EA013796B1 - Слитые полипептиды, содержащие glp-1 (глюкагон-подобный пептид-1), с повышенной устойчивостью к пептидазам - Google Patents
Слитые полипептиды, содержащие glp-1 (глюкагон-подобный пептид-1), с повышенной устойчивостью к пептидазам Download PDFInfo
- Publication number
- EA013796B1 EA013796B1 EA200800699A EA200800699A EA013796B1 EA 013796 B1 EA013796 B1 EA 013796B1 EA 200800699 A EA200800699 A EA 200800699A EA 200800699 A EA200800699 A EA 200800699A EA 013796 B1 EA013796 B1 EA 013796B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- sequence
- peptide
- fusion peptide
- component
- agd
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 326
- 230000004927 fusion Effects 0.000 title claims abstract description 60
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 91
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 title abstract description 7
- 102400000322 Glucagon-like peptide 1 Human genes 0.000 title abstract 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title description 16
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 title description 9
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 title description 3
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 title description 3
- 101100337060 Caenorhabditis elegans glp-1 gene Proteins 0.000 title 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 67
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 71
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 66
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 24
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 20
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 17
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 17
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 16
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 16
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 13
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 12
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 12
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 11
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 10
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 101710152019 Centromere-binding protein 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 108010058003 Proglucagon Proteins 0.000 claims description 7
- 101800001415 Bri23 peptide Proteins 0.000 claims description 6
- 102400000107 C-terminal peptide Human genes 0.000 claims description 6
- 101800000655 C-terminal peptide Proteins 0.000 claims description 6
- UYEGXSNFZXWSDV-BYPYZUCNSA-N (2s)-3-(2-amino-1h-imidazol-5-yl)-2-azaniumylpropanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC(N)=N1 UYEGXSNFZXWSDV-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 5
- PAJPWUMXBYXFCZ-UHFFFAOYSA-N 1-aminocyclopropanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CC1 PAJPWUMXBYXFCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- FVTVMQPGKVHSEY-UHFFFAOYSA-N 1-AMINOCYCLOBUTANE CARBOXYLIC ACID Chemical compound OC(=O)C1(N)CCC1 FVTVMQPGKVHSEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WOXWUZCRWJWTRT-UHFFFAOYSA-N 1-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CCCCC1 WOXWUZCRWJWTRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NILQLFBWTXNUOE-UHFFFAOYSA-N 1-aminocyclopentanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CCCC1 NILQLFBWTXNUOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PJSQECUPWDUIBT-UHFFFAOYSA-N 1-azaniumylcyclooctane-1-carboxylate Chemical compound OC(=O)C1(N)CCCCCCC1 PJSQECUPWDUIBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000010099 Fagus sylvatica Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 4
- SAAQPSNNIOGFSQ-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-4-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=NC=C1 SAAQPSNNIOGFSQ-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 3
- MPVGZUDRATZEEE-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-3-(3-hydroxyimidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1O MPVGZUDRATZEEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 3
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 claims description 3
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 claims description 3
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 claims description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 3
- WTKYBFQVZPCGAO-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-3-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CN=C1 WTKYBFQVZPCGAO-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 2
- 102100039994 Gastric inhibitory polypeptide Human genes 0.000 claims description 2
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 claims description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 2
- 102000035554 Proglucagon Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 2
- ZCKYOWGFRHAZIQ-UHFFFAOYSA-N dihydrourocanic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CNC=N1 ZCKYOWGFRHAZIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 claims description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 3
- 241001070947 Fagus Species 0.000 claims 2
- CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CC=N1 CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N 0.000 claims 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 101000886868 Homo sapiens Gastric inhibitory polypeptide Proteins 0.000 claims 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 claims 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 1
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 42
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 31
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 abstract description 4
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 3
- 102000016622 Dipeptidyl Peptidase 4 Human genes 0.000 abstract description 2
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 abstract description 2
- 101800000221 Glucagon-like peptide 2 Proteins 0.000 abstract description 2
- TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N glucagon-like peptide 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N 0.000 abstract description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 2
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 abstract 4
- 102400000326 Glucagon-like peptide 2 Human genes 0.000 abstract 1
- 208000034615 apoptosis-related disease Diseases 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 62
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 50
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 49
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 48
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 41
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 41
- -1 REEU Chemical compound 0.000 description 34
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 28
- 108010049870 Bone Morphogenetic Protein 7 Proteins 0.000 description 27
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 24
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 102100022544 Bone morphogenetic protein 7 Human genes 0.000 description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 18
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 17
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 17
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 17
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 16
- 108010011459 Exenatide Proteins 0.000 description 15
- 229960001519 exenatide Drugs 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 15
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 13
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 13
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 13
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 12
- JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N chembl1210015 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@]3(O[C@@H](C[C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)C(O)=O)O2)O)[C@@H](CO)O1)NC(C)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N 0.000 description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 10
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 9
- 108010014663 Glycated Hemoglobin A Proteins 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 8
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 8
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 8
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical class [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100038408 Kinesin-like protein KIF22 Human genes 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 6
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical class OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 6
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 108010090205 OriP-binding protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 5
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 5
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 5
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 5
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 5
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 5
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical class 0.000 description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical class [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 3
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N Exenatide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 3
- 102000000422 Matrix Metalloproteinase 3 Human genes 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Chemical class 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000002473 insulinotropic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 3
- IZYBEMGNIUSSAX-UHFFFAOYSA-N methyl benzenecarboperoxoate Chemical compound COOC(=O)C1=CC=CC=C1 IZYBEMGNIUSSAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 3
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 3
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 108091007196 stromelysin Proteins 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 2
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-m-cresol Chemical compound CC1=CC(O)=CC=C1Cl CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical class [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 2
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101100327050 Caenorhabditis elegans cbp-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 208000004986 Diffuse Cerebral Sclerosis of Schilder Diseases 0.000 description 2
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 240000000731 Fagus sylvatica Species 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 102100025924 Oxysterol-binding protein-related protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710201617 Oxysterol-binding protein-related protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100025925 Oxysterol-binding protein-related protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710201616 Oxysterol-binding protein-related protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710180309 Protease 4 Proteins 0.000 description 2
- 101000886298 Pseudoxanthomonas mexicana Dipeptidyl aminopeptidase 4 Proteins 0.000 description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N Pyridoxal Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 2
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 229940018602 docusate Drugs 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940031098 ethanolamine Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 2
- 230000010030 glucose lowering effect Effects 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N methyl benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1 QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940116315 oxalic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 2
- OJUGVDODNPJEEC-UHFFFAOYSA-N phenylglyoxal Chemical compound O=CC(=O)C1=CC=CC=C1 OJUGVDODNPJEEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 2
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 2
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical compound C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N (2R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid Chemical compound O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1.O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1 QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SNRCMWGPCHPRBP-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-(hydroxyamino)-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid Chemical compound ON[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 SNRCMWGPCHPRBP-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FQFVANSXYKWQOT-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-pyridin-4-ylpropanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=NC=C1 FQFVANSXYKWQOT-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- MSECZMWQBBVGEN-LURJTMIESA-N (2s)-2-azaniumyl-4-(1h-imidazol-5-yl)butanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC1=CN=CN1 MSECZMWQBBVGEN-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N (S)-chlorphenesin Chemical compound OC[C@H](O)COC1=CC=C(Cl)C=C1 MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Substances OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOGLQXZIGOQIBD-UHFFFAOYSA-N 1-(dimethylazaniumyl)propane-1-sulfonate Chemical class CCC(N(C)C)S(O)(=O)=O NOGLQXZIGOQIBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical group CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- ZPDQFUYPBVXUKS-YADHBBJMSA-N 1-stearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O ZPDQFUYPBVXUKS-YADHBBJMSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCSBTDBGTNZOAB-UHFFFAOYSA-N 2,3-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1[N+]([O-])=O HCSBTDBGTNZOAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHANCCMWYDZQOR-UHFFFAOYSA-N 2-(methyldisulfanyl)pyridine Chemical compound CSSC1=CC=CC=N1 BHANCCMWYDZQOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CRTWOYOCILXSSX-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(Br)CC1=CN=CN1 CRTWOYOCILXSSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 2-methylthioethanol Chemical compound CSCCO WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GAOFSPAZESJCOA-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1.OCCOC1=CC=CC=C1 GAOFSPAZESJCOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 3',5'-di-O-methyltricetin Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VJINKBZUJYGZGP-UHFFFAOYSA-N 3-(1-aminopropylideneamino)propyl-trimethylazanium Chemical compound CCC(N)=NCCC[N+](C)(C)C VJINKBZUJYGZGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSWYUZQBLVUEPH-UHFFFAOYSA-N 3-(azaniumylmethyl)benzoate Chemical compound NCC1=CC=CC(C(O)=O)=C1 GSWYUZQBLVUEPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONZQYZKCUHFORE-UHFFFAOYSA-N 3-bromo-1,1,1-trifluoropropan-2-one Chemical compound FC(F)(F)C(=O)CBr ONZQYZKCUHFORE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QHSXWDVVFHXHHB-UHFFFAOYSA-N 3-nitro-2-[(3-nitropyridin-2-yl)disulfanyl]pyridine Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CN=C1SSC1=NC=CC=C1[N+]([O-])=O QHSXWDVVFHXHHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVXTXHMUVFISPP-UHFFFAOYSA-N 4-azaniumyl-2-methylbutane-2-sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(C)(C)CC[NH3+] SVXTXHMUVFISPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXACTUVBBMDKRW-UHFFFAOYSA-N 4-bromobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)C=C1 PXACTUVBBMDKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybutyric acid Chemical compound OCCCC(O)=O SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBKXEAXTFZPCHS-UHFFFAOYSA-N 4-phenylbutyric acid Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=CC=C1 OBKXEAXTFZPCHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150014742 AGE1 gene Proteins 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000023434 Alpers-Huttenlocher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 108010079054 Amyloid beta-Protein Precursor Proteins 0.000 description 1
- 102000014303 Amyloid beta-Protein Precursor Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 206010003594 Ataxia telangiectasia Diseases 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N Bronopol Chemical compound OCC(Br)(CO)[N+]([O-])=O LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021984 C-C motif chemokine 4-like Human genes 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101150107019 CEP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical group NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- OIFBSDVPJOWBCH-UHFFFAOYSA-N Diethyl carbonate Chemical compound CCOC(=O)OCC OIFBSDVPJOWBCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 101710156525 Dipeptidyl aminopeptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101100112225 Emericella nidulans (strain FGSC A4 / ATCC 38163 / CBS 112.46 / NRRL 194 / M139) cpa-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010049020 Encephalitis periaxialis diffusa Diseases 0.000 description 1
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical group OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 101100533229 Galleria mellonella SER1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010004460 Gastric Inhibitory Polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108010088406 Glucagon-Like Peptides Proteins 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M Glycolate Chemical compound OCC([O-])=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229920003114 HPC-L Polymers 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 101000777471 Homo sapiens C-C motif chemokine 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000737602 Homo sapiens Ceramide synthase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001039157 Homo sapiens Leucine-rich repeat-containing protein 25 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 208000028257 Joubert syndrome with oculorenal defect Diseases 0.000 description 1
- 206010023379 Ketoacidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 102100040695 Leucine-rich repeat-containing protein 25 Human genes 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 108010076502 Matrix Metalloproteinase 11 Proteins 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N N-acetylimidazole Chemical compound CC(=O)N1C=CN=C1 VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N O-phosphoryl-L-serine Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010090207 OriP-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710138624 Otolith matrix protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 1
- 206010049082 Pancreatic mass Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N Piscigenin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2)=O)=C1 IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 241000316914 Prococcus Species 0.000 description 1
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710202113 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N R-2-phenyl-2-hydroxyacetic acid Natural products OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- LKJCZXIGFPOQPC-UHFFFAOYSA-N SSSSSSSSSSSSSSSS Chemical compound SSSSSSSSSSSSSSSS LKJCZXIGFPOQPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021811 Sandhoff disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021235 Schilder disease Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000017303 Stromelysin-3 Human genes 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYTOUQBROMCLBJ-UHFFFAOYSA-N Tetranitromethane Chemical compound [O-][N+](=O)C([N+]([O-])=O)([N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O NYTOUQBROMCLBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical class [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002058 anti-hyperglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N azane;7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole-4-sulfonic acid Chemical compound N.OS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C2=NON=C12 JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229930189065 blasticidin Natural products 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229960003168 bronopol Drugs 0.000 description 1
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000003491 cAMP production Effects 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N carboxyglutamic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 150000001244 carboxylic acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 1
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KVSASDOGYIBWTA-UHFFFAOYSA-N chloro benzoate Chemical compound ClOC(=O)C1=CC=CC=C1 KVSASDOGYIBWTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXIVSQZSERGHQP-UHFFFAOYSA-N chloroacetamide Chemical compound NC(=O)CCl VXIVSQZSERGHQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229960002242 chlorocresol Drugs 0.000 description 1
- MXOAEAUPQDYUQM-UHFFFAOYSA-N chlorphenesin Chemical compound OCC(O)COC1=CC=C(Cl)C=C1 MXOAEAUPQDYUQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003993 chlorphenesin Drugs 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229950006137 dexfosfoserine Drugs 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 229940099371 diacetylated monoglycerides Drugs 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- FRKBLBQTSTUKOV-UHFFFAOYSA-N diphosphatidyl glycerol Natural products OP(O)(=O)OCC(OP(O)(O)=O)COP(O)(O)=O FRKBLBQTSTUKOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBHFVMDLPTZDOI-UHFFFAOYSA-N dodecylphosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCOP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C QBHFVMDLPTZDOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002169 ethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 239000004403 ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043351 ethyl-p-hydroxybenzoate Drugs 0.000 description 1
- HXQVQGWHFRNKMS-UHFFFAOYSA-M ethylmercurithiosalicylic acid Chemical compound CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C(O)=O HXQVQGWHFRNKMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940093181 glucose injection Drugs 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N glyoxylic acid Chemical compound OC(=O)C=O HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N heptanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M hexanoate Chemical compound CCCCCC([O-])=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000053680 human centrocyte centroblast marker 1 Human genes 0.000 description 1
- 108700042450 human centrocyte centroblast marker 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940071870 hydroiodic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Substances C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002462 imidazolines Chemical class 0.000 description 1
- ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N imidurea Chemical compound O=C1NC(=O)N(CO)C1NC(=O)NCNC(=O)NC1C(=O)NC(=O)N1CO ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940113174 imidurea Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002510 mandelic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- QSCHODGYOXTSJN-UHFFFAOYSA-N mercury 2-nitrophenol Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=C(C=CC=C1)O.[Hg] QSCHODGYOXTSJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005341 metaphosphate group Chemical group 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940095102 methyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- RMAHPRNLQIRHIJ-UHFFFAOYSA-N methyl carbamimidate Chemical compound COC(N)=N RMAHPRNLQIRHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- NEGQCMNHXHSFGU-UHFFFAOYSA-N methyl pyridine-2-carboximidate Chemical compound COC(=N)C1=CC=CC=N1 NEGQCMNHXHSFGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 201000011540 mitochondrial DNA depletion syndrome 4a Diseases 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002276 neurotropic effect Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 235000020925 non fasting Nutrition 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002571 pancreatic alpha cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229940083254 peripheral vasodilators imidazoline derivative Drugs 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- DYUMLJSJISTVPV-UHFFFAOYSA-N phenyl propanoate Chemical compound CCC(=O)OC1=CC=CC=C1 DYUMLJSJISTVPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950009215 phenylbutanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- HMFAQQIORZDPJG-UHFFFAOYSA-N phosphono 2-chloroacetate Chemical compound OP(O)(=O)OC(=O)CCl HMFAQQIORZDPJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 201000002511 pituitary cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 description 1
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 description 1
- 229940044476 poloxamer 407 Drugs 0.000 description 1
- 229920001987 poloxamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UORVCLMRJXCDCP-UHFFFAOYSA-M propynoate Chemical compound [O-]C(=O)C#C UORVCLMRJXCDCP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000026447 protein localization Effects 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 1
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000003979 response to food Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012340 reverse transcriptase PCR Methods 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C([O-])=O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 229940116351 sebacate Drugs 0.000 description 1
- CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-L sebacate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCCCCCC([O-])=O CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000009962 secretion pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004249 sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 229960005480 sodium caprylate Drugs 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940001593 sodium carbonate Drugs 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical compound [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M sodium glycocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M 0.000 description 1
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M sodium taurocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000013097 stability assessment Methods 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 1
- 230000001300 stimulation of adenylate cyclase Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 150000003588 threonines Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008181 tonicity modifier Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N tricin Natural products COc1cc(OC)c(O)c(c1)C2=CC(=O)c3c(O)cc(O)cc3O2 BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 1
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 235000008979 vitamin B4 Nutrition 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Chemical class 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Chemical class 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
- A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- G—PHYSICS
- G07—CHECKING-DEVICES
- G07F—COIN-FREED OR LIKE APPARATUS
- G07F11/00—Coin-freed apparatus for dispensing, or the like, discrete articles
- G07F11/02—Coin-freed apparatus for dispensing, or the like, discrete articles from non-movable magazines
- G07F11/04—Coin-freed apparatus for dispensing, or the like, discrete articles from non-movable magazines in which magazines the articles are stored one vertically above the other
- G07F11/16—Delivery means
- G07F11/165—Delivery means using xyz-picker or multi-dimensional article picking arrangements
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
В настоящем изобретении описаны слитые пептиды, которые обладают активностью GLP-1 и повышенной стабильностью in vivo, прежде всего устойчивостью к дипептидилпептидазе IV. Слитый пептид содержит в качестве компонента (I) N-концевую последовательность GLP-1(7-35, 7-36 или 7-37) и в качестве компонента (II) С-концевую пептидную последовательность, которая состоит по меньшей мере из 9 аминокислот, или ее функционально активный фрагмент, вариант или производное. Компонент (II) предпочтительно представляет собой полную или частичную версию IP2 (интронный пептид 2). Предпочтительным вариантом осуществления изобретения является последовательность GLP-1(7-35, -36 или -37)/IP2/GLP-1(7-35, -36 или -37) или GLP-2. Слитый пептид можно получать в сконструированных клетках или путем синтеза и его можно применять для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения различных заболеваний или нарушений, например диабета типа 1 или 2, связанных с апоптозом заболеваний или нейродегенеративных нарушений.
Description
Настоящее изобретение относится к новым слитым пептидам, содержащим ОЬР-1 с удлиненными С-концами, которые обладают устойчивостью к инактивации эндопептидазой IV, могут экспрессироваться с высоким уровнем в трансформированных клетках животных и которые можно применять, например, для лечения диабета типа II.
Ген глюкагона хорошо изучен (см., например, \У1Шс ГXV. и др., Ыис1е1с Лаб Кек. 14(12), 1986, с. 4719-4730). Молекула препроглюкагона в виде высокомолекулярной молекулы-предшественника синтезируется в панкреатических альфа-клетках и в Ь-клетках тощей кишки и ободочной кишки. Препроглюкагон представляет собой состоящий из 180 аминокислот прогормон, и его последовательность содержит помимо глюкагона две последовательности родственной структуры: глюкагон-подобный пептид-1 (ОЬР1) и глюкагон-подобный пептид-2 (ОЬР-2). В молекуле препроглюкагона между ОЬР-1 и ОЬР-2 находится состоящая из 17 аминокислот пептидная последовательность (или точнее состоящая из 15 аминокислот последовательность плюс С-концевой расщепляемый КК-сайт), интронный пептид 2 (1Р2). Последовательность 1Р2 (локализованная между ОЬР-1 и -2 в молекуле-предшественнике), как правило, расщепляется протеолитически после аминокислоты (ак) 37 ОЬР-1. Таким образом, молекула препроглюкагона в зависимости от клетки и ее окружения расщепляется на различные пептиды, включая ОЬР-1(1-37), состоящий из 37 аминокислот пептид в непроцессированной форме. Как правило, его процессинг происходит в поджелудочной железе и в кишечнике. Последовательность ОЬР-1(1-37) может подвергаться дополнительному протеолитическому расщеплению с образованием активной процессированной формы ОЬР-1(7-37), состоящей из 31 аминокислоты, или амида ОЬР-1(7-36). Таким образом, при формировании ОЬР-1(7-37) образуется представляющий интерес фрагмент, который состоит из аминокислотных остатков от (и включительно) остатка в положении 7 до (и включительно) остатка в положении 37, начиная с Ν-конца родительского пептида ОЬР-1. Аминокислотная последовательность амида ОЬР-1(7-36) и ОЬР1(7-37) имеет формулу I (8ЕО ГО N0:43)
Н18-А1а-С1и-О1у-Т11г-РЬе-ТЬг-Яег-Анр-Уа1-8ег-8ег-Туг-Ьеи-С1и-О1у-О1п-А1а-А1аЬу8-О1и-Рйе-11е-А1а-Тгр-Ьеи-Уа1-Ьу8-О1у-Аг§-Х (I) которая соответствует амиду ОЬР-1(7-36), когда X обозначает ΝΗ2, и ОЬР-1(7-37), когда X обозначает О1у-ОН.
ОЬР-1 представляет собой гормон желудочно-кишечного тракта и наиболее эффективный эндогенный инсулинотропный агент, активность которого включает стимуляцию аденилатциклазной и протеинкиназной активности в бета-клетках. Физиологически в сочетании с желудочным ингибирующим полипептидом из верхнего отдела кишечника он функционирует в качестве эндокринного гормона, который снижает уровень глюкозы в крови. Таким образом, ОЬР-1, секреция которого происходит в ответ на прием пищи, обладает несколькими видами воздействия на желудок, печень, поджелудочную железу и головной мозг, которые совместно обеспечивают регулирование содержания сахара к крови. Поэтому амид глюкагон-подобного пептида ОЬР-1(7-36) и его неамидированный аналог ОЬР-1(7-37) представляют значительный интерес благодаря их высокой эффективности в отношении метаболизма углеводов и возможности их применения для лечения диабета, включая диабет типа II. Диабет типа II характеризуется устойчивостью к инсулину, поскольку клетки не реагируют соответствующим образом на присутствие инсулина. Это является более сложной проблемой, чем диабет типа I. Диабет типа II может оставаться незамеченным у пациента в течение многих лет до его диагностирования, поскольку симптомы, как правило, являются менее выраженными (отсутствие кетоацидоза) и могут быть спорадическими. Однако последствием незамеченного диабета типа II могут быть серьезные осложнения, включая почечную недостаточность и ишемическую болезнь сердца. Это повышает заболеваемость и смертность.
Амид ОЬР-1(7-36) или ОЬР-1(7-37) обладает непродолжительным временем жизни в сыворотке. Пептид расщепляет дипептидилпептидазой IV (ЭРР-Γν) между остатками 8 и 9. Расщепленный пептид является неактивным. Таким образом, ОЬР-1 при его экзогенном введении является очень короткоживущим и имеет ограниченное терапевтическое применение.
Предпринимались многочисленные попытки синтеза более стабильных (в отношении воздействия ЭРРН'У) аналогов встречающегося в естественных условиях ОЬР-1 (ОЬР-1(7-37)). В частности остаток в положении 8, который ίη νίνο представляет собой А1а, заменяли на другой остаток, например О1у, 8ет или Тйг (Вигсейп К. и др., Ме1аЬоШш 48, 1999, с. 252-258). Было проведено обширное исследование О1у8- или О8-аналога как в виде синтезированной молекулы, так и в виде молекулы, полученной в клеточных линиях, которые создавали с помощью генной инженерии с целью секреции мутантного полипептида (Вигсейп К. и др., Аппа1к о£ 1йе №\ν Уогк Асабету о£ 8с1епсек 875, 1999, с. 277-285). Для повышения стабильности ш νίνο без снижения его биологической активности в ОЬР-1(7-37) интродуцировали различные другие модификации. Однако все эти подходы не привели к получению каких-либо важных для терапевтического применения результатов из-за серьезных проблем.
В А0/9953064 на имя Тйогеп В. описана стратегия создания мультимерной экспрессионной кассеты ОЬР-1, которую можно встраивать в различные типы клеток, представляющие собой доступные научной общественности иммортализованные линии клеток и культуры, обладающих способностью к делению первичных клеток. Их примерами являются чувствительные к ЕОЕ нейросферы, чувствительные к ЬЕОЕ стволовые клетки-предшественники нейронов из ЦНС млекопитающих, хотя в приведенных в ка
- 1 013796 честве вариантов осуществления примерах использовали клетки почки детеныша хомяка (ВНК). Установлено, что имплантированные трансфектированные клетки можно применять для успешного лечения больных диабетом мышей, благодаря осуществлению контроля уровня глюкозы его удавалось приводить практически в полное соответствие с уровнем глюкозы в организме контрольных не больных диабетом животных. Однако этот метод не удовлетворяет требованиям общепринятого лечения пациентов, страдающих диабетов.
Другой подход к экзогенной стабилизации уровня глюкозы основан на применении нового класса лекарственных средств, известного как эндокринные миметики, возможность применения которых для лечения диабета типа II исследуется в настоящее время. Эксенатид (Вуеба®) представляет собой синтетическую версию встречающегося в естественных условиях соединения, обнаруженного в слюне ящерицы Ойа шоийег. В клинических опытах установлено, что эндокринный миметик (эксенатид) снижает уровень сахара в крови и улучшает функцию бета-клеток на уровне маркеров. Однако эксенатид оказывает лишь ограниченные воздействия на человеческий эндокринный гормон глюкагон-подобный пептид1 (СЬР-1).
В целом, в настоящее время отсутствует доступная эффективная терапия диабета типа II, позволяющая снижать уровень глюкозы в крови аналогично СЬР-1, другими словами, терапия, которая обладает полным спектром благоприятных действий, характерных для СЬР-1, например его способностью при физиологических концентрация значительно снижать скорость проникновения питательных веществ в кровоток путем снижения скорости опорожнения желудка у страдающих ожирением пациентов или его инсулинстимулирующей активностью. Таким образом, объектом настоящего изобретения является создание пептидных молекул на основе СЬР-1, которые обладают биологической активностью и устойчиво стью к протеолитическому расщеплению.
В настоящем изобретении предложен слитый пептид, который содержит в качестве компонента (I) Ν-концевую последовательность СЬР-1(7-35, 7-36 или 7-37) и в качестве компонента (II) С-концевую пептидную последовательность, состоящую по меньшей мере из 9 аминокислот, или ее функциональный фрагмент, вариант или производное.
В основу настоящего изобретения положен тот факт, что созданный пептид, предлагаемый в изобретении, защищен от протеолитического расщепления ίη νίνο, прежде всего протеолитической эндопептидазой IV. Предлагаемый в изобретении пептид, который содержит по меньшей мере два компонента (I) и (II), обладает биологической активностью, характерной для СЬР-1, и одновременно придает стабильность СЬР-1, который представляет собой компонент (I), в результате С-концевого удлинения.
Понятие «предлагаемый в изобретении пептид» в контексте настоящего описания относится к слитому пептиду, как он определен в контексте настоящего описания, его варианту, аналогу, фрагменту или производному, включая комбинации, например, дериватизированного фрагмента, аналога или варианта слитого пептида. Понятие «пептид СЬР-1» в контексте настоящего описания означает СЬР-1(7-35, -36 или -37), при этом подразумевается, что «модифицированный пептид СЬР-1» означает любой аналог СЬР-1, производное СЬР-1, вариант СЬР-1 или фрагмент СЬР-1, включая дериватизированный фрагмент, аналог или вариант СЬР-1(7-35, -36 или -37), который может присутствовать в любом из компонентов (I) и (III) предлагаемого в изобретении пептида. Понятие «пептид СЬР-2» в контексте настоящего описания означает СЬР-2(1-33, -34 или -35), при этом подразумевается, что «модифицированный пептид СЬР-2» означает любой аналог, фрагмент или вариант СЬР-2, включая дериватизированный фрагмент, аналог или вариант СЬР-2(1-33, -34 или -35). Варианты, аналоги, фрагменты и производные рассматриваются как модификации немодифицированной последовательности, например, СЬР-1(7-35, - 36 или -37) или СЬР-2(1-33, -34 или -35). В контексте настоящего изобретения подразумевается, что любой вариант, аналог, фрагмент или производное должно обладать функциональной активностью, например обладать таким же или подобным биологическим действием, что и немодифицированный пептид СЬР-1.
Предпочтительно предлагаемый в изобретении пептид представляет собой слитый пептид или его вариант, аналог, фрагмент или производное, в котором компонент (I) содержит последовательность, гомологичную по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 85% и еще более предпочтительно по меньшей мере на 90% последовательности, представленной в 8Е0 ГО N0:1. 8Е0 ГО N0:1 представляет собой нативную аминокислотную последовательность СЬР-1(7-37) (состоящую из 31 аминокислоты), которая является высококонсервативной у млекопитающих.
Второй компонент (компонент (II)) слитого пептида, предлагаемого в изобретении (или в более общем смысле любого предлагаемого в изобретении пептида, включая аналоги, фрагменты, варианты или производные слитых пептидов), как правило, содержит последовательность, состоящую по меньшей мере из 9 аминокислот, которые могут иметь структуры типа β-изгиба (складки) или не иметь такую структуру. β-складчатая структура представляет собой, как правило, элемент вторичной структуры белков или пептидов. Она, как правило, образуется четырьмя аминокислотами, которые изменяют на противоположное направление каркасной цепи пептида или белка. Аминокислотная последовательность компонента (II) содержит по меньшей мере 9 аминокислот и предпочтительно содержит по меньшей мере один остаток пролина или аланина в последовательности. Остатки пролина являются обычными аминокисло
- 2 013796 тами в β-складке, формирующей тетрамерную аминокислотную последовательность. Остаток пролина обычно и чаще всего локализован в положении 2 или 3, предпочтительно 2, тетрамерной последовательности β-складки, которая входит в состав компонента (II) слитого пептида.
В состав предлагаемого в изобретении слияния может, как правило, входить компонент (II), последовательность которого состоит из 9-30, предпочтительно 9-20 и наиболее предпочтительно 9-15 аминокислот. Другими словами, более короткие последовательности компонента (II) могут быть предпочтительными из-за из повышенной способности связываться с ОЬР-рецептором по сравнению с более длинными последовательностями. Последовательность компонента (II), хотя это не является необходимым условием, предпочтительно может быть нейтральной или иметь отрицательный заряд при рН 7.
Слитый пептид, предлагаемый в изобретении, является предпочтительным, если его компонент (II) содержит последовательность-мотив, выбранную из группы, включающей УАМ, IΑЕЕ, РЕЕУ, АЕЕУ, ЕЕЬО, АААА, ААУА, ААЬО, ЭЕРЕ, ΑΑΌΧ, ΑΧΌΧ и ΧΑΌΧ, где X обозначает любую аминокислоту (встречающуюся в естественных условиях или модифицированную не встречающуюся в естественных условиях аминокислоту). Эти тетрамерные мотивы могут быть локализованы в любом месте в последовательности компонента (II). В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения компонент (II) в предлагаемом в изобретении слитом пептиде представляет собой пептидную последовательность, связанную с С-концом компонента (I) через ее ^концевую последовательность-мотив, выбранную из группы, включающей АА, ХА, АХ, ЯК, ΚΧ и ΧΚ, где Χ обозначает любую аминокислоту (встречающуюся в естественных условиях или модифицированную не встречающуюся в естественных условиях аминокислоту).
Предпочтительный мотив компонента (II) предлагаемого в изобретении слитого пептида содержит последовательность-мотив, представленную в 8ЕО ГО N0:25 (ЭЕРЕЕУА), или содержит последовательность, которая гомологична по меньшей мере на 80% последовательности мотива ЭЕРЕЕУА, которая соответствует частичной последовательности человеческого или мышиного ГР-2.
Особенно предпочтительным является слитый пептид, в котором компонент (II) представляет собой пептидную последовательность, которая содержит последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:22 (ККЭЕРЕЕУА!) или 8Е0 ГО N0:26 (ААЭЕРЕЕУА!) (все пептидные последовательности представлены в однобуквенном коде), или последовательность, гомологичную по меньшей мере на 80% последовательности, представленной в 8Е0 ГО N0:22 или 8Е0 ГО N0:26. 8Е0 ГО N0:22 представляет собой частичную последовательность полноразмерной последовательности (человеческого или мышиного) ГО-2 (интронный пептид 2), которая содержит ^концевые 10 аминокислот состоящей из 15 аминокислот полноразмерной последовательности ГО-2. 8Е0 ГО N0:26 является производной 8Е0 ГО N0:22, которая получена заменой ^концевых (ЯЯ) остатков на (АА). ГО-2 является предпочтительным примером содержащей βскладку пептидной последовательности. Таким образом, другими еще более предпочтительными последовательностями являются последовательности, в которых компонент (II) длиннее частичных аминокислотных последовательностей ГО-2, например, содержит ^концевую состоящую из 14 аминокислот последовательность, которая встречается в человеческой (8Е0 ГО N0:23 (ККЭЕРЕЕУА^ЕЕЕ)) или мышиной копии (8Е0 ГО N0:24 (ЯЯ^ЕРЕЕVΑIΑЕЕ^)), или последовательность, гомологичную по меньшей мере на 80% последовательности, представленной в 8Е0 ГО N0: 23 или 24. Наиболее предпочтительными в качестве элементов, входящих в компонент (II) слитого пептида, являются полноразмерные последовательности ГО-2, которые содержат все 15 аминокислот встречающейся в естественных условиях последовательности ГО-2 (8Е0 ГО N0:2 (ЯЯ^ЕРЕЕVΑIVЕЕ^6), человеческая, или 8Е0 ГО N0:3 (ЯЯ^ЕРЕЕVΑIΑЕЕ^^), мышиная), или последовательность, гомологичную по меньшей мере на 80% последовательности, представленной в 8Е0 ГО N0:2 или 3. Под объем настоящего изобретения подпадают также все изоформы ГО2 млекопитающих (встречающиеся в естественных условиях в организме млекопитающих варианты ГО2). Все последовательности, упомянутые в этом параграфе, могут нести также ^концевой мотив (АА), (АХ) или (ХА) вместо встречающихся в естественных условиях (ЯЯ), например 8ЕО ГО N0:27 (ААЭЕРЕЕУА!УЕЕЕ), 8НО ГО N0:28 (ΑΑ^ЕРЕЕVΑIΑЕЕ^), 8ЕО ГО N0:29 (ААЭЕРЕЕУА[УЕЕЕО) и 8Е0 ГО N0:30 (ААЭЕРЕЕУАМЕЕЕС). Можно получать белки, содержащие более одной копии последовательности, включенной в компонент (II), например 2, 3 или даже большее количество копий ГО2 или фрагмента, варианта или аналога или производного ГО2.
Таким образом, предлагаемый в изобретении пептид предпочтительно содержит последовательность, представленную в 8ЕО ГО N0:8 (НΑЕ6ТЕТ8^V88Υ^Е6^ΑΑΚЕЕIΑ№^VΚ6Я6ЯЯ^ЕРЕЕVΑIАЕЕЬО), т.е. ОЬР-1(7-37), связанный без какой-либо линкерной последовательности через его С-конец с мышиным ГО2, или последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:12 (НАЕСТЕТ8ЭУ88УЕЕООАΑΚЕЕIΑ^^VΚ6Я6ЯЯ^ЕРЕЕVΑIVЕЕ^6), т.е. ОЬР-1(7-37), связанный без какой-либо линкерной последовательности через его С-конец с человеческим ГО2. Кроме того, другими предпочтительными предлагаемыми в изобретении вариантами предлагаемых в изобретении пептидов, которые имеют последовательности, представленные в 8Е0 ГО N0:8 и 8Е0 ГО N0:12, являются 8Е0 ГО N0:31
- 3 013796 (Ц;\ГО1ЕТ8Оνδ8ΥΕΕθρΑΑΚΕΠΑν.·ΤνΚΟΚ<3ΑΑΟΕΡΕΕνΑΙΑΕΠΓ.Ω), 8ЕО ГО N0:32 (НАЕСтТРТЯОУЗЗУГЕОфА ΑΚΕΙ'ΙΑ'λ'ΈνΚΟΚΟΚ.ΕΟΡΑΕΕνΑΙΑΕΕΕΟ).
8Е0 ГО N0:33 (НАЕОТРТ8ОУ88УЕЕО9ААКЕР1А\¥ЬУКОЕОККОААААУА1АЕЕЕО), ЗЕО ГО N0:34 (НАР.ОТРТЗОУЗЗУТ.ЕООЛЛКЕРТАУДАКОКОААОААААУАЕАААЕС), 8Εί) ГО N0:35 (ΗΑΕ0ΤΡΤ80ν88ΥΕΕ09ΑΑΚΕΡΙΑλνΕνΚ0Κ0ΚΚ0ΡΡ), 8 Ер ГО N0: 36 (НАЕОТРТ8ОУ88УЕЕОфААКЕР1АУ7ЕУКОКОККОРРБЕУА), 8Еф ГО N0:37 (ΗΑΕΟΤΡΤ8θν38ΥΕΕΟΟΑΑΚΕΡΙΑΨΕνΚΟΚ.ΟΚΚΟΡΡΕΕνΑΙΑΕΕΕΟΒ.Κ.ΗΑΟ), 8Е0 ГО N0:38 (НАЕОТРТ8ОУ88УЬЕО0ААКЕР1А^ЕУКОК.ОААОРРЕЕУА1УЕЕЕО), 8Ер ГО N0:39 (ΗΑΕΟΤΡΤ8θνδ8ΥΕΕΟ(2ΑΑΚ.ΕΡΙΑλνΕνΚΟΚΟΚΚϋΡΑΕΕνΑΐνΕΕΕΟ), 8Еф ГО N0:40 (ΗΑΕΟΤΡΤδΟνδδΥΕΕΟΟΑΑΚΕΡΙΑΨΕνΚΟΚ,ΟΚΚϋΑΑΑΑνΑΐνΕΕΕΟ), ЗЕО ГО N0:41 (ΗΑΕΟΤΡΤ3ϋν88ΥΕΕΟΟΑΑΚΕΡΙΑ1¥ΕνΚΟΚ.ΟΑΑΟΑΑΑΑνΑΐνΑΑΕΟ), 8Е0 ГО N0:42 (ΗΑΕΟΤΕΤ8^V88Υ^ΕΟ^ΑΑΚΕΡIΑ^V^VΚΟΚ(ЖΚ.^ΡΡΕΕVΑIVΕΕ^ΟΚΕ.ΗΑС);
т.е. ОЬР-1 (7-37), связанный без какой-либо линкерной последовательности через его С-конец с конкретными аналогами или вариантами последовательности ΙΡ2. Варианты, аналоги или фрагменты, которые имеют последовательность, гомологичную по меньшей мере на 80% 8Е0 ΙΌ N0:8 и 12, или их производные также подпадают под объем изобретения и являются предпочтительными.
Не вдаваясь в какую-либо теорию, при создании настоящего изобретения сделано предположение, что нестабильность ОЬР-1(7-35, -36 или -37), при введении любому пациенту, который нуждается в этом, является следствием незащищенной 3-мерной структуры. Протеазы могут расщеплять пептид 0ЬР-1(735, -36 или -37) и быстро устранять его физиологическую активность ίη νίνο. Путем связывания пептидной последовательности с С-концом ОЬР-1(7-35, -36 или -37) его структура приобретает стабильность в отношении ферментативного расщепления. Приобретенную стабильность, вероятно, можно повышать, если дополнительная С-концевая пептидная последовательность (входящая в компонент (ΙΙ) слитого пептида, предлагаемого в изобретении) приобретает складчатость в результате присутствия β-складчатого структурного элемента, образованного из ее первичной структуры и придающего жесткость компоненту (II). Однако β-складчатая структура в компоненте (II) предлагаемого в изобретении пептида, вероятно, не является необходимым условием стабилизации последовательности ОЬР-1 компонента (I) в отношении ферментативного расщепления. Предлагаемый в изобретении пептид, благодаря его С-концевому пептидному удлинению, например, содержащему элемент β-складчатой структуры, как установлено, обладает повышенной устойчивостью к инактивации ЬРРЧ V. С-концевой пептид либо не отщепляется от последовательности ОЬР-1(7-35, -36 или -37) перед воздействием на его рецептор на клетках-мишенях, либо он может ферментативно отщепляться с образованием ОЬР-1(7-35, -36 или -37) ίη νίνο. Вне зависимости от точной формы связи предлагаемого в изобретении пептида в сайте ОЬР-1-рецептора, пептид, предлагаемый в изобретении, осуществляет свою функцию в качестве активного инсулинотропного соединения.
Пептидные последовательности, которые можно рассматривать в качестве пригодных для включения в компонент (II), из-за их первичной структуры, образующей элемент β-складчатой структуры, можно легко идентифицировать с помощью соответствующих, например, спектроскопических методов, например циркулярного дихроизма, или других методов, известных специалисту в данной области.
Компонент (II) и компонент (I) можно связывать непосредственно или связывать через линкерную последовательность. Предпочтительно оба компонента непосредственно связывают друг с другом. В случае их связывания через линкер (или спейсер), линкер предпочтительно представляет собой пептидный линкер или органический линкер. Пептидный линкер, как правило, состоит из от 1 до 10 аминокислот, предпочтительно от 1 до 5, еще более предпочтительно от 1 до 3 аминокислот, в некоторых случаях линкерная последовательность может быть длиннее и содержать от 11 до 50 аминокислот. Пептидный линкер может состоять из различных аминокислотных последовательностей. Предпочтительно пептидный линкер должен интродуцировать определенную структурную гибкость между компонентами, подлежащими связыванию. Для достижения структурной гибкости применяют, например, пептидный линкер, который содержит различные количества остатков глицина или пролина, предпочтительно по меньшей мере 30%, более предпочтительно по меньшей мере 40% и еще более предпочтительно по меньшей мере 60% остатков пролина и глицина в линкерной последовательности. Вне зависимости от конкретной
- 4 013796 последовательности пептидный линкер предпочтительно должен быть иммунологически неактивным.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения предлагаемый в изобретении пептид, т.е. слитый пептид или его аналоги, фрагмент, варианты или производные, содержит третий компонент (компонент (III)), который или связан с С-концом компонента (II) и/или с Ν-концом компонента (I). Предпочтительно компонент (III) локализован на С-конце компонента (II). Вне зависимости от того, связан ли компонент (III) с Ν-концом компонента (I) (с помощью его С-конца), или с С-концом компонента (II) (с помощью его Ν-конца), сочетание может быть непосредственным или косвенным через линкерную последовательность. К линкерной последовательности применимо все описанное выше для линкера, соединяющего компонент (I) и компонент (II). Как правило, компонент (III) содержит по меньшей мере 4 аминокислотных остатка, предпочтительно по меньшей мере 10 дополнительных аминокислотных остатков, более предпочтительно по меньшей мере 20 или по меньшей мере 30 остатков. С точки зрения функции компонент (III) применяют для дополнительного повышения стабильности предлагаемого в изобретении пептида. Считается, что компонент (III) не должен влиять на биологическую функцию предлагаемого в изобретении пептида, которая примерно сопоставима с биологической активностью ОЬР-1(7-37).
Предпочтительно компонент (III) предлагаемого в изобретении пептида содержит по меньшей мере 4, предпочтительно по меньшей мере 10, более предпочтительно по меньшей мере 20 дополнительных аминокислотных остатков Ν-концевой последовательности изоформы ОЬР-2 из организма любого вида млекопитающих (другой встречающийся в естественных условиях вариант ОЬР-2 млекопитающих), например мышиной или человеческой изоформ, последовательности которых представлены в 8ЕО ГО N0:4 и 5. ОЬР-2 присутствует в проглюкагоне и также принимает участие в метаболизме углеводов. Также как и биологически активная последовательность, входящая в состав компонента (I) (пептид ОЬР-1), компонент (III) может также содержать аналоги, варианты или производные встречающихся в естественных условиях форм ОЬР-2. В альтернативном варианте компонент (III) может содержать также по меньшей мере 4, предпочтительно по меньшей мере 10, более предпочтительно по меньшей мере 20 дополнительных аминокислотных остатков Ν-концевой последовательности ОЬР-1(7-37), в том числе соответственно все изоформы, характерные для млекопитающих, или, как указано в настоящем описании, все их функциональные варианты, аналоги или производные. Другими словами, компонент (III) может содержать любую форму пептида ОЬР-1 или модифицированного пептида ОЬР-1, которая представлена в настоящем описании в качестве приемлемой для компонента (I) предлагаемого в изобретении пептида. В другом альтернативном варианте компонент (III) может содержать также химерные формы ОЬР-1(7-37) и ОЬР-2. Химерные формы можно получать путем сочетания ОЬР-1(7-37) и ОЬР-2 (или фрагментов, аналогов, вариантов или производных их обоих) друг с другом и путем последующей интродукции указанной химерной формы в качестве компонента (III) в предлагаемый в изобретении пептид. Предпочтительно химерная форма состоит из части последовательности ОЬР-1(7-37) и части последовательности ОЬР2, связанных вместе. Например, химерная форма может включать от 5 до 30 Ν-концевых аминокислот ОЬР-1 и от 5 до 30 С-концевых аминокислот ОЬР-2 или наоборот, например, аминокислоты от 7 или 8 до 22, 23, 24, 25, 26, 27 или 28 ОЬР-1(7-37) и аминокислотную последовательность от положения 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 до, например, С-конца ОЬР-2.
Если модификации встречающихся в естественных условиях форм ОЬР-2 или ОЬР-1(7-37) соответственно применяют в качестве компонента (III), то компонент (III) предпочтительно содержит последовательность, представленную в 8ЕО ГО Ν0:4 или 5, или в 8ЕО ГО Ν0:1 соответственно, или последовательность, которая по меньшей мере на 80% гомологичная последовательности, представленной в 8ЕО ГО Ν0:4 или 5 либо в 8ЕО ГО Ν0:1. Согласно настоящему изобретению производные этих предпочтительных последовательностей, например, полученные с помощью модификаций боковой цепи или модификаций пептидного каркаса и т.д. (обозначенные в контексте настоящего описания понятием «производные»), также можно применять в качестве компонента (III).
Согласно другому варианту осуществления изобретения компонент (III) может содержать несколько описанных выше последовательностей. Например, компонент (III) может содержать по меньшей мере 2, предпочтительно 2, 3 или 4 копии ОЬР-1(7-37) и/или ОЬР-2 или по меньшей мере 2 копии последовательностей, которые по меньшей мере на 80% гомологичны последовательности, представленной в 8ЕО ГО Ν0:1, 4 или 5. Кроме того, компонент (III) может содержать более одной копии описанной выше химерной версии ОЬР-1(7-37) или ОЬР-2, например, формирующие в конечной счете комбинацию химерной(ых) версии(ий) в сочетании с ОЬР-1(7-37) и/или ОЬР-2, или ее модификации, имеющей по меньшей мере 80%-ную гомологию последовательности. Под объем настоящего изобретения подпадает также применение двух или большего количества, предпочтительно двух компонентов (III), которые могут, например, быть (1) связаны своим Ν-концом с С-концом компонента (II) и (2) связаны своим С-концом с Ν-концом компонента (I) через линкер или непосредственно. Если применяют два компонента (III), то они могут быть одинаковыми или различными.
Таким образом, наиболее предпочтительными являются предлагаемые в изобретении слитые пептиды, которые содержат три компонента (I), (II) и (III). Четыре конкретных варианта, содержащих все эти компоненты, выбирают из группы, включающей: 8ЕО ГО Ν0:6 (Ν-ОЬР- 1(7-37)-[Р2(мышиный)-ВР
- 5 013796
СЬР-1(7-37)-С, обозначенный также в контексте настоящего описания как мышиный СМ1), 8ЕС ГО N0: 7 Ш-СЬР-1(7-37)-1Р2(мышиный)-КВ-СЬР2-С, обозначенный также в контексте настоящего описания как мышиный СМ2), 8Е0 ГО N0:10 (Ы-СЬР-1 (7-37)-1Р2(человеческий)-ВВ-СЬР-1(7-37)-С, обозначенный также в контексте настоящего описания как человеческий СМ1) и 8Е0 ГО N0:11 (№СЬР-1(7-37)1Р2(человеческий)-КВ-СЬР-2-С, обозначенный также в контексте настоящего описания как человеческий СМ2) или последовательность, которая по меньшей мере на 80% гомологична последовательности, представленной в 8Е0 ГО N0:6, 7, 10 или 11, или ее производное. Все последовательности 6, 7, 10 и 11 содержат ВВ-линкер (два остатка аргинина) на С-конце 1Р2 (компонент (II)), который в альтернативном варианте может отсутствовать. Компонент (I) в каждом из указанных вариантов, представленных в 8ЕС ГО N0:6, 7, 10 или 11, обозначает СЬР-1(7-37), а компонент (III) (в каждом из указанных вариантов связанный с С-концом компонента (II)) представляет собой либо СЬР-1(7-37), либо СЬР-2.
Предлагаемые в изобретении пептиды могут находиться в различных модифицированных формах. Эти модифицированные формы более подробно описаны ниже.
Понятие «соли» в контексте настоящего описания относится как к солям карбоксильных групп, так и к кислотно-аддитивным солям аминогрупп описанных выше слитых пептидов или их аналогов, фрагментов, производных или вариантов. Соли карбоксильной группы можно получать с помощью методов, хорошо известных в данной области, и они представляют собой неорганические соли, например соли натрия, кальция, аммония, железа или цинка и т. п., и соли с органическими основаниями, образованные, например, с аминами, такими как этаноламин, аргинин или лизин, пиперидин, прокаин и т.п. Кислотноаддитивные соли представляют собой, например, соли с минеральными кислотами, такими, например, как соляная кислота или серная кислота, и соли с органическими кислотами, такими, например, как уксусная кислота или щавелевая кислота. Естественно, любые указанные соли должны сохранять соответствующую биологическую активность предлагаемых в изобретении пептидов, т.е. способность снижать скорость проникновения питательных веществ в кровоток. Как будет описано ниже, пептиды в форме солей могут входить в состав фармацевтической композиции.
Понятие «фрагмент» слитого пептида, предлагаемого в настоящем изобретении, относится к любой субпопуляции молекул, т.е. укороченному пептиду, который сохраняет требуемую биологическую активность. Фрагменты легко можно получать путем удаления аминокислот из любого конца молекулы и осуществляя оценку образовавшейся молекулы в отношении ее свойств в качестве агента внутренней секреции. Протеазы, обладающие способностью удалять одномоментно одну аминокислоту или с N конца и/или с С-конца полипептида, известны в данной области и поэтому определение фрагментов, которые сохраняют требуемую биологическую активность, включает лишь осуществление общепринятых экспериментов. И, наконец, фрагменты можно получать в результате делеций аминокислот на концах пептида и/или аминокислот, локализованных внутри пептидной последовательности.
Кроме того, предлагаемый в изобретении пептид, обладающий активностью в отношении диабета типа II, который представляет собой сам слитый пептид, его аналог или вариант, соль, функциональное производное и/или фрагмент, может содержать также дополнительные аминокислотные остатки, фланкирующие предлагаемый в изобретении пептид. В случае, когда образовавшаяся молекула сохраняет устойчивость к действию протеаз или стабильность и способность проявлять активность в качестве агента внутренней секреции, то с помощью общепринятых экспериментов можно определять оказывают ли фланкирующие остатки какое-либо действие на основные или новые характеристики корового пептида, например, в результате их воздействия на панкреатические клетки. Понятие «состоит практически из» касательно конкретной последовательности означает, что в ней могут присутствовать дополнительные фланкирующие остатки, которые не оказывают влияния на основные и новые характеристики конкретного предлагаемого в изобретении пептида. Это понятие не включает замены, делеции или добавления в конкретной последовательности.
Понятие «вариант» в контексте настоящего изобретения относится к молекуле, которая практически аналогична либо полному предлагаемому в изобретении пептиду, как он определен выше, либо его фрагменту. Варианты пептидов можно получать путем прямого химического синтеза варианта пептида с использованием методов, хорошо известных в данной области. Естественно, указанный вариант предлагаемого в изобретении пептида должен обладать аналогичной противодиабетической, например, инсулинстимулирующей активностью, что и соответствующий встречающийся в естественных условиях пептид СЬР-1.
В другом случае варианты аминокислотной последовательности пептидов, как они определены выше, можно получать путем мутаций в ДНК, которые кодируют синтезированные производные. Такие варианты представляют собой, например, варианты, полученные в результате делеций или инсерций или замен остатков в аминокислотной последовательности. Для получения конечной конструкции можно также использовать комбинацию делеций, инсерций и замен при условии, что конечная конструкция обладает требуемой активностью. Очевидно, что мутации, которые можно создавать в ДНК, кодирующей вариант пептида, не должны изменять рамку считывания и предпочтительно не должны создавать комплементарные области, которые могут приводить к образованию вторичной структуры мРНК.
Понятие «аналог» указанных выше пептидов согласно настоящему изобретению относится к не
- 6 013796 встречающейся в естественных условиях молекуле, которая практически аналогична либо полной молекуле, либо ее активному фрагменту. Такой аналог должен обладать такой же активностью, что и соответствующий встречающийся в естественных условиях пептид СБР-1.
Типы замен, которые можно осуществлять в предлагаемом в изобретении пептиде, согласно настоящему изобретению могут быть основаны на анализе частоты встречаемости аминокислотных замен в гомологичном белке/пептиде различных видов. На основе такого анализа можно определять консервативные замены, как изменения в пределах одной из следующих пяти групп:
I) небольшие алифатические неполярные или имеющие небольшую полярность остатки: А1а, 8ег, Тйг, Рго, О1у;
II) полярные отрицательно заряженные остатки и их амиды: Акр, Аки, С1и. С1п;
III) полярные положительно заряженные остатки: Ηίκ, Агд, Бук;
IV) крупные алифатические неполярные остатки: Ме1, Ьеи, Не, να1, Сук;
V) крупные ароматические остатки: Рйе, Тгу, Тгр.
В пределах вышеуказанных групп «высококонсервативными» считаются следующие замены: Акр/О1и; Ηίκ/Агд/Ьук; Рйе/Туг/Тгр; Ме1/Беи/Не^а1. К полуконсервативным заменам относятся замены между двумя указанными выше группами (Ί)-(Γν), которые ограничены надгруппой (А), содержащей указанные выше группы (I), (II) и (III), или надгруппой (Б), содержащей указанные выше группы (IV) и (V). Замены не ограничены генетически кодируемыми или даже встречающимися в естественных условиях аминокислотами.
В целом, аналоги или варианты предлагаемого в изобретении пептида могут содержать также аминокислотные замены, которые осуществляют, например, для улучшения стабильности (замена гидрофобных аминокислот на гидрофильные аминокислоты). В одном из вариантов осуществления изобретения варианты/аналоги пептида ОБР-1, предлагаемого в изобретении (входящие в компонент (I) и/или (III) предлагаемого в изобретении пептида) (модифицированного) пептида СБР-1 отличаются наличием одной или нескольких замен в положениях 7, 8, 11, 12, 16, 22, 23, 24, 25, 27, 30, 33, 34, 35, 36 или 37 пептида СБР-1. Например, следующее обозначение [Агд34-ОБР-1(7-37)] относится к аналогу ОБР-1, в котором встречающийся в естественных условиях лизин в положении 34 заменен на аргинин.
В частности, компонент (I) и/или (III) предлагаемого в изобретении пептида может содержать варианты и аналоги ОБР-1(7-35, -36 или -37), включая, например, (Ж9-6БР-1 (7-37), ϋ-Ο1η9-ΟΕΡ-1(7-37), ацетил-Буз9-ОБР-1(7-37), Тйг16-Еу818-ОБР-1(7-37) и Бу518-ОБР-1(7-37), Агд34-аЕР-1(7-37), Бу838-Агд26ОБР-1(7-38)-ОН, Буз36-Агё26-ОБР-1(7-36), Агё26,34-Буз38-ОЕР-1(7-38), Агё26,34-Еуз38-ОЕР-1(7-38), Агё26,34-Еуз38-ОЕР-1(7-38), Агё26,34-Бу838-ОБР1(7-38), Агё26,34-Буз38-ОБР-1(7-38), Агё26-Бу838-ОБР-1(7-38), Агё26-Буз38ОЬР-1(7-38), Агё26-Бу838-ОБР-1(7-38), Агд34-Ьуз38-ОЕР-1(7-38), А1а37-Ьуз38ОБР-1(7-38) и Бу837-ОБР-1(7-37).
В другом варианте осуществления изобретения предлагаемый в изобретении пептид содержит в качестве компонента (I) или (III) модифицированный пептид ОБР-1, который содержит аминокислотную последовательность следующей формулы II (8ЕО ГО N0:44):
Хаа7-Хаа8-(31и-С1уТЪг-Рйе-Т11г-8ег-А8р-Хаа16-8ег-Хаа18-Хаа19-Хаа20-О1и-Хаа22-Хаа23-А1а-Хаа25Хаа26-Хаа27-РЬе-11е-ХааЗо-Тгр-Беи-ХааЗЗ-Хаа34-Хаа35-Хаа36-Хаа37, где Хаа7 обозначает Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, 3-гидроксигистидин, гомогистидин, Ν-ацетилгистидин, а-фторметилгистидин, а-метилгистидин, 3-пиридилаланин, 2пиридилаланин или 4-пиридилаланин;
Хаа8 обозначает А1а, О1у, Vа1, Ьеи, Не, Бук, А1Ь, (1-аминоциклопропил)карбоновую кислоту, (1аминоциклобутил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклопентил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогексил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогептил)карбоновую кислоту или (1-аминоциклооктил)карбоновую кислоту, где О1у является наиболее предпочтительным значением;
Хаа16 обозначает Vа1 или Ьеи;
Хаа18 обозначает 8ег, Бук или Агд;
Хаа19 обозначает Туг или О1п;
Хаа20 обозначает Беи или Ме1;
Хаа22 обозначает О1у, О1и или А1Ь;
Хаа23 обозначает О1п, О1и, Бук или Агд;
Хаа25 обозначает А1а или Vа1;
Хаа26 обозначает Бук, О1и или Агд;
Хаа27 обозначает О1и или Беи;
- 7 013796
Хаа30 обозначает А1а, О1и или Агд;
Хаа33 обозначает Уа1 или Ьук;
Хаа34 обозначает Ьук, О1и, Акп или Агд;
Хаа35 обозначает О1у или А1Ь;
Хаа36 обозначает Агд, С1у или Ьук или амид или отсутствует;
Хаа37 обозначает С1у. А1а, С1и. Рго, Ьук, амид или отсутствует.
В другом варианте осуществления изобретения компонент (I) и/или (III) предлагаемого в изобретении пептида содержит модифицированный пептид ОЬР-1, который содержит аминокислотную последовательность следующей формулы III (8ЕО Ш N0:45):
Хаа7-Хаа8-О1и-С1у-ТЬг-Рйе-Т11г-8ег-А5р-Уа1-8егХаа8-Туг-Ьеи-О1и-Хаа22-Хаа23-А1а-А1а-Хаа26-О1и-РЬе-11е-Хаа30-Тгр-Ьеи-Уа1Хаа34-Хаа3 5-ХааЗ 6-ХааЗ 7 где Хаа7 обозначает Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, -гидроксигистидин, гомогистидин, Ν-ацетилгистидин, а-фторметилгистидин, а-метилгистидин, 3-пиридилаланин, 2пиридилаланил или 4-пиридилаланин;
Хаа8 обозначает А1а, О1у, Уа1, Ьеи, Не, Ьук, А1Ь, (1-аминоциклопропил)карбоновую кислоту, (1аминоциклобутил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклопентил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогексил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогептил)карбоновую кислоту или (1-аминоциклооктил)карбоновую кислоту;
Хаа18 обозначает 8ег, Ьук или Агд;
Хаа22 обозначает 01у, 01и или А1Ь;
Хаа23 обозначает О1п, О1и, Ьук или Агд;
Хаа26 обозначает Ьук, 01и или Агд;
Хаа30 обозначает А1а, 01и или Агд;
Хаа34 обозначает Ьук, 01и или Агд;
Хаа35 обозначает 01у или А1Ь;
Хаа36 обозначает Агд или Ьук, амид или отсутствует;
Хаа37 обозначает О1у, А1а, О1и или Ьук, амид или отсутствует.
В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения компонент (I) и/или (III) предлагаемого в изобретении пептида содержит (модифицированный) пептид ОЬР-1, который выбирают из ОЬР-1(7-35), ОЬР-1(7-36), ОЬР-1(7-36)-амида, ОЬР-1(7-37) или его варианта, аналога или производного. Предпочтительными являются также предлагаемые в изобретении пептиды, содержащие в их компонентах (I) и/или (III) модифицированный пептид ОЬР-1, который несет остаток А1Ь в положении 8 или аминокислотный остаток в положении 7 пептида ОЬР-1, который выбирают из группы, включающей Όгистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, гидроксигистидин, гомогистидин, Ν-ацетилгистидин, афторметилгистидин, а-метилгистидин, 3-пиридилаланин, 2-пиридилаланил или 4-пиридилаланин.
Примерами методов получения аминокислотных замен в белках, которые можно использовать для создания аналогов, предлагаемых для применения согласно настоящему изобретению, являются любые стадии методов, представленных в и.8. КЕ 33653; 4959314; 4588585 и 4737462, на имя Магк и др.; 5116943 на имя Ко1115 и др.; 4965195 на имя №ипеп и др.; и 5017691 на имя Ьее и др., и метод получения замещенных лизином белков, описанный в И8 4904584 (8йате и др.).
Предпочтительно вариант или аналог, как они определены выше, которые входят в состав компонента (I), (II) и/или (III), должны иметь коровую последовательность, такую же как «нативная» последовательность, например ОЬР-1(7-37) или ОЬР-2, или ее биологически активный фрагмент или любую изоформу ГР2, аминокислотная последовательность которой по меньшей мере на 70% идентична нативной аминокислотной последовательности и сохраняет присущую ей биологическую активность. Более предпочтительно такая последовательность по меньшей мере на 80% идентична, по меньшей мере на 90% идентична или наиболее предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична нативной последовательности. Если говорят, что последовательность конкретного пептида характеризуется конкретным процентом идентичности относительно полипептиду определенной длины, с которым проводят сравнение, то процент идентичности оценивают относительно пептида, с которым проводят сравнение. Так, пептид, идентичный на 50% полипептиду, с которым проводят сравнение, который состоит из 100 аминокислот, представляет собой состоящий из 50 аминокислот полипептид, который полностью идентичен состоящей из 50 аминокислот области полипептида, с которым проводят сравнение. Он может представлять собой также состоящий из 100 аминокислот полипептид, который на 50% идентичен полипептиду, с которым проводят сравнение, по всей его длине. Естественно, другие полипептиды должны удовлетворять таким же критериям. Понятие «идентичность последовательности» в контексте настоящего описания означает, что последовательности сравнивают следующим образом. Осуществляют сравнительный анализ первичной структуры последовательностей с помощью версии 9 группы компьютерной генетики (Оепейе Сошрибпд Огоир'к) программы ОАР (глобальная программа сравнительного анализа первичной структуры), используя по умолчания матрицу (ВЬ08ИМ62) (значения от -4 до +11), принимая штраф за
- 8 013796 открытие бреши -12 (за первый нуль в бреши) и штраф за удлинение бреши -4 (за каждый последующий нуль в бреши). После сравнительного анализа первичной структуры рассчитывают процент идентичности, выражая количество совпадений в виде процента от количества аминокислот в заявляемой последовательности.
Под объем настоящего изобретения подпадают также производные слитого пептида или его аналога, фрагмента или варианта. Считается, что понятие «производное» предлагаемого в изобретении пептида относится только к таким модифицированным пептидам, предлагаемым в изобретении, в которых отсутствует замена одной аминокислоты на другую среди двадцати встречающихся в естественных условиях аминокислот. Таким образом, генетически кодируемые аминокислоты можно модифицировать путем взаимодействия с органическим дериватизирующим агентом, который обладает способностью к взаимодействию с выбранными боковыми цепями амино- и карбоксигрупп концевых остатков (предпочтительно путем ковалентной модификации) или путем интродукции не встречающихся в естественных условиях аминокислот (полученных путем химического синтеза, т.е. Ό-изомеров аминокислот, кодируемых генетическим кодом, А1Ь (а-аминоизомасляная кислота), ЛЬи (а-аминомасляная кислота), Т1е (третбут), η-аинаин, 3-аминометилбензойная кислота, антраниловая кислота), или встречающихся в естественных условиях аминокислот, которые не кодируются генетическим кодом, например гидроксипролин, γ-карбоксиглутамат, орнитин, фосфосерин, Ό-аланин и Ό-глутамин, или путем модификации каркаса пептида путем альтернативного устройства пептидного каркаса.
Описанные выше предпочтительные модификации аминокислот предлагаемого в изобретении пептида (в том числе, как указано выше, вариантов, аналогов или фрагментов слитого пептида) могут затрагивать любой сайт (любую аминокислоту) предлагаемого в изобретении пептида, например, расположенный в компоненте (I), (II) и/или (III).
Цистеинильные остатки, если присутствуют в любой форме предлагаемого в изобретении пептида, например, в аналоге предлагаемого в изобретении пептида, как правило, вступают во взаимодействие с альфа-галоацетатами (и соответствующими аминами), такими как хлоруксусная кислота или хлорацетамид, с образованием карбоксиметильных или карбоксиамидометильных производных. Цистеинильные остатки дериватизируют также путем взаимодействия с бромтрифторацетоном, альфа-бром-бета-(5имидазолил)пропионовой кислотой, хлорацетилфосфатом, Ν-алкилмалеимидами, 3-нитро-2пиридилдисульфидом, метил-2-пиридилдисульфидом, η-хлорбензоатом ртути, 2-хлор-4-нитрофенолом ртути или хлор-7-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом.
Гистидильные остатки предлагаемого в изобретении пептида можно дериватизировать путем взаимодействия с диэтилпрокарбонатом при рН 5,5-7,0, поскольку этот агент относительно специфичен в отношении гистидильной боковой цепи. Можно применять также парабромфенацилбромид; реакцию предпочтительно осуществляют в 0,1М какодилате натрия при рН 6,0. В частности, Ν-концевой остаток гистидина (НЦ7)ОЬР-1(7-37), который входит в компонент (I) и/или (III) предлагаемого в изобретении пептида, является очень важным для инсулинотропной активности пептидов ОЬР-1, как установлено 8ιιζι.ι1<ί с соавторами (Ь|аЬе1е5 Век.; С11шса1 Ртасйсе 5 (приложение 1), 1988, с. 30). Таким образом, предлагаемый в изобретении пептид можно модифицировать на НЦ7 ОЬР-1, который является частью его компонента (I) и/или (III), с помощью алкильных или ацильных (С1-С6)групп или путем замены НЦ функционально эквивалентными кольцевыми С5-С6-структурами. Предпочтительной модификацией является интродукция гидрофобного фрагмента на аминоконец НЬ7 или в его гистидильную боковую цепь.
Лизинильные и аминоконцевые остатки предлагаемого в изобретении пептида можно, например, подвергать взаимодействию с янтарным или другими ангидридами карбоновых кислот. Дериватизация с помощью этих агентов оказывает такое действие, как реверсия заряда лизинильных остатков. С помощью модификации ацилом (С12-С18) эпсилон-аминогруппы остатка(ов) лизина в предлагаемом в изобретении пептиде его время полужизни в кровотоке увеличивается. Аргинильные остатки можно, например, модифицировать путем взаимодействия с одним или несколькими общепринятыми реагентами, в том числе фенилглиоксалом; и нингидрином. Для дериватизации аргининовых остатков требуется осуществление реакции в щелочных условиях из-за высокого значения рКа гуанидиновой функциональной группы. Кроме того, эти реагенты можно подвергать взаимодействию с группами лизина, а также эпсилонаминогруппы аргинина.
Сама по себе специфическая модификация тирозильных остатков хорошо изучена. Для получения О-ацетилтирозильных видов и е-нитропроизводных предпочтительно можно применять Νацетилимидазол и тетранитрометан соответственно.
Карбоксильные боковые группы (аспартил или глутамил) можно избирательно модифицировать путем взаимодействия с карбодиимидами (Κ/Ν-^Ν-Κ.1), такими как 1-циклогексил-3-[2-морфолинил-(4этил)]карбодиимид или 1-этил-3-(4-азониа-4,4-диметилпентил)карбодиимид.
Кроме того, аспартильный и глутамильный остатки можно превращать в аспарагинильный и глутаминильный остатки путем взаимодействия с ионами аммония.
Глутаминильный и аспарагинильный остатки можно деамидировать с образованием соответствующих глутамильных и аспартильных остатков. В альтернативном варианте эти остатки можно деамидировать в слабо кислых условиях. Любая форма этих остатков подпадает под объем настоящего изобрете
- 9 013796 ния. У деамидированных предлагаемых в изобретении пептидов можно изменять чувствительность к протеолитическому расщеплению протеазами или пептидазами, исходя из предположения, что деамидирование может иметь важное физиологическое значение при непосредственном протеолитическом расщеплении предлагаемого в изобретении пептида. Следует отметить, что полученные в результате биосинтеза предлагаемые в изобретении пептиды могут расщепляться при определенных условиях хранения, что приводит к деамидированию в одном из нескольких положений в предлагаемом в изобретении пептиде. Остаток метионина в предлагаемых в изобретении пептидах может обладать чувствительностью к окислению, прежде всего до образования сульфоксида. В качестве других указанных выше производных можно использовать и дезамидированные предлагаемые в изобретении пептиды и/или сульфоксиды предлагаемых в изобретении пептидов, которые обладают полной биологической активностью.
Другими приемлемыми реагентами для дериватизации содержащих альфа-аминокислоты остатков являются сложные имидоэфиры, такие как метилпиколинимидат; пиридоксалфосфата; пиридоксал; хлорборогидрид; тринитробензолсульфоновая кислота; О-метилизомочевина; 2,4-пентиндион; и катализируемая трансаминазой реакция с глиоксилатом.
Концевые аминокислотные остатки предлагаемого в изобретении пептида с карбокси-(С-конец) и амино-(П-конец) группами (а также карбокси- или амидные группы боковых цепей аминокислот, см. выше) могут присутствовать в защищенной форме (например С-конец защищен амидной группой) с помощью амино- или карбоксильных защитных групп и/или в незащищенной форме. Кроме того, можно применять кислотно-аддитивные соли предлагаемого в изобретении пептида. Обычными кислотноаддитивными солями являются соли галогенводородных кислот, т.е. НВг, ΗΙ или более предпочтительно НС1.
ПЭГилирование карбоксильных групп концевых или боковых цепей или эпсилон-аминогруппы лизина в предлагаемом в изобретении пептиде придает устойчивость к окислению и также подпадает под объем настоящего изобретения.
Другие модификации, приводящие к получению производных предлагаемых в изобретении пептидов, затрагивают углеводы и/или липиды, которые могут быть ковалентно сшиты с предлагаемым в изобретении пептидом. Предпочтительно сшивать липиды и/или углеводы с серином, треонином, аспарагином, глутамином или тирозином или глутаматом или аспартатом через их реактивные фрагменты боковой цепи. В альтернативном варианте углеводы и/или липиды можно связывать также с концевыми фрагментами предлагаемого в изобретении пептида. Кроме того, предлагаемый в изобретении пептид можно сшивать с отличным по функциональной активности пептидным или белковым фрагментом, который может также повышать стабильность предлагаемого в изобретении пептида и/или может служить для улучшения транспортных свойств предлагаемого в изобретении пептида в общей воде организма, прежде всего в крови. Приемлемые пептиды или белки можно выбирать, например, из альбумина, трансферрина и т.д., которые непосредственно сшивают (в качестве компонента IV) с предлагаемым в изобретении пептидом или сшивают через пептидную или органическую линкерную последовательность. Предпочтительно эти пептиды или белки связывают с одним из концов предлагаемого в изобретении пептида.
Для решения проблемы, связанной с расщеплением предлагаемого в изобретении пептида, следующим вариантом осуществления настоящего изобретения является ретроинвертированный изомер предлагаемого в изобретении пептида, состоящий из Ό-аминокислот, или по меньшей мере частично состоящий из Ό-аминокислот. Понятие «ретро-инвертированный изомер» относится к изомеру линейного пептида, в котором направление последовательности является обратным, и хиральность каждого аминокислотного остатка является инвертированной (см., например, 1атс5оп и др., Ыа1иге, 368, 1994, с. 744-746; Вгабу и др., №1Шге. 368, 1994, с. 692-693). Касательно родительского пептида ретроинвертированной пептид собирают, используя обратный порядок аминокислот, как правило, защищенных с помощью Р-тос производных аминокислот. Как правило, неочищенные пептиды можно очищать с помощью ЖХВР с обращенной фазой.
Другие модификации, которые можно интродуцировать в предлагаемые в изобретении пептиды, представляют собой модификации пептидного каркаса. Предпочтительно модифицированные предлагаемые в изобретении пептиды представляют собой каркасные миметики. Их каркас отличается от встречающегося в естественных условиях каркаса, в то время как структуры боковых цепей идентичны структурам предлагаемых в изобретении пептидов, их фрагментов, вариантов, производных или аналогов. В целом, каркасные миметики несут модификацию одной или нескольких групп каркасной цепи (ΝΗ, СН, СО) либо в результате замены (предпочтительно) или в результате инсерции. Замены представляют собой, например, (I) -О-, -8- или -СН2- вместо -ΝΗ-; (II) -Ν-, С-алкил- или -ВН- вместо -СНВ- и (III) -С8-, -СН2-, -8Оп-, -Р=О(ОН)- или -В(ОН)- вместо -СО-. Пептидный миметик предлагаемого в изобретении пептида может представлять собой комбинацию каждой из указанных модификаций. В частности, можно объединять модификации каждой из групп I, II и III. В пептидном миметике можно модифицировать каждую группу каркасной цепи или в альтернативном варианте только некоторое количество групп цепи можно заменять на не встречающуюся в естественных условиях группу. Предпочтительно все группы каркасной цепи предлагаемого в изобретении пептида, такие как -ΝΗ-, -СНВ- или СО, заменяют
- 10 013796 на другую не встречающуюся в естественных условиях группу. В случае, когда амидную связь (-ΝΗ-СО-) каркаса предлагаемого в изобретении пептида заменяют (во всей молекуле или по меньшей мере в одном положении), предпочтительные для замены группы представляют собой биостерические, например, ретроинвертированные амидные связи (-СО-ΝΗ-), гидроксилэтилен (-СН(ОН)-СН2-), алкен (СН2=СН-), карба (СН2-СН2-) и/или -Р=О(ОН)-СН2-. В альтернативном варианте удлинение цепи каркаса путем встраивания можно осуществлять в каркасном миметике предлагаемого в изобретении пептида, например, с помощью групп, фланкирующих С-альфа атом. На любой стороне С-альфа атома можно встраивать, например, -О-, -8-, -СН-, -ΝΗ-.
Особенно предпочтительной является олигокарбаматная структура пептидного каркаса предлагаемых в изобретении пептидов. Амидную связь заменяют на карбаматную группу. Мономерные Νзащищенные аминоалкилкарбонаты можно получать на основе соответствующих аминокислот или аминоспиртов. Их превращают в активные сложные эфиры, например, сложный η-нитрофениловый эфир, с помощью Р-шое-группы или фоточувствительной нитроатрилоксикарбонильной группы путем твердофазного синтеза.
Предлагаемые в изобретении пептиды защищают от протеолитического расщепления согласно указанному выше методу. Прежде всего их защищают от действия дипептидиламинопептидазы-4 (ΌΡΡ-ΐν). Понятие «защищенный от действия ΌΡΡΗν» в контексте настоящего описания относится к пептиду по п.1 формулы изобретения. Предлагаемые в изобретении пептиды, а также их производные, аналоги, фрагменты и варианты, несущие ΟΕΡ-1(7-35, -36 или -37) в качестве части компонента (I) и/или (III) предлагаемого в изобретении пептида, обладают устойчивостью к присутствующей в плазме пептидазе (ΟΡΡΗν).
Устойчивость пептида к расщеплению дипептидиламинопептидазой IV определяют, например, с помощью изложенного далее анализа расщепления.
Аликвоты пептидов инкубируют при 37°С с аликвотой очищенной дипептидиламинопептидазы IV в течение 4-22 ч в соответствующем буфере при рН 7-8 (буфер не содержит альбумин). Ферментативные реакции прекращают, добавляя трифторуксусную кислоту, и продукты расщепления пептида отделяют и оценивают с помощью ЖХВР или ЖХ-МС-анализа. Один из методов осуществления анализа заключается в осуществлении следующей процедуры: смеси наносят на колонку 2огЬах3008В-С18 (диаметр пор 30 нм, частицы размером 5 мкм) 150x2,1 мм, и элюируют при скорости потока 0,5 мл/мин линейным градиентом ацетонитрила в 0,1% трифторуксусной кислоте (градиент от 0 до 100% ацетонитрила в течение 30 мин). Пептиды и их продукты расщепления можно оценивать по их абсорбции при 214 нм (пептидные связи) или 280 нм (ароматические аминокислоты), и определять количественно путем интеграции площадей их пиков. Схему расщепления можно определять с помощью ЖХ-МС, при использовании которых можно определять МС-спектры отдельного пика. Процентное соотношение интактного/расщепленного соединения в данный момент времени используют для оценки стабильности пептидов в отношении расщепления ΌΡΡΗν.
Предлагаемый в изобретении пептид рассматривается как стабилизированный (обладающий повышенной стабильностью) в отношении расщепления ΌΡΡΗν, когда его стабильность в 10 раз выше, чем у ΟΕΡ-1(7-37), при выражении в процентах интактного соединения в данный момент времени. Таким образом, стабилизированный в отношении расщепления ΌΡΡΗν предлагаемый в изобретении пептид предпочтительно по меньшей мере в 10, более предпочтительно по меньшей мере в 20 раз более стабилен, чем ΟΕΡ-1(7-37) сам по себе. Стабильность можно оценивать с помощью любого метода, известного специалисту в данной области, например, добавляя ΌΡΡ-Γν в раствор подлежащего оценке пептида, и определяя расщепление пептида, например, во времени, например, спектроскопическим методом, анализом методом Вестерн-блоттинга, путем скрининга с использованием антител и т.д. Параллельно предлагаемый в изобретении пептид оценивают в качестве соединения, которое обладает действием ΟΕΡ-1(737), например, оценивая связывание с его нативным рецептором (ΟΕΡ-1-рецептор). Предпочтительно предлагаемый в изобретении пептид обладает аффинностью к связыванию с ΟΕΡ-1-рецептором, составляющему по меньшей мере 10%, предпочтительно по меньшей мере 50% от аффинности связывания встречающегося в естественных условиях пептида ΟΕΡ-1. Аффинность связывания можно определять с помощью любого пригодного метода, например, с помощью резонанса поверхностного плазмона и т.д. Кроме того, предпочтительно, если предлагаемый в изобретении пептид вызывает формирование внутриклеточного цАМФ путем связывания с внеклеточным рецептором, который передает сигнал в клетку.
Пептиды, предлагаемые в изобретении, можно получать синтетически с помощью методов твердофазного пептидного синтеза, аналогично тому, как получают амид ΟΕΡ-1(7-36) и ΟΕΡ-1(7-37) в данной области, и можно очищать после этого в лабораторных условиях, например, с использованием одной стадии очистки на ЖХВР-колонке с обращенной фазой или с помощью приемлемых хроматографических методов.
Однако предпочтительно создают клетки, либо микробные клетки, либо клетки животных, для производства предлагаемого в изобретении пептида. Предлагаемый в изобретении пептид можно выделять из клеток, в которых он экспрессируется, например, с помощью общепринятых методов разделения. Так, клетки можно выращивать в соответствующих условиях, например, с использованием подложки и пита
- 11 013796 тельных веществ, ίη νίίτο, и секретируемый белок, т.е. предлагаемый в изобретении пептид, выделять из внеклеточной среды. Созданные таким образом в клетках последовательности предпочтительно включают лидерные последовательности и последовательности сигнальных пептидов, которые обеспечивают определенную направленность секреции предлагаемого в изобретении пептида. Клетки предпочтительно экспрессируют протеазу, которая обладает способностью расщеплять лидерные и сигнальные последовательности, либо эндогенные, либо сконструированные генные последовательности. В альтернативном варианте сконструированные генные последовательности, кодирующие предлагаемый в изобретении пептид, не содержат указанные лидерные последовательности и последовательности сигнальных пептидов, в результате экспрессируемый внутри клетки предлагаемый в изобретении пептид не может секретироваться и его выделяют из клеток с помощью процессов, включающих лизис клеток. При использовании таких методов кодирующие последовательности могут включать способствующие очистке метки, позволяющие эффективно экстрагировать пептидный продукт из среды, эти метки можно отщеплять для высвобождения выделенного предлагаемого в изобретении пептида.
Изобретение относится также к нуклеиновой кислоте, которая кодирует предлагаемый в изобретении пептид, представляющий собой слитый пептид или его фрагмент, аналог или вариант. Под объем настоящего изобретения подпадает любая нуклеиновая кислота, кодирующая предлагаемые в изобретении пептиды. В результате вырожденности генетического кода предлагаемый в изобретении пептид могут кодировать несколько нуклеотидных последовательностей. Подпадающая под объем настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты может содержать нуклеиновую кислоту, кодирующую предлагаемый в изобретении пептид, и, кроме того, дополнительные (функционально активные) нуклеотидные последовательности. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанная молекула нуклеиновой кислоты может кодировать (а) полную аминокислотную последовательность СЬР-1 (СЬР-1(1-37)) или функционально активную последовательность СЬР-1(7-35, -36 или -37), (б) отщепляемую любой протеазой последовательность на Ν-конце последовательности СЬР-1, кодирующей последовательность, которая указана в (а), расположенную против хода транскрипции относительно последовательности, указанной в (б), которая может кодировать лидерную последовательность. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения расположенная против хода транскрипции относительно нуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность, которая указана в (б), в молекуле нуклеиновой кислоты может дополнительно присутствовать (в) последовательность, которая кодирует сигнальный пептид. В альтернативном варианте предлагаемая в изобретении молекула нуклеиновой кислоты может иметь последовательность (в), слитую против хода транскрипции с последовательностью, указанной в (а), без какой-либо находящейся между ними последовательности, кодирующей лидерную последовательность (б). Предпочтительно лидерная последовательность и последовательность сигнального пептида являются гетерологичными относительно препроглюкагона.
Изобретение относится также к вектору, содержащему предлагаемую в изобретении нуклеиновую кислоту (молекулу) и другие функционально активные компоненты для экспрессии предлагаемой в изобретении нуклеиновой кислоты (молекулы). Как правило, предлагаемую в изобретении нуклеиновую кислоту (молекулы) можно сливать с промоторной последовательностью и, наконец, объединять с другими регуляторными последовательностями, например с энхансерной последовательностью. Для репликации плазмида может содержать сайт инициации репликации. Для селекции клеток, трансфектированных предлагаемым в изобретении вектором, вектор можно снабжать одним или несколькими генами, обеспечивающими устойчивость к антибиотику(ам) (например, канамицину, ампициллину). Вектор может представлять собой плазмиду, которая содержит промотор бактериального происхождения и гены, обусловливающие устойчивость к антибиотикам, и исходный промотор и гены, обусловливающие устойчивость к антибиотикам, для репликации и экспрессии в клетках млекопитающих. Изобретение относится также к клетке-хозяину, содержащей экзогенно интродуцированную ДНК, предлагаемую в изобретении, которая обладает способностью к трансляции указанного белка-предшественника. Клетка-хозяин может представлять собой либо прокариотическую клетку-хозяина, либо эукариотическую клеткухозяина, например клетку млекопитающего.
Следующим объектом изобретения является способ лечения животного, предпочтительно человека, заключающийся в том, что вводят предлагаемый в изобретении пептид, который содержит компоненты (I) и (II) и необязательно компонент (III). Изобретение относится также к соответствующему применению указанных предлагаемых в изобретении пептидов для получения продукта, предназначенного для лечения или предупреждения заболевания или состояния, ассоциированного с метаболизмом глюкозы. Примерами связанных с глюкозой нарушений являются (но, не ограничиваясь ими): сахарный диабет типа I или типа II (ИНСД, инсулин-независимый (сахарный) диабет) или устойчивость к инсулину, нарушения или заболевания, связанные с весом тела, или связанные с ним состояния, где нарушения веса тела или связанные с ним состояния включают ожирение, состояния, связанные с избыточным весом, нарушение регуляции насыщения, пониженные уровни инсулина в плазме, повышенные уровни глюкозы в крови или пониженную массу панкреатических бета-клеток. Предложено предпочтительно применять предлагаемые в изобретении пептиды для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения диабета типа II (ИНСД). Следовательно, настоящее изобретение относится к применению
- 12 013796 предлагаемого в изобретении пептида, например, для снижения веса индивидуума, для снижения порога насыщения индивидуума, для послеобеденного повышения уровней инсулина в плазме у индивидуума, для снижения уровня глюкозы в крови натощак у индивидуума, для повышения массы панкреатических бета-клеток у индивидуума или для лечения диабета типа I или II у пациента.
Кроме того, с помощью предлагаемых в изобретении пептидов, т.е. слитых пептидов или их аналогов, фрагментов, вариантов или производных, можно лечить пациентов с другими заболеваниями или нарушениями. Предлагаемые в изобретении пептиды можно применять для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения нейродегенеративных нарушений и заболеваний или связанных с ними состояний и для лечения нарушений и заболеваний, ассоциированных с апоптозом. Применение предлагаемого в изобретении пептида для лечения указанных нарушений обусловлено следующими причинами: рецепторы СЬР-1, которые связаны с путем вторичного мессенджера циклического АМФ, экспрессируются в головном мозге грызунов и людей. Хемоархитектура распределения рецепторов в головном мозге коррелирует не только с имеющей решающее значение ролью СЬР-1 в регуляции потребления пищи и ответом на вызывающий отвращение (к пище) стресс. Установлено также, что связь СЬР-1 со своим рецептором СЬР-1 приводит к проявлению нейротропной активности и служит защитой от индуцируемого глутаматом апоптоза и окислительного повреждения культивируемых нейронов. Кроме того, установлено, что СЬР-1 модифицирует процессинг предшественника амилоидного β-белка в культурах клеток и в зависимости от дозы снижает уровни амилодного β-пептида в головном мозге ίη νίνο. Так, СЬР-1 известен также в качестве регулятора центральной нервной системы. Предлагаемые в изобретении пептиды, имитирующие биологическую активность физиологически активного СЬР-1, обладают терапевтической ценностью для лечения, например, болезни Альцгеймера (АБ) и других нейродегенеративных состояний, связанных с центральной и периферической нервной системой (например, амиотрофический боковой склероз (АЬ8), болезнь Александера, синдром Альперса (прогрессирующая полидистрофия мозга), атаксия-телеангиэктазия, болезнь Канавана, синдром Кокейна, болезнь Крейтцфельдта-Якоба, рассеянный склероз, болезнь Сандхоффа, болезнь Пика, атаксия спинного мозга, болезнь Шильдера и болезнь Паркинсона).
Кроме того, установлено, что физиологически активный СЬР-1 обладает антиапоптозным действием в отношении различных клеток, например, ценным действием СЬР-1 является возможность его применения для сохранения массы и функции свежевыделенных человеческих островковых или других типов клеток. В результате биологически активный предлагаемый в изобретении пептид можно применять для лечения нарушений, обусловленных апоптозом клеток или тканей.
Предлагаемый в изобретении пептид можно применять для приготовления композиции, которую вводят экзогенно и которая содержит выделенный предлагаемый в изобретении пептид. Полученную композицию можно применять также для лечения вышеуказанных нарушений. Указанные выше нарушения можно лечить также с помощью предлагаемых в изобретении клеток-хозяев, нуклеиновых кислот (молекул) или векторов или более предпочтительно предлагаемые в изобретении клетки-хозяева, нуклеиновые кислоты (молекулы) или векторы можно применять для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения указанных нарушений.
Приготовление форм, которые содержат в качестве действующего вещества последовательности предлагаемого в изобретении пептида, как правило, хорошо известно в данной области, например, описано в И8 4608251; 4601903; 4599231; 4599230; 4596792 и 4578770, которые все включены в настоящее описание в качестве ссылки. Как правило, такие формы приготавливают в виде предназначенных для инъекции или жидких растворов, или суспензий, которые предпочтительно содержат воду (водная форма) или могут быть эмульгированы. Понятие «водная форма» означает форму, содержащую по меньшей мере 50 мас.% воды. Аналогично этому понятие «водный раствор» означает раствор, содержащий по меньшей мере 50 мас.% воды, а понятие «водная суспензия» означает суспензию, содержащую по меньшей мере 50 мас.% воды.
Для внутривенной, кожной или подкожной инъекции или инъекции в область поражения действующее вещество должно находиться в форме приемлемого для парентерального введения водного раствора, который не содержит пирогенов и имеет приемлемое значение рН, изотоничность и стабильность. Жидкие фармацевтические композиции, как правило, включают жидкий наполнитель, такой как вода. Предпочтительно жидкий наполнитель может представлять собой физиологический соляной раствор, декстрозный, этанольный или другой раствор сахарида или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль или их комбинации. Дополнительными примерами являются другие изотоничные наполнители, такие как раствор Рингера для инъекций или лактированный раствор Рингера (Рингер-лактат) для инъекций.
Если изобретение относится к фармацевтическому препарату, который содержит водный раствор соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, и буфер, то указанное соединение присутствует в концентрации от 0,1 мг/мл или выше, и значение рН указанного препарата составляет от примерно 2,0 до примерно 10,0, предпочтительно от примерно 7,0 до примерно 8,5. Предпочтительно значение рН препарата находится в диапазоне по меньшей мере 1 единицы рН от изоэлектрической точки соединения,
- 13 013796 предлагаемого в настоящем изобретении, еще более предпочтительно значение рН препарата находится в диапазоне по меньшей мере 2 единицы рН от изоэлектрической точки соединения, предлагаемого в настоящем изобретении.
Можно приготавливать также твердые формы, пригодные для растворения или суспендирования в жидкости перед инъекцией. Фармацевтический препарат может представлять собой высушенную вымораживанием форму, в которую лечащий врач или пациент добавляет растворители и/или разбавители перед применением. Другими словами приготовленный препарат не требуется немедленно вводить индивидууму. Как правило, после приготовления ее упаковывают для хранения в замороженном состоянии или в виде высушенной формы для последующего восстановления с получением жидкой формы или другой формы, пригодной для введения индивидууму.
В другом варианте осуществления изобретения фармацевтический препарат представляет собой высушенный препарат (например, сушкой вымораживанием или распылительной сушкой), готовый к применению без какого-либо предварительного растворения. Под «высушенной формой» понимают высушенную фармацевтическую композицию или препарат, который сушат либо сушкой вымораживанием (т.е. лиофилизацией; см., например, А1Шатк и РоШ, 1. Рагеп1ега1 8с1. Тсе11по1. 38, 1984, с. 48-59), распылительной сушкой (см., Мак1егк, 1991 в: 8ргау-Эгутд НапбЬоок, 5-е изд.; изд-во Ьопдтап 8с1епбПс апб Тесйшса1, Еккех, и.К., с. 491-676; Вгоабйеаб и др., Эгид Эеуе1. 1пб. Рйагт. 18, 1992, с. 1169-1206; и Митеп1йа1ег и др., Рйагт. Кек. 11, 1994, с. 12-20) или воздушной сушкой (Сагрейег и Сго\\'е. СгуоЬю1оду 25, 1988, с. 459-470; и Кокег, Вюрйагт. 4, 1991, с. 47-53). Образование агрегатов полипептида в процессе хранения жидкой фармацевтической композиции оказывает отрицательной воздействие на биологическую активность полипептида, приводящее к потере терапевтической эффективности фармацевтической композиции. Кроме того, образование агрегатов может приводить к другим проблемам, таким как блокада трубок, мембран или насосов, когда содержащую полипептид фармацевтическую композицию вводят с помощью системы для инфузии.
В содержащем пептид фармацевтическом препарате, предлагаемом в настоящем изобретении, могут присутствовать другие ингредиенты. Такие дополнительные ингредиенты могут представлять собой смачивающие вещества, эмульгаторы, антиоксиданты, наполнители, рН-забуферивающие агенты (например, фосфатный или цитратный, или малеатный буферы), консерванты, поверхностно-активные вещества, стабилизаторы, модификаторы тоничности, хелатирующие агенты, ионы металлов, жирные носители, белки (например, человеческий сывороточный альбумин, желатин или белки) и/или цвиттерион (например, аминокислота, такая как бетаин, таурин, аргинин, глицин, лизин и гистидин).
Стабилизаторы, которые можно применять в предлагаемых в изобретении препаративных формах, предпочтительно следует выбирать из группы, включающей высокомолекулярные полимеры или низкомолекулярные соединения. В другом варианте осуществления изобретения стабилизатор выбирают из группы, включающей полиэтиленгликоль (например, ПЭГ 3350), поливиниловый спирт (ПВС), поливинилпирролидон, карбоксигидроксицеллюлозу или ее производные (например, НРС (гидроксипропилцеллюлоза), НРС-8Ь, НРС-Ь и НРМС (гидроксипропилметилцеллюлоза)), циклодестрины, серосодержащие субстанции, такие как монотиоглицерин, тиогликолевая кислота и 2-метилтиоэтанол, и различные соли (например, хлорид натрия). Композиции, содержащие каждый из указанных стабилизаторов индивидуально, представляют собой альтернативный вариант осуществления изобретения. Фармацевтические композиции могут также содержать дополнительные стабилизирующие агенты, которые еще более повышают стабильность терапевтически активного полипептида. Представляющими наибольший интерес в контексте настоящего изобретения стабилизаторами являются (но, не ограничиваясь ими) метионин и ЭДТК, защищающая полипептид от метионинового окисления, и неионогенное поверхностно-активное вещество, которое защищает полипептид от агрегации, ассоциированной с замораживанием-оттаиванием или механическим сдвигом.
Поверхностно-активные вещества, которые можно применять в предлагаемых в изобретении препаративных формах, предпочтительно можно выбирать из группы, включающей детергент, этоксилированное касторовое масло, полигликолизированные глицериды, ацетилированные моноглицериды, эфиры жирных кислот и сорбитана, блок-полимеры полиоксипропилена-полиоксиэтилена (например, полоксамеры, такие как Р1игоше Е68, полоксамер 188 и 407, Тритон Х-100), эфиры жирных кислот и полиоксиэтиленсорбината, звездообразный ПЭО (полиэтиленоксид), производные полиоксиэтилена и полиэтилена, такие как алкилированные и алкоксилированные производные (Твины, например, Твин-20, Твин-40, Твин-80, и Вгу-35), полиоксиэтиленгидроксистеарат, моноглицериды или их этоксилированные производные, диглицериды или их полиоксиэтиленовые производные, спирты, глицерин, лецитины и фосфолипиды (например, фосфатидилсерин, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозит, дифосфатидилглицерин и сфингомиелин), производные фосфолипидов (например, дипальмитоилфосфатидная кислота) и лизофосфолипидов (например, пальмитоиллизофосфатидил-Ь-серин и сложные 1ацил-кп-глицеро-3-фосфатные эфиры этаноламина, холина, серина или треонина) и алкильные, алкоксильные (сложные алкиловые эфиры), алококси- (простые алкиловые эфиры) производные лизофосфатидила и фосфатидилхолинов, например лауроиловые и миристоиловые производные лизофосфатидилхолина, дипальмитоилфосфатидилхолина, и модификаторы полярной головной группы, представляющие
- 14 013796 собой холины, этаноламины, фосфатидную кислоту, серины, треонины, глицерин, инозит, и положительно заряженные Э0ЭЛС. Ό0ΤΜΛ, ЭСР. ВКН0Р, лизофосфатидилсерин и лизофосфатидилтреонин, и глицерофосфолипиды (например, цефалины), глицерогликолипиды (например, галактопиранозид), сфингогликолипиды (например, церамиды, ганглиозиды), додецилфосфохолин, лизолецитин куриного яйца, производные фузидоновой кислоты (например, тауро-дигидрофузидат натрия и т.д.), жирные кислоты с длинной цепью и соли С6-С12кислот (например, олеиновой кислоты и каприловой кислоты), ацилкарнитины и их производные, Ν'Χ-ацилированные производные лизина, аргинина или гистидина, или производные с ацилированной боковой цепью лизина или аргинина, Ν-ацилированные производные дипептидов, содержащие любую комбинацию лизина, аргинина и нейтральных или кислотных аминокислот, Ν-ацилированное производное трипептида, содержащее любую комбинацию нейтральных аминокислот и двух заряженных аминокислот, Ό88 (докусат натрия, регистрационный номер СЛ8 [577-117], докусат кальция, регистрационный номер СЛ8 [128-49-4], докусат калия, регистрационный номер СЛ8 [7491-09-0]), ДСН (додецилсульфат натрия или лаурилсульфат натрия), каприлат натрия, холевую кислоту или ее производные, желчные кислоты и их соли и конъюгаты с глицином или таурином, урсодезоксихолевую кислоту, холат натрия, дезоксихолат натрия, таурохолат натрия, гликохолат натрия, Νгексадецил-^№диметил-3-аммонио-1-пропансульфонат, анионогенные (алкиларилсульфонаты) одновалентные поверхностно-активные вещества, цвиттерионные поверхностно-активные вещества (например, №алкил-^№диметиламмонио-1 -пропансульфонаты, 3 -холамидо -1 -пропилдиметиламмонио -1 -пропансульфонат), катионогенные поверхностно-активные вещества (четвертичные аммониевые основания) (например, цетилтриметиламмонийбромид, цетилпиридинийхлорид), неионогенные поверхностноактивные вещества (например, додецил-Э-глюкопиранозид), полоксамины (например, тетроники (Тейошс'к)), которые представляют собой тетрафункциональные блок-сополимеры, полученные в результате последовательного добавления пропиленоксида и этиленоксида к этилендиамину, или поверхностно-активное вещество можно выбирать из группы, включающей имидазолиновые производные или их смеси. Композиции, содержащие каждое из указанных конкретных поверхностно-активных веществ индивидуально, представляют собой альтернативный вариант осуществления изобретения. Применение поверхностно-активного вещества в фармацевтических композициях хорошо известно специалистам в данной области. Для удобства в качестве ссылки представлен справочник РепйпдЮп: Тйе 8с1епсе апб Ргасбсе о£ Рйагтасу, 19-е изд., 1995.
Фарацевтически приемлемые консерванты предпочтительно можно выбирать из группы, включающей фенол, о-крезол, т-крезол, η-крезол, метил-п-гидроксибензоат, пропил-п-гидроксибензоат, 2феноксиэтанол, бутил-п-гидроксибензоат, 2-фенилэтанол, бензиловый спирт, этанол, хлорбутанол и тиомеросал, бронопол, бензойную кислоту, имидмочевину, хлоргекседин, дигидроацетат натрия, хлоркрезол, этил-п-гидроксибензоат, бензетонийхлорид, хлорфенесин (3-п-хлорфеноксипропан-1,2-диол) или их смеси.
Придающие изотоничность агенты предпочтительно можно выбирать из группы, включающей соль (например, хлорид натрия), сахар или сахарный спирт, аминокислоту (например, Ь-глицин, Ь-гистидин, аргинин, лизин, изолейцин, аспарагиновая кислота, триптофан, треонин), альдит (например, глицерин, 1,2-пропандиол (пропиленгликоль), 1,3-пропандиол, 1,3-бутандиол), полиэтиленгликоль (например, ПЭГ 400) или их смеси. Можно применять любой сахар, такой как моно-, ди- или полисахариды, или водорастворимые глюканы, включая, например, фруктозу, глюкозу, маннозу, сорбозу, ксилозу, мальтозу, лактозу, сахарозу, трегалозу, декстран, пуллулан, декстрин, циклодекстрин, растворимый крахмал, оксиэтилированный крахмал и Να-карбоксиметилцеллюлозу. В одном из вариантов осуществления изобретения добавка в виде сахара представляет собой сахарозу. Понятие «сахарный спирт» относится к С4С8углеводороду, содержащему по меньшей мере одну -ОН- группу, и включает, например, маннит, сорбит, инозит, галацитит, дульцит, ксилит и арабит. В одном из вариантов осуществления изобретения добавка в виде сахарного спирта представляет собой маннит. Указанные выше сахара или сахарные спирты можно применять индивидуально или в сочетании. Не существует точного предела применяемого количества, если сахар или сахарный спирт растворим в жидком препарате и не оказывает отрицательного действия на стабилизирующую активность, которую достигают с помощью способов, предлагаемых в изобретении.
Хелатирующие агенты предпочтительно можно выбирать из солей этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТК), лимонной кислоты и аспарагиновой кислоты и их смесей.
Буферы предпочтительно выбирают из группы, включающей ацетат натрия, карбонат натрия, цитрат, глицилглицин, гистидин, глицин, лизин, аргинин, первичный кислый фосфат натрия, динатрийфосфат, фосфат натрия и трис(гидроксиметил)аминометан, гепес (Нерек), бицин, трицин, яблочную кислоту, сукцинат, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, аспарагиновую кислоту или их смеси. Композиции, содержащие каждый из указанных конкретных буферов индивидуально, представляют собой альтернативный вариант осуществления изобретения.
Применение вышеуказанных добавок в фармацевтических композициях, содержащих предлагаемый в изобретении терапевтический пептид, хорошо известно специалисту в данной области, прежде всего касательно диапазона их концентраций. Для удобства в качестве ссылки представлен справочник
- 15 013796
ВеттдЮп: ТНе 8с1епсе апб Ргасбсе о£ РЬагтасу, 19-ое изд., 1995.
Препаративные формы, содержащие предлагаемый в изобретении пептид, можно вводить парентерально путем инъекции, например, подкожно, внутрикожно или внутримышечно. Композицию, предназначенную для парентерального введения предлагаемого в изобретении пептида, можно, например, приготавливать с помощью метода, описанного в \УО 03/002136.
Дополнительные препаративные формы, пригодные для других путей введения, представляют собой суппозитории и в некоторых случаях формы для орального, трансбуккального, подъязычного, внутрибрюшинного, внутривагинального, анального и внутричерепного введения. Для суппозиториев традиционные связующие вещества и носители могут представлять собой, например, полиалкиленгликоли или триглицериды; такие суппозитории можно приготавливать из смесей, содержащих действующее вещество в концентрации от 0,5 до 10%, предпочтительно 12%. В препаративные формы для орального введения входят такие, например, общепринятые эксципиенты, как имеющие чистоту, пригодную для фармацевтического применения, маннит, лактоза, крахмал, стеарат магния, сахарин натрия, целлюлозу, карбонат магния и т. п. Эти композиции имеют форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, препаративных форм с пролонгированным высвобождением или порошков и содержат 10-95% действующего вещества, предпочтительно 25-70%.
Как отмечалось выше, для контроля продолжительности действия можно применять дополнительные фармацевтические методики. Для создания препаратов с контролируемым высвобождением можно применять полимеры, предназначенные для образования комплекса или абсорбции пептида, предлагаемого в настоящем изобретении. Для осуществления контролируемого введения действующего вещества (пептида) можно выбирать соответствующие макромолекулы (например, сложные полиэфиры, полиминокислоты, поливинилпирролидон, сополимеры этилена и винилацетата, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу и сульфат протамина), применять соответствующую концентрацию макромолекул и методы включения. Такие сведения указаны в Веттфоп! РЬагтасеибса1 8с1епсе§ (см. выше). Другой возможный метод регулирования продолжительности действия с помощью препаратов с контролируемым высвобождением заключается в том, что включают пептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частицы полимерного материала, такого как сложные полиэфиры, полиаминокислоты, гидрогели, поли(молочная кислота) или сополимеры этилена и винилацетата.
Предлагаемые в изобретении пептиды могут иметь нейтральную форму или форму соли. Пептид, предлагаемый в настоящем изобретении, может быть в достаточной степени кислым или в достаточной степени щелочным для взаимодействия с любым(ой) из многочисленных органических или неорганических оснований и органических и неорганических кислот с образованием (аддитивной) соли, например, образованной со свободными аминогруппами пептида. Обычно применяемые для образования кислотноаддитивных солей кислоты представляют собой неорганические кислоты, такие как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, йодисто-водородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и т.п., и органические кислоты, такие как винная кислота, асп-толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, щавелевая кислота, миндальная кислота, п-бромфенилсульфоновая кислота, угольная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота. Примерами таких солей являются сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, фосфат, вторичный кислый фосфат, первичный кислый фосфат, метафосфат, пирофосфат, хлорид, бромид, йодид, ацетат, пропионат, деканоат, каприлат, акрилат, формиат, изобутират, капроат, гептаноат, пропиолат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, себацат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексин-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фталат, сульфонат, ксиленсульфонат, фенилацетат, фенилпропионат, фенилбутират, цитрат, лактат, гамма-гидроксибутират, гликолят, тартрат, метансульфонат, пропансульфонат. Соли, образованные со свободными карбоксильными группами, можно получать также из неорганических оснований, таких, например, как гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа(3), и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, прокаин и т. п. Кислотно-аддитивные соли, соли карбоксилатов, сложных (низш.)алкиловых эфиров и амидов предлагаемых в изобретении пептидов можно приготавливать согласно методам, описанным в АО 91/11457 (1991); ЕР 0733644 (1996) и И8 5512549 (1996).
Препараты, содержащие предлагаемые в изобретении пептидные последовательности, вводят путем, который соответствует дозе препарата, и в таком количестве, которое является терапевтически эффективным. Подлежащее введению количество зависит от индивидуума, подлежащего лечению, включая, например, серьезность заболевания пациента. Приемлемые диапазоны доз составляют, например, порядка нескольких сотен микрограммов действующего вещества на терапевтическую дозу, предпочтительно от примерно 0,1 до 2000 мкг (даже рассматривается применение больших количеств, составляющих 1-10 мг), например, от примерно 0,5 до 1000 мкг, предпочтительно от 1 до 500 мкг и особенно предпочтительно от примерно 10 до 100 мкг.
Препараты, содержащие предлагаемые в изобретении пептиды плюс, например, дополнительные эксципиенты, например глицин и маннит, или другие добавки, могут поступать в продажу в лиофилизированной форме в пузырьках. При этом прилагается входящий в комплект пузырек с разбавителем, что позволяет пациенту восстанавливать продукт с получением требуемой концентрации перед введением
- 16 013796 дозы. Предлагаемые в изобретении препараты могут также поступать в продажу в виде других хорошо известных приспособлений, таких как предварительно заполненные шприцы и т.д.
Ниже изобретение проиллюстрировано с помощью примеров.
Примеры
Пример 1.
Создание генетических конструкций.
Кодирующую последовательность кДНК СЬР-1(7-37) получали путем синтеза, включая в последовательность сайты НшсП и ЕсоК1, как показано на фиг. 1а. Отдельно синтезировали кДНК, проиллюстрированную на фиг. 1б, включая в кодирующие последовательности СЬР-1(7-37) 1Р2 и сайты рестрикции, распознаваемые 8Го1, ЕсоК! и ХЬа1, как проиллюстрировано на фиг. 1б. Для обеспечения пути секреции СЬР-1 использовали гетерологичную сигнальную последовательность стромелизина 3 (регистрационный номер ΝΜ_005940). Для этой цели кДНК, кодирующую сигнальную и лидерную последовательность стромелизина, амплифицировали с использованием ПЦР с обратной транскриптазой с человеческой РНК и применяли в сочетании с конструкцией, представленной на фиг. 1а или фиг. 1б, для создания конструкции, представленной на фиг. 1в и фиг. 1г соответственно.
Ншс11/ЕсоК1-фрагмент конструкции, представленной на фиг. 1а, клонировали в сайте 8Го1 последовательности, представленной на фиг. 1г, с получением конструкции, представленной на фиг. 1д. Аналогично этому ЕсоК1-фрагмент конструкции, представленной на фиг. 1г, клонировали в сайте ЕсоК! эукариотической экспрессионной плазмиды, получая конструкцию, представленную на фиг. 1е. Для создания конструкции, представленной на фиг. 1ж, Ншс11/ХЬа1-фрагмент конструкции, представленной на фиг. 1б, повторно клонировали в сайте 8!о1/ХЬа1 конструкции, представленной на фиг. 1г. На фиг. 1з представлена синтезированная последовательность с оптимизированным кодоном, которая кодирует лидерную и сигнальную последовательности стромелизина, со встроенной укороченной эндогенной интронной последовательностью, слитой с последовательностями, которые кодируют человеческий СЬР-1(7-37), 1Р2 и СЬР-2(1-35). Последовательность ДНК конструкции, представленной на фиг. 1з, показана в 8ЕЦ ΙΌ N0:16, а в 8Е0 ΙΌ N0:15 показана также последовательность транслированного пептида.
Синтезировали также последовательности, представленные на фиг. 1и и фиг. 1к. Их затем применяли для создания конструкции, представленной на фиг. 1л, путем клонирования №е1/Вк&НП-фрагмента конструкции, представленной на фиг. 1к, в линеаризованной с помощью №е1/ВккНП последовательности, представленной на фиг. 1з. Последовательность ДНК конструкции, представленной на фиг. 1л, показана в 8Е0 ΙΌ N0:14, а в 8Е0 ΙΌ N0:13 показана также последовательность транслированного пептида. Конструкцию, представленную на фиг. 1м, получали путем расщепления с помощью Вк&НП и повторного встраивания путем лигирования последовательности, представленной на фиг. 1з. Последовательность ДНК конструкции, представленной на фиг. 1м, показана в 8Е0 ΙΌ N0:18, а в 8Е0 ΙΌ N0:17 показана также последовательность транслированного пептида. Конструкцию, представленную на фиг. 1н, получали путем клонирования АГе1/Вк&Н11-фрагмента последовательности, представленной на фиг. 1и, в линеаризованной с помощью АГеЕВккНП последовательности, представленной на фиг. 1з. Последовательность ДНК конструкции, представленной на фиг. 1н, показана в 8Е0 ΙΌ N0:20, а в 8Е0 ΙΌ N0:19 показана также последовательность транслированного пептида.
Описанные выше конструкции специалист в данной области может получать с помощью общепринятых методов.
Пример 2.
Трансфекция, клональная селекция и экспрессия СЬР-1 в клетках млекопитающих.
Источник клеток: НЕК293 (линия клеток почки человеческого эмбриона, № АСС 305, Ό8ΜΖ коллекция клеточных культур, Германия), А!Т20 (линия клеток мышиного рака гипофиза ЬАГ1, № 87021902, Европейская коллекция клеточных культур, Великобритания), клетки линии ИТЕКТ-М8С, полученные от проф. Каккет, Университетский госпиталь Оденсе (Ишуегкйу Нокрйа1 оГ 0бепке), Дания.
Для трансфекции 106 клеток использовали 0,5-2 мкг плазмидной ДНК с различными конструкциями СЬР-1. Конструкции создавали с помощью пути, описанного в примере 1. НЕК293-клетки трансфектировали стандартным методом совместного осаждения фосфатом кальция, который описан в Сиггеи! РгоЮсо1к ίη Мо1еси1аг Вю1оду (АикиЬе1 и др., 1994ГГ, Нагуагб Мебюа1 8сйоо1, т.2., часть 9.1). А!Т20-клетки трансфектировали с использованием технологии ЕиСепе (фирма Косйе) согласно методу, описанному в Рго!осо1к ίη Мо1еси1аг Вю1оду (АикиЬе1 и др., 1994ГГ, Нагуагб Мебюа1 8сйоо1, т. 2, часть 9.4). Трансфекцию ЬТЕКТ-М8С-клеток осуществляли с помощью технологии М.1с1еоГес1ог (фирма Атаха), представляющей собой метод, не связанный с применением вирусов, который основан на сочетании электрических параметров и специфических для типа клеток растворов. С помощью устройства типа М.1с1еоГесЮг (программа С17) и М.1с1еоГесЮг-раствора УРЕ-1001 достигали эффективности трансфекции >60%. Через 48 ч после трансфекции осуществляли отбор клеточных клонов со стабильной интегрированной в хромосому ДНК, добавляя в культуральную среду агент для селекции бластицидин (2 мкг/мл). Через 12-15 дней стабильно трансфектированные клеточные клоны можно было выделять и размножать для изучения их характеристик.
Кратковременную экспрессию различных конструкций СЬР-1 оценивали в клетках линии 11ТЕКТ
- 17 013796
М8С и НЕК293. В то время как только незначительный уровень активного ОЬР-1 был обнаружен в мономерных конструкциях ОЬР-1 № 103 и № 317 (которые несли только одну копию ОЬР-1(7-37)), выраженное увеличение уровня экспрессии обнаружено в димерной конструкции ОЬР-1 № 217 (которая содержала ОЬР-1(7-37) в качестве компонента (I) и в качестве компонента (III)) как в ЙТЕКТ-М8С-, так и в НЕК293-клетках. Полученные результаты обобщены на фиг. 2. Удлинение конструкции ОЬР-1 № 159 (содержащей четыре копии Ш2 в качестве компонента (II)) не приводило к дополнительному заметному повышению (данные не показаны). После трансфекции клеток линии ЙТЕКТ-М8С различными конструкциями отбирали клоны, которые стабильно экспрессировали ОЬР-1. Уровни экспрессии представлены в табл. I.
Таблица I
Конструкция | Клеточный клон | Уровень активного СЬР/106 клеток/ч (пмоль) |
№ 103-6ЬР(7.з7) | 49ТМ113/13 | 0,4 |
№317-ΟΕΡ(7.37)ΪΡ2-1ί ак | 71ТМ169/1 | 0,3 |
№ 217-ОЬР(7-з7)1Р2-СЬР{7-37) | 79ТМ217/13 | 2,7 |
Пример 3.
Анализ методом Вестерн-блоттинга пептидов ОЬР-1, секретируемых из клеток млекопитающих.
Супернатанты клеточных культур секретирующих ОЬР-1 клеток разделяли с помощью электрофореза на ПААГ с использованием 10-20%-градиента ДСН (120 В, 90 мин) и переносили на мембрану из ПВДФ (поливинилендифторид) (мембрана [шшоЬПоп-Р. 0,45 мкм, МИИроге ШАН 00010) путем полусухого блоттинга (2,0 мА/см2, 60 мин). После фиксации метанолом и блокирования (3% мас./об. БСА, 0,1 об.% Твин-20 в ТВ8) осуществляли иммуноблоттинг мембраны с использованием 1 мкг/мл антитела к ОЬР-1 (ΗΥΒ 147-12, фирма АпйЬобукйор) при 4°С в течение ночи (о/п). После отмывки и инкубации с использованием 0,02 мкг/мл идентифицирующего антитела (антитело к мышиному ЦО, конъюгированное с НКР (переоксидаза из хрена), фирма Регкш Е1тег, РС 2855-1197) при комнатной температуре (КТ) в течение 4 ч, использовали хемилюминесцентное обнаружение для локализации белка.
Данные анализа методом Вестерн-блоттинга представлены на фиг. 3 (1: 100 нг синтетического ОЬР1(7-37), растворенного в супернатанте подвергнутых мнимой трансфекции клеток линии ЙТЕКТ-М8С, 2: супернатант клеток линии ЙТЕКТ-М8С (клон 79ТМ217/13), секретирующих димерный ОЬР-1 из конструкции № 217, 3: супернатант клеток линии А1Т20 (клон 81-А-217/3), секретирующих димерный ОЬР-1 из конструкции № 217; М: предварительно окрашенный белковый маркер [кДа]). Полученные результаты свидетельствуют о том, что предлагаемые в изобретении пептиды, которые содержат ОЬР-1(7-3 7) и С-концевой дополнительный фрагмент (2 и 3 на фиг. 3) секретируются из трансфектированных линий клеток и их можно выявлять с помощью антитела к ОЬР-1, которое связывается с расположенными внутри молекулы эпитопами ОЬР-1(7-37).
Пример 4.
Стабильность ш νίΙΐΌ в плазме пептидов ОЬР-1, секретируемых из человеческих клеток.
Клетки линии НЕК293 и ЙТЕКТ-М8С подвергали кратковременной трансфекции конструкциями, кодирующими гетерологичную сигнальную последовательность стромелизина, которую функционально связывали с вариантами ОЬР-1, кодирующими следующие пептиды:
1: ОЬР-1(7-37)
2: ОЬР-1 (7-3 7)-1Р2-удлиненный на 11 ак
3: ОЬР1(7-37)-1Р2-ОЬР1(7-37).
Супернатанты клеточных культур, содержащие пептиды ОЬР-1, секретируемые из клеток, или синтетический ОЬР-1(7-37) (фирма ВасЙет), инкубировали с человеческой обогащенной лимфоцитами плазмой, обладающей дипептидилпептидной активностью, при 37°С и 5% СО2 в течение 3 или 4 ч. Синтетический ОЬР-1(7-37) в супернатанте подвергнутых мнимой трансфекции клеток использовали в качестве позитивного контроля ЭРГА У-активности, которая, как установлено, ингибировалась добавлением ингибитора ЭРР-1У 1пЙ1Ы1ог (№ ЭРР4, фирма Вю1гепб). Содержание активного ОЬР оценивали с помощью ЕЫ8А для ОЬР-1 (активного) (№ ЕОЬР-35К, фирма Вю1гепб), используя антитело, которое связывается с Ν-концевым эпитопом ОЬР-1(7-37), идентифицирующим расщепленный ЭРР-РУ неактивный пептид ОЬР-1(9-37).
Полученные результаты представлены на фиг. 4 (НЕК293-клетки) и 5 (ЙТЕКТ-М8С-клетки). Обе линии клеток НЕК293 и ЙТЕКТ-М8С представляли собой эффективных хозяев для генных конструкций. Нумерация вариантов 1-3 при изложении результатов, полученных для трасфектированных клеток, такая же, как и в примере 3 (1: 100 нг синтетического ОЬР-1(7-37), растворенного в супернатанте подвергнутых мнимой трансфекции клеток линии ЙТЕКТ-М8С, 2: супернатант клеток линии ЙТЕКТ-М8С (клон 79ТМ217/13), секретирующих димерный ОЬР-1 из конструкции № 217, 3: супернатант клеток линии А1Т20 (клон 81-А-217/3), секретирующих димерный ОЬР-1 из конструкции № 217). В то время как кон
- 18 013796 струкция 1, которая продуцировала ОЬР-1 дикого типа, инактивировалась ИРРйУ аналогично синтетическому ОЬР-1, предлагаемые в изобретении удлиненные на С-конце формы ОЬР-1 (2 и 3 на фиг. 4, 3 на фиг. 5) оказались более устойчивыми к расщеплению и сохраняли по меньшей мере 40% активности. Удлиненные на С-конце пептиды ОЬР-1 обладали в значительной степени повышенной стабильностью в человеческой плазме ίη νίίτο. Пептид ОЬР-1 с димерной последовательностью (3) оказался практически полностью стабильным в присутствии ЬРРйУ, не подвергаясь расщеплению ίη νίίτο.
Пример 5.
Анализ пептидов ОЬР-1 методом Вестерн блоттинга.
Различные пептиды ОЬР-1 получали с помощью твердофазного синтеза (8уп) или методом рекомбинации в Е.сой (гес). Пептиды ОЬР-1 (31 нг 8ЕЦ ГО Ν0:1 и 10 нг каждой из 8ЕЦ ГО Ν0:6, 8ЕЦ ГО Ν0:7, 8ЕЦ ГО Ν0:8) разделяли с помощью электрофореза на ПААГ с использованием 10-20%-градиента ДСН (120 В, 90 мин) и переносили на мембрану из ПВДФ (мембрана IттοЬ^1οη-Р, 0,45 мкм, Мййроге ГОУН 00010) путем полусухого блоттинга (2,0 мА/см2, 60 мин). После фиксации метанолом и блокирования (3% мас./об. БСА, 0,1 об.% Твин-20 в ТВ8) осуществляли иммуноблоттинг мембраны с использованием 1 мкг/мл антитела к ОЬР-1 (ΗΥΒ 147-12, фирма ЛпиЬойуйюр) при 4°С в течение ночи (о/п). После отмывки и инкубации с использованием 0,02 мкг/мл идентифицирующего антитела (антитело к мышиному ^О, конъюгированное с НИР, фирма Регкт Е1тег, РС 2855-1197) при КТ в течение 4 ч, использовали хемилюминесцентное обнаружение для локализации белка. На фиг. 6 показаны результаты, полученные методом Вестерн-блоттинга, для указанных пептидов. Использовали следующие обозначения: 8ЕЦ ГО Ν0:1 (ГОИуп) соответствует
ОЬР-1(7-37), 31 ак, 3,3 кДа; ЗЕО Ю N0:8 (Ю8 вуп, СМ3) соответствует 0ЬР-1(737)-1Р2,46 ак, 5,1 кДа; 8Е0 ГО N0:7 (ГО7гес, СМ2) соответствует СЬР-1(7-37)1Р2-КК.-ОЬР2, 83 ак, 9,4 кДа; ЗЕЦ ГО N0:6 (ГОбвуп, СМ1) соответствует ОЬР1(7-37)-1Р2-К.К.-ОЬР1(7-37), 79 ак, 8,7 кДа.
Пример 6.
Стабильность ίη νίίτο в человеческой плазме пептидов ОЬР-1СМ.
Синтетические пептиды ОЬР-1 (8ЕЦ ГО N0:^,уιι. 8ЕЦ ГО Ν0:6^, 8ЕЦ ГО Ν0:7Γ(Χ, 8ЕЦ ГО Ν0:84.η) инкубировали в концентрации 20 нг/мл с человеческой плазмой при 37°С и 5% СО2 в течение 3 ч. Дипептидилпептидазную активность плазмы ингибировали с помощью ингибитора ИРРйУ (№ ИРР4, фирма Вю1гепй). Содержание активного ОЬР оценивали с помощью ЕЫ8А для ОЬР-1 (активного) (№ ЕОЬР35К, фирма ΒίοΙίΌπά).
В отличие от нативного ОЬР-1(7-37) (8ЕЦ ГО Ν0:1) предлагаемые в изобретении удлиненные на Сконце пептиды ОЬР-1, последовательность которых представлена в 8ЕЦ ГО Ν0:6, 8ЕЦ ГО Ν0:7 и 8ЕЦ ГО Ν0:8, обладали в значительной степени повышенной стабильностью в человеческой плазме ίη νίίτο (фиг. 7). В качестве контроля (справа) представлены результаты, полученные в экспериментах с добавлением ИРРйУ. В этих контрольных экспериментах активность ОЬР-1 полностью сохранялась.
Пример 7.
Биологические исследования ίη νίίτο.
Производство циклического АМФ.
Клетки линии ΚΙΝ-5Ε (опухолевые крысиные островковые клетки; ЕСАСС Νο. 95090402) выращивали в 24-луночных планшетах в течение 4 дней до достижения 70% конфлюэнтности. Клетки промывали дважды средой ИМЕМ (Е15-009, фирма РАА) перед добавлением 0,5 мл среды ИМЕМ (Е15-009, фирма РАА), дополненной 1% Н8А (человеческий сывороточный альбумин (фирма АуеШЬ)), 0,2мМ ГОМХ (858455, фирма 81дта) и тестируемых пептидов. После инкубации в течение 20 мин при 25°С клетки дважды промывали охлажденным на льду ЗФР. Клеточный цАМФ экстрагировали, добавляя 0,1н. НС1, содержащую 0,5% Тритон Х-100. Циклический АМФ оценивали количественно с помощью набора для иммуноферментного анализа (ИФА) цАМФ (низкое значение рН) (каталожный номер ИЕ0355, фирма Κ&Ό). Для стимуляции использовали 3х10-8М 8ЕЦ ГО Ν0:1, 8ЕЦ ГО Ν0:6^, 8ЕЦ ГО Ν0:6Γ(!(;, 8ЕЦ ГО Ν0:7Γ(Χ, 8ЕС ГО \0:8. .„.
Полученные результаты представлены на фиг. 8. 100% производство цАМФ соответствует основному уровню производства в отсутствии ОЬР-1. ОЬР-1 связывается со сшитыми с белком О рецепторами и стимулирует производство цАМФ. Все изученные молекулы повышали производство клеточного цАМФ.
Пример 8.
Биологический анализ ίη νίνο.
Страдающих диабетом типа II 11-недельных мышей (С57ВЬ/К8-Ьерт<1Ь/<1Ь, фирма Наг1аи) обрабатывали 5 мкг пептида путем подкожной инъекции дважды в день в 9 ч утра и 5 ч вечера (η=5 особей на группу). Оценивали уровень глюкозы в крови до (день 0) и после обработки пептидами ОЬРСМ (день 2, 4, 7, 10) в 10 утра после голодания в течение ночи. Данные представлены относительно уровней глюкозы в крови, которые были определены в день 0.
- 19 013796
Все предлагаемые в изобретении пептиды (8Е0 ГО N0:6 (синтетическая или рекомбинантная) и 8Е0 ГО N0:7 (синтетическая или рекомбинантная)) обладали антигипергликемическим действием. Самые хорошие результаты получали при использовании рекомбинантной последовательности 8Е0 ГО N0:6 (СМ1) и синтетической последовательности 8Е0 ГО N0:8 (СМ3). На фиг. 9 (у-ось) показано относительное воздействие обработки. Уровень глюкозы в крови в день 0 принимали за 1. У необработанных животных обнаружено постоянное увеличение уровня глюкозы в крови с течением времени, а у животных, обработанных предлагаемыми в изобретении пептидами, в целом (дгокко тобо) выявлено постоянное снижение уровней глюкозы в крови с течением времени.
Пример 9.
Оценка стабильности в плазме ίη убго пептидов СЬР1 (метод изучения кинетики).
Инкубировали с 10% человеческой плазмы в буфере для инкубации (50мМ триэтаноламин-НС1 (рН 7,8), 0,2% Н8Л) аликвоты по 1мкМ следующих пептидов: СМ3, замещенные аланином аналоги СМ3 (СМ3-ΑNΑ01, СΜ3-ΑNΑ02, СΜ3-ΑNΑ03, СΜ3-ΑNΑ04), укороченные на С-конце аналоги СМ3 (СМ3ΑNΑ06, СΜ3-ΑNΑ07) или удлиненные на С-конце аналоги СМ3 (СΜ3-ΑNΑ09), при 37°С и 5% СО2 в течение 0, 3, 6 и 9 ч. Дипептидилпептидазную активность ингибировали, добавляя ингибитор ЬРРВ (№ ЭРР. фирма Вю1гспб) и уровень активного СЬР-1 определяли с помощью ЕЫ8Л для СЬР-1 (активного) (№ ЕСЬР-35К, фирма Ьшсо). Результаты получали в трех повторностях по меньшей мере в двух независимых экспериментах.
Предлагаемые в изобретении пептиды, включающие по меньшей мере девять аминокислот, добавленных к С-концу СЬР-1, представляют собой СМ3 (мышиный, СЬР-1(7-37)-ГР2) и их производные с модифицированными последовательностями, входящими в компонент (II) (ГР2), т.е. СМ3-ΑNΑ01, СМ3ЛХЛ01, СМ3-А^02, СМ3-А^03, СМ3-А^04, СМ3-А^05, СМ3-А^07, СМ3-ЛХЛ07. Пептиды СЬР-1 и СМ3-АNА06 использовали в качестве контрольных или референс-субстанций.
На фиг. 10 представлены данные об уровне активности СЬР-1 в виде % от уровня, полученного в момент начала эксперимента (0 ч) (0 ч=100%). Ясно видно, что СЬР-1 обладал очень низкой стабильностью в плазме, через 9 ч после обработки в плазме сохранялось только 9% активности. Для СМ3-АNА01 обнаружена наиболее высокая стабильность, при этом 84% продукта сохранялось через 9 ч. Активность предлагаемых в изобретении пептидов сохранялась на уровне по меньшей мере 30% через 9 ч, в то время как для пептидов с более короткими удлинениями этот показатель не достигался. Исходя из данных о кинетике изучаемой субстанции, можно определять время, необходимое для расщепления до 80% активного СЬР-1 относительно значения, полученного в 0 ч (ΌΤ80: время расщепления 80%).
Перечень последовательностей, перечисленных в порядке увеличения значений ΌΤ80
Предлагаемые в изобретении субстанции обладают существенно более продолжительной стабильностью ίη убго в плазме по сравнению с референс-субстанциями. Не вдаваясь в какую-либо теорию, можно предположить, что удлинение С-конца СЬР-1 вносит стерические помехи, препятствующие проникновению активного сайта ЭРР-ГУ в указанные аналоги, что и позволяет им избегать расщепления, в то время как у более коротких референс-субстанций не обнаружено это защитное действие, обусловливающее стабильность СЬР-1. Эта гипотеза подтверждается постоянно возрастающей стабильностью по мере увеличения длины С-концевых удлинений пептидов СМ3-АNА06 (36 ак), СМ3-АNА07 (40 ак) и СМ3 (46 ак). Однако это явление зависит не только от количества аминокислот, что показано при заменах на аланин в IР2-области СМ3. Пептид СМ3-АNА03, имеющий такое же количество аминокислот, что и СМ3, обладал существенно более низкой стабильностью, чем СМ3. С другой стороны, СМ3-АNА01, который также состоит из 46 аминокислот, обладал более высокой стабильностью в плазме, чем СМ3. Эти данные могут свидетельствовать о том, что помимо количества аминокислот, на стабильность могут влиять стерические эффекты. Наиболее предпочтительными являются пептиды, которые несут удлинение, содержащее ГО2, на С-конце СЬР-1 или удлинение, обладающее определенной степенью гомологи с !Р2, что может являться результатом специфической конформации, препятствующей проникновению в
- 20 013796
Ν-концевую область активного сайта ЭРР-ГУ.
Пример 10.
Исследование ίη νίνο - иммуногенность.
Для решения вопроса о наличии потенциальной иммуногенности изученной субстанции СМ1 осуществляли опыты на мышах на фирме РагаЬ1О5С1епсе (Гронинген, Германия). Исследование осуществляли на мышах линии ВАЬВ/с, которым вводили 5 повторных инъекций (70 мкг пептида/дозу, ί.ν.) в течение 22 дней (п=5).
Установлено, что СМ18уп не обладал токсичностью и индуцировал лишь минимальный Т-клеточный гуморальный иммунный ответ и титр антител, что показано на приведенном ниже чертеже. Нельзя исключать иммунологическое действие побочных продуктов (чистота пептида составляла лишь 95%). На фиг. 11 представлены результаты исследований по оценке потенциальных иммуногенных эффектов пептида СМ1§уп. На левой стороне (фиг. 11 А) показаны результаты оценки Т-клеточного вторичного иммунного ответа. Эксплантировали селезенку обработанных и контрольных мышей, выделяли Т-клетки и стимулировали возрастающими количествами антигена. Оценивали пролиферативный вторичный иммунный ответ. На правой стороне (фиг. 11Б) представлены результаты определения титра антигенспецифического антитела подтипа ЦС в иммунной сыворотке животных.
Пример 11.
Оценка зависимости эффективности от дозы на больных диабетом мышах.
После голодания в течение 2 ч болеющих диабетом мышей линии С57ВЬ/К51@К)-бЬ (бЬ/бЬ) обрабатывали СЬР-1, СМ1, СМ3, СМ3-АNА01 и эксендином-4 в пяти различных концентрациях. Шестую группу обрабатывали только физиологическим раствором. Обрабатывали по 7 животных на группу.
Уровень глюкозы в крови определяли после взятия крови из хвостовой вены непосредственно до инъекции, через 1 и 4 ч после инъекции.
Результаты в виде кривых зависимости ответа от дозы представлены на фиг. 12 (фиг. 12А (СЬР-1), фиг. 12Б (СМ1), фиг. 12В (СМ3) и фиг. 12Г (СМ3-АNА01)). Для каждой изучаемой субстанции строили график, характеризующий изменение в процентах уровня глюкозы в крови относительно исходного значения при использовании различных концентраций. Определяли значение ЕЭ50 для различных изученных субстанций из кривых зависимости ответа от дозы, при этом оценивали значения через 1 ч в виде снижения уровня глюкозы в процентах по сравнению с исходным уровнем. Для определения значения ЕЭ50 для СЬР-1, СМ3-АNА01, СМ3гес и эксендина 4 применяли модель Моргана-Меркера-Флодина (Могдап-Мегсег-Иобт) (ММЕ), для СМ1 применяли модель Ричардса (КгсЬагбк). Обе модели представляют собой модели на основе аппроксимации сигмовидной зависимостью, которые можно применять для оценки зависимости ответа от дозы. Для каждого пептида определяли значения ЕЭ50 для уровня глюкозы в плазме (однократная 5.с.-доза в мкг/мышь), исходя из процента снижения уровня глюкозы в крови. Эти данные обобщены в табл. 1.
Таблица 1
Пептид | ЕО30 [мкг/мышь] |
СЕР-1(7-37) | 12,76 |
СМ1 | 0,61 |
СМ3 | 0,25 |
СМЗ-ΑΝΑΟΙ | 0,55 |
Эксендин-4 | 0,03 |
Исходя из значений ЕЭ50, можно считать, что аналоги СЬР-1 СМ1, СМ3 и СМ3-АNА01 обладают более чем в 20 раз более высокой биологической активностью ш νίνο, что наиболее вероятно является результатом повышенной стабильности в плазме.
Все изученные пептиды приводили к значительному снижению уровней глюкозы в крови у больных гипергликемией мышей линии бЬ/бЬ, по меньшей мере, в наиболее высоких концентрациях. Данные о снижении уровней глюкозы в плазме после однократной 5.с.-инъекции 1,1-3,0 нмоль пептида (относительно контроля) обобщены в табл. 2. В табл. 2 представлены данные о понижающем уровень глюкозы действии тестируемых субстанций (относительно контроля). Данные о снижении уровня глюкозы в плазме и соответствующих уровнях значимости представлены для периода времени, составляющего 1 ч (@1ч) и 4 ч (@4ч) после инъекции пептида. Обнаружены различия в длительной эффективности пептидов. Только эксендин-4 и СМ3 обладали способностью значительно снижать уровни глюкозы в крови через 4 ч.
- 21 013796
Таблица 2
Пептид | Концентрация | Снижение уровня глюкозы в плазме | Значение р (независимый 1критерий) |
ОЬР-1 (7.37) | 3,0 нмоля | 15% ±24%® 1ч | не значимо |
3,0 нмоля | 0%@4ч | не значимо | |
СМ1 | 1,1 нмоля | 50% ± 14%®1ч | Р <0,0001 |
1,1 нмоля | 0%®4ч | не значимо | |
СМ3 | 2,0 нмоля | 46% ± 6%®1ч | Р < 0,01 |
2,0 нмоля | 21% ± 10%®4ч | Р < 0,05 | |
СМЗ-ΑΝΑΟΙ | 2,0 нмоля | 62%.+ 12%®1ч | Р< 0,001 |
2,0 нмоля | 18% ± 11%®4ч | не значимо | |
эксендин-4 | 2,4 нмоля | 32% ± 14%@1ч | Р < 0,01 |
2,4нмоля | 29% ± 9%@4ч | Р < 0,01 |
Пример 12.
Продолжительное лечение мышей линии ЙЬ/ЙЬ.
Исследовали 4 группы, η=12, мышей линии С57ВЬ/К51@.К)-йЬ (ЙЬ/ЙЬ): группа А - обработка наполнителем (0,9% физиологический раствор), один раз в день, группа Б - обработка 24 нмоль/кг тестируемого соединения 1: т.е. СМ1гес, один раз в день, группа В - обработка 24 нмоль/кг тестируемого соединения 2: т.е. СМ3-ΑNΑ01, один раз в день, группа Г - обработка 24 нмоль/кг референс-субстанции эксендин-4 (известное и разрешенное к применению в данной области соединение (однако эксендин-4 не является аналогом СЬР-1)), один раз в день.
Пептиды или наполнитель вводили один раз в день (группы А-Г) в период времени между 2-3 ч дня подкожно в кожную складку спины. Продолжительность обработки составляла 18 недель. В период времени с 12 по 18 неделю 6 из 12 животных в группе обрабатывали дважды в день.
У мышей исследовали различные параметры, т.е. такие как состояние здоровья (1), вес тела (2), потребление корма (3), уровень глюкозы в крови (4), проба на переносимость глюкозы (5), данные об уровне инсулина (6), уровень гликозилированного гемоглобина (7), патология (8) и рестимуляция Т-клеток (9).
Состояние здоровья (1) оказалось хорошим во всех группах, никаких побочных действий лечения не обнаружено.
Вес тела (2) был более низким во всех обработанных группах после лечения в течение 18 недель (фиг. 13). Относительное прибавление веса тела оказалось существенно пониженным в группе, обработанной СМ3-ΑNΑ01. На фиг. 13А показано воздействие обработки физиологическим раствором (А), СМ1 (Б), СМ3-ΑNΑ01 (В) или эксендином (Г) на вес тела мышей линии ЙЬ/ЙЬ. Представлены средние значения для 12 животных в группе. На фиг. 13Б показано воздействие обработки физиологическим раствором (А), СМ1 (Б), СМ3-ΑNΑ01 (В) или эксендином (Г) на вес тела мышей линии ЙЬ/ЙЬ. Представлены данные об относительном прибавлении веса 12 мышей в группе после обработки в течение 122 дней. Только обработка тестируемой субстанций СМ3-ΑNΑ01 (группа Б) привела к существенному снижению прибавления веса (р<0,001).
Потребление корма (3) оказалось существенно пониженным в группе, обработанной СМ1 и СМ3ΑΝΑ01, по сравнению с контролем. На фиг. 14 показано воздействие обработки физиологическим раствором (А), СМ1 (Б), СМ3-ΑNΑ01 (В) или эксендином (Г) на еженедельное потребление корма мышами линии ЙЬ/ЙЬ в течение 122-дневного периода обработки. Относительное потребление корма одной мышью оказалось существенно пониженным в группе Б и В (р<0,001).
Уровни глюкозы в крови (4) определяли в различных опытах. Данные об уровне глюкозы в крови не натощак (через 1 ч после инъекции пептида) представлены на фиг. 15 А, т.е. воздействие обработки физиологическим раствором (А), СМ1 (Б), СМ3-ΑNΑ01 (В) или эксендином (Г) на уровни глюкозы в крови не натощак. Для определения уровня глюкозы брали кровь из хвостовой вены через 1 ч после к.с.инъекции физиологического раствора (А) или пептидов СМ1 (Б), СМ3-ΑNΑ01 (В) или эксендина (Г) в концентрации 24 нмоль/кг. По сравнению с контролем уровень глюкозы в крови не натощак через 1 ч после к.с.-инъекции пептида снижался на 55% в группе Б, 51% в группе В и 60% в группе Г (фиг. 15Б). Снижение уровней глюкозы в крови в обработанных группах оказалось достоверным с высоким уровнем значимости (р<0,0001).
Данные об уровне глюкозы в крови натощак (через 8 ч после инъекции пептида) представлены на фиг. 15В, т.е. воздействие обработки физиологическим раствором (А), СМ1 (Б), СМ3-ΑNΑ01 (В) или эксендином (Г) на уровни глюкозы в крови натощак. Для определения уровня глюкозы брали кровь из хвостовой вены после 12-часового периода голодания в течение ночи через 18 ч после к.с.-инъекции тестируемых субстанций. Уровни глюкозы в крови натощак снижались в СМ1- и СМ3-ΑNΑ01-группах.
Ьр.-пробу на переносимость глюкозы (5) (ГРСТТ) осуществляли через 8 недель после обработки мышей в группах А-Г. Исходный (основной) уровень глюкозы в крови (0 мин) у голодавших в течение
- 22 013796 ч животных определяли путем взятия крови из хвостовой вены после к.с.-инъекции тестируемой субстанции и 1.р.-инъекции 20%-ного раствора глюкозы (1 г глюкозы на кг). Уровень глюкозы в крови определяли также через 15, 30, 45, 60, 90 и 120 мин после инъекции глюкозы. Во всех обработанных группах обнаружена существенная нормализации переносимости глюкозы (фиг. 16А). На фиг. 16А представлены данные об абсолютных уровнях глюкозы в крови во время проведения ί.ρ.-пробы на переносимость глюкозы (4РСТТ) через 8 недель после обработки физиологическим раствором (А), СМ1 (Б), СΜ3-ΑNΑ01 (В) или эксендином (Г) (средние значения для каждой группы (п=12)).
Другое представление данных, приведенных на фиг. 16А, касающихся пробы на переносимость глюкозы, дано на фиг. 16Б. На фиг. 16Б представлены относительные уровни глюкозы в крови при осуществлении ί.ρ.-пробы на толерантность к глюкозе ДРОТТ) через 8 недель после обработки физиологическим раствором (А), СМ1 (Б), СΜ3-ΑNΑ01 (В) или эксендином (Г), стандартизованные относительно исходного уровня глюкозы в крови (100%).
Уровни инсулина (6) определяли у мышей после их 12-часового периода голодания в течение ночи. После обработки в течение 18 недель в организме всех мышей в опытных группах продуцировалось существенно больше инсулина, чем в необработанной контрольной группе. На фиг. 17 представлены данные об уровнях инсулина в сыворотке мышей после 18-недельной обработки 0,9%-ным физиологическим раствором (группа А), пептидом СМ1 (группа Б), пептидом СΜ3-ΑNΑ01 (группа В) или эксендином-4 (группа Г). Непосредственно после взятия образов крови их обрабатывали смесью протеазных ингибиторов для того, чтобы избежать расщепления инсулина. Анализировали уровень инсулина в сыворотке с помощью набора ^иБп Мойке ИНгакепзШуе ЕЫ8А (каталожный номер Е^-3440, фирма ЭЯС). Достоверность различий определяли с помощью ΐ-критерия Стьюднта.
Гликозилированный гемоглобин (7) образуется в результате избытка в плазме глюкозы, связывающейся с гемоглобином в эритроцитах (ЯВС). Поскольку продолжительность жизни ЯВС составляет 120 дней, оценка гликозилированного гемоглобина является показателем долговременного контроля глюкозы и рассматривается как более надежный показатель, чем уровень глюкозы в крови. Получали образцы цельной крови из заглазничного синуса и анализировали с помощью набора ЕпхутаНс НЬА1с Те5ΐ Κίΐ (№ ΌΖ121 А, фирма О|ахуте) для определения уровней гликозилированного гемоглобина. Рассматривая в качестве параметра уровень гликозилированного гемоглобина, обнаружено существенное снижение его повышения во всех обработанных группах.
На фиг. 18А показано относительное повышение уровня гликозилированного гемоглобина (СНЬ) в образцах цельной крови через 6, 12 и 18 недель после обработки физиологическим раствором (А), СМ1 (Б), СМ3-ΑNΑ01 (В) или эксендином (Г). На фиг. 18Б показано относительное повышение уровня гликозилированного гемоглобина (СНЬ) в образцах цельной крови через 18 недель после обработки физиологическим раствором (А), СМ1 (Б), СМ3-ΑNΑ01 (В) или эксендином (Г). Результаты представлены в виде среднего значений для всех животной в каждой группе (п=12). Повышение уровня гликозилированного гемоглобина во всех обработанных группах оказалось существенно ниже, чем в контроле.
Оценивали патологию (8) мышей. По данным аутопсии не обнаружено различий в органах в группах обработанных и необработанных животных (группа А) за исключением объема поджелудочных желез. Определяли массу поджелудочных желез и установлено ее существенное увеличение во всех обработанных группах. На фиг. 19 представлены данные о массе поджелудочных желез в день умерщвления животных после 18-недельной обработки 0,9%-ным физиологическим раствором (группа А, п=11), пептидом СМ1 (группа Б, п=12), пептидом СМ3-ΑNΑ01 (группа В, п=12) или эксендином-4 (группа Г, п=12).
Для оценки потенциальных иммунологических действий тестируемых субстанций оценивали тип IV иммуногенности (9) с помощью вторичной стимуляции Т-клеток. Для этой цели вырезали селезенку у 8 животных в каждой группе, выделяли Т-клетки и повторно стимулировали различными концентрациями соответствующей тестируемой субстанции. По сравнению с необработанными контрольными животными не обнаружено существенного повышения пролиферации повторно стимулированных пептидом Тклеток. На фиг. 20 показаны полученные ш νίΐτο данные о вторичном иммунном ответе клеток селезенки на обработку различными концентрациями тестируемых субстанций СМ1 (фиг. 20А) и СМ3-ΑNΑ01 (фиг. 20Б) и референс-субстанции эксендина-4 (фиг. 20В). С помощью нерадиоактивного метода анализа клеточной пролиферации (Се11 РгоПГегаЕоп ЕЫ8А, ВгбИ (5-бромдезоксиуридин), хемилюминесцентный анализ) оценивали ш νίΐτο вторичный иммунный ответ клеток селезенки мышей из групп А-Г на обработку 3-кратными разбавлениями тестируемых субстанций СМ1 и СМ3-ΑNΑ01 и референс-субстанции эксендина-4, начиная с концентрации 50 мкг/мл, в трех повторностях для каждой мыши. Индекс стимуляции (8Σ) рассчитывали как отношение уровня ответа в присутствии соответствующего пептида к уровню ответа в отсутствии пептидов. Представлены средние значения ± среднеквадратические отклонения, полученные для соответствующей обработанной группы и контрольной группы (группа А: п=3, группа Б: п=6, группа В: п=7, группа Г: п=6). При расчете средних значений анализировали только мышей, у которых величина 8I превышала более чем в 6,5 величину, полученную в позитивных контрольных культурах, обработанных 5 мкг/мл Соп А (конканавалин А).
Продолжительное исследование с использованием больных диабетом мышей дополнительно подтвердило эффективность предлагаемых в изобретении удлиненных на С-конце пептидов. При оценке
- 23 013796 всех изученных параметров (вес тела, потребление корма, уровень глюкозы в крови, уровень гликозилированного гемоглобина, переносимость глюкозы, секреция инсулина, масса поджелудочных желез) для удлиненных на С-конце пептидов выявлено заметное терапевтического действие. С учетом гомологии удлиненных на С-конце Се11Ме6-пептидов с эндогенной последовательностью, установлено, что указанные предлагаемые в изобретении пептиды обладают преимуществом с позиций иммуногенности по сравнению с имеющим происхождения из организмов, не относящихся к млекопитающим, эксендином-4. Данные, полученные в опыте по оценке иммуногенности на мышах, подтверждают отсутствие клинически значимой иммуногенности пептида СМ1.
Перечень последовательностей
ΗΆΕΟΤΓΤΞϋν ЗЗУЬЕСОААК ΕΡΙΑΗΟνΚΘΕ О
Зедиепсе ГО N0:1
НКОРРЕЕУА! УЕЕЬб
Зедиепсе ГО N0:2
ΚΚϋΓΡΕΕνΑΙ АЕЕЬС
Зедиепсе ГО N0:3
НАОСЗРЗОЕМ ΝΤΙΕΟΝΣΑΑΚ ΏΡΙΝΝΕΙΟΤΚ ΙΤϋΚΚ
Зедиепсе ГО N0:4
НАОСЗЕЗБЕМ ЗТ1ЬОИЬАТЕ НПЫИЫОТК ΙΤΏΚΚ
Зедиепсе ГО N0:5
НАЕОТЕТЗОУ ЗЗУЬЕООААК ЕЕТАНЬУКвЕ (ЗКР.ОРРЕЕУА 1АЕЕБ6КЕНА
ΕΟΤΡΤ3ϋν33 ΥΕΕΟΟΑΑΚΕΡ 1АИЬУКСЕС
Зедиепсе 10 N0:6
НАЕОТРТЗОУ ЗЗУЬЕООААК ЕГ1АИЬ'7КСЕ ОЕР-ОРРЕЕЛ/А 1АЕЕЬСЕЕНА
ОСЗРЗОЕМ8Т ШЭНЬАТР.ОЕ ΙΝΝΣΙβΤΚΙΤ ϋΚΚ
Зедиепсе 10 N0:7
НАЕОТРТЗОУ ЗЗУЬЕООААК ЕР1АИЬУКОЕ СР.КОГРЕЕ'/А 1АЕЕЫЭ
Зедиепсе ГО N0:8 марааньеза ААЕАЬЬРРМЬ ЬЬЬЫЭРРРЬЬ акаьрроунн ьнаеееорор
ИНААЬРЗЗРА РАРАТОЕАРЕ РАЗЗЬКРРЕС СУРОРЗООЬЗ ΑΕΝΗΟΚΚ
Зедиепсе ΙΟ N0:9
НАЕОТРТЗОУ ЗЗУЬЕООААК ЕР1АИЬУКСЕ СР.НОЕРЕЕ’ТА 1УЕЕЬСЕННА
ЕОТРТЗОУЗЗ УЪЕООААКЕР ГАКЬУКСЕО
Зедиепсе ГО N0:10
ΗΑΕ0ΤΡΤ3ϋν ЗЗУЬЕСОААК ЕПАИЬУКСЕ ОЕНОРРЕЕУА 1УЕЕЬСНР.НА
Ο63Ρ30ΕΜΝΤ 1ЬОИЬААКОР ГОНЫОТКТТ ΏΕΚ
Зедиепсе ГО N0:11
ΗΑΕ0ΤΡΤ3ϋν ЗЗУЬЕООААК ЕПАНЬУКбЕ ΟΚΕϋΡΡΕΕνΑ 1ЧЕЕЬ<3 зедиепсе ГО N0:12
1 дакаЪссасс | аЪддсссссд | ссдсс1:ддсС | даддадсдсс | дссдссаддд | |
М А | Р А | АНЬ | К £ А | А А К А | |
51 сссЬдсСдсс | асссаСдсСд | седсСдсСдс | Ъдсадссссс | ассСсСдсЬд | |
Ь Ь Р | Р м | Ь Ь Ь Ь | 0 ₽ Р | Р Ь ь |
- 24 013796
101 дсссдддссс ЬдсссссддС дадСдсссдс сасСсдссдС ссдсЬссСсд
А Е Ά Ь Р Р
151 сЬдадддддс дссдддсасд сдддсСдддс ссадсддсдС аЬссддасдс 201 саадааасса дададссадс садаЬдссаа адддсссСдс саСдСдссдд 251 СдсссСССсс с С с ί: сса ϋ С С дсссЬдссас асадСдддсС ддддсЬдсас 3 01 дЬдЬдСССдс Едасаддсса саЕсЕсЕаас ЕдСдддссаЕ дЕддассЕЕа 351 ддссЕдасса дасссСсаСд ЕсЕЕссЕссС Есссаддасд ЬдсассассЬ РУ Η Н Ь
401 дсасдссдад аддсдсддсс сСсадсссЬд дсасдссдсс сьдссаадса Η А Е ЯРЗР ОРИ И А А Ь Р 3 8
451 дсссЬдсссс Ьдссссадсс асссаддадд сссссаддсс Едссадсадс РАР АРА Т о Е А РРР А 8 8
501 сЬдаддссас ссаддкдсдд едЬдссЕдаЕ сссЬссдаЬд дссЕдадсдс
Ь Е Р Р Е С О V Р Б Р 5 Ό в Ь 8 А
551 ЬсддааЪсдд садаададдс асдссдаддд сассСЕсасс ЕссдасдЬда
Е N Е О К Р Н ЛЕС ТРТ 5 Б V 5
601 дсадсЕассЕ ддадддссад дссдссаадд адСЕсаЕсдс сЬддсЬддСд
Υ Ь Е <3 О А А К Е Р I А ИЬУ
651 аадддсаддд дссдсаддда сЪЕсссЬдад даддЕддсса ЬсдЬддадда
К (3 Р (3 Е Е Б ЕРЕ Е V А I V Е Е
701 дсСдддссдд сдасасдссд адддсассЕЕ сассЕссдас дЬдадсадсЬ
Ь О Е Е Η А Е ОТЕ Т 8 Б V 8 8 Υ
751 ассЬддаддд ссаддссдсс ааддадЬЬса ЕсдссЬддсЬ ддьдаадддс ЬЕО О А А К Е Г I А И Ь V К <3
801 аддддсЬдад сдсдс
Е <3 *
Зедиепсе ΙΡ N0:13 даЬаЬссасс аЕддсссссд ссдссЬддсЪ даддадсдсс дссдссаддд сссЕдсЕдсс асссаедсСд сЪдсСдсЕдс едсадссссс ассЬсСдскд дсссдддссс ЬдсссссддЬ 121 дадЬдсссдс сасЬсдссдЬ ссдсйссЕсд сЬдадддддс дссдддсасд сдддсЬдддс 181 ссадсддсдЪ аЪссддасдс саадааасса дададссадс садаЕдссаа адддсссЬдс 241 саСдЬдссдд СдсссЬЬЕсс сЬсЪссаЬЪЪ дсссЕдссас асадЬдддсЪ ддддЪЬдсас 301 дЬдЬдСЬЬдс Сдасаддсса саСсСсЪаас СдЬдддссаЬ дсддассъеа ддссЕдасса 361 дасссЕсаЕд ЪсЬЬссЪссЬ Есссаддасд ЕдсассассЕ дсасдссдад аддсдсддсс 421 сЬсадсссЪд дсасдссдсс сЕдссаадса дсссЬдсссс Ъдссссадсс асссаддадд 481 сссссаддсс Ьдссадсадс сЕдаддссас ссаддьдсдд сдедссЕдаЬ сссЪссдаЪд 541 дссЬдадсдс псддааЬсдд садаададдс асдссдаддд сассЪЬсасс СссдасдСда 601 дсадсЕассЬ ддадддссад дссдссаадд адЬЪсаЪсдс сЬддсЪддЬд аадддсаддд 661 дссдсаддда сЬЬсссЬдад даддЪддсса ъсдЬддадда дсЕдддссдд сдасасдссд 721 адддсассЪЬ сассСссдас дСдадсадск ассСддаддд ссаддссдсс ааддадЬЬса 781 ЬсдссЬддсЬ ддСдаадддс аддддсЬдад сдсдс Зедиепсе Ιϋ N0:14 даЬаЕссасс аЕддсссссд ссдссЕддсЕ даддадсдсс дссдссаддд МАРА АНЬ Е Б А ААРА сссЬдсЬдсс асссаЬдсЬд съдспдсьдс Ьдсадссссс ассьсьдсьд ььр рмь ььъь о₽р РЬЬ
101 дсссдддссс ЬдсссссддЕ дадЬдсссдс сасЕсдссдЕ ссдсЕссЕсд АРАБ Р Р
151 сЬдадддддс дссдддсасд сдддсСдддс ссадсддсдС аЬссддасдс
201 саадааасса дададссадс садаСдссаа адддсссСдс са£д£дссдд
251 ЕдсссЕЕЕсс сЕсЕссаЕЕЕ дсссСдссас асад£дддс£ ддддЕЕдсас 301 дСдСдСССдс Ьдасаддсса саСсСсСаас СдЬдддссаС дЕддассЕСа
351 | ддссЕдасса | дасссЕсаЕд | Ссеессессе | есссаддасд ЪдсассассС | |
Р V | Н Н Ь | ||||
401 | дсасдссдад НАЕ | аддсдсддсс Р И <3 Р | сЬсадсссЕд ОРИ | дсасдссдсс Н А А | сЕдссаадса Ь Р 3 5 |
451 | дсссЪдсссс РАР | Ъдссссадсс АРА | асссаддадд Т О Е А | сссссаддсс РРР | Едссадсадс А 3 3 |
501 | сЕдаддссас Ь Е Р Р | ссаддЕдсдд Н С О | сдЕ.дссЕдаЕ V Р Р | сссЕссдаЕд Р 3 Р <3 | дссЬдадсдс ЬЕА |
551 | ЕсддааЕсдд Е N Е | садаададдс О К Е И | асдссдаддд А Е С | сассЕЕсасс ТРТ | ЕссдасдЕда 3 Б V 3 |
601 | дсадсЕассЕ 3 Υ Ь | ддадддссад Е а о | дссдссаадд А А К Е | адСЬсаСсдс Р I А | сЬддсЕддЬд ИЬУ |
651 | аадддсаддд КОРС | дссдсаддда РРР | сЬЪсссЬдад Р Р Е | даддЬддсса Е V А I | ЕсдЕддадда V Е Е |
- 25 013796
701 дсСдддссдд сдасасдссд асддсадсСС садсдасдад аСдаасасса
Ь О Е Ε Η А Р СЭР ε Ώ Ε ΜΝΤΙ
751 СссСддасаа ссСддссдсд сдсдасССса ссаасСддсС даСссадасс
Ъ Ό N Ъ А Α К ϋ Ρ I ННЬ I 0 Т
801 аадаСсассд аСсддаадСд адсдсдсСда Расс
К I Τ ϋ К К *
Зедиепсе Ю N0:15 даСаСссасс аСддсссссд ссдссСддсС даддадсдсс дссдссаддд сссСдсСдсс асссаСдсСд сСдсСдсСдс Сдсадссссс ассСсСдсСд дсссдддссс СдсссссддС
121 дадСдсссдс сасСсдссдС ссдсСссЬсд сСдадддддс дссдддсасд сдддсСдддс
181 ссадсддсдС аСссддасдс саадааасса дададссадс садаСдссаа адддсссСдс
241 саСдСдссдд СдсссСССсс сСсСссаССС дсссСдссас асадСдддсС ддддССдсас
301 дСдСдСССдс Сдасаддсса саСсСсСаас СдСдддссаС дСддассССа ддссСдасса
361 дасссСсаСд СсССссСссС Ссссаддасд СдсассассС дсасдссдад аддсдсддсс
421 сссадсссСд дсасдссдсс сСдссаадса дсссСдсссс сдссссадсс асссаддадд
481 сссссаддсс Сдссадсадс сСдаддссас ссаддСдсдд сдСдссСдаС сссСссдаСд
541 дсссдадсдс ссддааСсдд садаададдс асдссдаддд сасссссасс Сссдасдсда
601 дсадсСассС ддадддссад дссдссаадд адССсаСсдс сСддсСддСд аадддсаддд
661 деедсаддда сССсссСдад даддСддсса СсдСддадда дсСдддссдд сдасасдссд
721 асддсадсСС садсдасдад аСдаасасса сссСддасаа ссСддссдсд сдсдасССса
781 СсаасСддсС даСссадасс аадаСсассд аСсддаадСд адсдсдсСда СаСс
Зедиепсе Ю N0:16 даСаСссасс аСддсссссд ссдссСддсС даддадсдсс дссдссаддд МАРА А И Ь КЗА А А К А сссСдсСдсс асссаСдсСд сСдсСдсСдс Сдсадссссс ассСсСдсСд Ь Ь Р Ρ М Ь ЬЬЬЬ 0 Ρ Р Р Ь Ь
101 дсссдддссс СдсссссддС дадСдсссдс сасСсдссдС ссдсСссСсд А к А ь р р
151 сСдадддддс дссдддсасд сдддсСдддс ссадсддсдС асссддасдс 201 саадааасса дададссадс садаСдссаа адддсссСдс саСдСдссдд 251 СдсссССССС ССсСссаССС дсссСдссас асадСдддсС ддддккдсас 301 дСдСдСССдс Сдасаддсса саСсСсСаас СдСдддссаС дСддассССа 351 ддссСдасса дасссссаСд есССсссссС Ссссаддасд СдсассассС ϋ V Н н ъ
401 дсасдссдад аддсдсддсс сСсадсссСд дсасдссдсс сСдссаадса
Η А Е | Ε И 6 Р | Ω Р И | Н А А | Ь Р 8 3 |
дсссСдсссс | Сдссссадсс | асссаддадд | сссссаддсс | Сдссадсадс |
РАР АРА Т 0 Е А РЕР АЗЗ
501 сСдаддссас ссаддСдсдд сдСдссСдаС сссСссдаСд дссСдадсдс ЬЕРР Е С С V Ρ ϋ РЗБС Ь 3 А
551 СсддааСсдд садаададдс асдссдаддд сассССсасс СссдасдСда
Ε Ν Ε О К Ε Η А Е О Τ Ρ Т 5 Ρ V 3 601 дсадсСассС ддадддссад дссдссаадд адССсаСсдс сСддсСддСд 3 Υ Ь ЕСС А А К Ε Ρ I А И Ь V 651 аадддсаддд дссдсаддда сССсссСдад даддСддсса СсдСддадда К О Е <3 Ε Ε ϋ РРЕ Ε V А I V Ε Е 701 дсСдддссдд сдасасдссд асддсадсСС садсдасдад аСдаасасса
ЬОЕ К Η Α ϋ О 3 Ρ 8ΌΕ ΜΝΤΙ 751 СссСддасаа ссСддссдсд сдсСда сас с
Ь О N Ь А А Е *
Зедиепсе Ю N0:17 даСаСссасс аСддсссссд ссдссСддсС асссаСдсСд сСдсСдсСдс Сдсадссссс 121 дадСдсссдс сасСсдссдС ссдсСссСсд 181 ссадсддсдС аСссддасдс саадааасса 241 саСдСдссдд СдсссСССсс сЪсСссаССС 301 дСдСдСССдс Сдасаддсса саСсСсСаас 361 дасссСсаСд СсССссСссС Ссссаддасд 421 сссадсссСд дсасдссдсс сСдссаадса 481 сссссаддсс сдссадсадс сСдаддссас 541 дссСдадсдс СсддааСсдд садаададдс 601 дсадсСассС ддадддссад дссдссаадд 721 асддсадсСС садсдасдад аСдаасасса Зедиепсе ΙΏ N0:18 даддадсдсс ассСсСдсСд ссдадддддс дададссадс дсссСдссас СдСдддссаС СдсассассС дсссСдсссс ссаддСдсдд асдссдаддд адССсаСсдс СссСддасаа дссдссаддд дсссдддссс дссдддсасд садаСдссаа асадСдддсС дСддассССа дсасдссдад Сдссссадсс сдСдссСдаС сассССсасс сСддсСддСд ссСддссдсд ссссдссдсс СдсссссддС сдддсСдддс адддсссСдс ддддССдсас ддссСдасса аддсдсддсс асссаддадд сссСссдаСд Сссдасдсда аадддсаддд сдсСдаСаСс
- 26 013796 даСа+ссасс а+ддсссссд ссдссСддсЬ даддадсдсс дссдссаддд МАРА АНЬ Е 3 А А А К А 51 ссс+дс+дсс асссаСдсСд сПдсЕдсЬдс Сдсадссссс асс+сЬдсСд Ь Ь Р РМЪ ЬЬЪЪ О Ρ Р РЬЬ 101 дсссдддссс ЬдсссссддХ дад&дсссдс сасесдссдС ссдсСссСсд АКАЕ Ρ Р
151 ссдадддддс дссдддсасд сдддсСдддс ссадсддсди аессддасдс 201 саадааасса дададссадс садаедссаа адддссседс саЬдьдссдд 251 +дсссСС(:сс сСсЕссаСЫ: дсссСдссас асадЕдддсЬ ддддСЕдсас 301 дЬдЬдССЬдс сдасаддсса саЬсСсСаас сдСдддссаЬ дСддассССа 351 ддссСдасса дасссЬсаСд &с££ссСсс(: Ьсссаддасд ЬдсассассЬ О V ИНЕ
401 дсасдссдад аддсдсддсс сЁсадссс+д дсасдссдсс с+дссаадса НАЕ Е Е С Р ОРИ Н А А Ъ Р 3 3
451 дссс+дсссс Едссссадсс асссаддадд сссссаддсс Сдссадсадс РАР АРА ТОЁА Ρ Ρ. Ρ А 3 3
501 с+даддссас ссадд+дсдд сд+дсседас ссс+ссда+д дссЬдадсдс Ь Е Ρ Р ЕСО V Р О Р 5 ϋ <3 Е 3 А
551 Ьсддаа+сдд садаададдс асдссдаддд сассЕСсасс сссдасдСда К N К 0 К К К А Е <3 ТРТ 8 Ώ V 3 601 дсадссасси ддадддссад дссдссаадд адССсаСсдс сЬддскддСд ЗУЬ ЕСО А А К Е ΡΙΑ И Ь V
651 аадддсаддд дссдсаддда сС+сссЪдад даддЬддсса ЪсдСддадда
К С Е 6 Е Е О | р р Е | Е V А I | V Е Е |
701 дс+дддс+да дсдсдс | |||
Е С * | |||
Зедиепсе ТО N0:19 |
даеаЪссасс аьддсссссд ссдссСддсЬ даддадсдсс дссдссаддд ссседс+дсс асссаСдсСд сЬдс+дсСдс Ьдсадссссс ассЬсЬдсСд дсссдддссс ЬдсссссддС
121 дадСдсссдс сасХсдссдЬ ссдсСссСсд с+дадддддс дссдддсасд сдддсСдддс
1Θ1 ссадсддсдХ а+ссддасдс саадааасса дададссадс садаЬдссаа адддсссСдс
241 саЬдСдссдд СдсссСССсс сСсСсса+СЬ дсссЬдссас асад+дддсЬ ддддСЪдсас
301 д+дСд+ЕСдс Едасаддсса саесСсХаас Ъд+дддссас дСддассСЬа ддсс+дасса
361 дасссЬсаЬд СсЬ+ссЬссЬ Ссссаддасд ЬдсассассС дсасдссдад аддсдсддсс
421 сХсадсссСд дсасдссдсс сСдссаадса дсссЬдсссс Ьдссссадсс асссаддадд
481 сссссаддсс Ьдссадсадс сЬдаддссас ссаддСдсдд сдЬдсс+даЬ сссЬссдаЪд
541 дссСдадсдс СсддааСсдд садаададдс асдссдаддд сассЬ+сасс СссдасдЬда
601 дсадсЬассЬ ддадддссад дссдссаадд ад+Ссассдс сСддсСдд+д аадддсаддд
661 дссдсаддда сЬ+сссЬдад даддЬддсса ЪсдЪддадда дсСдддсСда дсдсдс
Зедиепсе Ιϋ N0:20
НСЕСТЕТЗОУ ЗЗУЬЕООААК ΕΡΙΑΜβνΚΟΚ С
Зедиепсе ТО N0:21
ΚΕΌΡΡΕΕνΑΙ
Зедиепсе ТО N0:22
ΕΕΌΕΡΕΕνΑΙ νΕΕΙ:
Зедиепсе ТО N0:23
ΚΕΌΓΡΕΞνΑΙ АЕЕЬ
Зедиепсе 10 N0:24
Азр РЬе Рго <31и С1и 7 а. 1 А1а
Зедиепсе Ю N0:25
- 27 013796
А1а А1а Авр Зедиепсе М | РЬе Рго <Э1и <31и Уа1 А1а N0:26 | Не | ||||||||||
А1а А1а Авр | РЬе Рго | С1и | <31и | Уа1 | А1а | Не | Уа1 | С1и | О1и | Ьеи | ||
Зециепсе ю | N0:27 | |||||||||||
А1а А1а Авр | РЬе Рго | 01и | <31и | Уа1 | А1а | Не | А1а | 01и | <31и | Ьеи | ||
Зедиепсе Ю | N0:28 | |||||||||||
А1а А1а Авр | РЬе Рго | С1и | С1и | Уа1 | А1а | 11е | νβΐ | 01и | 01и | Ьеи | С1у | |
Зедиепсе 10 | N0:29 | |||||||||||
А1а А1а Авр | РЬе рго | 01и | С1и | Уа1 | А1а | Не | А1а | <31и | В1и | Ьеи | С1у | |
Зедиепсе Ιϋ | N0:30 | |||||||||||
Нхз А1а С1и | <31у ТЬг | РЬе | ТЬг | Зег | Авр | Уа1 | Зег | Зег | туг | Ьеи | <31и | (31у |
О1п А1а А1а | Ьув 01и | РЬе | Не | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьув | С1у | Агд | С1у | А1а |
А1а Авр РЬе | Рго <31и | 61и | Уа1 | А1а | 11е | А1а | С1и | С1и | Ьеи | ©1у | ||
Зедиепсе Ю | N0:31 | |||||||||||
Нхв А1а 61и | С1у ТЬг | РЬе | ТЬг | Зег | Авр | ν31 | Зег | Зег | Туг | Ьеи | С1и | <31у |
01п А1а А1а | Ьуз С1и | РЬе | 11е | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьуз | О1у | Агд | <31у | Агд |
Агд Авр РЬе | А1а С1и | С1и | Уа1 | А1а | Не | А1а | <31и | О1и | Ьеи | <31у | ||
Зедиепсе ΤΌ | N0:3 2 | |||||||||||
нхв А1а С1и | С1у ТЬг | РЬе | ты | Зег | Авр | Уа1 | Зег | Зег | туг | Ьеи | <31и | <31у |
<31п А1а А1а | Ьув С1и | РЬе | 11е | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьув | 01у | Агд | С1у | Агд |
Агд Авр А1а | А1а А1а | А1а | Уа1 | А1а | Не | А1а | С1и | С1и | ьеи | (31у | ||
Зедиепсе ΙΒ | N0:33 | |||||||||||
Нхв А1а С1и | <31у ТНг | РЬе | ты | Зег | Авр | Уа1 | Зег | Зег | Туг | Ьеи | <31и | <31у |
С1п А1а А1а | Ьуз <31и | РЬе | Не | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьуз | <31у | Агд | <Э1у | А1а |
А1а Авр А1а | А1а А1а | А1а | Уа1 | А1а | 11е | А1а | А1а | А1а | Ьеи | С1у | ||
Зедиепсе Ю | N0: 34 | |||||||||||
Нхв А1а 01и | <31у ТЬг | РЬе | ТЬг | Зег | Авр | Уа1 | Зег | Зег | Туг | ьеи | (31и | С1у |
<31п А1а А1а | Ьуз С1и | РЬе | 11е | А1а | Тгр | ьеи | Уа1 | Ьуз | С1у | Агд | С1у | Агд |
Агд Авр РЬе | Рго | |||||||||||
Зедиепсе Ю | N0:35 | |||||||||||
Нхв А1а 01и | С1у ТЬг | РЬе | ТЬг | Зег | Авр | Уа1 | Зег | Зег | Туг | Ьеи | О1и | <31у |
С1п А1а А1а | Ьув С1и | РЬе | Не | А1а | тгр | Ьеи | Уа1 | Ьуз | 61у | Агд | 61у | Агд |
Агд Авр РЬе | Рго О1и | <31и | Уа1 | А1а | ||||||||
Зедиепсе ιπ | N0:3 6 | |||||||||||
Нхз А1а О1и | С1у ТНг | РЬе | ТЬг | Зег | Азр | Уа1 | Зег | Зег | Туг | Ьеи | С1и | <31у |
<31п А1а А1а | Ьув <31и | РЬе | 11е | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьуз | С1у | Агд | О1у | Агд |
- 28 013796
Агд Азр РЬе Нхз А1а Суз | Рго 01и | 01и | Уа1 | А1а | Не | А1а | 01и | <31и | ьеи | О1у | Агд | Агд |
Зедиепсе Ю | N0:37 | |||||||||||
Н1в А1а О1и | С1у ТЬг | РЬе | ТЬг | Зег | Авр | Уа1 | Зег | Зег | Туг | Ьеи | 01и | <31у |
<31п А1а А1а | Ьув С1и | РЬе | Не | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьуз | С1у | Агд | <31у | А1а |
А1а Азр РЬе | Рго <31и | С1и | ν»ι | А1а | Не | <31и | 01и | Ьеи | С1у | |||
Зедиепсе Ю | N0:38 | |||||||||||
Н1з А1а <31и | О1у ТЬг | РЬе | ТЬг | Зег | Авр | Уа1 | Зег | Зег | Туг | Ьеи | О1и | <31у |
01п А1а А1а | Ьуз <31и | РЬе | 11а | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьуз | <31у | Агд | <31у | Агд |
Агд Авр РЬе | А1а С1и | 01и | Уа1 | А1а | Не | Уа1 | <31и | (31и | Ьеи | <31у | ||
Зедиепсе Ю | N0:39 | |||||||||||
Н1з А1а С1и | С1у ТЬг | РЬе | ТЬг | Зег | Авр | Уа1 | Зег | Зег | Туг | Ьеи | <31и | <31у |
С1п А1а А1а | Ьув <31и | РЬе | Не | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьуз | 31у | Агд | С1у | Агд |
Агд Азр А1а | А1а А1а | А1а | Уа1 | А1а | Не | Уа1 | С1и | С1и | Ьеи | О1у | ||
Зедиепсе ΙΟ | N0:40 | |||||||||||
Н1з А1а <Э1и | С1у ТЬг | РЬе | ТЬг | Зег | Авр | νΒ1 | Зег | Зег | Туг | ьеи | С1и | С1у |
ί*1Ί «е М е 7\1 -5 ла а ги-о. | Ьуз <31и | РЬе | Не | А1а | Тгр | ν= 1 | Ζ | ΠΊ чл — 2 | **“ э | — — 2 | А1а | |
А1а Авр А1а | А1а А1а | А1а | Уа1 | А1а | Не | Уа1 | А1а | А1а | Ьеи | <31у | ||
Зедиепсе ΙΟ | N0:41 | |||||||||||
Ηίθ А1а 61и | <31у ТЬг | РЬе | Ткг | Зег | Азр | Уа1 | Зег | Зег | Туг | ьеи | 01и | (Пу |
(31п А1а А1а | Ьуз <31и | РЬе | Не | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьуз | (31у | Агд | С1у | Агд |
Агд Авр РЬе Нгз А1а Сув | Рго <31и | С1и | Уа1 | А1а | Не | Уа1 | 01и | 01и | Ьеи | Й1у | Агд | Агд |
Зедиепсе Ю | N0:42 | |||||||||||
Ηίθ А1а С1и | С1у ТНг | РЬе | Ткг | Зег | Азр | Уа1 | Зег | Зег | Туг | Ьеи | 61и | <31у |
С1п А1а А1а | Ьуз <31и | РЬе | Не | А1а | Тгр | Ьеи | Уа1 | Ьуз | С1у | Агд | Хаа | |
Зедиепсе 10 | N0:43 (формула | (1} ) | ||||||||||
Хаа хаа О1и | О1у ТЬг | РЬе | ТЬг | Зег | Азр | Хаа | Зег | Хаа | Хаа | Хаа | 31и | Хаа |
Хаа А1а Хаа | Хаа Хаа | РЬе | Не | Хаа | Тгр | Ьеи | Хаа | Хаа | Хаа | Хаа | Хаа | |
Зечиепсе Ю | N0:44 (формула | (II) ) | ||||||||||
Хаа Хаа <31и | О1у ТЬг | РЬе | Ткг | Зег | Авр | νβΐ | Зег | Хаа | Туг | Ьеи | С1и | Хаа |
Хаа А1а А1а | Хаа 01и | РЬе | 11е | Хаа | Тгр | Ьеи | ν&1 | Хаа | Хаа | Хаа | Хаа |
Зедиепсе Ю N0:45 (формула (III))
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Claims (27)
1. Слитый пептид, содержащий в качестве компонента (I) Ν-концевую последовательность (ί) СЬР-1(7-37) 8Е0 ГО Ν0:1 или функциональную последовательность, обладающую функциональной активностью СЬР-1, как инкретинового гормона, а именно его антиапопатическим действием или его нейротрофическими свойствами, и имеющую последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную СЬР-1(7-37), (ίί) модифицированный пептид СЬР-1, включающий аминокислотную последовательность формулы II
Хаа7-Хаа8-О1и-О1у-ТЬг-РЬе-Т11г-8ег-А8р-Хаа16-8ег-Хаа18-Хаа19-Хаа2061и-Хаа22-Хаа23-А1а-Хаа25-Хаа26-Хаа27-РЬе-Пе-ХааЗо-Тгр-Ьеи-ХааЗЗХаа34-Хаа35-Хаа36-Хаа37, где Хаа7 обозначает Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, 3-гидроксигистидин, гомогистидин, Ν-ацетилгистидин, а-фторметилгистидин, а-метилгистидин, 3-пиридилаланин, 2пиридилаланин или 4-пиридилаланин;
- 29 013796
Хаа8 обозначает А1а, С1у, Vа1, Ьеи, Не, Бук, А1Ь, (1-аминоциклопропил)карбоновую кислоту, (1аминоциклобутил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклопентил)карбоновую кислоту, (1аминоциклогексил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогептил)карбоновую кислоту или (1аминоциклооктил)карбоновую кислоту, где С1у является наиболее предпочтительным;
Хаа16 обозначает Vа1 или Беи;
Хаа18 обозначает 8ег, Бук или Агд;
Хаа19 обозначает Туг или С1п;
Хаа20 обозначает Беи или Ме1;
Хаа22 обозначает С1у, С1и или А1Ь;
Хаа23 обозначает С1п, С1и, Бук или Агд;
Хаа25 обозначает А1а или Vа1;
Хаа26 обозначает Бук, С1и или Агд;
Хаа27 обозначает С1и или Беи;
Хаа30 обозначает А1а, С1и или Агд;
Хаа33 обозначает Vа1 или Бук;
Хаа34 обозначает Бук, С1и, Акп или Агд;
Хаа35 обозначает С1у или А1Ь;
Хаа36 обозначает Агд, С1у, или Бук, или амид или отсутствует;
Хаа37 обозначает С1у, А1а, С1и, Рго, Бук, амид или отсутствует, и в качестве компонента (II) С-концевую пептидную последовательность, состоящую по меньшей мере из 9 аминокислот и содержащую последовательность согласно 8ЕС ГО N0:22 (ΚΚ^ΡРЕЕVАI) или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность 8ЕС ГО N0:22, и удостаивающую слитый пептид лучшей устойчивостью к инактивации с помощью ОРР-Ш, причем Ν-терминальная последовательность слитого пептида является компонентом (I) как таковым или сигнальной пептидной последовательностью, слитой с помощью последовательности, которая расщепляется протеазой, с Νтерминальной последовательностью компонента (I), или сигнальным пептидом, слитым без помощи расщепляемой протеазой последовательности между ними с Ν-терминальным компонентом (I), или лидерной последовательностью, слитой с помощью последовательности, которая расщепляется протеазой с Ν-терминальным компонентом (I) и является гетерологичной по отношению к препроглюкагону.
2. Слитый пептид по п.1, где компонент (I) является модифицированным СБР-1, включающим аминокислотную последовательность формулы III
Хаа7-Хаа8-С1и-О1у-ТЬг-Р11е-ТЬг-8ег-А8р-Уа1-8ег-Хаа8-Туг-Беи-С1и-Хаа22Хаа23-А1а-А1а-Хаа26-61и-РЬе-11е-Хаа30-Тгр-Ъеи-Уа1-Хаа34-Хаа35-Хаа36-Хаа37, где Хаа7 обозначает Б-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, 3-гидроксигистидин, гомогистидин, Ν-ацетилгистидин, а-фторметилгистидин, а-метилгистидин, 3-пиридилаланин, 2пиридилаланил или 4-пиридилаланин;
Хаа8 обозначает А1а, С1у, Vа1, Беи, Не, Бук, А1Ь, (1-аминоциклопропил)карбоновую кислоту, (1аминоциклобутил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклопентил)карбоновую кислоту, (1аминоциклогексил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогептил)карбоновую кислоту или (1аминоциклооктил)карбоновую кислоту;
Хаа18 обозначает 8ег, Бук или Агд;
Хаа22 обозначает С1у, С1и или А1Ь;
Хаа23 обозначает С1п, С1и, Бук или Агд;
Хаа26 обозначает Бук, С1и или Агд;
Хаа30 обозначает А1а, С1и или Агд;
Хаа34 обозначает Бук, С1и или Агд;
Хаа35 обозначает С1у или А1Ь;
Хаа36 обозначает Агд или Бук, амид или отсутствует;
Хаа37 обозначает С1у, А1а, С1и или Бук, амид или отсутствует.
3. Слитый пептид по п.1, где компонент (I) является СБР-1(7-35) или СБР-1(7-36).
4. Слитый пептид по любому из пп.1-3, в котором компонент (II) представляет собой пептидную последовательность, которая содержит последовательность, выбранную из 8ЕС ГО Ν0:23 (ΚΚ^ΡРЕЕVАIVЕЕ^) или 8ЕС ГО Ν0:24 (ΚΚ^ΡРЕЕVАIАЕЕ^), или последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% последовательности, представленной 8ЕС ГО Ν0:23 или 24.
5. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-4, в котором компонент (II) представляет собой пептидную последовательность, которая содержит последовательность, выбранную из 8ЕС ГО Ν0:2 (ΚΚ^ΡРЕЕVАIVЕЕ^С) или 8ЕС ГО Ν0:3 (ΚΚ^ΡРЕЕVАIАЕЕ^С), или последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% любой последовательности, представленной в 8ЕС ГО Ν0:2 или 3.
6. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-5, в котором компонент (I) и компонент (II) связаны непосредственно или связаны через линкерную последовательность.
7. Слитый пептид по п.6, в котором последовательность состоит из 1-10 аминокислот.
- 30 013796
8. Слитый пептид по одному из пп.1-7, где слитый пептид содержит последовательность, выбранную из 8Е0 ГО N0:8 (НАЕСТРТ8ПУ88УЬЕ6(2ААКЕР1А\УЬУК(ЖОВ.1ГОГРЕЕУА1АЕЕЬС1) или 8ЕО ГО N0:12 (НАЕСТРТ8ОУ88УЕЕО(ЗААКЕР1А^ЕУКОК<лК.КОРРЕЕУА1УЕЕЕС)! или последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% последовательностям, представленным в 8Е0 ГО N0: 8 или 12.
9. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-8, где слитый пептид содержит дополнительный компонент (III), связанный с С-концом компонента (II) и/или с ^концом компонента (I).
10. Слитый пептид по п.9, в котором компонент (III) содержит по меньшей мере четыре аминокислотных остатка, предпочтительно по меньшей мере 10 аминокислотных остатков или включает по меньшей мере 20 аминокислотных остатков.
11. Слитый пептид по п.9 или 10, в котором компонент (III) содержит по меньшей мере 4, предпочтительно по меньшей мере 10, более предпочтительно по меньшей мере 20 дополнительных аминокислотных остатков в ^концевой последовательности СЬР-2, такой как проглюкагон или СЬР-1(7-37).
12. Слитый пептид по одному из пп.9-11, в котором компонент (III) содержит последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:4 или 5, или последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% последовательности, представленной в 8Е0 ГО N0:4 или 5.
13. Слитый пептид по одному из пп.9-12, где слитый пептид содержит пептидную последовательность, выбранную из группы, которая включает 8Е0 ГО N0:6, 7, 10 и 11, или последовательность, гомологичную по меньшей мере на 80% последовательности, представленной в 8Е0 ГО N0:6, 7, 10 или 11.
14. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-13, в котором по меньшей мере одну из аминокислот дериватизируют путем ковалентной модификации боковой цепи встречающейся в естественных условиях аминокислоты, путем модификации пептидного каркаса, путем модификации №Н2- или карбоксильных концевых групп.
15. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-14, где слитый пептид содержит белок-носитель, прежде всего трансферрин или альбумин, в качестве компонента (IV).
16. Слитый пептид по п.14, в котором по меньшей мере одну из аминокислот дериватизуют с помощью липидной или углеводной группы.
17. Слитый пептид по п.14 или 16, в котором ^концевой остаток НЬ СЬР-1 (СЬР-1(7)) химически модифицируют на его №Н2-конце и/или гистидильной боковой цепи, прежде всего с помощью гидрофобного остатка.
18. Способ получения слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-17 с помощью твердофазного пептидного синтеза.
19. Слитый пептид по любому из пп.1-17 в качестве лекарственного средства для применения при терапии человека или животных.
20. Нуклеиновая кислота, кодирующая слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-13 или 15.
21. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.20.
22. Клетка-хозяин, содержащая экзогенно интродуцированную ДНК по п.20, в частности вектор по п.21, которая обладает способностью экспрессировать слитый пептид, где клетка-хозяин не является человеческой эмбриональной или зародышевой клеткой.
23. Способ получения слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-13 или 15, в котором микроорганизм, трансформированный путем включения нуклеиновой кислоты, кодирующей слитый пептид, ферментируют и выделяют белок.
24. Способ получения белка по п.23, заключающийся в том, что клетки животного выращивают в условиях, при которых белок экспортируется из клеток.
25. Применение слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-17, нуклеиновой кислоты по п.20, вектора по п.21 или клетки-хозяина по п.22 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения сахарного диабета типа I или II, устойчивости к инсулину, нарушений веса и связанных с ними заболеваний или состояний.
26. Применение слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-17, нуклеиновой кислоты по п.20, вектора по п.21 или клетки-хозяина по п.22 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения нейродегенеративных нарушений и связанных с ними заболеваний или состояний.
27. Применение слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-17, нуклеиновой кислоты по п.20, вектора по п.21 или клетки-хозяина по п.22 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения нарушений и заболеваний или состояний, ассоциированных с апоптозом.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP05020718A EP1767545B1 (en) | 2005-09-22 | 2005-09-22 | GLP-1 (Glucagon-like peptide-1) fusion polypeptides with increased peptidase resistance |
PCT/EP2006/009226 WO2007039140A1 (en) | 2005-09-22 | 2006-09-22 | Glp-1 ( glucagon-like peptide-1 ) fusion polypeptides with increased peptidase resistance |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200800699A1 EA200800699A1 (ru) | 2008-10-30 |
EA013796B1 true EA013796B1 (ru) | 2010-06-30 |
Family
ID=35700191
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200800699A EA013796B1 (ru) | 2005-09-22 | 2006-09-22 | Слитые полипептиды, содержащие glp-1 (глюкагон-подобный пептид-1), с повышенной устойчивостью к пептидазам |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8431533B2 (ru) |
EP (5) | EP2045265B1 (ru) |
JP (2) | JP5222729B2 (ru) |
KR (1) | KR20080064840A (ru) |
CN (1) | CN101273058A (ru) |
AT (1) | ATE448247T1 (ru) |
AU (1) | AU2006299134B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0616107A2 (ru) |
CA (1) | CA2619053A1 (ru) |
CY (1) | CY1109778T1 (ru) |
DE (1) | DE602005017628D1 (ru) |
DK (1) | DK1767545T3 (ru) |
EA (1) | EA013796B1 (ru) |
ES (3) | ES2397289T3 (ru) |
HK (1) | HK1129121A1 (ru) |
HR (1) | HRP20100062T1 (ru) |
IL (1) | IL188904A0 (ru) |
PL (1) | PL1767545T3 (ru) |
PT (1) | PT1767545E (ru) |
RS (1) | RS51319B (ru) |
SG (1) | SG165414A1 (ru) |
SI (1) | SI1767545T1 (ru) |
WO (1) | WO2007039140A1 (ru) |
ZA (1) | ZA200803488B (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2681857C2 (ru) * | 2013-08-13 | 2019-03-13 | ДжиМАКС БАЙОФАРМ ЭлЭлСи. | Антитело, специфически связывающееся с glp-1r, и его слитый с glp-1 белок |
WO2024144431A1 (ru) * | 2022-12-29 | 2024-07-04 | Авва Фармасьютикалс Лтд | Новый штамм-продуцент escherichia coli, продуцирующий гибридный белок cbd-hs-es-glp1, и способ получения полипептида glp-1 |
Families Citing this family (37)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2397289T3 (es) | 2005-09-22 | 2013-03-06 | Biocompatibles Uk Ltd. | Polipéptidos de fusión de GLP-1 (péptido 1 de tipo glucagón) con resistencia a peptidasa incrementada |
JP2009513627A (ja) * | 2005-10-27 | 2009-04-02 | ペプトロン カンパニー リミテッド | 生理活性物質−血液蛋白質複合体及びこれを利用する生理活性物質の安定化方法 |
US8841255B2 (en) | 2005-12-20 | 2014-09-23 | Duke University | Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides |
US20130172274A1 (en) | 2005-12-20 | 2013-07-04 | Duke University | Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties |
EP1854455B1 (en) * | 2006-05-10 | 2009-10-07 | Biocompatibles UK Limited | Spherical microcapsules comprising GLP-1 peptides, their production and use |
EP1972349A1 (en) * | 2007-03-21 | 2008-09-24 | Biocompatibles UK Limited | GLP-1 fusion peptides conjugated to polymer(s), their production and use |
EP1975176A1 (en) * | 2007-03-27 | 2008-10-01 | Biocompatibles UK Limited | Novel glp-1 fusion peptides, their production and use |
CN105727261A (zh) | 2008-06-27 | 2016-07-06 | 杜克大学 | 包含弹性蛋白样肽的治疗剂 |
EP2163243A1 (en) * | 2008-09-12 | 2010-03-17 | Biocompatibles UK Limited | Treatment of acute myocardial infarction (AMI) using encapsulated cells encoding and secreting GLP-1 peptides or analogs thereof |
CN101993485B (zh) * | 2009-08-20 | 2013-04-17 | 重庆富进生物医药有限公司 | 促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途 |
BR112012019992A2 (pt) * | 2010-02-11 | 2020-08-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag. | conjugados de igf-i poli (etileno glicol) |
KR20130099126A (ko) * | 2010-10-01 | 2013-09-05 | 가부시키가이샤 엠엠티 | 이뮤노글로불린 결합능을 갖는 펩타이드 |
CN102766204B (zh) * | 2011-05-05 | 2014-10-15 | 天津药物研究院 | 胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法和其应用 |
CN102363633B (zh) * | 2011-11-16 | 2013-11-20 | 天津拓飞生物科技有限公司 | 胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法、药物组合物和其应用 |
JP6525456B2 (ja) * | 2012-11-20 | 2019-06-05 | メデリス ダイアビーティーズ,エルエルシー | インスリン抵抗性のための改善されたペプチド製剤 |
CN104707131A (zh) * | 2013-12-13 | 2015-06-17 | 上海建华精细生物制品有限公司 | 一种药物组合物及其制备方法和用途 |
CN117180445A (zh) | 2014-05-28 | 2023-12-08 | 梅德瑞斯糖尿病有限责任公司 | 针对胰岛素抵抗的改良肽药物 |
JP6731953B2 (ja) | 2015-02-11 | 2020-07-29 | ジーエムエーエックス バイオファーム エルエルシー. | Glp−1r抗体融合タンパク質の安定な医薬溶液製剤 |
US11123405B2 (en) | 2015-12-23 | 2021-09-21 | The Johns Hopkins University | Long-acting GLP-1R agonist as a therapy of neurological and neurodegenerative conditions |
CN107818433B (zh) * | 2016-09-14 | 2022-07-05 | 菜鸟智能物流控股有限公司 | 取件方法、物流信息处理方法及装置、系统 |
WO2018104559A1 (en) * | 2016-12-09 | 2018-06-14 | Zealand Pharma A/S | Glp-1/glp-2 dual agonists |
WO2018104558A1 (en) * | 2016-12-09 | 2018-06-14 | Zealand Pharma A/S | Acylated glp-1/glp-2 dual agonists |
MX2019006486A (es) | 2016-12-09 | 2019-08-01 | Zealand Pharma As | Agonistas duales acilados de glp-1/glp-2. |
CN108341880B (zh) * | 2017-01-23 | 2023-07-04 | 天津药物研究院有限公司 | 含有胰高血糖素样肽-1和胰高血糖素的片段类似物的嵌合多肽及其用途 |
KR101827245B1 (ko) * | 2017-12-26 | 2018-02-08 | (주)제이유타이드 | 알라린을 주성분으로 하는 요독증 치료제 |
US11541028B2 (en) | 2018-01-03 | 2023-01-03 | Altimmune Inc. | Peptide pharmaceuticals for treatment of NASH and other disorders |
KR101903564B1 (ko) * | 2018-01-31 | 2018-11-13 | 한국지질자원연구원 | 제지공정에서 발생되는 부산물의 재활용 방법 |
HRP20221054T1 (hr) | 2018-04-05 | 2022-11-11 | Sun Pharmaceutical Industries Limited | Novi analozi glp-1 |
EP3901173A4 (en) | 2018-12-21 | 2022-11-23 | Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. | BISPECIFIC PROTEIN |
WO2021182928A1 (ko) * | 2020-03-12 | 2021-09-16 | 주식회사 에스엘메타젠 | 신규 이중 특이성 단백질 및 그의 용도 |
KR102349717B1 (ko) * | 2020-03-12 | 2022-01-11 | 주식회사 에스엘메타젠 | 신규 대사증후군 및 그와 관련된 질환 치료용 약학 조성물 |
WO2022015039A1 (ko) * | 2020-07-14 | 2022-01-20 | (주)지아이이노베이션 | 글루카곤-유사 펩타이드-1 및 글루카곤-유사 펩타이드-2를 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도 |
JP2023553362A (ja) * | 2020-11-27 | 2023-12-21 | ディーアンドディー ファーマテック インコーポレイテッド | ビオチン部分、脂肪酸部分またはその組合せを連結されて有する生物学的活性材料結合体 |
CN116940384A (zh) * | 2020-11-27 | 2023-10-24 | D&D制药技术股份有限公司 | 具有与生物素部分、脂肪酸部分或其组合偶联的生物活性材料缀合物的口服制剂 |
CN112661862B (zh) * | 2020-12-25 | 2023-03-31 | 深圳大学 | 一种融合蛋白及其制备方法和应用 |
CN113846124A (zh) * | 2021-09-26 | 2021-12-28 | 康霖生物科技(杭州)有限公司 | 一种用于糖代谢相关疾病基因治疗的核酸构建体 |
CN114621339B (zh) * | 2021-12-28 | 2022-09-23 | 北京惠之衡生物科技有限公司 | 一种长效glp-1衍生物 |
Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998008871A1 (en) * | 1996-08-30 | 1998-03-05 | Novo Nordisk A/S | Glp-1 derivatives |
US5861284A (en) * | 1991-02-19 | 1999-01-19 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for producing a biologically active recombinant cysteine-free parathyroid hormone (1-34) |
WO1999046283A1 (en) * | 1998-03-09 | 1999-09-16 | Zealand Pharmaceuticals A/S | Pharmacologically active peptide conjugates having a reduced tendency towards enzymatic hydrolysis |
WO2002046227A2 (en) * | 2000-12-07 | 2002-06-13 | Eli Lilly And Company | Glp-1 fusion proteins |
WO2003058203A2 (en) * | 2002-01-08 | 2003-07-17 | Eli Lilly And Company | Extended glucagon-like peptide-1 analogs |
US20030195154A1 (en) * | 2002-04-04 | 2003-10-16 | Kenneth Walker | Use of transthyretin peptide/protein fusions to increase the serum half-life of pharmacologically active peptides/proteins |
US20030221201A1 (en) * | 2001-08-30 | 2003-11-27 | Biorexis Pharmaceutical Corporation | Modified transferrin fusion proteins |
US20040146985A1 (en) * | 2001-07-19 | 2004-07-29 | Shanghai Hua-Yi Bio-Tech Lab | Method of producing insulinotropic GLP-1 (7-36) polypeptide and/or GLP-1 analogs |
EP1454629A2 (en) * | 2003-03-07 | 2004-09-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Insulinotrophic agent based on preproglucagon |
US6858576B1 (en) * | 1996-08-08 | 2005-02-22 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Methods for regulating gastrointestinal motility |
WO2005058958A2 (en) * | 2003-12-18 | 2005-06-30 | Novo Nordisk A/S | Novel glp-1 analogues linked to albumin-like agents |
WO2006010143A2 (en) * | 2004-07-13 | 2006-01-26 | Neose Technologies, Inc. | Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 [glp-1] |
Family Cites Families (71)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US586128A (en) * | 1897-07-13 | Toilet-paper holder | ||
US4352883A (en) * | 1979-03-28 | 1982-10-05 | Damon Corporation | Encapsulation of biological material |
ATE6548T1 (de) | 1979-10-16 | 1984-03-15 | Winfried Dr. Med. Stoecker | Vorrichtung zur durchfuehrung von mikroanalysen. |
US4596792A (en) | 1981-09-04 | 1986-06-24 | The Regents Of The University Of California | Safe vaccine for hepatitis containing polymerized serum albumin |
JPS5938877A (ja) | 1982-08-30 | 1984-03-02 | Musashi Eng Kk | 紙葉判別方法 |
US4737462A (en) | 1982-10-19 | 1988-04-12 | Cetus Corporation | Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β |
US4588585A (en) | 1982-10-19 | 1986-05-13 | Cetus Corporation | Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins |
US4518584A (en) | 1983-04-15 | 1985-05-21 | Cetus Corporation | Human recombinant interleukin-2 muteins |
DD224119A1 (de) | 1983-11-07 | 1985-06-26 | Univ Schiller Jena | Temperierbarer probentraeger |
US4599230A (en) | 1984-03-09 | 1986-07-08 | Scripps Clinic And Research Foundation | Synthetic hepatitis B virus vaccine including both T cell and B cell determinants |
US4599231A (en) | 1984-03-09 | 1986-07-08 | Scripps Clinic And Research Foundation | Synthetic hepatitis B virus vaccine including both T cell and B cell determinants |
US4959314A (en) | 1984-11-09 | 1990-09-25 | Cetus Corporation | Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins |
US4608251A (en) | 1984-11-09 | 1986-08-26 | Pitman-Moore, Inc. | LHRH analogues useful in stimulating anti-LHRH antibodies and vaccines containing such analogues |
US5116943A (en) | 1985-01-18 | 1992-05-26 | Cetus Corporation | Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein |
US4601903A (en) | 1985-05-01 | 1986-07-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccine against Neisseria meningitidis Group B serotype 2 invasive disease |
US5144139A (en) * | 1985-08-05 | 1992-09-01 | Biotrack, Inc. | Capillary flow device |
US4687529A (en) * | 1985-08-30 | 1987-08-18 | Miles Laboratories, Inc. | Method of making a reagent test device containing hydrophobic barriers |
CA1292176C (en) | 1985-09-18 | 1991-11-19 | Joel M. Blatt | Volume metering capillary gap device for applying a liquid sample onto a reactive surface |
US5017691A (en) | 1986-07-03 | 1991-05-21 | Schering Corporation | Mammalian interleukin-4 |
US6849708B1 (en) * | 1986-05-05 | 2005-02-01 | The General Hospital Corporation | Insulinotropic hormone and uses thereof |
US4965195A (en) | 1987-10-26 | 1990-10-23 | Immunex Corp. | Interleukin-7 |
US4904584A (en) | 1987-12-23 | 1990-02-27 | Genetics Institute, Inc. | Site-specific homogeneous modification of polypeptides |
ES2113879T3 (es) | 1990-01-24 | 1998-05-16 | Douglas I Buckley | Analogos de glp-1 utiles para el tratamiento de diabetes. |
CA2062338A1 (en) | 1991-03-15 | 1992-09-16 | Zia Yassinzadeh | Electronic control cartridge and method of simulating light transmission patterns |
GB9311147D0 (en) | 1993-05-28 | 1993-07-14 | Long Ashton Research Station | Regulation of plant growth |
US5705483A (en) | 1993-12-09 | 1998-01-06 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods |
US5512549A (en) | 1994-10-18 | 1996-04-30 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptide analogs, compositions, and methods of use |
BE1008987A3 (fr) | 1995-01-06 | 1996-10-01 | Robyn Pierre | Blocs refractaires a canalisations pour sols de fours verriers et installation dans les sols de circuits de refroidissement ou de chauffage, permettant d'ameliorer le controle thermique des sols et la qualite du verre. |
JP3643863B2 (ja) | 1995-08-09 | 2005-04-27 | アークレイ株式会社 | 液体保持具とその製造方法 |
DE69740176D1 (de) | 1996-03-01 | 2011-05-26 | Novo Nordisk As | Appetithemmendes Peptid, Zusammensetzung und Verwendung |
US6165739A (en) * | 1996-03-13 | 2000-12-26 | Compucyte Corporation | Multiple simultaneous testing media |
ATE289517T1 (de) | 1996-11-12 | 2005-03-15 | Novo Nordisk As | Verwendung von glp-1 peptiden |
CA2318376A1 (en) | 1998-01-12 | 1999-07-15 | Betagene, Inc. | Compositions and methods for regulated secretion from neuroendocrine cell lines |
WO1999044638A1 (en) * | 1998-03-06 | 1999-09-10 | Spectrx, Inc. | Photothermal structure for biomedical applications, and method therefor |
AU3047299A (en) | 1998-04-13 | 1999-11-01 | Modex Therapeutiques, S.A. | Methods of delivering glp-1 |
US7259136B2 (en) * | 1999-04-30 | 2007-08-21 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating peripheral vascular disease |
US6267954B1 (en) * | 1999-11-24 | 2001-07-31 | Universite De Paris V Rene-Descartes | Intraocular transplantation of encapsulated cells |
US6706159B2 (en) * | 2000-03-02 | 2004-03-16 | Diabetes Diagnostics | Combined lancet and electrochemical analyte-testing apparatus |
AU2001237254A1 (en) | 2000-03-08 | 2001-09-17 | Novo-Nordisk A/S | Lowering serum lipids |
DE10039643A1 (de) * | 2000-08-14 | 2002-02-28 | Max Planck Gesellschaft | Funktionalisierte Perylentetracarbonsäurediimide |
WO2002076878A2 (en) | 2001-02-09 | 2002-10-03 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method and structure for microfluidic flow guiding |
EP1401480B1 (en) | 2001-02-22 | 2012-11-28 | Novartis AG | Viral vectors encoding endostatin in the treatment of ocular neovascularization |
US20030034147A1 (en) * | 2001-05-31 | 2003-02-20 | Houck Glenn M. | Apparatus which eliminates the need for idling by trucks |
EP1412384B1 (en) | 2001-06-28 | 2007-12-26 | Novo Nordisk A/S | Stable formulation of modified glp-1 |
WO2003010305A1 (en) | 2001-07-27 | 2003-02-06 | Arhus Amt | Immortilized stem cells |
US7576050B2 (en) | 2001-07-31 | 2009-08-18 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | GLP-1 exendin-4 peptide analogs and uses thereof |
US20040143104A1 (en) * | 2001-08-08 | 2004-07-22 | Wadsworth Samuel C. | Methods of treating diabetes and other blood sugar disorders |
CN1635900A (zh) | 2001-08-28 | 2005-07-06 | 伊莱利利公司 | Glp-1和基础胰岛素的预混合物 |
US7166208B2 (en) * | 2004-03-03 | 2007-01-23 | Stephen Eliot Zweig | Apoenzyme reactivation electrochemical detection method and assay |
EP1790353A1 (en) * | 2001-12-29 | 2007-05-30 | Novo Nordisk A/S | Combined use of a GLP-1 compound and a modulator of diabetic late complications |
GB2388898B (en) | 2002-04-02 | 2005-10-05 | Inverness Medical Ltd | Integrated sample testing meter |
US20030143113A2 (en) * | 2002-05-09 | 2003-07-31 | Lifescan, Inc. | Physiological sample collection devices and methods of using the same |
EP1539210A4 (en) | 2002-09-06 | 2006-06-07 | Bayer Pharmaceuticals Corp | GLP-1 RECEPTOR MODIFIED AGONISTS AND THEIR PHARMACOLOGICAL METHODS OF USE |
US6969166B2 (en) | 2003-05-29 | 2005-11-29 | 3M Innovative Properties Company | Method for modifying the surface of a substrate |
US7057116B2 (en) | 2003-06-02 | 2006-06-06 | Intel Corporation | Selective reference plane bridge(s) on folded package |
JP4629047B2 (ja) * | 2003-06-12 | 2011-02-09 | イーライ リリー アンド カンパニー | Glp−1アナログ複合タンパク質 |
EP1498143A1 (en) | 2003-07-18 | 2005-01-19 | Aventis Pharma S.A. | Self-emulsifying and self-microemulsifying formulations for the oral administration of taxoids |
JP2007501811A (ja) | 2003-08-08 | 2007-02-01 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | 治療的な関心対象のタンパク質に対する遅延分子の選択的な化学物質接合のためのガラクトースオキシダーゼの使用。 |
WO2005034988A1 (en) | 2003-10-10 | 2005-04-21 | Novo Nordisk A/S | Long-acting molecules in sustained release formulations |
WO2005072216A2 (en) | 2004-01-20 | 2005-08-11 | The Curators Of The University Of Missouri | Supported molecular biofluid viscosity sensors for in vitro and in vivo use |
BRPI0507594A (pt) | 2004-02-11 | 2007-07-03 | Amylin Pharmaceuticals Inc | polipetìdeos hìbridos com propriedades selecionáveis |
DE602004011688D1 (de) | 2004-03-05 | 2008-03-20 | Egomedical Swiss Ag | Analyttestsystem zur bestimmung der konzentration eines analyten in einer physiologischen flüssigkeit |
JP2008537873A (ja) | 2004-03-31 | 2008-10-02 | セントカー・インコーポレーテツド | ヒトglp−1ミメティボディ、組成物、方法および用途 |
BRPI0419004A (pt) | 2004-08-13 | 2007-12-11 | Egomedical Technologies Ag | sistema de testes de analitos para determinar a concentração de um analito em um fluido fisiológico ou aquoso |
US7442682B2 (en) | 2004-10-19 | 2008-10-28 | Nitto Denko Corporation | Transepithelial delivery of peptides with incretin hormone activities |
EP1909823A2 (en) | 2005-07-29 | 2008-04-16 | Amprotein Corporation | Chimeric therapeutic agents |
ES2397289T3 (es) | 2005-09-22 | 2013-03-06 | Biocompatibles Uk Ltd. | Polipéptidos de fusión de GLP-1 (péptido 1 de tipo glucagón) con resistencia a peptidasa incrementada |
EP1854455B1 (en) | 2006-05-10 | 2009-10-07 | Biocompatibles UK Limited | Spherical microcapsules comprising GLP-1 peptides, their production and use |
EP1972349A1 (en) * | 2007-03-21 | 2008-09-24 | Biocompatibles UK Limited | GLP-1 fusion peptides conjugated to polymer(s), their production and use |
EP1975176A1 (en) * | 2007-03-27 | 2008-10-01 | Biocompatibles UK Limited | Novel glp-1 fusion peptides, their production and use |
EP2163243A1 (en) | 2008-09-12 | 2010-03-17 | Biocompatibles UK Limited | Treatment of acute myocardial infarction (AMI) using encapsulated cells encoding and secreting GLP-1 peptides or analogs thereof |
-
2005
- 2005-09-22 ES ES08021837T patent/ES2397289T3/es active Active
- 2005-09-22 AT AT05020718T patent/ATE448247T1/de active
- 2005-09-22 EP EP08021837A patent/EP2045265B1/en active Active
- 2005-09-22 EP EP05020718A patent/EP1767545B1/en active Active
- 2005-09-22 DE DE602005017628T patent/DE602005017628D1/de active Active
- 2005-09-22 PT PT05020718T patent/PT1767545E/pt unknown
- 2005-09-22 PL PL05020718T patent/PL1767545T3/pl unknown
- 2005-09-22 RS RSP-2010/0039A patent/RS51319B/sr unknown
- 2005-09-22 SI SI200530887T patent/SI1767545T1/sl unknown
- 2005-09-22 ES ES05020718T patent/ES2336575T3/es active Active
- 2005-09-22 DK DK05020718.2T patent/DK1767545T3/da active
-
2006
- 2006-09-22 JP JP2008531616A patent/JP5222729B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-09-22 AU AU2006299134A patent/AU2006299134B2/en not_active Ceased
- 2006-09-22 ZA ZA200803488A patent/ZA200803488B/xx unknown
- 2006-09-22 KR KR1020087009543A patent/KR20080064840A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-09-22 EA EA200800699A patent/EA013796B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-09-22 WO PCT/EP2006/009226 patent/WO2007039140A1/en active Application Filing
- 2006-09-22 CN CNA2006800350367A patent/CN101273058A/zh active Pending
- 2006-09-22 EP EP06792228A patent/EP1926748B1/en not_active Not-in-force
- 2006-09-22 SG SG201006921-9A patent/SG165414A1/en unknown
- 2006-09-22 CA CA002619053A patent/CA2619053A1/en not_active Abandoned
- 2006-09-22 US US11/991,562 patent/US8431533B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-09-22 BR BRPI0616107-3A patent/BRPI0616107A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-09-22 EP EP10009718A patent/EP2261245A1/en not_active Withdrawn
- 2006-09-22 ES ES06792228T patent/ES2394218T3/es active Active
- 2006-09-22 EP EP09014513A patent/EP2174952A3/en not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-01-21 IL IL188904A patent/IL188904A0/en unknown
-
2009
- 2009-10-05 HK HK09109186.6A patent/HK1129121A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-02-02 HR HR20100062T patent/HRP20100062T1/hr unknown
- 2010-02-11 CY CY20101100139T patent/CY1109778T1/el unknown
-
2012
- 2012-05-29 US US13/482,354 patent/US8853159B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-01-25 JP JP2013012558A patent/JP2013099352A/ja active Pending
Patent Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5861284A (en) * | 1991-02-19 | 1999-01-19 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for producing a biologically active recombinant cysteine-free parathyroid hormone (1-34) |
US6858576B1 (en) * | 1996-08-08 | 2005-02-22 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Methods for regulating gastrointestinal motility |
WO1998008871A1 (en) * | 1996-08-30 | 1998-03-05 | Novo Nordisk A/S | Glp-1 derivatives |
WO1999046283A1 (en) * | 1998-03-09 | 1999-09-16 | Zealand Pharmaceuticals A/S | Pharmacologically active peptide conjugates having a reduced tendency towards enzymatic hydrolysis |
WO2002046227A2 (en) * | 2000-12-07 | 2002-06-13 | Eli Lilly And Company | Glp-1 fusion proteins |
US20040146985A1 (en) * | 2001-07-19 | 2004-07-29 | Shanghai Hua-Yi Bio-Tech Lab | Method of producing insulinotropic GLP-1 (7-36) polypeptide and/or GLP-1 analogs |
US20030221201A1 (en) * | 2001-08-30 | 2003-11-27 | Biorexis Pharmaceutical Corporation | Modified transferrin fusion proteins |
WO2003058203A2 (en) * | 2002-01-08 | 2003-07-17 | Eli Lilly And Company | Extended glucagon-like peptide-1 analogs |
US20030195154A1 (en) * | 2002-04-04 | 2003-10-16 | Kenneth Walker | Use of transthyretin peptide/protein fusions to increase the serum half-life of pharmacologically active peptides/proteins |
EP1454629A2 (en) * | 2003-03-07 | 2004-09-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Insulinotrophic agent based on preproglucagon |
WO2005058958A2 (en) * | 2003-12-18 | 2005-06-30 | Novo Nordisk A/S | Novel glp-1 analogues linked to albumin-like agents |
WO2006010143A2 (en) * | 2004-07-13 | 2006-01-26 | Neose Technologies, Inc. | Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 [glp-1] |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
DRUCKER D.J.: "Glucagon-like peptides: regulators of cell proliferation, differentiation, and apoptosis", MOLECULAR ENDOCRINOLOGY, BALTIMORE, MD, US, vol. 17, no. 2, February 2003 (2003-02), pages 161-171, XP002979356, ISSN: 0888-8809 * abstract; figure 1; from the last paragraph on page 164 to the first paragraph on page 167 * * |
KIEFFER T.J. ET AL.: "THE GLUCAGON-LIKE PEPTIDES", ENDOCRINE REVIEWS, BALTIMORE, MD, US, vol. 20, no. 6, December 1999 (1999-12), pages 876-913, XP008010226, page 899, right-hand column, lines 8-30; figures 4, 8 * |
PERRY TRACY ANN ET AL.: "Enhancing central nervous system endogenous GLP-1 receptor pathways for intervention in Alzheimer's disease", CURRENT ALZHEIMER RESEARCH, vol. 2, no. 3, July 2005 (2005-07), pages 377-385, XP001246463, ISSN: 1567-2050, abstract * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2681857C2 (ru) * | 2013-08-13 | 2019-03-13 | ДжиМАКС БАЙОФАРМ ЭлЭлСи. | Антитело, специфически связывающееся с glp-1r, и его слитый с glp-1 белок |
WO2024144431A1 (ru) * | 2022-12-29 | 2024-07-04 | Авва Фармасьютикалс Лтд | Новый штамм-продуцент escherichia coli, продуцирующий гибридный белок cbd-hs-es-glp1, и способ получения полипептида glp-1 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA013796B1 (ru) | Слитые полипептиды, содержащие glp-1 (глюкагон-подобный пептид-1), с повышенной устойчивостью к пептидазам | |
US20220249614A1 (en) | Methods of treating or ameliorating metabolic disorders using growth differentiation factor 15 (gdf-15) | |
EP1975176A1 (en) | Novel glp-1 fusion peptides, their production and use | |
ES2949553T3 (es) | Composición para el tratamiento de la diabetes, que contiene conjugado de análogo de insulina de acción prolongada y conjugado de péptido de secreción de insulina de acción prolongada | |
EP1972349A1 (en) | GLP-1 fusion peptides conjugated to polymer(s), their production and use | |
EP2552951A1 (en) | Novel glucagon analogues | |
JP2012051894A (ja) | 修飾glp−1の安定な処方剤 | |
WO2012130866A1 (en) | Novel glucagon analogues | |
US11130794B2 (en) | Bifunctional compounds | |
WO2004089985A1 (en) | Stable pharmaceutical compositions | |
AU2012202972A1 (en) | GLP-1 fusion peptides, their production and use |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |