JP6095844B2 - テトラヒドロピロロチアジン化合物 - Google Patents

Description

本発明は、新規テトラヒドロピロロチアジン化合物、その化合物を含む医薬組成物、生理学的障害を治療するためにその化合物を使用する方法、ならびにその化合物の合成に有用な中間体およびプロセスに関する。

本発明は、アルツハイマー病ならびにアミロイドβ（Ａベータ）ペプチド、神経毒性およびアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の高度に凝集したペプチド断片に関与する他の疾患および障害の治療の分野である。アルツハイマー病は世界中で数百万人の患者に影響を及ぼす破壊的な神経変性障害である。患者に一時的にのみ対症効果をもたらす市販の現在承認されている薬剤を考慮して、アルツハイマー病の治療において重大なまだ満たされていない必要性が存在している。

アルツハイマー病は、脳内のＡベータの生成、凝集および沈殿によって特徴付けられる。β−セクレターゼ（β−部位アミロイド前駆体タンパク質切断酵素；ＢＡＣＥ）の完全または部分的な阻害は、マウスモデルにおいてプラークに関連したおよびプラーク依存性の病変に対して有意な効果を有することが示されており、Ａβペプチドレベルのさらに少しの低下が、プラーク負荷およびシナプス欠損の長期間の有意な減少を生じ得るので、特にアルツハイマー病の治療において有意な治療的有用性を提供することを示唆している。

特許文献１は、ＢＡＣＥ阻害活性を有する縮合アミノジヒドロチアジン誘導体を開示しており、それはアルツハイマー型認知症などのＡβペプチドによって引き起こされる神経変性疾患について有用な治療剤としてさらに開示されている。さらに、非特許文献１は、経口投与されるＣＮＳ活性ＢＡＣＥ阻害剤である、（Ｓ）−４−（２，４−ジフルオロ−５−ピリミジン−５−イル−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミンを開示している。

米国特許出願公開第２００９／０２０９７５５号

Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、３１（４６）、１６５０７−１６５１６ページ（２０１１）

十分にＣＮＳに浸透する有効なＢＡＣＥ阻害剤は、アルツハイマー病などのＡベータペプチド媒介性障害のための治療を提供することが望まれる。本発明はＢＡＣＥの有効な阻害剤である特定の新規化合物を提供する。さらに、本発明はＣＮＳに浸透する特定の新規化合物を提供する。

したがって、本発明は、式Ｉの化合物：

（式中、ＲはＨまたはＦであり、
Ａは

である）
またはその医薬的に許容可能な塩を提供する。

本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む、患者におけるアルツハイマー病を治療する方法を提供する。

本発明はさらに、有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む、患者における軽度認識障害のアルツハイマー病への進行を予防する方法を提供する。

本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む、患者におけるＢＡＣＥを阻害する方法を提供する。

本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む、アミロイド前駆体タンパク質のＢＡＣＥ媒介性切断を阻害する方法を提供する。

本発明はさらに、有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、Ａベータペプチドの産生を阻害する方法を提供する。

さらに、本発明は、療法に使用するため、特にアルツハイマー病を治療するため、または軽度認識障害のアルツハイマー病への進行を予防するための式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩を提供する。なおさらに、本発明は、アルツハイマー病を治療するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はまた、軽度認識障害のアルツハイマー病への進行を予防するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はまた、ＢＡＣＥを阻害するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はさらに、Ａベータペプチドの産生を阻害するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。

本発明はさらに、１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物を提供する。特定の実施形態において、組成物はさらに、１種以上の他の治療剤を含む。本発明はまた、式Ｉの化合物を合成するための新規中間体およびプロセスを包含する。

軽度認識障害は、臨床所見および時間と共に軽度認識障害を示す患者からアルツハイマー型認知症への進行に基づいてアルツハイマー病に関連する認知症の潜在的な前駆期と定義されている（Ｍｏｒｒｉｓら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．、５８、３９７−４０５（２００１）；Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．、５６、３０３−３０８（１９９９））。「軽度認識障害からアルツハイマー病への進行の予防」という用語は、患者における軽度認識障害からアルツハイマー病への進行を遅延、停止または反転することを含む。

好ましい化合物は、

またはその医薬的に許容可能な塩であり、遊離塩基であることが特に好ましい。

本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療すること」という用語は、既存の症状または障害の進行または重症度を抑制、遅延、停止、または反転することを含む。

本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、ヒトを指す。

「Ａベータペプチドの産生の阻害」という用語は、患者におけるＡベータペプチドのインビボレベルの減少を意味すると解釈される。

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、患者へ単回または複数回投与すると、診断または治療下の患者に所望の効果を提供する、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩の量または用量を指す。

有効量は、公知の技術の使用によって、および同様の条件下で得られた結果を観察することによって、当業者としての担当医によって容易に決定され得る。患者についての有効量を決定する際に、限定されないが、患者の種；その大きさ、年齢および全体的な健康；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の関与の程度または重症度；個々の患者の反応；投与される特定の化合物；投与様式；投与される製剤のバイオアベイラビリティ特性；選択される投与レジメン；併用薬の使用；および他の関連状況を含む、複数の要因が担当医によって考慮される。

本発明の化合物は全体的に広い投薬範囲にわたって効果的である。例えば、１日当たりの投薬は、通常、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。一部の場合、上述の範囲の下限値以下の投薬レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合、さらに多い用量が許容可能な副作用で利用されてもよく、したがって、上記の投薬範囲は本発明の範囲を限定することを決して意図しているわけではない。

本発明の化合物は、好ましくは、経口および非経口経路を含む、生物学的に利用可能な化合物を生じる、任意の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、このような組成物は経口投与用である。このような医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは当該分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ編、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００６）を参照のこと）。

当業者は、本発明の化合物がスキームＡに示されるように互変異性型で存在し得ることは理解するであろう。この適用において本発明の化合物の特定の互変異性体の１つに対して任意の参照が与えられる場合、互変異性型およびその全ての混合物の両方を包含することが理解される。

本発明の化合物、またはその塩は、当業者に知られている種々の手順によって調製でき、それらのいくつかは、以下のスキーム、調製例、および実施例に例示される。記載されている経路の各々についての特定の合成工程は、式Ｉの化合物、またはその塩を調製するために、異なる手段で、または異なるスキームからの工程と併用して組み合わされてもよい。以下のスキームにおける各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、従来の方法によって回収できる。

特定の立体化学中心は特定されないままであり、特定の置換基は、明確さの目的のために以下のスキームにおいて取り除かれており、決してスキームの教示を限定することを意図しているわけではない。さらに、個々の異性体、光学異性体、またはジアステレオマーは、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィーなどの方法によって式Ｉの化合物の合成の任意の簡便な点で当業者により分離または分割されてもよい（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓら、「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、１９８１、およびＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ、「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、１９９４を参照のこと）。「異性体１」および「異性体２」の指定は、最初および次にそれぞれキラルクロマトグラフィーから溶出する化合物を指し、キラルクロマトグラフィーが合成の初期に開始される場合、同じ指定がその後の中間体および実施例に適用される。さらに、以下のスキームに記載される中間体は複数の窒素保護基を含有する。可変保護基は、実施される特定の反応条件および特定の変換に応じて各出現において同じであってもよく、異なっていてもよい。保護および脱保護条件は当業者に周知であり、文献に記載されている（例えば、Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．２００７による「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第４版を参照のこと）。

当業者は、本発明の化合物が、少なくとも２つのキラル中心：

を含有するコアから構成されることを理解するであろう。本発明は、前記化合物の全ての個々の光学異性体、およびラセミ体を含む光学異性体の混合物を意図するが、スキームＢに例示されるように１および２で標識した炭素原子において絶対配置である化合物が本発明の好ましい化合物である。

本明細書に使用される略語は、Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、Ｖｏｌ．１７、Ｎｏ．１、１９８４に従って定義される。他の略語は以下の通りに定義される：「ＡＰＰ」はアミロイド前駆体タンパク質を指し；「ＢＯＣ」はｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを指し；「ＣＳＦ」は脳脊髄液を指し；「ＤＣＣ」は１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドを指し；「ＤＩＣ」はジイソプロピルカルボジイミドを指し；「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し；「ＥＤＣＩ」は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を指し；「ｅｅ」は鏡像体過剰率を指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「Ｅｘ」は実施例を指し；「Ｆ１２」はＨａｍ’ｓ Ｆ１２培地を指し；「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し；「ＦＲＥＴ」は蛍光共鳴エネルギー移動を指し；「ＨＥＫ」はヒト胚腎臓を指し；「ＨＯＡｃ」は酢酸を指し；「ＨＯＡｔ」は１−ヒドロキシ−７−アゾベンゾトリアゾールを指し；「ＨＯＢｔ」は１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール水和物を指し；「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し；「ｈｒ」は時間を指し；「ＩＣ_５０」は薬剤についての可能な最大阻害反応の５０％を生じるその薬剤の濃度を指し；「ｍｉｎ」は分を指し；「ＭＴＢＥ」はメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指し；「ＰＤＡＰＰ」は血小板由来アミロイド前駆体タンパク質を指し；「Ｐｒｅｐ」は調製例を指し；「ＲＦＵ」は相対蛍光単位を指し；「Ｒ_ｔ」は反応時間を指し；「ＲＴ」は室温を指し；「ＳＣＸ」は強カチオン交換を指し；「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。

以下のスキームにおいて、全ての置換基は、他に示されない限り、上記に定義されている。試薬および開始物質は一般に当業者に容易に利用可能である、他のものは、既知の構造的に類似した化合物の合成と同様である有機および複素環化学の標準的な技術、ならびに任意の新規手順を含む、以下の調製例および実施例に記載される手順によって作製できる。

スキーム１はオキシム（４）および（８）の形成を示す。オキシムは、各々、二環式イソオキサゾール（５）を形成するために使用できる。置換芳香族基は、スキーム１、工程１および工程７に示されるように合成の異なる点に挿入できる。「ＰＧ」は、カルバメートおよびアリルなどのアミノ基について開発された保護基である。このような基は周知であり、当該分野において理解されている。

２工程の反応において、ベータハロゲン（１）を有するケトンは、炭酸カリウムなどの無機塩基を使用して保護アリルアミン（２）でアルキル化し（３、工程１）、次いでエタノールなどの極性プロトン性溶媒中でヒドロキシルアミン塩酸塩およびピリジンなどの有機塩基で処理して、オキシムを得ることができる（４、工程２）。次いでオキシム（４）は、トルエンまたはキシレンなどの非極性溶媒中でオキシム（４）を加熱することなどのいくつかの方法によって３＋２環化において二環式イソオキサゾール（５）に変換して、二環式イソオキサゾールを形成できる（５、工程３）。あるいは、オキシムはギ酸などの酸で処理されるジメチルアセタール（６）から開始して、アルデヒドを形成できる（７、工程４）。工程５において、次いでアルデヒド（７）はヒドロキシルアミン塩酸塩および酢酸ナトリウム三水和物などの塩基でオキシム（８）に変換できる。二環式イソオキサゾール（９）は次亜塩素酸ナトリウム水溶液を使用して工程６に示されるようにオキシム（８）から形成できる。工程７において、次いで保護二環式イソオキサゾール（９）は、芳香族有機リチウム試薬またはグリニャール試薬と反応して、保護二環式イソオキサゾール（５）を得ることができる。

スキーム２は保護ピロロチアジン（１２）についての異なる経路を例示する。保護二環式イソオキサゾール（５）は、酢酸中の粉末Ｚｎで処理して、または圧力水素化条件下でエタノールなどの極性溶媒中のラネーニッケルによって、アミノピロリジンメタノール（１３、工程１１）を得ることができる。次いでアミノピロリジンメタノール（１３）は、ＴＨＦなどの極性溶媒中のベンゾイルイソチオシアネートで反応し、続いて１，１カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を添加して、縮合保護ピロリジンチアジン（１２、工程１２）を得ることができる。あるいは、二環式イソオキサゾール（５）のアミンはベンゾイルイソチオシアネートと反応して、チオ尿素（１０、工程８）を得ることができ、次いで工程９において、イソオキサゾール環は酢酸中の粉末亜鉛で開き、ヒドロキシル化合物（１１）を得ることができる。次いでヒドロキシル化合物（１１）は、ＴＨＦなどの極性非プロトン性溶媒中のＣＤＩまたはＤＣＭ中の１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミンで処理して、縮合保護ピロリジンチアジン（１２、工程１０）を得ることができる。縮合ピロリジンチアジン（１２）はまた、トリフェニルホスフィンおよびジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）を使用することなど光延反応から形成できる。

スキーム３は、ピロロチアジン（１２）のアニリン（１４、工程１３）への変換を示し、次いでアニリンはアシル化され、続いてピロリジンの脱保護およびヘテロアリール化が行われ得る。チアジンアミンの脱保護は式Ｉの化合物を生じる。

アジド脱ハロゲン化が、アジ化ナトリウムなどのアジド源の存在下で適切なピロロチアジン（１２）で実施される。このようなアジド脱ハロゲン化反応は周知であり、当該分野において理解されている。得られるアジド中間体のアニリン（１４、工程１３）への還元は、周知であり、当該分野において記載されている水素化条件によって、またはＬｉＡｌＨ_４、ＮａＢＨ_４、ＰＰｈ_３などの当該分野において周知の還元剤によって行われ得る。

ＢＯＣ保護ピロリジンは当該分野において周知の酸性条件下で脱保護できる（工程１４の工程１）。次いで脱保護ピロリジンは、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、またはＮ，Ｎ，Ｎ，Ｎ’−テトラメチルグアニジンなどの有機塩基を使用して置換芳香族ピリミジンで求核芳香族置換（ＳＮＡｒ）においてヘテロアリール化して、化合物１５を得ることができる（工程１４の工程２）。アニリン（１５）はカップリング条件下で複素芳香族カルボン酸（１６）とカップリングできる（工程１５の工程１）。当業者は、カルボン酸およびアミンの反応から得られるアミド形成についての複数の方法および試薬が存在することを認識するであろう。例えば、カップリング試薬およびＤＩＰＥＡまたはトリエチルアミンなどのアミン塩基の存在下で化合物１６の適切な酸との適切なアニリン（１５）の反応は、チアジンアミンの脱保護後、式Ｉの化合物を生じる。カップリング試薬としては、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣＩなどのカルボジイミド、ならびにＨＯＢｔおよびＨＯＡｔなどの芳香族オキシムが挙げられる。さらに、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、およびＰｙＢｒＯＰなどの非求核アニオンのウロニウムまたはホスホニウム塩が、多くの従来のカップリング試薬の代わりに使用されてもよい。ＤＭＡＰなどの添加剤が反応を向上させるために使用されてもよい。あるいは、保護アニリンアミン（１５）はトリエチルアミンまたはピリジンなどの塩基の存在下で置換塩化ベンゾイルを使用してアシル化できる。次いで保護チアジンアミンは、エタノールなどの極性非プロトン性溶媒中のピリジンおよびメチルヒドロキシルアミン塩酸塩などの有機塩基またはメタノール中の水酸化リチウムなどの無機塩基と脱保護して、式Ｉの化合物を得ることができる。

任意の工程において、式Ｉの化合物の医薬的に許容可能な塩は、標準条件下で適切な溶媒中の適切な医薬的に許容可能な酸との式Ｉの適切な遊離塩基の反応により形成できる。さらに、このような塩の形成は窒素保護基の脱保護と同時に起こる。このような塩の形成は周知であり、当該分野において理解されている。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．、「Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、３３：２０１−２１７（１９８６）；Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．ら、「Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ」、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ４：４２７−４３５（２０００）；ａｎｄ Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．ら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、６６：１−１９、（１９７７）を参照のこと。当業者は、式Ｉの化合物が容易に変換され、塩酸塩などの医薬的に許容可能な塩として単離できることを理解するであろう。

調製例および実施例
以下の調製例および実施例は本発明をさらに例示する。反対に示されない限り、本明細書に例示される化合物は、Ｓｙｍｙｘ（登録商標）Ｄｒａｗバージョン３．２またはバージョン４．０（Ｓｙｍｙｘ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．）またはＩＵＰＡＣＮＡＭＥ ＡＣＤＬＡＢＳを使用して命名され、番号付けされる。

調製例１
１−（３−ブロモフェニル）−２−（ジアリルアミノ）エタノン

炭酸カリウム（３８．８ｇ、２８１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４３０ｍＬ）中の３−ブロモフェナシルブロミド（６０ｇ、２１６ｍｍｏｌ）に加え、混合物を窒素下で０℃に冷却する。ジアリルアミン（３４．６ｍＬ、２８０．６３ｍｍｏｌ）を１時間にわたって滴下して加え、反応物を一晩２２℃に加温する。粗反応混合物を濃縮し、残渣を水（３００ｍＬ）およびＭＴＢＥ（３００ｍＬ）中に分配する。水層を捨て、有機層を水（１００ｍＬ、２×）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を一定重量まで蒸発させて、標題化合物（６２ｇ、９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２９４（Ｍ＋１）。

調製例２
ベンジルＮ−（２，２−ジメトキシエチル）カルバメート

トルエン（１２０ｍＬ）中のアミノアセトアルデヒドジメチルアセタール（２５ｍＬ、２２９ｍｍｏｌ）の溶液を、４．８５Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（７０．８ｍＬ、３４３．５ｍｍｏｌ）により０℃で処理する。混合物を０℃にて１０分間撹拌し、添加の間、２０℃未満の内部温度を維持しながらクロロギ酸ベンジル（３３．８ｍＬ、２２９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を４時間にわたって室温に加温する。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮乾固して標題化合物（５４ｇ、９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２４０（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３
ベンジルＮ−アリル−Ｎ−（２，２−ジメトキシエチル）カルバメート

トルエン（１８０ｍＬ）中のベンジルＮ−（２，２−ジメトキシエチル）カルバメート（５０ｇ、２０８．９ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で固体水酸化カリウム（５１．６ｇ、９１９．６９ｍｍｏｌ）で処理する。１０分後、ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド（０．８ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を加える。さらに１０分後、トルエン（５０ｍＬ）中の臭化アリル（３３ｇ、２７２．８ｍｍｏｌ）の溶液を１０分にわたって滴下して加える。得られた混合物を５０℃にて４８時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、水でクエンチする。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮乾固して標題化合物（４４ｇ、７５％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２８０（Ｍ＋Ｈ）。

調製例４
ベンジルＮ−アリル−Ｎ−（２−オキソエチル）カルバメート

ギ酸（３６．８ｍＬ、８６０ｍｍｏｌ）および水（４．８４ｍＬ）中のベンジルＮ−アリル−Ｎ−（２，２−ジメトキシエチル）カルバメート（３０ｇ、１０７ｍｍｏｌ）の溶液を室温にて一晩撹拌する。混合物を濃縮し、ヘキサン／酢酸エチル（１：２）および水で希釈する。有機層を分離し、ｐＨ＝６になるまでブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶媒を蒸発させて、標題化合物（２５ｇ、９９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２３４（Ｍ＋Ｈ）。

調製例５
１−（３−ブロモフェニル）−２−（ジアリルアミノ）エタノンオキシム

エタノール（７２０ｍＬ）およびピリジン（２４．８ｍＬ、３０７ｍｍｏｌ）中の１−（３−ブロモフェニル）−２−（ジアリルアミノ）エタノン（６０ｇ、２０４．７ｍｍｏｌ）の溶液を２２℃にて１５分撹拌する。ヒドロキシルアミン塩酸塩（１７ｇ、２４６ｍｍｏｌ）を１時間にわたって溶液に小分けして加える。反応物を２時間５０℃に加温し、次いで１６時間７０℃に加熱する。溶媒を蒸発させ、残渣を水（３００ｍＬ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３００ｍＬ）中に分配する。有機層を分離し、水（１００ｍＬ、２×）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して標題化合物（７５．５ｇ、７９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３０９（Ｍ＋１）。

調製例６
ベンジルＮ−アリル−Ｎ−［２−ヒドロキシイミノエチル］カルバメート

アセトニトリル（１５０ｍＬ）中のベンジルＮ−アリル−Ｎ−（２−オキソエチル）カルバメート（２５ｇ、１０７ｍｍｏｌ）の溶液を、ヒドロキシルアミン塩酸塩（９．６８ｇ、１３９ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム三水和物（１６ｇ、１１７．９ｍｍｏｌ）の水溶液（７５ｍＬ）で処理する。混合物を室温にて一晩撹拌する。アセトニトリルを蒸発させ、水溶液を酢酸エチルで抽出する。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、標題化合物（２４ｇ、９０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２４９（Ｍ＋Ｈ）。

調製例７
５−アリル−６ａ−（３−ブロモフェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

粗１−（３−ブロモフェニル）−２−（ジアリルアミノ）エタノンオキシム（７５．５ｇ、１９５．３４ｍｍｏｌ）をトルエン（６００ｍＬ）に溶解し、１２時間還流する。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣を水性１Ｎ ＨＣｌ（１Ｌ）とメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３００ｍＬ）の混合物に溶解する。混合物を１５分間撹拌し、珪藻土（１０ｇ）を加える。混合物をさらに２０分間撹拌し、珪藻土で濾過する。濾過ケーキをさらに水性１Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２００ｍＬ）で洗浄する。有機層を分離し、１Ｎ ＨＣｌ（２×１００ｍＬ）で洗浄する。水層を合わせ、ｐＨをＮａＯＨ５０％ｗ／ｗで９に調整する。水性混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×２５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。濾液を蒸発させ、真空下で乾燥させて、赤色の固体（６０ｇ）を得る。赤色の固体をヘプタン（６００ｍＬ）で希釈し、混合物を２０分間加熱して還流する。炭（２ｇ）を加え、混合物を珪藻土で濾過する。

濾液を大気圧下で濃縮して３００ｍＬの最終体積に調整する。溶液を２２℃に冷やし、３時間撹拌する。淡黄色の固体を濾過により回収し、一定重量まで真空下で乾燥させて、標題化合物（４０ｇ、６０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３０９（Ｍ＋１）。

調製例８
ベンジル３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート

ジクロロメタン（３３８ｍＬ）中のベンジルＮ−アリル−Ｎ−［２−ヒドロキシイミノエチル］カルバメート（２４ｇ、９６．６ｍｍｏｌ）の溶液を、次亜塩素酸ナトリウム（１０６．０８ｍｍｏｌ、１４３．０６ｍＬ）の５％ｗ／ｗ水溶液で１０分にわたって滴下して処理する。得られた混合物を室温にて一晩撹拌する。反応を亜硫酸水素ナトリウム（７ｇ）の４０％水溶液でクエンチする。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で濃縮する。粗生成物をヘキサン中の５％酢酸エチルで溶出するシリカゲルで精製して標題化合物（１８ｇ、７５％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２４７（Ｍ＋Ｈ）。

調製例９
ベンジル６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート

ｎ−ブチルリチウム（２５．４ｍＬ、４０．６ｍｍｏｌ）の１．６Ｍヘキサン溶液を、テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）中の４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨードベンゼン（１２．２２ｇ、４０．６ｍｍｏｌ）の−７８℃の溶液に滴下して加えて黄色の溶液を得、それを１５分間、−７８℃で撹拌する。三フッ化ホウ素エーテル（５．１４ｍＬ、４０．６ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）中のベンジル３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート（５ｇ、２０．３ｍｍｏｌ）の別の−７８℃の溶液に加え、混合物を−７８℃にて５分間撹拌する。この溶液を以前に調製した−７８℃の有機リチウム混合物にカニューレにより加える。合わせた混合物を−７８℃にて３０分間撹拌する。混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、室温に加温する。混合物を酢酸エチル（３×）で抽出し、有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去する。粗生成物を、３５分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％酢酸エチルを用いてシリカゲルで精製して、標題化合物（２．２７ｇ、２７％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４２１／４２３（Ｍ＋Ｈ）。

調製例１０
ベンジル１−（ベンゾイルカルバモチオイル）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート

ベンゾイルイソチオシアネート（２．８７ｍＬ、２１．２８ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（９５ｍＬ）中のベンジル６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート（５．９７７ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加え、窒素下で一晩撹拌する。溶媒を真空中で除去する。粗生成物を、３０分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％ＥｔＯＡｃを用いてシリカゲルで精製して、標題化合物（６．０５ｇ、７３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）５８４／５８６（Ｍ＋Ｈ）。

調製例１１
［１−アリル−４−アミノ−４−（３−ブロモフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール

酢酸（４００ｍＬ）中の５−アリル−６ａ−（３−ブロモフェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（４０ｇ、１２９．４ｍｍｏｌ）の２２℃の溶液を、一度に亜鉛末（４２．３ｇ、６４６．８ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を室温にて１時間激しく撹拌する。酢酸エチル（４００ｍＬ）を加え、混合物を珪藻土で濾過する。濾液を蒸発させ、残渣を真空下で乾燥させる。残渣を水（３００ｍＬ）およびＭＴＢＥ（３００ｍＬ）中で分配する。ｐＨを水酸化ナトリウム５０％ｗ／ｗで８に調整し、有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。濾液を蒸発させ、残渣を真空下で乾燥させて標題化合物（４１ｇ、９７％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３１１（Ｍ＋１）。

調製例１２
ベンジル３−（ベンゾイルカルバモチオイルアミノ）−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート

ベンジル１−（ベンゾイルカルバモチオイル）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−５−カルボキシレート（６．０５ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）および亜鉛（粉末、＜１０ミクロン）（６．７７ｇ、１０３．５ｍｍｏｌ）を窒素下で一晩室温にて酢酸（５２ｍＬ）中で撹拌する。反応物を酢酸エチルで希釈し、珪藻土で濾過する。溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチル、水および飽和炭酸水素ナトリウムで希釈する。混合物を酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去する。粗生成物を、３０分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％ＥｔＯＡｃを用いてシリカゲルで精製して標題化合物（５．２２２ｇ、８６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）５８６／５８８（Ｍ＋Ｈ）。

調製例１３
［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（３−ブロモフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール；（２Ｒ，３Ｒ）−２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二酸

イソプロピルアルコール（９１４ｍＬ）中の［１−アリル−４−アミノ−４−（３−ブロモフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール（７７ｇ、２３５ｍｍｏｌ）の溶液を７０℃で加熱する。ジ−ｐ−トルオイル−Ｌ−酒石酸（８６．２ｇ、２２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間にわたって２２℃に冷やし、一晩撹拌する。スラリーを濾過して、淡黄色の固体を回収し、イソプロピルアルコールで洗浄する。固体を真空下で乾燥させて、標題化合物（６３ｇ、３６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３１１（Ｍ＋１）。生成物を逆相キラルクロマトグラフィーにより分析する：最初の溶出異性体の分析（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＤ−３ ４．６×５０ｍｍ；溶出液：７０：３０、水性２０ｍＭ炭酸水素アンモニウム：アセトニトリル；流量：ＵＶ２１５ｎｍにて１．５ｍＬ／分）により、Ｒ_ｔ＝１．２６分で鏡像異性的に過剰（９６％ｅｅ）な鏡像異性体を確認する。

調製例１４
［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（３−ブロモフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール

［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（３−ブロモフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール；（２Ｒ，３Ｒ）−２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二酸（６３ｇ、８５．８ｍｍｏｌ）を水性１Ｎ ＨＣｌ（８００ｍＬ）および酢酸エチル（４００ｍＬ）と合わせ、混合物を２２℃にて１５分間撹拌する。層を分離し、水層のｐＨを水酸化ナトリウム５０％ｗ／ｗで１０に調整する。水性混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×２５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して、標題化合物（２７ｇ、９９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３１１（Ｍ＋１）。

調製例１５
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（３−ブロモフェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

テトラヒドロフラン（２７０ｍＬ）中の［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（３−ブロモフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール（２７ｇ；８６．７ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で−５℃に冷却する。ベンゾイルイソチオシアネート（１２．３ｍＬ、９１ｍｍｏｌ）を０℃未満に温度を維持しながら滴下して加える。反応物を１時間にわたって２２℃に加温する。１，１’−カルボニルジイミダゾール（２８．１ｇ、１７３．５ｍｍｏｌ）を一度に加え、反応物を２２℃にて１時間撹拌し、次いで１６時間加熱して還流する。溶媒を真空中で除去し、残渣を真空下で乾燥させる。粗物質をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（５００ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）中に分配する。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。粗物質を９０／１０〜６０／４０塩化メチレン／酢酸エチルのシリカゲル勾配で精製して標題化合物（２７ｇ、６８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４５６（Ｍ＋１）。

調製例１６
ベンジル２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

１，１’−カルボニルジイミダゾール（２．８７ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（５２ｍＬ）中のベンジル３−（ベンゾイルカルバモチオイルアミノ）−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５．１９８ｇ、８．８６ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を室温にて１．５時間撹拌し、次いで反応物を窒素下で一晩還流にて加熱する。反応物を冷却し、水で希釈し、酢酸エチル（３×）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去する。粗生成物を、３０分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％ＥｔＯＡｃを用いてシリカゲルで精製して標題化合物（２．９３ｇ、５８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）。５６８／５７０（Ｍ＋Ｈ）

調製例１７
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−ブロモフェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

室温のクロロホルム（２２ｍＬ）中のＮ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（３−ブロモフェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１ｇ、２．１９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルバルビツール酸（０．８６８ｇ、５．４８ｍｍｏｌ）の混合物を、室温にて５分間、得られたスラリーに窒素を通して泡立てることによって脱気する。混合物をテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．２６１ｇ、２１９μｍｏｌ）で処理し、窒素下で１．５時間撹拌する。

別のフラスコ中で、クロロホルム（４８６ｍＬ）中のＮ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（３−ブロモフェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２２．２ｇ、４８．６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルバルビツール酸（１９．２８ｇ、１２１．６ｍｍｏｌ）の混合物を、室温にて５分間、得られたスラリーに窒素を通して泡立てることによって脱気する。混合物をテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５．７９ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下で２時間撹拌する。

２つの反応物を合わせ、溶媒を真空中で除去して、粗生成物を得る。粗物質を、３０分、ジクロロメタン勾配中の０．５％〜１０％メタノールを用いてシリカゲルで精製して、標題化合物（２２．４ｇ、１００％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４１６／４１８（Ｍ＋Ｈ）。

調製例１８
Ｎ−［７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

ヨードトリメチルシラン（２．２１ｍＬ、１５．４６ｍｍｏｌ）を、室温のアセトニトリル（４４ｍＬ）中のベンジル２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート（２．９３ｇ、５．１５ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。反応物を室温にて２時間撹拌し、溶媒を真空中で除去する。粗生成物を、３：１のジクロロメタン：メタノールおよび次いで２：１のジクロロメタン：メタノール中の７Ｎアンモニアを使用してＳＣＸカラムで精製して、標題化合物（２．０９８ｇ、９４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４３４／４３６（Ｍ＋Ｈ）。

調製例１９
ｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−７ａ−（３−ブロモフェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

室温のジクロロメタン（３６７ｍＬ）中のＮ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−ブロモフェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２２．４ｇ、３６．６９ｍｍｏｌ）の溶液を、ジ−ｔ−ブチルジカルボネート（８．８１ｇ、４０．３６ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（７．６７ｍＬ、５５．０４ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を窒素下で室温にて１時間撹拌する。溶媒を真空中で除去し、粗生成物を、２５分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％酢酸エチルを用いてシリカゲルで精製して標題化合物（２０．２２ｇ、１００％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：（^７９Ｂ／^８１Ｂｒ）５１６／５１８（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２０
ｔｅｒｔ−ブチル２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

ジ−ｔ−ブチルジカルボネート（１．１６ｇ、５．３１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．０１ｍＬ、７．２５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（４８ｍＬ）中のＮ−［７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２．０９８ｇ、４．８３ｍｍｏｌ）の溶液に加える。反応物を窒素下で室温にて１時間撹拌する。溶媒を真空中で除去し、粗生成物を、３０分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％ＥｔＯＡｃを用いてシリカゲルで精製して、標題化合物（２．５５６ｇ、９９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）５３４／５３６（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２１
ｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−２−ベンズアミド−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

エタノール（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−７ａ−（３−ブロモフェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート（５ｇ、９．７ｍｍｏｌ）およびｔｒａｎｓ−Ｎ，Ｎ’−ジメチル−１，２−シクロヘキサンジアミン（２２０．３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の溶液を、アジ化ナトリウム（１．３０ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）で処理する。Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム塩水溶液（０．６６Ｍ、３．２ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）および水（１０ｍＬ）を加え、フラスコの上部を窒素でパージする。混合物を硫酸銅（ＩＩ）五水和物水溶液（０．３３Ｍ、３．２ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を、窒素下で８０℃にて１．５時間、予熱したホットプレート上で即座に加熱する。加熱すると均質の混合物が得られる。反応物を冷却し、氷水を加える。混合物を酢酸エチル（３×）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去して、粗アジド生成物を得る。粗アジド生成物を冷エタノール（１５０ｍＬ）中の１０％パラジウム炭素（２ｇ）と合わせ、真空／窒素および次いで真空／水素を使用して混合物をパージする。混合物を、２時間、３０ｐｓｉの水素下で室温にて撹拌する。反応物を通気し、ジクロロメタンを使用して混合物を珪藻土で濾過して、濾過ケーキをリンスする。溶媒を真空中で濾液から除去し、粗生成物を、ジクロロメタン中の５０％酢酸エチルを用いてシリカゲルで精製して、標題化合物（４ｇ、９１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４５３（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２２
ｔｅｒｔ−ブチル７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２−ベンズアミド−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

エタノール（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート（２．５５６ｇ、４．８ｍｍｏｌ）およびｔｒａｎｓ−Ｎ，Ｎ’−ジメチル−１，２−シクロヘキサンジアミン（１５０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液をアジ化ナトリウム（９３３ｍｇ、１４．３ｍｍｏｌ）で処理する。Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム塩水溶液（０．６６Ｍ、３．２ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）および水（１ｍＬ）を加え、フラスコの上部を窒素でパージする。混合物を硫酸銅（ＩＩ）五水和物水溶液（０．３３Ｍ、３．２ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を、予熱したホットプレート上で、窒素下、８０℃にて１．５時間、即座に加熱する。加熱すると均質な混合物が得られる。反応物を冷却し、氷水で希釈し、混合物を酢酸エチル（３×）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去して、粗アジド生成物を得る。粗アジド生成物を、冷エタノール（１５０ｍＬ）中の１０％パラジウム炭素（１ｇ）と合わせ、真空／窒素および次いで真空／水素を使用して混合物をパージする。混合物を５時間、３０ｐｓｉの水素下で室温にて撹拌する。反応物を通気し、珪藻土で濾過し、濾過ケーキをジクロロメタンでリンスする。真空中で濾液から溶媒を除去し、ジクロロメタン中の５０％酢酸エチルを用いてシリカゲルで粗生成物を精製して、標題化合物（２．０１４ｇ、８９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４７１（（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２３
ｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−７ａ−［３−［（５−フルオロピリジン−２−カルボニル）アミノ］フェニル］−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート

ジメチルホルムアミド（１ｍｌ）を含有するジクロロメタン（４ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−２−ベンズアミド−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート（９３ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、５−フルオロピリジン−２−カルボン酸（３１．９ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（５６．７ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）および１−（２−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（４０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のスラリーをジイソプロピルエチルアミン（１７９．２μＬ、１．０３ｍｍｏｌ）で処理し、得られた混合物を室温にて一晩撹拌する。反応混合物をジクロロメタン（５ｍＬ）および飽和炭酸水素ナトリウム（１５ｍＬ）で希釈する。有機層を分離し、飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去して、粗標題化合物（１０５ｍｇ、８９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：５７６（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２４
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド；２，２，２−トリフルオロ酢酸

ｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−７ａ−［３−［（５−フルオロピリジン−２−カルボニル）アミノ］フェニル］−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート（１０５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（５００μＬ、６．６ｍｍｏｌ）で処理する。得られた黄色の溶液を室温にて４時間撹拌し、溶媒を真空中で除去して、粗標題生成物（１９０ｍｇ、１００％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４７６（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２５
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

トリフルオロ酢酸（２５ｍＬ）を、ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−２−ベンズアミド−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート（４ｇ、８．８４ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を窒素下で４時間、室温にて撹拌する。溶媒を真空中で除去し、粗生成物を、３：１のジクロロメタン：メタノールおよび次いで２：１のジクロロメタン：メタノール中の７Ｎアンモニアを使用したＳＣＸカラムで精製して、標題化合物（２．４９ｇ、８０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３５３（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２６
Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を、ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２−ベンズアミド−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボキシレート（２．０１３ｇ、４．２８ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を窒素下で４時間、室温にて撹拌する。溶媒を真空中で除去し、粗生成物を、３：１のジクロロメタン：メタノールおよび次いで２：１のジクロロメタン：メタノール中の７Ｎアンモニアを使用したＳＣＸカラムで精製して、標題化合物（１．５５５ｇ、９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３７１（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２７
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

１，４−ジオキサン（６０ｍＬ）中のＮ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２．４９ｇ、７．０６ｍｍｏｌ）、５−フルオロ−２−クロロピリミジン（３．７４ｇ、２８．２６ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（６．１６ｍＬ、３５．３２ｍｍｏｌ）の溶液を窒素下で４時間加熱して還流する。反応物を冷やし、水で希釈し、酢酸エチル（３×）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去して粗生成物を得る。粗生成物を、２５分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％酢酸エチルを用いてシリカゲルで精製して、標題化合物（２．５１ｇ、７９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４４９（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２８
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド；２，２，２−トリフルオロ酢酸（１５０ｍｇ、２５４μｍｏｌ）、５−フルオロ−２−クロロピリミジン（６８ｍｇ、５１μｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（９８μＬ、５６μｍｏｌ）の溶液を、ジメチルスルホキシド（５ｍＬ）中で４０℃にて一晩加熱する。さらに５−フルオロ−２−クロロピリミジン（６８ｍｇ、５１μｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（９８μＬ、５６μｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃にて一晩加熱する。さらに５−フルオロ−２−クロロピリミジン（６８ｍｇ、５１μｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（９８μＬ、５６μｍｏｌ）を加え、混合物を３日目の夜に５０℃にて一晩加熱する。反応物を冷やし、飽和炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で希釈してスラリーを得、それを濾過し、５０℃にて４時間、真空オーブン中で乾燥させて標題化合物（６０ｍｇ、４１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４４９（Ｍ＋Ｈ）。

代替調製例２８
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２８２ｍｇ、６２８．７３μｍｏｌ）および５−フルオロピリジン−２−カルボン酸（１０６．４６ｍｇ、７５４．４７μｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）およびジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中で合わせる。１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１１２．７０ｍｇ、８１７．３５μｍｏｌ）および次いで１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１５９．０７ｍｇ、８１７．３５μｍｏｌ）を加え、得られた混合物を窒素下で室温にて５時間撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ｐＨを１Ｎ ＮａＯＨで約１２に調整する。混合物を酢酸エチル（３×）で抽出する。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去して粗生成物を得る。粗生成物を、２０分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％酢酸エチルを用いてシリカゲルで精製して標題化合物（３２７ｍｇ、９１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：５７１（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２９
Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（７０５ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）、５−フルオロ−２−クロロピリミジン（１．０１ｇ、７．６１ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（１．６６ｍＬ、９．５２ｍｍｏｌ）の溶液を１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）中で加熱して窒素下で４時間還流する。反応物を冷却し、水で希釈し、酢酸エチル（３×）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去して粗生成物を得る。粗生成物を、２５分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％酢酸エチルを用いてシリカゲルで精製して標題化合物（５９０ｍｇ、６６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４６７（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３０
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキシアミド

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（４００ｍｇ、８９１．８１μｍｏｌ）および５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（１６５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）およびジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中で合わせる。１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１６０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）および次いで１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２２６ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を窒素下で室温にて５時間撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ｐＨを１Ｎ ＮａＯＨで約１２に調整する。混合物を酢酸エチル（３×）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去する。粗生成物を、２０分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％酢酸エチルを用いてシリカゲルで精製して標題化合物（４８２ｍｇ、９２％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：５８５（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３１
Ｎ−［３−［２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド

Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（３０２ｍｇ、６４７μｍｏｌ）および５−フルオロピリジン−２−カルボン酸（１１０ｍｇ、７７７μｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）およびジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中で合わせる。１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１１６ｍｇ、８４２μｍｏｌ）および次いで１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１６４ｍｇ、８４２μｍｏｌ）を加え、混合物を窒素下で室温にて一晩撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ｐＨを１Ｎ ＮａＯＨで約１２に調整し、次いで酢酸エチル（３×）で抽出する。有機層を合わせ、濾過して不溶性材料を収集する。固体を水および酢酸エチルで洗浄し、真空下で乾燥させて標題化合物を得る。濾液から有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去する。残渣を、２０分、ヘキサン勾配中の５％〜１００％酢酸エチルを用いてシリカゲルで精製して、合わせた収率（２７５ｍｇ、７２％）でさらなる標題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：５９０（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３２
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド、（異性体１）

ラセミ体Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１．６９４ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）をＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ、８×３５ｃｍ；溶出液：９０％メタノール（０．２％ジメチルエチルアミン）および１０％アセトニトリル；ＵＶ２８０ｎｍにて流量４００ｍＬ／分）によりキラル精製する。第１の溶出異性体の分析（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ−Ｈ ０．４６×１５ｃｍ；溶出液：１０：９０のアセトニトリル：メタノール（０．２％ジメチルエチルアミンを有する）；ＵＶ２８０ｎｍにて流量：０．６ｍＬ／分）により、Ｒ_ｔ＝６．７０分で鏡像異性的に過剰（９９％ｅｅ）な鏡像異性体（７２３ｍｇ、４３％）を確認する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４６７（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３３
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキシアミド（異性体１）

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（０．３６１ｇ、０．７７ｍｍｏｌ、異性体１）を、ジクロロメタン（４ｍＬ）およびＤＭＦ（０．５ｍＬ）の混合物に溶解する。５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（２４０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２１０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（３００ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）を混合物に加え、混合物を室温にて一晩撹拌する。反応溶液を１２ｇのシリカゲルを充填したカラムに直接加え、４０ｇのシリカゲルカラムを使用して精製し、０〜１００％酢酸エチル／ヘキサン勾配で溶出する。生成物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨ（２×５０ｍＬ）、およびブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄する。シリカゲル精製を上記のように反復して標題化合物（３５０ｍｇ、７４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：６０３（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３４
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキシアミド

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（０．３０ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）および５−シアノピリジン−２−カルボン酸（１２９ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）に溶解し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１８５ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１６９ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を加える。ジイソプロピルエチルアミン（０．３５ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて一晩撹拌する。物質を、０〜１００％酢酸エチル／ヘキサン勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーで直接精製して標題化合物（３６０ｍｇ、８８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：５７９（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３５
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（３−アミノフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（０．３０ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）および３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボン酸（１３８ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）に溶解し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１８５ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１６９ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を加える。ジイソプロピルエチルアミン（０．３５ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて一晩撹拌する。反応物を、０〜１００％酢酸エチル／ヘキサン勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーで直接精製して標題化合物（３３０ｍｇ、８４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：５９０（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３６
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキシアミド、（異性体１）

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（０．１８０ｇ、０．３９ｍｍｏｌ、異性体１）を、ジクロロメタン（２ｍＬ）およびＤＭＦ（０．２５ｍＬ）の混合物に溶解する。５−シアノピリジン−２−カルボン酸（１１４ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１０６ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１５０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて一晩撹拌する。混合物を水（１０ｍＬ）、酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、１Ｎ ＮａＯＨ（１００ｍＬ）の溶液に加える。混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、ブラインで洗浄する。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣を、０〜１００％酢酸エチル／ヘキサン勾配を使用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して標題化合物（１３３ｍｇ、５７％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：５９７（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３７
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド、（異性体１）

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（０．１８０ｇ、０．３９ｍｍｏｌ、異性体１）をジクロロメタン（２ｍＬ）およびＤＭＦ（０．２５ｍＬ）の混合物に溶解する。５−シアノピリジン−２−カルボン酸（１１４ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１０６ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１５０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて一晩撹拌する。混合物を水（１０ｍＬ）および酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、次いで１Ｎ ＮａＯＨ（１００ｍＬ）の溶液中に注ぐ。混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出し、有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄する。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣を、０〜１００％酢酸エチル／ヘキサン勾配を使用したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（１９０ｍｇ、８０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：６０８（Ｍ＋Ｈ）。

実施例Ａ
Ｎ−［３−［２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド

Ｎ−［３−［２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド（２９３ｍｇ、４９７μｍｏｌ）、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４３０ｍｇ、４．９７ｍｍｏｌ）およびピリジン（４０２μＬ、４．９７ｍｍｏｌ）の混合物を、蓋の付いたフラスコ中で２．５時間、エタノール（１３ｍＬ）中で７０℃まで加熱する。ジメチルスルホキシド（３ｍＬ）を加え、混合物を７０℃にて一晩加熱する。さらなるジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）を加え、加熱を７０℃にて４時間継続する。さらなるＯ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２０８ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）およびピリジン（２０１μＬ、２．４８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３時間６０℃まで加熱し、混合物を室温にて３日間撹拌する。別のフラスコ中で、Ｎ−［３−［２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド（２７６ｍｇ、４６８μｍｏｌ）、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４０５ｍｇ、４．６８ｍｍｏｌ）およびピリジン（４７８μＬ、４．６８ｍｍｏｌ）の混合物を、蓋の付いたフラスコ中で一晩７０℃にて、エタノール（１５ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（４ｍＬ）中で加熱する。さらなるジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）を加え、加熱を７０℃にて４時間継続する。さらなるＯ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１９５ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）およびピリジン（１８９μｌ、２．３４ｍｍｏｌ）を加え、７０℃にて３時間、加熱を継続し、続いて室温にて３日間、混合物を撹拌する。２つの反応混合物を合わせ、溶媒のほとんどを真空中で除去する。粗生成物を、３：１のジクロロメタン：メタノールおよび次いで２：１のジクロロメタン：メタノール中の７Ｎアンモニアを使用したＳＣＸカラムで精製する。粗生成物を、２０分、０．５％〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノール勾配を用いてシリカゲルでさらに精製して標題化合物（４５１ｍｇ、９６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４８６（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１
Ｎ−｛３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ（４Ｈ）−イル］フェニル｝−５−フルオロピリミジン−２−カルボキシアミド塩酸塩

エタノール（１５ｍＬ）中のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド（３２０ｍｇ、５６０μｍｏｌ）、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４８５ｍｇ、５．６０ｍｍｏｌ）およびピリジン（４５３μＬ、５．６０ｍｍｏｌ）の混合物を、５時間、蓋のついたバイアル中で６５℃にて加熱する。反応物を冷却し、溶媒を真空中で除去する。粗生成物を、３０分、０．５％〜１０％勾配のメタノールジクロロメタン中の７Ｎアンモニア勾配を用いてシリカゲルで精製して、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド（２１９ｍｇ、８４％）を得る。この物質をジクロロメタン（１ｍＬ）およびメタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（０．４７ｍＬ、４７０μｍｏｌ）中の１Ｍ塩化水素を加える。溶媒を真空中で除去して標題化合物（２２８ｍｇ、８１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４６８（Ｍ＋Ｈ）。

実施例２
Ｎ−｛３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ（４Ｈ）−イル］フェニル｝−５−メトキシピラジン−２−カルボキシアミド塩酸塩

エタノール（２０ｍＬ）中のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキシアミド（４７９ｍｇ、８１９μｍｏｌ）、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（７０９ｍｇ、８．１９ｍｍｏｌ）およびピリジン（６６３μＬ、８．１９ｍｍｏｌ）の混合物を、蓋の付いたフラスコ中で一晩、５０℃にて加熱する。ジメチルスルホキシド（４ｍＬ）を加え、混合物を７０℃で４時間加熱して溶液を得る。反応物を冷却し、溶媒のほとんどを真空中で除去する。水を加え、ｐＨを１Ｎ水酸化ナトリウムで約１２に調整する。混合物を酢酸エチル（５×）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去する。粗生成物を、３０分、０．５％〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノール勾配を用いてシリカゲルで精製する。混合物を、３：１のジクロロメタン：メタノールおよび次いで２：１のジクロロメタン：メタノール中の７Ｎアンモニアを使用したＳＣＸカラムで再び精製して、残留ジメチルスルホキシドを除去する。混合物を最後に、２０分、０．５％〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノールを用いてシリカゲルで精製してＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキシアミドを得る。この物質をジクロロメタン（１ｍＬ）およびメタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（０．６６ｍＬ、６６０μｍｏｌ）中の１Ｍ塩化水素を加える。溶媒を真空中で除去して標題化合物（３２９ｍｇ、７８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４８１（Ｍ＋Ｈ）。

実施例３
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド塩酸塩

ラセミ体Ｎ−［３−［２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド（４５１ｍｇ、９２９μｍｏｌ）をＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（５ｕｍ）、２．１×２５ｃｍ；溶出液：ＣＯ_２中の４０％メタノール（０．２％イソプロピルアミン）；ＵＶ２２５ｎｍにて流量７０ｍＬ／分）によりキラル精製する。第１の溶出異性体のキラル分析：カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（５μｍ）、４．６×１５０ｍｍ；溶出液：ＣＯ_２中の４０％メタノール（０．２％イソプロピルアミン）；ＵＶ２２５ｎｍにて流量５ｍＬ／分により、Ｒ_ｔ＝１．０１分で鏡像鏡異性体過剰（＞９９％ｅｅ）の鏡像異性体（１７５ｍｇ、３６０μｍｏｌ）を確認する。この物質（遊離塩基、異性体１）をジクロロメタン（１ｍＬ）およびメタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（０．３６ｍＬ、３６０μｍｏｌ）中の１Ｍ塩化水素を加える。溶媒を真空中で除去して標題化合物（１８３ｍｇ、３８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４８６（Ｍ＋Ｈ）。

実施例４
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキシアミド塩酸塩

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキシアミド（０．３５０ｇ、０．５８ｍｍｏｌ、異性体１）をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解し、次いでメタノール（４ｍＬ）およびエタノール（４ｍＬ）を加える。Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４９５ｍｇ、５．８１ｍｍｏｌ）およびピリジン（４７０μＬ、５．８１ｍｍｏｌ）を混合物に加え、反応物を５０℃に加温し、一晩撹拌する。シリカゲル（約１０ｇ）を反応物に加え、混合物を濃縮する。シリカゲル上で乾燥させた試料を空のカートリッジに充填し、０〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノールで溶出して精製する。生成物を２回目に、３：１のジクロロメタン：メタノールおよび次いで２：１のジクロロメタン：メタノール中の７Ｎアンモニアを使用したＳＣＸカラムで精製する。生成物を最後に、０％〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノールを用いてシリカゲルで精製して標題化合物の遊離塩基を得る。この物質をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（０．２０ｍＬ、６６０μｍｏｌ）中の１Ｍ塩化水素を加える。溶媒を真空中で除去して標題化合物（７１ｍｇ、２３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４９８（Ｍ＋Ｈ）。

実施例５
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキシアミド塩酸塩

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキシアミド（３６０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解する。Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（５０４ｍｇ、５．９１ｍｍｏｌ）およびピリジン（４７８μＬ、５．９１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて週末（７０時間）にわたって撹拌する。反応物を６０℃に加温し、２４時間撹拌する。反応物を濃縮して粗生成物を得、０〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノールを使用したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して標題化合物の遊離塩基を得る。この物質をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（０．５４ｍＬ、５４０μｍｏｌ）中の１Ｍ塩化水素を加える。溶媒を真空中で除去して標題化合物（２４０ｍｇ、７５％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４７５（Ｍ＋Ｈ）。

実施例６
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド塩酸塩

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］フェニル］−３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド（３３０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、エタノール（１０ｍＬ）で希釈する。Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４５３ｍｇ、５．３２ｍｍｏｌ）およびピリジン（４３０μＬ、５．９１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を週末（７０時間）にわたって室温にて撹拌する。反応物を６０℃に加温し、２４時間撹拌する。混合物をシリカゲル（約１０ｇ）上で濃縮し、０〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノールを使用したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して標題化合物の遊離塩基を得る。この物質をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（０．４９ｍＬ、４９０μｍｏｌ）中の１Ｍ塩化水素を加える。溶媒を真空中で除去して標題化合物（１５９ｍｇ、５４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４８６（Ｍ＋Ｈ）。

実施例７
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキシアミド塩酸塩

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキシアミド（１３３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、異性体１）をＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解し、メタノール（３ｍＬ）およびエタノール（３ｍＬ）で希釈する。Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１９０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）およびピリジン（１８０μＬ、２．２ｍｍｏｌ）を加える。反応物を５０℃に加温し、一晩撹拌する。混合物をシリカゲル（約１０ｇ）上で濃縮し、０〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。この物質を２回目に、３：１のジクロロメタン：メタノールおよび次いで２：１のジクロロメタン：メタノール中の７Ｎアンモニアを使用したＳＣＸカラムで精製する。混合物を最後に、０％〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノールを用いたシリカゲルで精製して標題化合物の遊離塩基を得る。この物質をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（０．２７ｍＬ、２７０μｍｏｌ）中の１Ｍ塩化水素を加える。溶媒を真空中で除去して標題化合物（１１４ｍｇ、９７％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４９３（Ｍ＋Ｈ）。

実施例８
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド塩酸塩

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボキシアミド（１９０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ、異性体１）をＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解し、メタノール（３ｍＬ）およびエタノール（３ｍＬ）で希釈する。Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２６７ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）およびピリジン（２５３μＬ、３．１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を５０℃に加温し、一晩撹拌する。反応物を、３：１のジクロロメタン：メタノールおよび次いで２：１のジクロロメタン：メタノール中の７Ｎアンモニアを使用したＳＣＸカラムで精製する。この物質を最後に、０％〜１０％勾配のジクロロメタン中の７Ｎアンモニアメタノールを用いたシリカゲルで精製して標題化合物の遊離塩基を得る。この物質をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（０．２０ｍＬ、２００μｍｏｌ）中の１Ｍ塩化水素を加える。溶媒を真空中で除去して標題化合物（１０１ｍｇ、６０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：５０４（Ｍ＋Ｈ）。

インビトロアッセイ手順：
インビトロ酵素および細胞アッセイのために、試験化合物をＤＭＳＯ中で調製して１０ｍＭのストック溶液を作製する。このストック溶液をＤＭＳＯ中で連続希釈して、インビトロ酵素および全細胞アッセイを行う前に、９６ウェル丸底プレート中で１０ｍＭ〜０．０５ｎＭの範囲の最終化合物濃度で１０点希釈曲線を得る。

インビトロプロテアーゼ阻害アッセイ：
ヒトＢＡＣＥ１の発現
ヒトＢＡＣＥ１（受託番号：ＡＦ１９０７２５）を、ＲＴ−ＰＣＲによって全脳ｃＤＮＡからクローニングする。アミノ酸配列＃１〜４６０に対応するヌクレオチド配列を、ヒトＩｇＧ_１（Ｆｃ）ポリペプチドをコードするｃＤＮＡ内に挿入する（Ｖａｓｓａｒら、１９９９）。ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃと名付けた、ＢＡＣＥ１（１〜４６０）およびヒトＦｃのこの融合タンパク質をｐＪＢ０２ベクター内に構築する。ヒトＢＡＣＥ１（１〜４６０）：Ｆｃ（ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ）をＨＥＫ２９３細胞内で一時的に発現する。各構築物の２５０μｇのｃＤＮＡをＦｕｇｅｎｅ６と混合し、１リットルのＨＥＫ２９３細胞に加える。トランスフェクションの４日後、馴化培地を精製のために収集する。

ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃの精製
ｈｕＢＡＣＥ１：ＦｃをプロテインＡクロマトグラフィーにより精製する。酵素を少しのアリコートで−８０℃にて保存する。

ＢＡＣＥ１ ＦＲＥＴアッセイ
試験化合物の連続希釈を上記のように調製する。ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液中で化合物をさらに２０倍に希釈する。１０μＬの各希釈液を、反応混合物（２５μＬの５０ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４、ｐＨ４．６、１ｍＭ ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００、１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン、および１５μＭのＦＲＥＴ基質）（Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、９１（６）１２４９−５９（２００４）を参照のこと）を含有する対応する低タンパク質結合ブラックプレートの列Ａ〜Ｈで各ウェルに加える。内容物を１０分間、プレートシェーカーで十分に混合する。ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液中の１５μＬの２００ｐＭヒトＢＡＣＥ１（１〜４６０）：Ｆｃ（Ｖａｓｓｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８６、７３５−７４１（１９９９）を参照のこと）を、基質および試験化合物を含有するプレートに加えて反応を開始する。プレートシェーカーで簡単に混合した後、０時における混合物のＲＦＵを３５５ｎｍの励起波長および４６０ｎｍの発光波長で記録する。反応プレートをアルミニウム箔で覆い、室温にて１６〜２４時間、暗所の加湿したオーブン中に維持する。インキュベーションの終わりにＲＦＵを０時で使用したのと同じ励起および発光設定で記録する。０時とインキュベーションの終わりにおけるＲＦＵの差異は化合物処理下でのＢＡＣＥ１の活性を表す。ＲＦＵの差異を阻害剤濃度に対してプロットし、曲線を４パラメータロジスティック式に適合してＥＣ_５０およびＩＣ_５０値を得る（Ｓｉｎｈａら、Ｎａｔｕｒｅ、４０２、５３７−５４０（２０００）を参照のこと）。

以下の例示した化合物を実質的に上記のように試験し、ＢＡＣＥ１について以下の活性を示した：

これらのデータにより、表１の化合物が、精製した組換えＢＡＣＥ１酵素活性をインビトロで有効に阻害することが実証される。

ベータ−セクレターゼ活性の阻害を測定するための全細胞アッセイ
ＨＥＫ２９３Ｓｗｅ全細胞アッセイ
ベータ−セクレターゼ活性の阻害を測定するための慣用の全細胞アッセイは、一般にＳｗｅｄｉｓｈ変異（ＨＥＫ２９３Ｓｗｅと示される）と呼ばれている、天然に発現する二重突然変異Ｌｙｓ６５１Ｍｅｔ６５２からＡｓｎ６５１Ｌｅｕ６５２を含有するヒトＡＰＰ７５１ ｃＤＮＡを安定に発現するヒト胚腎臓細胞株ＨＥＫ２９３ｐ（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５７３）を利用し、Ａベータを過剰生産することが示される（Ｃｉｔｒｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３６０、６７２−６７４（１９９２））。インビトロでのＡベータ減少アッセイは文献に記載されている（Ｄｏｖｅｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７６、１７３−１８１（２００１）；Ｓｅｕｂｅｒｔら、Ｎａｔｕｒｅ、３６１、２６０（１９９３）；およびＪｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４、１５５０−１５５５（１９９７）を参照のこと）。

細胞（２００μＬの培養培地を含有する、３．５×１０^４細胞／ウェルのＨＥＫ２９３Ｓｗｅ、１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ）を、所望の濃度にて阻害剤（ＤＭＳＯで希釈した）の存在／非存在下で４〜２４時間、３７℃にてインキュベートする。インキュベーションの終わりに、馴化培地を、例えば、Ａベータペプチドの分析によって、ベータ−セクレターゼ活性の証拠のために分析する。全Ａベータペプチド（Ａベータ１〜ｘ）を、捕捉抗体としてモノクローナル２６６および報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用して、サンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。あるいは、Ａベータ１〜４０およびＡベータ１〜４２ペプチドを、Ａベータ１〜４０についての捕捉抗体としてモノクローナル２Ｇ３、およびＡベータ１〜４２についての捕捉抗体としてモノクローナル２１Ｆ１２を使用して、サンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。Ａベータ１〜４０およびＡベータ１〜４２ＥＬＩＳＡの両方は報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用する。化合物処理後に馴化培地中に放出されるＡベータの濃度はこのような条件下でＢＡＣＥ１の活性に対応する。１０点阻害曲線をプロットし、４パラメータロジスティック式に適合して、Ａベータ低下効果についてＥＣ_５０およびＩＣ_５０値を得る。以下の例示した化合物を実質的に上記のように試験し、Ａベータ低下効果について以下の活性を示した：

これらのデータにより、表２の化合物が全細胞において天然のＡベータ産生を有効に阻害することが実証される。

ＰＤＡＰＰ初代ニューロンアッセイ
確認全細胞アッセイもまた、ＰＤＡＰＰトランスジェニック胚マウスから生成した初代神経細胞培養で実施する。初代皮質ニューロンを１６日のＰＤＡＰＰ胚である胚から調製し、９６ウェルプレート（ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）プラス１０％ＦＢＳ中の１５×１０^４細胞／ウェル）で培養する。インビトロで２日後、培養培地を、Ｂ２７補足物および２μＭ（最終）のＡｒａ−Ｃ（Ｓｉｇｍａ、Ｃ１７６８）を含有する無血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）と置き換える。インビトロで５日目に、所望の濃度にて阻害剤（ＤＭＳＯ中で希釈した）の存在／非存在下でニューロンを３７℃にて２４時間インキュベートする。インキュベーションの終わりに、馴化培地を、例えば、Ａベータペプチドの分析によって、ベータ−セクレターゼ活性の証拠について分析する。全Ａベータペプチド（Ａベータ１〜ｘ）を、捕捉抗体としてモノクローナル２６６および報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用して、サンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。あるいは、Ａベータ１〜４０およびＡベータ１〜４２ペプチドを、Ａベータ１〜４０についての捕捉抗体としてモノクローナル２Ｇ３、およびＡベータ１〜４２についての捕捉抗体としてモノクローナル２１Ｆ１２を使用して、サンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。Ａベータ１〜４０およびＡベータ１〜４２ＥＬＩＳＡの両方は報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用する。化合物処理後に馴化培地中に放出されるＡベータの濃度はこのような条件下でＢＡＣＥ１の活性に対応する。１０点阻害曲線をプロットし、４パラメータロジスティック式に適合して、Ａベータ低下効果についてＥＣ_５０およびＩＣ_５０値を得る。以下の例示した化合物を実質的に上記のように試験し、Ａベータ低下効果について以下の活性を示した：

これらのデータにより、表３の化合物が全細胞においてＡベータ産生を有効に阻害することが実証される。

ベータ−セクレターゼのインビボでの阻害
マウス、モルモット、イヌおよびサルを含む、数匹の動物モデルを、化合物処理後、インビボでのベータ−セクレターゼ活性の阻害をスクリーニングするために使用できる。本発明に使用した動物は、野生型、トランスジェニック、または遺伝子ノックアウト動物であり得る。例えば、Ｇａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ３７３、５２３−５２７（１９９５）に記載されているように調製したＰＤＡＰＰマウスモデル、および他の非トランスジェニックまたは遺伝子ノックアウト動物が、阻害化合物の存在下でＡベータおよびｓＡＰＰベータ産生のインビボでの阻害を分析するのに有益である。一般に、２〜１２月齢のＰＤＡＰＰマウス、遺伝子ノックアウトマウスまたは非トランスジェニック動物に、コーンオイル、シクロデキストラン、リン酸緩衝液、ＰＨＡＲＭＡＳＯＬＶＥ（登録商標）、または他の適切なビヒクルなどのビヒクル中で製剤化した化合物を投与する。化合物投与の１〜２４時間後、動物を屠殺し、脳ならびに脳脊髄液および血漿を、Ａベータ、Ｃ９９、およびｓＡＰＰ断片の分析のために除去する（Ｍａｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、３１、１６５０７−１６５１６（２０１１）を参照のこと）。

標準的なインビボでの薬理学的研究のために、種々の濃度の化合物を動物に投与し、同じ時間に投与したビヒクルで処置した対照群と比較する。いくつかの時間経過研究のために、脳組織、血漿、または脳脊髄液を、ベースラインを確立するために０時に開始して、選択した動物から得る。化合物または適切なビヒクルを他の群に投与し、投与後、種々の時間に屠殺する。脳組織、血漿、または脳脊髄液を、選択した動物から得、例えば、特定のサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイによって、Ａベータペプチド、ｓＡＰＰベータ、および他のＡＰＰ断片を含む、ＡＰＰ切断産物の存在について分析する。試験時間の終わりに、動物を屠殺し、脳組織、血漿、または脳脊髄液を、必要に応じて、Ａベータペプチド、Ｃ９９、およびｓＡＰＰベータの存在について分析する。ＡＰＰトランスジェニック動物の脳組織もまた、化合物処理後、ベータ−アミロイドプラークの量について分析できる。本明細書で使用される場合、「Ａベータ１〜ｘペプチド」とは、残基１で開始し、残基２８より多いＣ末端で終了するＡベータ種の合計を指す。これは大部分のＡベータ種を検出し、しばしば「全Ａベータ」と呼ばれる。

阻害化合物を投与した動物（ＰＤＡＰＰまたは他のＡＰＰトランスジェニックもしくは非トランスジェニックマウス）は、ビヒクルで処置した対照またはゼロ時の対照と比較して、脳組織、血漿または脳脊髄液中でＡベータまたはｓＡＰＰベータの減少および脳組織中でベータアミロイドプラークの減少を実証し得る。例えば、若いメスのＰＤＡＰＰマウスへの１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの経口用量の実施例１の化合物の投与の３時間後、Ａベータ１〜ｘペプチドレベルは、ビヒクルで処置したマウスと比較して、それぞれ、脳海馬中で約３４％、４８％、および５３％、ならびに大脳皮質中で約４３％、５９％および６６％減少する。

例えば、実施例３の化合物の１または３ｍｇ／ｋｇの経口用量の投与の３時間後、Ａベータ１〜ｘペプチドは、ビヒクルで処置したマウスと比較して、それぞれ、脳海馬中で約３８％および５０％、ならびに大脳皮質中で約３４％および５３％減少する。

インビトロでＢＡＣＥ酵素に対する実施例１および３の活性を考慮して、これらのＡベータ低下効果はインビボでのＢＡＣＥ阻害と一致し、実施例１および３のＣＮＳ浸透がさらに実証される。

これらの研究により、本発明の化合物がＢＡＣＥを阻害し、したがってＡベータレベルを減少させるのに有用であることが示される。
本発明は以下を提供する。
［１］
以下の式の化合物：

（式中、ＲはＨまたはＦであり、
Ａは、

である）
またはその医薬的に許容可能な塩。
［２］

である、請求項１に記載の化合物または塩。
［３］

である、請求項２に記載の化合物。
［４］
有効量の請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、患者におけるアルツハイマー病を治療する方法。
［５］
有効量の請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、アルツハイマー病を発症する危険性のある患者における進行を予防する方法。
［６］
療法に使用するための請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容可能な塩。
［７］
アルツハイマー病の治療に使用するための請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容可能な塩。
［８］
１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。

Claims (8)

1. 以下の式の化合物：
   

   

   
   （式中、ＲはＨまたはＦであり、
   Ａは、
   

   

   
   である）
   またはその医薬的に許容可能な塩。
2. 

   
   である、請求項１に記載の化合物または塩。
3. 

   
   である、請求項２に記載の化合物。
4. 有効量の請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を含む、患者におけるアルツハイマー病を治療するための医薬組成物。
5. 有効量の請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を含む、アルツハイマー病を発症する危険性のある患者における進行を予防するための医薬組成物。
6. 療法に使用するための請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容可能な塩。
7. アルツハイマー病の治療に使用するための請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容可能な塩。
8. １種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。