JP2015535247A - Ｂａｃｅ阻害剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、式Ｉの化合物：（式中、Ａは、からなる群から選択され、Ｒ１は、ＨまたはＦであり、Ｒ２は、Ｈ、−ＯＣＨ３、Ｃ１−Ｃ３アルキル、であり、Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨまたはＦである）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、新規テトラヒドロピロロチアジン化合物、該化合物を含む医薬組成物、生理障害を治療するために該化合物を使用する方法、ならびに該化合物の合成に有用な中間体およびプロセスに関する。

本発明は、アルツハイマー病ならびにアミロイドβ（Ａβ）ペプチド、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の神経毒および高い凝集性のペプチド断片に関する他の疾患および障害の治療の分野である。アルツハイマー病は、世界中で数百万人の患者に影響を与える破壊的な神経性変性障害である。現在、患者に対する症状の有益性を一時的にのみ与える市販されている承認されている薬剤を考慮しても、アルツハイマー病の治療において重要で満たされていない必要性が存在する。

アルツハイマー病は、脳におけるＡβの生成、凝集、および沈着によって特徴付けられる。β−セクレターゼ（β部位アミロイド前駆体タンパク質切断酵素；ＢＡＣＥ）の完全または部分的な阻害は、マウスモデルにおいてプラークに関連したおよびプラークに依存した病理に対する顕著な効果を有することが示されており、Ａベータペプチドレベルの少しの減少さえも、プラーク負荷およびシナプス欠損の長期間の顕著な減少を生じ得るので、特にアルツハイマー病の治療において顕著な治療効果を与えることが示唆される。

特許文献１は、アルツハイマー型認知症などのＡベータペプチドによって引き起こされる神経変性疾患に有用な治療剤としてさらに開示されている縮合アミノジヒドロチアジン誘導体を開示している。さらに、非特許文献１は、経口投与されるＣＮＳ活性ＢＡＣＥ阻害剤である、（Ｓ）−４−（２，４−ジフルオロ−５−ピリミジン−５−イル−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミンを開示している。

十分なＣＮＳ浸透を有する有効なＢＡＣＥ阻害剤が、アルツハイマー病などのＡβペプチド媒介性障害についての治療を提供するために望まれる。本発明は、ＢＡＣＥの有効な阻害剤である特定の新規化合物を提供する。さらに、本発明は、ＣＮＳ浸透を有する特定の新規化合物を提供する。

米国特許第２００９／０２０９７５５号明細書

Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、３１（４６）、１６５０７−１６５１６ページ（２０１１）

発明の詳細な説明

したがって、本発明は、式Ｉの化合物：

（式中、Ａは、

からなる群から選択され、
Ｒ^１は、ＨまたはＦであり、
Ｒ^２は、Ｈ、−ＯＣＨ_３、Ｃ１−Ｃ３アルキル、

であり、
Ｒ^３は、Ｈ、−ＣＨ_３、または−ＯＣＨ_３であり、
Ｒ^４は、ＨまたはＦである）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。

本発明はまた、患者においてアルツハイマー病を治療する方法であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与する工程を含む、方法を提供する。

本発明は、患者において軽度の認識機能障害からアルツハイマー病への進行を予防する方法であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与する工程を含む、方法をさらに提供する。

本発明はまた、患者においてＢＡＣＥを阻害する方法であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与する工程を含む、方法を提供する。

本発明はまた、アミロイド前駆体タンパク質のＢＡＣＥ媒介性切断を阻害する方法であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与する工程を含む、方法を提供する。

本発明は、Ａβペプチドの産生を阻害する方法であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与する工程を含む、方法をさらに提供する。

さらに、本発明は、療法に使用するため、特にアルツハイマー病の治療のためまたは軽度の認識機能障害からアルツハイマー病への進行の予防のための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。なおさらに、本発明は、アルツハイマー病の治療のための医薬の製造のための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はまた、軽度の認識機能障害からアルツハイマー病への進行を予防するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はまた、ＢＡＣＥを阻害するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はさらに、Ａβペプチドの産生を阻害するための医薬を製造するための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。

本発明はさらに、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と共に式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態において、組成物はさらに１種以上の他の治療剤を含む。本発明はまた、式Ｉの化合物を合成するための新規中間体およびプロセスを含む。

軽度の認識機能障害は、臨床所見および時間と共に軽度の認識機能障害からアルツハイマー認知症を示す患者の進行に基づいたアルツハイマー病に関連する認知症の潜在的な前駆期と定義される（Ｍｏｒｒｉｓら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．５８、３９７−４０５（２００１）；Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．５６、３０３−３０８（１９９９））。「軽度の認識機能障害からアルツハイマー病への進行の予防」という用語は、患者において軽度の認識機能障害からアルツハイマー病への進行を遅延、停止または反転することを含む。

本明細書で使用される場合、「Ｃ１−Ｃ３アルキル」という用語は、メチル、エチル、プロピルおよびイソプロピルアルキル基を指す。

本明細書で使用される場合、「治療」、「治療する」または「治療すること」という用語は、既存の症状または障害の進行または重症度を抑性、予防、制限、遅延、停止、または反転することを含む。

本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、哺乳動物、より好ましくはヒトを指す。

「Ａβペプチドの産性の阻害」という用語は、哺乳動物におけるＡβペプチドのインビボレベルの減少を意味する。

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、患者への単回または複数回用量投与で、診断または治療下の患者に所望の効果を与える、本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の量または用量を指す。

有効量は、公知の技術の使用によって、および類似の状況下で得られる結果を観察することによって当業者としての担当診断医により容易に決定され得る。患者のための有効量を決定する際に、担当診断医によって、限定されないが、哺乳動物の種；その大きさ、年齢、および全体的な健康；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の程度または関与または重症度；個々の患者の反応；投与される特定の化合物；投与様式；投与される製剤の生物学的利用能特性；選択される投与レジメン；併用薬の使用；および他の関連状況を含む、多くの要因が考慮される。

式Ｉの化合物は全体的に広範囲の投薬量にわたって効果的である。例えば、１日当たりの投薬量は、通常、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。一部の場合、上述の範囲の下限値以下の用量レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合、さらに高い用量が許容可能な副作用で利用されてもよく、したがって、上記の投薬量範囲は本発明の範囲を決して限定することを意図していない。本発明の化合物は、好ましくは、化合物を生物学的に利用可能にする、経口および非経口経路を含む、任意の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、このような組成物は経口投与用である。このような医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは当該分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ編、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００６を参照のこと）。

式Ｉの化合物は本発明の治療方法に特に有用であるが、特定の基、置換基および構造が式Ｉの化合物に好ましい。以下の段落は、このような好ましい基、置換基および構造を記載する。これらの選択は本発明の治療方法および新規化合物の両方に適用可能であることは理解されるであろう。

Ａは、

からなる群から選択されることが好ましい。

Ａは、

からなる群から選択されることが最も好ましい。

Ａは、

であることが最も特に好ましい。

Ｒ^１はＦであることが好ましい。

Ｒ^２はＨまたは

であることが好ましい。

Ｒ^２は

であることが最も好ましい。

Ｒ^３はＨであることが好ましい。

Ｒ^１がＦであり、Ｒ^３がＨである場合、Ｒ^２はＨであることが特に好ましい。

Ｒ^１がＦであり、Ｒ^３がＨである場合、Ｒ^２は

であることがさらに特に好ましい。

好ましい実施形態は、改善されたＣＮＳ浸透を有する式Ｉの化合物を含む。

好ましい化合物は、
２−［２−［（４ａＲ，７ａＲ）−２−アミノ−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール；
２−［２−［（４ａＲ，７ａＲ）−２−アミノ−７ａ−（５−フルオロ−２−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール；
２−［２−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール；
（４ａＲ，７ａＲ）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン、異性体１；
およびそれらの薬学的に許容可能な塩である。

特に好ましい化合物は、
２−［２−［（４ａＲ，７ａＲ）−２−アミノ−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール；
２−［２−［（４ａＲ，７ａＲ）−２−アミノ−７ａ−（５−フルオロ−２−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール；
２−［２−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール；
およびそれらの薬学的に許容可能な塩である。

最も特に好ましい化合物は、
２−［２−［（４ａＲ，７ａＲ）−２−アミノ−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール、およびその薬学的に許容可能な塩である。

当業者は、本発明の化合物が、スキームＡに記載されるように互変異性型で存在し得ることを理解するであろう。本発明の化合物の特定の互変異性体の１つに対するこの適用において任意の参照が与えられる場合、互変異性型およびその全ての混合物の両方を含むことが理解される。

本発明の化合物またはその塩は当該分野において公知の種々の手順によって調製でき、そのうちのいくつかは以下のスキーム、調製例および実施例に例示される。記載される経路の各々についての特定の合成工程は、式Ｉの化合物またはその塩を調製するために、異なる方法で組み合わされてもよいか、または異なるスキームからの工程と併用されてもよい。以下のスキームにおける各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、従来の方法によって回収され得る。

特定の立体化学中心は特定されていないままであり、特定の置換基は簡潔さのために以下のスキームにおいて除外されており、スキームの教示を決して限定するものではない。さらに、個々の異性体、鏡像異性体、またはジアステレオマーは、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィーなどの方法によって式Ｉの化合物の合成において任意の都合の良い点で当業者により分離または分割され得る（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓら、「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、１９８１、ならびにＥ．Ｌ．ＥｌｉｅｌおよびＳ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ、「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、１９９４を参照のこと）。「異性体１」および「異性体２」という指定は、それぞれ第１および第２のキラルクロマトグラフィーから溶出する化合物を指し、キラルクロマトグラフィーが合成において早期に開始される場合、同じ指定が後の中間体および実施例に適用される。さらに、以下のスキームに記載される中間体は複数の窒素保護基を含む。様々な保護基は、実施される特定の反応条件および特定の変換に応じて各々の出現において同じであっても、異なっていてもよい。保護および脱保護条件は当業者に周知であり、文献に記載されている（例えば、「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第４版、Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．ＷｕｔｓおよびＴｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．２００７を参照のこと）。

当業者は、本発明の化合物が少なくとも２つのキラル中心を含むコアから構成されることを理解するであろう。

本発明は、ラセミ体を含む、全ての個々の鏡像異性体、および前記化合物の鏡像異性体の混合物を意図するが、スキームＢに例示されるように１および２と標識した原子において絶対配置を有する化合物が本発明の好ましい化合物である。

本明細書に使用される略語は、Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、Ｖｏｌ．１７、Ｎｏ．１、１９８４に従って定義される。他の略語は以下のように定義される：「ＡＰＰ」はアミロイド前駆体タンパク質を指し；「ＢＯＣ」はｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを指し；「ＣＳＦ」は脳脊髄液を指し；「ＤＣＣ」は１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドを指し；「ＤＩＣ」はジイソプロピルカルボジイミドを指し；「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し；「ＥＤＣＩ」は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を指し；「Ｅｘ」は実施例を指し；「Ｆ１２」はＨｍａ’ｓ Ｆ１２培地を指し；「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し；「ＦＲＥＴ」は蛍光共鳴エネルギー移動を指し；「ＨＥＫ」はヒト胚腎臓を指し；「ＨＯＡｃ」は酢酸を指し；「ＨＯＡｔ」は１−ヒドロキシ−７−アゾベンゾトリアゾールを指し；「ＨＯＢｔ」は１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール水和物を指し；「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し；「ｈｒ」は時間を指し；「ＩＣ_５０」は薬剤について可能な５０％の最大阻害反応を生じる薬剤の濃度を指し；「ｍｉｎ」は分を指し；「ＰＤＡＰＰ」は血小板由来アミロイド前駆体タンパク質を指し；「Ｐｒｅｐ」は調製例を指し；「ＲＦＵ」は相対蛍光単位を指し；「Ｒ_ｔ」は保持時間を指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。

以下のスキームにおいて、他に示されない限り、全ての置換基は上記に定義される通りである。試薬および出発物質は一般に当業者に容易に利用可能である。他のものは、公知の構造的に類似している化合物の合成ならびに以下の任意の新規手順を含む調製例および実施例に記載される手順に類似している有機および複素環化学の標準的な技術によって作製される。

スキーム１は、後でオキシムに変換され得るケトン（３）を形成するために使用されるワインレブアミド（２）の形成を示す。オキシムは二環式イソオキサゾール（９）を形成するために使用され得る。（Ａ）基はスキーム１に示されるように合成の異なる点において挿入され得る。「ＰＧ」は、カルバメートおよびアリルなどの、アミノ基のために開発された保護基である。そのような基は周知であり、当該分野において理解される。

式（１）の化合物は、ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンなどの有機塩基およびアミドカップリングの効率を改善するためにカルボジイミドおよびＨＯＢｔまたはＨＯＡｔなどのカップリング試薬を使用してＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩によりワインレブアミド（工程１、化合物２）に変換される。当業者は、カルボン酸およびアミンの反応から生じる、アミド形成についての多くの方法および試薬が存在することを認識するであろう。例えば、有用なカルボジイミドはＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣＩである。

あるいは、カルボン酸は酸塩化物に変換されてもよく、ワインレブアミドは、有機塩基およびＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩を使用して形成され得る。

グリニャール試薬または有機リチウム試薬などの有機金属試薬によるワインレブアミドの後の処理により、化合物３が得られる（工程２）。例えば、複素環式ハロゲン化物およびアルキルグリニャールまたは有機リチウム試薬が、所望の（Ａ）基が付着されたケトンを形成するために使用され得る（工程２、３）。ケトン、（３）は、次いで、ヒドロキシルアミン塩酸塩および酢酸ナトリウム三水和物もしくは酢酸ナトリウムなどの無機塩基またはピリジンなどの有機塩基を用いて、あるいはエタノールなどの極性プロトン性溶媒中の５０ｗｔ％ヒドロキシルアミン水溶液を使用することによってオキシムを形成するために使用され、化合物６が得られ得る（工程３）。あるいは、２工程反応において、ベータハロゲンを有するケトンは、保護アリルアミンを用いて、またはアリルアミンとの反応、続いてインサイチュでのｔｅｒｔブトキシカルバミル保護によってアルキル化され、次いでヒドロキシルアミン塩酸塩で処理して、オキシムが得られ得る（工程４、６）。オキシム、（６）は、次いで、トルエンまたはキシレンなどの非極性溶媒中でオキシム（６）を加熱することなどのいくつかの方法によって３＋２環化において二環式イソオキサゾール（９）に変換されて化合物９を形成でき（工程５）、または次亜塩素酸ナトリウム水溶液もしくはチタン（ＩＶ）エトキシドを使用して、かつ加熱しながらトルエンもしくはキシレンなどの非極性溶媒中で化合物９を形成できる（工程５）。

スキーム２は、オキシムのインサイチュでの形成およびその後、二環式イソオキサゾールを形成するように変換して化合物（１０）が得られる（工程８）ことを例示する。Ｎ−［（４−メトキシフェニルメチル］ヒドロキシルアミン塩酸塩を、トリエチルアミンなどの有機塩基中で化合物（３）で処理して、それにチタン（ＩＶ）エトキシドを加え、加熱して化合物１０を得る。二環式イソオキサゾールのＢＯＣ保護ピロリジンは当該分野において周知の酸性条件下で脱保護する。アリル保護ピロリジンは、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムなどの触媒と共にＮ，Ｎ−ジメチルバルビツール酸などの酸を使用して脱保護され得る。脱保護ピロリジンは、次いで、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、またはＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルグアニジンなどの有機塩基を使用して置換または非置換芳香族ピリミジンとの芳香族求核置換反応（ＳＮＡｒ）で反応されて、所望の置換保護二環式イソオキサゾールが得られ得る（工程９の１および２の工程）。４−メトキシベンジル（ＰＭＢ）保護二環式イソオキサゾールがその後、酸性条件下で脱保護されて化合物１１が得られる（工程９の３の工程）。化合物１１は、ＴＨＦなどの極性非プロトン性溶媒中のイソチオシアン酸ベンゾイルで処理されて、チオ尿素が得られる（工程１０、１２）。イソオキサゾール環が酢酸中の粉末亜鉛により開かれ得る（工程１１、１３）。ヒドロキシ化合物（１３）は、次いで、１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミンで処理されて、縮合ピロリジン保護チアジンが形成される（工程１２、１４）。チアジンアミドは、エタノールなどの極性非プロトン性溶媒中のピリジンおよびメチルヒドロキシルアミン塩酸塩などの有機塩基またはメタノール中の水酸化リチウムなどの無機塩基で脱保護されて、工程１３において式Ｉの化合物が得られ得る。

スキーム３は、最初に酢酸中の粉末Ｚｎで、または水素化条件の圧力下でエタノールなどの極性溶媒中でラネーニッケルによって処理され得る保護二環式イソオキサゾール（９）を示し（工程１６、１６）、続いてベンゾチオイソシアネートと反応して化合物１７が得られる（工程１７）。チアジン環は、スキーム２、工程１２に記載されるように形成されて化合物１８が得られ得る（工程１８）。工程１９において、ピロリジン（１８）は、スキーム２に記載されるように脱保護され、ヘテロアリール化されて（工程９の１および２の工程）、縮合ピロリジン保護チアジンが得られ得る（化合物１４、スキーム２）。チアジンアミドは、次いで、スキーム２に記載されるように脱保護されて（工程１３）、式Ｉの化合物が得られ得る。

スキーム４はスキーム３およびスキーム２から代替の経路を示し、化合物９は、ピロリジン窒素におけるＳＮＡｒ反応で脱保護され、ヘテロアリール化され得、イソオキサゾール環はベンゾイルイソシアネートで二環式イソオキサゾールを処理する前に開かれ得る。

例えば、スキーム２に記載されるようにピロリジン窒素は、脱保護され、ヘテロアリール化され得る（工程９）。化合物１１のイソオキサゾール環は、スキーム３、工程１６に記載されるように開かれて、化合物１９が得られ得る（工程２１）。保護チアジンを形成するための２工程変換（１４）は、工程２２および２４に示され、スキーム３の工程１７および１８に記載されるように達成され得るか、または保護チアジンは、第１の工程においてベンゾチオイソシアネートならびに第２の工程においてトリフェニルホスフィンおよびジイソプロピルアゾジカルボキシレートを使用して工程２３に示されるように直接形成され得る。チアジンアミドは、スキーム２、工程１３に記載されるように脱保護されて、式Ｉの化合物が得られ得る。

任意の工程において、塩酸塩などの式Ｉの化合物の薬学的に許容可能な塩が、標準的な条件下で適切な溶媒中での適切な薬学的に許容可能な酸との式Ｉの適切な遊離塩基の反応によって形成され得る。さらに、このような塩の形成は窒素保護基の脱保護により同時に起こり得る。このような塩の形成は周知であり、当該分野において理解される。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．、「Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、３３：２０１−２１７（１９８６）；Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．ら、「Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ」、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、４：４２７−４３５（２０００）；およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．ら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、６６：１−１９（１９７７）を参照のこと。

調製例および実施例
以下の調製例および実施例は本発明をさらに例示する。反対に示されない限り、本明細書に例示される化合物は、Ｓｙｍｙｘ（登録商標）Ｄｒａｗバージョン３．２（Ｓｙｍｙｘ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．）またはＩＵＰＡＣＮＡＭＥ ＡＣＤＬＡＢＳを使用して命名され、番号付けされる。

調製例１
２−クロロ−５−フルオロ−４−イソプロピル−ピリミジン

１，２−ジメトキシエタン（２５ｍＬ）中の５−フルオロ−２−クロロピリミジン（５．００ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、１５℃以下に温度を維持しながら、テトラヒドロフラン（２８．３ｍＬ、５６．６ｍｍｏｌ）中の２Ｍのイソプロピルマグネシウムクロリドの溶液と反応させる。得られた溶液を窒素下で１時間撹拌し、次いで０℃に冷却する。テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中のトリエチルアミン（５．７６ｍＬ、３７．７ｍｍｏｌ）を加え、続いてテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中のヨウ素（９．５８ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）の溶液を加える。添加が完了した後、暗い反応混合物を、水、続いて飽和炭酸水素ナトリウムおよび飽和硫酸水素ナトリウムでクエンチする。混合物を酢酸エチル（３×）で抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去する。得られた残渣を、ヘキサン中のジクロロメタンの５〜１００％勾配を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（２．５５ｇ、３９％）を得る。ＧＣ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：１７４。

以下の化合物は本質的に調製例１の方法によって調製する。

調製例４
２−クロロ−５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン

ナトリウムメトキシド（４４６．５３ｍｇ、８．２７ｍｍｏｌ）を、０℃にてメタノール（８ｍＬ、１９７．６６ｍｍｏｌ）中の２，４−ジクロロ−５−フルオロ−６−メチル−ピリミジン（１．７ｇ、７．５１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に少しずつ加える。次いで混合物を室温にて１時間撹拌する。水（２０ｍＬ）を反応混合物、続いてジクロロメタンに加える。層を分離し、水層をジクロロメタンで再抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させて、８：１の生成物：出発物質の混合物を得る。粗物質を、イソヘキサン中のジクロロメタンの０〜９９％勾配を使用してシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（１．１６ｇ、８７％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ４．０９（ｓ，３Ｈ），２．４５（ｄ，３Ｈ）。

調製例５
１−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）エタノン

ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）中の５−フルオロ−２，４−ジクロロ−ピリミジン（２０ｇ、１１９．８ｍｍｏｌ）および（１−エトキシエテニル）トリメチルスタンナン（４３．２６ｇ、１１９．８ｍｍｏｌ）の室温溶液を窒素でパージする。ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（１．７０ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を窒素下で２時間７０℃で加熱する。反応物を５０℃に冷却し、水性５Ｎ塩化水素（１００ｍＬ）を加え、２時間撹拌する。反応物を冷却し、水（２００ｍＬ）およびブラインで希釈し、ジエチルエーテルで５回抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮する。粗生成物を、ヘキサン中の酢酸エチルの５〜５０％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用して精製して、標題化合物（１９．２ｇ、９２％）を得る。ＧＣ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：１７４および１７６。

調製例６
２−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）プロパン−２−オール

窒素下で、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中の１−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）エタノン（１０．０６ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）の撹拌した−７８℃の溶液に、ジエチルエーテル（３Ｍ、１２４ｍＬ、７２．０４ｍｍｏｌ）中の臭化メチルマグネシウムを加え、得られた混合物を−７８℃にて２０分間撹拌する。反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、混合物を室温まで加温する。反応混合物を酢酸エチルで３回抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮する。粗生成物を、ヘキサン中の酢酸エチルの５〜１００％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用して精製して、標題化合物（７．０６ｇ、６４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：１９１および１９３（Ｍ＋１）。

調製例７
２−クロロ−５−フルオロ−４−（１−フルオロ−１−メチル−エチル）ピリミジン

ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（６．５３ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）を、窒素下で、ジクロロメタン（７０ｍＬ）中の２−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）プロパン−２−オール（４．８２５ｇ、２５．３１ｍｍｏｌ）の−７８℃の溶液に滴下して加える。反応物を窒素下で−７８℃にて３０分間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチし、室温に加温する。反応混合物を酢酸エチルで３回抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮する。得られた粗物質を、ヘキサン中の酢酸エチルの５〜１００％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用して精製して標題化合物（４．２３ｇ、８７％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：１９３および１９５（Ｍ＋１）。

調製例８
（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ｔｅｒｔ−ブチルカルボネート

ヒドロキシルアミン塩酸塩（５５０．０ｇ、７．９ｍｏｌ）、水（５．５Ｌ）およびヘプタン／ＭＴＢＥの溶液（５：１、５．５Ｌ）の混合物を−５℃に冷却する。ヘプタン／ＭＴＢＥ（５：１、１．１Ｌ）中の溶液としてジ−ｔ−ブチルジカルボネート（３．５５Ｋｇ、１６．３ｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．６７Ｋｇ、１６．５ｍｏｌ）の予め冷却した（−５℃）の溶液を２時間にわたってゆっくり加える。反応物を−５℃にて１時間撹拌し、次いで室温に加温し、一晩撹拌する。層を分離し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液（２Ｌ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（１Ｌ）で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、白色固体に結晶化する油を得る。固体を氷水浴中でヘプタン（１Ｌ）と共に撹拌し、濾過して、標題生成物（１３６０．２ｇ、７３％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ１０．７（ｂｓ，１Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）。

調製例９
［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−［（４−メトキシフェニル）メチル］アミノ］ｔｅｒｔ−ブチルカルボネート

窒素下で、２０Ｌのリアクタに、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ｔｅｒｔ−ブチルカルボネート（８１２．９ｇ、３．４８ｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（４．４Ｌ）、炭酸カリウム（６２６．５ｇ、４．５２ｍｏｌ）および１−（クロロメチル）−４−メトキシ−ベンゼン（４６２ｍＬ、２．５６ｍｏｌ）を入れる。混合物を４０℃にて一晩撹拌する。^１Ｈ ＮＭＲ分析により、不完全な反応が示される。さらなる炭酸カリウム（６２６．５ｇ、４．５２ｍｏｌ）を加え、混合物を４０℃にて撹拌する。４８時間後の^１Ｈ ＮＭＲ分析により、反応はまだ不完全であることが示される。さらなる炭酸カリウム（４８２ｇ、３．４９ｍｏｌ）を加え、混合物を４０℃にて撹拌する。一晩反応した後の^１Ｈ ＮＭＲ分析により、出発物質が残存していない完全な反応が示される。水（５Ｌ）およびＭＴＢＥ（５Ｌ）を加え、層を分離する。有機層を水（３×３Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、標題化合物（１．２１Ｋｇ、９８％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ７．２０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ），３．３５（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｓ，１８Ｈ）。

調製例１０
Ｎ−［（４−メトキシフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン塩酸塩

［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−［（４−メトキシフェニル）メチル］アミノ］ｔｅｒｔ−ブチルカルボネート（１．１２５Ｋｇ、３．１ｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２．８Ｌ）に溶解し、塩化水素溶液（ジオキサン中に４Ｍ、３．１５Ｌ、１２．４ｍｏｌ）を１時間３０分にわたって滴下して加える。溶液を室温にて一晩撹拌する。標題生成物を白色固体（４８８．０ｇ、８１％）として濾過によって回収する。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ１１．７１（ｓ，２Ｈ），１０．９４（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．２２（ｓ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ）。

調製例１１
２−（アリル（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）酢酸

炭酸カリウム（１００ｇ、７２４ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（１１０ｇ、７２７ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（３００ｍＬ）、トリエチルアミン（２００ｍＬ、１．４４ｍｏｌ）および２−プロペン−１−アミン（２４ｇ、４２６ｍｍｏｌ）を含有する丸底フラスコに、０℃にて、ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中のエチル２−ブロモアセテート（６０．２ｇ、３６０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加える。反応物を周囲温度に加温し、１４時間撹拌する。固体を濾過によって除去し、ジエチルエーテルで洗浄する。飽和塩化ナトリウム水溶液（１Ｌ）を濾液に加え、層を分離する。水層をジエチルエーテルで抽出する。有機相を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去して、残渣を得る。０℃にて、エタノール（５００ｍｌ）およびトリエチルアミン（４０ｇ、３９５ｍｍｏｌ）中の粗残渣の溶液に、ジ−ｔ−ブチルジカルボネート（１０５ｇ、４６７ｍｍｏｌ）を一度に加える。反応物を室温に加温し、１４時間撹拌する。反応物を減圧下で濃縮し、水（２００ｍＬ）および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテルで抽出する。有機相を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得る。この残渣をメタノール（２００ｍＬ）中に取り、２Ｎの水酸化ナトリウム（５００ｍＬ）を加える。得られた溶液を室温にて３時間撹拌する。体積を減圧下で約２００ｍｌに減少させ、得られた溶液を塩酸（１２Ｎ）を使用してｐＨ４に酸性化する。得られた淡い橙色の固体を濾過により回収し、水で洗浄し、乾燥させて、標題化合物（５０ｇ、６５％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）２つの回転異性体の混合物（５０：５０）δ１．４３，１．４５（ｓ，９Ｈ），３．８６−３．９９（ｍ，４Ｈ），５．１０−５．２０（ｍ，２Ｈ），５．７１−５．８３（ｍ，１Ｈ）。

調製例１２
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−［２−（メトキシ（メチル）アミノ）−２−オキソ−エチル］カルバメート

２−（アリル（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）酢酸（４９．６ｇ、１５６ｍｍｏｌ）を、０℃にて、テトラヒドロフラン（６００ｍＬ）に加え、続いてトリエチルアミン（３６．３ｇ、３５９ｍｍｏｌ）および塩化ピバロイル（３１ｇ、３５３ｍｍｏｌ）を加える。反応物を室温にて３時間撹拌し、次いで０℃に冷却する。次いでＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２８ｇ、２８３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３３ｍＬ、２３７ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）を加える。氷浴を除去し、反応物を室温にて３時間撹拌し、減圧下で濃縮する。得られた固体を水に溶解し、酢酸エチルで抽出する。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去して残渣を得る。残渣を、ヘキサン中のアセトンの０〜５０％勾配で溶出する、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（３２ｇ、５４％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）２つの回転異性体の混合物（６０：４０）δ１．４２，１．４４（ｓ，９Ｈ），３．１６，３．１７（ｓ，３Ｈ），３．６６，３．６９（ｓ，３Ｈ），３．８８−３．９８（ｍ，２Ｈ），４．０１，４．１１（ｓ，２Ｈ），５．１０−５．１８（ｍ，２Ｈ），５．７３−５．８５（ｍ，１Ｈ）。

調製例１３
２−ブロモ−（３−ピリジル）エタノン臭化水素酸塩

酢酸（６５ｍＬ）中の１−（３−ピリジニル）−エタノン（７．２ｍＬ、６５．４４ｍｍｏｌ）および４８％臭化水素水溶液（１１ｍＬ、９７．８８ｍｍｏｌ）の激しく撹拌溶液に、０℃にて、臭素（３．５ｍＬ、６８．１１ｍｍｏｌ）を滴下して加える。反応物を激しく撹拌しながら４０℃に加温し、２時間撹拌する。次いで反応物を７５℃に加温し、２時間撹拌する。反応混合物を室温に冷やし、ジエチルエーテルで希釈する。得られた沈殿物を回収し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、白色結晶固体（１８．２７ｇ、９９％）として標題化合物を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ１４．５３−１４．４７（ｍ，１Ｈ），９．３５（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），９．０１（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９７−７．９１（ｍ，１Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ）。

以下の化合物は本質的に２−アセチルピリジンを使用して調製例１３の方法によって調製する。臭素を４等量で滴下して加える。

調製例１５
２−ブロモ−１−（４−ピリジル）エタノン臭化水素酸塩

酢酸（３０ｍＬ）中の４−アセチルピリジン（３．６２ｇ、２９．８８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、４８％臭化水素水溶液（５．３ｍＬ、４７．１６ｍｍｏｌ）を加える。臭素（１．６ｍＬ、３１．１４ｍｍｏｌ）を４等量で滴下して加える。反応物を約２時間撹拌し、固体を沈殿させる。臭素（１．６ｍＬ、３１．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌する。得られた沈殿物を回収し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、標題化合物（８．６ｇ、１０２％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ９．０２（ｄ，２Ｈ），８．１７（ｄ，２Ｈ），５．０８（２Ｈ）。

調製例１６
２−ブロモ−１−ピラジン−２−イル−エタノン臭化水素酸塩

酢酸（７０ｍＬ）中のアセチルピラジン（１０ｇ、８１．８８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、臭化水素（３８％酢酸溶液、１６ｍＬ）、続いて過臭化臭化ピリジニウム（２８ｇ、８３．１７ｍｍｏｌ）を加える。それらは一度に加える。反応物を室温にて約１．５時間撹拌する。この時間の間に懸濁液が形成する。ジエチルエーテル（５００ｍＬ）を加え、得られた沈殿物を濾過により回収する。単離した生成物をアセトニトリルおよびジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、淡い茶色の固体（２３．２ｇ、定量的収率）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ９．１９（１Ｈ，ｍ），８．９５（１Ｈ，ｍ），８．８４（１Ｈ，ｍ），５．０２（２Ｈ，ｓ）。

調製例１７
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−［２−オキソ−２−（３−ピリジル）エチル］カルバメート

２−ブロモ−１−（３−ピリジル）エタノン臭化水素酸塩（９．３５ｇ、２１．９６ｍｍｏｌ）を、０℃にて、テトラヒドロフラン（２７０ｍＬ）中の２−プロペン−１−アミン（１．８２ｍＬ、２４．１６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（７．６６ｍＬ、４３．９３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に５分にわたって滴下して加える。反応混合物を０℃にて１時間４０分間撹拌する。テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中のジ−ｔ−ブチルジカルボネート（９．４０ｍＬ、４１．７３ｍｍｏｌ）を加え、反応を０℃にて１時間４０分間継続する。反応を飽和炭酸水素ナトリウム（１２０ｍＬ）でクエンチする。ジクロロメタン（３００ｍＬ）を加え、相を分離する。水相をジクロロメタン（３００ｍＬ）で再抽出する。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮する。粗生成物を、ジクロロメタン中のアセトンの０〜５％勾配、続いてジクロロメタン中のアセトンの５〜１０％勾配、次いで１００％アセトンを使用してシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（１．１５ｇ、１９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２７７（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に適切なピリジンまたはピラジンを使用して調製例１７の方法によって調製する。

調製例２１
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−［２−（５−フルオロ−２−ピリジル）−２−オキソ−エチル］カルバメート

テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中の２−ブロモ−５−フルオロ−ピリジン（２．４６ｇ、１３．９８ｍｍｏｌ）を、室温にて窒素下で撹拌しながらイソプロピルマグネシウムクロリド（１５ｍＬ、３０．００ｍｍｏｌの２Ｍテトラヒドロフラン溶液）に滴下して加える。得られた反応混合物を室温にて２時間撹拌する。次いでテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−［２−［メトキシ（メチル）アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバメート（３．４ｇ、１３．１６ｍｍｏｌ）を室温にて滴下して加え、得られた混合物を一晩撹拌する。希釈して塩酸を加え、続いて酢酸エチルを加える。層を分離し、水相を酢酸エチルで再び抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥するまで濃縮する。得られた残渣を、イソヘキサン中のアセトンの０〜４０％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（１．２７ｇ、３３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３１７（Ｍ＋２３）。

調製例２２
２−（ジアリルアミノ）−１−（３−ピリジル）エタノン

２−ブロモ−１−（３−ピリジル）エタノン臭化水素酸塩（１０ｇ、２３．４９ｍｍｏｌ）を、０℃にて、テトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）中のジアリルアミン（５．２ｍＬ、４２．２９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１０．２４ｍＬ、５８．７３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に５分にわたって少しずつ加える。得られた混合物を０℃にて１時間撹拌する。反応を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）およびジクロロメタン（３００ｍＬ）の添加によってクエンチする。層を分離し、水相をジクロロメタン（３００ｍＬ）で再び抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去して、粗生成物を得て、それを、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（４．７５ｇ、９３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２１７（Ｍ＋１）。

調製例２３
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−（２−ヒドロキシイミノ−２−ピラジン−２−イル−エチル）カルバメート

ｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−（２−オキソ−２−ピラジン−２−イル−エチル）カルバメート（６．５３ｇ、２３．５５ｍｍｏｌ）を、窒素下で撹拌しながらエタノール（２２ｍＬ）に溶解する。ヒドロキシルアミン塩酸塩（３．８０ｇ、５４．１６ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．６７ｍＬ、３２．９７ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を窒素下で８０分間８０℃にて加熱する。次いで反応物を室温に冷却し、減圧下で少量に濃縮する。ジクロロメタン（２００ｍｌ）および１Ｍの水酸化ナトリウム（６０ｍｌ）を加え、相を分離する。水相をジクロロメタン（２×２００ｍＬ）で再び抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させる。粗生成物を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍのアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用してシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、Ｅ／Ｚ異性体（６．６１ｇ、９６％）の混合物として標題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２９３（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例２３の方法によって調製する。

調製例２５
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−［２−（５−フルオロ−２−ピリジル）−２−ヒドロキシイミノ−エチル］カルバメート

テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中の２−ブロモ−５−フルオロ−ピリジン（６．４７５ｇ、３６．７９ｍｍｏｌ）を、室温にて窒素下で撹拌しながらイソプロピルマグネシウムクロリド（２０ｍＬ、４０．００ｍｍｏｌの２Ｍのテトラヒドロフラン溶液）に滴下して加える。得られた反応混合物を室温にて２時間撹拌する。次いでテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−［２−［メトキシ（メチル）アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバメート（４．４３ｇ、１７．１５ｍｍｏｌ）を室温にて滴下して加え、得られた混合物を室温にて４時間３０分撹拌する。反応を、塩化アンモニウム水溶液、続いて酢酸エチルを添加することによってクエンチする。層を分離し、水相を酢酸エチルで再び抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固する。得られたダーク油を撹拌しながらエタノール（６０ｍＬ）中に取る。５０ｗｔ％のヒドロキシルアミン水溶液（３ｍＬ、５５．０９ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を６０℃にて週末にわたって加熱する。次いで反応物を室温に冷却し、減圧下で濃縮する。粗生成物を、酢酸エチル中のイソヘキサンの０〜３５％の勾配を使用してシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、Ｅ／Ｚ異性体（４．２ｇ、９２％）の混合物として標題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３１０（Ｍ＋１）。

調製例２６
ｔｅｒｔ−ブチル６ａ−ピラジン−２−イル−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート

トルエン（８０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−（２−ヒドロキシイミノ−２−ピラジン−２−イル−エチル）カルバメート（６．６ｇ、２２．５８ｍｍｏｌ）の溶液を１２０℃にて２２時間撹拌する。反応物を冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させる。粗生成物を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍのアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（５．１３ｇ、７４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２９３（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例２６の方法によって調製する。

調製例２９
ｔｅｒｔ−ブチル１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート

無水トルエン（３８ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−［２−オキソ−２−（３−ピリジル）エチル］カルバメート（２．３ｇ、８．３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン塩酸塩（２．０５ｇ、１０．８２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．７４ｍＬ、１２．４８ｍｍｏｌ）を加える。チタン（ＩＶ）エトキシド（６．０９ｍＬ、２９．１３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７５℃にて５時間加熱する。反応物を室温に冷却し、水（６０ｍＬ）および酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、混合物を１０分間撹拌し、珪藻土で濾過する。相を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮する。粗物質を、イソヘキサン中のアセトンの０〜４０％勾配を使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（２．９ｇ、７６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４１２（Ｍ＋１）。

以下の化合物は、２．５時間から６時間加熱しながら本質的に調製例２９の方法によって調製する。

調製例３３
２−（ジアリルアミノ）−１−（３−ピリジル）エタノンオキシム

２−（ジアリルアミノ）−１−（３−ピリジル）エタノン（４．７５ｇ、２１．９６ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下で、エタノール（４７ｍＬ）に溶解する。次いでヒドロキシルアミン塩酸塩（３．５５ｇ、５０．５１ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．５ｍＬ、３０．７５ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液を窒素下で１４０分間７０℃にて加熱する。次いで反応物を室温に冷却し、溶媒を減圧下で部分的に蒸発させる。得られた残渣は、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）とジクロロメタン（２５０ｍＬ）との間に分配する。相を分離し、水相を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で再び抽出する。有機層を合わせ、溶媒を蒸発させる。粗物質を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜１０％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｅ／Ｚ異性体の混合物として標題化合物（３．９５ｇ、７８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２３２（Ｍ＋１）。

調製例３４
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−［２−ヒドロキシイミノ−２−（３−ピリジル）エチル］カルバメート

ｔｅｒｔ−ブチルＮ−アリル−Ｎ−［２−オキソ−２−（３−ピリジル）エチル］カルバメート（３１．３４ｇ、１１３．４１ｍｍｏｌ）を、窒素下で撹拌しながらエタノール（１１０ｍＬ）に溶解する。ヒドロキシルアミン塩酸塩（１８．３１ｇ、２６０．８５ｍｍｏｌ）およびピリジン（１２．８４ｍＬ、１５８．７８ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液を窒素下で２時間８０℃にて加熱し、次いで室温に冷却する。溶媒を部分的に蒸発させ、得られた残渣を次いで２Ｍの水酸化ナトリウム（１５０ｍｌ）とジクロロメタン（５００ｍＬ）との間に分配する。相を分離し、水相をジクロロメタン（２×２５０ｍＬ）で再び抽出する。有機抽出物を合わせ、減圧下で蒸発させる。粗生成物を、ジクロロメタン中の０〜１０％の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（３０．３４ｇ、９１．８２％）をＥ／Ｚ異性体の混合物として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）Ｍ＋１＝２９２。

調製例３５
５−アリル−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

トルエン（５６ｍＬ）中の２−（ジアリルアミノ）−１−（３−ピリジル）エタノンオキシム（３．９５ｇ、１７．０８ｍｍｏｌ）の溶液を１２０℃にて１８時間加熱する。溶媒を減圧下で除去する。粗生成物を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（２．１４ｇ、４３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２３２（Ｍ＋１）。

調製例３６
６ａ−（４−ピリジル）−１，３，３ａ，４，５，６−ヘキサヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−６ａ−（４−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート（１．３ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（７ｍＬ、９４．７７ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液を室温にて１時間撹拌する。反応物を濃縮し、得られた残渣を室温にて一晩維持する。次いでこの残渣をイオン交換カラムに充填し、最初にカラムをメタノールで溶出し、続いて２Ｍアンモニア／メタノール溶液で溶出する。所望の塩基性画分を収集し、減圧下で濃縮して、標題化合物（５９２ｍｇ、９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：１９２（Ｍ＋１）。

調製例３７
６ａ−ピラジン−２−イル−１，３，３ａ，４，５，６−ヘキサヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

トリフルオロ酢酸（４０ｍＬ）を、室温にて、ジクロロメタン（２００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６ａ−ピラジン−２−イル−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート（５．１４ｇ、１７．５８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加える。混合物を１時間撹拌し、溶媒を減圧下で蒸発させる。得られた残渣をメタノール（１００ｍＬ）に溶解し、イオン交換カラム（５０ｇ）に充填し、カラムを最初にメタノール（１１０ｍＬ）で溶出し、続いて７Ｍのアンモニア／メタノール溶液（１５０ｍＬ）で溶出する。この塩基性画分を減圧下で濃縮して、粗生成物を得、
それを、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノールの０〜１０％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに精製して、標題化合物（２．４ｇ、７１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：１９３（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例３７の方法によって調製する。

調製例３９
６ａ−（３−ピリジル）−１，３，３ａ，４，５，６−ヘキサヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

５−アリル−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（２．１４ｇ、７．４０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルバルビツール酸（６．９３ｇ、４４．４１ｍｍｏｌ）をクロロホルム（８０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を液体窒素を使用して２回脱気する。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１．２８ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて２時間撹拌する。反応物を減圧下で濃縮する。得られた残渣をジメチルスルホキシド／メタノール（４０ｍｌ）の１：１混合物に溶解し、溶液をイオン交換カラムに充填する。この物質をメタノール（７０ｍＬ）、次いで７Ｍアンモニア／メタノール溶液（７０ｍＬ）で溶出する。塩基性画分を収集し、減圧下で濃縮する。生成物をさらに、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜１５％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．２８ｇ、８６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：１９２（Ｍ＋１）。

調製例４０
５−（５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン−２−イル）−６ａ−ピラジン−２−イル−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）中の６ａ−ピラジン−２−イル−１，３，３ａ，４，５，６−ヘキサヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（１．４ｇ、７．２８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−クロロ−５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン（５．１４ｇ、２９．１３ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（５．７ｍＬ、３２．７７ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液を１１０℃にて４時間加熱する。反応物を冷却し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、ジクロロメタン中の０．１４ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（０．９３ｇ、３８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３３３（Ｍ＋１）。

以下の化合物は、４時間から４．５時間の加熱時間および１００〜１１０℃の範囲の温度で適切なピリミジンを使用して本質的に調製例４０の方法によって調製する。

調製例４５
１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−６ａ−（３−ピリジル）−３ａ，４，５，６−テトラヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

ジクロロメタン（８０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート（２．９ｇ、７．０５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸（１６ｍＬ）を加える。反応混合物を室温にて１時間３０分撹拌する。溶媒を濃縮し、残渣を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）とジクロロメタン（１００ｍＬ）との間に分配する。得られた溶液を３０分間撹拌し、次いで相を分離する。水相をジクロロメタンで再び抽出する。合わせたジクロロメタン抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、残渣を得る。残渣を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜１０％勾配を使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（１．３３ｇ、４３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３１２（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例４５の方法によって調製する。

調製例４８
５−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）中の１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−６ａ−（３−ピリジル）−３ａ，４，５，６−テトラヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（１．３３ｇ、４．２７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン（２．５５ｇ、１９．２２ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３．７２ｍＬ、２１．３６ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液を１１０℃にて３時間加熱する。反応物を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させて残渣を得る。残渣を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．１１ｇ、５４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４０８（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例４８の方法によって調製する。

調製例５１
５−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

トリフルオロ酢酸（９．３ｍＬ）中の５−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（１．１１ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）の溶液を６０℃にて１時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、得られた残渣をジクロロメタン（１００ｍＬ）と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）との間に分配する。有機相を分離し、水相をジクロロメタン（１００ｍＬ）で２回再び抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空下で蒸発させて残渣を得、それを、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜１０％勾配を使用したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０．６４ｇ、９６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２８８（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例５１の方法によって調製する。

調製例５４
Ｎ−［５−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−１−カルボチオイル］ベンズアミド

ベンゾイルイソチオシアネート（５１１μＬ、３．７９ｍｍｏｌ）を、０℃にて、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中の５−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（６４０ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に滴下して加える。得られた混合物を０℃にて１時間撹拌し、１時間にわたって室温に加温する。溶媒を真空下で蒸発させ、得られた残渣を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（１．１ｇ、定量的）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４５１（Ｍ＋１）。

調製例５５
Ｎ−［６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

酢酸（５ｍＬ）中のＮ−［５−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−６ａ−（３−ピリジル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−１−カルボチオイル］ベンズアミド（５５０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）および粉末亜鉛（７９８．３３ｍｇ、１２．２１ｍｍｏｌ）の混合物を室温にて２時間超音波処理する。混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）で抽出する。水相をジクロロメタン（１００ｍＬ）で３回再び抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、残渣を得る。残渣を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜１０％勾配を使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、中間体Ｎ−［［１−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−３−（３−ピリジル）ピロリジン−３−イル］カルバモチオイル］ベンズアミド（１４５ｍｇ）を得る。これをジクロロメタン（６ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却する。次いで１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミン（０．０５ｇ、３７４．１９μｍｏｌ）を加え、混合物を０℃にて１時間撹拌する。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）およびジクロロメタン（１００ｍＬ）を加える。相を分離し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、標題生成物（１１０ｍｇ、１７％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４３５（Ｍ＋１）。

調製例５６
［４−アミノ−１−（５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン−２−イル）−４−ピラジン−２−イル−ピロリジン−３−イル］メタノール

エタノール（４０ｍＬ）中の５−（５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン−２−イル）−６ａ−ピラジン−２−イル−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（０．９２ｇ、２．７７ｍｍｏｌ）の溶液を、ＰＡＲＲ水素化器を使用して５時間、ラネーニッケル（水中のスラリーとして）（２．７ｇ、４５．５４ｍｍｏｌ）の存在下で５０ｐｓｉにて水素化する。メタノールを加え、触媒を珪藻土のパッドを通す濾過により除去する。珪藻土のパッドをメタノールで洗浄する。合わせた濾液を減圧下で濃縮して標題化合物（０．９２ｇ、９９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３３５（Ｍ＋１）。

以下の化合物は、ＰＡＲＲ水素化器またはフロー水素化器を使用して５時間から３日の反応時間で本質的に調製例５６の方法によって調製する。

調製例６５
Ｎ−［［１−（５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン−２−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−３−ピラジン−２−イル−ピロリジン−３−イル］カルバモチオイル］ベンズアミド

窒素雰囲気下で、テトラヒドロフラン（２９ｍＬ）中の［４−アミノ−１−（５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン−２−イル）−４−ピラジン−２−イル−ピロリジン−３−イル］メタノール（９３０ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、イソチオシアン酸ベンゾイル（６１３μＬ、４．４５ｍｍｏｌ）を加える。反応物を室温にて１時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去する。得られた残渣を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．３２ｇ、９５％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４９８（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例６５の方法によって調製する。

調製例７４
ラセミ体Ｎ−［６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（２−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

４−アミノ−１−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４−（２−ピリジル）ピロリジン−３−イル］メタノール（２４０ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）に溶解する。混合物を窒素下で０℃に冷却し、イソチオシアン酸ベンゾイル（１２０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物を３０分間撹拌する。トリフェニルホスフィン（２６０ｍｇ、０．９８１ｍｍｏｌ）、続いてジイソプロピルアゾジカルボキシレート（３４０ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温に加温する。１時間後、反応物を減圧下で濃縮する。得られた残渣を、シクロヘキサン中のテトラヒドロフランの０〜５０％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製する。これをアキラルＳＦＣ（超臨界流体クロマトグラフィー）（カラム：Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ ＤＮＰ（ジニトロフェニル）（５μ）、２１．１×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の１５〜３０％メタノールの勾配（０．２％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２４０ｎｍにて６５ｍＬ／分）によりさらに精製して、標題化合物（１６０ｍｇ、４４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４３５（Ｍ＋１）。

調製例７５
ラセミ体Ｎ−［６−（５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン−２−イル）−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミン（４９２μＬ、３．７１ｍｍｏｌ）を、室温にて、ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のＮ−［［１−（５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン−２−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−３−ピラジン−２−イル−ピロリジン−３−イル］カルバモチオイル］ベンズアミド（１．３２ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加える。反応混合物を１時間３０分撹拌する。次いで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）、続いてジクロロメタン（７０ｍＬ）を加える。層を分離し、水層をジクロロメタン（７０ｍＬ）で再び抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させる。得られた残渣をメタノール（４０ｍＬ）に溶解し、イオン交換カラムに充填する。カラムをメタノール（６０ｍＬ）、次いで７Ｍアンモニア／メタノール溶液（１００ｍＬ）で溶出する。塩基性溶媒画分を収集し、減圧下で蒸発させる。単離した残渣を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに精製して、標題化合物（８２０ｍｇ、６４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４８０（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例７５の方法によって調製する。

調製例８１
ラセミ体ｔｅｒｔ−ブチル２−ベンズアミド−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミン（４０９．７１μＬ、３．１０ｍｍｏｌ）を、室温にて、ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−（ベンゾイルカルバモチオイルアミノ）−４−（ヒドロキシメチル）−３−ピラジン−２−イル−ピロリジン−１−カルボキシレート（１．０９ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加える。反応物を室温にて３時間撹拌した後、炭酸ナトリウム（１５ｍＬ）の飽和水溶液を加え、混合物を５分間撹拌する。ジクロロメタン（８０ｍＬ）を加え、層を分離する。水層をジクロロメタン（７０ｍＬ）で再び抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮する。単離した生成物をメタノール（６０ｍＬ）に溶解し、メタノール（６０ｍＬ）、次いで７Ｍのアンモニア／メタノール溶液（１２０ｍＬ）で溶出するイオン交換カラムクロマトグラフィーによって精製する。塩基性画分を収集し、得られた生成物をさらに、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題生成物（７４７ｍｇ、７１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）４４０（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例８１の方法によって調製する。

調製例８４
ｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＲ）−２−ベンズアミド−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

ラセミ体ｔｅｒｔ−ブチル２−ベンズアミド−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレートを、キラルＳＦＣ（超臨界流体クロマトグラフィー）（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（５μ）、３０×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の５０％イソプロパノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２６０ｎｍにて１２０ｍＬ／分）によってその構成物質の鏡像異性体に分離する。第１の溶出異性体は標題化合物である。

調製例８５
ｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＲ）−２−ベンズアミド−７ａ−（５−フルオロ−２−ピリジル）−４−４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

ラセミ体ｔｅｒｔ−ブチル２−ベンズアミド−７ａ−（５−フルオロ−２−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレートを、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（５μ）、３０×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の４０％メタノール（０％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２６０ｎｍにて１２０ｍＬ／分）によりその構成物質の鏡像異性体に分離する。第２の溶出異性体は標題化合物である。

調製例８６
ｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

ラセミ体ｔｅｒｔ−ブチル２−ベンズアミド−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレートを、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（５μ）、３０×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の３５％イソプロパノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２６０ｎｍにて１３０ｍＬ／分）によりその構成物質の鏡像異性体に分離する。第１の溶出異性体は標題化合物である。

調製例８７
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＲ）−７ａ−ピラジン−２−イル−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

トリフルオロ酢酸（１．５ｍＬ）を、室温にて、ジクロロメタン（６ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＲ）−２−ベンズアミド−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート（２９９ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加える。反応物を室温にて８０分間撹拌し、溶媒を減圧下で除去する。得られた残渣をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、この溶液をイオン交換カラムに充填し、メタノール、次いで７Ｍアンモニア／メタノール溶液で溶出する。塩基性画分を収集し、減圧下で濃縮して、標題化合物（２３１ｍｇ、定量的）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３４０（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例８７の方法によって調製する。

調製例９０
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＲ）−６−［５−フルオロ−４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−２−イル］−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＲ）−７ａ−ピラジン−２−イル−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２３１ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（４ｍＬ）に溶解する。２−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）プロパン−２−オール（６４８．６０ｍｇ、３．４０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（６５３μＬ、３．７４ｍｍｏｌ）を加える。反応物を１１０℃にて６時間加熱し、次いで室温に冷却し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜５％勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（３３０ｍｇ、９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４９４（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に調製例９０の方法によって調製する。

実施例Ａ
２−［２−［（４ａＲ，７ａＲ）−２−アミノ−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＲ）−６−［５−フルオロ−４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−２−イル］−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（３３０ｍｇ、０．６６８ｍｍｏｌ）を撹拌しながらメタノール（８ｍＬ）に溶解する。水酸化リチウム（４２．５１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を６０℃にて５時間３０分加熱する。反応物を室温に冷却し、シリカゲルカラムに充填する。カラムをジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノールの０〜５％勾配で溶出する。得た生成物をさらに、６０ｍＬ／分にて９分にわたって１０％Ｂ〜１００％Ｂ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（カラム＝Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水と１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム、ｐＨをアンモニアでｐＨ１０に調整した、移動相Ｂ：アセトニトリル）により精製して、標題化合物（１４６ｍｇ、５６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３９０（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に実施例Ａの方法によって調製する。

実施例Ｊ
ラセミ体６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン

エタノール（１０ｍＬ）中のＮ−［６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１１０ｍｇ、０．２１０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ピリジン（１８７μＬ、２．３１ｍｍｏｌ）およびＯ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１４３ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を加える。混合物を１７時間撹拌しながら７０℃にて加熱する。溶媒を減圧下で除去する。残渣を、ジクロロメタン中の０．１４Ｍアンモニア／メタノール溶液の０〜１０％勾配を使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（６２ｍｇ、８９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３３１（Ｍ＋１）。

以下の実施例は、２〜１８時間の反応時間および６５〜８０℃の温度で本質的に実施例Ｊの方法によって調製する。

実施例Ｒ
（４ａＲ，７ａＲ）−６−（５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン−２−イル）−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン

ラセミ体６−（５−フルオロ−４−メトキシ−６−メチル−ピリミジン−２−イル）−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（４９０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（５μ）、２１．２×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の５０％メタノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；ＵＶ２６０ｎｍにて流速７０ｍＬ／分）によってその構成物質の鏡像異性体に分離する。第１の溶出異性体は標題化合物（２０６ｍｇ、３２％）である。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３７６（Ｍ＋１）。

実施例１
（４ａＲ，７ａＳ）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン

ラセミ体６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（１３７ｍｇ、０．４１５ｍｍｏｌ）を、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（５μ）、２１．２×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の３５％イソプロパノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；ＵＶ２６０ｎｍにて流速：７０ｍＬ／分）によってその構成物質の鏡像異性体に分離する。第２の溶出異性体は標題化合物（１９ｍｇ）である。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３３１（Ｍ＋１）。

実施例２
（４ａＲ，７ａＳ）−６−（５−フルオロ−４−イソプロピル−ピリミジン−２−イル）−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン

ラセミ体６−（５−フルオロ−４−イソプロピル−ピリミジン−２−イル）−７ａ−（３−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（２１０ｍｇ、０．５６４ｍｍｏｌ）を、キラルＳＣＦ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（５μ）、２１．２×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の２５％メタノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２６０ｎｍにて７０ｍＬ／分）によってその構成物質の鏡像異性体に分離する。第１の溶出異性体は、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（５μ）、２１．２×２５０ｍｍ：溶出液：ＣＯ_２中の１５％メタノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２６０ｎｍにて７０ｍＬ／分）によって再びさらに精製されて、標題化合物（７１ｍｇ）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３７３（Ｍ＋１）。

実施例３
（４ａＲ，７ａＲ）−６−（５−フルオロ−４−イソプロピル−ピリミジン−２−イル）−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン、異性体１

ラセミ体６−（５−フルオロ−４−イソプロピル−ピリミジン−２−イル）−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（１２７ｍｇ、０．３４０ｍｍｏｌ）を、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（５μ）、２１．２×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の５０％エタノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２６０ｎｍにて７０ｍＬ／分）によってその構成物質の鏡像異性体に分離する。第１の溶出異性体は標題化合物（５４ｍｇ）である。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３７４（Ｍ＋１）。

実施例４
（４ａＲ，７ａＲ）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（２−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン

ラセミ体６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（２−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（８２ｍｇ）を、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ（５μ）、３０×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の５５％イソプロパノール（０．４％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２４０ｎｍにて７０ｍＬ／分）によってその構成物質の鏡像異性体に分離する。第１の溶出異性体は標題化合物（３７．７ｍｇ）である。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３３１（Ｍ＋１）。

実施例５
（４ａＲ，７ａＲ）−７ａ−（５−フルオロ−２−ピリジル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン、異性体−２

ラセミ体７ａ−（５−フルオロ−２−ピリジル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（６０ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）を、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（５μ）、２１．２×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の４０％エタノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２６０ｎｍにて７０ｍＬ／分）によってその構成物質の鏡像異性体に分離する。第２の溶出異性体は標題化合物（２３．８ｍｇ）である。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３４９（Ｍ＋１）。

実施例６
（４ａＲ，７ａＳ）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（４−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン、異性体−２

ラセミ体６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−（４−ピリジル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（１８５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ−Ｈ（５μ）、２１．２×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の２５％エタノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２６０ｎｍにて７０ｍＬ／分）によってその構成物質の鏡像異性体に分離する。第２の溶出異性体は標題化合物（４０ｍｇ）である。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３３１（Ｍ＋１）。

実施例７
（４ａＲ，７ａＲ）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン、異性体１

ラセミ体６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（５２０ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を、キラルＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（５μ）、２１．２×２５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の４５％メタノール（０．２％ジエチルメチルアミン）；流速：ＵＶ２６０ｎｍにて７０ｍＬ／分）によってその構成物質の鏡像異性体に分離する。第１の溶出異性体は標題化合物（２３０ｍｇ）である。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３３２（Ｍ＋１）。

実施例８
２−［２−［（４ａＲ，７ａＲ）−２−アミノ−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール塩酸塩

２−［２−［（４ａＲ，７ａＲ）−２−アミノ−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オール（１２０ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）を０．１ＭのＨＣｌ（３．１ｍＬ）およびアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解する。得られた溶液を凍結乾燥して、白色固体として標題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３９０（Ｍ＋１）。

以下の化合物は本質的に実施例８の方法によって調製する。

インビトロアッセイ手順：
インビトロ酵素および細胞アッセイに関して、試験化合物をＤＭＳＯ中に調製して１０ｍＭのストック溶液を作製する。ストック溶液をＤＭＳＯ中で連続希釈して、インビトロ酵素および全細胞アッセイを実施する前に９６ウェル丸底プレート中で１０ｍＭ〜１ｎＭの範囲の最終化合物濃度で１０点希釈曲線を得る。

組換えヒトＢＡＣＥ１の調製
ヒトＢＡＣＥ１（アクセッション番号：ＡＦ１９０７２５）を、室温ＰＣＲによって全脳ｃＤＮＡからクローニングする。アミノ酸配列＃１〜４６０に対応するヌクレオチド配列を、ヒトＩｇＧ_１（Ｆｃ）ポリペプチドをコードするｃＤＮＡに挿入する（Ｖａｓｓａｒら、１９９９）。ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃと命名される、ＢＡＣＥ（１〜４６０）およびヒトＦｃのこの融合タンパク質をｐＪＢ０２ベクター内に構築する。ヒトＢＡＣＥ１（１〜４６０）：Ｆｃ（ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ）をＨＥＫ２９３細胞において一過的に発現する。各構築物の２５０μｇのｃＤＮＡをＦｕｇｅｎｅ６と混合し、１リットルのＨＥＫ２９３細胞に加える。トランスフェクションの４日後、馴化培地を精製のために収集する。ｈｕＢＡＣＥ１：ＦｃをプロテインＡクロマトグラフィーによって精製する。酵素を少しのアリコートにおいて−８０℃に保存する。

インビトロプロテアーゼ阻害アッセイ：
ＢＡＣＥ１ ＦＲＥＴアッセイ
試験化合物の連続希釈を上記のように調製する。化合物をＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液中でさらに２０倍に希釈する。１０μＬの各希釈物を、反応混合物（２５μＬの５０ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４、ｐＨ４．６、１ｍＭのＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００、１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン、および１５μＭのＦＲＥＴ基質）を含有する、列Ａ〜Ｈの対応する低いタンパク質結合ブラックプレートで各ウェルに加える（Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、９１（６）１２４９−５９（２００４）を参照のこと）。内容物を、プレートシェーカーで１０分間、十分に混合する。ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液中の１５μＬの２００ｐＭのヒトＢＡＣＥ１（１〜４６０）：Ｆｃ（Ｖａｓｓｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８６、７３５−７４１（１９９９）を参照のこと）を基質および試験化合物を含有するプレートに加えて反応を開始する。０時における混合物のＲＦＵを、プレートシェーカーで簡単に混合した後、励起波長３５５ｎｍおよび放射波長４６０ｎｍにて記録する。反応プレートをアルミニウム箔で覆い、１６〜２４時間、室温にて暗い加湿オーブン内に維持する。インキュベーションの終わりにＲＦＵを、０時において使用した同じ励起および放射設定で記録する。０時およびインキュベーションの終了時におけるＲＦＵの相違は、化合物処理下でのＢＡＣＥ１の活性を表す。ＲＦＵの相違を阻害剤濃度に対してプロットし、曲線を４パラメータロジスティック式に適合してＩＣ_５０値を得る（Ｓｉｎｈａら、Ｎａｔｕｒｅ、４０２、５３７−５４０（２０００）を参照のこと）。

本明細書における実施例１〜１７の化合物を本質的に上記のように試験すると、ＢＡＣＥ１について約１μＭ未満のＩＣ_５０値を示した。以下の例示した化合物を本質的に上記のように試験すると、ＢＡＣＥ１について以下の活性を示した：

これらの代表的なデータにより、表２１の化合物が、精製された組換えＢＡＣＥ１酵素活性をインビトロで強力に阻害することが実証される。

ベータ−セクレターゼ活性の阻害を測定するための全細胞アッセイ
ＨＥＫ２９３Ｓｗｅ全細胞アッセイ
ベータ−セクレターゼ活性の阻害を測定するための慣例の全細胞アッセイは、一般にＳｗｅｄｉｓｈ変異体（ＨＥＫ２９３／ＡＰＰ７５１ｓｗと示される）と呼ばれ、Ａベータを過剰生産することが示されている（Ｃｉｔｒｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３６０、６７２−６７４（１９９２））、天然に存在する二重変異体Ｌｙｓ６５１Ｍｅｔ６５２からＡｓｎ６５１Ｌｅｕ６５２を含有するヒトＡＰＰ７５１ ｃＤＮＡを安定に発現するヒト胚腎臓細胞株ＨＥＫ２９３ｐ（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１５７３）を利用する。インビトロＡベータ減少アッセイは文献に記載されている（Ｄｏｖｅｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７６、１７３−１８１（２００１）；Ｓｅｕｂｅｒｔら、Ｎａｔｕｒｅ、３６１、２６０（１９９３）；およびＪｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４、１５５０−１５５５（１９９７）を参照のこと）。

細胞（２００μＬの培地、１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭを含有する、３．５×１０^４個の細胞／ウェルにてＨＥＫ２９３／ＡＰＰ７５１ｓｗ）を、所望の濃度にて、阻害剤（ＤＭＳＯに希釈した）の存在／非存在下で３７℃にて４〜２４時間インキュベートする。インキュベーションの終わりに、例えば、Ａベータペプチドの分析によって、ベータ−セクレターゼ活性の証拠について馴化培地を分析する。捕捉抗体としてモノクローナル２６６および報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用して、サンドイッチＥＬＩＳＡによって全Ａベータペプチド（Ａベータ１〜ｘ）を測定する。あるいは、Ａベータ１〜４０およびＡベータ１〜４２ペプチドを、Ａベータ１〜４０について捕捉抗体としてモノクローナル２Ｇ３およびＡベータ１〜４２について捕捉抗体としてモノクローナル２１Ｆ１２を使用してサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。Ａベータ１〜４０およびＡベータ１〜４２の両方のＥＬＩＳＡは報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用する。化合物処理後に馴化培地に放出したＡベータの濃度はこのような条件下でＢＡＣＥ１の活性に対応する。１０点阻害曲線をプロットし、４パラメータロジスティック式に適合して、Ａベータ低下効果についてＩＣ_５０値を得る。以下の例示した化合物を本質的に上記のように試験すると、Ａベータ低下効果について以下の活性を示した：

これらのデータより、表２２の化合物が、インビトロで細胞内で天然内因性ヒトＢＡＣＥ１を阻害することが実証される。

ＰＤＡＰＰ初代神経アッセイ
確認の全細胞アッセイもまた、ＰＤＡＰＰトランスジェニック胚マウスから生成された初代神経培養物中で実施する。初代皮質ニューロンを胎生１６日目のＰＤＡＰＰ胚から調製し、９６ウェルプレート（ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）プラス１０％ＦＢＳ中の１５×１０^４個の細胞／ウェル）中で培養する。インビトロで２日後、培養培地を、Ｂ２７補足物および２μＭ（最終）のＡｒａ−Ｃ（Ｓｉｇｍａ、Ｃ１７６８）を含有する無血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）と置き換える。インビトロで５日目に、神経を、所望の濃度にて阻害剤（ＤＭＳＯ中に希釈した）の存在／非存在下で、３７℃にて２４時間、インキュベートする。インキュベーションの終わりに、例えば、Ａベータペプチドを分析することによってベータ−セクレターゼ活性の証拠について馴化培地を分析する。全Ａベータペプチド（Ａベータ１〜ｘ）を、捕捉抗体としてモノクローナル２６６および報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用してサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。あるいは、Ａベータ１〜４０およびＡベータ１〜４２ペプチドを、Ａベータ１〜４０について捕捉抗体としてモノクローナル２Ｇ３およびＡベータ１〜４２について捕捉抗体としてモノクローナル２１Ｆ１２を使用してサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。Ａベータ１〜４０およびＡベータ１〜４２の両方のＥＬＩＳＡは報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用する。化合物処理後に馴化培地に放出されるＡベータの濃度は、このような条件下でＢＡＣＥ１の活性に対応する。１０点阻害曲線をプロットし、Ａベータ低下効果についてＩＣ_５０値を得るために４パラメータロジスティック式に適合する。以下の例示した化合物を本質的に上記のように試験すると、Ａベータ低下効果について以下の活性を示した：

これらのデータにより、表２３の化合物が、インビトロで細胞中で天然の内因性マウスＢＡＣＥ１を阻害することが実証される。

ベータ−セクレターゼのインビボでの阻害
マウス、ラット、モルモット、イヌ、およびサルを含む、いくつかの動物モデルを、化合物処理後のインビボでのベータ−セクレターゼ活性の阻害についてスクリーニングするために使用できる。本発明に使用した動物は、Ｇａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３、５２３−５２７（１９９５）に記載されるトランスジェニックＰＤＡＰＰマウスであり、これは、阻害化合物の存在下で、Ａベータ産生のインビボでの阻害を分析するのに有用である。２ヶ月齢のＰＤＡＰＰマウスに、水中のＮ−メチルピロリドン（Ｐｈａｒｍａｓｏｌｖｅ（登録商標））で製剤化した化合物を投与する。化合物の投与から３時間後、動物を屠殺し、Ａベータ断片の分析のために脳を取り出す（Ｄｏｖｅｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７６、１７３−１８１（２００１）；およびＪｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４、１５５０−１５５５（１９９７）を参照のこと）。

標準的なインビボ薬理学的研究について、動物に種々の濃度の化合物を投与し、同じ時間に投与したビヒクル処理した対照群と比較する。試験期間の終わりに、動物を屠殺し、特異的サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイによってＡベータペプチドの存在について脳組織を分析する。本明細書で使用される場合、「Ａベータ１〜ｘペプチド」とは、残基１で開始し、残基２８より多いＣ末端で終了するＡベータ種の合計を指す。これはＡベータ種の大部分を検出し、しばしば「全Ａベータ」と呼ばれる。

阻害化合物を投与した動物（ＰＤＡＰＰまたは他のＡＰＰトランスジェニックまたは非トランスジェニックマウス）は、ビヒクル処理した対照またはゼロ時の対照と比較して脳組織内のＡベータの減少が実証され得る。例えば、若い雌のＰＤＡＰＰマウスへの実施例８の化合物の１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇの経口用量の投与から３時間後、Ａベータ１〜ｘペプチドレベルは、ビヒクル処理したマウスと比較して、脳海馬においてそれぞれ約１９％および４６％、ならびに大脳皮質においてそれぞれ約２３％および５３％、顕著に減少する。実施例８の化合物の経口投与後の全Ａベータの顕著および用量反応性の減少は、インビボでのＢＡＣＥ（ベータ−セクレターゼ酵素）阻害の機構と一致する。これらの研究により、本発明の化合物はＢＡＣＥを阻害し、したがって、Ａベータレベルを減少させるのに有用であることが示される。したがって、本発明の化合物はＢＡＣＥの有効な阻害剤である。

Claims (14)

1. 以下の式の化合物：
   

   

   
   （式中、Ａは、
   

   

   
   からなる群から選択され、
   Ｒ^１は、ＨまたはＦであり、
   Ｒ^２は、Ｈ、−ＯＣＨ_３、Ｃ１−Ｃ３アルキル、
   

   

   
   であり、
   Ｒ^３は、Ｈ、−ＣＨ_３、または−ＯＣＨ_３であり、
   Ｒ^４は、ＨまたはＦである）
   またはその薬学的に許容可能な塩。
2. Ａは、
   

   

   
   からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物または塩。
3. Ａは、
   

   

   
   からなる群から選択される、請求項１または請求項２に記載の化合物または塩。
4. Ａは、
   

   

   
   である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物または塩。
5. Ｒ^２は、
   

   

   
   である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
6. Ｒ^１は、Ｆである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物または塩。
7. ２−［２−［（４ａＲ，７ａＲ）−２−アミノ−７ａ−ピラジン−２−イル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル］プロパン−２−オールである、請求項１に記載の化合物または塩。
8. 患者においてアルツハイマー病を治療する方法であって、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
9. アルツハイマー病を発症する危険性のある患者において進行を予防する方法であって、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
10. 患者におけるＢＡＣＥを阻害する方法であって、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
11. 療法に使用するための請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
12. アルツハイマー病の治療に使用するための請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学液に許容可能な塩。
13. 請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に含む、医薬組成物。
14. １種以上の他の治療剤をさらに含む、請求項１３に記載の医薬組成物。