формулы (ΐν). Снятие защитных групп амина осуществляют с помощью способов, известных в данной области, а затем следует восстановление сложного эфира до спирта с помощью способов, хорошо известных в данной области техники, например, с применением алюмогидрида лития

- 6 016955 или боргидрида лития. К спирту (ν) добавляют бензоилизотиоцианат. Промежуточное соединение обрабатывают НС1, чтобы облегчить как образование тиазина, так и удаление бензоильной группы, а затем присоединяют подходящую защитную группу азота с получением соединения формулы (1а).

Схема III

На схеме III избыток бромида винилмагния добавляют к соединению формулы (ί) в подходящем растворителе, таком как ТГФ, с получением соединения формулы (νί). Полученный спирт (νί) обрабатывают тионилхлоридом или РБгз в подходящем растворителе, таком как гексан или этанол, а затем добавляют тиомочевину с получением соединения формулы (νίί). Соединение формулы (νίί) обрабатывают кислотой при повышенной температуре, чтобы получить рацемический аминотиазин, который защищен подходящей защитной группой азота, и подвергают условиям очистки, таким как хиральная хроматография или кристаллизация, с получением соединения формулы (1 а).

Схема IV

На схеме IV изображены стадии синтеза, начиная с подходящего соединения формулы (ίί), с получением соединения формулы (1Ь). Избыток хлорида 2-метилаллилмагния добавляют к раствору соединения формулы (и) в подходящем растворителе, таком как дихлорметан. Полученное в результате промежуточное соединение обрабатывают раствором НС1 в подходящем растворителе, таком как диоксан, с получением соединения формулы (νίίί). Амин (νίίί) вступает в реакцию с бензоилизотиоцианатом в подходящем растворителе, таком как ТГФ, с получением соединения формулы (ίχ). Обработка соединения формулы (ίχ) избытком йода в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, позволяет получить соединение формулы (х). Наконец, добавление гидрида три-н-бутилолова и азо-бис-изобутиронитрила (АГВЫ) в подходящем растворителе, таком как толуол, позволяет получить соединение формулы (1Ь).

- 7 016955

(ίν)

Схема V

Ή/

К⁴МдХ (χίίί)

Восстановление

1. ) ΒζΝΟΒ

2. ) Η+

3. ) Введение защитной группы

(XV)

На схеме V изображены стадии синтеза для получения соединения формулы (1с), начиная с подходящего соединения формулы (ίν). X представляет собой бром или хлор; К⁵ представляет собой подходящую защитную группу азота; К⁶ представляет собой метил или этил. Соединение (χί) получают путем взаимодействия Ν,Θ-диметилгидроксиламина с избытком бутиллития в подходящем растворителе, таком как ТГФ. Соединение формулы (ίν) добавляют к раствору соединения (χί) с получением соединения формулы (χίί). Добавляют избыток подходящего галогенида магния (χίίί) к раствору соединения формулы (χίί) в подходящем растворителе, таком как ТГФ. Полученный в результате кетон (χίν) восстанавливают до спирта (χν) при условиях, хорошо известных и общепринятых в данной области техники, например, с помощью боргидрида натрия в подходящем растворителе, таком как метанол. К спирту (χν) добавляют бензоилизотиоцианат. Промежуточное соединение обрабатывают НС1, а затем присоединяют подходящую защитную группу азота с получением соединения формулы (1 с).

Схема VI

На семе VI изображены стадии синтеза для получения соединения формулы (1ά) и соединения формулы (1е), начиная с подходящего соединения формулы (χνί), где К⁵ представляет собой подходящую защитную группу азота.

Соединение формулы (χνίί) получают сначала путем взаимодействия бромида (метил)трифенилфосфония и н-бутиллития в подходящем растворителе, таком как ТГФ. В этот раствор медленно добавляют соединение формулы (χνί), например, с помощью воронки для добавления или шприцевого насоса. Соединение формулы (χνίίί) получают путем добавления этилглиоксалата и трифторметансульфоната иттербия к соединению формулы (χνίί) в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил.

- 8 016955

Соединение формулы (χίχ) получают с помощью трехстадийного процесса: сначала спирт соединения формулы (χνίίί) преобразуют в уходящую группу, например, путем реакции с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты в присутствии подходящего аминного основания, такого как 2,6-лутидин или диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе, таком как метиленхлорид. Добавляют избыток тиомочевины, а затем полученное в результате промежуточное соединение добавляют к избытку серной кислоты. Полученную в результате аминогруппу соединения формулы (χίχ) защищают подходящей защитной группой азота с помощью способов, хорошо известных и описанных в данной области техники, с получением соединения формулы (хх). Реакцию соединения формулы (хх) можно осуществить двумя способами с получением либо соединения формулы (16), либо соединения формулы (1е).

Соединение формулы (16) можно получить путем восстановления эфира соединения (хх) с помощью способов, хорошо известных или описанных в данной области техники, например, избытком боргидрида лития в подходящем растворителе, таком как ТГФ.

Соединение формулы (1е) можно получить путем взаимодействия соединения формулы (хх) с избытком хлорида метилмагния в подходящем растворителе, таком как ТГФ.

Примеры синтеза и примеры

Следующие примеры синтеза и примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение.

Названия соединений согласно настоящему изобретению получали с помощью СйетОгает® И11га, версии 10,0.

Сокращения, используемые в настоящем описании, имеют значения согласно А16г1сЫт1са Ле1а, νοί. 17, Νο 1, 1984. Другие сокращения имеют значения, описанные далее:

8СХ представляет собой сильный катионообменник;

са. означает около или приблизительно;

ЕЮАс представляет собой этилацетат;

МеОН представляет собой метанол;

ЭСМ представляет собой дихлорметан;

ТГФ представляет собой тетрагидрофуран;

Е1₂О представляет собой диэтиловый эфир;

(ОЕ1) представляет собой этоксид;

экв. означает эквиваленты;

РВЕТ представляет собой резонансный перенос энергии флуоресценции;

ВГИ представляет собой относительную единицу флуоресценции;

ЭМЕМ представляет собой модифицированную по способу Дульбекко среду Игла;

Р12 представляет собой среду Хама Р12;

РВ8 представляет собой эмбриональную сыворотку теленка.

Результаты масс-спектрометрии, если не указано иначе, получали с помощью ЖХ/МС: колонка ХЬпбде С18 (2,1x50x3,5 мкм) при температуре 50±10°С со скоростью потока 1 мл/мин. Система элюирования представляет собой элюирование от 5 до 100% акрилонитрилом (ΑΟΝ) по весу в 10 мМ бикарбонате аммония (рН 10) в течение 7,0 мин, затем выдерживание в 100% ΑΟΝ в течение 1,0 мин в сочетании с ионизацией электрораспылением (диапазон сканирования 100-800 а.е.м.; шаг 0,2 а.е.м.; фрагментор 80 В; прибавление 1,0; порог 80).

Некоторые соединения очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), способ А: колонка Х1егга® ВР18 (30x300 мм) при температуре окружающей среды со скоростью потока 40 мл/мин. Система элюирования представляет собой или состоит из изократического градиента 0:100 (ацетонитрил: (0,1% НС1 в Н₂О)) в течение 1-5 мин, а затем линейного градиента от 0:100 (ацетонитрил: (0,1% НС1 в Н₂О)) до 50:50 (ацетонитрил: (0,1% НС1 в Н₂О)) в течение 20 мин. Любые другие условия ВЭЖХ в других случаях указаны.

Пример синтеза 1.

[1 -(5-Бром-2,4-дифторфенил)этилиден]амид (В)-2-метилпропан-2-сульфиновой кислоты

К раствору 1-(5-бром-2,4-дифторфенил)этанона (19 г, 64,7 ммоль, 1 экв.) и амида (В)-2метилпропан-2-сульфиновой кислоты (10,2 г, 84,1 ммоль, 0,76 экв.) в ТГФ (0,3 М, 215 мл) добавляли Т1(ОЕ1)₄ (29,5 г, 129 ммоль, 2,0 экв.) одной порцией при температуре окружающей среды. Реакционную смесь нагревали до 70°С и оставляли для перемешивания в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и вливали в воду. Полученную в результате суспензию фильтровали через прокладку из диатомитовой земли и промывали этилацетатом.

- 9 016955

Фильтрат собирали и экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом от гексана до смеси гексан :этилацетат (3:1) в течение 20 мин, с получением указанного в заголовке соединения (выход 81%).

МС (т/ζ): 338, 340 (М+1).

Следующие соединения в табл. 1 получали, по существу, как описано для получения [1-(5-бром-2,4дифторфенил)этилиден] амида (К)-2-метилпропан-2-сульфиновой кислоты.

Таблица 1

Пример синтеза 2.

Метиловый эфир (8)-3-((К)-2-метилпропан-2-сульфиниламино)-3-(5-бром-2,4-дифторфенил)масляной кислоты

н-Бутиллитий (41,9 мл, 105 ммоль, 2 экв.) (2,5 М в гексане) добавляли к охлажденному до -78°С раствору диизопропиламина (10,6 г, 105 ммоль, 2 экв.) в ТГФ (262 мл). Через 15 мин добавляли по каплям метилацетат (7,7 г, 105 ммоль, 2 экв.) и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 30 мин. В реакционную смесь добавляли по каплям раствор триизопропоксида хлортитана (31,6 г, 115 ммоль, 2,2 экв.) в ТГФ (50 мл). После перемешивания в течение 60 мин при -78°С добавляли по каплям раствор [1-(3-бромфенил)этилиден]амида 2-метилпропан-2-сульфиновой кислоты (12,2 г, 40,4 ммоль, 1 экв.) в ТГФ (50 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при -78°С. Реакцию гасили насыщенным раствором хлорида аммония (100 мл), нагревали до температуры окружающей среды и разбавляли водой (100 мл). Полученную в результате суспензию фильтровали через прокладку из диатомитовой земли и промывали этилацетатом. Фильтрат собирали и экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом от смеси гексан:этилацетат (5:1) до смеси гексан: этилацетат (10:7) в течение 20 мин, с получением указанного в заголовке соединения (выход 72%).

МС (т/ζ): 412, 414 (М+1).

Следующие соединения в табл. 2 получали, по существу, как описано для получения метилового эфира (8)-3-((К)-2-метилпропан-2-сульфиниламино)-3-(5-бром-2,4-дифторфенил)масляной кислоты.

- 10 016955

Таблица 2

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
2а	(5)-этил 3—(5—бром—2,4 — дифторфенил)-3-((К)-1,1диметилэтилсульфинамидо)бутаноат	426, 428 (М+1)
2Ь	Метиловый эфир (3)-3-((К)-2метилпропан-2-сульфиниламино)-3-(3бром-4-фторфенил)масляной кислоты	394, 396 (М+1)
2с	Метиловый эфир (3)-3-((В)-2- метилпропан-2-сульфиниламино) -3-- (5бром-2-фторфенил)масляной кислоты	394, 396 (М+1)
26	Метиловый эфир (3)-3- ( (К.) -2метилпропан-2-сульфиниламино)-3фенилмасляной кислоты	376, 378 (М+1)
2е	(3)-метил 3-(5-бром-2-хлорфенил)-3- ( (Ю-1,1- диме тилэ тилсуль финамидо)бут ано а т	410, 412 (М+1)

Пример синтеза 3.

Г идрохлорид (8)-метил-3-амино-3-(2,4-дифторфенил)бутаноата С1Н

К раствору метилового эфира (8)-3-((К)-2-метилпропан-2-сульфиниламино)-3-фенилмасляной кислоты (15,5 г; 37,6 ммоль; 1 экв.) и метанола (100 мл) добавляли одной порцией хлористый водород (4 М в диоксане) (100 мл, 400 ммоль, 11 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки (выход >95%).

МС (т/ζ): 306, 308 (М+1).

Следующие соединения в табл. 3 получали, по существу, как описано для получения гидрохлорида (8)-метил-3-амино-3-(2,4-дифторфенил)бутаноата.

Таблица 3

Номер		Физические
примера	Химическое название	характеристики МС
синтеза	Гидрохлорид (З)-метил-З-		(т/ζ;	)
За	амино-3-(З-бром-4-	290,	292	(М+1)
	фторфенил)бутаноата
	Гидрохлорид (З)-метил-З-
ЗЬ	амино-3-(5-бром-2-	290,	292	(М+1)
	фторфенил)бутаноата
	Гидрохлорид (З)-метил-З-
Зс	амино-3-(4-	272,	274	(М+1)
	фторфенил)бутаноата
	Гидрохлорид (З)-метил-З-
36	амино-3-(5-бром-2-	306,	308	(М+1)
	хлорфенил)бутаноата
Зе	Гидрохлорид (8)-этил-3-амино- 3- (2,4-дифторфенил)бутаноата	322,	324	(М+1)

- 11 016955

Пример синтеза 4.

(8)-3-Амино-3-(5-бром-2,4-дифторфенил)бутан-1-ол

К охлажденному до 0°С раствору гидрохлорида (8)-этил-3-амино-3-(2,4-дифторфенил)бутаноата (40,2 г, 90,5 ммоль, 1 экв.) в ТГФ (180 мл) добавляли алюмогидрид лития (1 М в ТГФ) (118 мл, 118 ммоль) в течение 45 мин, поддерживая внутреннюю температуру реакции ниже 15°С. Реакционную смесь оставляли для нагревания до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и гасили добавлением по каплям воды (4,5 мл), 2 М гидроксида натрия (4,5 мл) и воды (13,6 мл). Полученное в результате твердое вещество удаляли фильтрованием и промывали этилацетатом. Фильтрат сушили над М§80₄ и фильтровали. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки (выход 71%, чистота 73%, как определено с помощью ЖХ/МС).

МС (т/ζ): 280, 282.

Пример синтеза 5.

(8)-3 - Амино-3 -(3-бромфенил)бутан-1 -ол

К охлажденному до 0°С раствору гидрохлорида (8)-метил-3-амино-3-(4-фторфенил)бутаноата (14 г, 38,6 ммоль, 1 экв.) в ТГФ (200 мл) аккуратно добавляли боргидрид лития (1,67 г, 77,1 ммоль, 2 экв.). Через 5 мин реакционную смесь нагревали до 50°С и перемешивали. По завершении реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и гасили путем добавления по каплям воды. Реакционную смесь подкисляли с помощью 1Ν НС1 (100 мл). После перемешивания в течение 1 ч раствор делали основным с помощью 5Ν ΝαΟΗ и экстрагировали дихлорметаном. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 94%).

МС (т/ζ): 244 и 246 (М+1).

Следующие соединения в табл. 4 получали, по существу, в соответствии с получением (8)-3-амино3-(3-бромфенил)бутан-1-ола.

Таблица 4

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
5а	(5)-З-амино-З-(З-бром-4фторфенил)бутан-1-ол	262, 264 (М+1)
5Ь	(5)-З-амино-З-(5-бром-2фторфенил)бутан-1-ол	262, 264 (М+1)
5с	(5)-З-амино-З-(5-бром-2хлорфенил)бутан-1-ол	278, 280 (М+1)

Пример синтеза 6.

(8)-1 -Бензоил-3 -[ 1-(5-бром-2,4-дифторфенил)-3 -гидрокси-1 -метилпропил]тиомочевина

К раствору (8)-3-амино-3-(5-бром-2,4-дифторфенил)бутан-1-ола (9,5 г, 34 ммоль, 1 экв.) в ТГФ (50 мл) добавляли бис-(триметилсилил)трифторацетамид (8,7 г, 34 ммоль, 1 экв.). Через 2 ч добавляли по каплям бензоилизотиоцианат (5,5 г, 34 ммоль, 1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч, гасили водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы экстрагировали 1Ν НС1 и насыщенным водным №С1. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход >95%, чистота 90%, как определено с помощью ЖХ/МС).

МС (т/ζ): 443, 445 (М+1).

Следующие соединения в табл. 5 получали, по существу, как описано для получения (8)-1-бензоил-3-[1-(5-бром-2,4-дифторфенил)-3-гидрокси-1-метилпропил]тиомочевины.

- 12 016955

Таблица 5

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
ба	(3)-1-бензоил-З-[1-(З-бром-4фторфенил)-3-гидрокси-1метилпропил]тиомочевина	425, 427 (М+1)
бЬ	(3)-1-бензоил-З-[1-(5-бром-2фторфенил)-З-гидрокси-1метилпропил]тиомочевина	425, 427 (М+1)
6с	(3)-Ν-(2-(3-бромфенил)-4гидроксибутан-2илкарбамотиоил)пиваламид	359, 361 (М+1)
ба	(3)-Ν-(2-(5-бром-2-хлорфенил)-4гидроксибутан-2илкарбамотиоил)бензамид	441, 443 (М+1)

Пример синтеза 7.

(8)-4-(5-Бром-2,4-дифторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амин

К раствору (8)-1-бензоил-3-[1-(5-бром-2,4-дифторфенил)-3-гидрокси-1-метилпропил]тиомочевины (41 г, 68 ммоль) в 1,4-диоксане (20 мл) добавляли водный раствор НС1 (5Ν, 407 мл, 2,0 моль, 30 экв.). Полученную в результате суспензию нагревали до 100°С. После перемешивания в течение 20 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученную в результате смесь обрабатывали водным раствором НС1 (5Ν, 407 мл, 2,0 моль) и перемешивали при 100°С в течение 18 ч. Суспензию охлаждали до 10°С и рН доводили до 10 с помощью 50% водного раствора ΝαΟΗ. Полученный в результате водный раствор экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя ступенчатым градиентом от смеси гексан: ацетон (4:1) до смеси гексан: ацетон (3:1), с получением указанного в заголовке соединения (выход 57%, чистота 85%, как определено с помощью ЖХ/МС).

МС (т/ζ): 321, 323 (М+1).

Следующие соединения в табл. 6 получали, по существу, в соответствии с получением (8)-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амина.

Таблица 6

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
7а	Гидрохлорид (2)-4-(З-бром-4фторфенил)-4-метил-5,6дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2иламина	303, 305 (М+1)
7Ь	Гидрохлорид (5)-4-(3бромфенил)-4-метил-5,6дигидро-4Н-1,З-тиазин-2-амина	285, 287 (М+1)
7с	(3)-4-(5-бром-2-хлорфенил)-4метил-5,б-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-амин	319, 321 (М+1)

- 13 016955

Пример синтеза 8.

трет-Бутиловый эфир (8)-[4-(5-бром-2-фторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2ил]карбаминовой кислоты.

Раствор (8)-1-бензоил-3-[1-(5-бром-2-фторфенил)-3-гидрокси-1-метилпропил]тиомочевины (0,79 г,

1,8 ммоль) и водной НС1 (5Ν, 25 мл, 71 ммоль) нагревали до 100°С. После перемешивания в течение 6 ч реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и давали отстояться в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного гидрохлорида (8)-4-(5-бром-2-фторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амина.

МС (т/ζ): 303, 305 (М+1).

К раствору гидрохлорида (8)-4-(5-бром-2-фторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амина в ТГФ (30 мл) и насыщенного водного бикарбоната натрия (15 мл) добавляли ди-трет- бутилдикарбонат (0,77 г, 3,5 ммоль). Через 4 ч реакционную смесь разбавляли водой, экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом от гексана до смеси гексан:этилацетат (3:1), с получением указанного в заголовке соединения (выход 69%).

МС (т/ζ): 403, 405 (М+1).

Пример синтеза 9.

(8)-трет-Бутил 4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамат

К раствору (8)-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амина (14,3 г, 39 ммоль 1 экв.) в 1,4-диоксане (190 мл) добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (190 мл) и воду (30 мл) при температуре окружающей среды. Суспензию перемешивали в течение 5 мин, а затем добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (17 г, 78 ммоль, 2 экв.). Через 1 ч реакционную смесь разбавляли водой, экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя смесью гексан: этилацетат (4:1), с получением указанного в заголовке соединения (выход 78%).

МС (т/ζ): 421, 423 (М+1).

Следующие соединения в табл. 7 получали, по существу, как описано для получения (8)-трет-бутил 4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамата.

Таблица 7

Пример синтеза 10.

2-(3-Бромфенил)бут-3-ен-2-ол

К раствору 3-бромацетофенона (50 г, 250 ммоль; 1 экв.) в МТВЕ (375 мл) при 10°С добавляли по каплям бромид винилмагния (0,7 М в ТГФ, 250 ммоль; 360 мл, 1 экв.). Реакционную смесь нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали и гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония. Полученную смесь разбавляли водой, экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя ступенчатым градиен

- 14 016955 том от смеси гексаны :этилацетат (9:1) до смеси гексаны :этилацетат (4:1), с получением указанного в заголовке соединения (40 г, выход 42%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СБС1₃): 1,64 (с, 3Н), 5,18 (д, 1=14 Гц, 1Н), 5,30 (д, 1=23 Гц, 1Н), 6,13 (дд, 1=14,

Гц, 1Н), 7,21 (т, 1=11 Гц, 1Н), 7,36-7,40 (м, 2Н), 7,63 (с, 1Н).

Пример синтеза 11.

Г идрохлорид 2-[3-(3-бромфенил)бут-2-енил]изотиомочевины

ΝΗ

К охлажденному до 0°С раствору 2-(3-бромфенил)бут-3-ен-2-ола (11 г, 29 ммоль, 1 экв.) и гексана (20 мл) добавляли тионилхлорид (6,9 г, 58 ммоль, 2 экв.). Реакционную смесь оставляли для нагревания до температуры окружающей среды, в это время интенсивно выделялся газ. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды до тех пор, пока газ не переставал выделяться, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный в результате остаток растворяли в ацетонитриле (100 мл). Добавляли тиомочевину (2,2 г, 29 ммоль, 1 экв.) и реакционную смесь нагревали до 50°С. Через 2 ч реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды. Полученный в результате осадок собирали фильтрованием и промывали ацетонитрилом с получением указанного в заголовке соединения (выход 90%).

МС (т/ζ): 285, 287 (М+1).

Пример синтеза 12.

4-(3-Бромфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-иламин

Суспензию гидрохлорида 2-[3-(3-бромфенил)бут-2-енил]изотиомочевины (17 г, 52 ммоль) в 12 М НС1 (53 мл, 640 ммоль, 12 экв.) нагревали до 100°С. Через 24 ч раствор охлаждали до температуры окружающей среды. Величину рН раствора доводили до 10 с помощью водного 2Ν ЫаОН и экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 70%).

МС (т/ζ): 285, 287 (М+1).

Пример синтеза 13. №(4-(3-Бромфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-ил)ацетамид

К охлажденному до 0°С раствору 4-(3-бромфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-иламина (10 г, 35 ммоль, 1 экв.) и триэтиламина (4,3 г, 42 ммоль, 1,2 экв.) в дихлорметане (70 мл) добавляли по каплям ацетилхлорид (2,8 г, 35 ммоль, 1 экв.) в течение 5 мин. Реакционную смесь оставляли для нагревания до температуры окружающей среды. Через 1 ч реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и экстрагировали водой. Органические слои разделяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя смесью гексан :этилацетат (1:1), с получением указанного в заголовке соединения (выход 87%).

МС (т/ζ): 327, 329 (М+1).

Пример синтеза 14.

(8)-№[4-(3-Бромфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-ил]ацетамид.

4-(3-Бромфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-иламин (20 г, 61 ммоль) очищали с помощью хирального разделения ВЭЖХ [колонка: 8x32 см С1пга!рак ЛБ; элюент: 60:40:0,2 (изопропиловый спирт: гептаны: диметилэтиламин); поток: 350 мл/мин при УФ 260 нм]. Элюируемый вторым изомер выделяли, чтобы получить энантиомерно обогащенное указанное в заголовке соединение (выход 35%).

МС (т/ζ): 327, 329 (М+1).

- 15 016955

Пример синтеза 15.

трет-Бутиловый эфир (8)-[4-(2,4-дифтор-5-пиримидин-5-илфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н[1,3]тиазин-2-ил]карбаминовой кислоты

К нагретому до 100°С раствору (8)-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-амина (12,6 г, 29,9 ммоль, 1 экв.) в смеси 1,2-диметоксиэтан: вода: этанол (15:7:5, 300 мл) добавляли пиримидин-5-бороновую кислоту (25 г, 203 ммоль, 6,8 экв.), а затем карбонат цезия (58 г, 180 ммоль, 6 экв.) и хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия(П) (4,2 г, 6,0 моль, 0,2 экв.). Через 40 мин реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя ступенчатым градиентом от смеси гексаны :этилацетат (7:3) до смеси гексаны :этилацетат (1:1), с получением указанного в заголовке соединения (выход 67%).

МС (т/ζ): 421 (М+1).

Следующие соединения в табл. 8 получали, по существу, как описано для получения третбутилового эфира (8)-[4-(2,4-дифтор-5-пиримидин-5-илфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2ил]карбаминовой кислоты.

Таблица 8

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (ш/ζ)
15а	(3)-Ν-{4-[3-(5-метоксипиридин-3- ил)фенил]-4-метил-5,6-дигидро-4Н- [1,3]тиазин-2-ил}ацетамид	356 (М+1)
15Ь	(5)-Ν-(4-(3-(5-хлор-2-фторпиридин- 3-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро- 4Н-1,З-тиазин-2-ил)ацетамид	378 (М+1)
15с	Трет-бутиловый эфир (3)-[4-(4фтор-З-пиримидин-5-илфенил)-4метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин2-ил]карбаминовой кислоты	403 (М+1)
15ά	Трет-бутиловый эфир (3)-[4-(2фтор-5-пиримидин-5-илфенил)-4метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин- 2-ил]карбаминовой кислоты	403 (М+1)
15е	(3)-Ν-[4-метил-4-(3-пиримидин-5илфенил)-5,6-дигидро-4Н[1,3]тиазин-2-ил]ацетамид	327 (М+1)
15£	Трет-бутиловый эфир (3)-{4-[4фтор-3- (2-фторпиридин-З-ил)фенил]4-метил-5,6-дигидро-4Н- [1,3]тиазин-2-ил}карбаминовой кислоты	420 (М+1)
15д	Трет-бутиловый эфир (3)-{4-[2,4дифтор-5-(2-фторпиридин-Зил) фенил]-4-метил-5,6-дигидро-4Н[1,3]тиазин-2-ил}карбаминовой кислоты	438 (М+1)

- 16 016955

15Ь (3)-трет-бутил 4-(2,4-дифтор-5-(5фторпиридин-3-ил)фенил)-4-метил5,6-дигидро-4Н-1,З-тиазин-2илкарбамат

438 (М+1)

151

151

15к (3)-4-(2-хлор-5-(5-хлор-2фторпиридин-3-ил)фенил)-4-метил5,6-дигидро-4Н-1,З-тиазин-2-амин¹

N-{4-[3-(5~метоксипиридин-3ил)фенил]-4-метил-5,6-дигидро-4Н[1,3]тиазин-2-ил}ацетамид (8)-Ν-(4-(3-(2-фторпиридин-Зил)фенил)-4-метил-5,б-дигидро-4Н1,З-тиазин-2-ил)ацетамид

370, 372 (М+1)

356 (М+1)

344 (М+1) ¹ трет-Бутоксикарбонильная группа отщепляется при условиях реакции.

Пример синтеза 16.

(8)-4-(3-(2-Фторпиридин-3-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амин

νη₂

К раствору (8)-№(4-(3-(2-фторпиридин-3-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2ил)ацетамида (450 мг, 1,3 ммоль) в метаноле (40 мл) добавляли раствор К₂СО₃ (210 мг, 1,5 ммоль) в смеси метанол: вода (2:1, 15 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток растворяли в этилацетате. Этилацетатный слой промывали водой и насыщенным водным №С1, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Полученный остаток очищали с помощью 8СХ колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (выход 65%).

МС (т/ζ): 302 (М+1).

Пример синтеза 17.

(8)-4-(3-Бром-4-фторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амин

νη₂

К раствору (З)-трет-бутил 4-(3-бром-4-фторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2илкарбамата (1,1 г, 2,7 ммоль) и метанола (10 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (10 мл). Реакционную смесь нагревали до 60°С. Через 15 ч растворитель удаляли при пониженном давлении. К полученному в результате остатку добавляли воду и смесь делали основной с помощью насыщенного бикарбоната натрия. Основную водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу отделяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 62%).

МС (т/ζ): 303, 305 (М+1).

Пример синтеза 18.

(8)-Ы-(4-(3-Бром-4-фторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-ил)ацетамид.

К раствору (8)-4-(3-бром-4-фторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амина (550 мг,

1,8 ммоль, 1,0 экв.) в тетрагидрофуране (20 мл) добавляли пиридин (720 мг, 9,0 ммоль, 5 экв.) и ангидрид уксусной кислоты (220 мг, 2,2 ммоль, 1,2 экв.). Через 10 мин реакционную смесь вливали в воду и водную смесь экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу отделяли и промывали 1Ν НС1 и насыщенным водным №С1, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 83%).

МС (т/ζ) 345, 347 (М+1).

- 17 016955

Пример синтеза 19.

(8)-трет-Бутил 4-(4-фтор-3-(пиразин-2-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамат

Раствор трет-бутилового эфира (8)-[4-(3-бром-4-фторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2ил]карбаминовой кислоты (100 мг, 250 мкмоль, 1 экв.), тетракис-(трифенилфосфин)палладия (14 мг, 12,40 мкмоль, 0,05 экв.) и 2-трибутилстаннилпиразина (96 мг, 250 мкмоль, 1 экв.) в диоксане (3 мл) облучали в лабораторной микроволновой печи до температуры 130°С и выдерживали в течение 20 мин. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом с понижением от гексана до смеси гексан: этилацетат (1:4) в течение 20 мин, с получением указанного в заголовке соединения (выход 14%, чистота 90%, как определено с помощью ЖХ/МС).

МС (т/ζ): 403 (М+1).

Пример синтеза 20.

(8)-Н-(4-(4-Фтор-3-(3-фторпиразин-2-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-ил)ацетамид.

К раствору (8)-Н-(4-(3-бром-4-фторфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-ил)ацетамида (500 мг, 1,5 ммоль, 1 экв.), 2-фтор-3-(трибутилстаннил)пиразина (1,7 г, 4,3 ммоль, 3,0 экв.) в толуоле (15 мл) добавляли хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия(П) (51 мг, 72 мкмоль, 0,05 экв.) и хлорид лития (92 мг, 2,2 ммоль, 1,5 экв.). Реакционную смесь облучали в лабораторной микроволновой печи до температуры 130°С и выдерживали в течение 3 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом с понижением от гексана до смеси гексан :этилацетат (1:1) в течение 20 мин, с получением указанного в заголовке соединения (выход 31%).

МС (т/ζ): 363 (М+1).

Следующее соединение в табл. 9 получали, по существу, в соответствии с получением (8)-Ν-(4-(4фтор-3-(3-фторпиразин-2-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-ил)ацетамида.

Таблица 9

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
20а	(3)-Ν- (4-(2,4-дифтор-5-(3фторпиразин-2-ил)фенил)-4метил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-ил)ацетамид	381 (М+1)

Пример синтеза 21.

(К)-Н-((8)-2-(3-Бром-4-фторфенил)-4-метилпент-4-ен-2-ил)-2-метилпропан-2-сульфинамид К02-Е01905-021-2

К охлажденному до 0°С раствору (К,2)-Н-(1-(3-бром-4-фторфенил)этилиден)-2-метилпропан-2сульфинамида (10 г, 31 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (100 мл) медленно добавляли хлорид 2-метилаллилмагния (0,5 М в ТГФ, 250 мл, 125,92 ммоль, 4 экв.). Через 2 ч реакцию гасили насыщенным хлоридом аммония и экстрагировали этилацетатом. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом от дихлорметана до смеси 10% дихлорметан: этилацетат, с получением указанного в заголовке соединения (выход 35%).

МС (т/ζ): 376, 378 (М+1).

Пример синтеза 22.

(8)-2-(3-Бром-4-фторфенил)-4-метилпент-4-ен-2-амин

К раствору (К)-Н-((8)-2-(3-бром-4-фторфенил)-4-метилпент-4-ен-2-ил)-2-метилпропан-2сульфинамида (1,8 г, 5,1 ммоль, 1 экв.) в 1,4-диоксане (6 мл) добавляли хлористый водород (4,0 М в 1,4-диоксане, 15 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин и растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли насыщенный водный бикарбонат натрия и смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенную органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и

- 18 016955 концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 97%).

¹Н ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц): δ 7,66 (дд, 1Н, 1=6,40, 2,80 Гц), 7,37-7,33 (м, 1Н), 7,02 (т, 1Н, 1=8,40 Гц), 4,83 (с, 1Н), 4,62 (с, 1Н), 2,47 (д, 1Н, 1=13,2 Гц), 2,35 (д, 1Н, 1=13,2 Гц), 1,44 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н).

Пример синтеза 23. (8)-Ы-(2-(3-Бром-4-фторфенил)-4-метилпент-4-ен-2-илкарбамотиоил)бензамид

К раствору (8)-2-(3-бром-4-фторфенил)-4-метилпент-4-ен-2-амина (1,3 г, 4,6 ммоль, 1,0 экв.) в ТГФ (5 мл) добавляли бензоилизотиоцианат (0,63 мл, 4,6 ммоль, 1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом от 20% дихлорметан: гексаны до 50% дихлорметан: гексаны, с получением указанного в заголовке соединения (выход 84%).

МС (т/ζ): 457, 459 (М+23).

Пример синтеза 24.

Ы-((48)-4-(3-Бром-4-фторфенил)-6-(йодметил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2ил)бензамид

К охлажденному до 0°С раствору (δ)-Ν-(2-(3-бром-4-фторфенил)-4-метилпент-4-ен-2илкарбамотиоил)бензамида (1,3 г, 3,0 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (40 мл) добавляли йод (1,5 г,

5,9 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и постепенно нагревали до комнатной температуры. Реакционную смесь гасили насыщенным водным тиосульфатом натрия. Водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенную органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 82%).

МС (т/ζ): 561, 563 (М+1).

Пример синтеза 25.

(8)-№(4-(3-Бром-4-фторфенил)-4,6,6-триметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-ил)бензамид

К раствору №((48)-4-(3-бром-4-фторфенил)-6-(йодметил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин2-ил)бензамида (0,13 г, 0,23 ммоль, 1,0 экв.) в толуоле (1,5 мл) добавляли 2-2'-азо-бис-изобутиронитрил (0,006 г, 0,03 ммоль, 0,15 экв.) и гидрид три-н-бутилолова. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и концентрировали при пониженном давлении. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом от 5% этилацетат: гексаны до 20% этилацетат: гексаны, с получением указанного в заголовке соединения (выход 25%).

МС (т/ζ): 435, 437 (М+1).

Пример синтеза 26. (8)-№(4-(4-Фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-4,6,6-триметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2ил)бензамид

К нагретому до 97°С раствору (8)-№(4-(3-бром-4-фторфенил)-4,6,6-триметил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-ил)бензамида (0,067 г, 0,15 ммоль, 1,0 экв.) в 1,2-диметоксиэтане (1,5 мл), этаноле (0,7 мл) и воде (1,0 мл) добавляли пиримидин-5-бороновую кислоту (0,095 г, 0,77 ммоль, 5,0 экв.), карбонат цезия (0,301 г, 0,92 ммоль, 6,1 экв.) и хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия(П) (0,022 г, 0,03 ммоль, 0,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 97°С в течение 20 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь вливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью колоночной флэшхроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом от дихлорметана до 15% этилацетат: дихлорметан, с получением указанного в заголовке соединения (выход 46%).

МС (т/ζ): 435 (М+1).

- 19 016955

Пример синтеза 27.

(8)-3-(3-Бромфеннл)-№метоксн-№метнл-3-(К)-(2-метнлпропан-2-сульфнниламнно)бутирамид

К охлажденному до -78°С раствору гидрохлорида Ν,Ο-диметилгидроксиламина (12 г, 130 ммоль, 5,0 экв.) в ТГФ (200 мл) добавляли через трубочку н-бутиллитий (100 мл, 250 ммоль, 10 экв.) (2,5 М в гексанах). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин и добавляли по каплям раствор метилового эфира (8)-3-((К)-2-метилпропан-2-сульфиниламино)-3-фенилмасляной кислоты (9,5 г, 25 ммоль, 1,0 экв.) в ТГФ (50 мл). Реакционную смесь нагревали до -60°С и поддерживали при этой температуре в течение 1 ч. Реакцию гасили насыщенным водным хлоридом аммония, разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу экстрагировали водой, насыщенным водным №С1, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 60%).

МС (т/ζ): 405, 407 (М+1).

Следующие соединения в табл. 10 получали, по существу, как описано для получения (8)-3-(3-бромфенил)-№метокси-^метил-3-(К)-(2-метилпропан-2-сульфиниламино)бутирамида.

Таблица 10

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (ш/ζ)
27а	(3)-3-(З-бром-4-фторфенил)-3- ((Ю-1,1- диметилэтилсульфинамидо)-Ν- метокси-Г1-метилбутанамид	423, 425 (М+1)
27Ь	(3)-3-(5-бром-2,4-дифторфенил)-3- ( (Н)-1,1- диметилэтилсульфинамидо)-Ν- метокси-1Я-метилбутанамид	441, 443 (М+1)

Пример синтеза 28.

[(8)-1-(3-бромфенил)-1-метил-3-оксобутил]амид (К)-2-метилпропан-2-сульфиновой кислоты

К охлажденному до -78°С раствору (8)-3-(3-бромфенил)-^метокси-№метил-3-(К)-(2-метилпропан2-сульфиниламино)бутирамида (1,5 г, 3,7 ммоль; 1,0 экв.) в ТГФ (53 мл) добавляли бромид метилмагния (6,2 мл, 18,5 ммоль, 5,0 экв.) и реакционную смесь оставляли для нагревания до температуры окружающей среды. Через 1 ч реакционную смесь охлаждали до -78°С и гасили насыщенным водным хлоридом аммония. Полученную смесь разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход >95%).

МС (т/ζ): 360, 362 (М+1).

Следующие соединения в табл. 11 получали, по существу, как описано для получения [(8)-1-(3бромфенил)-1-метил-3-оксобутил]амида (К)-2-метилпропан-2-сульфиновой кислоты.

- 20 016955

Таблица 11

Номер примера синтеза

Химическое название

Физические характеристики МС (т/ζ)

28а

28Ь (К)-Ν-((3)-2-(З-бром-4фторфенил)-4-оксопентан-2ил)-2-метилпропан-2сульфинамид (К) -Ν-((3)-2-(5-бром-2,4дифторфенил)-4-оксопентан-2ил)-2-метилпропан-2сульфинамид

378, 380 (М+1)

396, 398 (М+1)

Пример синтеза 29.

(К)-Н-((28)-2-(3-Бромфенил)-4-гидроксипентан-2-ил)-2-метилпропан-2-сульфинамид ΡΘ6-Ε01647-028

К раствору (К)-2-метилпропан-2-сульфиновой кислоты [(8)-1-(3-бромфенил)-1-метил-3оксобутил] амида (1,34 г, 3,5 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (20 мл) добавляли терагидроборат натрия (1,4 г, 35 ммоль, 10,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь осторожно гасили водой и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением смеси диастереомеров. Диастереомеры разделяли с помощью хроматографии на силикагеле (120 г), элюируя градиентом от (50:50) этилацетат: гексан до (100:0) этилацетат:гексан. Элюируемый вторым изомер выделяли и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде отдельного диастереомера (выход 45%).

МС (т/ζ): 362, 364 (М+1).

Следующие соединения в табл. 12 получали, по существу, как описано для получения (К)-Ы-((28)-2(3-бромфенил)-4-гидроксипентан-2-ил)-2-метилпропан-2-сульфинамида.

Таблица 12

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
29а	(К)-Ν-((23)-2-(З-бром-4фторфенил)-4-гидроксипентан-2ил)-2-метилпропан-2суль финамид2	380, 382 (М+1)
2 9Ъ	(К) -Ν-((23)-2-(5-бром-2,4дифторфенил)-4-гидроксипентан2-ил)-2-метилпропан-2сульфинамид3	398, 400 (М+1)

2—----------------------------1----------------------------1--------------------------------------------------------1

Указанное в заголовке соединение выделяли и использовали в виде смеси диастереомеров.

³ Указанное в заголовке соединение выделяли и использовали в виде смеси диастереомеров 65:35.

НС1

ΝΗ,ΟΗ ²1

Пример синтеза 30.

(8)-4-Амино-4-(3-бромфенил)пентан-2-ол

ВгРаствор хлористого водорода (5 мл; 13 экв.; 20 ммоль) (4 М в диоксане) и [(8)-1-(3-бромфенил)-3гидрокси-1-метилбутил] амида (К)-2-метилпропан-2-сульфиновой кислоты (570 мг, 1,6 ммоль, 1,0 экв.) в виде отдельного диастереомера перемешивали в течение 5 мин. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток делали основным с помощью насыщенного водного бикарбоната натрия. Водную

- 21 016955 фазу экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения.

МС (т/ζ): 358, 360 (М+1).

Следующие соединения в табл. 13 получали, по существу, как описано для получения (8)-4-амино4-(3-бромфенил)пентан-2-ола.

Таблица 13

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
30а	(45)-4-амино-4-(5-бром-2,4дифторфенил)пентан-2-ол4	380, 382 (М+1)

⁴ Указанное в заголовке соединение выделяли в виде смеси диастереомеров.

Пример синтеза 31.

трет-Бутил-(48,6К)-4-(3-бромфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамат

К раствору (8)-4-амино-4-(3-бромфенил)пентан-2-ола (410 мг, 794 мкмоль) в виде отдельного диастереомера в ТГФ (10 мл) добавляли бис-(триметилсилил)трифторацетамид (204 мг, 0,79 ммоль). Через 1 ч добавляли по каплям бензоилизотиоцианат (259 мг, 1,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. К полученному в результате остатку добавляли 5Ν хлористый водород (25 мл, 125 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 100°С. Через 48 ч растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток распределяли между ТГФ (20 мл) и насыщенным бикарбонатом натрия (10 мл). К смеси добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (347 мг, 1,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 48 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью силикагеля, элюируя линейным градиентом от гексана до смеси гексан :этилацетат (5:2) в течение 20 мин, с получением указанного в заголовке соединения (выход 52%, чистота 70%, как определено с помощью ЖХ/МС).

МС (т/ζ): 399, 401 (М+1).

Пример синтеза 32. трет-Бутил-(48,6К)-4-(3-бром-4-фторфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамат.

Раствор (К)-Щ(28)-2-(3-бром-4-фторфенил)-4-гидроксипентан-2-ил)-2-метилпропан-2-сульфинамида в виде смеси диастереомеров 1:5 (2 г, 1,0 экв.) в диоксане (5 мл) добавляли по каплям к раствору 4Ν хлористого водорода в диоксане (20 мл, 80 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 5 мин. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток делали основным с помощью насыщенного водного бикарбоната натрия. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении.

Полученный в результате остаток растворяли в ТГФ (50 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям бензоилизотиоцианат (1,7 г, 10,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в диоксане (5 мл) и переносили в толстостенный стеклянный реакционный сосуд. В раствор добавляли 5Ν хлористый водород (75 мл, 375 ммоль). Реакционный сосуд накрывали и нагревали до 100°С. Через 24 ч растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток распределяли между ТГФ (20 мл) и насыщенным водным бикарбонатом натрия (10 мл). К смеси добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (1,7 г, 7,9 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии с использованием силикагеля (340 г), элюируя градиентом от (0:100) смеси этилацетат: гексан до (50:50) смеси этилацетат:гексан в течение 25 мин. Элюируемый вторым диастереомер собирали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением 595 мг смеси.

Пример синтеза 32. трет-Бутил-(48,6К)-4-(3-бром-4-фторфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-илкарбамат.

МС (т/ζ): 417, 419 (М+1).

Пример синтеза 32а.

Ю((48,6К)-4-(3-Бром-4-фторфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-ил)бензамид.

МС (т/ζ): 421, 423 (М+1).

- 22 016955

Пример синтеза 33.

(48)-4-(5-Бром-2,4-дифторфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амин

К охлажденному до 0°С раствору (48)-4-амино-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)пентан-2-ола (1,3 г, 4,4 ммоль) в виде смеси диастереомеров в ТГФ (50 мл) добавляли по каплям бензоилизотиоцианат (1,4 г, 1,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в диоксане (5 мл) и переносили в толстостенный стеклянный реакционный сосуд. К смеси добавляли 5Ν хлористый водород (75 мл, 375 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 100°С. Через 36 ч растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток растворяли в воде. Водную смесь экстрагировали этилацетатом. Водную фазу делали основной с помощью 5Ν ХаО11 и экстрагировали смесью 3:1 хлороформ: изопропанол (РРА). Фазу со смесью хлороформ:ГРА сушили над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением ука занного в заголовке соединения.

Этилацетатный экстракт сушили над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный в результате остаток пропускали через уравновешенную МеОН колонку 8СХ, промывали метанолом, а затем элюировали 2Ν ΝΗ₃ в МеОН (50 мл). Смыв 2Ν ΝΗ₃ в МеОН собирали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток объединяли с указанным в заголовке соединением, полученным экстрагированием смесью хлороформ:ГРА, с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси (6К и 68) (48)-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро4Н-1,3-тиазин-2-амина.

(Выход 64%, чистота 80%, как определено с помощью ЖХ/МС).

МС (т/ζ): 335, 337 (М+1).

Пример синтеза 34. трет-Бутил-(48,6К)-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2илкарбамат

К смеси (6К и 68) (48)-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2амина в ТГФ (20 мл) и насыщенного водного бикарбоната натрия (10 мл) добавляли ди-третбутилдикарбонат (900 мг, 4,1 ммоль). Через 2 ч реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью силикагеля, элюируя линейным градиентом от гексана до смеси гексан: этилацетат (4:1) в течение 5 мин. Элюируемый вторым диастереомер собирали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 43%).

МС (т/ζ): 435, 437 (М+1).

Пример синтеза 35.

трет-Бутиловый эфир [(48,6К)-4,6-диметил-4-(3-пиримидин-5-илфенил)-5,6-дигидро-4Н[1,3]тиазин-2-ил]карбаминовой кислоты

К нагретому до 100°С раствору трет-бутил (48,6К)-4-(3-бромфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-

1,3-тиазин-2-илкарбамата в смеси 1,2-диметоксиэтан:вода:этанол [(3:1,5:1), 12 мл] добавляли одной порцией пиримидин-5-бороновую кислоту (128 мг, 5,9 ммоль, 2,5 зкв.), хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия(П) (29 мг, 41 мкмоль, 0,1 экв.) и карбонат цезия (1,24 г, 1,24 ммоль, 3 экв.). Через 20 мин реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли водой и экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя линейным градиентом от гексана до смеси гексан:этилацетат (5:2) в течение 20 мин, с получением указанного в заголовке соединения (выход 39%).

МС (т/ζ): 399 (М+1).

Следующие соединения в табл. 14 получали, по существу, как описано для получения третбутилового эфира [(48,6К)-4,6-диметил-4-(3-пиримидин-5-илфенил)-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2ил]карбаминовой кислоты.

- 23 016955

Таблица 14

Номер примера синтеза

Химическое название

Физические характеристики МС (т/ζ)

35а

35Ь

Трет-бутил (43,6К)-4-(4-фтор3-(пиримидин-5-ил)фенил)-4,6диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-илкарбамат⁵ Трет-бутил (45,6К)-4-(2,4дифтор-5-(пиримидин-5ил)фенил)-4,6-диметил-5,6дигидро-4Н-1,З-тиазин-2илкарбамат

417 (М+1)

435 (М+1) ⁵ Выделен в виде смеси указанного в заголовке соединения и Ν-((48,6Β)-4-(3бром-4-фторфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-ил)бензамида. МС (т/ζ): 421 (М+1).

Пример синтеза 36.

1-Бром-3-(проп-1-ен-2-ил)бензол

Бромид метилтрифенилфосфония (35,7 г, 97,9 ммоль, 1,3 экв.) суспендировали в тетрагидрофуране (100 мл) и охлаждали до 0°С. Медленно добавляли к смеси Ν-бутиллитий (2,5 М в гексанах, 27,0 г, 97,7 ммоль, 39,2 мл, 1,3 экв.) через воронку для добавления. Полученный в результате раствор перемешивали в течение 1 ч при 0°С. Медленно добавляли раствор 3-бромацетофенона (15,0 г, 75,3 ммоль, 10,0 мл, 1,0 экв.) в тетрагидрофуране (50 мл) через воронку для добавления. Полученную в результате смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония. Слои разделяли в разделительной воронке и водную фазу экстрагировали гексанами. Объединенную органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и давали отстояться в течение ночи при комнатной температуре. Органическую фазу сливали с осадка и концентрировали при пониженном давлении. Полученное в результате твердое вещество разбавляли гексанами и фильтровали. Осадок промывали гексанами. Фильтрат концентрировали и полученную в результате смесь очищали с помощью колоночной флэшхроматографии на силикагеле (гексаны) с получением указанного в заголовке соединения (выход 83%).

²Н ЯМР (СЭС13, 400 МГц): δ 7,59 (т, 1Н, 1=1,72 Гц), 7,40-7,36 (м, 2Н), 7,18 (т, 1Н, 1=8 Гц), 5,36 (с, 1Н), 5,12-5,10 (м, 1Н), 2,13-3,11 (м, 3Н).

Следующее соединение в табл. 15 получали, по существу, в соответствии с получением 1-бром-3(проп-1-ен-2-ил)бензола.

Таблица 15

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики
Зба	2-Бром-1-фтор-4-(проп- 1-ен-2-ил)бензол	См. ниже6

^{6 1}Н ЯМР (СОС1₃, 400 МГц): δ 7,61 (дд, 1Н, 1=6,8, 2,2 Гц), 7,36-7,32 (м, 1Н), 7,05 (т, 1Н, 1=8,4 Гц), 5,29 (с, 1Н), 5,09-5,07 (м, 1Н), 2,10-2,09 (м, 3Н).

Пример синтеза 37.

Этил 4-(3-бромфенил)-2-гидроксипент-4-еноат

К раствору 2-бром-1-фтор-4-(проп-1-ен-2-ил)бензола (12,3 г, 62,2 ммоль, 1,0 экв.) в ацетонитриле (124 мл, 0,5 М) добавляли этилглиоксалат (38,1 г, 37 мл, 187 ммоль, 3 экв.) и гидрат трифторметансульфоната иттербия (7,72 г, 12,4 ммоль, 0,2 экв.). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь концентрировали при пониженном давлении и разбавляли диэтиловым эфиром. Полученный в результате раствор промывали дважды водой. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (330 г) двумя партиями, используя гради

- 24 016955 ент 0-100% смеси этилацетат/гексаны, с получением указанного в заголовке соединения (выход 87%).

¹Н ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц): δ 7,53 (т, 1Н, 1=1,9 Гц), 7,41-7,37 (дт, 1Н), 7,33-7,30 (дт, 1Н), 7,18 (т, 1Н, 1=7,6 Гц), 5,37 (с, 1Н), 5,22 (с, 1Н), 4,26-4,21 (м, 1Н), 4,17-3,99 (м, 2Н), 2,99 (дд, 1=14,8, 4,8 Гц), 2,83-2,72 (м, 2Н), 1,23 (т, 3Н, 1=7,6 Гц).

Следующее соединение в табл. 16 получали, по существу, в соответствии с получением этил 4-(3бромфенил)-2-гидроксипент-4-еноата.

Таблица 16

^{7 1}Н ЯМР (СПС1₃, 400 МГц): δ 7,59-7,55 (м, 1Н), 7,32-7,27 (м, 1Н), 7,08-7,03 (м, 1Н), 5,33 (с, 1Н), 5,20 (с, 1Н), 4,26-4,20 (м, 1Н), 4,19-4,02 (м, 2Н), 2,96 (дд, 1=14,8, 4,8 Гц), 2,80-2,73 (м, 2Н), 1,24 (т, 3Н, 1=7,6 Гц).

Пример синтеза 38.

Этил 2-амино-4-(3-бромфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-6-карбоксилат

К раствору этил 4-(3-бромфенил)-2-гидроксипент-4-еноата (5,1 г, 17 ммоль) в ацетонитриле (68 мл) добавляли 2,6-лутидин (2,19 г, 20,4 ммоль, 1,2 экв.). Реакционную смесь охлаждали до 0°С и добавляли по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (3,30 мл, 19,6 ммоль, 1,15 экв.) в течение приблизительно 5 мин. Смесь перемешивали при 0°С в течение 20 мин. Добавляли тиомочевину (2,59 г, 34,0 ммоль, 2 экв.) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры. Через 45 мин смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное в результате вязкое оранжевое масло затем добавляли большой пипеткой в перемешиваемую серную кислоту (17,8 М, 8 мл) при комнатной температуре. Через 20 мин смесь добавляли по каплям в интенсивно перемешиваемый охлажденный до 0°С раствор К₂СО₃ (приблизительно 50 г) в 50 мл Н₂О. Чтобы позволить перемешивание при образовании твердого вещества во время гашения, дополнительно добавляли воду. Желтовато-коричневое/оранжевое твердое вещество собирали путем фильтрования. Твердое вещество оставляли для высыхания на фильтровальной бумаге под потоком воздуха в течение 1 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси диастереомеров, которую использовали без дополнительной очистки.

МС (т/ζ): 357, 359 (М+1).

Следующее соединение в табл. 17 получали, по существу, как описано для получения этил 2-амино4-(3-бромфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-6-карбоксилата.

Таблица 17

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
38а	Этил 2-амино-4-(З-бром-4фторфенил)-4-метил-5,6дигидро-4Н-1,З-тиазин-6карбоксилат8	375, 377 (М+1)

⁸ Рацемические диастереомеры.

- 25 016955

Пример синтеза 39.

Этил 4-(3-бромфенил)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-6карбоксилат

В суспензию этил 2-амино-4-(3-бромфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-6-карбоксилата (6,1 г, 17 ммоль) в 1,4-диоксане (35 мл), воде (18 мл) и насыщенном водном бикарбонате натрия (18 мл) добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (7,42 г, 34,0 ммоль, 2 экв.). Полученную смесь перемешивали в течение приблизительно 60 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали трижды СН₂С1₂. Органический слой сушили над Ыа₂8О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением коричневого масла. Масло очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (150 г), элюируя градиентом от 0 до 100% смеси этилацетат: гексан, с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси диастереомеров (выход 64%).

МС (т/ζ): 457, 459 (М+1).

Следующее соединение в табл. 18 получали, по существу, в соответствии с получением этил 4-(3-бромфенил)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-6-карбоксилата.

Таблица 18

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
39а	Этил 4-(З-бром-4-фторфенил)-2- (трет-бутоксикарбониламино)-4метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин- 6-карбоксилат9	475, 477 (М+1)

⁹ Рацемические диастереомеры.

Пример синтеза 40.

(48,68)-Этил 4-(3-бромфенил)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-

6-карбоксилат

Этил 4-(3-бромфенил)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-6карбоксилат (3,5 г, 7,7 ммоль) очищали с помощью хиральной ВЭЖХ в две стадии: (колонка: СЫга1ее1 ΟΙ 8x32 см; элюент: 1:3 (3А спирт: гептан); поток: 400 мл/мин при УФ 240 нм), при этом брали пики 1 и 2 из 3; затем пики 1 и 2 дополнительно очищали с помощью хиральной хроматографии (колонка: СЫга1ее1 ΟΌ 8x32 см; элюент 1:9 (изопропиловый спирт: гептан); поток: 400 мл/мин при УФ 240 нм). Выделение элюируемого вторым изомера позволяло получить указанное в заголовке соединение после концентрирования фракций при пониженном давлении (выход 14%).

Пример синтеза 41.

(+/-) трет-Бутил-(48,68)-4-(3-бромфенил)-6-(гидроксиметил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2илкарбамат

Г о ^ΒΓχθ'·ΤΝ^Ν^°

К охлажденному до 0°С раствору этил 4-(3-бромфенил)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метил-

5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-6-карбоксилата (2,0 г, 4,4 ммоль) в тетрагидрофуране (87 мл) и этаноле (25 мл) добавляли боргидрид лития (289 мг, 13,1 ммоль, 3 экв.). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным ЯН₄С1. Слои разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным водным ЫаС1 и сушили над Ыа₂8О₄. Смесь фильтровали и концентрировали с получением светло-желтого масла. Масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (120 г), используя градиент от 0 до 100% смеси этилацетат: гексан, с получением указанного в заголовке соединения (выход 29%).

- 26 016955

МС (т/ζ): 415, 417 (М+1).

Пример синтеза 42.

трет-Бутил (48,68)-4-(3-бромфенил)-6-(гидроксиметил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2илкарбамат.

(+/-) трет-Бутил (48,68)-4-(3-бромфенил)-6-(гидроксиметил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2илкарбамат (870 мг, 2,1 ммоль) очищали путем хирального разделения ВЭЖХ: (колонка: СЫга1рак АЭ 8x36 смх20 мкм; элюент: 100% 3А этиловый спирт; поток: 400 мл/мин при УФ 250 нм). Элюируемый вторым изомер выделяли, чтобы получить энантиомерно обогащенное указанное в заголовке соединение (выход 38,5%).

МС (т/ζ): 415, 417 (М+1).

Пример синтеза 43.

(+/-) трет-Бутил (48,68)-6-(гидроксиметил)-4-метил-4-(3-(пиримидин-5-ил)фенил)-5,6-дигидро-4Н-

1,3-тиазин-2-илкарбамат

К нагретому до 110°С раствору (+/-) трет-бутил (48,68)-4-(3-бромфенил)-6-(гидроксиметил)-4метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамата (150 мг, 0,36 ммоль) в 1,2-диметоксиэтане (4,5 мл), этаноле (1,5 мл) и воде (2,3 мл) добавляли пиримидин-5-бороновую кислоту (112 мг, 0,90 ммоль, 2,5 экв.), карбонат цезия (353 мг, 1,08 ммоль, 3 экв.) и хлорид бис-(трифенилфосфин)палладия(11) (25 мг, 0,036 ммоль, 0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 110°С. Через 20 мин реакционную смесь разбавляли БЮАс и Η₂Ο. Слои разделяли и водную фазу экстрагировали БЮАс. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (5% МеОН/ЭСМ) с получением указанного в заголовке соединения (выход 29%).

МС (т/ζ): 415 (М+1).

Следующее соединение в табл. 19 получали, по существу, в соответствии с получением (+/-) третбутил (48,68)-6-(гидроксиметил)-4-метил-4-(3-(пиримидин-5-ил)фенил)-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2илкарбамата.

Таблица 19

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
43а	Трет-бутил (43, 63)-4-(3- бромфенил)-6-(гидроксиметил)-4метил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-илкарбамат	415 (М+1)

Пример синтеза 44.

(+/-) трет-Бутил (48,68)-4-(3-бромфенил)-6-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-илкарбамат

К охлажденному до 0°С раствору этил 2-амино-4-(3-бромфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-6-карбоксилата (250 мг, 0,55 ммоль) в тетрагидрофуране (5,5 мл) добавляли хлорид метилмагния (0,58 мл, 1,75 ммоль, 3,2 экв.). Через 15 мин добавляли дополнительное количество хлорида метилмагния (0,38 мл, 1,2 ммоль, 2 экв.). Через 30 мин реакционную смесь гасили насыщенным водным N11.|С1 и разбавляли этилацетатом. Слои разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным водным №С1, сушили над №₂8Ο₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (80 г), элюируя градиентом от 0 до 100% смеси этилацетат:гексаны, с получением указанного в заголовке соединения (выход 26%).

МС (т/ζ): 443, 445 (М+1).

Следующие соединения в табл. 20 получали, по существу, в соответствии с получением (+/-) третбутил (48,68)-4-(3-бромфенил)-6-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамата.

- 27 016955

Таблица 20

Номер примера синтеза

Химическое название

Физические характеристики

МС (ш/ζ)

44а

44Ь (+/-) Трет-бутил (45,65)-4-(3бром-4-фторфенил)-6-(2гидроксипропан-2-ил)-4-метил-5,6дигидро-4Н-1,З-тиазин-2илкарбамат

Трет-бутил (45,65)-4-(3бромфенил) -6- (2-гидроксипропан:-2ил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-илкарбамат

461, 463 (М+1)

443, 445 (М+1)

Пример синтеза 45.

(+/-) трет-Бутил (48,68)-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-6-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метил-

5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамат

К нагретому до 100°С раствору трет-бутил (48,68)-4-(3-бром-4-фторфенил)-6-(2-гидроксипропан-2ил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамата (1,11 г, 2,41 ммоль, 1,0 экв.) в 1,2-диметоксиэтане (22 мл) и воде (7 мл) добавляли пиримидин-5-бороновую кислоту (1,2 г, 9,6 ммоль, 4 экв.), хлорид бис(трифенилфосфин)палладия(П) (508 мг, 0,723 ммоль, 0,3 экв.) и карбонат цезия (2,36 г, 7,2 ммоль, 3 экв.). Через 25 мин смесь охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс и распределяли между ЕЮАс и водой. Водную фазу экстрагировали 3 раза ЕЮАс. Объединенную органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (80 г), элюируя ЕЮАс, с получением указанного в заголовке соединения (460 мг, выход 41%).

МС (т/ζ): 461 (М+1).

Пример синтеза 45а.

(+/-) 2-((48,68)-2-Амино-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-

6-ил)пропан-2-ола (145 мг).

МС (т/ζ): 361 (М+1).

Следующие соединения в табл. 21 получали, по существу, в соответствии с получением (+/-) третбутил (48,68)-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-6-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-

1,3-тиазин-2-илкарбамата.

Таблица 21

Номер примера синтеза	Химическое название	Физические характеристики МС (ш/ζ)
45Ь	( + /-) Трет-бутил (45, 65)-6-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метил-4- (3-(пиримидин-5-ил)фенил)-5,6дигидро-4Н-1,З-тиазин-2илкарбамат10	443 (М+1)
45с	Трет-бутил (45, 65)-6-(2гидроксипропан-2-ил)-4-метил-4(3-(пиримидин-5-ил)фенил)-5, 6дигидро-4Н-1,З-тиазин-2илкарбамат	443 (М+1)

¹⁰ Рацемическое соединение, полученное и очищенное с помощью хиральной хроматографии при условиях, описанных в примере синтеза 46.

- 28 016955

Пример синтеза 46.

трет-Бутил (48,68)-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-6-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метил-5,6дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамат

(+/-) трет-Бутил (48,68)-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5ил)фенил)-6-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метил-

5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамат (455 мг, 0,99 ммоль) очищали с помощью хирального разделения ВЭЖХ (колонка: СЫга1рак ΆΏ-Η 2,1x25 смх5 мкм; элюент: 20% ЕЮН/СО₂; поток: 70 мл/мин при УФ 225 нм). Элюируемый вторым изомер выделяли, чтобы получить энантиомерно обогащенное указанное в заголовке соединение (29%).

МС (т/ζ): 461 (М+1).

Примеры

Пример 1.

(8)-4-(3-(2-Фторпиридин-3-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амин, дихлористоводородная соль

К раствору (8)-4-(3-(2-фторпиридин-3-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амина (160 мг, 0,531 ммоль) в ТГФ (4 мл) добавляли насыщенный раствор НС1 в диоксане (2 мл) при 0°С. Реакционную смесь оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 4 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное в результате твердое вещество многократно промывали безводным эфиром и сушили при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 87%).

МС (т/ζ): 302 (М+1).

Пример 2.

Дигидрохлорид (8)-4-[3-(5-хлор-2-фторпиридин-3-ил)фенил]-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин2-иламина 2785443, РО6-Е01268-074

С1

Раствор (8)-№{4-[3-(5-хлор-2-фторпиридин-3-ил)фенил]-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2ил} ацетамида (430 мг, 1,1 ммоль) в трифторуксусной кислоте (50 мл) и метаноле (50 мл) перемешивали в течение 8 ч при 60°С. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде и нейтрализовали с помощью насыщенного бикарбоната и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом. Полученный в результате амин растворяли в дихлорметане и барботировали раствор газообразным НС1 в течение 30 с. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (52%).

МС (т/ζ): 336 (М+1).

Следующие соединения в табл. 22 получали, по существу, как описано для получения дигидрохлорида (8)-4-[3-(5-хлор-2-фторпиридин-3-ил)фенил]-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-иламина.

- 29 016955

Таблица 22

Номер примера	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
3	Гидрохлорид (3)—4-(4—фтор-3—(3 — фторпиразин-2-ил)фенил)-4метил-5,6-дигидро-4Η-1,3тиазин-2-амина11	321 (М+1)
4	Гидрохлорид (3)-4-(2,4-дифтор- 5-(З-фторпиразин-2-ил)фенил)-4метил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-амина11	339 (М+1)

¹¹ Очищен с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ: способ А.

Пример 5.

(8)-4-(2,4-Дифтор-5-пиримидин-5-илфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-иламин

В раствор трет-бутилового эфира (8)-[4-(2,4-дифтор-5-пиримидин-5-илфенил)-4-метил-5,6-дигидро4Н-[1,3]тиазин-2-ил]карбаминовой кислоты (263 мг, 625 мкмоль) в дихлорметане (15 мл) при температуре окружающей среды барботировали газообразный НС1 в течение 1 мин. Реакционную смесь закрывали мембраной и перемешивали 18 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход >95%).

МС (т/ζ): 321 (М+1).

Следующие соединения в табл. 23 получали, по существу, в соответствии с получением (8)-4-(2,4дифтор-5-пиримидин-5-илфенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-иламина.

- 30 016955

Таблица 23

Номер примера	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
6	Дигидрохлорид (3)-4-(4-фтор-Зпиримидин-5-илфенил)-4-метил5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2иламина	303 (М+1)
7	Дигидрохлорид (3)-4-(2-фтор-5пиримидин-5-илфенил)-4-метил5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2иламина	303 (М+1)
8	Гидрохлорид (3)-4-[4-фтор-З-(2фторпиридин-3-ил)фенил]-4-метил5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2иламина12	320 (М+1)
9	Гидрохлорид (3)-4-(2,4-дифтор-5(2-фторпиридин-З-ил)фенил)-4метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин2-амина13	338 (М+1)
10	Гидрохлорид (3)—4—(2—хлор—5—(5— хлор-2-фторпиридин-З-ил)фенил)4-метил-5,6-дигидро-4Η-1,3тиазин-2-амина14	370, 372 (М+1)
11	Дигидрохлорид (3)-4-(2,4-дифтор- 5-(5-фторпиридин-З-ил)фенил)-4метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин2-амина	338 (М+1)
12 13 14 15 16	Дигидрохлорид (8)—4—(4—фтор—3— (пиразин-2-ил)фенил)-4-метил- 5,6-дигидро-4Н-1,З-тиазин-2амина13 (+/-) ( (43, 68)-2-амино-4-метил- 4-(3-(пиримидин-5-ил)фенил)-5,6дигидро-4Н-1,З-тиазин-6ил)метанол ((43,63)-2-амино-4-метил-4-(3(пиримидин-5-ил)фенил)-5,6дигидро-4Н-1,З-тиазин-6ил)метанол Дигидрохлорид (43, 6К.)-4, 6диметил-4-(3-(пиримидин-5- ил)фенил)-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-амина13 Дигидрохлорид (4 5,6К)-4-(2,4дифтор-5-(пиримидин-5-ил)фенил)4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2 -амина13	303 (М+1) 315 (М+1) 315 (М+1) 299 (М+1) 335 (М+1)
17	( + /-) 2-( (43, 63)-2-амино-4-(4фтор-3- (пиримидин-5-ил)фенил)-4метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин- 6-ил)пропан-2-ол	361 (М+1)

¹² Очищен путем кристаллизации из ацетонитрила.

¹³ Очищен с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ, способ А.

¹⁴ 1 М НС1 в эфире использовали вместо НС1 (газ).

- 31 016955

Пример 18.

Дигидрохлорид (8)-4-метил-4-(3-пиримидин-5-илфенил)-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-иламина.

Раствор (8)-Ы-[4-метил-4-(3-пиримидин-5-илфенил)-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-ил]ацетамида (2,7 г, 8,3 ммоль, 1,0 экв.) перемешивали в 5Ν хлористом водороде (50 мл, 250 ммоль, 30 экв.) при 100°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный в результате остаток растворяли в воде и экстрагировали этилацетатом. Водную фазу нейтрализовали насыщенным водным бикарбонатом натрия и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток фильтровали через прокладку из силикагеля и промывали этилацетатом. Прокладку из силикагеля затем промывали этилацетатом, содержащим этилацетат и 10% изопропиламина. Смыв 10% изопропиламином в этилацетате собирали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный в результате свободный амин растворяли в растворе 100 мл воды, содержащей 14 мл 1Ν НС1. Полученный в результате раствор лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения (выход 81%).

МС (т/ζ): 285 (М+1).

Следующие соединения в табл. 24 получали, по существу, как описано для получения дигидрохлорида (8)-4-метил-4-(3-пиримидин-5-илфенил)-5,6-дигидро-4Н-[1,3]тиазин-2-иламина.

Таблица 24

Номер примера	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
19	Дигидрохлорид (3)-4-[3-(5метоксипиридин-3-ил)фенил]-4метил-5,б-дигидро-4Н[1,3] тиазин-2-иламина15	314 (М+1)
20	Дигидрохлорид 4 - [ 3 - (5 метоксипиридин-3-ил)фенил]-4метил-5,6-дигидро-4Н[1,3]тиазин-2-иламина	314 (М+1)
21	(3)-4- (4-фтор-З-(пиримидин-5ил)фенил)-4,6,6-триметил-5,6дигидро-4Н-1,З-тиазин-2-амин16	331 (М+1)

¹⁵ Очищен путем кристаллизации неочищенной НС1-соли из 2-5% метанола в ацетонитриле.

¹⁶ Очищен с помощью ВЭЖХ, способ А.

Пример 22.

Дигидрохлорид (48,6К)-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3тиазин-2-амина.

В смесь 1:1 трет-бутил (48, 6К)-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-

1,3-тиазин-2-илкарбамата и Ы-((48,6К)-4-(3-бром-4-фторфенил)-4,6-диметил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин2-ил)бензамида (360 мг) в дихлорметане (10 мл) при температуре окружающей среды барботировали газообразный НС1 в течение 1 мин. Реакционную смесь закрывали мембраной и перемешивали 18 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный в результате остаток растворяли в воде и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением Ы-((48,6К)-4-(3-бром-4-фторфенил)-4,6-диметил-

5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-ил)бензамида в виде остатка. К полученному в результате остатку добавляли 5Ν НС1 (5 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°С в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения.

Водную фазу из исходного этилацетатного смыва нейтрализовали с помощью насыщенного бикарбоната натрия и экстрагировали смесью (3:1) СНС1₃: изопропиловый спирт. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Этот продукт объединяли с неочищенным продуктом и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ: колонка Х1егга® КР18 (30x300 мм) при температуре окружающей среды и скорости потока 40 мл/мин. Система элюирования состояла из изократического градиента 0:100 (ацетонитрил: (0,1% НС1 в Н2О)) в течение 1-5 мин, а затем линейного градиента от 10:90 (ацетонитрил: (0,1% НС1 в Н₂О)) до 30:70 (ацетонитрил: (0,1% НС1 в Н₂О)) в течение 20 мин. Фракции объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (выход 50%).

МС (т/ζ): 317 (М+1).

- 32 016955

Пример 23.

(+/-) 2-((48,68)-2-Амино-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-

6-ил)пропан-2-ол.

Газообразный хлористый водород барботировали через раствор (+/-) трет-бутил (48,68)-6-(2гидроксипропан-2-ил)-4-метил-4-(3-(пиримидин-5-ил)фенил)-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамата (33 мг, 0,075 ммоль) в дихлорметане (5 мл) и полученную в результате смесь закрывали и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали путем пропускания через уравновешенную МеОН колонку 8СХ, элюируя 7Ν ΝΗ₃ в МеОН. Полученное в результате свободное основание растворяли в МеОН и добавляли 1Ν НС1 в Е1₂О (приблизительно 5 экв.). Смесь концентрировали и дважды выпаривали совместно с Е1₂О с получением указанного в заголовке соединения (выход 87%).

МС (т/ζ): 343 (М+1).

Пример 24.

2-((48,68)-2-Амино-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-6ил)пропан-2-ол

Раствор трет-бутил (48,68)-6-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метил-4-(3-(пиримидин-5-ил)фенил)-5,6дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-илкарбамата (221 мг, 0,50 ммоль) в трифторуксусной кислоте (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 80 мин. Смесь добавляли непосредственно в уравновешенную МеОН колонку 8СХ. Колонку промывали МеОН (100 мл) и продукт элюировали 7Ν Ν Е в МеОН (100 мл). Раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли СН₂С1₂ и барботировали через него НС1 (газ) в течение 5 мин. Реакционную смесь концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (выход 67,5%).

МС (т/ζ): 343 (М+1).

Следующее соединение в табл. 25 получали, по существу, как описано для получения 2-((48,68)-2амино-4-(4-фтор-3-(пиримидин-5-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-6-ил)пропан-2-ола.

Таблица 25

Номер примера	Химическое название	Физические характеристики МС (т/ζ)
25	2-((43,63)-2-амино-4-(4-фтор-З(пиримидин-5-ил)фенил)-4-метил- 5,6-дигидро-4Η-1,З-тиазин-6- ил)пропан-2-ол	362 (М+1)

Методики анализов в условиях ΐη νϊΐτο.

Для ферментативных и клеточных анализов ΐη νϊΐτο исследуемые соединения получали в ДМСО с приготовлением 10 мМ исходного раствора. Исходный раствор подвергали серийному разведению в ДМСО с получением десятиточечной кривой разведения с конечными концентрациями соединения в диапазоне от 10 мМ до 1 пМ в 96-луночном круглодонном планшете перед проведением ферментативных и цельноклеточных тестов ΐη νϊΐτο.

Анализы в условиях ϊη νϊΐτο на ингибирование протеазы.

Анализ ЕКЕТ для ВАСЕ.

Серийные разведения исследуемых соединений получали, как описано выше. Соединения дополнительно разводили в 20 раз в буфере КН₂РО₄. 10 мкл каждого разведения добавляли в каждую лунку в рядах с А по Н соответствующего черного планшета со слабым связыванием белка, содержащего реакционную смесь (25 мкл 50 мМ КН₂РО₄, рН 4,6, 1 мМ ТКIТΟN® Х-100, 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 15 мкМ субстрата для ЕКЕТ) (см. Уэп^, е1 а1., I. ХеигосКепизНу, 91(6) 1249-59 (2004)). Содержимое хорошо смешивали на планшетном шейкере в течение 10 мин. 15 мкл из 200 пМ ВАСЕ (1-460): Ес человека (см. Уаззег, е1 а1., 8с^еηсе, 286, 735-741 (1999)) в буфере КН₂РО₄ добавляли в планшет, содержащий субстрат и исследуемые соединения, чтобы инициировать реакцию. Относительные единицы флуоресценции (КЕИ) смеси в момент времени 0 регистрировали при длине волны возбуждения 355 нм и длине волны излучения 460 нм, после быстрого смешивания на планшетном шейкере. Реакционный планшет накрывали алюминиевой фольгой и хранили в темном увлажненном термостате при комнатной температуре в течение 16-24 ч. КЕи по окончании инкубирования регистрировали при тех же параметрах возбуждения и излучения. Различие в КЕи в момент времени 0 и по окончании инкубирования представляло собой активность ВАСЕ при обработке соединением. Различия в КЕи наносили на

- 33 016955 график в зависимости от концентрации ингибитора и кривую аппроксимировали с помощью четырехпараметрического логистического уравнения с получением значений ЕС₅₀ и Κ\₀ (см. 81пйа, е! а1., \а1иге, 402, 537-540 (2000)).

Соединения, приведенные в качестве примера в данном изобретении, тестировали, по существу, как описано выше, и они проявили значение Κ'\₀ для ВАСЕ ниже чем 1 мкМ. Следующие приведенные в качестве примера соединения тестировали, по существу, как описано выше, и они проявили следующую активность по отношению к ВАСЕ.

Таблица 26

Эти результаты демонстрировали то, что соединения из табл. 26 ингибируют ферментативную активность очищенного рекомбинантного ВАСЕ ΐη νΐίτο.

Экспрессия ВАСЕ человека.

ВАСЕ человека (номер доступа: АР190725) клонировали из всей кДНК головного мозга с помощью ПЦР при комнатной температуре. Последовательности нуклеотидов, соответствующие последовательностям аминокислот #1-460, вставляли в кДНК, кодирующую полипептид человека Σ§Ο₁ (Ре) (Уаззаг е! а1. 1999). Этот слитый белок ВАСЕ (1-460) и Рс человека, названный РиВАСЕ:Рс, вставляли в вектор р1В02. ВАСЕ (1-460):Рс человека (РиВАСЕ:Рс) временно экспрессировали в клетках НЕК 293. 250 мкг кДНК каждой конструкции смешивали с реагентом Ридепе 6 и добавляли к 1 л клеток НЕК 293. Через 4 дня после трансфекции кондиционированную среду собирали для очистки.

Очистка РиВАСЕ:Рс.

РиВАСЕ:Рс очищали с помощью хроматографии на белке А.

Фермент хранили при -80°С в малых аликвотах.

Цельноклеточные исследования для измерения ингибирования бета-секретазной активности. Цельноклеточное исследование с НЕК 2938же.

В обычном цельноклеточном исследовании для измерения ингибирования бета-секретазной активности используют линию эмбриональных клеток почки человека НЕК 293р (номер доступа в АТСС СКЬ-1573), стабильно экспрессирующую кДНК АРР751 человека, содержащую природную двойную мутацию Ьуз651Ме!652 на Азп651Реи652, обычно называемую шведской мутацией (обозначенной НЕК 293/АРР751зж), которая, как было показано, приводит к чрезмерной продукции А-бета (С1!гоп, е! а1., №!иге, 360, 672-674 (1992)). Анализы на снижение количества Ав ш νΐ!το описаны в литературе (см. ^ονеу, е! а1., 1оигпа1 οί ХеигосЬе'иизйу, 76, 173-181 (2001); 8еиЪег!, е! а1., Хайде, 361, 260 (1993) и ,1о11пзоп-\\оос1, е! а1., Ргос. Ка!1. Аса4. 8сг и8А, 94, 1550-1555 (1997)).

Клетки (НЕК 293/АРР751зж при плотности 3,5х10⁴ клеток/лунку, содержащую 200 мкл культуральной среды ЭМЕМ, включающей 10% РВ8) инкубировали при 37°С в течение 4-24 ч в присутствии/в отсутствие ингибиторов (разведенных в ДМСО) при желательной концентрации. По окончании инкубирования кондиционированную среду анализировали на проявление бета-секретазной активности, например, с помощью анализа пептидов А-бета. Суммарное количество пептидов А-бета (А-бета 1-х) измеряли с помощью сэндвич-ЕЫ8А, используя моноклональное антитело 266 в качестве захватывающего антитела и биотинилированное антитело 31)6 в качестве репортерного антитела. В качестве альтернативы, количество пептидов А-бета 1-40 и А-бета 1-42 измеряли с помощью сэндвич-ЕЫ8А, используя моноклональное антитело 2Θ3 в качестве захватывающего антитела для А-бета 1-40 и моноклональное антитело 21Р12 в качестве захватывающего антитела для А-бета 1-42. В ЕЫ8А как для А-бета 1-40, так и для А-бета 1-42 использовали биотинилированное антитело 31)6 в качестве репортерного антитела. Концентрация А-бета, высвобожденного в кондиционированную среду после обработки соединением, соответствует активности ВАСЕ при таких условиях. Кривую ингибирования по 10 точкам наносили на график и аппроксимировали четырехпараметрическим логистическим уравнением с получением значений ЕС50 и 0₀ для эффекта уменьшения количества А-бета. Следующие приведенные в качестве примера соединения исследовали, по существу, как описано выше, и они проявляли следующую активность для эффекта уменьшения количества А-бета.

- 34 016955

Таблица 27

ПРИМЕР	НЕК 293 Зне, ЕЫЗА А-бета (1-40) 1С50 (нМ)	НЕК 2 93 Заде, ЕЫЗА А-бета (1-42) 1С50 (нМ)
5	303	299
19	335	480
12	1300	948
21	863	803

Эти результаты демонстрируют то, что соединения из табл. 27 ингибируют нативный эндогенный ВАСЕ человека в клетках ΐπ νΐΐΓΟ.

Исследование на первичных нейронах РЭАРР.

Подтверждающий цельноклеточный анализ также проводили на культурах первичных нейронов, полученных из трансгенных зародышей мышей РЭАРР. Первичные кортикальные нейроны получали в эмбриональный день 16 из зародышей РЭАРР, и их культивировали в 96-луночных планшетах (15х10⁴ клеток/лунку в ЭМЕМ/Е12 (1:1) плюс 10% РВ8). Через 4-6 дней ΐπ νΐΐΓΟ культуральную среду заменяли на бессывороточную ЭМЕМ/Е12 (1:1), содержащую добавку В27, и нейроны инкубировали при 37°С в течение 24 ч в присутствии/в отсутствие ингибиторов (разведенных в ДМСО) при желательной концентрации. По окончании инкубирования кондиционированную среду анализировали на признаки бетасекретазной активности, например, с помощью анализа пептидов Ά-бета. Общее содержание пептидов Άбета (Ά-бета 1-х) измеряли с помощью сэндвич-ЕЫ8А, используя моноклональное антитело 266 в качестве захватывающего антитела и биотинилированное антитело 3Ό6 в качестве репортерного антитела. В качестве альтернативы, содержание пептидов Ά-бета 1-40 и Ά-бета 1-42 измеряли с помощью сэндвич-ЕЫ8А, используя моноклональное антитело 203 в качестве захватывающего антитела для Ά-бета 1-40 и моноклональное антитело 21Р12 в качестве захватывающего антитела для Ά-бета 1-42. В ЕЫЗА как для Ά-бета 1-40, так и для Ά-бета 1-42 использовали биотинилированное антитело 3Ό6 в качестве репортерного антитела. Концентрация Ά-бета, высвобожденного в кондиционированную среду после обработки соединением, соответствует активности ВАСЕ при таких условиях. Кривую ингибирования по 10 точкам наносили на график и аппроксимировали четырехпараметрическим логистическим уравнением с получением значений ЕС₅₀ и ХС₅₀ для эффекта уменьшения количества Ά-бета. Следующие приведенные в качестве примера соединения, тестировали, по существу, как описано выше, и они проявляли следующую активность для эффекта уменьшения количества Ά-бета.

Таблица 28

ПРИМЕР	ЕЫЗА А-бета (1-40) для нейронов ΡϋΑΡΡ 1С50 (нМ)	ЕЫЗА А-бета (1-42) для нейронов ΡϋΑΡΡ 1С50 (нМ)
5	102	94,7
19	288	214
12	658	648
21	355	429

Эти результаты демонстрируют то, что соединения из табл. 28 ингибируют нативный эндогенный ВАСЕ мыши в клетках ΐπ νΐΐΓΟ.

Ингибирование бета-секретазы в условиях ΐπ νινο.

Несколько моделей на животных, включая мышь, морскую свинку, собаку и обезьяну, можно использовать для проверки ингибирования бета-секретазной активности в условиях ΐπ νινο после обработки соединениями. Животные, использованные согласно настоящему изобретению, могут быть животными дикого типа, трансгенными или нокаутными по гену животными. Например, модель на мышах РЭАРР, полученная, как описано у Сатез е1 а1., ΝαΙιιΐΌ. 373, 523-527 (1995), и другие нетрансгенные или нокаутные по гену животные полезны для исследования в условиях ΐπ νινο ингибирования продукции Ά-бета и зАРР-бета в присутствии соединений-ингибиторов. Как правило, мышам РЭАРР в возрасте от 2 до 12 месяцев, нокаутным по гену мышам или нетрансгенным животным вводили соединение, входящее в состав композиции в средах, таких как кукурузное масло, циклодекстран, фосфатные буферы, РНАКМАЗОЬУЕ®, или других подходящих средах. Через 1-24 ч после введения соединения животных умерщвляли и головной мозг, а также спинномозговую жидкость и плазму удаляли для анализа фрагментов Ά-бета, С99 и зАРР (см. ^ονеу, е1 а1., 1оигпа1 οί №игосИет1з1гу, 76, 173-181 (2001) и .1о11пзоп-'Шоос1, е1 а1., Ргос. N311. Аса4. 8с1. И8А, 94, 1550-1555 (1997)).

- 35 016955

Для стандартных исследований эффективности животным вводили различные концентрации соединения и сравнивали с контрольной группой, которой вводили в то же время среду. Для некоторых динамических исследований ткань головного мозга, плазму или спинномозговую жидкость получали от выбранных животных, начиная в момент времени 0, чтобы определить фоновый уровень. Соединение вводили в другие группы и умерщвляли животных в различные моменты времени после введения дозы. Ткань головного мозга, плазму или спинномозговую жидкость получали от выбранных животных и анализировали на присутствие продуктов расщепления АРР, включая пептиды А-бета, зАРР-бета и другие фрагменты АРР, например, с помощью специфичных анализов сэндвич-ЕЫ8А. По окончании периода анализа животных умерщвляли и ткани головного мозга, плазму или спинномозговую жидкость исследовали на присутствие пептидов А-бета, С99 и зАРР-бета. Ткани головного мозга трансгенных по АРР животных также анализировали на количество бета-амилоидных бляшек после обработки соединениями.

Животные (РБАРР или другие трансгенные по АРР или нетрансгенные мыши), которым вводили соединение-ингибитор, могут демонстрировать уменьшение количества А-бета или зАРР-бета в тканях головного мозга, плазме или спинномозговой жидкости и уменьшение бета-амилоидных бляшек в ткани головного мозга по сравнению с контрольными животными, которым вводили среду, или с контрольными животными в нулевой момент времени. Например, через 3 ч после подкожного введения дозы 100 мг/кг соединения примера 19 молодым самцам мышей РЭАРР уровни пептида А-бета 1-х, С99 и зАРРЪ уменьшались приблизительно на 30, 50 и 20% в коре головного мозга соответственно по сравнению с мышами, которым вводили среду. Аналогично, через 3 ч после подкожного введения дозы 30 мг/кг соединения примера 5 молодым самцам мышей РЭАРР уровни пептида А-бета 1-х, С99 и зАРРЪ уменьшались приблизительно на 50, 45 и 30% соответственно по сравнению с мышами, которым вводили среду. В соответствии с изменениями количества А-бета, С99 и зАРРЪ в головном мозге через 3 ч после перорального введения дозы 10 мг/кг соединения примера 5 уровни А-бета 1-х в плазме и спинномозговой жидкости уменьшались приблизительно на 50 и 60% соответственно.

Соединение, приведенное в качестве примера в Ж) 2007/049532, и его энантиомеры исследовали, по существу, согласно описанию анализов, приведенному выше, и они проявляли следующие значения активности.

Таблица 29

Структура	ВАСЕ	НЕК 293 Зие, ЕЫЗА А-бета (1-40)	НЕК 293 Зие, Абета ЕЫЗА (1-42)	Нейроны из ΡϋΑΡΡ, ЕЫЗА А-бета (1-40)	Нейроны из ΡϋΑΡΡ, А-бета (1-42) ЕЫЗА
	ΐΑίΙ ν<^νη 2 ААА	116,000	21,400	35,300
АА	НС1
	^'ίν^ΝΗ2 ААА	28,000	13,200	16,400	7,820	10,400
и	НС1
[ГА	Ν^ΝΗ2	>100,000	16,500	23,700	28,100	46,800
и	НС1

¹⁷ Все результаты в табл. 29 приведены в виде 1С₅₀ (нМ).

Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно составляют в виде фармацевтических композиций, которые можно вводить множеством путей. Наиболее предпочтительно такие соединения предназначены для перорального введения. Такие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники. См., например, ВеттдЮп: Т11е 8с1епсе апб Ргасбсе οί Рйагтасу (А. Оеппаго, е! а1., ред., 19-е изд., Маск РиЪкзЫпд Со., 1995).

- 36 016955

Соединения формулы I, как правило, эффективны в широком диапазоне дозировок. Например, дозировки в день обычно находятся в диапазоне от приблизительно 0,01 до приблизительно 30 мг/кг массы тела. В отдельных случаях уровни дозировки ниже нижнего предела указанного выше диапазона могут быть более чем достаточными, тогда как в других случаях даже еще большие дозы можно использовать, не вызывая пагубного побочного эффекта, и, следовательно, указанный выше диапазон дозировок не предполагается ограничивающим каким-либо образом объем настоящего изобретения. Должно быть очевидно, что количество соединения, которое вводят на практике, будет определять лечащий врач в свете соответствующих обстоятельств, включая патологическое состояние, от которого лечат, выбранный путь введения, конкретное соединение или соединения, которые вводят, возраст, вес и реакцию на лечение конкретного пациента и тяжесть симптомов пациента.

Claims (12)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы I где η представляет собой 0, 1 или 2;

   К¹ представляет собой пиримидинил, пиразинил, необязательно замещенный хлором или фтором, или пиридинил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из хлора, фтора и С1-С3-алкокси;

   К² в каждом случае независимо выбран из хлора или фтора;

   К³ представляет собой водород или С₁-С₄-алкил, необязательно замещенный гидроксилом;

   К⁴ представляет собой водород или С1-С3-алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.
2. 2. Соединение по п.1, где

   К¹ представляет собой пиримидинил, пиридинил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, в каждом случае независимо выбранными из хлора, фтора или метокси, или пиразинил, необязательно замещенный фтором;

   К² представляет собой хлор или фтор;

   К³ представляет собой водород, метил, метил, замещенный гидроксилом, или изопропил, замещенный гидроксилом;

   К⁴ представляет собой водород;

   η представляет собой 0, 1 или 2, или его фармацевтически приемлемая соль.
3. 3. Соединение по любому из пп.1, 2, где

   К¹ представляет собой пиримидинил, пиридинил, необязательно замещенный фтором, или пиразинил, необязательно замещенный фтором;

   К² представляет собой фтор;

   К³ представляет собой водород или метил;

   К⁴ представляет собой водород;

   η представляет собой 1 или 2, или его фармацевтически приемлемая соль.
4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, где

   К¹ представляет собой пиримидинил;

   К² представляет собой фтор;

   К³ представляет собой водород;

   К⁴ представляет собой водород;

   η представляет собой 2, или его фармацевтически приемлемая соль.
5. 5. Соединение по любому из пп.1-4, где конфигурация хирального центра, расположенного рядом с атомом азота аминотиазина, представляет собой (8), или его фармацевтически приемлемая соль.
6. 6. Соединение 4-(2,4-дифтор-5-(пиримидин-5-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амин

   Ή ΝΗ, или его фармацевтически приемлемая соль.
7. 7. Соединение по п.6, где указанное соединение представляет собой (8)-4-(2,4-дифтор-5(пиримидин-5-ил)фенил)-4-метил-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин-2-амин

   - 37 016955 или его фармацевтически приемлемую соль.
8. 8. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.
9. 9. Способ лечения болезни Альцгеймера путем введения эффективного количества соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли.
10. 10. Применение соединения по любому из пп.1-7 в терапии.
11. 11. Применение соединения по любому из пп.1-7 для лечения болезни Альцгеймера.
12. 12. Применение соединения по пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера.

    Евразийская патентная организация, ЕАПВ

    Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2