EA007186B1 - Производные 3-(4-амидопиррол-2-илметилиден)-2-индолинона в качестве ингибиторов протеинкиназ - Google Patents
Производные 3-(4-амидопиррол-2-илметилиден)-2-индолинона в качестве ингибиторов протеинкиназ Download PDFInfo
- Publication number
- EA007186B1 EA007186B1 EA200300793A EA200300793A EA007186B1 EA 007186 B1 EA007186 B1 EA 007186B1 EA 200300793 A EA200300793 A EA 200300793A EA 200300793 A EA200300793 A EA 200300793A EA 007186 B1 EA007186 B1 EA 007186B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- oxo
- methyl
- dihydro
- dimethyl
- pyrrole
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
- C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
- C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D471/04—Ortho-condensed systems
Abstract
Настоящее изобретение относится к соединениям пирролзамещенного 2-индолинона и их фармацевтически приемлемым солям, которые модулируют активность протеинкиназ и, следовательно, ожидается, что они будут полезны в предупреждении и лечении клеточных расстройств, связанных с протеинкиназами, таких как рак.
Description
Приоритетные заявки
По данной заявке испрашивается приоритет по предварительным заявкам 60/321361, поданной 15 августа 2001г., и 60/268683, поданной 15 февраля 2001г., причем полное содержание обеих заявок включено сюда путем ссылки.
Предшествующий уровень техники Область изобретения
Настоящее изобретение относится к некоторым производным 3-(4-амидопиррол-2-илметилиден)-2индолинона, которые модулируют активность протеинкиназ (РК). Соединения по данному изобретению, следовательно, полезны при лечении расстройств, связанных с аномальной активностью РК. Также раскрыты фармацевтические композиции, содержащие эти соединения, способы лечения заболеваний с использованием фармацевтических композиций, содержащих эти соединения, и способы их получения.
Уровень техники
РК представляют собой ферменты, которые катализируют фосфорилирование гидроксигрупп на тирозиновых, сериновых и треониновых остатках в белках. Последствия этой кажущейся простой активности являются поразительными; клеточный рост, дифференцировка и пролиферация, то есть фактически все аспекты жизни клетки, тем или другим образом зависят от активности РК. Более того, аномальная активность РК связана со множеством расстройств, варьирующих от относительно не угрожающих жизни заболеваний, таких как псориаз, до чрезвычайно вирулентных заболеваний, таких как глиобластома (рак головного мозга).
РК могут быть удобно разбиты на два класса, протеинтирозинкиназы (РТК) и серинтреонинкиназы (8ТК).
Одним из первичных аспектов активности РТК является их взаимодействие с рецепторами факторов роста. Рецепторы факторов роста представляют собой белки клеточной поверхности. При связывании лиганда фактора роста рецепторы факторов роста переходят в активную форму, которая взаимодействует с белками на внутренней поверхности клеточной мембраны. Это приводит к фосфорилированию на тирозиновых остатках рецептора и других белков и к образованию внутри клетки комплексов с рядом цитоплазматических сигнальных молекул, которые, в свою очередь, осуществляют многочисленные клеточные ответы, такие как деление клеток (пролиферация), клеточная дифференцировка, клеточный рост, экспрессия метаболических эффектов во внеклеточное микроокружение и т.д. Для более полного рассмотрения см. §сЫе881идег апб и11г1сН. Ленгой, 9: 303-391 (1992), который включен путем ссылки, включая любые графические материалы, как если бы был полностью приведен здесь.
Рецепторы факторов роста с активностью РТК известны как рецепторные тирозинкиназы (КТК). Они включают в себя большое семейство трансмембранных рецепторов с разнообразной биологической активностью. В настоящее время идентифицировано по меньшей мере девятнадцать (19) разных подсемейств КТК. Примером их является подсемейство, обозначенное как НЕК КТК, которое включает в себя ЕСЕК (ерййе11а1 дго\\И1 ГасЮг гесерЮг, рецептор эпителиального фактора роста), НЕК2, НЕК3 и НЕК4. Эти КТК состоят из внеклеточного гликозилированного лигандсвязывающего домена, трансмембранного домена и внутриклеточного цитоплазматического каталитического домена, который может фосфорилировать тирозиновые остатки на белках.
Еще одно подсемейство КТК состоит из инсулинового рецептора (1К), рецептора инсулиноподобного фактора роста I (1СЕ-1К) и рецептора, родственного инсулиновому рецептору (1КК). 1К и 1СЕ-1К взаимодействуют с инсулином, 1СЕ-1 и 1СЕ-11 с образованием гетеротетрамера из двух полностью внеклеточных гликозилированных α-субъединиц и двух β-субъединиц, которые пересекают клеточную мембрану и которые содержат тирозинкиназный домен.
Третье подсемейство КТК называют группой рецептора тромбоцитарного фактора роста (РОСЕК), которая включает РОСЕКа, РОСЕКв, С8Е1К, с-ΚίΙ и с-Гшз. Эти рецепторы состоят из гликозилированных внеклеточных доменов, состоящих из разного количества иммуноглобулинподобных петель, и внутриклеточного домена, где тирозинкиназный домен прерывается неродственными аминокислотными последовательностями.
Еще одна группа, которую из-за ее сходства с подсемейством РОСЕК иногда относят к последнему, представляет собой рецепторное подсемейство киназы печени эмбриона (Г1к). Считают, что эта группа состоит из рецепторной киназы печени эмбриона-1 с киназным встроенным доменом (КОК/РЬК-1, УЕСЕ-К2), Г1к-1К, Г1к-4 и Гшз-подобной тирозинкиназы 1 (ΠΙ-Ι).
Еще одним членом семейства тирозинкиназного рецептора фактора роста является подгруппа рецептора фактора роста фибробластов (ЕСЕ). Эта группа состоит из четырех рецепторов ЕСЕК 1-4 и семи лигандов ЕСЕ 1-7. Хотя это еще точно не определено, рецепторы, по-видимому, состоят из гликозилированного внеклеточного домена, содержащего вариабельное количество иммуноглобулинподобных петель, и внутриклеточного домена, в котором тирозинкиназная последовательность прерывается областями неродственных аминокислотных последовательностей.
Еще одним членом семейства тирозинкиназного рецептора фактора роста является подгруппа рецептора сосудистого эндотелиального фактора роста (УЕСЕ). УЕСЕ представляет собой димерный
- 1 007186 гликопротеин, похожий на РЭСР, но имеющий отличающиеся биологические функции и специфичность в отношении клеток-мишеней ίη νΐνο. Более конкретно, в настоящее время считают, что УЕСР играет существенную роль в васкулогенезе и ангиогенезе.
Более полный список известных подсемейств ВТК описан в Ρ1ο\νιη;·ιη е! а1., ΌΝ&Ρ, 7(6): 334-339 (1994), который включен сюда путем ссылки, включая любые графические материалы, как если бы был полностью приведен здесь.
В дополнение к этим ВТК также существует семейство полностью внутриклеточных РТК, называемых нерецепторные тирозинкиназы или клеточные тирозинкиназы. Это последнее обозначение, сокращаемое как СТК (се11и1аг 1угокше кшакек), будет использоваться здесь. СТК не содержат внеклеточных и трансмембранных доменов. В настоящее время идентифицировано более 24 СТК в 11 подсемействах (8гс, Ргк, В!к, Скк, АЫ, Ζαρ70, Рек, Ррк, Рак, 1ак и Аск). До сих пор подсемейство 8гс, по-видимому, представляет собой самую большую группу СТК и включает в себя 8гс, Уек, Руп, Ьуп, Ьск, В1к, Нск, Рдг и Угк. Для более детального рассмотрения СТК см. Во1еп, Опсодепе, 8: 2025-2031 (1993), которая включена сюда путем ссылки, включая любые графические материалы, как если бы была полностью приведена здесь.
Серин/треонинкиназы, 8ТК, подобно СТК являются преимущественно внутриклеточными, хотя существует несколько рецепторных киназ 8ТК-типа. 8ТК являются наиболее распространенными из цитозольных киназ, то есть киназ, которые осуществляют свою функцию в части цитоплазмы, отличной от цитоплазматических органелл и цитоскелета. Цитозоль представляет собой область внутри клетки, где происходит большая часть посреднической метаболической и биосинтетической клеточной активности, например именно в цитозоле белки синтезируются на рибосомах.
ВТК, СТК и 8ТК - все вовлечены во множество патогенных состояний, включая, в значительной степени, рак. Другие патогенные состояния, которые связаны с РТК, включают, без ограничения, псориаз, цирроз печени, диабет, ангиогенез, рестеноз, глазные болезни, ревматоидный артрит и другие воспалительные расстройства, иммунологические расстройства, как, например, аутоиммунное заболевание, сердечно-сосудистое заболевание, как, например, атеросклероз, и ряд почечных расстройств.
В отношении рака, двум основным гипотезам удалось объяснить, что избыточная клеточная пролиферация, ведущая в развитии опухоли, относится к функциям, про которые известно, что они регулируются РК. То есть предположили, что злокачественный клеточный рост является результатом нарушения в механизмах, которые контролируют клеточное деление и/или дифференцировку. Было показано, что белковые продукты ряда протоонкогенов вовлечены в пути сигнальной трансдукции, которые регулируют клеточный рост и дифференцировку. Эти белковые продукты протоонкогенов включают внеклеточные факторы роста, трансмембранные РТК-рецепторы факторов роста (ВТК), цитоплазматические РТК (СТК) и цитозольные 8ТК, обсуждавшиеся выше.
Ввиду очевидной связи между связанными с РК клеточными активностями и широким разнообразием человеческих расстройств, не удивительно, что огромное количество усилий тратится в попытке идентифицировать пути модуляции активности РК. В некоторые из этих усилий вовлечены биомиметические подходы, использующие большие молекулы, похожие на те, что вовлечены в действительные клеточные процессы (например, мутантные лиганды (заявка на патент США № 4966849); растворимые рецепторы и антитела (заявка № XVО 94/10202, Кепба11 апб Тйотак, Ргос. Νη1'1 Асаб. 8ск, 90:10705-09 (1994), К1ш, е! а1. №!иге, 362:841-844 (1993)); РНК-лиганды (1е1шек, е! а1., ВюсйетщЦу, 33:10450-56; Такапо, е! а1., Мо1. Вю. Се11 4:358А (1993); Кшке11а, е! а1., Ехр. Се11 Век. 199:56-62 (1992); νπ§ϋ, е! а1., 1. Се11и1аг Рйук., 152:448-57) и ингибиторы тирозинкиназы (νθ 94/03427; νθ 92/21660; νθ 91/15495; νθ 94/14808; патент США № 5330992; Мапаш, е! а1., Ргос. Ат. Аккос. Сапсег Век., 35:2268 (1994)).
В дополнение к вышесказанному, были сделаны попытки идентифицировать небольшие молекулы, которые действуют как ингибиторы РК. Например, бис-моноциклические, бициклические и гетероциклические арильные соединения (РСТ νθ 92/20642), виниленазаиндольные производные (РСТ νθ 94/14808) и 1-циклопропил-4-пиридилхинолоны (патент США № 5330992) были описаны как ингибиторы тирозинкиназ. Соединения стирила (патент США № 5217999), стирилзамещенные пиридильные соединения (патент США № 5302606), хиназолиновые производные (заявка ЕР № 0566266 А1), селенаиндолы и селениды (РСТ νθ 94/03427), трициклические полигидроксильные соединения (РСТ νθ 92/21660) и соединения бензилфосфоновой кислоты (РСТ νθ 91/15495) - все описаны в качестве ингибиторов РТК, полезных при лечении рака.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к некоторым производным 3-(4-амидопиррол-2-илметилиден)-2индолинона, которые проявляют РК-модулирующую способность и, следовательно, полезны при лечении расстройств, связанных с аномальной активностью РК.
Одно воплощение данного изобретения представляет собой соединение формулы (I)
- 2 007186
где К1 выбран из группы, состоящей из водорода, галогено, алкила, галогеноалкокси, циклоалкила, гидрокси, алкокси, -С(О)К8 и -С(О)КК.12К13;
К2 выбран из группы, состоящей из водорода, галогено, алкила, тригалогенометила, гидрокси, алкокси и -С(О)К8;
К3, К4 и К5 представляют собой независимо водород или алкил;
Ζ представляет собой арил, гетероарил, гетероцикл или -ΝΚ15Κ16, где К15 и К16 независимо представляют собой водород или алкил; либо К15 и К16 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоаминогруппу;
К6 выбран из группы, состоящей из водорода или алкила;
К7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила и гетероарила;
К8 выбран из группы, состоящей из гидрокси и алкокси;
К12 и К13 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила и арила; либо К12 и К13 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоамино;
или его фармацевтически приемлемую соль;
при условии, что это соединение не представляет собой
и где алкил означает (Д-Сщалкил, возможно замещенный галогеном или гидрокси;
циклоалкил означает С3.8 моноциклическое кольцо или Сц_12 конденсированное или полициклическое кольцо, где одно или более чем одно из колец может содержать одну и более чем одну двойную связь, но ни одно из колец не имеет полностью сопряженной пи-электронной системы;
арил означает моноциклическую или конденсированную полициклическую С6.12 кольцевую группу, имеющую полностью сопряженную пи-электронную систему и возможно замещенную одним или более чем одним галогено или циано;
гетероарил означает моноциклическую или конденсированную кольцевую группу из 5-12 атомов, содержащую 1-4 кольцевых гетероатома, выбранных из Ν, О или 8, имеющих полностью сопряженную пи-электронную систему, и возможно замещенную гидрокси;
гетероциклил означает насыщенное циклическое кольцо из 3-8 атомов, в котором один или два кольцевых атома представляют собой гетероатомы, выбранные из Ν, О или 8(О)П (где η представляет собой целое число от 0 до 2), где один или два С атома гетероцикла возможно могут быть замещены карбонильной группой и где гетероциклическое кольцо возможно замещено одним незамещенным С1-С4алкилом или двумя незамещенными С1-С4алкилами;
гетероциклоамино означает насыщенное циклическое кольцо из 3-8 атомов, в котором по меньшей мере один из кольцевых атомов представляет собой азот и возможно один или два дополнительных кольцевых атома представляют собой гетероатомы, выбранные из Ν, О или 8(О)П (где η представляет собой целое число от 0 до 2), где один или два атома С могут быть возможно замещены карбонильной группой и где гетероциклоаминокольцо возможно замещено одним незамещенным С1-С4алкилом или двумя незамещенными С1-С4алкилами; и арилокси означает -О-С6_12арил или О-гетероарил.
Другое воплощение представляет собой соединение формулы I, где:
К1 выбран из группы, состоящей из водорода, галогено, алкила, циклоалкила, гидрокси, алкокси, -С(О)К8 и -Ο(Ο)ΝΚ12Κ13;
К2 выбран из группы, состоящей из водорода, галогено, алкила, тригалогенометила, гидрокси, алкокси;
-3007186
К3, К4 и К5 представляют собой независимо водород или алкил;
Ζ представляет собой арил, гетероарил, гетероцикл или -ΝΚ?5Κ16, где К15 и К16 независимо представляют собой водород или алкил; либо К15 и К16 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоаминогруппу;
К6 выбран из группы, состоящей из водорода или алкила;
К7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила, и гетероарила;
К8 выбран из группы, состоящей из гидрокси и алкокси;
К и К независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила и арила, либо К и К вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероцикл;
или его фармацевтически приемлемую соль.
Еще одно воплощение представляет собой соединение формулы (1а)
где:
К1, К3, К4 и К5 представляют собой водород;
К2 представляет собой фтор и находится в положении 5 индолинонового кольца; и
Ζ представляет собой морфолин-4-ил;
К6 и К7 представляют собой метил; и стереохимия по *С представляет собой (8).
Еще одним воплощением данного изобретения является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
| № соединения | Структура | Название |
| 2Ν | ЕηργΥ Н Н | 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(3)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид |
| 3Ν | н | 2,4-ди метил-5-[2-оксо-1,2-дигид рои ндол-(3)-илиденметил]-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пропил)-амид |
| 4Ν | н н Ан М н н | 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гид рокси-3-морфол ин-4-ил-п рол ил)амид |
-4007186
| 5Ν | С Η II >=° Η | 'Ν-ν~Ό ч Н ОН к^о | 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-индолилиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пропил)-амид |
| 6Ν | 0 | 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидро- | |
| н /V | Н ОН Ν=Ν | индол-илиденметил]-1 Н-пиррол-3- | |
| νΑΑ | карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- | ||
| 0 I >=° Чз^и н | [1,2,3]триазол-1-ил-пропил )-амид | ||
| 7Ν | 0 | 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол- | |
| н 1Г\ | н ОН Ν=Ν | илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол- | |
| у? N ρνχ4_Η | 3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- | ||
| В I >° Ч^-Ν н | [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил )-амид | ||
| 8Ν | 0 | 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол- | |
| н /~ч | Α'ζ4χ>4νζ4 Ч.н он ^=ν | илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол- | |
| У/ N н | 3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- | ||
| чДа° н | [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил )-амид | ||
| 9Ν | < | > | 5-[5-бром-2-оксо-1,2-ди гидро-индол- |
| н Зг\ | ч М ОН №Ν | илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол- | |
| Ίι Вг>^г^’ Н | 3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- | ||
| ТЫ'*0 Чз^Н н | [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил)-амид | ||
| 1 -ΙΝ | и но-/ {Λην | 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- | |
| А. >=о | ил]метилен}-2-оксо-М-фенил-2,3- | ||
| нл | ..лк | ди гидро-1 Н-индол-5-карбоксамид | |
| ΑΑ-4γ | ΥΆ >ОН | ||
| н кА | н | ||
| 12Ν | X | (3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | |
| но-/ | метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- | ||
| / | >; | ил]метилен}-М-метил-2-оксо-2,3ди гидро-1 Н-индол-5-карбоксамид | |
| н | V %° .Ул | ||
| А I 'н'ЧСт4 | |||
| ^он | |||
| Η 4ΧΝΗ | |||
| 13Ν | (3£)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | ||
| но-/ | метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- | ||
| Он/ | ил]метилен}-М-(2-гидроксиэтил)-2- | ||
| н | А°° | оксо-2,3-дигидро-1 Н-индоп-5- | |
| 0 | г4/ | карбоксамид | |
| Л=он | |||
| Н «А* | Ν Н | ||
| 14Ν | V} | М-[3-(диэтиламино)-2-гидроксипропил]- 4-(4-фторфенил)-2-метил-5-{[5- | |
| р. но/ | (морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо-1,2- | ||
| О«( | дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}- | ||
| н | 4—\ Л=° | 1 Н-пиррол-З-карбоксамид | |
| 0 | ΥΆ^ | ||
| оС№ | Л=он 'ΝΗ |
-5007186
| 15Ν | А Λν н Ч | Η. | Ρ но-/ ^=4 >ο ΑΤί ΪΙ Ы ! η >=ο ΊΗ | 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил )-3-(4фторфенил)-5-метил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-М-изопропил-2-оксо-2,3дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид |
| 16Ν | Λ | 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-3- | ||
| кно) | (2,4-Дифторфенил)-5-метил-1 Н- | |||
| ο™ | пиррол-2-ил]метилен}-2-оксо-Ы-фенил- | |||
| о, • Η | ο к | н-Сл~£ Ί/ Ν Ύ>οΗ /-νη | 2,3-дигидро-1Н-индол-5-карбоксамид | |
| 17Ν | ν} _ ) | 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-3- | ||
| ΡΆ° \ 0Н? | (2,4-дифторфенил)-5-метил-1 Нпиррол-2-ил]метилен}-М-(2- | |||
| Ην | гидроксиэтил )-2-оксо-2,3-дигидро-1Н- | |||
| Η | Ο | Λ=οΗ Η | индол-5-карбоксамид | |
| 18Ν | а | 3-{[3-(4-цианофенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2- | ||
| 4 | но-/ | гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | ||
| Λην2 | метил-1 Н-пиррол-2-ил]метилен}-М,М- | |||
| Η 0 | π | \ /^=0 ЛК | диметил-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол- 5-карбоксамид | |
| ''ν/Γ'ι ' Μ | ΝΗ | Η =0 | ||
| 19Ν | К ) | 4-(4-цианофенил)-1Ч-[3-(диэтиламино)- 2-гидроксипропил]-2-метил-5-{[5- | ||
| но-/ | (морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо-1,2- | |||
| Ηη | Ηην2 а >о | дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метип}- 1Н-пиррол-3-карбоксамид | ||
| 0 | ?/ ΰ | |||
| Ρ | \ Η >=0 ΝΗ | |||
| 20Ν | 3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3(диэтиламино)-2- | |||
| С1. НО-/ | гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | |||
| Ннг? | метил-1 Н-пиррол-2-ил]метилен}-2- | |||
| Η | λββ\_Λϊ0 | оксо-Ы-фенил-2,3-дигидро-1Н-индол-5- | ||
| ал Η | Ο | Ί/ X Η >0 ΝΗ | карбоксамид | |
| 21Ν | Λ | 3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2- | ||
| с\ | Н0-/ | гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | ||
| ζ | χ | метил-1 Н-пиррол-2-ил]метилен}-М- | ||
| Η | \ /Кэ ο | изопропил-2-оксо-2,3-ди гидро-1 Н- | ||
| ^Ν^Ι] Η 4^ | Д ^ΝΗ | Η =ο | индол-5-карбоксамид | |
| 22Ν | Ν'Λ | 5-[(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси- | ||
| Η. Η | Η -Ο | V -—С Ν £η οη | 3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4- диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
-6007186
| 23Ν | Ν-Д η X η 0Η кДчм Η | 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси3 -(2 Н-тетразол-2-и л )π ρο π и л]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 24Ν | МД 9. η~Γ·ή νΗν 0Η ΌΦΗ Η | И-[2-гидрокси-3-(2Н-тетразол-2ил)пропил]-2,4-диметил-5-{[2-оксо-5трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
| 25Ν | ^Ν ο /-ν^·ν °Η I τ Η | 5-[(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[2-гидрокси3-(1 Н-тетразол-1 -ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 26Ν | ν+Ι 1 Ν νΑδ Γ^-Ν^ С Η Η | 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-1М-[2-гидрокси3-(1Н-тетразол-1-ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 27Ν | Ν% ο /-Η<_Ν'ί' нх~Ъ^ 0Η ΪΣ+ο Η | 1М-[2-гидрокси-3-( 1 Н-тетразол-1 ил)пропил]-2,4-диметил-5-{[2-оксо-5трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
| 28Ν | ч °кг<<5 \У-/н он уФА ϊχν 4ί+-Ν н | М-[3-[2,6-диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-5-[(5-фтор-2-оксо-1,2дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2, 4-ди метил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 29Ν | ΧςΡ н | 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-{3-[2,6диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-2,4-ди метил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 30Ν | <3 '-/'Сд р \ НЧ' он 4Р уллн €0=° н | М-{3-[2,6-диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-2,4-диметил-5-{[2оксо-5-(трифторметокси)-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден]метил}-1 Н-пирролЗ-карбоксамид |
| 34Ν | \Ώ~ί Η °н 0 Η | 5-[(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси3-(3-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1ил)пропил]-2,4-диметил-1 Н-пиррол-3карбоксамид |
| 35Ν | V х 1 '-ГР ψ он° Ό>θΗ Η | М-[2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]-2,4диметил-5-{(2)-[2-оксо-5-(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗН-индол-3илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
-7 007186
| 36Ν | V Н он ° ο'γνΐ н I X Н | 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-ди гидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси3-(3-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоксамид |
| 37Ν | О γΧΝΧ-Η он 0 О-Ν °Н Н | Ν-[3-(1 ^-диоксидотиоморфолин-4-ил)2-гидроксипропил]-2,4-диметил-5-[(2оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 38Ν | 0 Η. ΡΥ>4_ н I Т >о Н | М-[3-(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)2-гидроксипропил]-5-[(5-фтор-2-оксо- 1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 39Ν | 0 Μ ΧΑΝ'ν^Ν^Ο он ΟΙΥΑ> н н | 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-ил иден)метил]-Ы-[3-(1,1 диоксидотиоморфолин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 40Ν | о н ΧτΑνύΌ·0 ООО-н он 'Ά вг^Ц! н Т Т>о н | 5-[(5-бром-2-оксо-1,2-ди гидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[3-(1,1диоксидотиоморфолин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 47Ν | ϊΎ. н | 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-ди ги дро-и ндол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид |
| 48Ν | с‘у^2у%н н | 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-Зилиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид |
| 49Ν | нА Η'γΧζϊΧ он и | 2,4-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид |
| 50Ν | л/έ η^3Υη он с <! ΡΥ4Τ>οΗ Η’ | 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-пропил]-амид |
| 51Ν | Ά . л^Ч» Η 0Η _, II Υ4τ\Μθ Η Η | 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-пропил]-амид |
| 52Ν | Ρ’ μ-Ν* н Η | 2,4-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-пропил]-амид |
-8007186
Еще одним воплощением данного изобретения является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
| № соединения | Структура | Название |
| 28 | О /Л он V о н н | 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид |
| 38 | • 0 АЛН он %° Н | 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(37)-илиденметил]-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пропил)-амид |
| 48 | О уАргп. АЛН он ν Н н · | 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид |
| 58 | О /Л о» χο Н хО-м Н | 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил ]-2,4-ди метил-1 Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид |
| 68 | О н он ν=ν ° н | 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(37)-илиденметил]-1 Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил)-амид |
| 78 | 0 γΑΥΥ ,λνχ, н °н ΡΥΥ>οΗ Η | 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1 -илпропил)-амид |
| 88 | Υ-Αν^'Υ^ν''^ Η θΗ Ν=Ν ϊη=° Η | 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(37)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1-илпропил)-амид |
| 93 | 0 . Υ-βΑ н он ν=ν η χΑ-ν Η | 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1 -илпропил)-амид |
Еще одним воплощением данного изобретения является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
118
(37)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил ]амино}карбонил)-5метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-2-оксо-М-фенил-2.3дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид
-9007186
| 125 | 0 ЧЧг Η | υ Н0-/ <Αην | (32)-(3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-Н-метил-2-оксо-2,3дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид | |
| I/ Ν 4Η •ΝΗ | =0 | |||
| 138 | (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | |||
| ноЧ | метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- | |||
| Лн? | ил]метилен}-М-(2-гидроксиэтил)-2- | |||
| =( >=0 д1 | оксо-2,3-дигидро-1 Н-индол-5- | |||
| С | ? _____ί ТО Η | карбоксамид | ||
| ΗΟ^-Ν> Η | ₽οΗ | |||
| 145 | М-[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]-4-(4-фторфенил)-2- | |||
| Ρ. | НО-/ | метил-5-{(2)-[5-(морфолин-4- | ||
| / | \ ΗΝ | илкарбонил)-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН- | ||
| \>о Λ | индол-3-илиден]метил}-1Н-пиррол-3- | |||
| ο | Γ | карбоксамид | ||
| 4 | ЧД-ΝΗ | =οΗ | ||
| 155 | Εχ Γ | V? НО-/ )ην лк Η 0 | (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-3-(4фторфенил)-5-метил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-И-изопропил-2-оксо-2,3дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид | |
| Λδ | ί | >= | |||
| Η | О'-ΝΗ | |||
| 165 | (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-3- | |||
| Ε, | НО-/ | (2,4-дифторфенил)-5-метил-1 Н- | ||
| Ζ | пиррол-2-ил]метилен}-2-оксо-М- | |||
| Ε | ν/ο | фенил-2,3-дигидро-1 Н-индол-5- | ||
| ал | =οΗ | карбоксамид | ||
| Η | ||||
| 175 | 4 | (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-3- | ||
| Ε | НО-/ | (2,4-дифторфенил)-5-метил-1 Н- | ||
| Υ | \ / / ΗΝ1 | пиррол-2-ил]метилен}-И-(2- | ||
| Ε | К >0 _τ1 | гидроксиэтил)-2-оксо-2,3-ди гидро-1 Н- | ||
| ο Η | те Η | ГГ =οΗ | индол-5-карбоксамид |
- 10007186
| 185 | и \ и°7 Онг? 0 ''Ν'%ΑΧ2'>=ΟΗ 1 <Χ~-ΝΗ | (32)-3-{[3-(4-цианофенил)-4-({[3(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5метил-1Н-пиррол-2-ил]метилен}-М,Мдиметил-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол5-карбоксамид |
| 195 | δ к. но~? Онг? ο //π' Ц __ Π и 0*0 | 4-(4-цианофенил)-ЩЗ-(диэтиламино)- 2-гидроксипропил]-2-метил-5-{(2)-[5(морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо-1,2дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}- 1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 205 | δ α Η°7 Онг/ вилн Η Χ+-ΝΗ | (32)-3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5метил-1Н-пиррол-2-ил]метилен}-2оксо-М-фенил-2,3-дигидро-1Н-индол5-карбоксамид |
| 215 | V? οι но \ Онг? >=ο г Й ΑΑ0Α=Ο η %Χνη | (32)-3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5метил-1Н-пиррол-2-ил]метилен}-Г+ изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1Ниндол-5-карбоксамид |
| 225 | νΛ ο Χ'Π'Ν У~Лн οη I Τ>=ο Η | 5-[(2)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[2-гидрокси3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 235 | Ν= ό ζ-ν-ν }Μ Η | 5-[(2)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-1Ч-[2-гидрокси3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 243 | Ν-Ν, 0 Γ-Ν’Ν Ρχ Жй 0Η ρΐ Γι °Оо θΟΝ Η | М-[2-гидрокси-3-(2Н-тетразол-2ил)пропил]-2,4-диметил-5-{(г)-[2-оксо5-трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
- 11 007186
| 258 | ч 0 >1н он // ν+ I Σ >=ο Ά~-ν Η | 5-[(Ζ)-(5-φτορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[2-гидрокси3-(1Н-тетразол-1-ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 265 | ν^ν. θ. Η °Η с,ту£/ Η | 5-[(г)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[2-гидрокси3-( 1 Н-тетразол-1 -ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 278 | ν-ν·ν 4ρ ДХэ 0Η ХДчм Η | Ы-[2-гидрокси-3-(1 Н-тетразол-1 ил)пропил]-2,4-диметил-5-{(7)-[2-оксо5-трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
| 288 | 0 алЗ >?η 0Η 1) Α Ό>°Η Η | Ν-{3-[(2Κ, 65)-2,6-диметилморфолин-4ил]-2-гидроксипропил}-5-[(2)-(5-фтор2-оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 298 | г 0Η θ'χχϋ Η | 5-[(Ζ)-(5-χπορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-{3-[(2Я,65)2,6-диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 308 | 0 Ρ ЬЛн 0Η 4Ρ ΡΡ ο^τ^Ρ! η Τ ΖΟ=° Ο-Ν Η | Ν-{3-[(2Κ, 68)-2,6-диметилморфолин-4ил]-2-гидроксипропил}-2,4-диметил-5{(2)-[2-оксо-5-(трифторметокси)-1,2дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}- 1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 318 | \-ΛΝ ОН 0 ₽ и Ρ ΥΧ>θΗ Η | 5-[(2)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[(2К)-2гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]- 2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 328 | V χ г Ρ' V νζ+ Ън0 Η | 5-[(Ζ)-(5-χπορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[(2К)-2гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]- 2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 338 | ο Ζ~ν ρΝ 0Η° χ Ο*4 °νγ5=οΗ . Η | М-[(2К)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]2,4-диметил-5-{(2)-[2-оксо-5(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
| 348 | V X % <“ V У1 Η 0Η 0 Ρ Λ Γ Тт>ом Ο--Ν Η | 5-[(Ζ)-(5-φτορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[(25)-2гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]- 2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
- 12007186
| 355 | х г Р Xΰ он 0 °Ό>°Η •Η | М-[(25)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]2,4-диметил-5-{(7)-[2-оксо-5(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1Н-пиррол-3карбоксамид |
| 368 | λ-Ν' ΑΧ™0 ск<АС Η Η | 5-[(2)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-Ы-[(28)-2гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]2,4-Диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид |
| 375 | 0 Дкн он Η ί 1 >=ο Ο'Ν Η | Ν-[3-(1,1 -диоксидотиоморфолин-4-ил)2-гидроксипропил]-2,4-диметил-5-[(7)(2-оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-1 Н-пиррол-3карбоксамид |
| 385 | 0 χΛΛ' он '-Л) н ХД-Ν 0 Η | Ν-[3-(1,1 -диоксидотиоморфолин-4-ил)2-гидроксипропил]-5-[(2)-(5-фтор-2оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-2,4-Диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 395 | 0 χ4°Η Η | 5-[(г)-(5-хлор-2-оксо-1,2’ДИГИДро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[3-(1,1 диоксидотиоморфолин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-ДИметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 408 | ο Υ-Α·Ν'ν'Ν'~\.Ο ΧΑ Η ΟΗ Η Τ X >ο Α>Ν Η | 5-[(г)-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[3-(1,1диоксидотиоморфолин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-З-карбоксамид |
| 415 | 0 | 5-[(Ζ)-(5-φτορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-Н-[(28)-2гидрокси-З-морфолин-4-илпропил]2,4-диметил-Ш-пиррол-З-карбоксамид |
| 425 | 0 Χό ΧγΧ Η | 5-[(г)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[(2К)-2гидрокси-З-морфолин-4-илпропил]2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид |
| 435 | 0 αα °» υ> °'№\Д= Η Α>Α-νη | 5-[(7)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[(2К)-2гидрокси-З-морфолин-4-илпропил]2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид |
| 445 | 0 Хгт ΑΑ ™ X Η кД-ΝΗ | 5-[(2)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[(28)-2гидрокси-З-морфолин-4-илпропил]2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид |
Еще одним воплощением является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
478
5-(5-(г)-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-ДИметил1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-([1,2,3]триазоло[4,5Ь]пиридин-3-илокси)-пропил]-амид
- 13 007186
| 485 | Н | 5-(5-(2)-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметип1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-([1,2,3]триазоло[4,5Ь]пиридин-3-илокси)-пропил]-амид |
| 495 | ααΡ н | 2,4-(2)-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидро-индол-Зилиденметил)-1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид |
| 505 | ,0’ °н н | 5-(5-(Ζ)-φτορ-2-οκοο-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-(3-окси-бензотриазол-1ил)-пропил]-амид |
| 515 | Н | 5-(5-(7)-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-(3-окси-бензотриазол-1ил)-пропил]-амид |
| 525 | хо* Ν-Λ ОС он АуЦн н | 2,4-(2)-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-пропил]-амид |
Еще одним воплощением данного изобретения является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
| № соединения | Структура | Название |
| 45Ν | н | 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-2,4-диметил-1 Н-пирролЗ-карбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пропил)-метил-амид |
| 455 | 5-((Ζ)-5-φτορ-2-οκεο-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты ((5)- 2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)- метил-амид | |
| 465 | 5-((Ζ)-5-φτορ-2-οκοο-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты ((К)- 2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)- метил-амид |
Еще одним воплощением является фармацевтическая композиция, содержащая соединение или соль формул I или 1а и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
Еще одним воплощением является способ модуляции каталитической активности протеинкиназы, при котором указанную протеинкиназу приводят в контакт с соединением или солью формул I или 1а.
-14007186
Протеинкиназа для этого способа может представлять собой рецепторную тирозинкиназу, нерецепторную тирозинкиназу и серинтреонинкиназу.
Еще одним воплощением является способ лечения или предупреждения расстройства, связанного с протеинкиназой, у организма, при котором вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции, содержащей соединение или соль формул I или 1а и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Протеинкиназа для этого способа может представлять собой рецепторную тирозинкиназу, нерецепторную тирозинкиназу и серинтреонинкиназу. Расстройство, связанное с протеинкиназой, может представлять собой расстройство, связанное с ЕСЕК, расстройство, связанное с ΡϋΟΕΚ, расстройство, связанное с 1СЕК, и расстройство, связанное с йк. Протеинкиназное расстройство может также представлять собой плоскоклеточный рак, астроцитому, саркому Калоши, глиобластому, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак головы и шеи, меланому, рак яичников, рак простаты, рак молочной железы, мелкоклеточный рак легкого, глиому, рак ободочной и прямой кишки, рак мочеполовых путей и рак желудочно-кишечного тракта. Более того, протеинкиназное расстройство может также представлять собой диабет, аутоиммунное расстройство, гиперпролиферативное расстройство, рестеноз, фиброз, псориаз, болезнь Гиппеля-Линдау, остеоартрит, ревматоидный артрит, ангиогенез, воспалительное расстройство, иммунологическое расстройство и сердечно-сосудистое расстройство. Эти способы могут быть использованы для лечения людей.
Еще в одном воплощении данное изобретение относится к соединению 418 или его фармацевтиче-
Кроме того, данное изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения 418 или фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
В другом воплощении данное изобретение относится к способам получения соединений формулы I.
Наконец, данное изобретение также относится к идентификации химического соединения, которое модулирует каталитическую активность протеинкиназы, путем приведения клеток, экспрессирующих протеинкиназу, в контакт с соединением или солью по настоящему изобретению, и последующего мониторинга клеток в отношении эффекта.
Подробное описание изобретения
Определения
Если не указано иначе, следующие термины, используемые в описании и формуле, имеют значения, как трактуется ниже.
Алкил относится к насыщенному алифатическому углеводородному радикалу, включая группы с прямой цепью и разветвленной цепью из 1-20 атомов углерода (всякий раз, когда здесь установлен числовой диапазон, например 1-20, это означает, что группа, в данном случае алкильная группа, может содержать 1 атом углерода, 2 атома углерода, 3 атома углерода и т.д. вплоть до 20 атомов углерода включительно). Более предпочтительно, он представляет собой алкил среднего размера, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, например метил, этил, пропил, 2-пропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, пентил и т.п. Наиболее предпочтительно, это низший алкил, имеющий от 1 до 4 атомов углерода, например метил, этил, пропил, 2-пропил, н-бутил, изобутил или трет-бутил и т.п. Алкил может быть замещенным или незамещенным, и когда он является замещенным, группа(ы)-заместитель(и) представляет(ют) собой предпочтительно галогено, гидрокси, низший алкокси, арил, арилокси, гетероарил, гетероалициклическую группу, С(О)К8, ΝΚ9Κ10 и С(О)1Х1К9К10.
Циклоалкил относится к 3-8-членной полностью углеродной моноциклической кольцевой группе, полностью углеродной 5-членной/6-членной или 6-членной/6-членной конденсированной бициклической кольцевой группе или мультициклической конденсированной кольцевой группе (конденсированная кольцевая система означает, что каждое кольцо в этой системе имеет общую пару соседних атомов углерода с каждым другим кольцом в этой системе), где одно или более чем одно из колец может содержать одну или более чем одну двойную связь, но ни одно из этих колец не имеет полностью сопряженной пиэлектронной системы. Неограничивающими примерами циклоалкильных групп являются циклопропан, циклобутан, циклопентан, циклопентен, циклогексан, циклогексадиен, адамантан, циклогептан, циклогептатриен и т.п. Циклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. Когда она замещена, группа(ы)-заместитель(и) представляет(ют) собой предпочтительно один или более чем один, более предпочтительно один или два заместителя, независимо выбранных из группы, состоящей из низше
-15 007186 го алкила, тригалогеноалкила, галогено, гидрокси, низшего алкокси, арила, возможно замещенного одной или более чем одной, предпочтительно одной или двумя группами, независимо друг от друга представляющими собой галогено, гидрокси, низший алкил или низшую алкоксигруппу, арилокси, возможно замещенного одной или более чем одной, предпочтительно одной или двумя группами, независимо друг от друга представляющими собой галогено, гидрокси, низший алкил или низшую алкоксигруппу, 6членного гетероарила, имеющего от 1 до 3 атомов азота в кольце, причем углероды в этом кольце возможно замещены одной или более чем одной, предпочтительно одной или двумя группами, независимо друг от друга представляющими собой галогено, гидрокси, низший алкил или низшую алкоксигруппу, 5членного гетероарила, имеющего от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы, причем атомы углерода и азота этой группы возможно замещены одной или более чем одной, предпочтительно одной или двумя группами, независимо друг от друга представляющими собой галогено, гидрокси, низший алкил или низшую алкоксигруппу, 5- или 6-членной гетероалициклической группы, имеющей от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы, причем атомы углерода и азота (если присутствует) в этой группе возможно замещены одной или более чем одной, предпочтительно одной или двумя группами, независимо друг от друга представляющими собой галогено, гидрокси, низший алкил или низшую алкоксигруппу, меркапто, (низший алкил)тио, арилтио, возможно замещенный одной или более чем одной, предпочтительно одной или двумя группами, независимо друг от друга выбранными из галогено, гидрокси, низшей алкильной или низшей алкоксигрупп, циано, ацила, тиоацила, О-карбамила, Ν-карбамила, О-тиокарбамила, Ν-тиокарбамила, С-амидо, Ν-амидо, нитро, Ν-сульфонамидо, 8-сульфонамидо, К98(О)-, К98(О)2-, -С(О)ОК9, К9С(О)О- и -ЛК9К10, такие как определено выше.
Алкенил относится к алкильной группе, как она определена здесь, состоящей из по меньшей мере 2 атомов углерода и по меньшей мере одной углерод-углеродной двойной связи. Репрезентативные примеры включают, но не ограничены ими, этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, 1-, 2- или 3-бутенил и т.п.
Алкинил относится к алкильной группе, как она определена здесь, состоящей из по меньшей мере 2 атомов углерода и по меньшей мере одной углерод-углеродной тройной связи. Репрезентативные примеры включают, но не ограничены ими, этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-, 2- или 3-бутинил и т.п.
Арил относится к полностью углеродной моноциклической или полициклической с конденсированными кольцами (то есть кольцами, которые имеют общие пары соседних атомов углерода) группам из
6-12 атомов углерода, имеющим полностью сопряженную пи-электронную систему. Примерами, без ограничения, арильных групп являются фенил, нафталенил и антраценил. Арильная группа может быть замещенной или незамещенной. Когда она замещена, группа(ы)-заместитель(и) представляет(ют) собой предпочтительно одну или более чем одну, более предпочтительно одну, две или три, еще более предпочтительно одну или две группы, независимо выбранные из группы, состоящей из низшего алкила, тригалогеноалкила, галогено, гидрокси, низшего алкокси, меркапто, (низший алкил)тио, циано, ацила, тиоацила, О-карбамила, Ν-карбамила, О-тиокарбамила, Ν-тиокарбамила, С-амидо, Ν-амидо, нитро, Ν-сульфонамидо, 8-сульфонамидо, К98(О)-, К98(О)2-, -С(О)ОК9, К9С(О)О- и -НК9К10, причем К9 и К10 такие, как определено выше. Предпочтительно, арильная группа возможно замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогено, низшего алкила, тригалогеноалкила, гидрокси, меркапто, циано, Ν-амидо, моно- или диалкиламино, карбокси или Ν-сульфонамидо.
Гетероарил относится к моноциклической или конденсированной кольцевой (то есть кольца имеют общую пару соседних атомов) группе из 5-12 атомов в кольце, содержащей один, два, три или четыре кольцевых гетероатома, выбранных из Ν, О или 8, при этом оставшиеся кольцевые атомы представляют собой С, и, кроме того, имеющей полностью сопряженную пи-электронную систему. Примерами, без ограничения, незамещенных гетероарильных групп являются пиррол, фуран, тиофен, имидазол, оксазол, тиазол, пиразол, пиридин, пиримидин, хинолин, изохинолин, пурин, тетразол, триазин и карбазол. Гетероарильная группа может быть замещенной или незамещенной. Когда она замещена, группа(ы)-заместитель(и) представляет(ют) собой предпочтительно один или более чем один, более предпочтительно один, два или три, даже более предпочтительно один или два заместителя, независимо выбранных из группы, состоящей из низшего алкила, тригалогеноалкила, галогено, гидрокси, низшего алкокси, меркапто, (низший алкил)тио, циано, ацила, тиоацила, О-карбамила, Ν-карбамила, О-тиокарбамила, Ν-тиокарбамила, С-амидо, Ν-амидо, нитро, Ν-сульфонамидо, 8-сульфонамидо, К98(О)-, К98(О)2-, -С(О)ОК9, К9С(О)О- и -ИК.9К10, причем К9 и К10 такие, как определено выше. Предпочтительно, гетероарильная группа возможно замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогено, низшего алкила, тригалогеноалкила, гидрокси, меркапто, циано, Ν-амидо, моно- или диалкиламино, карбокси или Νсульфонамидо.
Гетероалициклическая группа относится к моноциклической или конденсированной кольцевой группе, имеющей в кольце(ах) от 5 до 9 кольцевых атомов, среди которых один или два кольцевых атома представляют собой гетероатомы, выбранные из Ν, О или 8(О)П (где η представляет собой целое число от 0 до 2), а оставшиеся кольцевые атомы представляют собой С. Кольца могут также иметь одну или более чем одну двойную связь. Однако кольца не имеют полностью сопряженной пи-электронной системы. Примерами, без ограничения, незамещенных гетероалициклических групп являются пирролидино, пипе
- 16 007186 ридино, пиперазино, морфолино, тиоморфолино, гомопиперазино и т.п. Гетероалициклическое кольцо может быть замещенным или незамещенным. Когда оно замещено, группа(ы)-заместитель(и) представляет(ют) собой предпочтительно один или более чем один, более предпочтительно один, два или три, даже более предпочтительно один или два заместителя, независимо выбранных из группы, состоящей из низшего алкила, тригалогеноалкила, галогено, гидрокси, низшего алкокси, меркапто, (низший алкил)тио, циано, ацила, тиоацила, О-карбамила, Ν-карбамила, О-тиокарбамила, Ν-тиокарбамила, С-амидо, Ν-амидо, нитро, Ν-сульфонамидо, 8-сульфонамидо, В98(О)-, В98(О)2-, -С(О)ОВ9, В9С(О)О- и -ΝΚ®0, причем В9 и В10 такие, как определено выше. Предпочтительно, гетероалициклическая группа возможно замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогено, низшего алкила, тригалогеноалкила, гидрокси, меркапто, циано, Ν-амидо, моно- или диалкиламино, карбокси или Ν-сульфонамидо.
Гетероциклил обозначает насыщенный циклический радикал из 3-8 кольцевых атомов, в котором один или два кольцевых атома представляют собой гетероатомы, выбранные из Ν, О или 8(О)п (где п представляет собой целое число от 0 до 2), а оставшиеся кольцевые атомы представляют собой С, при этом один или два атома С могут возможно быть заменены карбонильной группой. Гетероциклическое кольцо может быть возможно замещено независимо одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из низшего алкила, возможно замещенного одним или двумя заместителями, независимо выбранными из карбокси- или сложноэфирной группы, галогеноалкила, цианоалкила, галогено, нитро, циано, гидрокси, алкокси, амино, моноалкиламино, диалкиламино, аралкила, гетероаралкила и -СОВ (где В представляет собой алкил). Более конкретно, термин гетероциклил включает в себя, но не ограничен ими, тетрагидропиранил, 2,2-диметил-1,3-диоксолан, пиперидино, №метилпиперидин-3-ил, пиперазино, Ν-метилпирролидин-3-ил, пирролидино, морфолино, тиоморфолино, тиоморфолино-1-оксид, тиоморфолино-1,1диоксид, 4-этилоксикарбонилпиперазино, 3-оксопиперазино, 2-имидазолидинон, 2-пирролидинон, 2-оксогомопиперазино, тетрагидропиримидин-2-он и их производные. Предпочтительно, гетероциклическая группа возможно замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогено, низшего алкила, низшего алкила, замещенного карбокси, сложным эфиром, гидрокси либо моно- или диалкиламино.
Гетероциклоамино обозначает насыщенный циклический радикал из 3-8 кольцевых атомов, в котором по меньшей мере один из кольцевых атомов представляет собой азот и возможно где один или два дополнительных кольцевых атома представляют собой гетероатомы, выбранные из Ν, О или 8(О)п (где п представляет собой целое число от 0 до 2), при этом оставшиеся кольцевые атомы представляют собой С, при этом один или два атома С могут возможно быть заменены карбонильной группой. Гетероциклоаминокольцо может быть возможно замещено независимо одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из низшего алкила, возможно замещенного одним или двумя заместителями, независимо выбранными из карбокси или сложноэфирной группы, галогеноалкила, цианоалкила, галогено, нитро, циано, гидрокси, алкокси, амино, моноалкиламино, диалкиламино, аралкила, гетероаралкила и -СОВ (где В представляет собой алкил). Более конкретно, термин «гетероциклоамино» включает, но не ограничен ими, пиперидин-1-ил, пиперазин-1-ил, пирролидин-1-ил, морфолин-4-ил, тиоморфолин-4-ил, тиоморфолино-1-оксид, тиоморфолино-1,1-диоксид, 4-этилоксикарбонилпиперазин-1-ил, 3-оксопиперазин-1-ил, 2имидазолидон-1-ил, 2-пирролидинон-1-ил, 2-оксогомопиперазино, тетрагидропиримидин-2-он и их производные. Предпочтительно, эта гетероциклическая группа возможно замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогено, низшего алкила, низшего алкила, замещенного карбокси или сложным эфиром, гидрокси либо моно- или диалкиламино. Гетероциклоаминогруппа представляет собой подвид гетероциклической группы, определенной выше.
Гидрокси относится к группе -ОН.
Алкокси относится как к группе -О-(алкил), так и к -О-(незамещенный циклоалкил). Репрезентативные примеры включают, но не ограничены ими, например, метокси, этокси, пропокси, бутокси, циклопропилокси, циклобутилокси, циклопентилокси, циклогексилокси и т. п.
Галогеноалкокси относится к -О-(галогеноалкил)группе. Репрезентативные примеры включают, но не ограничены ими, например, трифторметокси, трибромметокси и т.п.
Арилокси относится к обеим, -О-арильной и -О-гетероарильной группам, как они определены здесь. Репрезентативные примеры включают в себя, но не ограничены ими, например, фенокси, пиридинилокси, фуранилокси, тиенилокси, пиримидинилокси, пиразинилокси и т. п. и их производные.
Меркапто относится к группе -8Н.
Алкилтио относится к обеим группам, -8-(алкил) и -8-(незамещенный циклоалкил). Репрезентативные примеры включают в себя, но не ограничены ими, например, метилтио, этилтио, пропилтио, бутилтио, циклопропилтио, циклобутилтио, циклопентилтио, циклогексилтио и т.п.
Арилтио относится к обеим, -8-арильной и -8-гетероарильной группам, как они определены здесь. Репрезентативные примеры включают в себя, но не ограничены ими, фенилтио, пиридинилтио, фуранилтио, тиенилтио, пиримидинилтио и т. п. и их производные.
Ацил относится к группе -С(О)-В, где В выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила, тригалогенометила, незамещенного циклоалкила, арила, возможно замещенного одним или более чем одним, предпочтительно одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей
- 17 007186 из низшего алкила, тригалогенометила, низшего алкокси, галогено и -ΝΚ9Κ10 групп, гетероарила (присоединенного через кольцевой углерод), возможно замещенного одним или более чем одним, предпочтительно одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей из низшего алкила, тригалогеноалкила, низшего алкокси, галогено и -ΝΚ9Κ10 групп, и гетероалициклической группы (присоединенной через кольцевой углерод), возможно замещенной одним или более чем одним, предпочтительно одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей из низшего алкила, тригалогеноалкила, низшего алкокси, галогено и -ΝΚ9Κ10 групп. Репрезентативные ацильные группы включают в себя, но не ограничены ими, ацетил, трифторацетил, бензоил и т.п.
Альдегид относится к ацильной группе, где К представляет собой водород.
Тиоацил относится к группе -С(8)-К, при этом К такой, как определено здесь.
Сложный эфир относится к группе -С(О)О-К, при этом К такой, как определено здесь, за исключением того, что К не может быть водородом.
Ацетильная группа относится к группе -С(О)СН3.
Галогено-группа относится к фтору, хлору, брому или иоду, предпочтительно фтору или хлору.
Тригалогенометильная группа относится к группе -СХ3, где X представляет собой галогено, как определено выше.
Тригалогенометансульфонильная группа относится к группе Х3С8(=О)2-, где X такой, как определено выше.
Циано относится к группе -СйХ
8-Сульфонамидо относится к группе -8(Ο)2ΝΚ9Κ10, причем К9 и К10 такие, как определено здесь. Ν-Сульфонамидо относится к группе -ΝΚ98(Ο)2Κ10, причем К9 и К10 такие, как определено здесь.
Э 1 О 19 17
Ο-Карбамильная группа относится к группе -Οϋ(Ο)ΝΚ К , причем К и К такие, как определено здесь.
Ν-Карбамил относится к группе Κ9Οϋ(Ο)ΝΚ10-, причем К9 и К10 такие, как определено здесь. О-Тиокарбамил относится к группе -ОС(8)КК.12К13, причем К12 и К13 такие, как определено здесь. Ν-Тиокарбамил относится к группе Κ9Οϋ(8)ΝΚ10-, причем К9 и К10 такие, как определено здесь. Амино относится к группе -ΝΚ9Κ10, где К9 и К10 оба представляют собой водород.
С-Амидо относится к группе -ϋ(Ο)ΝΚ9Κ10, причем К9 и К10 такие, как определено здесь. Ν-Амидо относится к группе К9С(О)ИК.10-, причем К9 и К10 такие, как определено здесь. Нитро относится к группе -ΝΟ2.
Галогеноалкил обозначает алкил, предпочтительно низший алкил, как он определен выше, который замещен одним или более одинаковыми или различными галогеноатомами, например -СН2С1, -СР3, -СН2СР3, -СН2СС13 и т.п.
Гидроксиалкил обозначает алкил, предпочтительно низший алкил, как он определен выше, который замещен одной, двумя или тремя гидроксигруппами, например гидроксиметил, 1- или 2-гидроксиэтил, 1,2-, 1,3- или 2,3-дигидроксипропил и т.п.
Аралкил обозначает алкил, предпочтительно низший алкил, как он определен выше, который замещен арильной группой, как она определена выше, например -СН2фенил, -(СН2)2фенил, -(СН2)3фенил, СН3СН(СН3)СН2фенил и т.п. и их производные.
Гетероаралкильная группа обозначает алкил, предпочтительно низший алкил, как он определен выше, который замещен гетероарильной группой, например -СН2пиридинил, -(СН2)2пиримидинил, -(СН2)3имидазолил и т.п. и их производные.
Моноалкиламино обозначает радикал -ΝΗΚ, где К представляет собой алкильную или незамещенную циклоалкильную группу, как они определены выше, например метиламино, (1-метилэтил)амино, циклогексиламино и т.п.
Диалкиламино обозначает радикал -ΝΚΚ, где каждый К представляет собой независимо алкильную или незамещенную циклоалкильную группу, как они определены выше, например диметиламино, диэтиламино, (1-метилэтил)этиламино, циклогексилметиламино, циклопентилметиламино и т.п.
Возможный или возможно обозначают, что событие или обстоятельство, за ними описанное, может, но не обязательно, иметь место и что описание изобретения включает в себя случаи, когда событие или обстоятельство имеет место, и случаи, в которых оно не имеет место. Например, гетероциклическая группа, возможно замещенная алкильной группой обозначает, что алкил может присутствовать, но не обязательно присутствует, и описание изобретения включает в себя ситуации, где гетероциклическая группа замещена алкильной группой, и ситуации, где гетероциклическая группа не замещена алкильной группой.
Термины 2-индолинон, индолин-2-он и 2-оксиндол используются взаимозаменяемо здесь для обозначения молекулы, имеющей химическую структуру н
Термин пиррол относится к молекуле, имеющей химическую структуру
- 18007186
Соединения, которые имеют одинаковую молекулярную формулу, но различаются по своей природе, или порядку связи своих атомов, или расположению своих атомов в пространстве, называют изомеры.
Изомеры, которые различаются по расположению своих атомов в пространстве, называют стереоизомеры. Стереоизомеры, которые не являются зеркальными отображениями один другого, называют диастереомеры, а те, которые являются не накладываемыми друг на друга зеркальными отображениями друг друга, называют энантиомеры. Когда соединение обладает асимметрическим центром, например оно связано с четырьмя различными группами, возможна пара энантиомеров. Энантиомер может характеризоваться абсолютной конфигурацией его асимметрического центра и описываться правилами К- и 8-последовательности Кана и Прелога или тем, каким образом молекула вращает плоскость поляризованного света и тогда обозначается как правовращающая или левовращающая (то есть как (+) или (-)-изомеры, соответственно). Хиральное соединение может существовать либо в виде индивидуального энантиомера, либо в виде смеси энантиомеров. Смесь, содержащая равные доли энантиомеров, называется рацемической смесью.
Соединения по настоящему изобретению могут обладать одним или более чем одним асимметрическим центром; такие соединения могут, следовательно, быть получены в виде индивидуальных (К)- или (8)-стереоизомеров или в виде их смесей. Например, атом углерода, несущий гидроксигруппу в Α0ΝΗΟ1Κ.3ΑΚ.4(0Η)Ο15Ζ в соединении формулы (I), представляет собой асимметрический центр, и, следовательно, соединение формулы (I) может существовать в виде (К)- или (8)-стереоизомера. Если не указано иначе, понимается, что описание или название конкретного соединения в описании и формуле изобретения включает в себя как индивидуальные энантиомеры, так и их смеси - рацемические или другие. Способы определения стереохимии и разделения стереоизомеров хорошо известны в данной области (смотри обсуждение в главе 4 АсЬ апссс! Огдашс Οιεπύδίτγ, 4411 εάίίίοη 1. Матей, 1о1ш \У11су апй 8оп5. Νε\ν Уотк, 1992).
Соединения формулы (I) могут проявлять таутомерию и структурную изомерию. Например, соединения, описанные здесь, могут иметь Е или Ζ конфигурацию вокруг двойной связи, соединяющей 2-индолиноновую группировку с пиррольной группировкой, либо они могут представлять собой смесь Е и Ζ. Данное изобретение охватывает любую таутомерную или структурно изомерную форму и их смеси, которые обладают способностью модулировать активность НТК, СТК и/или 8ТК, и не ограничивается какой-либо одной таутомерной или структурно изомерной формой.
Фармацевтическая композиция относится к смеси одного или более чем одного из соединений, описанных здесь, или их физиологически/фармацевтически приемлемых солей или пролекарств, с другими химическими компонентами, такими как физиологически/фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты. Целью фармацевтической композиции является облегчение введения соединения в организм.
Соединение формулы (I) может также действовать в качестве пролекарства. Пролекарство относится к агенту, который превращается в родоначальное лекарство ίη νίνο. Пролекарства часто полезны, поскольку в некоторых ситуациях их можно вводить легче, чем ро до начальное лекарство. Они могут быть, например, биодоступны при пероральном введении, в то время как родоначальное лекарство - нет. Пролекарство может также иметь улучшенную растворимость в фармацевтических композициях по сравнению с родоначальным лекарством. Примером, без ограничения, пролекарства будет соединение по настоящему изобретению, которое вводится в виде сложного эфира (пролекарства) для облегчения прохождения через клеточную мембрану, где растворимость в воде вредит подвижности, а затем в ходе обмена веществ гидролизуется до карбоновой кислоты - активного начала - сразу же внутри клетки, где растворимость в воде благоприятна.
Дополнительным примером пролекарства может быть короткий полипептид, например, без ограничения, 2- 10-аминокислотный полипептид, связанный через концевую аминогруппу с карбоксигруппой соединения по настоящему изобретению, при этом полипептид гидролизуется или метаболизируется ίη νίνο с высвобождением активной молекулы. Пролекарства соединения формулы (I) входят в объем данного изобретения.
Дополнительно, предполагается, что соединение формулы (I) будет метаболизироваться с помощью ферментов в теле организма, такого как человек, с образованием метаболита, который может модулировать активность протеинкиназ. Такие метаболиты входят в объем настоящего изобретения.
Как используется здесь, термин физиологически/фармацевтически приемлемый носитель относится к носителю или разбавителю, который не вызывает значительного раздражения в организме и не снимает биологическую активность и свойства вводимого соединения.
Фармацевтически приемлемый эксципиент относится к инертному веществу, добавляемому в фармацевтическую композицию для дополнительного облегчения введения соединения. Примеры, без ограничения, эксципиентов включают в себя карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара и типы крахмала, производные целлюлозы, желатин, растительные масла и полиэтиленгликоли.
Как используется здесь, фармацевтически приемлемая соль относится к тем солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства родоначального соединения. Такие соли включают:
-19007186 (1) соль присоединения кислоты, которую получают путем реакции свободного основания родоначального соединения с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и перхлорная кислота и т.п., либо с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, (Ό)- или (Ь)-яблочная кислота, малеиновая кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, паратолуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота или малоновая кислота и т.п., предпочтительно соляная кислота или (Ь)-яблочная кислота; либо (2) соли, образованные, когда кислотный протон, присутствующий в родоначальном соединении, либо заменен ионом металла, например ионом щелочного металла, ионом щелочно-земельного металла или ионом алюминия; либо образует координационные связи с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, Ν-метилглюкамин и т.п.
РК относится к рецепторной протеинтирозинкиназе (КТК), нерецепторной или клеточной тирозинкиназе (СТК) и серинтреонинкиназам (8ТК).
Способ относится к образу действий, средствам, методикам и процедурам для осуществления поставленной задачи, включая, но не ограничиваясь ими, образ действий, средства, методики и процедуры, либо известные, либо легко разрабатываемые из известных образов действий, средств, методик и процедур специалистами в химических, фармацевтических, биологических, биохимических и медицинских областях.
Модуляция или модулирование относится к изменению каталитической активности КТК, СТК и 8ТК. Более конкретно, модулирование относится к активации каталитической активности КТК, СТК и 8ТК, предпочтительно к активации или ингибированию каталитической активности КТК, СТК и 8ТК, в зависимости от концентрации соединения или соли, воздействию которых подвергается КТК, СТК и 8ТК, либо, более предпочтительно, к ингибированию каталитической активности КТК, СТК и 8ТК.
Каталитическая активность относится к скорости фосфорилирования тирозина под влиянием, прямым или косвенным, КТК и/или СТК либо фосфорилирования серина и треонина под влиянием, прямым или косвенным, 8ТК.
Приведение в контакт относится к сведению вместе соединения по данному изобретению и РКмишени таким образом, что соединение может влиять на каталитическую активность РК либо прямо, то есть путем взаимодействия с самой киназой, либо косвенно, то есть путем взаимодействия с другой молекулой, от которой зависит каталитическая активность киназы. Такое приведение в контакт можно осуществлять ίη νίίΓο, то есть в пробирке, на чашке Петри или т.п. В пробирке приведение в контакт может включать в себя только соединение и интересующую РК либо может включать в себя целые клетки. Клетки могут также поддерживаться или выращиваться в чашках для культивирования клеток и приводиться в контакт с соединением в этой среде. В этом контексте, способность конкретного соединения влиять на связанное с РК расстройство, то есть ИК50 соединения, определенная ниже, может быть установлена до попыток использования соединений ίη νΐνο на более сложных живых организмах. Для клеток за пределами организма существует, и они хорошо известны специалистам в данной области, множество способов приведения РК в контакт с соединениями, включая, но не ограничиваясь ими, прямую микроинъекцию в клетки и множество методик трансмембранного переноса.
Ιη νίίτο относится к процедурам, осуществляемым в искусственной окружающей среде, как, например, без ограничения, в пробирке или культуральной среде.
Ιη νΐνο относится к процедурам, осуществляемым внутри живого организма, такого как, без ограничения, мышь, крыса или кролик.
Расстройство, связанное с РК, расстройство, стимулируемое РК и аномальная активность РК все это относится к состоянию, характеризующемуся неподходящей, то есть пониженной или, более часто, повышенной каталитической активностью РК, где конкретная РК может представлять собой КТК, СТК или 8ТК. Неподходящая каталитическая активность может возникать как результат либо: (1) экспрессии РК в клетках, которые в норме не экспрессируют РК; либо (2) повышенной экспрессии РК, приводящей к нежелательной пролиферации, дифференцировке и/или росту клеток, либо (3) пониженной экспрессии РК, приводящей к нежелательным уменьшениям пролиферации, дифференцировке и/или росту клеток. Повышенная активность РК относится либо к амплификации гена, кодирующего конкретную РК, либо к продуцированию уровня активности РК, который может коррелировать с расстройством клеточной пролиферации, дифференцировки и/или роста (таким образом, когда уровень РК повышается, тяжесть одного или более из симптомов клеточного расстройства увеличивается). Уменьшенная активность имеет место, естественно, наоборот, когда тяжесть одного или более чем одного из симптомов клеточного расстройства увеличивается при снижении уровня активности РК.
Лечить, лечение относятся к способу облегчения или нейтрализации РК-опосредованного клеточного расстройства и/или его сопутствующих симптомов. По отношению конкретно к раку, эти термины просто означают, что предполагаемая продолжительность жизни индивидуума, пораженного раком, будет увеличена или что один или более из симптомов заболевания будут уменьшены.
Организм относится к любому живому существу, состоящему из по меньшей мере одной клетки. Живой организм может быть таким простым, как, например, одноклеточная эукариотическая клетка, или таким сложным, как млекопитающее, включая человека.
- 20 007186
Терапевтически эффективное количество относится к такому количеству вводимого соединения, которое будет ослаблять до некоторой степени один или более из симптомов расстройства, которое лечат. При ссылке на лечение рака, терапевтически эффективное количество относится к такому количеству, которое обладает эффектом:
(1) уменьшения размера опухоли;
(2) ингибирования (то есть замедления до некоторой степени, предпочтительно остановки) опухолевого метастаза;
(3) ингибирования до некоторой степени (то есть замедления до некоторой степени, предпочтительно остановки) роста опухоли; и/или (4) облегчения до некоторой степени (либо, предпочтительно, устранения) одного или более чем одного симптома, связанного с раком.
Мониторинг обозначает наблюдение или детекцию эффекта приведения в контакт соединения с клеткой, экспрессирующей конкретную РК. Наблюдаемый или детектируемый эффект может представлять собой изменение в фенотипе клетки, в каталитической активности РК либо изменение во взаимодействии РК с естественным партнером связывания. Методики наблюдения и детектирования таких эффектов хорошо известны в данной области.
Вышеназванный эффект выбирают из изменения или отсутствия изменения в фенотипе клетки, изменения или отсутствия изменения каталитической активности указанной протеинкиназы либо изменения или отсутствия изменения во взаимодействии указанной протеинкиназы с естественным партнером связывания в конечном аспекте данного изобретения.
Фенотип клетки относится к внешнему виду клетки или ткани либо к биологической функции клетки или ткани. Примерами, без ограничения, клеточного фенотипа являются размер клетки, рост клетки, пролиферация клетки, клеточная дифференцировка, продолжительность жизни клетки, апоптоз, а также захват и использование питательных веществ. Такие фенотипические характеристики можно определить с помощью методик, хорошо известных в данной области техники.
Естественный партнер связывания относится к полипептиду, который связывается с конкретной РК в клетке. Естественные партнеры связывания могут играть роль в распространении сигнала в процессе РК-опосредованной сигнальной трансдукции. Изменение во взаимодействии естественного партнера связывания с РК может проявляться как повышенная или пониженная концентрация комплекса РК/естественный партнер связывания и, в результате, в наблюдаемом изменении способности РК опосредовать сигнальную трансдукцию.
Репрезентативные соединения по настоящему изобретению приведены в табл. 1а ниже.
Таблица 1а
| № соединения | Структура | Название | МС т/ζ |
| 1 | 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4ди метил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты (З-диэтиламино-2- гидрокси-пропил)-амид | 427 [М+1] | |
| 2 | ад™ ^й | 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З-морфолин4-ил-пропил)-амид | 441 [М-1] |
| 3 | О о +° | 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2дигидро-индол-(Зг)илиденметил]-1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты (2-гидрокси3-морфолин-4-ил-пропил)-амид | 423 [М-1] |
| 4 | 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З-морфолин4-ил-пропил)-амид | 457 [М-1] | |
| 5 | 0 •'ΎτΛιι'νΌ | 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З-морфолин4-ил-пропил)-амид | 501 [М-1] 503 [М-1 1 |
-21 007186
| 6 | ‘‘ϊτΛίΐΎ'ι'^ ов | 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2дигидро-индол-(32)илиденметил]-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси3-(1,2,3]триазол-1-ил-пропил)амид | 405 [М-1] |
| 7 | 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1 /-/-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил )-амид | 423 [М-1] | |
| 8 | 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(ЗК)-илиденметил]-2,4диметил-1 /7-пиррол-З-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил)-амид | 439 [М-1] | |
| 9 | .^!Λ=· | 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1 Н-лиррол-З-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- [1,2,3]триазол-1-ил-пропил)-амид | 483 [М-1] 485 [М-1] |
| 10 | 5-{(7)-[4-(3-хлорфенил)-2-оксо-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилиден]метил}-М-(2-гидрокси-3пирролидин-1-илпропил)-2,4диметил-1 Н-пиррол-3карбоксамид | |
| 11 | ч НО—г | (ЗИ)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)5-метил-3-фенил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-2-оксо-М-фенил-2,3ди гидро-1 Н-индол-5-карбоксамид |
| 12 | (Зг)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)5-метил-3-фенил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-М-метил-2-оксо-2,3дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид | |
| 13 | (37)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)5-метил-3-фенил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-М-(2-гидроксиэтил)-2оксо-2,3-дигидро-1 Н-индол-5карбоксамид | |
| 14 | ч ₽ но-/ | М-[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]-4-(4фторфенил)-2-метил-5-{(г)-[5(морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо- 1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден]метил}-1 Н-пиррол-3карбоксамид |
-22007186
| 15 | ч | (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)3-(4-фторфенил)-5-метил-1 Нпиррол-2-ил]метилен}-ГМизопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1Ниндол-5-карбоксамид |
| 16 | (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)3-(2,4-Дифторфенил)-5-метил-1 Нпиррол-2-ил]метилен}-2-оксо-Мфенил-2,3-дигидро-1 Н-индол-5карбоксамид | |
| 17 | (3/)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)3-(2,4-дифторфенил)-5-метил-1 Нпиррол-2-ил]метилен}-М-(2гидроксиэтил)-2-оксо-2,3-дигидро- 1 Н-индол-5-карбоксамид | |
| 18 | о X— ί / | (32)-3-{[3-(4-цианофенил)-4-({[3(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)5-метил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-М, М-диметил-2-оксо2,3-дигидро-1 Н-индол-5карбоксамид |
| 19 | „ ч на-/ οΑςΡ | 4-(4-цианофенил)-М-[3(диэтиламино)-2-гидроксипропил]2-μθτμπ-5-{(Ζ)-[5(морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо- 1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден]метил}-1 Н-пиррол-3карбоксамид |
| 20 | о ιι+0+·° | (3/)-3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)- 5-метил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-2-оксо-ЬБфенил-2,3дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид |
| 21 | ч ИНО—/ ι ν^/'τ'' % Ογ°° | (Зг)-3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)- 5-метил-1 Н-пиррол-2- ил]метилен}-М-изопропил-2-оксо- 2,3-дигидро-1 Н-индол-5карбоксамид |
| 22 | 5-[(2)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-М-[2гидрокси-3-(2Н-тетразол-2ил)пропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид | |
| 23 | м*\ | 5-[(Ζ)-(5-χηορ-2-οκοο-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-М-[2гидрокси-3-(2Н-тетразол-2ил)пропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 24 | Ы-[2-гидрокси-3-(2Н-тетразол-2ил)пропил]-2,4-ДИметил-5-{(2)-[2оксо-5-(трифторметокси)-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилиден]метил}-1 Н-пиррол-3карбоксамид |
-23 007186
| 25 | аа' °К М-А0 | 5-[(Ζ)-(5-φτορ-2 -оксо-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-М-[2гидрокси-3-(1 Н-тетразол-1 ил)пропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 26 | “όΡ | 5-[(г)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-М-[2гидрокси-3-(1 Н-тетразол-1 ил)пропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 27 | л о /—н-^А | Ы-[2-гидрокси-3-(1 Н-тетразол-1 ил)пропил]-2,4-диметил-5-{(г)-[2оксо-5-(трифторметокси)-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилиден]метил}-1 Н-пиррол-3карбоксамид |
| 28 | /Ч А' | Ν-{3-[(2Η, 65)-2,6диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-5-[(2)-(5-фтор-2оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 29 | 5-[(Ζ)-(5-χτορ-2-οκοο-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-1Ч-{3[(2К, 65)-2,6-диметилморфолин-4ил]-2-гидроксипропил}-2,4диметил-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид | |
| 30 | Ν-{3-[(2Κ,65)-2,6диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-2,4-диметил-5{(2)-[2-оксо-5-(трифторметокси)- 1,2-дигидро-ЗН-индол-З-илиден]метил}-1 Н-пиррол-З-карбоксамид | |
| 31 | 'γ^όΐ/'' | 5-[(2)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-1Ч[(2К)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1ил)пропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 32 | 5-[(2)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-Ы[(2К)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1ил)пропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид | |
| 33 | Ы-[(2Н)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1 ил)пропил]-2,4-диметил-5-{(2)-[2оксо-5-(трифторметокси)-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид | |
| 34 | 5-[(г)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-Ц[(25)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1 ил)пропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
-24 007186
| 35 | М-[(23)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1ил)пропил]-2,4-диметил-5-{(И)-[2оксо-5-(трифторметокси)-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилидеи]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид | |
| 36 | 5-[(г)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро- ЗН-индол-3-илиден)метил]-М[(28)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1 ил)пропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид | |
| 37 | Ν-[3-(1,1 -диоксидотиоморфолин4-ил)-2-гидроксипропил]-2,4диметил-5-[(г)-(2-оксо-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид | |
| 38 | 14-(3-(1,1 -диоксидотиоморфолин4-ил)-2-гидроксипропил]-5-[(г)-(5фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид | |
| 39 | 5-[(г)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-1Ч-[3(1,1 -диоксидотиоморфолин-4-ил)2-гидроксипропил]-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоксамид | |
| 40 | 5-[(Ζ)-(5-6ροΜ-2-οκοο-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден)метил]-М-[3(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)2-гидроксипропил]-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоксамид | |
| 41 | 442,49 5-[(Ζ)-(5-φτορ-2-οκοο-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-М-[(28)-2гидрокси-З-морфолин-4илпропил]-2,4-диметил- 1Н- пиррол-3-карбоксамид | |
| 42 | <4 | 442,49 5-[(Ζ)-(5-φτορ-2-οκοο-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-Ы-[(2Р)-2гидрокси-З-морфолин-4илпропил]-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 43 | 458,95 5-[(г)-(5-хлор-2-оксо-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-Ы-[(2К)-2гидрокси-З-морфолин-4илпропил]-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоксамид | |
| 44 | Χ’ΊΓΟ χί | 458,95 5-[(г)-(5-хлор-2-оксо-1,2дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-М-[(28)-2гидрокси-З-морфолин-4илпропил]-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 47 | 5-(5-(г)-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2-гидрокси-З- ([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид |
-25 007186
| 48 | °” н | 5-(5-(2)-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил )-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2-гидрокси-З- ([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид |
| 49 | ДАА аоР н | 2,4-(2)-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1 Нпиррол-3-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-([1,2,3]триазоло[4,5Ь]пиридин-3-илокси)-пропил]-амид |
| 50 | °Н н | 5-(5-(Ζ)-φτορ-2-οκοο-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4ди метил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3-окси- бензотриазол-1-ил)-пропил]-амид |
| 51 | Л+А с,ак н | 5-(5-(г)-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил )-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3-окси- бензотриазол-1 -ил)-пропил]-амид |
| 52 | Р' | 2,4-(2)-диметил-5-(2-оксо-5трифтормето кси-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1 Нпиррол-3-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-(3-окси-бензотриазол1-ил)-пропил]-амид |
Другие репрезентативные соединения по настоящему изобретению показаны в табл. 16 ниже.
Таблица 16
| № соедин ения | Структура | Название |
| 1Ν | Ό>· н | 5-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-2,4-диметил-1 Н-пирролЗ-карбоновой кислоты (3-диэтиламино2-гидрокси-пропил)-амид |
| 2Ν | ρΥΥ>=οΗ Н | 5-[5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(3)-илиденметил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид |
| 3Ν | О н А/Др он %° Н | 2,4-Диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(3)-илиденметил]-1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пропил)-амид |
| 4Ν | оДхо н н | 5-[5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(3Ζ)-ηπ иденметил]-2,4-ди метил-1 Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2- гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид |
| 5Ν | 0 АААН - Ο ЧД'Ч н | 5-[5-Бром-2-оксо-1,2-дигидро-индолилиденметил]-2,4-диметил-1 Н-пирролЗ-карбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пропил)-амид |
-26 007186
| 6Ν | 0 | 2,4-Диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-илиденметил]-1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты (2-гидрокси-З[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)-амид | |
| Η / оХ Η | -Λ'ΥΥ^ „Xн он ν=ν Ν Η ) | ||
| 7Ν | 0 | 5-[5-Фтор-2-оксо-1,2-ди гидро-индол- | |
| Η 1 | ϊτ-^Ν^Υ^Ν^ СК Η ОН Ν=Ν | илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол- | |
| Η | 3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- | ||
| Η | 0 | [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил)-амид | |
| 8Ν | 0 | 5-[5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол- | |
| Η | ν-<^Νζ*ν^ΝΧ4 ДДН Д„ '№ΝΖ | илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол- | |
| αϊτ | Η | 3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- | |
| Η | [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил )-амид | ||
| 9Ν | 0 | 5-[5-Бром-2-оксо-1,2-дигидро-индол- | |
| Η | >-<4Ν<ΛνΛ,4ΝΧ4 <Χ Η ОН Ν=Ν | илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол- | |
| ΒΓγνΤ | Ν Η | 3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- | |
| ΧΧν- Η | [ 1,2,3]тр и азо л-1 -и л-проп и л)-а м ид | ||
| 11Ν | ο | 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- | |
| гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | |||
| метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- | |||
| ил]метилен}-2-оксо-М-фенил-2,3- | |||
| ал | Η Υ+ -ν>οΗ | дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид | |
| Η | Η | ||
| 12Ν | υ | (3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | |
| Н0-/ | метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- | ||
| Οην2 | ил]метилен}-М-метил-2-оксо-2,3- | ||
| Η4 | ν Η ]ί ί! | дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид | |
| ο | |||
| Ν η Τ | Λ=οΗ | ||
| Η | ~ΝΗ | ||
| 13Ν | Α | (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | |
| НО-/ | метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- | ||
| Ον | ил]метилен}-Ы-(2-гидроксиэтил)-2- | ||
| оксо-2,3-дигидро-1 Н-индол-5- | |||
| 0 | Γχ1· Л>°н | карбоксамид | |
| ΗΟ-^ζ-'-ιΑ' | |||
| Η | Η | ||
| 14Ν | Α | М-[3-(диэтиламино)-2-гидроксипропил]- 4-(4-фторфенил)-2-метил-5-{[5- | |
| Ρχ Η0~? | (морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо-1,2- | ||
| Он/ | дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}- | ||
| ХгЯ\ >0 Η 1ГЛ | 1 Н-пиррол-З-карбоксамид | ||
| 0 | |||
| ίΑ | αό'=°Η 4>-ΝΗ |
-27007186
| 15Ν | /ν χΓ н Ч | к н, •X | и но-/ /X Ά Λ=θ X мн | 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипролил]амино}карбонил)-3-(4фторфенил)-5-метил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-Ы-изопропил-2-оксо-2,3ди гидро-1 Н-индол-5-карбоксамид |
| 16Ν | л | 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-3- | ||
| кнз | (2,4-дифторфенил)-5-метил-1 Н- | |||
| О нм' | пиррол-2-ил]метилен}-2-оксо-М-фенил- | |||
| о. | о | У^гА Хон | 2,3-дигидро-1Н-индол-5-карбоксамид | |
| • н | ΧΑ-ΝΗ | |||
| 17Ν | л у но~л Сх с \ Хо | 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-3(2,4-Дифторфенил)-5-метил-1 Нпиррол-2-ил]метилен}-М-(2- | ||
| 0 | н |1 | хх ТЛ X | гидроксиэти л)-2-о ксо-2,3-ди гидро-1Ниндол-5-карбоксамид | |
| н | чх | Ν Н | ||
| 18Ν | а | 3-{[3-(4-цианофенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2- | ||
| НО-/ | гидроксипропил]амино}карбонил-5- | |||
| к | X | метил-1 Н-пиррол-2-ил]метилен}-Ы,М- | ||
| н 0 | п | л | диметил-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол- 5-карбоксамид | |
| Н =0 | ||||
| 1 | ЧМН | |||
| 19Ν | X ) | 4-(4-цианофенил)-М-[3-(диэтиламино)- 2-гидроксипропил]-2-метил-5-{[5- | ||
| но-/ | (морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо-1,2- | |||
| дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}- | ||||
| 4-\ >Κθ Ζ1 | 1 Н-пиррол-З-карбоксамид | |||
| 0 | ]/ и | |||
| Р | 'Х' •X- | < Н >0 ΝΗ | ||
| 20Ν | 3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2- | |||
| С1. но-2 | гидроксипропил]амино}карбонил)-5- | |||
| /Ч ΗΝ | метил-1 Н-пиррол-2-ил]метилен}-2- | |||
| н | ^уо | оксо-1М-фенил-2,3-ди гидро-1 Н-индол-5- | ||
| ал | // ΝΚ· X н >о | карбоксамид | ||
| н | чх | ΝΗ | ||
| 21Ν | л | 3-{[3-(4-хлорфенил)-4-{{[3- (диэтиламино)-2- | ||
| С1ч | но-/ | гидроксипропил]амино)карбонил)-5- | ||
| а | χ | метил-1 Н-пиррол-2-ил]метилен}-М- | ||
| н | Х/=о Л | изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1 Н- | ||
| ΐ X | V | ЛХ н «о | индол-5-карбоксамид | |
| н X | ^ΝΗ | |||
| 22Ν | (гЛ 0 /—^'Ν | 5-[(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси- | ||
| а | /й он | 3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4- | ||
| н | .Ν Н о | ди метил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
-28 007186
| 23Ν | Ν--Ν. 0 -/Ν'Ν 0Η Ό>°Η Η | 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[2-гидрокси3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 24Ν | Ν-Λ \Ж0Н ρ\χΡ Η | Ы-[2-гидрокси-3-(2Н-тетразол-2- и л) про п и л]-2,4-ДИмети л-5-{[2-о ксо-5трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
| 25Ν | Ν’ν ’ Ν 0 нхУ~/'н 0Η Η I Τ ·>=θ Η | 5-[(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси3-(1 Н-тетразол-1 -ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 26Ν | Ν=Ν. 0 \ УЧ °Η ΟτΑ Η Ο-Ν 0 Η | 5-{(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси- 3-(1 Н-тетразол-1 -ил)пропил]-2,4- диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 27Ν | ο Γ-Ν-4 ρ нхЧС^он От ΪΣ>=° ΟΝ Η | Ы-[2-гидрокси-3-(1 Н-тетразол-1ил)пропил]-2,4-диметил-5-{[2-оксо-5трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
| 28Ν | ч ч ο. αα \ЧЧн 0Η Ό>°Η 44 Η | Ы-{3-[2,6-диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-5-[(5-фтор-2-оксо-1,2дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2, 4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид |
| 29Ν | Η | 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-{3-[2,6диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 30Ν | . 0 Ρ Η. ИПн^ 4Ρ ΥΑΛΗ I 4>ο Ο-Ν Η · | 1М-{3-[2,6-диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-2,4-диметил-5-{[2оксо-5-(трифторметокси)-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден]метил}-1 Н-пирролЗ-карбоксамид |
| 34Ν | V 0 НхЧ1 Η 0Η ° ΡγΑζθίΓ Η | 5-[(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси3-(3-мети л-2,5-диоксои м и дазол и ди н-1 ил)пропил]-2,4-диметил-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
| 35Ν | км χ ι ΡΓ Ρ φ \>£η °η° ЧГГ Η | М-[2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]-2,4диметил-5-{(2)-[2-оксо-5- (трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид |
-29007186
| 36Ν | V χ кА н УЧн 0Η 0 Χ'Ν Η | 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси3-(3-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоксамид |
| 37Ν | 0 уХнХ.н он Π>οΗ Η | Ν-[3-(1,1 -диоксидотиоморфолин-4-ил)2-гидроксипропил]-2,4-диметил-5-[(2оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-1 Н-пиррол-3карбоксамид |
| 38Ν | 0 нч ΕΑΝΎ^Ρ5'° чрыХн он ΧΛν ° Η | Ν-[3-(1,1 -диоксидотиоморфолин-4-ил)- 2-гидроксипропил]-5-[(5-фтор-2-оксо- 1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 39Ν | 0 Η γ0ΎΆ° ΗλΥΧν'^·η οη Ο Ογγζ Η 0 Η | 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[3-(1,1 диоксидотиоморфолин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 40Ν | ο Η ΖτΛ'Ν~υ^ν·~Ύ.ο χΟΑΗ 0Η ΒΓγΟΙ η Ц-Ν Η | 5-[(5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[3-(1,1 диоксидотиоморфолин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-ди метил-1 Нпиррол-3-карбоксамид |
| 47Ν | . νλΑ /улА °η Η | 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид |
| 48Ν | <-1 'Ίτ Ά С ΥΥ>οΗ Η | 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид |
| 49Ν | Ν*4 ο. 'ν-ζ Η | 2,4-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид |
| 50Ν | <^Ъ \>Γη οη _ ΤΊΛ Рхг%г-Х Η ° Η' | 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-лропил]-амид |
| 51Ν | α η Η 0Η αγγζο Η | 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-пропил]-амид |
| 52Ν | Η | 2,4-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-пропил]-амид |
-30007186
Другие репрезентативные соединения по настоящему изобретению показаны в табл. 1в ниже.
Таблица 1в
| № соединения | Структура | Название |
| 45Ν | н | 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пропил)-метил-амид |
| 455 | и | 5-((2)-5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты ((5)2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)метил-амид |
| 465 | К | 5-((2)-5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты ((К)2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)метил-амид |
Соединения, представленные в табл. 1а-1в, являются только примерами и никоим образом не должны истолковываться как ограничивающие объем данного изобретения.
Предпочтительные воплощения
Хотя самое широкое определение приведено в разделе Краткое изложение сущности изобретения, некоторые соединения формулы (I), приведенные ниже, предпочтительны.
Предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая, где
Я6 выбран из группы, состоящей из водорода и алкила, предпочтительно водорода, метила, этила, изопропила, трет-бутила, изобутила или н-бутила, более предпочтительно водорода или метила; а
Я7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила и гетероарила, и более предпочтительно Я7 представляет собой водород, метил, этил, изопропил, и-, изо- или трет-бутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, даже более предпочтительно метил, водород или фенил.
Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая, где
Я6 выбран из группы, состоящей из водорода и алкила, предпочтительно водорода, метила, этила, изопропила, трет-бутила, изобутила или н-бутила, более предпочтительно водорода или метила, наиболее предпочтительно метила;
Я7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила и гетероарила, и Я7 представляет собой, более предпочтительно, водород, метил, этил, изопропил, и-, изо- или трет-бутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, даже более предпочтительно метил, водород или фенил; и
Я3, Я4 и Я5 представляют собой водород; а
Ζ представляет собой арил.
Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая, где:
Я6 выбран из группы, состоящей из водорода и алкила, предпочтительно водорода, метила, этила, изопропила, трет-бутила, изобутила или н-бутила, более предпочтительно водорода или метила, наиболее предпочтительно метила;
Я7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила и гетероарила, и Я7 представляет собой, более предпочтительно, водород, метил, этил, изопропил, и-, изо- или трет-бутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, даже более предпочтительно метил, водород или фенил, наиболее предпочтительно метил; и
Я3, Я4 и Я5 представляют собой водород; а
Ζ представляет собой гетероарил, предпочтительно триазинил, тетразолил, имидазолил, пиридинил, пиримидинил или пиразинил.
Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая, где:
Я6 выбран из группы, состоящей из водорода и алкила, предпочтительно водорода, метила, этила, изопропила, трет-бутила, изобутила или н-бутила, более предпочтительно водорода или метила, наиболее предпочтительно метила;
Я7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила и гетероарила, и Я7 представляет собой, более предпочтительно, водород, метил, этил, изопропил, и-, изо- или трет-бутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, даже более предпочтительно метил, водород или фенил; и
Я3, Я4 и Я5 представляют собой водород; а
-31 007186
Ζ представляет собой гетероцикл.
Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая, где:
Я6 выбран из группы, состоящей из водорода и алкила, предпочтительно водорода, метила, этила, изопропила, трет-бутила, изобутила или н-бутила, более предпочтительно водорода или метила, наиболее предпочтительно метила;
Я7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила и гетероарила, и Я7 представляет собой, более предпочтительно, водород, метил, этил, изопропил, н-, изо- или трет-бутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, даже более предпочтительно метил, водород или фенил, наиболее предпочтительно метил; и
Я3, Я4 и Я5 представляют собой водород; а
Ζ представляет собой -НЯ15Я16, где Я15 и Я16 объединены с образованием гетероциклоамино, предпочтительно пиперидин-1-ила, Ы-метилпиперидин-1-ила, пиперазин-1-ила, Ы-метилпирролидин-1-ила, пирролидин-1-ила, морфолин-4-ила, тиоморфолин-4-ила, тиоморфолино-1-оксида, тиоморфолино-1,1-диоксида, 4-этилоксикарбонилметилпиперазин-1-ила, 3-оксопиперазин-1-ила, имидазолидин-1-ил-2-она, пирролидин-1-ил-2-она, 2-оксогомопиперазин-1-ила или тетрагидропиримидин-1-ил-2-она, более предпочтительно морфолин-4-ила.
Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая, где:
Я6 выбран из группы, состоящей из водорода и алкила, предпочтительно водорода, метила, этила, изопропила, трет-бутила, изобутила или н-бутила, более предпочтительно водорода или метила;
Я7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила и гетероарила, где Я17 представляет собой гидрокси, алкил или арил, и Я7 представляет собой, более предпочтительно, водород, метил, этил, изопропил, н-, изо- или трет-бутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, даже более предпочтительно метил, водород или фенил; и
Я3, Я4 и Я5 представляют собой водород; а
Ζ представляет собой -НЯ15Я16, где Я15 и Я16 представляют собой алкил, предпочтительно диэтиламино, диметиламино или этиламино.
В пределах вышеуказанных предпочтительных и более предпочтительных групп даже более предпочтительной группой соединений является такая, где:
Я1 представляет собой водород, алкил, -С(О)НЯ12Я13, незамещенный циклоалкил, предпочтительно водород, 3,4-диметоксифениламинокарбонил, 4-метокси-3-хлорфениламинокарбонил, даже более предпочтительно водород или метил, наиболее предпочтительно водород; и
Я2 представляет собой водород, галогено, низший алкокси, предпочтительно Я2 представляет собой водород, хлоро, бромо, фторо, метокси, этокси, фенил, диметиламиносульфонил, 3-хлорфениламиносульфонил, карбокси, метокси, более предпочтительно водород, фторо или бромо. Наиболее предпочтительно Я2 представляет собой фторо и локализован в 5-положении индолинонового кольца.
В вышеуказанных предпочтительных, более предпочтительных и еще более предпочтительных соединениях стереохимия по атому углерода, несущему гидроксигруппу в цепи -СОБ1НСН(Я3)*СЯ4(ОН)СЯ^ и обозначенному символом представляет собой что-либо из Я8, Я или 8, более предпочтительно 8.
Полезность
РК, чья каталитическая активность модулируется соединениями по настоящему изобретению, включают протеинтирозинкиназы, которых существует два типа: рецепторные тирозинкиназы (ЯТК) и клеточные тирозинкиназы (СТК), а также серинтреонинкиназы (8ТК). ЯТК-опосредованная сигнальная трансдукция инициируется внеклеточным взаимодействием со специфичным фактором роста (лигандом), за чем следуют димеризация рецептора, временная стимуляция свойственной протеинтирозинкиназной активности и фосфорилирование. Сайты связывания, таким образом, создаются для молекул внутриклеточной сигнальной трансдукции и приводят к образованию комплексов с рядом цитоплазматических сигнальных молекул, которые облегчают соответствующий клеточный ответ (например, деление клетки, метаболические эффекты на внеклеточное микроокружение и т.д.). Смотри 8сЫе88шдет апб υΐΙτίοΗ. 1992, Хеигоп 9: 303-391.
Было показано, что сайты фосфорилирования тирозина на рецепторах факторов роста функционируют как высокоаффинные сайты связывания для доменов 8Н2 (зтс гомология, зтс йото1оду) сигнальных молекул. ЕапЙ е1 а1., 1992, Се11 69:413-423, 8опдуапд е1 а1., 1994, Мо1. Се11. Вю1. 14:2777-2785), 8опдуапд е1 а1., 1993, Се11 72:767-778, и Косй е1 а1., 1991, 8с1епсе 252:668-678. Несколько внутриклеточных субстратных белков, которые связываются с ЯТК, были идентифицированы. Они могут быть разделены на две основные группы: (1) субстраты, которые имеют каталитический домен, и (2) субстраты, у которых отсутствует такой домен, но которые служат в качестве адаптеров и связываются с каталитически активными молекулами. 8опдуапд е1 а1., 1993, Се11 72: 767-778. Специфичность взаимодействий между рецепторами и 8Н2-доменами их субстратов определяется аминокислотными остатками, непосредственно окружающими фосфорилированный тирозиновый остаток.
Различия в афинностях связывания между 8Н2-доменами и аминокислотными последовательностями, окружающими фосфотирозиновые остатки на конкретных рецепторах, находятся в соответствии с наблюдаемыми различиями в профилях их субстратного фосфорилирования. 8опдуапд е1 а1., 1993, Се11 72: 767-778. Эти наблюдения предполагают, что функция каждой ЯТК определяется не только характе
- 32 007186 ром ее экспрессии и доступностью лигандов, но также рядом путей по ходу сигнальной трансдукции, которые активируются конкретным рецептором. Таким образом, фосфорилирование обеспечивает важную регуляторную стадию, которая определяет селективность сигнальных путей, задействованных рецепторами специфичных факторов роста, а также рецепторами факторов дифференцировки.
8ТК, являясь преимущественно цитозольными, влияют на внутреннюю биохимию клетки, часто в виде ответа в сторону нижнего уровня на РТК-событие. 8ТК вовлечены в сигнальный процесс, который инициирует синтез ДНК и последующий митоз, приводящий к клеточной пролиферации.
Таким образом, РК-сигнальная трансдукция приводит, среди других ответов, к клеточной пролиферации, дифференцировке, росту и метаболизму. Аномальная клеточная пролиферация может приводить к широкому спектру расстройств и заболеваний, включая развитие неоплазии, такой как карцинома, саркома, глиобластома и гемангиома, расстройств, таких как лейкемия, псориаз, артериосклероз, артрит и диабетическая ретинопатия, и других расстройств, связанных с неконтролируемым ангиогенезом и/или васкулогенезом.
Точное понимание механизма, по которому соединения по настоящему изобретению ингибируют РК, не требуется для того, чтобы применять настоящее изобретение на практике. Однако, не привязываясь настоящим к какому-либо конкретному механизму или теории, считается, что данные соединения взаимодействуют с аминокислотами в каталитической области РК. РК обычно обладают двудольной структурой, причем АТФ, по-видимому, связывается в щели между двумя долями в области, где аминокислоты консервативны среди РК. Полагается, что ингибиторы РК связываются с помощью нековалентных взаимодействий, таких как водородная связь, силы Ван дер Ваальса и ионные взаимодействия, в той же самой основной области, где вышеуказанная АТФ связывается с РК. Более конкретно, считают, что 2индолиноновый компонент соединений по настоящему изобретению связывается в основном пространстве, обычно занятом адениновым кольцом АТФ. Спицифичность конкретной молекулы в отношении конкретной РК может затем возрастать как результат дополнительных взаимодействий между различными заместителями на 2-индолиноновом ядре и аминокислотными доменами, специфичными для конкретных РК. Таким образом, различные индолиноновые заместители могут вносить вклад в преимущественное связывание с конкретными РК. Возможность отобрать соединения, активные в отношении различных сайтов связывания АТФ (или другого нуклеотида), делает соединения по настоящему изобретению полезными для нацеливания на любой белок с таким сайтом. Соединения, описанные здесь, таким образом, полезны в ίη νίίτο анализах для таких белков, а также проявляют ίη νίνο терапевтические эффекты посредством взаимодействия с такими белками.
Дополнительно, соединения по настоящему изобретению обеспечивают терапевтический подход к лечению многих видов твердых опухолей, включая, но не ограничиваясь ими, карциномы, саркомы, включая саркому Калоши, эритробластому, глиобластому, менингиому, астроцитому, меланому и миобластому. Лечение или предупреждение рака не в виде твердых опухолей, такого как лейкемия, также предполагается настоящим изобретением. Показания могут включать в себя, но не ограничены ими, рак головного мозга, рак мочевого пузыря, рак яичников, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак ободочной кишки, рак крови, рак легкого и рак кости.
Дополнительные примеры, без ограничения, типов расстройств, связанных с несоответствующей активностью РК, в предупреждении, лечении и изучении которых могут быть полезны соединения, описанные здесь, представляют собой клеточные пролиферативные расстройства, фиброзные расстройства и расстройства обмена веществ.
Клеточные пролиферативные расстройства, которые можно предупреждать, лечить или дополнительно изучать с помощью настоящего изобретения, включают в себя рак, пролиферативные расстройства кровеносных сосудов и пролиферативные расстройства мезангиальных клеток.
Пролиферативные расстройства кровеносных сосудов относятся к расстройствам, связанным с аномальным васкулогенезом (образование кровеносных сосудов) и ангиогенезом (распространение кровеносных сосудов). Хотя васкулогенез и ангиогенез играют важную роль в разнообразных нормальных физиологических процессах, таких как эмбриональное развитие, образование желтого тела, заживление ран и регенерация органов, они также играют кардинальную роль в развитии рака, где они приводят к образованию новых капилляров, необходимых для поддержания опухоли живой. Другие примеры пролиферативных расстройств кровеносных сосудов включают в себя артрит, где новые капиллярные кровеносные сосуды проникают в сустав и разрушают хрящ, и глазные болезни, подобные диабетической ретинопатии, где новые капилляры в сетчатке проникают в стекловидное тело, кровоточат и вызывают слепоту.
Были идентифицированы две структурно родственные ВТК, которые связывают УЕОБ с высокой афинностью: Гпъ-подобный тирозиновый рецептор 1 (ί1ί-1) (8ЫЬиуа с1 а1., 1990, Онсоцснс. 5:519-524; Бе Упек еί а1., 1992, 8с1епсе, 255:989-991) и КБВ/БЬК-1 рецептор, также известный как УЕОБ-Я2. Сообщалось, что сосудистый эндотелиальный фактор роста (УЕОБ) представляет собой специфический митоген эндотелиальных клеток с ίη νίίτο активностью, стимулирующей рост эндотелиальных клеток. Беггага & Непхек 1989, Вюсйеш. ВюрЬуз. Вез. Сотт., 161:851-858; Уа1зтап е1 а1., 1990, 1. Βίο1. С1ет., 265:1946119566. Информация, приведенная в заявках на патент США №№ 08/193829, 08/038596 и 07/975750, прочно позволяет считать, что УЕОБ не только ответственен за пролиферацию эндотелиальных клеток,
- 33 007186 но также является первичным регулятором нормального и патологического ангиогенеза. См., в общем, К1аАшгп & 8окег, 1993, СипепСВю1о§у, 3 (10) 699-702; Ноиск, е1 а1., 1992. 1. Вю1. Скет., 267:26031-26037.
Нормальный васкулогенез и ангиогенез играют важные роли в разнообразных физиологических процессах, таких как эмбриональное развитие, заживление ран, регенерация органов и женские репродуктивные процессы, такие как развитие фолликула в желтом теле во время овуляции и плацентарный рост после беременности. Ро1ктап & 8Ыпд, 1992, 1. Вю1ощса1 Скет., 267 (16): 10931-34. Неконтролируемый васкулогенез и/или ангиогенез связан с заболеваниями, такими как диабет, а также со злокачественными твердыми опухолями, которым для роста нужна васкуляризация. К1ад8Ьигп & 8окег, 1993, Сиггей Вю1оду, 3 (10): 699-702; Ро1ккат, 1991, 1. ЫаИ. Сапсег Ιπ8ΐ., 82: 4-6; №е1йпег, е1 а1., 1991, Хеи Еп§1. 1. Мей., 324: 1-5.
Предполагаемая роль УЕСР в пролиферации и миграции эндотелиальных клеток во время ангиогенеза и васкулогенеза указывает на важную роль КОК/РЬК-1-рецептора в этих процессах. Заболевания, такие как сахарный диабет (Ро1ктап, 198, в Х1Ск Сопдгекк о! ТкготЬоА апй Наето51а515 (Уег51гае1а. е1 а1., ей§.), рр. 583-596, Ьеиуеп Ишуегайу Рге§8, Ьеиуеп) и артрит, а также злокачественный рост опухоли, могут являться результатом неконтролируемого ангиогенеза. Смотри, например, Ро1ктап, 1971, N. Епд1. 1. Мей., 285: 1182-1186. Рецепторы, с которыми УЕСР специфически связывается, представляют собой важную и мощную терапевтическую мишень для регуляции и модуляции васкулогенеза и/или ангиогенеза также разнообразных тяжелых заболеваний, в которые вовлечен аномальный клеточный рост, вызванный такими процессами. Р1оитап, е1 а1., 1994, ΌΝ&Ρ, 7(6): 334-339. Более конкретно, высокоспецифичная роль КОК/РЬК-1 рецептора в неоваскуляризации делает его мишенью выбора для терапевтических подходов к лечению рака и других заболеваний, в которые вовлечено неконтролируемое образование кровеносных сосудов.
Таким образом, в настоящем изобретении предложены соединения, способные к регуляции и/или модуляции тирозинкиназной сигнальной трансдукции, включая КОК/РЬК-1-рецепторную сигнальную трансдукцию, для ингибирования или стимуляции ангиогенеза и/или васкулогенеза, т. е. соединения, которые ингибируют, предупреждают или оказывают влияние на сигнал, передаваемый КОК/РЬК-1 при активации лигандами, такими как УЕСР. Хотя считается, что соединения по настоящему изобретению действуют на рецептор или другой компонент в пути тирозинкиназной сигнальной трансдукции, они могут также действовать непосредственно на опухолевые клетки, которые являются результатом неконтролируемого ангиогенеза.
Хотя номенклатура человеческого и мышиного эквивалентов рецептора Дк-1 отличается, они являются во многих отношениях взаимозаменяемыми. Мышиный рецептор, Р1к-1, и его человеческий эквивалент, КОК, имеют гомологию последовательности на 93,4% в пределах внутриклеточного домена. Подобным образом, мышиный РЬК-1 связывает человеческий УЕСР с такой же афинностью, что и мышиный УЕСР, и, соответственно, активируется лигандом, полученным от любого из этих видов. МШаиег е1 а1., 1993, Се11, 72: 835-846; Спит е1 а1., 1993, Ргос. Νίώ. Асай. 8с1. И8Л, 90: 7533-7537. РЬК-1 также связывается с субстратами человеческой КТК (например, РЬС-γ или р85) и затем фосфорилирует их по тирозину при совместной экспрессии в 293 клетках (фибробласты почек человеческого эмбриона).
Модели, которые опираются на РЬК-1 рецептор, следовательно, прямо применимы для понимания КОК рецептора. Например, использование мышиного РЬК-1 рецептора в способах, которыми идентифицируют соединения, регулирующие путь сигнальной трансдукции у мышей, прямо применимо к идентификации соединений, которые могут быть использованы для регуляции пути сигнальной трансдукции у человека, т.е. которые регулируют активность, связанную с КОК рецептором. Таким образом, химические соединения, идентифицированные в качестве ингибиторов КОК/РЬК-1 ш уйго, могут быть подтверждены в подходящих 1п у1уо моделях. Было продемонстрировано, что обе 1п у1уо, мышиная и крысиная, животные модели обладают исключительной ценностью для оценки клинического потенциала агентов, действующих на индуцируемый КОК/РЬК-1 путь сигнальной трансдукции.
Таким образом, в настоящем изобретении предложены соединения, которые регулируют, модулируют и/или ингибируют васкулогенез и/или ангиогенез, воздействуя на ферментативную активность рецептора КОК/РЬК-1 и оказывая влияние на сигнал, передаваемый КОК/РЬК-1. Таким образом, в настоящем изобретении предложен терапевтический подход к лечению многих видов твердых опухолей, включая, но не ограничиваясь ими, глиобластому, меланому и саркому Калоши, а также карциному яичника, легкого, молочной железы, простаты, поджелудочной железы, ободочной кишки и эпидермиса. Кроме того, данные предполагают, что введение соединений, которые ингибируют КОК/РЬК-1-опосредованный путь сигнальной трансдукции, может также быть использовано при лечении гемангиомы, рестеноза и диабетической ретинопатии.
Более того, данное изобретение относится к ингибированию васкулогенеза и ангиогенеза через другие рецептор-опосредованные пути, включая путь, в который вовлечен ί1ΐ-1 рецептор.
Сигнальная трансдукция, опосредованная рецепторной тирозинкиназой, инициируется внеклеточным взаимодействием со специфичным фактором роста (лигандом), за чем следует димеризация рецептора, временная стимуляция свойственной протеинтирозинкиназной активности и аутофосфорилирование. Создаются, таким образом, сайты связывания для молекул внутриклеточной сигнальной трансдукции, что приводит к образованию комплексов с рядом цитоплазматических сигнальных молекул, кото
- 34 007186 рые способствуют соответствующему клеточному ответу, например клеточному делению и метаболическим эффектам на внеклеточное микроокружение. Смотри 8с11екк1пдег апб и11пск 1992, Ыеигоп 9: 1-20.
Близкая гомология внутриклеточных областей ΚΌΚ/ΕΈΚ-1 с таковыми у рецептора ΡΌΟΕ-β (50,3% гомологии) и/или родственного ί1ΐ-1 рецептора указывает на индукцию перекрывания путей сигнальной трансдукции. Например, для рецептора ΡΌΟΡ-β было показано, что члены кгс-семейства (Т^ат1еу е! а1., 1993, Ргос. Ыа!1. Асаб. 8а. И8А, 90: 7696-7700), фосфатидилинозитол-3'-киназа (Ни е! а1., 1992, Мо1. Се11. В1о1., 12:981-990), фосфолипаза су (КакЫкЫаи & Соорег, 1993, Мо1. Се11. Вю1., 4:49-51), гак-СТРазаактивирующий белок (КакЫкЫап е! а1., 1992, ЕМВО к, 11: 1373-1382), РТР-ГО/кур (Ках1апккак е! а1., 1993, Ргос. Ыа!1. Асаб. 8а. И8А, 10 90:6939-6943), СгЬ2 (Атбзюп е! а1., 1994, Мо1. Се11. Вю1., 14:6715-6726) и адаптерные молекулы 811с и Ыск (МкЫтига е! а1., 1993, Мо1. Се11. Вю1., 13:6889-6896) связываются с областями, включающими в себя различные сайты аутофосфорилирования. Смотри, в общем, С1аеккоп\Уе1кк 1994, Ргод. Сго\\111 Рас!ог Яек., 5: 37-54. Таким образом, вероятно, что пути сигнальной трансдукции, активируемые КЭЯ/ЕЕК-1, включают в себя гак-путь (ЯохакЯ е! а1., 1992, Ыа!иге, 360: 689-692), Р13'-киназный, кгс-опосредованный и р1су-опосредованный пути. Каждый из этих путей может играть критическую роль в ангиогенном и/или васкулогенном эффекте КОЯ/ЕЬК-1 в эндотелиальных клетках. Следовательно, еще один аспект настоящего изобретения относится к применению органических соединений, описанных здесь, для модуляции ангиогенеза и васкулогенеза, поскольку эти процессы контролируются указанными путями.
Напротив, расстройства, связанные со сжатием, сокращением или закрытием кровеносных сосудов, такие как рестеноз, также подразумеваются, и их можно лечить или предупреждать с помощью способов по настоящему изобретению.
Фиброзные расстройства относятся к аномальному формированию внеклеточного матрикса. Примеры фиброзных расстройств включают цирроз печени и пролиферативные расстройства мезангиальных клеток. Цирроз печени характеризуется увеличением составляющих внеклеточного матрикса, приводя к образованию печеночных рубцов. Увеличенный внеклеточный матрикс, приводящий к печеночным рубцам, также может быть вызван вирусной инфекцией, такой как гепатит. Липоциты, по-видимому, играют главную роль в циррозе печени. Другие подразумеваемые фиброзные расстройства включают атеросклероз.
Пролиферативные расстройства мезангиальных клеток относятся к расстройствам, вызываемым аномальной пролиферацией мезангиальных клеток. Мезангиальные пролиферативные расстройства включают различные человеческие болезни почек, такие как гломерулонефрит, диабетическая нефропатия и злокачественный нефросклероз, а также такие расстройства, как синдромы тромботической микроангиопатии, отторжение трансплантата и гломерулопатии. ЯТК РЭСРЯ вовлечена в поддержание пролиферации мезангиальных клеток. Е1оеде е! а1., 1993, К1бпеу 1п!егпабопа1 43: 478-548.
Многие виды рака представляют собой клеточные пролиферативные расстройства и, как отмечалось выше, РК связаны с клеточными пролиферативными расстройствами. Таким образом, не удивительно, что РК, такие как, например, члены семейства ЯТК, связаны с развитием рака. Некоторые из этих рецепторов, подобно ЕСЕЯ (Ти/ί е! а1., 1991, Вг. I. Сапсег 63:227-233, Тогр е! а1., 1992, АРМ18 100: 713719), НЕЯ2/пеи (81атоп е! а1., 1989, 8аепсе 244: 707-712) и РОСЕ-Я (КитаЬе е! а1., 1992, Опсодепе, 7:627-633), сверхэкспрессируются во многих опухолях и/или постоянно активирутся аутокринными петлями. Действительно, при большинстве наиболее распространенных и тяжелых видах рака были продемонстрированы сверхэкспрессия этих рецепторов (АкЬакак апб 8ипег-АкЬакак е! а1., 1992, 1. №иго1. 8ск, 111:119-133, Эюккоп е! а1., 1992, Сапсе1-Тгеа1теп! Яек. 61:249-273, Когс е! а1., 1992, 1. С1т. 1пуек!., 90:1352-1360) и аутокринные петли (Ьее апб Ооподкие, 1992, 1. Се11. Вю1., 118:1057-1070, Когс е! а1., кирга, АкЬакак апб 8ипег-АкЬакак е! а1., кирга). Например, ЕСЕЯ связан с плоскоклеточной карциномой, астроцитомой, глиобластомой, раком головы и шеи, раком легкого и раком мочевого пузыря. НЕЯ2 связан с раком молочной железы, яичника, желудка, легкого, поджелудочной железы и мочевого пузыря. РОСЕЯ связан с глиобластомой и меланомой, а также с раком легкого, яичника и простаты. ЯТК с-те! также связана с образованием злокачественной опухоли. Например, с-те! также связан, среди других видов рака, с карциномами ободочной и прямой кишки, щитовидной железы, поджелудочной железы, желудка и гепатоцеллюлярной карциномой и лимфомами. Дополнительно, с-те! связан с лейкемией. Сверхэкспрессия гена с-те! также была обнаружена у пациентов с болезнью Ходжкина и болезнью Беркитта.
1СЕ-1Я помимо того, что он вовлечен в парентеральное питание и в диабет типа II, также связан с несколькими типами рака. Например, ЮЕ4 вовлечен в качестве аутокринного стимулятора роста для нескольких типов опухолей, например клетки карциномы рака молочной железы человека (Айеада е! а1., 1989, 1. С1т. Шуек!. 84: 1418-1423) и клетки мелкоклеточной опухоли легкого (Масаи1еу е! а1., 1990, Сапсег Яек., 50: 2511-2517). В дополнение, ЮЕЛ, хотя и неотъемлемо вовлечен в нормальный рост и дифференцировку нервной системы, также, по-видимому, является аутокринным стимулятором человеческих глиом. 8апбЬегд-Ыогбду1к! е! а1., 1993, Сапсег Яек. 53: 2475-2478. Важность ЮЕ4Я и его лигандов в клеточной пролиферации дополнительно поддерживается тем фактом, что многие типы клеток в культуре (фибробласты, эпителиальные клетки, гладкомышечные клетки, Т-лимфоциты, миелоидные клетки, хондроциты и остеобласты (стволовые клетки костного мозга)) стимулируются к росту с помощью ЮЕ-к
- 35 007186
СоШпид апб 6о1бгшд, 1991, Еикагуойс Сепе Ехргеззюп, 1: 301-326. Вазегда и Сорро1а предполагают, что 1СЕ-1В играет центральную роль в механизме трансформации и как таковой может быть предпочтительной мишенью для терапевтических вмешательств для широкого спектра человеческих злокачественных опухолей. Вазегда, 1995, Сапсег Вез., 55: 249-252, Вазегда, 1994, Се11 79: 927-930, Сорро1а е! а1., 1994, Мо1. Се11. Вю1., 14: 4588-4595.
БТК вовлечены во многие типы рака, включая, в значительной степени, рак молочной железы (Сапсе, е! а1., 1п!. 1. Сапсег, 54: 571-77 (1993)).
Связь между аномальной активностью РК и заболеванием не ограничивается раком. Например, ВТК связаны с такими заболеваниями, как псориаз, сахарный диабет, эндометриоз, ангиогенез, развитие атеросклеротических бляшек, болезнь Альцгеймера, рестеноз, болезнь Гиппеля-Линдау, эпидермальная гиперпролиферация, нейродегенеративные заболевания, старческая дегенерация желтого пятна и гемангиомы. Например, ЕСЕВ показан при заживлении ран роговицы и кожи. Дефекты инсулин-В и 1СЕ-1В показаны при сахарном диабете типа II. Более полная корреляция между конкретными ВТК и их терапевтическими показаниями приведена в Р1о^тап е! а1., 1994, ΌΝ&Ρ 7: 334-339.
Как отмечалось ранее, не только ВТК, но и СТК, включая, но не ограничиваясь ими, згс, аЫ, Ерз, уез, Еуп, 1уп, 1ск, Ык, Иск, Едг и угк (обзор в Во1еп е! а1., 1992, ЕАБЕВ 1., 6: 3403-3409), вовлечены в пролиферативные и метаболические пути сигнальной трансдукции, и, таким образом, можно ожидать, и это было показано, что они вовлечены во многие РТК-опосредованные расстройства, на которые направлено настоящее изобретение. Например, было показано, что мутантная згс (ν-згс) представляет собой онкобелок (рр60¥-згс) у куриц. Более того, ее клеточный гомолог, протоонкоген рр60с-згс, передает онкогенные сигналы многих рецепторов. Сверхэкспрессия ЕСЕВ или НЕВ2/пеи в опухолях приводит к конститутивной активации рр60с-згс, которая присуща злокачественным клеткам, но отсутствует в нормальных клетках. С другой стороны, мыши, дефицитные по экспрессии с-згс, проявляют остеопетрозный фенотип, указывая на ключевое участие с-згс в функции остеобластов и возможную вовлеченность в родственные расстройства.
Подобным образом, 2ар70 вовлечен в Т-клеточную передачу сигнала, которая может быть связана с аутоиммунными расстройствами.
БТК связаны с воспалением, аутоиммунным заболеванием, иммунологическими ответами и гиперпролиферативными расстройствами, такими как рестеноз, фиброз, псориаз, остеоартрит и ревматоидный артрит.
РК также вовлечены в имплантацию эмбриона. Таким образом, соединения по настоящему изобретению могут обеспечить эффективный способ предупреждения такой имплантации эмбриона и, таким образом, могут быть полезны в качестве агентов контроля рождаемости. Дополнительные расстройства, которые можно лечить или предупреждать с использованием соединений по настоящему изобретению, представляют собой иммунологические расстройства, такие как аутоиммунное заболевание, СПИД, и сердечно-сосудистые расстройства, такие как атеросклероз.
Наконец, в настоящее время предполагается, что как ВТК, так и БТК вовлечены в гипериммунные расстройства.
Представленные соединения и данные не следует интерпретировать как каким-либо образом ограничивающие объем данного изобретения.
Введение и фармацевтическая композиция
Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить пациенту-человеку как таковые либо их можно вводить в фармацевтических композициях, в которых вышеупомянутые материалы смешаны с подходящими носителями или эксципиентом(ами). Методики для приготовления и введения лекарств могут быть найдены в Вешшд!оп'з Рйагтасо1одюа1 Баепсез, Маск РиЫйзЫпд Со., Еаз!оп, РА., последнее издание.
Как используется здесь, вводить или введение относится к доставке соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы или его фармацевтически приемлемую соль по настоящему изобретению, организму с целью предупреждения или лечения расстройства, связанного с РК.
Подходящие пути введения могут включать в себя, без ограничения, пероральное, ректальное введение, введение через слизистую или интерстинальное введение либо внутримышечную, подкожную, интрамедуллярную, интратекальную, прямую внутрижелудочковую, внутривенную, интравитреальную, интраперитонеальную, интраназальную или внутриглазную инъекции. Предпочтительными путями введения являются пероральный и парентеральный.
Альтернативно, можно вводить соединение местным, а не системным способом, например путем инъекции соединения прямо в твердую опухоль, часто в депо-препарате или в препарате с замедленным высвобождением.
Более того, можно вводить лекарство в системе направленной доставки лекарства, например в липосоме, покрытой опухольспецифичным антителом. Липосомы будут мишенью и будут селективно захватываться ей.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть произведены с помощью способов, хорошо известных в данной области техники, например общепринятыми способами смешивания, растворения, гранулирования, изготовления драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, захватывания или лиофилизации.
- 36 007186
Фармацевтические композиции для применения в соответствии с настоящим изобретением могут быть приготовлены в виде препаратов традиционным способом, с использованием одного или более чем одного физиологически приемлемого носителя, включая эксципиенты и вспомогательные вещества, которые облегчают процесс включения активных соединений в препараты, которые могут быть использованы фармацевтически. Подходящий препарат зависит от выбранного пути введения.
Для инъекции соединения по изобретению могут быть приготовлены в виде препаратов в форме водных растворов, предпочтительно в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хенка, раствор Рингера или физиологический солевой буфер. Для введения через слизистую в препарате используют смачивающие реагенты, подходящие для проникновения через нужный барьер. Такие смачивающие реагенты обычно известны в данной области техники.
Для перорального введения соединения могут быть включены в препарат путем объединения активных соединений с фармацевтически приемлемыми носителями, хорошо известными в данной области. Такие носители позволяют готовить препараты соединений по изобретению в виде таблеток, пилюлей, лепешек, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, взвесей, суспензий и т.п. для перорального проглатывания пациентом. Фармацевтические препараты для перорального применения могут быть приготовлены с использованием твердого экципиента, возможно с измельчением полученной смеси и обработкой смеси гранул после добавления других подходящих вспомогательных веществ, если желательно, с получением ядер таблеток или драже. Полезными эксципиентами являются, в частности, наполнители, такие как сахара, включая лактозу, сахарозу, маннит или сорбит, препараты целлюлозы, такие как, например, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал и картофельный крахмал, и другие материалы, как, например, желатин, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза и/или поливинилпирролидон (ПВП). При желании могут быть добавлены разрыхляющие агенты, такие как поперечно-сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота. Может быть также использована соль, такая как альгинат натрия.
Ядра драже обеспечивают подходящим покрытием. Для этой цели могут быть использованы концентрированные растворы сахаров, которые могут, возможно, содержать аравийскую камедь, тальк, поливинилпирролидон, гель на основе карбопола, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, растворы лака и подходящие органические растворители или смеси растворителей. Красители или пигменты могут быть добавлены в покрытия таблеток или драже для идентификации или характеристики различных комбинаций доз активного соединения.
Фармацевтические композиции, которые могут применяться перорально, включают в себя капсулы с крышечками, сделанные из желатина, а также мягкие герметичные капсулы, изготовленные из желатина и пластификатора, такого как глицерин или сорбит. Капсулы с крышечками могут содержать активные ингредиенты в смеси с наполнителем, таким как лактоза, связующим веществом, таким как крахмал, и/или смазывающим веществом, таким как тальк или стеарат магния, и, возможно, со стабилизаторами. В мягких капсулах активные соединения могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин либо жидкие полиэтиленгликоли. Стабилизаторы также могут быть добавлены в эти препараты.
Фармацевтические композиции, которые также могут быть использованы, включают в себя твердые желатиновые капсулы. Как неограничивающий пример: готовый пероральный лекарственный продукт активного соединения, представляющий собой капсулу, может иметь дозы 50 и 200 мг. Эти две дозы получают из тех же самых гранул путем заполнения ими твердых желатиновых капсул разного размера: размера 3 для капсулы на 50 мг и размера 0 для капсулы на 200 мг. Состав препарата может быть, например, таким, как указано в табл. 2.
Таблица 2
| Ингредиент наименование/ сорт | Концентрация при грануляции (% масс./масс.) | Количество в капсуле на 50 мг (мг) | Количество в капсуле на 200 мг (мг) |
| Активное соединение ΝΕ | 65,0 | 50,0 | 200,0 |
| Маннит ΝΕ | 23,5 | 18,1 | 72,4 |
| Кроскармеллоза натрия ΝΕ | 6,0 | 4,6 | 18,4 |
| Повидон К 30 ΝΕ | 5,0 | 3,8 | 15,2 |
| Стеарат магния ΝΕ | 0,5 | 0,38 | 1,52 |
| Капсула, шведская желтая ΝΕ | Размер 3 | Размер 0 |
-37007186
Капсулы могут быть упакованы в склянки из коричневого стекла или пластиковые бутылочки для защиты активного соединения от света. Контейнеры, содержащие препарат активного соединения в форме капсул, должны храниться при регулируемой комнатной температуре (15-30°С).
Для введения путем ингаляции соединения для применения по настоящему изобретению удобно доставлять в форме распыляемого аэрозоля, с использованием контейнера под давлением или распылителя и подходящего пропеллента, например, без ограничения, дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана или диоксида углерода. В случае аэрозоля под давлением единицу дозировки можно регулировать путем обеспечения клапана для доставки отмеренного количества. Капсулы и картриджи для использования в ингаляторе или инсуффляторе, изготовленные, например, из желатина, могут быть приготовлены как препарат, содержащий порошкообразную смесь соединения и подходящую порошкообразную основу, такую как лактоза или крахмал.
Соединения могут также быть включены в состав препаратов для парентерального введения, например, путем болюсной инъекции или непрерывной инфузии. Препараты для инъекций могут быть представлены в стандартной лекарственной форме, например в ампулах или в многодозовых контейнерах, с добавленным консервантом. Композиции могут находиться в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных носителях, и могут содержать такие материалы, используемые в технологии приготовления лекарственных средств, как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты.
Фармацевтические композиции для парентерального введения включают водные растворы водорастворимой формы активного соединения, такой как, без ограничения, соль. Дополнительно, суспензии активных соединений могут быть приготовлены в липофильном растворителе. Подходящие липофильные растворители включают в себя жирные масла, такие как масло кунжута, синтетические эфиры жирных кислот, такие как этилолеат, и триглицериды, или материалы, такие как липосомы. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран. Возможно, суспензия может также содержать подходящие стабилизаторы и/или агенты, которые увеличивают растворимость соединений, позволяя получать высококонцентрированные растворы.
Альтернативно, активный ингредиент может быть в порошкообразной форме для разведения подходящим растворителем, например стерильной апирогенной водой, перед применением.
Соединения по изобретению могут быть включены в препараты в виде ректальных композиций, таких как суппозитории или удерживающие клизмы, с использованием, например, традиционных основ для суппозиториев, таких как масло-какао или другие глицериды.
В дополнение к препаратам, описанным ранее, соединения могут быть включены в депо-препараты. Такие препараты длительного действия можно вводить путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. Соединение по настоящему изобретению для этого пути введения может быть включено в препарат с подходящими полимерными или гидрофобными материалами (например, в эмульсии с фармакологически приемлемым маслом), с ионообменными смолами либо в виде слаборастворимого производного, такого как, без ограничения, слаборастворимая соль.
Неограничивающим примером фармацевтического носителя для гидрофобных соединений по настоящему изобретению является система сорастворителей, содержащая бензиловый спирт, неполярное поверхностно-активное вещество (ПАВ), смешивающийся с водой органический полимер и водную фазу, как, например, система сорастворителей УРБ. УРБ представляет собой раствор 3% мас./об. бензилового спирта, 8% мас./об. неполярного поверхностно-активного вещества полисорбата 80 и 65% мас./об. полиэтиленгликоля 300, доведенный до объема абсолютным этанолом. Система сорастворителей УРБ (УРБ:Б5^) состоит из УРБ, разбавленного 1:1 5% декстрозой в водном растворе. Эта система сорастворителей хорошо растворяет гидрофобные соединения и сама по себе дает низкую токсичность при системном введении. Естественно, соотношения в такой системе сорастворителей могут значительно варьировать без нарушения характеристик ее растворимости и токсичности. Более того, идентичность компонентов-сорастворителей может варьировать: например, вместо полисорбата 80 могут быть использованы другие низкотоксичные неполярные поверхностно-активные вещества, размер фракции полиэтиленгликоля может варьировать, другие биосовместимые полимеры могут заменить полиэтиленгликоль, например поливинилпирролидон, а другие сахара или полисахариды могут заменить декстрозу.
Альтернативно, могут быть использованы другие системы доставки для гидрофобных фармацевтических соединений. Липосомы и эмульсии представляют собой хорошо известные примеры средств доставки или носителей для гидрофобных лекарств. В дополнение, некоторые органические растворители, такие как диметилсульфоксид, также могут быть использованы, хотя часто ценой большей токсичности.
Дополнительно, соединения могут быть доставлены с использованием системы пролонгированного высвобождения, такой как полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие терапевтический агент. Изучены различные материалы пролонгированного высвобождения, и они хорошо известны специалистам в данной области. Капсулы пролонгированного высвобождения могут, в зависимости от их химической природы, высвобождать соединения в течение нескольких недель, вплоть
- 38 007186 до периода более 100 дней. В зависимости от химической природы и биологической стабильности терапевтического реагента, могут быть использованы дополнительные стратегии для стабилизации белка.
Фармацевтические композиции здесь также могут содержать подходящие носители или эксципиенты в твердой фазе или в фазе геля. Примеры таких носителей или эксципиентов включают в себя, но не ограничены ими, карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара, крахмалы, производные целлюлозы, желатин и полимеры, такие как полиэтиленгликоли.
Многие из модулирующих РК соединений по изобретению могут быть предложены в виде физиологически приемлемых солей, причем заявленное соединение может образовывать отрицательно или положительно заряженные структуры. Примеры солей, когда соединение образует положительно заряженную группировку, включают в себя, без ограничения, соли четвертичного аммония (определенные в другом месте здесь), такие как гидрохлорид, сульфат, карбонат, лактат, тартрат, малат, малеат, сукцинат, где атом азота четвертичной аммониевой группы представляет собой азот выбранного соединения по изобретению, который провзаимодействовал с подходящей кислотой. Соли, в которых соединение по настоящему изобретению образует отрицательно заряженные структуры, включают в себя, без ограничения, соли натрия, калия, кальция и магния, образованные путем взаимодействия карбоксильной группы в соединении с подходящим основанием (например, гидроксидом натрия (ΝαΟΗ), гидроксидом калия (КОН), гидроксидом кальция (Са(ОН)2) и т.д.).
Фармацевтические композиции, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают композиции, где активные ингредиенты содержатся в количестве, достаточном для достижения заданной цели, например модуляции активности РК или лечения либо предупреждения расстройства, связанного с РК.
Более конкретно, терапевтически эффективное количество означает количество соединения, эффективное для предупреждения, облегчения или уменьшения интенсивности симптомов заболевания или продления жизни субъекта, которого лечат.
Определение терапевтически эффективного количества также находится в пределах знаний специалистов в данной области, особенно в свете подробного описания, предложенного здесь.
Для любого соединения, используемого в способах по изобретению, терапевтически эффективное количество или доза могут оцениваться на ранней стадии с помощью анализов в клеточных культурах. Затем, может быть отработана дозировка для применения в животных моделях, такая, чтобы достичь диапазона концентрации в системе кровообращения, включающего ИК50, которая определена в клеточной культуре (то есть концентрацию тестируемого соединения, которая дает половинное от максимального ингибирование активности РК). Такая информация затем может быть использована для более точного определения доз, используемых у людей.
Токсичность и терапевтическую эффективность соединений, описанных здесь, можно определить с помощью стандартных фармацевтических методик на клеточных культурах или экспериментальных животных, например путем определения ИК50 и ЛД50 (обе из которых обсуждаются здесь в другом месте) для рассматриваемого соединения. Данные, полученные в этих анализах клеточных культур и исследованиях на животных, могут быть использованы при разработке диапазона дозировок для применения у людей. Дозировка может варьировать в зависимости от используемой лекарственной формы и применяемого пути введения. Конкретный препарат, путь введения и дозировка могут быть выбраны конкретным лечащим врачом с учетом состояния пациента (см., например, Б1ид1, с1 а1., 1975, ίη ТНс Р11агтаео1ощеа1 Ва818 о£ ТБегареийсз, СБ. 1 р.1).
Количество доз и интервал между ними могут быть отрегулированы индивидуально так, чтобы обеспечить уровни в плазме активных молекул, достаточные для поддержания эффектов модулирования киназ. Эти уровни в плазме называют минимальными эффективными концентрациями (МЕС). МЕС будет варьировать для каждого соединения, но может быть оценена по ίη νίίτο данным, например концентрация, необходимая для достижения 50-90% ингибирования киназы, может быть установлена с использованием анализов, описанных здесь. Дозировки, необходимые для достижения МЕС, будут зависеть от конкретных характеристик и пути введения. Анализы с помощью ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) или биоанализы могут быть использованы для определения концентраций в плазме.
Интервалы дозировок также могут быть определены с использованием величины МЕС. Соединения следует вводить, используя режим, который поддерживает уровни в плазме, превышающие МЕС, в течение 10-90% времени, предпочтительно 30-90% и наиболее предпочтительно 50-90%.
В настоящее время терапевтически эффективные количества соединений формул I, 1а или II могут варьировать от приблизительно 25 до 1500 мг/м2 в сутки; предпочтительно примерно 3 мг/м2/сутки. Даже более предпочтительно - от 50 мг/каждое утро каждый день до 400 мг/каждый день.
В случаях местного введения или селективного захвата, эффективная местная концентрация лекарства может не быть связана с концентрацией в плазме, а могут быть использованы другие методики, известные в данной области, для определения правильного количества дозировки и интервала.
Количество вводимой композиции, конечно, будет зависеть от субъекта, которого лечат, тяжести болезни, способа введения, заключения лечащего врача и т.д.
Композиции, при желании, могут быть представлены в упаковке или дозирующем устройстве, таком как набор, одобренный Управлением по контролю за качеством продуктов и лекарств США (ΕΌΑ),
- 39 007186 который может содержать одну или более чем одну стандартную лекарственную форму, содержащую активный ингредиент. Упаковка может, например, представлять собой металлическую или пластиковую фольгу, как, например, блистерная упаковка. Упаковка или дозирующее устройство могут сопровождаться инструкциями по введению. Упаковка или дозирующее устройство могут также сопровождаться уведомлением при контейнере в форме, предписанной государственным органом, регулирующим производство, применение или продажу фармацевтических средств, которое отражает одобрение этим органом такой формы композиций либо введения людям или животным. Такое уведомление может быть, например, ярлыком, одобренным ΡΌΑ И8 для лекарств, отпускаемых по рецептам, либо одобренным вкладышем на продукт. Композиции, содержащие соединение по изобретению, включенное в препарат в совместимом фармацевтическом носителе, также могут быть приготовлены, помещены в соответствующий контейнер и снабжены ярлыком, относящимся к лечению указанного состояния. Подходящие состояния, указанные на ярлыке, могут включать в себя лечение опухоли, ингибирование ангиогенеза, лечение фиброза, диабета и т.п.
Настоящее изобретение можно вводить с помощью суспензионного носителя на основе карбоксиметилцеллюлоз (СМС). Примерная СМС-суспензия представлена ниже в табл. 3.
Таблица 3
| Компонент | Концентрация, % (мас./об.) |
| ΑΡΙ | * |
| Натрийкарбоксиметилцеллюлоза, Фармакопея США (И8Р) (среднее качество) | 0,5 |
| Хлорид натрия, ϋδΡ/ΝΡ | 0,9 |
| Полисорбат-80, ΝΡ | 0,4 |
| Бензиловый спирт, ΝΡ | 0,9 |
| Вода, деионизированная | Достаточное количество (цз) до 100 мл |
* зависит от требуемой концентрации (времени)
Протокол для 1,0 л суспензионного СМС-носителя является следующим. Вычисляют подходящее количество эксципиентов, необходимых для приготовления препарата носителя, с использованием таблицы, показывающей состав препарата носителя и размер партии. Взвешивают подходящий пустой контейнер, такой как чистая широкогорлая стеклянная бутыль или полиэтиленовая бутыль. В контейнер добавляют примерно 600 мл воды. Взвешивают натрийкарбоксиметилцеллюлозу (5 г) и переносят в контейнер. Перемешивают, используя магнитный стержень-мешалку или лабораторную пропеллерную мешалку до гомогенности (примерно 2-3 ч). Взвешивают ЫаС1 и добавляют в контейнер. Продолжают перемешивание до растворения (примерно 10 мин). Добавляют полисорбат-80. Перемешивают до тех пор, пока раствор не станет гомогенным (примерно 20 мин). Добавляют бензиловый спирт. Перемешивают до тех пор, пока раствор не станет гомогенным (примерно 10 мин). Добавляют оставшуюся воду, чтобы довести массу раствора до требуемого размера партии, либо по массе, либо по объему (1010 г или 1000 мл, плотность при 22°С равна 1,01). Хранят при 2-8°С (в холодильнике).
Препарат-суспензию можно производить следующим образом. Растирают ΑΡΙ, используя ступку и пестик для получения порошка гомогенного вида с маленьким размером частиц (никаких больших кусков или больших частиц - в идеале должны проходить через стандартное сито по И8 >80, то есть размер <180 мкм). Отвешивают рассчитанное количество ΑΡΙ в контейнер. Добавляют примерно 90% общего требуемого количества (суспензионного СМС-носителя) в контейнер. Суспендируют соединения в носителе, используя лабораторную пропеллерную мешалку или ее эквивалент. Диаметр лопастей пропеллера должен соответствовать диаметру дна контейнера, чтобы обеспечить достаточное перемешивание. Перемешивают при 50 об./мин в течение 30 мин либо до тех пор, пока лекарство не будет хорошо суспендированным. Добавляют препарат носителя до с.|з (достаточное количество) (доводят водой) до подходящей массы, соответствующей размеру партии. Перемешивают при 50 об./мин в течение дополнительных 30 мин. Аликвоты суспензии немедленно помещают в контейнеры из янтарного стекла или полипропиленовые контейнеры. Контейнеры должны быть защищены от света. Перемешивают при 2-8°С (в холодильнике, не замораживая).
Также аспектом настоящего изобретения является то, что соединение, описанное здесь, или его соль, или пролекарство может быть объединено с другими химиотерапевтическими агентами для лечения заболеваний или расстройств, обсуждавшихся выше. Например, соединение, соль или пролекарство по настоящему изобретению может быть объединено с алкилирующими агентами, такими как фторурацил (5-Ρϋ) сам по себе или в дополнительной комбинации с лейковорином; или с другими алкилирующими агентами, такими как, без ограничения, другие пиримидиновые аналоги, такие как ϋΡΤ, капецитабин, гемцитабин и цитарабин, алкилсульфонаты, например бусульфан (используемый при лечении хронической гранулоцитической лейкемии), импросульфан и пипосульфан; азиридины, например бензодепа, карбохон (сагЕосцюпс). метуредепа и уредепа; этиленимины и метилмеламины, например алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилолмеламин; и азоти
- 40 007186 стые аналоги иприта (ш1годеи тийатй), например хлорамбуцил (используемый при лечении хронического лимфолейкоза, первичной макроглобулинемии и неходжкинской лимфомы), циклофосфамид (используемый при лечении болезни Ходжкина, множественной миеломы, нейробластомы, рака молочной железы, рака яичников, рака легкого, опухоли Вильмса и рабдомиосаркомы), эстрамустин, ифосфамид, новембрихин, преднемустин и урациловый аналог иприта (игаей тийагй) (используемый при лечении первичного тромбоцитоза, неходжкинской лимфомы, болезни коджкина и рака яичников); и триазины, например дакарбазин (используемый при лечении саркомы мягких тканей).
Соединение, соль или пролекарство по настоящему изобретению также может быть использовано в комбинации с другими антиметаболическими хемотерапевтическими агентами, такими как, без ограничения, аналоги фолиевой кислоты, например метотрексат (используемый при лечении острого лимфолейкоза, хориокарциномы, грибовидного микоза, рака молочной железы, рака головы и шеи и остеогенной саркомы) и птероптерин; и пуриновые аналоги, такие как меркаптопурин и тиогуанин, которые находят применение при лечении острой гранулоцитарной лейкемии, острого лимфолейкоза и хронической гранулоцитарной лейкемии.
Предусматривается, что соединение, соль или пролекарство по настоящему изобретению может также быть использовано в комбинации с хемотерапевтическими агентами на основе природных продуктов, такими как, без ограничения, алкалоиды барвинка, например винбластин (используемый при лечении рака молочной железы и рака яичек), винкристин и виндезин; эпиподофилотоксины, например этопозид и тенипозид, оба из которых полезны при лечении рака яичек и саркомы Капоши; антибиотические хемотерапевтические агенты, например даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, митомицин (используемый при лечении рака желудка, шейки матки, ободочной кишки, молочной железы, мочевого пузыря и поджелудочной железы), дактиномицин, темозоломид, пликамицин, блеомицин (используемый при лечении рака кожи, пищевода и мочеполовых путей); и хемотерапевтические агенты-ферменты, такие как Ь-аспарагиназа.
В дополнение к вышесказанному, соединение, соль или пролекарство по настоящему изобретению также может быть использовано в комбинации с координационными комплексами платины (цисплатин и т.д.); замещенными мочевинами, такими как гидроксимочевина; производными метилгидразина, например прокарбазином; адренокортикальными супрессантами, например митотаном, аминоглутетимидом; и гормоном и антагонистами гормона, такими как адренокортикостероиды (например, преднизон), прогестины (например, гидроксипрогестерона капроат), эстрогены (например, диэтилстилбестерол), антиэстрогены, такие как тамоксифен, андрогены, например пропионат тестостерона; и ингибиторами ароматазы, такими как анастрозол.
Наконец, также предполагается, что комбинация соединения по настоящему изобретению будет эффективна в комбинации с митоксантроном, паклитакселом, ингибиторами циклооксигеназы-2, известными в данной области, в частности с Се1еЬгех®, РатасохЛ®, νίοχχ®, ЛЬЬоИ'5 Сох-189, описанным в публикации РСТ № \νϋ 99/11605, ингибиторами топоизомеразы, такими как Сатр1о§ат®, антагонистами рецептора Нег-2, такими как НетсерИп®, эндостатин, С1ееуас®, антагонистом рецептора 1тС1опе νΕΟΡ 1МС С225® для лечения твердых опухолевых раков или лейкемий, таких как, без ограничения, острая миелогенная (нелимфоцитарная) лейкемия.
Общая методика синтеза
Следующая общая методика может быть использована для получения соединений по настоящему изобретению.
Подходящим образом замещенный 2-оксиндол (1 экв.), подходящим образом замещенный 3-карбокси-5-формилпиррол (1,2 экв.) и основание (0,1 экв.) смешивают в растворителе (1-2 мл/ммоль 2-оксиндола) и данную смесь затем нагревают в течение промежутка времени от примерно 2 до примерно 12 ч. После охлаждения осадок, который образовался, фильтруют, промывают холодным этанолом или диэтиловым эфиром и сушат под вакуумом с получением соответствующей 5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил)-1-Н-пиррол-3-карбоновой кислоты. Если никакого осадка не образуется, реакционную смесь концентрируют и остаток растирают с дихлорметаном/диэтиловым эфиром, полученное твердое вещество собирают путем фильтрования и затем сушат. Продукт возможно может быть дополнительно очищен с помощью хроматографии.
Основание может представлять собой органическое или неорганическое основание. Если используют органическое основание, предпочтительно это азотное основание. Примеры органических азотных оснований включают в себя, но не ограничены ими, диизопропиламин, триметиламин, триэтиламин, анилин, пиридин, 1,8-диазабицикло[5,4,1]ундец-7-ен, пирролидин и пиперидин.
Примерами неорганических оснований являются, без ограничения, аммиак, гидроксиды щелочных металлов или щелочно-земельных металлов, фосфаты, карбонаты, бикарбонаты, бисульфаты и амиды. Щелочные металлы включают литий, натрий и калий, в то время как щелочно-земельные металлы включают кальций, магний и барий.
В предпочтительном в настоящее время воплощении данного изобретения, когда растворитель представляет собой протонный растворитель, такой как вода или спирт, основание представляет собой
- 41 007186 неорганическое основание щелочного металла или щелочно-земельного металла, предпочтительно гидроксид щелочного металла или щелочно-земельного металла.
Специалистам в данной области будет понятно, на основе известных общих принципов органического синтеза и данного описания изобретения, какое основание будет наиболее подходящим для рассматриваемой реакции.
Растворитель, в котором осуществляют реакцию, может представлять собой протонный или апротонный растворитель, предпочтительно он представляет собой протонный растворитель. Протонный растворитель представляет собой растворитель, который имеет атом(ы) водорода, ковалентно связанный(ые) с атомами кислорода или азота, которые делают атомы водорода существенно кислотными и, таким образом, способными быть разделенными с растворенным веществом с помощью водородной связи. Примеры протонных растворителей включают, без ограничения, воду и спирты.
Апротонный растворитель может быть полярным или неполярным, но в любом случае не содержит кислотных атомов водорода и, следовательно, не способен к образованию однородной связи с растворенными веществами. Примерами, без ограничения, неполярных апротонных растворителей являются пентан, гексан, бензол, толуол, метиленхлорид и четыреххлористый углерод. Примерами полярных апротонных растворителей являются хлороформ, тетрагидрофуран, диметилсульфоксид и диметилформамид.
В предпочтительном в настоящее время воплощении данного изобретения растворитель представляет собой протонный растворитель, предпочтительно воду или спирт, такой как этанол.
Реакцию осуществляют при температурах, больших чем комнатная температура. Температура представляет собой обычно температуру от примерно 30 до примерно 150°С, предпочтительно от примерно 80 до примерно 100°С, наиболее предпочтительно от примерно 60 до примерно 85°С, что представляет собой примерно температуру кипения этанола. Под примерно подразумевается, что температурный диапазон находится предпочтительно в пределах 10°С от указанной температуры, более предпочтительно в пределах 5°С от указанной температуры и наиболее предпочтительно в пределах 2°С от указанной температуры. Таким образом, например, под примерно 75°С понимают 75°С±10°С, предпочтительно 75°С±5°С и наиболее предпочтительно 75°С±2°С.
2-Оксиндолы и 3-карбокси-5-формилпиррол могут быть легко синтезированы с использованием методик, хорошо известных в области химии, с использованием легкодоступных исходных материалов.
Сочетание 5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты с амином формулы ΖΟΗ(Β5)-ΟΚ4(ΟΗ)-ΟΗΚ3ΝΗ2 в органическом растворителе, таком как диметилформамид, тетрагидрофуран и т.п., и в присутствии подходящего агента сочетания, такого как дициклогексилкарбодиимид, ΌΕΑΌ (диэтилазодикарбоксилат), ЕЭС и ΗΟΒΐ (1-гидроксибензотриазола гидрат), затем дает соединение формулы (I). Амины формулы ΖΟΗ(Κ5)-ΟΚ4(ΟΗ)-ΟΗΚ3’ΝΗ2 имеются в продаже, либо они могут быть приготовлены способом, хорошо известным в данной области техники. Некоторые такие методики описаны ниже.
Специалистам в данной области следует понимать, что доступны и другие пути синтеза соединений по изобретению и что следующее предлагается в качестве примера, а не ограничения.
Примеры
Следующие приготовления и примеры даны, чтобы позволить специалистам в данной области более ясно понимать и внедрять в практику настоящее изобретение. Они не должны рассматриваться как ограничение объема изобретения, а просто в качестве его иллюстрации и примера.
Примеры синтеза
Пример 1. Синтез 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(3Ζ)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты.
Стадия 1.
Диметилформамид (25 мл, 3 экв.) охлаждали при перемешивании в ледяной бане. К этому добавляли РОС13 (1,1 экв., 10,8 мл). Через 30 мин раствор 3,5-диметил-4-этилового эфира пиррола (17,7 г, 105,8 ммоль) в диметилформамиде (ДМФ) (2М, 40 мл) добавляли к реакционной смеси и перемешивание продолжали. Через 2 ч реакционную смесь разбавляли водой (250 мл) и подщелачивали до рН=11 с помощью 1н. водного раствора ΝαΟΗ. Белое твердое вещество удаляли путем фильтрования, промывали водой, а затем гексанами и сушили с получением этилового эфира 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (19,75 г, 95%) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 'Η ЯМР (360 МГц, ΌΜδΟ-46) δ 12,11 (Ьг 8, 1Η, ΝΗ), 9,59 (δ, 1Η, СНО), 4,17 (φ 1=6,7 Гц, 2Η, ОСН2СН3), 2,44 (δ, 3Η, СН3), 2,40 (δ, 3Η, СН3), 1,26 (4, 1= 6,7 Гц, 3Η, ОСН2СН3).
Стадия 2.
Этиловый эфир 5-формил-2,4-диметил-Ш-пиррол-3-карбоновой кислоты (2 г, 10 ммоль) добавляли к раствору гидроксида калия (3 г, 53 ммоль), растворенного в метаноле (3 мл) и воде (10 мл). Данную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч, охлаждали до комнатной температуры и подкисляли 6н. соляной кислотой до рН 3. Твердое вещество собирали путем фильтрования, промывали водой и сушили в вакуумном сушильном шкафу в течение ночи с получением 5-формил-2,4-диметил-1Н
- 42 007186 пиррол-3-карбоновой кислоты (1,6 г, 93%). ’Н ЯМР (300 МГц, ΌΜ8Ο-ά6) δ 12,09 (з, Ьг, 2Н, ΝΗ и СООН), 9,59 (з, 1Н, СНО), 2,44 (з, 3Н, СН3), 2,40 (з, 3Н, СН3).
Стадия 3.
5-Фторизатин (8,2 г, 49,7 ммоль) растворяли в 50 мл гидрата гидразина и кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. Реакционные смеси затем выливали в воду со льдом. Осадок затем фильтровали, промывали водой и сушили в вакуумном сушильном шкафу с получением 5-фтор-2-оксиндола (7,5 г).
Стадия 4.
Реакционную смесь 5-фтороксиндола (100 мг, 0,66 ммоль), 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (133 мг, 0,79 ммоль) и 10 капель пиперидина в этаноле (3 мл) перемешивали при 60°С в течение ночи и фильтровали. Твердое вещество промывали 1М водным раствором хлороводорода, водой и сушили с получением 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (201 мг, количественно) в виде желтого твердого вещества. Масс-спектрометрия (МС) т/ζ (относительная интенсивность, %) 299 ([М-1]+, 100).
Пример 2. Синтез 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (3-диэтиламино-2-гидроксипропил)амида.
Стадия 1.
К 2-хлорметилоксирану (95 г, 1,03 моль) добавляли смесь воды (3,08 г, 0,17 моль) и диэтиламина (106,2 мл, 1,03 моль) при 30°С. Реакционную смесь затем перемешивали при 28-35°С в течение 6 ч и охлаждали до 20-25°С с получением 1-хлор-3-диэтиламинопропан-2-ола.
Стадия 2.
Раствор гидроксида натрия (47,9 г, 1,2 моль) в 78 мл воды добавляли к 1-хлор-3-диэтиламинопропан-2-олу. Полученную смесь перемешивали при 20-25°С в течение 1 ч, разбавляли 178 мл воды и дважды экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенный эфирный раствор сушили с помощью твердого гидроксида калия и выпаривали с получением 135 г неочищенного продукта, который очищали путем фракционной перегонки с получением чистого глицидилдиэтиламина (98 г, 76%) в виде масла.
Стадия 3.
К ледяному раствору гидроксида аммония (25 мл, 159 ммоль), 25% (мас./мас.), по каплям добавляли глицидилдиэтиламин (3,2 г, 24,8 ммоль) в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при 0-5°С в течение 1 ч, а затем при комнатной температуре в течение 14 ч. Полученную реакционную смесь упаривали и перегоняли (84-90°С при 500-600 мТ (65,5-78,6 Па)) с получением 1-амино-3-диэтиламинопропан-2-ола (3,3 г, 92%). МС т/ζ 147 ([Μ+1]+).
Стадия 4.
К раствору 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (100 мг, 0,43 ммоль), ЕБС (122,7 мг, 0,64 ммоль) и НОВ! (86,5 мг, 0,64 ммоль) в 1,0 мл ДМФ добавляли 1-амино-3-диэтиламинопропан-2-ол (93,2 мг, 0,64 ммоль). Полученный реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и упаривали. Остаток суспендировали в 10 мл воды и фильтровали. Твердое вещество промывали насыщенным бикарбонатом натрия и водой и сушили в сушильном шкафу при большом вакууме в течение ночи с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией, элюируя в 6% растворе метанола в дихлорметане, содержащем триэтиламин (2 капли/100 мл 6% метанола в дихлорметане) с получением 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (3-диэтиламино-2-гидроксипропил)амида (62 мг, 34%) в виде желтого твердого вещества. ’Н ЯМР (400 МГц, БМ8О-б6) δ 13,70 (з, 1Н, N^1'), 10,90 (з, 1Н, №Н-1), 7,76 (άά, Σ=2,38; 9,33 Гц, 1Н, Н-4), 7,72 (з, 1Н, винил-Н), 7,60 (т, Ьг, 1Н, СО1МНСН2СН(ОН)СН2№С2Н5)2-4'), 6,93 (άί, Σ=2,38; 8,99 Гц, 1Н, Н-5), 6,85 (άά, Σ=4,55; 8,99 Гц, 1Н, Н-6), 3,83 (т, Ьг, 1Н, ОН), 3,33 (т, 4Н), 2,67 (т, Ьг, 5Н), 2,46 (з, 3Н, СН3), 2,44 (з, 3Н, СН3), 1,04 (т, Ьг, 6Н, СН3х2). МС т/ζ (относительная интенсивность, %) 427 ([М+1]+, 100).
Пример 3. Синтез 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)амида.
Стадия 1.
Смесь морфолина (2,6 мл, 30 ммоль) и эпихлоригидрина (2,35 мл, 30 ммоль) в этаноле (50 мл) перемешивали при 70°С в течение ночи. После удаления растворителя остаток разбавляли метиленхлоридом (50 мл). Чистое выпавшее в осадок твердое вещество собирали путем вакуумного фильтрования с получением 1-хлор-3-морфолин-4-ил-пропан-2-ола (2,0 г, 37%). ’Н ЯМР (БМ8ОШ6) δ 3,49 (ΐ, Σ=4,8 Гц, 2Н), 3,60 (ί, .1 4,6 Гц, 2Н), 3,75 (т, 4Н, 2хСН2), 4,20 (άά, Σ=5,2; 12 Гц, 2Н), 4,54 (т, 2Н), 4,62 (т, 1Н, СН), 6,64 (ά, .16,4 Гц, 1Н, ОН). МС (т/ζ) 180,2 (М+1).
Стадия 2.
1-Хлор-3-морфолин-4-ил-пропан-2-ол (2,0 г, 11 ммоль) обрабатывали раствором ΝΉ3 в метаноле (25% по массе, 20 мл) при комнатной температуре. Азот барботировали через реакционную смесь для удаления аммиака. Выпаривание растворителя дало соль гидрохлорид 1-амино-3-морфолин-4-ил-пропан-
2-ола (2,0 г, 91%). ’Н ЯМР (БМ8ОД6) δ 2,30 (ά, Σ=6,0 Гц, 2Н), 2,36 (т, 4Н, Ν№2), 2,65 (άά, Σ=8,4; 12,8 Гц,
- 43 007186
ΙΗ), 2,91 (άά, 1=3,6; 12,8 Гц, ΙΗ), 3,52 (ш, 4Η, ОСН2), 3,87 (ш, 1Н, СН), 5,32 (з, 1Н, ОН), 8,02 (Ьгз., ЗН, ΝΗ3 +). МС (ш/ζ) 161,1 (М+1).
Стадия 3.
5-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил- 1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (120 мг, 0,4 ммоль) конденсировали с 1-амино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-олом (74 мг, 0,48 ммоль) с выпадением в осадок 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(37)-илиденметил]-2,4-диметил- 1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)амида (65 мг, 36%). Маточный раствор упаривали до сухости и остаток очищали с помощью флэш-хроматографии с получением дополнительных 2Ν (70 мг, 39%). Ή ЯМР (ϋΜ8Ο-ά6) δ 2,28 (ш, 1Н), 2,32 (ш, 1Н), 2,40 (ш, 4Н), 2,40, 2,42 (2хз, 6Н, 2хСН3), 3,15 (з, 1Н), 3,31 (ш, 1Н), 3,55 (ш, 4Н), 3,78 (ш, 1Н), 4,73 (Ьгз, 1Н, ОН), 6,82 (άά, 1=4,5; 8,4 Гц, 1Н), 6,90 (ίά, 21=2,8;31=10,0 Гц, 1Н), 7,53 (ш, 1Н), 7,70 (з, 1Н), 7,74 (άά, 1=2,0; 9,6 Гц, 1Н) (ароматический и винильный), 10,87 (з, ΙΗ, ΟΟΝΗ), 13,66 (з, ΙΗ, ΝΗ). ЖХ (жидкостная хроматография)-МС (ш/ζ) 441,4 (М-1).
Синтез 2-гидрокси-7-окса-4-азониаспиро[3,5]нонанхлорида.
о. С| Про-0
В 1 л 3-горлую круглодонную колбу, снабженную термопарой, впускным отверстием для азота и воронкой для добавления на 250 мл, загружали морфолин (91,5 г, 91,5 мл, 1,05 моль, 1,0 экв.) и 100 мл этанола. Раствор быстро перемешивали с добавлением эпихлоргидрина (100 г, 84,5 мл, 1,08 моль, 1,03 экв.) из колонки для добавления в течение примерно 30 мин. За температурой наблюдали, и когда температура куба достигла 27°С, реакционную смесь охлаждали с помощью ледяной водяной бани. Прозрачный раствор перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь анализировали с помощью ГХ (газовой хроматографии) (разводили 5 капель реакционной смеси в 1 мл этанола и впрыскивали на 15ш ϋΒ-5 капиллярную колонку для ГХ со следующими рабочими параметрами: инжектор 250°С, детектор 250°С, начальная температура термостата 28°С, нагрев до 250°С со скоростью 10°С/мин). Реакцию завершали с менее чем 3% оставшегося морфолина. Реакционную смесь концентрировали на роторном испарителе при 50°С с полным вакуумом до тех пор, пока больше дистиллята нельзя было сконденсировать. Полученное масло хранили при комнатной температуре в течение 24-48 ч или до тех пор, пока не наблюдалась значительная масса кристаллов (затравка увеличит скорость процесса). Суспензию разбавляли 250 мл ацетона и фильтровали. Твердые вещества сушили в вакуумном сушильном шкафу при 60°С в течение 18-24 ч. Это обеспечило 84 г кристаллического продукта. Маточные жидкости можно было концентрировать и процесс кристаллизации повторяли с увеличением извлечения. 'Н ЯМР (400 МГц, ϋΜ8Ο-ά6) δ 6,55 (ά, ΙΗ), 4,64 (ш, ΙΗ), 4,53 (ш, 2Η), 4,18 (ш, 2Н), 3,74 (ш, 4Н), 3,60 (ш, 2Н), 3,48 (ш, 2Н). 13С ЯМР (100 МГц, ϋΜ8Ο-ά6) δ 70,9, 61,39, 61,04, 60,25, 58,54, 57,80.
Синтез 1-амино-3-(4-морфолинил)-2-пропанола (рацемического).
СГ
НС1 <^ν·%^νη2 он
В 3 л 1-горлую круглодонную колбу с магнитным перемешивающим стержнем загружали 2-гидрокси-7-окса-4-азониаспиро[3,5]нонанхлорид (150 г, 835 ммоль), а затем 23 мас.% безводный аммиак в метаноле (2120 мл). Колбу закупоривали и полученный прозрачный раствор перемешивали при 20-23°С в течение 18 ч. ГХ в условиях, указанных выше, показала, что никакого исходного материала не осталось. Пробку удаляли и аммиаку давали возможность барботировать из раствора в течение 30 мин. Колбу затем переносили в роторный испаритель и осуществляли концентрирование до белого твердого вещества с помощью 45°С бани и полного вакуума. 2Н ЯМР (400 МГц, ϋΜ8Ο-ά6) δ 3,57 (άά, 2Н), 3,3-3,5 (ш, 6Н), 2,59 (ш, 2Н), 2,2-2,4 (ш, 6Н); 13С ЯМР (100 МГц, ϋΜ8Ο-ά6) δ 70,8, 67,1, 60,1, 53,8, 48,1.
Следуя процедуре, описанной в примере 3 выше, но замещая 2-(К8)-1-амино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-ол на 2-(8)-1-амино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-ол, приготовленный, как описано ниже, получали желаемое соединение 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-(37)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-(8)-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)амид.
Синтез 1-амино-3-(4-морфолинил)-2-пропанола (нерацемического).
К°(Ви ΝΗ,
МеОН
ΝΗ3, МеОН
ТНР
он νη2
В 1 л 3-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, термопарой и воронкой для добавления, загружали морфолин (91,5 г, 91,5 мл, 1,05 моль, 1,0 экв.) и 45 мл трет-бутанола. Раствор быстро перемешивали, добавляя К-эпихлоргидрин (100 г, 84,5 мл, 1,08 моль, 1,03 экв.) из воронки для добавления в течение примерно 30 мин. За температурой наблюдали, и, когда температура куба достигла 27°С, реакционную смесь охлаждали с помощью ледяной водяной бани. Прозрачный раствор перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь анализировали с помощью ГХ (газовой хроматографии) (разво
-44007186 дили 5 капель реакционной смеси в 1 мл этанола и впрыскивали в 15т ЭВ-5 капиллярную колонку для ГХ со следующими рабочими параметрами: инжектор 250°С, детектор 250°С, начальная температура термостата 28°С, нагрев до 250°С при 10°С/мин). Реакцию завершали с менее чем 3% оставшегося морфолина. Раствор охлаждали до 10°С и 20 мас.% раствор трет-бутилата калия в ТГФ (тетрагидрофуран) (576 г) добавляли по каплям, поддерживая температуру менее 15°С. Полученную белую суспензию перемешивали при 10-15°С в течение 2 ч и проверяли с помощью ГХ, используя вышеуказанные условия. Никакого хлоргидрина не наблюдалось. Смесь концентрировали на роторном испарителе, используя 50°С баню и полный вакуум. Полученную смесь разбавляли водой (500 мл) и метиленхлоридом. Фазы разделяли и водную фазу промывали метиленхлоридом (500 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали до прозрачного бесцветного масла. Эго обеспечило 145 г, 97% выход, эпоксида. Ή ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-с16) δ 3,3 (άά, 4Н), 3,1 (ш, 1Н), 2,6 (άά, 1Н), 2,5 (άά, 1Н), 2,4 (ш, 4Н), 2,2 (άά, 2Н); 13С ЯМР (100 МГц, ϋΜδΟ-άβ) δ 65,4, 60,1, 53,1, 48,9, 43,4.
Вышеуказанный неочищенный эпоксид загружали в 3 л 1-гордую круглодонную колбу с магнитным перемешивающим стержнем. Добавляли безводный аммиак в метаноле (24% мас./мас., 2,5 л.), колбу закупоривали и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. ГХ в условиях, указанных выше, показала, что никакого исходного материала не осталось. Пробку удаляли и аммиаку давали возможность барботировать из раствора в течение 30 мин. Колбу затем переносили в роторный испаритель и осуществляли концентрирование до прозрачного бесцветного масла с помощью 45°С бани и полного вакуума. Это дало 124 г продукта. ’Н ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-с16) δ 3,57 (άά, 2Н), 3,3-3,5 (ш, 6Н), 2,59 (ш, 2Н), 2,2-2,4 (ш, 6Н); 13С ЯМР (100 МГц, ЭМ8О-с16) δ 70,8, 67,1, 60,1, 53,8, 48,1.
Синтез 1-амино-3-(4-морфолинил)-2-(8)-пропанола.
В 1 л 3-гордую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, термопарой и воронкой для добавления, загружали морфолин (91,5 г, 91,5 мл, 1,05 моль, 1,0 экв.) и 200 мл метанола. Раствор быстро перемешивали, добавляя ^.-эпихлоргидрин (100 г, 84,5 мл, 1,08 моль, 1,03 экв.) из воронки для добавления в течение примерно 30 мин. За температурой наблюдали и, когда температура куба достигла 27°С, реакционную смесь охлаждали с помощью водяной бани со льдом. Прозрачный раствор перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь анализировали с помощью ГХ (газовой хроматографии) (разводили 5 капель реакционной смеси в 1 мл этанола и впрыскивали в 15ш ЭВ-5 капиллярную колонку для ГХ со следующими рабочими параметрами: инжектор 250°С, детектор 250°С, начальная температура в термостате 28°С, нагрев до 250°С при 10°С/мин). Реакцию завершали с менее чем 3% оставшегося морфолина. Раствор охлаждали до 10°С и 25 мас.% раствор метилата натрия в метаноле (233 г, 1,08 моль, 247 мл) добавляли по каплям, поддерживая температуру менее 15°С. Полученную белую суспензию перемешивали при 10-15°С в течение 2 ч и проверяли с помощью ГХ, используя вышеуказанные условия. Никакого хлоргидрина не наблюдалось. Смесь концентрировали на роторном испарителе, используя 50°С баню и полный вакуум. Полученную смесь разбавляли водой (500 мл) и метиленхлоридом. Фазы разделяли и водную фазу промывали метиленхлоридом (500 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали до прозрачного бесцветного масла. Эго обеспечило 145 г, 97% выход, 1,2-эпокси-3-морфолин-4-илпропана. 'Н ЯМР (400 МГц, ΟΜ8Ο-ά6) § 3,3 (άά, 4Н), 3,1 (ш, 1Н), 2,6 (άά, 1Н), 2,5 (άά, 1Н), 2,4 (ш, 4Н), 2,2 (άά, 2Н); 13С ЯМР (100 МГц, ЭМ8О-с16) δ 65,4, 60,1, 53,1, 48,9, 43,4.
Вышеуказанный неочищенный 1,2-эпокси-3-морфолин-4-илпропан загружали в 3 л 1-горлую круглодонную колбу с магнитным перемешивающим стержнем. Добавляли безводный аммиак в метаноле (24% мас./мас., 2,5 л), колбу закупоривали и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. ГХ в условиях, указанных выше, показала, что никакого исходного материала не осталось. Пробку удаляли и аммиаку давали возможность барботировать из раствора в течение 30 мин. Колбу затем переносили в роторный испаритель и осуществляли концентрирование до прозрачного бесцветного масла с помощью 45°С бани и полного вакуума. Эго дало 124 г 1 -амино-3-(4-морфолинил)-2-(8)-пропанола.1Н ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-с16) δ 3,57 (άά, 2Н), 3,3-3,5 (ш, 6Н), 2,59 (ш, 2Н), 2,2-2,4 (ш, 6Н); 13С ЯМР (100 МГц, ЭМ8О-с16) δ 70,8, 67,1, 60,1, 53,8, 48,1.
ОН
541иогоох1лс1о1е ΕΙ3Ν, ТНР
Имидазоламид (7,0 г, 32,3 ммоль), амин (15,0 г, 64,6 ммоль), 5-фтороксиндол (4,93 г, 32,6 ммоль), триэтиламин (9,79 г, 96,9 ммоль) и ТГФ (88 мл) смешивали и нагревали до 60°С. Образовывался коричневый раствор. После перемешивания в течение 24 ч при 60°С желтую суспензию охлаждали до к.т. (комнатная температура) и фильтровали. Лепешку осадка промывали 80 мл ТГФ и сушили в течение но-45 007186 чи при 50°С в вакууме. Получали коричневое твердое вещество (23.2 г). Данное твердое вещество суспендировали в 350 мл воды в течение 5 ч при к.т. и фильтровали. Лепешку осадка промывали 100 мл воды и сушили при 50°С в вакууме в течение ночи. Получали 8,31 г с 56% химическим выходом.
0,25 л колбу, снабженную термометром, конденсатором, магнитной мешалкой и впускным отверстием для азота, загружали 4,92 г 5-фтороксиндола, 7,0 г имидазоламида, 15,5 г (К)-1-амино-3-(4-морфолинил)-2-пропанола, 9,78 г триэтиламина и 88 мл тетрагидрофурана. Смесь нагревали до 60°С в течение
16,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и фильтровали. Полученные твердые вещества суспендировали (3) последовательно 3 раза в ацетонитриле в концентрации 11 мл/г, сушили в вакууме в течение 3,6 г (25,25%). [ВЭЖХ, Нурегзй Βϋδ, С-18, 5 μ, (6:4), ацетонитрил:0,1М аммония хлорид, РНА-571437=4,05 мин]. ХН ЯМР (ϋΜδΟ): δ 10,86 (1Н, Ьз); 7,75 (ΙΗ, ά); 7,70 (ΙΗ, з); 7,50 (ΙΗ, ш); 6,88 (2Η, ш); 4,72 (1Н, Ьз); 3,78 (1Н, Ьз); 3,56 (4Н, ш); 3,32 (6Н, ш); 3,15 (1Н, ш); 2,43 (8Н, Ьш).
Пример 4. Синтез 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(37)-илиденметил]-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)амида.
5-(2-Оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (113 мг, 0,4 ммоль) конденсировали с 1-амино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-олом (74 мг, 0,48 ммоль) с выпадением в осадок 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(37)-илиденметил]-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)амида (77 мг, 45,3%). 'Н ЯМР (ϋΜδΟ-ά6) δ 2,27 (ш, 1Н), 2,32 (ш, 1Н), 2,40 (ш, 4Н), 2,40, 2,42 (2x5, 6Н, 2хСН3), 3,15 (δ, 1Н), 3,32 (ш, 1Н), 3,55 (ш, 4Н), 3,77 (ш, 1Н), 4,74 (ф 1=4,8 Гц, 1Н, ОН), 6,86 (ф 1=7,6 Гц, 1Н), 6,96 (1, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,10 (1, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,49 (1, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,61 (δ, 1Н), 7,77 (ф 1=8,0 Гц, 1Н) (ароматический и винильный), 10,88 (δ, ΙΗ, ΟΟΝΗ), 13,62 (δ, 1Н, ΝΗ). ЖХ-МС (ш/ζ) 425,4 (М+1).
Пример 5. Синтез 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(37)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)амида.
5-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (126,6 мг, 0,4 ммоль) конденсировали с 1-амино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-олом (74 мг, 0,48 ммоль) с выпадением в осадок 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(37)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)амида (107 мг, 58%). 'Н ЯМР (ϋΜδΟ-φ) δ
2,29 (ш, 1Н), 2,33 (ш, 1Н), 2,39 (ш, 4Н), 2,40, 2,42 (2χδ, 6Н, 2хСН3), 3,15 (з, 1Н), 3,37 (ш, 1Н), 3,55 (ш, 4Н), 3,77 (ш, 1Н), 4,74 (ф 1=4,8 Гц, 1Н, ОН), 6,85 (ф 1=8,4 Гц, 1Н), 7,11 (άφ 1=2,0; 8,0 Гц, 1Н), 7,53 (1,1=5,6 Гц, 1Н), 7,75 (з, 1Н), 7,97 (ά, 1=2,0 Гц, 1Н) (ароматический и винильный), 10,99 (з, ΙΗ, ΟΟΝΗ), 13,62 (з, 1Н, ΝΗ). ЖХ-МС (ш/ζ) 457,4 (М-1).
К и δ стереоизомеры могут быть получены следующим образом.
Имидазоламид (7,0 г, 32,3 ммоль), амин (15,5 г, 96,9 ммоль), 5-хлороксиндол (5,48 г, 32,6 ммоль), триэтиламин (14 мл) и ТГФ (88 мл) смешивали и нагревали до 60°С. Образовывался красный раствор. После перемешивания в течение 16 ч при 60°С желтую суспензию охлаждали до к.т. и фильтровали. Лепешку осадка промывали 2x50 мл ТГФ и сушили в течение ночи при 50°С в вакууме. Получали 4,36 г с 29% химическим выходом.
-46007186
О
ОН X0
5-сЫогоох1п<1о1е
Ε^Ν,ΤΗΡ
О
νΧ^ν—Ί н ОН к/0
Имидазоламид (6,8 г, 31,3 ммоль), амин (10,0 г, 62,5 ммоль), 5-хлороксиндол (5,3 г, 31,6 ммоль) и ТГФ (100 мл) смешивали и нагревали до 60°С. Образовывался красный раствор. После перемешивания в течение 68 ч при 60°С добавляли триэтиламин (14 мл) и перемешивали в течение 5 ч при 60°С. Реакция не была завершена. Добавляли 4,6 г аминной боковой цепи и перемешивали в течение 20 ч при 60°С. Желтую суспензию охлаждали до к.т. и фильтровали. Лепешку осадка промывали 2x50 мл ТГФ и сушили в течение ночи при 50°С в вакууме. Получали 5,48 г с 38% химическим выходом.
Пример 6. Синтез 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-
3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)амида.
-(5 -Бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З -илиденметил)-2,4-диметил-1 Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (72,2 мг, 0,2 ммоль) конденсировали с 1-амино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-олом (38 мг, 0,24 ммоль) с выпадением в осадок 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-индол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)амида (55 мг, 55%). 1Н ЯМР (ϋΜ8Ο-ά6) δ 2,27 (ш, 1Н), 2,32 (ш, 1Н), 2,39 (ш, 4Н), 2,41, 2,42 (2хз, 6Н, 2хСН3), 3,13 (δ, 1Н), 3,35 (ш, 1Н), 3,55 (ш, 4Н), 3,77 (ш, 1Н), 4,74 (ά, 1=4,4 Гц, 1Н, ОН), 6,80 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,24 (άά, 1=2,0; 8,0 Гц, 1Н), 7,51 (ΐ, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,76 (8, 1Н), 8,09 (ά, 1=2,0 Гц, 1Н) (ароматический и винильный), 10,99 (8, ΙΗ, ΟΟΝΗ), 13,62 (8, ΙΗ, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ) 503,4 (М-1).
Пример 7. Синтез 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)амида.
Стадия 1.
Смесь 3-[1,2,3]триазола (2,0 г, 29 ммоль), эпихлоргидрина (3,4 мл, 43,5 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламина (2,6 мл, 15 ммоль) в этаноле (50 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После удаления растворителей остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (СН2С12/СН3ОН=100/1100/2-100/4) с получением 1-хлор-3(1,2,3)триазол-2-илпропан-2-ола (2,1 г, 45%). ’Н ЯМР (СОС13) δ 3,52 (ш, 2Н, ОН и СН2), 3,60 (άά, 1=5,2; 11,2 Гц, 1Н), 4,36 (ш, 1Н, СН), 4,68 (ш, 2Н), 7,67 (8, 2Н). МС (т/ζ) 162,1 (М+1) и 1-хлор-3-(1,2,3)триазол-1-илпропан-2-ола (2,3 г, 49%). Ή ЯМР (СОС13) δ 3,56 (8, 1Н), 3,57 (8, 1Н), 4,35 (ш, 1Н), 4,53 (άά, 1=7,2; 14 Гц, 1Н), 4,67 (άά, 1=3,8; 14 Гц, 1Н), 7,67 (8, 1Н), 7,71 (8, 1Н). МС (т/ζ) 162,1 (М+1).
Стадия 2.
1-Хлор-3(1,2,3)триазол-1-илпропан-2-ол (2,3 г, 13 ммоль) обрабатывали раствором ΝΗ3 в метаноле (25 мас.%, 20 мл) при 60°С в течение ночи в закрытом аппарате высокого давления. После охлаждения до комнатной температуры азот барботировали в реакционную смесь для удаления аммиака. Выпаривание растворителя дало соль гидрохлорид 1-амино-3(1,2,3)триазол-1-илпропан-2-ола (2,57 г, 100%). ’Н ЯМР (ΌΜ8Ο-ά„) δ 2,68 (άά, 1=8,8; 12,8 Гц, ΙΗ), 2,97 (άά, 1=3,6; 12,8 Гц, ΙΗ), 4,15 (ш, ΙΗ), 4,44 (άά, 1=6,4; 14 Гц, ΙΗ), 4,57 (άά, 1=4,6; 14 Гц, ΙΗ), 5,95 (ά, 1=5,2 Гц, ΙΗ, ΟΗ), 7,77 (8, ΙΗ), 8,01 (Ьг8, ЗН, ΝΗ3 +), 8,12 (8, ΙΗ). МС (т/ζ) 143,1 (Μ+1).
Стадия 3.
5-(2-Оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (113 мг, 0,4 ммоль) конденсировали с 1-амино-3(1,2,3)триазол-1-ил-пропан-2-олом (85 мг, 0,48 ммоль) с выпадением в осадок 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)амида (70 мг, 41%). ’Н ЯМР (ϋΜ8Ο-ά6) δ 2,45, 2,48 (2x8, 6Н, 2хСН3), 3,35 (ш, 2Н), 4,02 (ш, 1Н), 4,32 (άά, 1=7,6; 14 Гц, 1Н), 4,53 (άά, 1=3,4; 14 Гц, 1Н), 5,43 (ά, 1=5,6 Гц, 1Н, ОН), 6,91 (ά, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,01 (ΐ, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,15 (ΐ, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,66 (8, 1Н), 7,12 (ΐ, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,74 (8, 1Н), 7,77 (ά, 1=7,6 Гц, 1Н), 8,11 (8, 1Н), 10,93 (8, ΙΗ, ΟΟΝΗ), 13,68 (8, ΙΗ, ΝΗ). ЖХМС (т/ζ) 405,4 (М-1).
Пример 8. Синтез 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)амида.
5-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (120 мг, 0,4 ммоль) конденсировали с 1-амино-3(1,2,3)триазол-1-ил-пропан-2-олом (85 мг, 0,48 ммоль) с выпадением в осадок 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)амида (100 мг, 62%). ’Н ЯМР (ϋΜ8Ο-ά6) δ 2,42, 2,44 (2x8, 6Н, 2хСН3), 3,27 (ш, 2Н), 3,98 (ш, 1Н), 4,27 (άά, 1=7,6; 14 Гц, 1Н), 4,50 (άά, 1=3,4; 13,6 Гц, 1Н), 5,38 (ά, 1=5,6 Гц, 1Н, ОН), 6,82 (άά, 1=4,4; 8,4 Гц, 1Н), 6,91 (ΐά, 4=2,4; 31=9,0 Гц, 1Н), 7,70 (ш, ЗН), 7,75 (άά, 1=2,4; 9,2 Гц, 1Н), 8,11 (8, 1Н), 10,93 (8, ΙΗ, ΟΟΝΗ), 13,73 (8, ΙΗ, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ) 423,4 (М-1).
-47007186
Пример 9. Синтез 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1 -ил-пропил )амида.
5-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (126,6 мг, 0,4 ммоль) конденсировали с 1-амино-3(1,2,3)триазол-1-ил-пропан-2-олом (85 мг, 0,48 ммоль) с выпадением в осадок 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)амида (48 мг, 27%). ХН ЯМР (ΏΜ8Ο-ά6) δ 2,42, 2,44 (2x8, 6Н, 2хСН3), 3,27 (ш, 2Н), 3,99 (ш, 1Н), 4,28 (άά, 1=7,8; 14 Гц, 1Н), 4,51 (άά, 1=3,2; 14 Гц, 1Н), 5,39 (ά, 1=6,0 Гц, 1Н, ОН), 6,85 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,12 (άά, 1=2,0; 8,2 Гц, 1Н), 7,70 (ш, 2Н), 7,74 (з, 1Н), 7,97 (ά, 1=2,0 Гц, 1Н), 8,07 (з, 1Н), 10,99 (з, ΙΗ, ΟΟΝΗ), 13,65 (з, ΙΗ, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ) 439,4 (М-1).
Пример 10. Синтез 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1 -ил-пропил)амида.
5-(5-Бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил- 1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (144,4 мг, 0,4 ммоль) конденсировали с 1-амино-3(1,2,3)триазол-1-ил-пропан-2-олом (85 мг, 0,48 ммоль) с выпадением в осадок 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)амида (130 мг, 67%). 'Н ЯМР (ΏΜ8Ο-ά6) δ 2,41, 2,44 (2x8, 6Н, 2хСН3), 3,27 (т, 2Н), 3,99 (т, 1Н), 4,28 (άά, 1=7,6; 14 Гц, 1Н), 4,50 (άά, 1=3,6; 14 Гц, 1Н), 5,40 (ά, 1=5,6 Гц, 1Н, ОН), 6,81 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,24 (άά, 1=2,0; 8,0 Гц, 1Н), 7,70 (т, 2Н), 7,77 (з, 1Н), 8,07 (з, 1Н), 8,10 (ά, 1=1,6 Гц, 1Н), 11,0 (з, 1 Η, ΟΟΝΗ), 13,64 (з, ΙΗ, ΝΗ). ЖХ-МС (т/ζ) 485,4 (М-1).
Синтез 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты, 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты, 5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты описан в заявке заявителей, поданной одновременно с настоящей заявкой 14 февраля 2001г., озаглавленной Пирролзамещенные 2-индолиноновые ингибиторы протеинкиназ, серийный номер 09/783264, описание которой настоящим включено сюда полностью.
Пример И. Синтез 1-амино-3-(1,1-диоксо^6-тиоморфолин-4-ил)пропан-2-ола.
о
К раствору тиоморфолина (5,0 г, 48,7 ммоль) в НОСН3 (200 мл) добавляли раствор оксона (36,0 г, 58,5 ммоль) в Н2О (100 мл). Смесь хорошо перемешивали при 40°С в течение 48 ч, а затем охлаждали до 0°С. Водный раствор №ОН добавляли по каплям, чтобы подвести рН=12. Твердое вещество отфильтровывали и промывали НОСН3 (3x40 мл). Объединенную жидкость конденсировали и очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (ΟΗΟ13/ΟΗ3ΟΗ/ΝΗ3·Η2Ο=3/1/0,1-2/1/0,1) с получением 1,1-диоксида тиоморфолина (6,2 г) с 93% выходом. 'Н ЯМР (ΏΜ8Ο-ά6) δ 2,97 (ш, 4Н), 3,07 (ш, 4Н), 3,42 (Ьгз, 1Н), МС (т/ζ) 136 (М+1).
Смесь 1,1-диоксида тиоморфолина (2,5 г, 18,5 ммоль) и (К)-(-)эпихлоргидрина (1,55 мл, 20 ммоль) в смеси растворителей этанола (50 мл) и Н2О (5мл) перемешивали при 25°С в течение 24 ч. После удаления растворителя остаток очищали с помощью флэш-хроматографии с получением (К)-1-хлор-3-(1,1диоксо^6-тиоморфолин-4-ил)пропан-2-ола (4,0 г, 96%). 1Н ЯМР (ΏΜ8Ο-ά6) δ 2,50 (ш, 2Н), 2,94 (ш, 4Н), 3,05 (т, 4Н), 3,54 (άά, 1=5,8; 11,2 Гц, 1Н), 3,63 (άά, 1=4,4; 11,2 Гц, 1Н), 3,78 (т, Н, СН), 5,10 (ά, 1=5,2 Гц, 1Н, ОН), МС (т/ζ) 228,2 (М+1).
(К)-1-Хлор-3-(1,1-диоксо^6-тиоморфолин-4-ил)пропан-2-ол (2,27 г, 10 ммоль) обрабатывали раствором ΝΗ3 в метаноле (25 мас.%, 20 мл) при 50°С в течение 12 ч. После выпаривания растворителей остаток обрабатывали анионообменной смолой (АСг1х8, ОН-форма) в воде с получением неочищенного (8)-1 -амино-3-( 1,1 -диоксо^6-тиоморфолин-4-ил)пропан-2-ола (2,0 г).
Он был загрязнен примерно на 30% своим димером и мог быть очищен только с помощью колоночной хроматографии. МС (т/ζ) 209,2 (М+1). Конденсация (8)-1-амино-3-(1,1-диоксо^6-тиоморфолин4-ил)пропан-2-ола с оксиндолами дала желаемые индолиноны (выход 50-80% после очистки).
[3-(1,1-Диоксо^6-тиоморфолин-4-ил)-2-гидроксипропил]амид (К)-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты.
-48007186
'Н ЯМР (ΌΜ8Ο-ά6) δ 2,39, 2,42 (2хз, 6Н, 2хСН3), 2,49 (т, 1Н), 2,56 (т, 1Н), 2,97 (т, 4Н), 3,07 (т, 4Н), 3,16 (т, 1Н), 3,34 (т, 1Н), 3,74 (т, 1Н), 4,83 (ά, 1=4,8 Гц, 1Н, ОН), 6,86 (ά=7,6 Гц, 1Н), 6,97 (1,1=7,4 Гц, 1Н), 7,11 (1, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,50 (1, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,61 (8, 1Н), 7,76 (ά, 1=7,6 Гц, 1Н) (ароматический и винильный), 10,88 (8, ΙΗ, ΟΟΝΗ), 13,62 (8, ΙΗ, ΝΗ), ЖХ-МС (т/ζ) 473,4 (М+1).
[3-(1,1 -Диоксо^6-тиоморфолин-4-ил)-2-гидроксипропил]амид (К)-5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3 -илиденметил)-2,4-диметил-1 Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты.
н 'Н ЯМР (ΌΜ8Ο-ά6) δ 2,40, 2,42 (2χ8, 6Н, 2хСН3), 2,47 (т, 1Н), 2,54 (т, 1Н), 2,97 (т, 4Н), 3,06 (т, 4Н), 3,17 (т, 1Н), 3,30 (т, 1Н), 3,74 (т, 1Н), 4,83 (ά, 1=4,4 Гц, 1Н), 6,82 (1, 1=4,0 Гц, 1Н), 6,91 (ΐά, 21=2,8; 31=9,0 Гц, 1Н), 7,53 (1, 1=5,8 Гц, 1Н), 7,70 (8, 1Н), 7,75 (άά, 1=2,4; 9,2 Гц, 1Н), 10,88 (8, 1Н), 13,67 (8, 1Н). ЖХ-МС (т/ζ) 491,4 (М+1).
[3-(1,1-Диоксо^6-тиоморфолин-4-ил)-2-гидроксипропил]амид (К)-5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1 Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
'Н ЯМР (ΌΜ8Ο-ά6) δ 2,40, 2,42 (2χ8, 6Н, 2хСН3), 2,45 (т, 1Н), 2,53 (т, 1Н), 2,96 (т, 4Н), 3,06 (т, 4Н), 3,17 (т, 1Н), 3,33 (т, 1Н), 3,75 (т, 1Н), 4,83 (ά, 1=4,4 Гц, 1Н, ОН), 6,85 (1, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,11 (сИ, 1=2,2; 8,2 Гц, 1Н), 7,53 (1, 1=5,5 Гц, 1Н), 7,75 (8, 1Н), 7,97 (ά, 1=2,0 Гц, 1Н), 10,98 (8, 1Н), 13,62 (8, 1Н), ЖХ-МС (т/ζ) 507,2 (М+1).
(К)-5-(5 -Бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3 -илиденметил)-2,4-диметил-1 Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты [3-(1,1-диоксо^6-тиоморфолин-4-ил)-2-гидроксипропил]амид.
н 'Н ЯМР (ΌΜ8Ο-ά6) δ 2,41, 2,42 (2хз, 6Н, 2хСН3), 2,47 (т, 1Н), 2,54 (т, 1Н), 2,97 (т, 4Н), 3,06 (т, 4Н), 3,18 (т, 1Н), 3,30 (т, 1Н), 3,74 (т, 1Н), 4,83 (ά, 1=4,8 Гц, 1Н), 6,81 (ά, 1=8,4 Гц, 1Η), 7,24 (сИ, 1=1,8; 8,2 Гц, 1Н), 7,53 (1,1=5,8; 1Н), 7,76 (8, 1Н), 8,09 (ά, 1=2,0 Гц, 1Н), 10,98 (8, 1Н), 13,62 (8, 1Н), ЖХ-МС (т/ζ) 553,6 (М+1).
Пример 12. Синтез (8)- или (К)-1-метиламино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-ола.
(5)-
(К)8Смесь морфолина (1,74 мл, 20 ммоль) и (К)-эпихлоргидрина (1,56 мл, 20 ммоль) в этаноле (10 мл) перемешивали при к.т. в течение 48 ч. После удаления растворителя остаток обрабатывали раствором
-49007186 ίΉ3ΝΗ2 в воде (40 мас.%, 20 мл) при к.т. в течение 14 ч. Удаление растворителей дало неочищенный (8)1-метиламино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-ол, который можно было очистить с помощью вакуумной перегонки или колоночной хроматографии (2,4 г, 70%). (К)-1-Метиламино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-ол был с использованием (8)-эпихлоргидрина с 76% выходом. 'Н ЯМР (СОС13) δ 2,33 (άά, 1=3,6; 12,4 Гц, 1Н), 2,42 (ш, 1Н), 2,44 (άά, 1=2,8; 9,8 Гц, 2Н), 2,45 (в, ЗН), 2,53 (άά, 1=7,6; 11,8 Гц, 1Н), 2,62 (ш, 2Н), 2,65 (άά, 1=3,6; 12,0 Гц, 1Н), 3,71 (ш, 4Н), 3,85 (ш, 1Н), 13С ЯМР (СОС13) δ 67,06, 65,58, 62,80, 55,87, 53,94, 36,72, МС (т/ζ) 175 (М+1).
(8)-1-Метиламино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-ол, конденсированный с 5-фтороксиндолом, давал (2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)метиламид (К)-5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З -илиденметил)2,4-диметил- 1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
'Н ЯМР (ϋΜ8Ο-ά6) δ 2,0 (в, ЗН), 2,15 (ш, 1Н), 2,25 (ш, 6Н), 2,28 (ш, 2Н), 2,42 (в, 1Н), 2,95 (в, 1Н), 3,0 (в, ЗН), 3,25 (ш, 2Н), 3,57 (ш, 2Н), 3,97 и 3,68 (2хЬгв, 1Н), 4,80 и 4,74 (2хЬгв, 1Н), 6,82 (άά, 1=4,0; 8,0 Гц, 1Н), 6,90 (ΐά, Э=2,3; 31=8,7 Гц, 1Н), 7,67 (в, 1Н), 7,71 (άά, 1=2,2; 9,0 Гц, 1Н), 10,86 (в, 1Н), 13,57 (в, 1Н), ЖХ-МС (т/ζ) 457,2 (М+1).
(К)-1 -Амино-3-морфолин-4-ил-пропан-2-ол давал (8)-5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)-2,4-диметил-1 Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты (2-гидрокси-З -морфолин-4-ил-пропил)метиламид.
'Н ЯМР (ϋΜ8Ο-ά6) δ 2,0 (ш, ЗН), 2,10 (ш, 1Н), 2,22 (ш, 6Н), 2,25 (ш, 2Н), 2,38 (ш, 1Н), 2,90 (в, 1Н), 2,96 (в, ЗН), 3,27 (ш, 2Н), 3,52 (ш, 2Н), 3,93 и 3,64 (2хЬгв, 1Н), 4,75 и 4,70 (2хЬгв, 1Н), 6,77 (άά, 1=4,6; 8,2 Гц, 1Н), 6,85 (ΐά, Э=2,5; 31=8,8 Гц, 1Н), 7,62 (в, 1Н), 7,67 (άά, 1=2,0; 9,6 Гц, 1Н), 10,81 (в, 1Н), 13,52 (в, 1Н), ЖХ-МС (т/ζ) 457,2 (М+1).
Пример 13. Получение аминной боковой цепи 3-(1-Н-тетразол-1-ил)-2-гидрокси-1-хлорпропан и 3(2-Н-тетразол-2-ил)-2 -гидрокси-1 -хлорпропан.
6,905 г тетразола (100 ммоль), и 1,75 мл диизопропилэтиламина (10 ммоль), и 11,73 мл эпихлоргидрина (150 ммоль) в безводном ацетонитриле (30 мл) перемешивали при 60°С в течение 4 ч. Полученный раствор упаривали, сушили под высоким вакуумом и очищали на колонке из диоксила кремния в смеси хлороформа и метанола (соотношение 100:8). Первая фракция обеспечила чистый 3-(2-Н-тетразол-2-ил)-
2-гидрокси-1-хлорпропан, 6,215 г (бесцветное масло, 38% выход), вторая фракция дала 9,208 г чистого 3(1-Н-тетразол-1-ил)-2-гидрокси-1-хлорпропана (липкая смола, 57% выход).
3-( 1 -Н-Тетразол-1 -ил)-2-гидрокси-1 -аминопропан.
9,110 г 3-(1-Н-тетразол-1-ил)-2-гидрокси-1-хлорпропана, 15 г карбоната калия и 130 мл насыщенного метанольного аммиака перемешивали в течение 21ч, затем фильтровали и упаривали. Остаток очищали на колонке с диокидом кремния с использованием смеси хлороформа, метанола и водного раствора аммиака в соотношении 80:35:4. Выход=7,326 г белой липкой смолы (91,5% СЬ (теоретический)).
3-(2-Н-Тетразол-2-ил)-2-гидрокси-1 -аминопропан.
6,105 г 3-(2-Н-тетразол-2-ил)-2-гидрокси-1 -хлорпропана, 10 г карбоната калия и 95 мл насыщенного метанольного раствора аммиака перемешивали в течение 21ч, затем фильтровали и упаривали. Остаток очищали на колонке с силикагелем, используя смесь хлороформа, метанола и водного раствора аммиака в соотношении 60:25:2. Выход=3,726 г белого кристаллического твердого вещества (69,5% ΐΗ).
3-[(2К,68)-2,6-Диметилморфолин-4-ил]-2-гидрокси-1-амино пропан.
4,7 мл эпихлоргидрина (60 ммоль) добавляли к охлажденному на льду раствору цис-2,6-диметилморфолина (4,607 г, 40 ммоль) в трифторэтаноле (5 мл). Раствор перемешивали при 0-5°С в течение 1 ч, охлаждающую баню убирали и перемешивали при к.т. в течение дополнительных 5 ч. Смесь упаривали под высоким вакуумом, полученный маслянистый остаток растворяли в безводном этаноле (50 мл), раствор охлаждали на ледяной бане, твердый метилат натрия (2,27 г) добавляли двумя порциями и смесь перемешивали при 0-5°С в течение 2 ч. Реакционную смесь затем фильтровали, соли промывали этанолом (30 мл) и объединенные фильтраты добавляли к охлажденному на льду концентрированному водному раствору аммиака (200 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 12 ч, затем упаривали под высоким вакуумом. Остаток очищали на колонке из кремнезема в смеси хлороформа, метанола и 7 М мета
-50007186 нольного растора аммиака с соотношением 80:15:3. Выход=5,75 г белого кристаллического гигроскопичного твердого вещества (76,3% 111).
(2§)-3-(3-Метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-2-гидрокси-1-хлорпропан и (2§)-3-(3-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-2-гидрокси-1-аминопропан.
3,423 г 3-метил-2,5-диоксоимидазолидина (3,423 г) и 3,60 мл Κ эпихлоргидрина (-) (99% е.е. (сггогз схеср1с4. ошибки в пределах допустимости)) и 0,30 мл основания Бартона (1,5 ммоль) в безводном ацетонитриле перемешивали при 60°С в течение 20 ч. Полученный раствор упаривали под высоким вакуумом и очищали на колонке с диоксидом кремения в смеси хлороформа и метанола (градиент от 5 до 20% метанола) для получения 5,572 г хлорсодержащего соединения в виде белого аморфного твердого вещества (90% выход). Хлорид превращали в амин следующим образом. Полученное гидроксихлорпромежуточное соединение растворяли в метанольном растворе аммиака (насыщенный газообразным аммиаком), добавляли карбонат калия и смесь перемешивали в закрытой колбе в течение 2,5 дней. Реакционную смесь фильтровали, фильтраты упаривали. Остаток очищали на колонке с диоксидом кремния в смеси хлороформа, метанола и конц. водного раствора аммиака с соотношением 80:15:1,5.
Пример 14. 5-[^)-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]А-[2-гидрокси-3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 22) (общая методика).
мг 3-(2-Н-тетразол-2-ил)-2-гидрокси-1-аминопропана добавляли к суспензии 105 мг (0,25 ммоль) 1окси-7-азабензтриазольного эфира 5-[^)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (полученного путем активации (3Ζ)-3-({3,3-диметил-4-карбокси-1-Н-пиррол-2-ил}метилен)-5-фтор-1,3-дигидро-2Н-индол-2-она (480 мг; 1,6 ммоль) реагентом ΗΑΤυ (570 мг; 1,5 ммоль) в присутствии основания Хюнига (3,0 моль; 0,525 мл) в ДМФ (5 мл) и выделенного в чистой форме путем осаждения хлороформом (5 мл) и высушивания под высоким вакуумом с 92% выходом (579 мг)) в безводном диметилацетамиде (1,5 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин и упаривали под высоким вакуумом. Остаток суспендировали в смеси метанола и диэтиламина с соотношением 20:1 (3 мл), давали кристаллизоваться в холодильнике (5°С) в течение 1 ч, фильтровали, осадок промывали ледяным метанолом и сушили под высоким вакуумом. Выход=106 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 15. 5-[^)-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]А-[2-гидрокси-3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 23) (общая методика).
мг 3-(2-Н-тетразол-2-ил)-2-гидрокси-1-аминопропана добавляли к суспензии 109 мг (0,25 ммоль) 1окси-7-азабензотриазольного эфира 5-[^)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (полученного путем активации (3Ζ)-3-([3,3-диметил-4-карбокси-1-Н-пиррол-2-ил]метилен)-5-хлор-1,3-дигидро-2Н-индол-2-она (1,520 г; 4,8 ммоль) реагентом ΗΑΤυ (1,768 г; 4,65 ммоль) в присутствии основания Хюнига (9,0 ммоль; 1,58 мл) в ДМФ (20 мл) и выделенного в чистой форме путем осаждения хлороформом (20 мл) и высушивания под высоким вакуумом с 94% выходом (1,907 г)) в безводном диметилацетамиде (1,5 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин и упаривали под высоким вакуумом. Остаток суспендировали в смеси метанола и диэтиламина в соотношении 20:1 (3 мл), давали кристаллизоваться в холодильнике (5°С) в течение 1 ч, фильтровали, осадок промывали ледяным метанолом и сушили под высоким вакуумом. Выход=109 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 16. №[2-Гидрокси-3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4-диметил-5-[^)-[2-оксо-5-трифторметокси)-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден]метил)-1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 24) (общая методика).
мг 3-(2-Н-тетразол-2-ил)-2-гидрокси-1-аминопропана добавляли к суспензии 121,5 мг (0,25 ммоль) 1-окси-7-азабензотриазольного эфира 5-[^)-(5-трифторметокси-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден) метил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (полученного путем активации (3Ζ)-3-((3,3-диметил-
4-карбокси-1-Н-пиррол-2-ил)метилен)-5-трифторметокси-1,3-дигидро-2Н-индол-2-она (1,768 г; 4,8 ммоль) реагентом ΗΑΤυ (1,758 г; 4,8 ммоль) в присутствии основания Хюнига (9,0 ммоль; 1,58 мл) в ДМФ (25 мл) и выделенного в чистой форме путем упаривания и осаждения безводным ацетонитрилом и высушивания под высоким вакуумом с 85,5% выходом (1,929 г)) в безводном диметилацетамиде (1,5 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин и упаривали под высоким вакуумом. Остаток суспендировали в смеси метанола и диэтиламина в соотношении 20:1 (3 мл), давали кристаллизоваться в холодильнике (5°С) в течение 1 ч, фильтровали, осадок промывали ледяным метанолом и сушили под высоким вакуумом. Выход=113 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 17. 5-[^)-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]А-[2-гидрокси-3-(1Н-тетразол-1 -ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3 -карбоксамид (соединение 25).
Его получали в соответствии с методикой примера 14 из 72 мг соответствующего амина. Выход=113 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 18. 5-[^)-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]А-[2-гидрокси-3-(1Н-тетразол-1 -ил)пропил] -2,4-диметил-1Н-пиррол-3 -карбоксамид (соединение 26).
Его получали по методике примера 15 из 72 мг соответствующего амина. Выход=122 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
- 51 007186
Пример 19. Н-[2-Гидрокси-3-(1Н-тетразол-1-ил)пропил]-2,4-диметил-5-[(2)-[2-оксо-5-(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил]- 1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 27).
Его получали по методике примера 16 из 72 мг соответствующего амина. Выход=118 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 20. Н-[3-[(2К,68)-2,6-Диметилморфолин-4-ил]-2-гидроксипропил]-5-[(2)-(5-фтор-2-оксо1,2-дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 28).
Его получали по методике примера 14 из 95 мг соответствующего амина. Выход=99 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 21. 5 - [(Ζ)-(5 -Хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-З -илиден)метил] -Ν- [3 - [(2К,68)-2,6-диметилморфолин-4-ил]-2-гидроксипропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 29).
Его получали по методике примера 15 из 95 мг соответствующего амина. Выход=101 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 22. Ν-[3-[(2Κ,68)-2,6-Диметилморфолин-4-ил]-2-гидроксипропил]-2,4-диметил-5-[(2)-[2-оксо-
5-(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗН-индол-З-илиден]метил]-1 Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 30).
Его получали по методике примера 16 из 95 мг соответствующего амина. Выход=89 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 23. 5-[(2)-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-М-[(28)-2-гидрокси-3-(3метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 34).
Его получали по методике примера 14 из 95 мг соответствующего амина. Выход=109 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 24. 5-[(2)-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-М-[(28)-2-гидрокси-3-(3метил-2,5 -диоксоимидазолидин-1 -ил)пропил]-2,4-диметил-1 Н-пиррол-3 -карбоксамид (соединение 3 6).
Его получали по методике примера 15 из 95 мг соответствующего амина. Выход=107 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 25. Ν- [(28)-2-Гидрокси-3 -(3 -метил-2,5 -диоксоимидазолидин-1 -ил)пропил] -2,4-диметил-5 {(2)-[2-оксо-5-(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}-1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 35).
Его получали по методике примера 16 из 95 мг соответствующего амина. Выход=123 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 26. 5-[(2)-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-М-[(2К)-2-гидрокси-3-(3метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 31).
Его получали по методике примера 14 из 95 мг соответствующего амина. Выход=110 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 27. 5-[(Ζ)-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-П-[(2К)-2-гидрокси-3-(3метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 32).
Его получали в соответствии с методикой примера 15 из 95 мг соответствующего амина. Выход=103 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 28. М-[(2К.)-2-Гидрокси-3-(3-метил-2,5-диоксоимидазолидин- 1-ил)пропил]-2,4-диметил-5{(Ζ)-2-οκοο-5-(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗН-индол-З-илиденметил}-1 Н-пиррол-3-карбоксамид (соединение 33).
Его получали по методике примера 16 из 95 мг соответствующего амина. Выход=120 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 29. Этиловый эфир 5-формил-2-метил-4-фенил-1 Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Н
ДМФ (4 мл, 3 экв.) охлаждали при перемешивании в ледяной бане. К этому добавляли РОС13 (1,1 экв., 1,8 мл). Через 30 мин раствор 3,5-диметил-4-этилового эфира пиррола (4 г, 17,4 ммоль) в ДМФ (2М, 9 мл) добавляли в реакционную смесь и перемешивание продолжали. Через 10 мин реакционная смесь затвердевала. Ее разбавляли 5 мл ДМФ и нагревали при 90°С в масляной бане. Через 1 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (100 мл) и подщелачивали до рН=11 с помощью 1н. №ОН. Продукт экстрагировали в метиленхлорид (3x200 мл) и органические слои промывали соляным раствором (200 мл), сушили (Мд8О4) и концентрировали с получением 4,3 г (95%) этилового эфира 5-формил-2-метил-4-фенил-1 Н-пиррол-3-карбоновой кислоты в виде коричневого твердого вещества. Ή ЯМР (360 МГц, ϋΜ8Ο-ά6) δ 12,5 (Ьг 8, ΙΗ, ΝΗ), 9,11 (8, 1Н, СНО), 7,35 (8, 5Н, АгН), 3.98 (щ 1=6,8 и 7,2 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 2,48 (8, ЗН, СН3), 0,98 (1,1=7 Гц, ЗН, ОСН2СН3).
5-Формил-2-метил-4-фенил-1 Н-пиррол-3-карбоновая кислота.
-52007186 <
•он
Этиловый эфир 5-формил-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты растворяли в воде (100 мл) и метаноле (45 мл) при перемешивании. Добавляли КОН (2 экв., 1,9 г) и грели при 100°С. Через
2,5 ч охлаждали до комнатной температуры, оставшийся эфир удаляли путем экстрагирования в этилацетат (200 мл), сушили и концентрировали. Водный слой подкисляли до рН=3, используя 2н. НС1. Белое твердое вещество удаляли путем фильтрования, с промывкой водой. Твердое вещество повторно концентрировали из толуола, растирали с гексанами и сушили с получением 2 г (52%) грязно-белого твердого вещества. 'Н ЯМР (360 МГц, ЭМБО-с!,,) δ 12,46 (Ьг з, 1Н, СО2Н), 11,95 (з, ΙΗ, ΝΗ), 9,08 (з, 1Н, СНО), 7,36 (з, 5Н, АтН), 2,49 (з, ЗН, СН3). МС т/ζ (относительная интенсивность %, ионы) обнаружено 229 (100, М+); вычисл. 229,2.
-Формил-2-метил-4-фенил-1 Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты (3 -диэтиламино-2-гидроксипропил)амид.
О.
Смесь 5-формил-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (1,0 г, 4,36 ммоль), 1-амино-Здиэтиламино-2-пропанола (950 мг, 6,54 ммоль), ББС (диэтилдитиокарбамат) (900 мг, 4,36 ммоль) и ΗΟΒΐ (884 мг, 6,54 ммоль) в хлороформе (60 мл) перемешивали при к.т. в течение 12 ч. Реакционную смесь выливали в нас. бикарбонат натрия (60 мл) и к этому добавляли 1н. ΝαΟΗ (8 мл). Затем это экстрагировали ЕЮАс (3x100 мл), промывали водой и соляным раствором, сушили и концентрировали с получением 400 мг 5-формил-2-метил-4-фенил-1 Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (3-диэтиламино-2-гидроксипропил)амида.
Пример 30. Методика синтеза соединений 11-21.
0,36 М раствор каждого оксиндола получают в ЭМ80. так же как и 0,576 М раствор каждого альдегида. 300 мкл соответствующего оксиндола смешивают с 300 мкл соответствующего альдегида в присутствии 200 мкл ЭМ80. Затем добавляют 40 мг диэтилентриамин-акцепторной смолы. Смесь помещают в блок Роббинса и этот блок закупоривают и помещают в сушильный шкаф при 60°С, где его встряхивают в течение 18 ч.
Через 18 ч блок Роббинса удаляют из шкафа. Верхнюю крышку блока удаляют и 800 мкл ЭМ80 добавляют к смеси. Затем блок вновь закупоривают и снова помещают в сушильный шкаф при 60°С, где он вращается непрерывно в течение 1 ч.
После того как 1 ч пройдет, блок Роббинса удаляют из сушильного шкафа и дают ему остыть. Нижнюю крышку блока Роббинса осторожно удаляют и весь блок помещают в фильтрационное устройство, которое позволяет отфильтровать вновь синтезированные соединения из смолы.
Пример 31. 3 - [ 1 -Н-(7-Азабензотриазолил)окси] -2-гидрокси-1 -аминопропан.
4,083 г 1-гидрокси-7-азабензотриазола (30 ммоль), и 0,53 мл диизопропиламина (3 ммоль), и 4,70 мл эпихлоргидрина в безводном хлороформе перемешивали при 60°С в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали на колонку с диоксидом кремния и элюировали смесью хлороформа и метанола с соотношением 100:3. Полученное гидроксихлор-промежуточное соединение (4,83 г, бледно-желтое масло, 70% выход) растворяли в метанольном растворе аммиака (100 мл, насыщенный газообразным аммиаком), добавляли 8,3 г карбоната калия и смесь перемешивали в закрытой колбе в течение 2,5 дней. Реакционную смесь фильтровали, фильтраты упаривали. Остаток очищали на колонке с диоксидом кремния, используя смесь хлороформа, метанола и конц. водного аммиака с соотношением 80:15:1,5. Выход=2,793 г белого кристаллического твердого вещества (63% ώ. от хлорида).
-[ 1 -Н-(Бензотриазолил)окси] -2-гидрокси-1 -хлорпропан и 3 -[ 1 -Н-(бензотриазолил-3-Ν-океидо)] -2гидрокси-1 -хлорпропан.
12,162 г гидроксиазабензотриазола (90 ммоль), 1,59 мл диизопропилэтиламина (9 ммоль) и 14,1 мл эпихлоргидрина (180 ммоль) в безводном хлороформе перемешивали при 55°С в течение 2 ч. Реакционную смесь упаривали, остаток сушили под высоким вакуумом, затем очищали на колонке с диоксидом кремния смесью хлороформа и метанола с соотношением 100:5. Первые фракции обеспечили 3-[1-Н(бензотриазолил)окси]-2-гидрокси-1-хлорпропан, 10,570 г (бледно-желтый мед, 51,5% выход), за чем следовала фракция 3-[1-Н-(бензотриазолил-3-Н-оксидо)]-2-гидрокси-1-хлорпропана, 9,990 г (белое кристаллическое твердое вещество, 48,5% выход).
-53 007186
3-[1 -Н-(Бензотриазолил-3 -Ν-оксидо )]-2-гидрокси-1-аминопропан.
Получили путем аминолизиса 3-[1-Н-(бензотриазолил-3-№оксидо)]-2-гидрокси-1-хлорпропана по аналогии с синтезом 3-[1-Н-(7-азабензотриазолил)окси]-2-гидрокси-1-аминопропана.
Пример 32. 5-[^)-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]-№[2-гидрокси-3-(3Н[1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3-илокси)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид (общая методика).
105 мг 3-(1-Н-7-азабензотриазолил)окси-2-гидрокси-1-аминопропана добавляли к суспензии 105 мг (0,25 ммоль) 5-[(2)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты 1-окси-7-азабензотриазольного эфира (полученного путем активации (3Ζ)-3-({3,3диметил-4-карбокси-1-Н-пиррол-2-ил}метилен)-5-фтор-1,3-дигидро-2Н-индол-2-она (480 мг; 1,6 ммоль; 0,525 мл) в ДМФ (5 мл) и выделенного в чистой форме путем осаждения хлороформом (5 мл) и высушивания под высоким вакуумом с 92% выходом (579 мг)) в безводном диметилацетамиде (1,5 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин и упаривали под высоким вакуумом. Остаток суспендировали в смеси метанола и диэтиламина с соотношением 20:1 (3 мл), давали кристаллизоваться в холодильнике (5°С) в течение 1 ч, фильтровали, осадок промывали ледяным метанолом и сушили под высоким вакуумом. Выход=121 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 33. 5-[^)-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]-Щ2-гидрокси-3-(3Н-[1,2,3] триазоло [4,5-Ь] пиридин-3 -илокси)пропил] -2,4-диметил-1Н-пиррол-3 -карбоксамид (общая методика).
105 мг 3-(1-Н-7-азабензотриазолил)окси-2-гидрокси-1-аминопропана добавляли к суспензии 109 мг (0,25 ммоль) 1-окси-7-азабензотриазольного эфира 5-[^)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден) метил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (полученного путем активации (3Ζ)-3-({3,3-диметил-4-карбокси-1-Н-пиррол-2-ил}метилен)-5-хлор-1,3-дигидро-2Н-индол-2-она (1,520 г; 4,8 ммоль) реагентом НАТи (1,768 г; 4,65 ммоль) в присутствии основания Хюнига (9,0 ммоль; 1,58 мл) в ДМФ (20 мл) и выделенного в чистой форме путем осаждения хлороформом (20 мл) и высушивания под высоким вакуумом с 94% выходом (1,907 г)) в безводном диметилацетамиде (1,5 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин и упаривали под высоким вакуумом. Остаток суспендировали в смеси метанола и диэтиламина с соотношением 20:1 (3 мл), давали кристаллизоваться в холодильнике (5°С) в течение 1 ч, фильтровали, осадок промывали ледяным метанолом и сушили под высоким вакуумом. Выход=130 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 34. 5-[^)-(5-Трифторметокси-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]-Щ2-гидрокси-3(3Н-[1,2,3]1риазоло[4,5-Ь]пиридин-3-илокси)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид (общая методика).
105 мг 3-(1-Н-7-азабензотриазолил)окси-2-гидрокси-1-аминопропана добавляли к суспензии 121,5 мг (0,25 ммоль) 1-окси-7-азабензотриазольного эфира 5-[^)-(5-трифторметокси-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (полученного путем активации (3Ζ)3 -({3,3-диметил-4-карбокси-1 -Н-пиррол-2-ил}метилен)-5-трифторметокси-1,3-дигидро-2Н-индол-2-она (1,768 г; 4,8 ммоль) реагентом НАТи (1,758 г; 4,8 ммоль) в присутствии основания Хюнига (9,0 ммоль; 1,58 мл) в ДМФ (25 мл) и выделенного в чистой форме путем упаривания и осаждения безводным ацетонитрилом и высушивания под высоким вакуумом с 85,5% выходом (1,929 г)) в безводном диметилацетамиде (1,5 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин и упаривали под высоким вакуумом. Остаток суспендировали в смеси метанола и диэтиламина с соотношением 20:1 (3 мл), давали кристаллизоваться в холодильнике (5°С) в течение 1 ч, фильтровали, осадок промывали ледяным метанолом и сушили под высоким вакуумом. Выход=142 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 35. 5-[^)-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]-№[2-гидрокси-3-(3-оксидо-1Н-1,2,3-бензотриазол-1 -ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3 -карбоксамид.
Его получали в соответствии с методикой примера 32 из 105 мг соответствующего амина. Выход=120 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 36. 5-[^)-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден)метил]-№[2-гидрокси-3-(3-оксидо-1Н-1,2,3-бензотриазол-1 -ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3 -карбоксамид.
Его получали в соответствии с методикой примера 33 из 105 мг соответствующего амина. Выход=127 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Пример 37. №[2-Гидрокси-3-(3-оксидо-1Н-1,2,3-бензотриазол-1-ил)пропил]-2,4-диметил-5-[^)-[2оксо-5-(трифторметокси)- 1,2-дигидро-3Н-индол-3-илиден]метил]- 1Н-пиррол-3 -карбоксамид.
Его получали в соответствии с методикой примера 34 из 105 мг соответствующего амина. Выход=141 мг оранжевого кристаллического твердого вещества.
Биологические примеры
Для обнаружения тех соединений, которые демонстрируют оптимальную степень желаемой активности, используют следующие анализы.
А. Методы анализа.
Следующие анализы могут быть использованы для определения уровня активности и действия различных соединений по настоящему изобретению на одну или более чем одну из РК. Для любой РК могут быть разработаны подобным же образом аналогичные анализы с использованием методик, хорошо известных в данной области техники.
- 54 007186
Некоторые из анализов, описанных здесь, осуществляют в формате ЕБ18А (Епхуте-Ыпкеб 1ттипокогЬеп! 8апб\\'1с11 Аккау, твердофазный иммуноферментный анализ) (Уо11ег, е! а1., 1980, ЕпхутеЫпкеб 1ттипокогЬеп! Аккау, Мапиа1 оГ С11шса1 1ттипо1оду, 2б еб., Воке апб Рпебтап, Ат. 8ос. ОГ МюгоЬю1оду, VакЫηд!οη, Э.С., рр. 359-371). Общая процедура состоит в следующем: соединение вводят в клетки, экспрессирующие тестируемую киназу, либо естественным образом, либо рекомбинантным, в течение выбранного периода времени, после истечения которого, если тестируемая киназа представляет собой рецептор, добавляют лиганд, про который известно, что он активирует рецептор. Клетки лизируют и лизат переносят в лунки планшета для ЕЬ18А, предварительно покрытые специфичным антителом, распознающим субстрат реакции ферментативного фосфорилирования. Компоненты клеточного лизата, не являющиеся субстратом, вымывают и количество фосфорилирования на субстрате определяют с помощью антитела, специфически распознающего фосфотирозин, по сравнению с контрольными клетками, которые не подвергали контакту с тестируемым соединением.
Протоколы, предпочтительные в настоящем изобретении для проведения ЕЬ18А-экспериментов для конкретных РК, предложены ниже. Однако адаптация этих протоколов для определения активности соединений против других ВТК, а также для СТК и 8ТК входит в пределы знаний специалистов в данной области. Другие анализы, описанные здесь, измеряют количество ДНК, производимой в ответ на активацию тестируемой киназы, что представляет собой общую меру пролиферативного ответа. Общая процедура для этого анализа представляет собой следующее: соединение вводят в клетки, экспрессирующие тестируемую киназу, либо естественным образом, либо рекомбинантным, в течение выбранного периода времени, по прошествии которого, если тестируемая киназа представляет собой рецептор, добавляют лиганд, про который известно, что он активирует этот рецептор. После инкубации, по меньшей мере, в течение ночи добавляют ДНК-метящий реагент, такой как 5-бромдезоксиуридин (ВгбИ) или Н3-тимидин. Количество меченой ДНК определяют с помощью либо анти-Вгби-антитела, либо путем измерения радиоактивности, и сравнивают с контрольными клетками, которые не подвергали контакту с тестируемым соединением.
Биоанализ С8Т-РБК-1.
С помощью этого анализа исследуют тирозинкиназную активность С8Т-РЬК-1 на ро1у(д1и, !уг) пептидах. Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты для ЕЫ8А Согшпд (каталог Согшпд № 5805-96).
2. Ро1у(д1и, 1уг) 4:1, лиофилизат (каталог 81дта # Р0275).
3. Приготовление планшетов для анализа, покрытых ро1у(д1и, !у г) (рЕУ): наносят покрытие с использованием 2 мкг/лунку ро1у(д1и, !уг) (рЕУ) в 100 мкл РВ8 (физиологический раствор, забуференный фосфатом), выдерживают при комнатной температуре в течение 2 ч или при 4°С в течение ночи. Хорошо накрывают планшеты для предупреждения испарения.
4. РВ8-буфер: для 1 л смешивают 0,2 г КН2РО4, 1,15 г №2НРО4, 0,2 г КС1 и 8 г №С1 в приблизительно 900 мл бН2О (деионизованная вода). Когда все реагенты растворены, подводят рН до 7,2 с помощью НС1. Доводят общий объем до 1 л, используя бН2О.
5. РВ8Т-буфер: к 1 л РВ8-буфера добавляют 1,0 мл Т\гееп-20.
6. ТВВ - блокирующий буфер: для 1 л смешивают 1,21 г Трис, 8,77 г №С1, 1 мл ТVЕЕN-20 в приблизительно 900 мл бН2О. Подводят рН до 7,2 с помощью НС1. Добавляют 10 г В8А (бычий сывороточный альбумин), перемешивают для растворения. Доводят общий объем до 1 л с помощью бН2О. Фильтруют для удаления частиц веществ.
7. 1% В8А в РВ8: для приготовления 1х рабочего раствора добавляют 10 г В8А к приблизительно 990 мл РВ 8-буфера, перемешивают для растворения. Доводят общий объем до 1 л с помощью РВ8буфера, фильтруют для удаления частиц веществ.
8. 50 мМ Нерек рН 7,5.
9. 68Т-Р1к1сб, очищенная из кЕ9 рекомбинантной бакуловирусной трансформации (8иСЕН 1пс.).
10. 4% ЭМ8О в бН2О.
11. 10 мМ АТФ в бН2О.
12. 40 мМ МпС12.
13. Буфер для разведения киназ (КЭВ): смешивают 10 мл Нерек (рН 7,5), 1 мл 5М №С1, 40 мкл 100 мМ ортованадата натрия и 0,4 мл 5% В8А в бН2О с 88,56 мл бН2О.
14. 96-луночные У-донные полипропиленовые планшеты ΝυΝΟ АррНеб 8с1еп(1Пс Са!а1од № А8-72092.
15. ЕЭТА (этилендиаминтетрауксусная кислота): смешивают 14,12 г этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЕЭТА) с приблизительно 70 мл бН2О. Добавляют 10н. №1ОН до тех пор, пока ЕЭТА не растворится. Подводят рН до 8. Доводят общий объем до 100 мл с помощью бН2О.
16. 1° буфер для разведения антител: смешивают 10 мл 5% В8А в РВ8-буфере с 89,5 мл ТВ8Т (забуференный Трисом изотонический раствор НС1, содержащий Т\гееп-20).
17. Антифосфотирозиновое моноклональное антитело, коньюгированное с пероксидазой хрена (РУ99 НВР, 8ап!а Сгих Вю!есй).
18. 2,2'-Азинобис(3-этилбензтиазолин)-6-сульфоновая кислота (АВТ8, Мокк, номер по каталогу АВ8Т).
19. 10% 8Ό8 (додецилсульфат натрия).
- 55 007186
Методика
1. Покрывают 96-луночные планшеты для ЕЫБА Сотшпд 2 мкг полиЕУ-пептида в стерильном РВБ, как описано на стадии 3 в Материалах и реагентах.
2. Удаляют несвязавшуюся жидкость из лунок путем переворачивания планшета. Промывают 1 раз ТВБТ. Похлопывают планшетом по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости.
3. Добавляют 100 мкл 1% ВБА в РВБ в каждую лунку. Инкубируют, при встряхивании, в течение 1 ч при комнатной температуре.
4. Повторяют стадию 2.
5. Промывают лунки 50 мМ НЕРЕБ (рН 7,5) (150 мкл/лунку).
6. Разбавляют тестируемое соединение 4Н2О/4% ИМБО в 4-кратной желаемой конечной концентрации в анализе в 96-луночных полипропиленовых планшетах.
7. Добавляют 25 мкл разбавленного тестируемого соединения в планшет для ЕЫБА. В контрольные лунки помещают 25 мкл 4Н2О/4% ИМБО.
8. Добавляют 25 мкл 40 мМ МпС12 с 4х АТФ (2 мкМ) в каждую лунку.
9. Добавляют 25 мкл 0,5 М ЕИТА в лунки с негативным контролем.
10. Разбавляют 0БТ-Е1к1 до 0,005 мкг (5 нг)/лунку с помощью КИВ.
11. Добавляют 50 мкл разбавленного фермента в каждую лунку.
12. Инкубируют, при встряхивании, в течение 15 мин при комнатной температуре.
13. Останавливают реакцию добавлением 50 мкл 250 мМ ЕИТА (рН 8,0).
14. Промывают 3х, используя ТВБТ, и похлопывают планшетом по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости.
15. Добавляют 100 мкл на лунку конъюгата антифосфотирозин-НВР, разведение 1:5000 в буфере для разведения антител. Инкубируют, при встряхивании, в течение 90 мин при комнатной температуре.
16. Промывают как на стадии 14.
17. В каждую лунку добавляют 100 мкл раствора АВТБ комнатной температуры.
18. Инкубируют, при встряхивании, в течение 10-15 мин при комнатной температуре. Удаляют любые пузырьки.
19. Останавливают реакцию добавлением 20 мкл 10% БИБ в каждую лунку.
20. Считывают результаты на устройстве для чтения планшетов для ЕЫБА Эупа1ес11 МР7000 с тест-фильтром при 410 нМ и эталонным фильтром при 630 нМ.
Биоанализ ΡΥΚ2.
Этот анализ используют для измерения ίη νίΐτο киназной активности НА-эпитоп-меченой полноразмерной рук2 (ЕЬ.рук2-НА) в ЕЫБА-анализе.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты для ЕЫБА Сотшпд.
2. 12СА5 моноклональное анти-НА-антитело (БИОЕИ, 1пс.).
3. РВБ (солевой раствор Дульбекко, забуференный фосфатом (каталог 01Ьсо № 450-1300ЕВ)).
4. ТВБТ-буфер: для 1 л смешивают 8,766 г ИаС1, 6,057 г Трис и 1 мл 0,1% Тритон Х-100 приблизительно в 900 мл 4Н2О. Подводят рН до 7,2, доводят объем до 1 л.
5. Блокирующий буфер: для 1 л смешивают 100 г 10% ВБА, 12,1 г 100 мМ Трис, 58,44 г 1М ИаС1 и 10 мл 1% ТАЕЕИ-20.
6. ЕЬ.рук2-НА из к£9 клеточных лизатов (БИОЕИ, 1пс.).
7. 4% ИМБО в М11110ие Н2О.
8. 10 мМ АТФ в 4Н2О.
9. 1М МпС12.
10. 1М М§С12.
11. 1М дитиотрейтол (ИТТ).
12. 10х киназный буфер фосфорилирования: смешивают 5,0 мл 1М Нерек (рН 7,5), 0,2 мл 1М МпС12, 1,0 мл 1М МдС12, 1,0 мл 10% Тритона Х-100 в 2,8 мл 4Н2О. Непосредственно перед применением добавляют 0,1 мл 1М ИТТ.
13. 96-луночные У-донные полипропиленовые планшеты ΝυΝΟ
14. 500 мМ ЕИТА в 4Н2О.
15. Буфер для разведения антитела: для 100 мл: 1 мл 5% ВБА/РВБ и 1 мл 10% Тгоееп-20 в 88 мл ТВБ.
16. НКР-коньюгированный анти-Р1уг ΡΥ99, Бап1а Стих Вю1ес11 номер по каталогу БС-7020.
17. АВТБ (2,2'-азино-ди-(3-этилбензотиазолин)-6-сульфокислота), Мокк, номер по каталогу АВБТ-2000.
18. 10% БИБ.
Методика
1. Покрывают 96-луночные планшеты для ЕЫБА Сотшпд 0,5 мкг на лунку 12СА5 анти-НАантителом в 100 мкл РВБ. Хранят в течение ночи при 4°С.
- 56 007186
2. Удаляют несвязавшееся НА-антитело из лунок путем переворачивания планшета. Промывают планшет бН2О. Похлопывают планшетом по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости.
3. Добавляют 150 мкл блокирующего буфера в каждую лунку. Инкубируют при встряхивании в течение 30 мин при комнатной температуре.
4. Промывают планшет 4х ТВБ-Т.
5. Разбавляют лизат РВБ (1,5 мкг лизата/100 мкл РВБ).
6. Добавляют 100 мкл разбавленного лизата в каждую лунку. Встряхивают при комнатной температуре в течение 1 ч.
7. Промывают, как на стадии 4.
8. Добавляют 50 мкл 2х киназного буфера в планшеты для ЕБ1БА, содержащие захваченный рук2-НА.
9. Добавляют 25 мкл 400 мкМ тестируемого соединения в 4% ЭМБО в каждую лунку. Для контрольных лунок используют лишь 4% ЭМБО.
10. Добавляют 25 мкл 0,5М ЕОТА в лунки с негативным контролем.
11. Добавляют 25 мкл 20 мкМ АТФ во все лунки. Инкубируют при встряхивании в течение 10 мин.
12. Останавливают реакцию добавлением 25 мкл 500 мМ ЕОТА (рН 8,0) во все лунки.
13. Промывают, как на стадии 4.
14. Добавляют 100 мкл НВР-коньюгированного анти-Р1уг, разведенного 1:6000 в буфере для разведения антитела, в каждую лунку. Инкубируют при встряхивании в течение 1 ч при комнатной температуре.
15. Промывают планшет 3х ТВБТ и 1х РВБ.
16. Добавляют 100 мкл раствора АВБТ в каждую лунку.
17. Если необходимо, останавливают развитие реакции добавлением 20 мкл 10% БОБ в каждую лунку.
18. Читают планшет на устройстве для чтения планшетов для ЕБ1БА с тест-фильтром при 410 нМ и эталонным фильтром при 630 нМ.
Биоанализ ЕСЕВ1.
Этот анализ используют для измерения киназной активности ш νίΙΐΌ ЕСЕ1-В методом ЕБ1БАанализа.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты для ЕЫБА Соз1аг (каталог Согшпд № 3369).
2. Ро1у(д1и, 1уг) (каталог Б1дта № Р0275).
3. РВБ (каталог С1Ысо № 450-1300ЕВ).
4. 50 мМ буферный раствор Нерез.
5. Блокирующий буфер (5% ВБА/РВБ).
6. Очищенная ОБТ-ЕОЕВ1 (БиСЕН 1пс.).
7. Буфер для разведения киназы: смешивают 500 мкл 1М Нерез (С1ВСО), 20 мкл 5% ВБА/РВБ, 10 мкл 100 мМ ортованадата натрия и 50 мкл 5М №С1.
8. 10 мМ АТФ.
9. АТФ/МпС12 смесь фосфорилирования: смешивают 20 мкл АТФ, 400 мкл 1М МпС12 и 9,56 мл бН2О.
10. 96-луночные У-донные полипропиленовые планшеты ΝΌΝΟ (Аррйей Бс1еп11Пс Са!а1од № АБ-72092).
11. 0,5М НОТА.
12. 0,05% ТВБТ. Добавляют 500 мкл Т\VЕЕN к 1 л ТВБ.
13. Кроличья поликлональная антифосфотирозиновая сыворотка (БиСЕХ 1пс.).
14. Пероксидазный конъюгат козьего антикроличьего 1дС (Вюзоигсе, номер по каталогу ΛΕΙ0404).
15. Раствор АВТБ.
16. Раствор АВТБ/Н2О2.
Методика
1. Покрывают 96-луночные планшеты Соз1аг для ЕБ1БА 1 мкг на лунку ро1у(д1и, 1уг) в 100 мкл РВБ. Хранят в течение ночи при 4°С.
2. Промывают покрытые планшеты 1 раз РВБ.
3. Добавляют 150 мкл 5% ВБА/РВБ блокирующего буфера в каждую лунку. Инкубируют, при встряхивании, в течение 1 ч при комнатной температуре.
4. Промывают планшет 2х РВБ, затем 1 раз 50 мМ Нерез. Похлопывают планшетами по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости и пузырьков.
5. Добавляют 25 мкл 0,4 мМ тестируемого соединения в 4% ЭМБО или один 4% ЭМБО (контроли) в планшет.
6. Разводят очищенную СБТ-ЕСЕВ1 в буфере для разведения киназы (5 нг киназы/50 мкл КЭВ/лунку).
7. Добавляют 50 мкл разбавленной киназы в каждую лунку.
8. Начинают киназную реакцию добавлением 25 мкл/лунку свежеприготовленного АТФ/Мп++ (0,4 мл 1М МпС12, 40 мкл 10 мМ АТФ, 9,56 мл бН2О), свежеприготовленный.
9. Это быстрая киназная реакция, и она должна быть остановлена 25 мкл 0,5М ЕЭТА подобным добавлению АТФ образом.
10. Промывают планшет 4х свежим ТВБТ.
- 57 007186
11. Готовят буфер для разведения антитела (αηΐίόοάν άί1ιιΙίοη ЬиГГег, ΑΌΒ): на 50 мл: смешивают 5 мл 5% Β8Α, 250 мкл 5% молока и 50 мкл 100 мМ ванадата натрия, доводят до конечного объема 0,05% ТВ8Т.
12. Добавляют 100 мкл на лунку антифосфотирозина (разведение 1:10000 в ΑΌΒ). Инкубируют, при встряхивании, в течение 1 ч при комнатной температуре.
13. Промывают, как на стадии 10.
14. Добавляют 100 мкл на лунку пероксидазного конъюгата козьего антикроличьего 1дС Βίοδοιιπχ (разведение 1:6000 в ΑΌΒ). Инкубируют, при встряхивании, в течение 1 ч при комнатной температуре.
15. Промывают, как на стадии 10, а затем РΒ8 для удаления пузырьков и избытка ТАЕЕН.
16. Добавляют 100 мкл раствора АВТ8/Н2О2 в каждую лунку.
17. Инкубируют, при встряхивании, в течение 10-20 мин. Удаляют любые пузырьки.
18. Считывают результаты анализа на устройстве Оупа1ес11 МК7000 для чтения планшетов для ЕБ18Л с тест-фильтром при 410 нМ и эталонным фильтром при 630 нМ.
Биоанализ ЕСЕК.
Этот анализ используют для киназной активности ЕСЕ1-К ίη νίίτο в Е^I8Α-анализе.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты для Е^I8Л ΕοΓηίη§.
2. 8ИМО1 моноклональное анти-ЕСЕК-антитело (8иСЕК, 1пс.).
3. РΒ8.
4. ТΒ8Т-буфер.
5. Блокирующий буфер: для 100 мл смешивают 5,0 г Сагпа1юп ΙηδΙηηί Νοη-ΕιΙ М11к® со 100 мл РΒ8.
6. Лизат клеток А431 (8иСЕК, 1пс.).
7. ТΒ8-буфер.
8. ΈΒ8 + 10% ОМ8О: для 1 л смешивают 1,514 г Трис, 2,192 г №1С1 и 25 мл ОМ8О; доводят до общего объема 1 л с помощью бН2О.
9. АТФ (аденозин-5'-трифосфат, из лошадиной мышцы, номер по каталогу 81дта Α-5394), 1,0 мМ раствор в бН2О. Этот реагент должен быть приготовлен непосредственно перед применением и храниться на льду.
10. 1,0 мМ МпС12.
11. Смесь фосфорилирования АТФ/МпС12: для приготовления 10 мл смешивают 300 мкл 1 мМ АТФ, 500 мкл МпС12 и 9,2 мл бН2О. Готовят непосредственно перед применением, хранят на льду.
12. 96-луночные У-донные полипропиленовые планшеты ΝϋΝΟ.
13. ЕМА.
14. Кроличья поликлональная антифосфотирозиновая сыворотка (8υСЕN, 1пс.).
15. Пероксидазный конъюгат козьего антикроличьего 1дС (номер по каталогу Βίοδοιιιτχ ΑΕΙ0404).
16. ΑΒΨ8.
17. 30% пероксид водорода.
18. ΑΒΊ^^^.
19. 0,2М НС1.
Методика
1. Покрывают 96-луночные планшеты для Е^I8Α ΕοΓηίη§ 0,5 мкг 8ИМО1 в 100 мкл РΒ8 на лунку, хранят в течение ночи при 4°С.
2. Удаляют несвязавшееся 8ИМО1 из лунок путем переворачивания планшета для удаления жидкости. Промывают 1х бН2О. Похлопывают планшетом по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости.
3. Добавляют 150 мкл блокирующего буфера в каждую лунку. Инкубируют при встряхивании в течение 30 мин при комнатной температуре.
4. Промывают планшеты 3х деионизированной водой, затем 1 раз 1^81/ Похлопывают планшетом по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости и пузырьков.
5. Разбавляют лизат РΒ8 (7 мкл лизата/100 мкл РΒ8).
6. Добавляют 100 мкл разбавленного лизата в каждую лунку. Встряхивают при комнатной температуре в течение 1 ч.
7. Промывают планшеты, как на стадии 4 выше.
8. Добавляют 120 мкл ΈΒ8 в планшеты для Е^I8Α, содержащие захваченный ЕСЕК.
9. Разбавляют тестируемое соединение в соотношении 1:10 в 'ΓΒ8, помещают в лунку.
10. Добавляют 13,5 мкл разбавленного тестируемого соединения в планшет для Е^I8Α. В контрольные лунки добавляют 13,5 мкл ΈΒ8 в 10% ОМ8О.
11. Инкубируют, при встряхивании, в течение 30 мин при комнатной температуре.
12. Добавляют 15 мкл смеси фосфорилирования во все лунки, за исключением лунок с негативным контролем. Конечный объем в лунке должен составлять приблизительно 150 мкл с конечной концентрацией АТФ/5 мМ МпС12 в каждой лунке, равной 3 мкМ. Инкубируют при встряхивании в течение 5 мин.
13. Останавливают реакцию добавлением 16,5 мкл раствора ЕОТА при встряхивании. Встряхивают в течение дополнительной минуты.
14. Промывают 4х деионизированной водой, 2х ТΒ8Т.
- 58 007186
15. Добавляют 100 мкл антифосфотирозина (разведение 1:3000 в ТВЗТ) на лунку. Инкубируют, при встряхивании, в течение 30-45 мин при комнатной температуре.
16. Промывают, как на стадии 4 выше.
17. Добавляют 100 мкл пероксидазного конъюгата козьего антикроличьего 1дС Вюкоигсе (разведение 1:2000 в ТВЗТ) в каждую лунку. Инкубируют, при встряхивании, в течение 30 мин при комнатной температуре.
18. Промывают, как на стадии 4 выше.
19. Добавляют 100 мкл раствора АВТ8/Н2О2 в каждую лунку.
20. Инкубируют 5-10 мин при встряхивании. Удаляют любые пузырьки.
21. Если необходимо, останавливают реакцию добавлением 100 мкл 0,2М НС1 на лунку.
22. Считывают результаты анализа на устройстве Эупа1ес11 М К.7000 для чтения планшетов для ЕБ18А: тест-фильтр - при 410 нМ, эталонный фильтр - при 630 нМ.
Биоанализ РИСЕК.
Этот анализ используют для киназной активности ЕСЕ1-К ίη νίίτο в ЕЬ1§А-анализе.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты для ЕЫ8А Согшпд.
2. 28И4С10 моноклональное анти-РЭСЕК-антитело (δυΟΕΝ, 1пс.).
3. РВЗ.
4. ТВЗТ-буфер.
5. Блокирующий буфер (такой же, как для биоанализа ЕСЕК).
6. Лизат ΝΙΗ 3Т3 клеток, экспрессирующих РЭСЕК-β (ШСЕН 1пс.).
7. ТВЗ-буфер.
8. ТВЗ+ 10% ИМ8О.
9. АТФ.
10. МпС12.
11. Киназная буферная смесь фосфорилирования: для 10 мл смешивают 250 мкл 1М Трис, 200 мкл 5М №С1, 100 мкл 1М МпС12 и 50 мкл 100 мМ Тритона Х-100 в достаточном количестве 6Н2О для приготовления 10 мл.
12. 96-луночные У-донные полипропиленовые планшеты ΝυΝΟ
13. Е11ТА.
14. Кроличья поликлональная антифосфотирозиновая сыворотка (ЗиСЕН 1пс.).
15. Пероксидазный конъюгат козьего антикроличьего 1дС (Вюкоигсе, номер по каталогу АЕ10404).
16. АВТЗ.
17. Пероксид водорода, 30% раствор.
18. АВТЗ/Н2О2.
19. 0,2 М НС1.
Методика
1. Покрывают 96-луночные планшеты для ЕБ18А Согшпд 0,5 мкг 28Э4С10 в 100 мкл РВЗ на лунку, хранят в течение ночи при 4°С.
2. Удаляют несвязавшееся 28И4С10 из лунок путем переворачивания планшета для удаления жидкости. Промывают 1х 6Н2О. Похлопывают планшетом по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости.
3. Добавляют 150 мкл блокирующего буфера в каждую лунку. Инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре при встряхивании.
4. Промывают планшеты 3х деионизированной водой, затем 1 раз ТВЗТ. Похлопывают планшетом по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости и пузырьков.
5. Разбавляют лизат НЫТС (10 мкл лизата/100 мкл НЫТС).
6. Добавляют 100 мкл разбавленного лизата в каждую лунку. Встряхивают при комнатной температуре в течение 60 мин.
7. Промывают планшеты, как описано на стадии 4.
8. Добавляют 80 мкл рабочей киназной буферной смеси в планшеты для ЕЬРЗА, содержащие захваченный РИСЕК.
9. Разбавляют тестируемое соединение в соотношении 1:10 в ТВЗ в 96-луночных полипропиленовых планшетах.
10. Добавляют 10 мкл разбавленного тестируемого соединения в планшет для ЕЫ8А. В контрольные лунки добавляют 10 мкл ТВЗ + 10% ЭМ8О. Инкубируют, при встряхивании, в течение 30 мин при комнатной температуре.
11. Добавляют 10 мкл АТФ непосредственно во все лунки, за исключением лунок с негативным контролем (конечный объем в лунке должен составлять приблизительно 100 мкл с 20 мкМ АТФ в каждой лунке). Инкубируют 30 мин при встряхивании.
12. Останавливают реакцию добавлением 10 мкл раствора ЕЭТА в каждую лунку.
13. Промывают 4х деионизированной водой, дважды - ТВЗТ.
- 59 007186
14. Добавляют 100 мкл антифосфотирозина (разведение 1:3000 в ТВ8Т) на лунку. Инкубируют, при встряхивании, в течение 30-45 мин при комнатной температуре.
15. Промывают, как на стадии 4.
16. Добавляют 100 мкл пероксидазного конъюгата козьего антикроличьего 1дО Β^οзοи^се (разведение 1:2000 в ТВ8Т) в каждую лунку. Инкубируют, при встряхивании, в течение 30 мин при комнатной температуре.
17. Промывают, как на стадии 4.
18. Добавляют 100 мкл раствора АВТ8/Н2О2 в каждую лунку.
19. Инкубируют 10-30 мин при встряхивании. Удаляют любые пузырьки.
20. Если необходимо, останавливают реакцию добавлением 100 мкл 0,2 М НС1 на лунку.
21. Считывают результаты анализа на устройстве для чтения планшетов для ЕЫ8Л Эупа1есН МВ7000 с тест-фильтром при 410 нМ и эталонным фильтром - при 630 нМ.
Анализ клеточной НЕВ-2 киназы.
Этот анализ используют для измерения киназной активности НЕВ-2 в целых клетках в формате ЕЬ18А. Материалы и реагенты
1. БМЕМ (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла) (О1ВСО, номер по каталогу 11965-092).
2. Фетальная бычья сыворотка (БВ8, номер по каталогу О1ВСО 16000-044), термоинактивированная в водяной бане в течение 30 мин при 56°С.
3. Трипсин (О1ВСО, номер по каталогу 25200-056).
4. Ь-Глутамин (О1ВСО, номер по каталогу 25030-081).
5. НЕРЕ8 (О1ВСО, номер по каталогу 15630-080).
6. Ростовая среда. Смешивают 500 мл БМЕМ, 55 мл термоинактивированной БВ8, 10 мл НЕРЕ8 и
5,5 мл Ь-глютамина.
7. Голодная среда. Смешивают 500 мл БМЕМ, 2,5 мл термоинактивированной БВ8, 10 мл НЕРЕ8 и
5,5 мл Ь-глютамина.
8. РВ8.
9. Плоскодонные 96-луночные микротитрационные планшеты для культуры тканей (ΕοΓηίη§, номер по каталогу 25860).
10. 15 см чашки для культуры тканей (Οοτηίη^, номер по каталогу 08757148).
11. 96-луночные планшеты для ЕЫ8А ί,’οΓηίηβ.
12. 96-луночные У-донные полипропиленовые планшеты ΝϋΝΟ.
13. Картриджи переноса Соз1аг для ТгамзЮг 96 (Сοзίа^, номер по каталогу 7610).
14. 8ИМО1: моноклональное анти-ЕОБВ-антитело (8ЬСЕ№ 1пс.).
15. ТВ8Т-буфер.
16. Блокирующий буфер: 5% Сата1юг1 Iη5ίаηί М11к® в РВ8.
17. ЕОБ лиганд: ЕОБ-201, 81ιίη1<ο Атенсам, Ειρηη.
Суспендируют порошок в 100 мкл 10 мМ НС1. Добавляют 100 мкл мМ №ЮН. Добавляют 800 мкл РВ8 и переносят в пробирки Ерреηάο^Γ. хранят при -20°С до тех пор, пока не будет готово к применению.
18. НЭТО-буфер для лизиса. Для исходного 5х НЭТО смешивают 23,83 г Нерез, 43,83 г №С1, 500 мл глицерина, 100 мл Тритона Х-100 и достаточное количество дН2О для приготовления 1 л общего раствора. Для 1х Н№ГО* смешивают 2 мл НЭТО, 100 мкл 0,1М №3УО4, 250 мкл 0,2М Nа4Р2Ο7 и 100 мкл ЕЬТА.
19. НОТА.
20. №3УО4. Для приготовления исходного раствора смешивают 1,84 г №3УО4 с 90 мл άΗ2Ο. Подводят рН до 10. Варят в микроволновой печи в течение 1 мин (раствор становится прозрачным). Охлаждают до комнатной температуры. Подводят рН до 10. Повторяют цикл нагревания/охлаждения до тех пор, пока рН не останется на 10.
21. 200 мМ №1.-|Р2О-.
22. Кроличья поликлональная антисыворотка, специфичная к фосфотирозину (анти-Р1уг-антитело, 8ИОЕН 1пс.).
23. Афинноочищенная антисыворотка, антитело, представляющее собой козий антикроличий 1дО, пероксидазный конъюгат (Β^οзοи^се, номер по каталогу АЫ0404).
24. АВТ8 раствор.
25. 30% раствор пероксида водорода.
26. АВТ8/Н2О2.
27. 0,2М НС1.
Методика
1. Покрывают 96-луночные планшеты для ЕЫ8А ί.'οΓηίη§ 8ИМО1 в концентрации 1,0 мкг на лунку в РВ8, 100 мкл конечный объем/лунку. Хранят в течение ночи при 4°С.
2. В день применения удаляют покрывающий буфер и промывают планшеты 3 раза άΗ2Ο и 1 раз ТВ8Т-буфером. Все промывки в этом анализе должны быть сделаны этим способом, если не указано иначе.
- 60 007186
3. Добавляют 100 мкл блокирующего буфера в каждую лунку. Инкубируют планшет, при встряхивании, в течение 30 мин при комнатной температуре. Непосредственно перед применением планшет промывают.
4. Используют ΕΟΕγ/ΗΕΚ-2 химера/3Т3-С7 клеточную линию для этого анализа.
5. Выбирают чашки, имеющие 80-90% конфлюенцию. Собирают клетки путем трипсинизации и центрифугирования при 1000 об./мин при комнатной температуре в течение 5 мин.
6. Ресуспендируют клетки в голодной среде и подсчитывают с помощью триптанового синего. Необходима жизнеспособность выше 90%. Высевают клетки в голодную среду с плотностью 2500 клеток на лунку, 90 мкл на лунку, в 96-луночном микротитрационном планшете. Инкубируют высеянные клетки в течение ночи при 37° в атмосфере 5% СО2.
7. Начинают анализ через 2 дня после посева.
8. Тестируемые соединения растворяют в 4% ΌΜ8Ο. Образцы затем дополнительно разводят непосредственно на планшетах голодной ΌΜΕΜ. Обычно это разведение должно быть 1:10 или больше. Все лунки затем переносят на клеточный планшет в дополнительном разведении 1:10, 10 мкл образца и среды в 90 мкл голодной среды. Конечная концентрация ΌΜ8Ο должна быть 1% или ниже. Стандартное серийное разведение может также быть использовано.
9. Инкубируют в атмосфере 5% Ο’Ο2 при 37°С в течение 2 ч.
10. Готовят ΕΟΕ лиганд путем разведения исходного ΕΟΕ (16,5 мкМ) в теплой ΌΜΕΜ до 150 нМ.
11. Готовят свежий ΗΝΤΟ* в количестве, достаточном для 100 мкл на лунку, помещают на лед.
12. Через 2 ч инкубации с тестируемым соединением добавляют приготовленный ΕΟΕ лиганд к клеткам, 50 мкл на лунку, для конечной концентрации 50 нМ. Лунки с позитивным контролем получают то же самое количество ΕΟΕ. Негативные контроли не получают ΕΟΕ. Инкубируют при 37°С в течение 10 мин.
13. Удаляют тестируемое соединение, ΕΟΕ и ΌΜΕΜ. Промывают клетки 1 раз ΡΒδ.
14. Переносят ΗΝΤΟ* к клеткам, 100 мкл на лунку. Помещают на лед на 5 мин. Тем временем удаляют блокирующий буфер из планшета для ΕΌΙδΑ и промывают.
15. Соскабливают клетки с планшета с помощью микропипетки и гомогенизируют клеточный материал путем повторяющегося отсасывания и диспергирования НЫТС*-буфера для лизиса. Переносят лизат в сенсибилизированные, блокированные, промытые планшеты для ΕΌΙ8Α. Либо используют картридж переноса Со§1ат для переноса лизата на планшет.
16. Инкубируют, при встряхивании, при комнатной температуре в течение 1 ч.
17. Удаляют лизат, промывают. Переносят свежеразведенное анти-Р1уг-антитело (1:3000 в ΤΒδΤ) на планшет для ΕΌΙδΑ, 100 мкл на лунку.
18. Инкубируют, при встряхивании, при комнатной температуре в течение 30 мин.
19. Удаляют анти-Р1уг-антитело, промывают. Переносят свежеразведенное антитело ΒΙΟδΟΗΚΟΕ на планшет для ΕΌΙ8Α (1:8000 в ΤΒδΤ, 100 мкл на лунку).
20. Инкубируют, при встряхивании, при комнатной температуре в течение 30 мин.
21. Удаляют антитело ΒΙΟδΟΗΚΟΕ, промывают. Переносят свежеприготовленный раствор ΑΒΤδ/Η2Ο2 на планшет для ΕΌΙδΑ, 100 мкл на лунку.
22. Инкубируют, при встряхивании, в течение 5-10 мин. Удаляют любые пузырьки.
23. Останавливают реакцию добавлением 100 мкл 0,2 М ΗΟ1 на лунку.
24. Считывают результаты анализа на устройстве ЭупаЮсН ΜΚ7000 для чтения планшетов для ΕΌΙ8Α с тест-фильтром, установленным при 410 нМ, и эталонным фильтром - при 630 нМ.
Анализ СОК2/циклина А.
Этот анализ используют для измерения ίη νίίτο серин/треонинкиназной активности с4к2/циклина А человека в анализе сцинтилляционной близости (δΡΑ).
Материалы и реагенты
1. 96-луночные полиэтилентерефталатные (гибкие) планшеты Аа11ас (номер по каталогу Аа11ас 1450-401).
2. ЛтсгхНат КсШтис [γ33Ρ] АТФ (номер АН 9968 по каталогу ЛтсгхНат).
3. Покрытые стрептавидином поливинилтолуоловые δΡΑ-гранулы Απ-κιέΙ!;·!!!'! (номер ΚΡΝφ0007 по каталогу Αтс^8Ьат). Гранулы должны быть разведены в ΡΒδ без магния или кальция, в концентрации 20 мг/мл.
4. Активированный ферментный комплекс с4к2/циклин А, очищенный из 8Г9 клеток (δυΟΕΝ, Шс.).
5. Биотинилированный пептидный субстрат (НсЬНЦс). Пептид биотин-Х-ΡΚΤΡΚΚΑΚΚ^ растворяют в άΗ2Ο в концентрации 5 мг/мл.
6. Смесь пептид/АТФ: для 10 мл смешивают 9,979 мл άΗ2Ο, 0,00125 мл холодной АТФ, 0,010 мл ЭсЫШс и 0,010 мл γ33Ρ АТФ. Конечная концентрация на лунку должна составлять 0,5 мкМ холодной АТФ, 0,1 мкг ОсЫ14с и 0,2 мкКи γ33Ρ АТФ.
7. Киназный буфер: для 10 мл смешивают 8,85 мл άΗ2Ο, 0,625 мл Трис (рН 7,4), 0,25 мл 1М Μ§Ο12, 0,25 мл 10% ΝΡ40 и 0,025 мл 1М ΌΤΤ, добавленного свежим непосредственно перед применением.
8. 10 мМ АТФ в 4Η2Ο.
9. 1М Трис, рН подводят до 7,4 с помощью ΗΟ1.
10. 1М Μ§Ο12·
- 61 007186
11. 1М ΌΓΓ.
12. РВ8 (номер по каталогу 61Ьсо 14190-144).
13. 0,5М ЕЭТА.
14. Стоп-раствор: для 10 мл смешивают 9,25 мл РВ8, 0,005 мл 100 мМ АТФ, 0,1 мл 0,5М ИОТА, 0,1 мл 10% Тритона Х-100 и 1,25 мл 20 мг/мл 8РА-гранул.
Методика
1. Готовят растворы тестируемых соединений в 5% ЭМ8О в концентрации 5х желаемой конечной концентрации. Добавляют 10 мкл в каждую лунку. В качестве негативных контролей используют 10 мкл одного 5% ЭМ8О в лунках.
2. Разбавляют 5 мкл раствора сбк2/циклина А 2,1 мл 2х киназного буфера.
3. Добавляют 20 мкл фермента в каждую лунку.
4. Добавляют 10 мкл 0,5 М ЕЭТА в лунки с негативным контролем.
5. Чтобы запустить киназную реакцию, добавляют 20 мкл смеси пептид/АТФ в каждую лунку. Инкубируют в течение 1 ч без встряхивания.
6. Добавляют 200 мкл стоп-раствора в каждую лунку.
7. Выдерживают по меньшей мере 10 мин.
8. Центрифугируют планшет при 2300 об./мин в течение 3-5 мин.
9. Считывают планшет с использованием ТгПих или аналогичного устройства для чтения планшетов.
Анализ МЕТ(метионин)-трансфосфорилирования.
Этот анализ используют для измерения уровней фосфотирозина на поли(глутаминовая кислота:тирозин (4:1)) субстрате как средство идентификации агонистов/антагонистов те!-трансфосфорилирования субстрата.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты Согшпд для ЕЫ8А, номер по каталогу Согшпд 25805-96.
2. Ро1у(д1и, Гуг) 4:1, 81дта, номер по каталогу Р 0275.
3. РВ8, номер по каталогу 61Ьсо 450-1300ЕВ.
4. 50 мМ НЕРЕ8.
5. Блокирующий буфер: растворяют 25 г бычьего сывороточного альбумина, номер по каталогу 81дта А-7888, в 500 мл РВ8, фильтруют через 4 мкм фильтр.
6. Очищенный 68Т(глутатион-8-1рансфераза)-слитый белок, содержащий Ме!-киназный домен, 8идеп, 1пс.
7. ТВ8Т-буфер.
8. 10% водный (МИНОие Н2О) ЭМ8О.
9. 10 мМ водный (бН2О) аденозин-5'-трифосфат, номер по каталогу 81дта А-5394.
10. 2х буфер для разведения киназы: для 100 мл смешивают 10 мл 1М НЕРЕ8, рН 7,5, с 0,4 мл 5% В8А/РВ8, 0,2 мл 0,1М ортованадата натрия и 1 мл 5М хлорида натрия в 88,4 мл бН2О.
11. 4хАТФ реакционная смесь: для 10 мл смешивают 0,4 мл 1 М хлорида марганца и 0,02 мл 0,1М АТФ в 9,56 мл бН2О.
12. 4х смесь негативных контролей: для 10 мл смешивают 0,4 мл 1М хлорида марганца в 9,6 мл бН2О.
13. 96-луночные У-донные полипропиленовые планшеты ΝυΝΟ № 8-72092 в АррНеб 8с1епНПс Са!а1од.
14. 500 мМ ЕЭТА.
15. Буфер для разведения антитела: для 100 мл смешивают 10 мл 5% В8А/РВ8, 0,5 мл 5% Сагпабоп 1пк!ап! Мбк® в РВ8 и 0,1 мл 0,1М ортованадата натрия в 88,4 мл ТВ8Т.
16. Кроличье поликлональное антифосфотирозиновое антитело, 8идеп, 1пс.
17. Козье антикроличье антитело, коньюгированное с пероксидазой хрена, Вюкоигсе, 1пс.
18. АВТ8 раствор: для 1 л смешивают 19,21 г лимонной кислоты, 35,49 г Ыа2НРО4 и 500 мг АВТ8 с достаточным для приготовления 1 л количеством бН2О.
19. АВТ8/Н2О2: смешивают 15 мл АВ8Т раствора с 2 мкл Н2О2 за 5 мин до использования.
20. 0,2М НС1.
Методика
1. Покрывают планшеты для ЕБ18А 2 мкг ро1у(д1и, !уг) в 100 мкл РВ8, хранят в течение ночи при 4°С.
2. Блокируют планшеты 150 мкл 5% В8А/РВ8 в течение 60 мин.
3. Промывают планшет дважды РВ8 и 1 раз 50 мМ буфером Нерек, рН 7,4.
4. Добавляют 50 мкл разведенной киназы во все лунки. (Очищенную киназу разводят буфером для разведения киназы. Конечная концентрация должна составлять 10 нг/лунку.)
5. Добавляют 25 мкл тестируемого соединения (в 4% ЭМ8О) либо только ЭМ8О (4% в бН2О) - для контролей - в планшет.
6. Инкубируют смесь киназы и соединения в течение 15 мин.
7. Добавляют 25 мкл 40 мМ МпС12 в лунки с негативным контролем.
8. Добавляют 25 мкл смеси АТФ/МпС12 во все остальные лунки (за исключением негативных контролей). Инкубируют в течение 5 мин.
9. Добавляют 25 мкл 500 мМ ЕЭТА для остановки реакции.
10. Промывают планшет ТВ8Т 3х.
- 62 007186
11. Добавляют 100 мкл кроличьего поликлонального анти-РКг разведенного в соотношении 1:10000 буфером для разведения антитела, в каждую лунку. Инкубируют, при встряхивании, при комнатной температуре в течение 1 ч.
12. Промывают планшет ТВ8Т 3х.
13. Разводят НКР-коньюгированное антикроличье антитело Вюкоитсе буфером для разведения антитела в соотношении 1:6000. Добавляют 100 мкл на лунку и инкубируют при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 ч.
14. Промывают планшет 1х РВ8.
15. Добавляют 100 мкл раствора АВТ8/Н2О2 в каждую лунку.
16. Если необходимо, останавливают развитие реакции добавлением 100 мкл 0,2 М НС1 на лунку.
17. Прочитывают планшет на устройстве Эупа1ес11 МК7000 для чтения планшетов для ЕЫ8А с тестфильтром при 410 нМ и эталонным фильтром при 630 нМ.
Анализ 1СР-1-трансфосфорилирования.
Этот анализ используют для измерения уровня фосфотирозина в поли(глутаминовая кислота:тирозин (4:1)) для идентификации агонистов/антагонистов - 1СР-1 - трансфосфорилирования субстрата.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты Сотшпд для ЕЫ8А.
2. Ро1у(д1и, 1уг) (4:1), 81дта, номер по каталогу Р 0275.
3. РВ8, номер по каталогу С1Ьсо 450-1300ЕВ.
4. 50 мМ НЕРЕ8.
5. Блокирующий буфер ТВВ: для 1 л смешивают 100 г В8А, 12,1 г Трис (рН 7,5), 58,44 г хлорида натрия и 10 мл 1% Т\УЕЕХ-20.
6. Очищенный С8Т-слитой белок, содержащий 1СР-1-киназный домен (8идеп, 1пс.).
7. ТВ8Т буфер: для 1 л смешивают 6,057 г Трис, 8,766 г хлорида натрия и 0,5 мл Т\УЕЕХ-20 с достаточным для приготовления 1 л количеством йН2О.
8. 4% ЭМ8О в М1Ш-9 Н2О.
9. 10 мМ АТФ в йН2О.
10. 2х буфер для разведения киназы: для 100 мл смешивают 10 мл 1М НЕРЕ8 (рН 7,5), 0,4 мл 5% В8А в йН2О, 0,2 мл 0,1М ортованадата натрия и 1 мл 5М хлорида натрия с достаточным для приготовления 100 мл количеством йН2О.
11. 4х АТФ реакционная смесь: для 10 мл смешивают 0,4 мл 1М МпС12, 0,008 мл 0,01М АТФ и 9,56 мл йН2О.
12. Смесь 4х негативных контролей: смешивают 0,4 мл 1М хлорида марганца в 9,60 мл йН2О.
13. 96-луночные У-донные полипропиленовые планшеты ΝϋΝΤ.
14. 500 мМ ЕЭТА в йН2О.
15. Буфер для разведения антитела: для 100 мл смешивают 10 мл 5% В8А в РВ8, 0,5 мл 5% Сатпайоп 1пйап1 Хоп-Га1 М11к® в РВ8 и 0,1 мл 0,1М ортованадата натрия в 88,4 мл ТВ8Т.
16. Кроличье поликлональное антифосфотирозиновое антитело, 8ИСЕХ, 1пс.
17. Козье антикроличье антитело, коньюгированное с пероксидазой хрена (НКР), Вюкоитсе.
18. АВТ8-раствор.
20. АВТ8/Н2О2: смешивают 15 мл АВТ8-раствора с 2 мкл Н2О2 за 5 мин до использования.
21. 0,2М НС1 в йН2О.
Методика
1. Покрывают планшет для ЕЫ8А 2 мкг/лунку ро1у(д1и, 1уг) с соотношением 4:1 (81дта Р0275) в 100 мкл РВ8, хранят планшет в течение ночи при 4°С.
2. Промывают планшет 1 раз РВ8.
3. Добавляют 100 мкл блокирующего буфера ТВВ в каждую лунку. Инкубируют планшет в течение 1 ч при встряхивании при комнатной температуре.
4. Промывают планшет 1 раз РВ8, затем дважды 50 мМ буфером Нерек, рН 7,5.
5. Добавляют 25 мкл тестируемого соединения в 4% ЭМ8О (полученного путем разведения исходного 10 мМ раствора тестируемого соединения в 100% ЭМ8О добавлением йН2О) в планшет.
6. Во все лунки добавляют 10,0 нг дй - 1СР-1 - киназы в 50 мкл буфера для разведения киназы.
7. Запускают киназную реакцию добавлением 25 мкл 4х АТФ реакционной смеси во все тестируемые лунки и лунки с позитивный контролем. Добавляют 25 мкл смеси 4х негативных контролей во все лунки негативного контроля. Инкубируют в течение 10 мин при встряхивании при комнатной температуре.
8. Добавляют 25 мкл 0,5 ЕЭТА (рН 8,0) во все лунки.
9. Промывают планшет 4х ТВ8Т буфером.
10. Добавляют кроличью поликлональную антифосфотирозиновую антисыворотку в разведении 1:10000 в 100 мкл буфера для разведения антитела во все лунки. Инкубируют, при встряхивании, при комнатной температуре в течение 1 ч.
11. Промывают планшет, как на стадии 9.
- 63 007186
12. Добавляют 100 мкл антикроличьего антитела-НКР Вюкоитсе в разведении 1: 10000 в буфере для разведения антитела во все лунки. Инкубируют, при встряхивании, при комнатной температуре в течение 1 ч.
13. Промывают планшет, как на стадии 9, с последующей одной промывкой РВЗ для уменьшения количества пузырьков и избытка Ттеееи-20.
14. Проявляют добавлением 100 мкл/лунку АВТЗ/Н2О2 в каждую лунку.
15. Примерно через 5 мин прочитывают на устройстве для чтения планшетов для ЕЬ13А с тестфильтром при 410 нМ и эталонным фильтром при 630 нМ.
Анализы включения ВКОИ (5-бромдезоксиуридина).
В следующих анализах используют клетки, полученные инженерным путем, которые экспрессиют выбранный рецептор, и затем оценивают эффект интересующего соединения на активность лигандиндуцированного синтеза ДНК путем определения включения ВтйИ в ДНК.
Следующие материалы, реагенты и методики являются общими для каждого из следующих анализов включения ВтйИ. Вариации в конкретных анализах отмечены.
Материалы и реагенты
1. Соответствующий лиганд.
2. Соответствующие клетки, полученные инженерным путем.
3. ВтйИ-метящий реагент: 10 мМ в РВЗ (рН 7,4) (Воейтшдет Маиийет, Сегтапу).
4. ИхОепа!: фиксирующий раствор (готовый к применению) (Воейппдег МаппНепп. Сегтапу).
5. Анти-Вгби-РОЭ: мышиное моноклональное антитело, коньюгированное с пероксидазой (Воейгшдег Маппйе1т, Сегтапу).
6. Субстратный раствор ТМВ: тетраметилбензидин (ТМВ, Воейгшдег Маппйе1т, Сегтапу).
7. РВЗ промывочный раствор: 1х РВЗ, рН 7,4.
8. Альбумин, бычий (ВЗА), фракция V порошка (З1дта Сйет1са1 Со., ИЗА).
Общая методика
1. Клетки высевают в концентрации 8000 клеток/лунку в 10% СЗ, 2 мМ С1п в ΌΜΕΜ, в 96-луночном планшете. Клетки инкубируют в течение ночи при 37°С в 5% СО2.
2. Через 24 ч клетки промывают РВЗ, а затем подвергают сывороточному голоданию в среде без сыворотки (0% СЗ ΌΜΕΜ с 0,1% ВЗА) в течение 24 ч.
3. На 3 сутки соответствующий лиганд и тестируемое соединение добавляют к клеткам одновременно. Лунки с негативным контролем получают ΌΜΕΜ, свободную от сыворотки, только с 0,1% ВЗА; клетки, представляющие собой позитивный контроль, получают лиганд, но не получают тестируемого соединения. Тестируемые соединения готовят в ΌΜΕΜ, свободной от сыворотки, с лигандом, в 96-луночном планшете, и серийно разводят с получением 7 тестируемых концентраций.
4. Через 18 ч активации лиганда добавляют разведенный ВгбИ-метящий реагент (1:100 в ΌΜΕΜ, 0,1% ВЗА) и клетки инкубируют с ВгбИ (конечная концентрация=10 мкМ) в течение 1,5 ч.
5. После инкубации с метящим реагентом среду удаляют путем декантирования и похлопывания перевернутым планшетом по бумажному полотенцу. Добавляют раствор ИхОепа! (50 мкл/лунку) и планшеты инкубируют при комнатной температуре в течение 45 мин на шейкере для планшетов.
6. ИхОепа! раствор тщательно удаляют путем декантирования и постукивания перевернутым планшетом по бумажному полотенцу. Добавляют молоко (5% дегидратированное молоко в РВЗ, 200 мкл/лунку) в качестве блокирующего раствора и планшет инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре на шейкере для планшетов.
7. Блокирующий раствор удаляют путем декантирования и лунки промывают 1 раз РВЗ. Раствор анти-Вгби-ΡΟΌ (разведение 1:200 в РВЗ, 1 % ВЗА) добавляют (50 мкл/лунку) и планшет инкубируют в течение 90 мин при комнатной температуре на шейкере для планшетов.
8. Конъюгат антитела тщательно удаляют путем декантирования и промывания лунок 5 раз РВЗ и планшет сушат путем переворачивания и постукивания по бумажному полотенцу.
9. Субстратный раствор ТМВ добавляют (100 мкл/лунку) и инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре на шейкере для планшетов до тех пор, пока развитие окрашивания не будет достаточным для фотометрического обнаружения.
10. Оптическую плотность образцов измеряют при 410 нм (в режиме двойной длины волны с фильтром, считывающим при 490 нм, в качестве эталонной длины волны) на устройстве Оупа1ес11 для чтения планшетов для ΕΒ^Λ.
Анализ ΕСΕ-индуцированного включения ВгбИ.
Материалы и реагенты
1. Мышиный ΕСΕ, 201 (ТоуоЬо Со., ЬЙ., 1арап).
2. 3Т3ЖСЕКс7.
- 64 007186
Анализ ЕСЕ-индуцированного Нег-2-управляемого включения ВгйИ.
Материалы и реагенты
1. Мышиный ЕСЕ, 201 (ТоуоЫо Со., Ь!й., 1арап).
2. 3Т3/ЕСЕг/Нег2/ЕСЕг (ЕСЕг с Нег-2-киназным доменом).
Анализ ЕСЕ-индуцированного Нег-4-управляемого включения ВгйИ.
Материалы и реагенты
1. Мышиный ЕСЕ, 201 (ТоуоЫо Со., Ь!й., 1арап).
2. 3Т3/ЕСЕг/Нег4/ЕСЕг (ЕСЕг с Нег-4-киназным доменом).
Анализ РОСЕ-индуцированного включения ВгйИ.
Материалы и реагенты
1. Человеческий РОСЕ В/В (Воейппдег МаппЕет, Сегтапу).
2. 3Т3/ЕСЕВс7.
Анализ ЕСЕ-индуцированного включения ВгйИ.
Материалы и реагенты
1. Человеческий ЕСЕ2/ЫЕСЕ (С1Ысо ВВЬ, ИБА).
2. 3Т3с7/ЕСЕг.
Анализ 1СЕ1-индуцированного включения ВгйИ.
Материалы и реагенты
1. Человеческий рекомбинантный (С511, Рготеда Согр., ИБА).
2. 3Т3/1СЕ1Г.
Анализ инсулин-индуцированного включения ВгйИ.
Материалы и реагенты
1. Инсулин, кристаллический, бычий, цинк (13007, С1Ысо ВВЬ, ИБА).
2. 3Т3/Н25.
Анализ НСЕ (фактор роста гепатоцитов)-индуцированного включения ВгйИ.
Материалы и реагенты
1. Рекомбинантный человеческий НСЕ (номер по каталогу 249-НС, В&Э Буз!етз, 1пс. ИБА).
2. ВхРС-3 клетки (АТСС СВЬ-1687).
Методика
1. Клетки высевают в концентрации 9000 клеток/лунку в среде ВРМ1, содержащей 10% ЕВБ, в 96луночном планшете. Клетки инкубируют в течение ночи при 37°С в 5% СО2.
2. Через 24 ч клетки промывают РВБ, а затем подвергают сывороточному голоданию в 100 мкл среде, свободной от сыворотки, (ВРМ1 с 0,1% ВБА) в течение 24 ч.
3. На 3 сутки 25 мкл, содержащие лиганд (приготовленный в концентрации 1 мкг/мл в ВРМ1, содержащей 0,1% ВБА; конечная концентрация НСЕ составляет 200 нг/мл) и тестируемые соединения, добавляют к клеткам. Лунки с негативным контролем получают 25 мкл ВРМ1, свободной от сыворотки и содержащей только 0,1% ВБА; клетки, представляющие собой позитивный контроль, получают лиганд (НСЕ), но не получают тестируемого соединения. Тестируемые соединения готовят в 5-кратной от конечной концентрации в свободной от сыворотки ВРМ1 с лигандом, в 96-луночном планшете, и серийно разводят с получением 7 тестируемых концентраций. Обычно самая высокая конечная концентрация тестируемого соединения составляет 100 мкМ, и используют разведения 1:3 (то есть диапазон конечной концентрации тестируемого соединения составляет 0,137-100 мкМ).
4. Через 18 ч активации лиганда 12,5 мкл разведенного ВгйИ-метящего реагента (1:100 в ВРМ1, 0,1% ВБА) добавляют в каждую лунку и клетки инкубируют с ВгйИ (конечная концентрация составляет 10 мкМ) в течение 1 ч.
5. Так же, как в общей методике.
6. Так же, как в общей методике.
7. Блокирующий раствор удаляют путем декантирования и лунки промывают 1 раз РВБ. Раствор анти-ВМИ-РОО (разведение 1:100 в РВБ, 1 % ВБА) добавляют (100 мкл/лунку) и планшет инкубируют в течение 90 мин при комнатной температуре на шейкере для планшетов.
8. Так же, как в общей методике.
9. Так же, как в общей методике.
10. Так же, как в общей методике.
- 65 007186
Анализ НИУ-ЕС-С.
Этот анализ используют для измерения активности соединения против РИСЕ-К, ЕСЕ-К, УЕСЕ, аЕСЕ или Е1к-1/КЭК, все из которых естественным образом экспрессируются НИУ-ЕС клетками.
Сутки 0.
1. Промывают и трипсинизируют клетки НИУ-ЕС-С (человеческие эндотелиальные клетки пупочной вены (Американская коллекция типовых культур, номер по каталогу 1730 СКИ)). Промывают физиологическим раствором, забуференным фосфатом Дульбекко (Ό-РВБ, получен от С1Ьсо ВКИ, номер по каталогу 14190-029), 2 раза в количестве примерно 1 мл/10 см2 колбы для культивирования тканей. Трипсинизируют 0,05% трипсин-ЕИТА в неферментативном растворе клеточной диссоциации (Бщта СЕетюа1 Сотрапу, номер по каталогу С-1544). 0,05% Трипсин готовят разведением 0,25% трипсина/1 мМ ЕИТА (С1Ьсо, номер по каталогу 25200-049) в растворе клеточной диссоциации. Трипсинизируют примерно 1 мл/25-30 см2 колбы для культивирования тканей в течение примерно 5 мин при 37°С. После того как клетки отделились от колбы, добавляют равный объем среды для анализа и переносят в 50 мл стерильную центрифужную пробирку (Е1кЕег БаеШШс, номер по каталогу 05-539-6).
2. Промывают клетки примерно 35 мл среды для анализа в 50 мл стерильной центрифужной пробирке путем добавления среды для анализа, центрифугируют в течение 10 мин при приблизительно 200х д, отсасывают супернатант и ресуспендируют в 35 мл Ό-РВБ. Повторяют промывку Ό-РВБ еще 2 раза, ресуспендируют клетки примерно в 1 мл среды для анализа/15 см2 колбы для культивирования тканей. Среда для анализа состоит из среды Е12К (С1Ьсо ВКИ, номер по каталогу 21127-014) и 0,5% термоинактивированной фетальной телячьей сыворотки. Подсчитывают клетки с помощью СоиЕег Соийег® (СоиЕег Е1ес1гоп1ск, 1пс.) и добавляют среду для анализа к клеткам для достижения концентрации 0,8-1,0х105 клеток/мл.
3. Клетки добавляют в плашки 96-луночных плоскодонных планшетов в концентрации 100 мкл/лунку или 0,8-1,0х104 клеток/лунку, инкубируют ~24 ч при 37°С, 5% СО2.
Сутки 1.
1. Делают двухкратные титрования тестируемого соединения в отдельных 96-луночных планшетах, обычно от 50 до 0 мкМ. Используют ту же самую среду для анализа, которая упомянута для суток 0, стадии 2, выше. Титрования делают путем добавления 90 мкл/лунку тестируемого соединения в концентрации 200 мкМ (4х-кратная конечная концентрация в лунке) в верхнюю лунку отдельной колонки планшета. Поскольку исходный раствор тестируемого соединения составляет обычно 20 мМ в ИМБО, 200 мкМ концентрация лекарства содержит 2% ИМБО.
Разбавитель, добавленный к 2% ИМБО в среде для анализа (Е12К + 0,5% фетальная телячья сыворотка), используют в качестве разбавителя для титровании тестируемого соединения, для того чтобы разбавить тестируемое соединение, но сохранить концентрацию ИМБО постоянной. Добавляют этот разбавитель в оставшиеся лунки в колонке в количестве 60 мкл/лунку. Отбирают 60 мкл из 120 мкл 200 мкМ-разведения тестируемого соединения в верхней лунке колонки и смешивают с 60 мкл во второй лунке колонки. Отбирают 60 мкл из этой лунки и смешивают с 60 мкл в третьей лунке этой колонки, и так далее до тех пор, пока двухкратные титрования не будут завершены. Когда предпоследнюю лунку смешивают, отбирают 60 мкл из 120 мкл в этой лунке и отбрасывают их. Последнюю лунку оставляют с 60 мкл разбавителя ИМБО/среда в качестве контроля, не содержащего тестируемого соединения. Готовят 9 колонок раститрованного тестируемого соединения, достаточных для трехкратных лунок для каждого из: (1) УЕСЕ (полученный от Рерго ТесН 1пс., номер по каталогу 100-200), (2) фактора роста эндотелиальных клеток (ЕССЕ) (также известный как кислотный фактор роста фибробластов, или аЕСЕ) (полученный от ВоеЕппдег МаппНепп ВюсЕетюа, номер по каталогу 1439 600), либо (3) человеческого РИСЕ В/В (1276-956, ВоеЕппдег МаппЕеш, Сегтапу) и контроля среды для анализа. ЕССЕ поступает в виде препарата с гепарином натрия.
2. Переносят 50 мкл/лунку разведении тестируемого соединения в 96-луночные планшеты для анализа, содержащие 0,8-1,0х104 клеток/100 мкл/лунку клеток НИУ-ЕС-С из суток 0 и инкубируют ~2 ч при 37°С, 5% СО2.
3. В трех параллелях добавляют 50 мкл/лунку 80 мкг/мл УЕСЕ, 20 нг/мл ЕССЕ или контрольной среды в тестируемое соединение в каждых условиях. Как и в отношении тестируемых соединений, концентрации фактора роста представляют собой четырехкратные от желаемой конечной концентрации. Используют среду для анализа из суток 0, стадии 2, для приготовления концентраций факторов роста. Инкубируют приблизительно 24 ч при 37°С, 5% СО2. Каждая лунка будет содержать 50 мкл разведения тестируемого соединения, 50 мкл фактора роста или среды и 100 мкл клеток, что достигает в сумме 200 мкл/лунку. Таким образом, четырехкратные концентрации тестируемого соединения и факторов роста становятся однократными, как только все компоненты будут добавлены в лунки.
Сутки 2.
1. Добавляют 3Н-тимидин (АтегкЕат, номер по каталогу ТКК-686) в концентрации 1 мкКи/лунку (10 мкл/лунку раствора 100 мкКи/мл, приготовленного в среде КРМ1, + 10% термоинактивированная фетальная телячья сыворотка) и инкубируют ~24 ч при 37°С, 5% СО2. КРМ1 получают от С1Ьсо ВКИ, номер по каталогу 11875-051.
Сутки 3.
1. Замораживают планшеты в течение ночи при -20°С.
- 66 007186
Сутки 4.
Оттаивают планшеты и собирают с помощью харвестера для 96-луночных планшетов (Тοтίес Нагуейег 96®) на фильтровальные матрасы (Аа11ас, номер по каталогу 1205-401), считывают импульсы на жидкостном сцинтилляционном счетчике Аа11ас Βеίар1аίе™.
Биоанализы, которые были использованы или которые могут быть использованы для оценки соединений, подробно описаны ниже. Соединения 1-9 были протестированы, и было обнаружено, что они активны в анализах с Г1кС8Т, ЕСЕК1 и РОСЕ.
Животные модели ίπ νΐνο
Животные модели ксенотрансплантанта.
Способность человеческих опухолей расти в качестве ксенотрансплантантов у бестимусных мышей (например, Βа1Ь/с, пи/пи) обеспечила полезную ίπ νΐνο модель для изучения биологического ответа на терапию человеческих опухолей. Со времени первой удачной ксенотрансплантации человеческих опухолей бестимусным мышам (Кудаагб аиб Рονкеπ, 1969, Α^ Ра11ю1. М1сгоЫа1. 8саиб. 77:758-760), много разных клеточных линий человеческих опухолей (например, опухолей молочной железы, легкого, мочеполовых путей, желудочно-кишечного тракта, головы и шеи, глиобластомы, опухоли кости и злокачественных меланом) были трансплантированы и успешно растут у голых (иибе) мышей. Следующие анализы могут быть использованы для определения уровня активности, специфичности и эффекта различных соединений по настоящему изобретению. Три основных типа анализов используют для оценки соединений: клеточный/каталитический, клеточный/биологический и ίπ νΐνο. Целью клеточных/каталитических анализов является определение эффекта соединения на способность ТК (тирозинкиназа) фосфорилировать остатки тирозина на известном субстрате в клетке. Целью клеточных/биологических анализов является определение эффекта соединения на биологический ответ, стимулируемый ТК в клетке. Целью ίπ νΐνο анализов является определение эффекта соединения в животной модели конкретного расстройства, как, например, рака.
Подходящие клеточные линии для экспериментов с подкожной ксенотрансплантацией включают клетки С6 (глиома, АТСС # ССЬ 107), клетки А375 (меланома, АТСС # (номер в Американской Коллекции Типовых Культур) СКЬ 1619), клетки А431 (эпидермоидная карцинома, АТСС # СКЬ 1555), клетки Са1и 6 (легкое, АТСС # НТВ 56), клетки РС3 (простата, АТСС # СКЬ 1435), клетки 8КОУ3ТР5 и МН 3Т3 фибробласты, разработанные с помощью генной инженерии сверхэкспрессирующими ЕСЕК, РОСЕК, 1СЕ-1К или любую другую тестируемую киназу. Следующий протокол может быть использован для осуществления экспериментов по ксенотрансплантации.
Самок бестимусных мышей (ΒΑΤΒ/С, пи/пи) получают от 8ттоп5еп Ε4ώοπιΙοι®5 (СПгоу, СΑ). Всех животных содержат в условиях чистых помещений в микроизоляторных клетках с подстилкой Альфадрай (Α1ρΗ3-άπ). Они получают стерильный корм для грызунов и воду по желанию.
Клеточные линии выращивают в соответствующей среде (например, МЕМ, ЭМЕМ, Нат'к Е10 или Нат'к Е12 плюс 5-10% фетальная телячья сыворотка (ΈΒ8) и 2 мМ глутамин (СЕ-Ν)). Все среды для культур клеток, глутамин и фетальную телячья сыворотку закупают у СЛот Ьйе ТесЬиο1οд^е8 (Сгапб Ыаиб, ΝΥ), если не указано иначе. Все клетки выращивают во влажной атмосфере 90-95% воздуха и 5-10% СО2 при 37°С. Все клеточные линии традиционным образом пересевают дважды в неделю, и они являются отрицательными в отношении микоплазмы, что определяют с помощью метода Му^еЩ (ОФот).
Клетки собирают при конфлюентности или в состоянии, близком к конфлюэнтности, 0,05% Трипсин-Е^ТΑ и осаждают центрифугированием при 450 х д в течение 10 мин. Осадки ресуспендируют в стерильном РΒ8 или среде (без ЕΒ8) до определенной концентрации и эти клетки имплантируют в задниюю боковую поверхность мыши (8-10 мышей в группе, 2-10х106 клеток/животное). Рост опухоли измеряют в течение 3-6 недель, используя штангенциркуль. Объем опухоли вычисляют как произведение длина х ширина х высота, если не указано иначе.
Р-величины вычисляют, используя ί-критерий Стьюдента. Тестируемые соединения в 50-100 мкл эксципиента (ЭМ8О или УРЭ:Э5А) могут быть доставлены путем 1Р (интраперитонеальной) инъекции в различных концентрациях, обычно начиная в первый день после имплантации.
Модель инвазии опухоли.
Разработана следующая модель инвазии опухоли, и она может быть использована для оценки терапевтической ценности и эффективности соединений, которые идентифицированы как селективно ингибирующие КПК/ЕЬК-1 рецептор.
Методика.
8-недельных голых мышей (самок) (Ыптоп^еп 1ис.) используют в качестве экспериментальных животных. Имплантацию опухолевых клеток можно осуществлять в вытяжном шкафу с ламинарным потоком. Для анестезии ксилазин/кетаминовую смесь (100 мг/кг кетамина и 5 мг/кг ксилазина) вводят интраперитонеально. Срединный разрез делают для раскрытия брюшной полости (приблизительно 1,5 см в длину), чтобы сделать инъекцию 107 опухолевых клеток в объеме среды 100 мкл. Клетки инъецируют либо в дуоденальную долю поджелудочной железы, либо под серозную оболочку ободочной кишки. Брюшину и мышцы закрывают непрерывным швом шелковой нитью 6-0 и кожу закрывают с использованием зажимов для раны. Животных наблюдают ежесуточно.
Анализ.
- 67 007186
Через 2-6 недель, в зависимости поверхностных наблюдений за животными, мышей умервщляли и локальные опухолевые метастазы в различные органы (легкое, печень, головной мозг, желудок, селезенка, сердце, мышца) вырезали и анализировали (измерение размера опухоли, степени инвазии, иммунохимия, определение ίη δίΐιι гибридизации и т.д.).
С-К1Т анализ.
Этот анализ используют для определения уровня фосфорилирования с-кй тирозина.
Клетки МО7Е (человеческая острая миелоидная лейкемия) подвергают сывороточному голоданию в течение ночи в 0,1% сыворотке. Клетки предварительно обрабатывают соединением (одновременно с сывороточным голоданием) перед стимуляцией лигандом. Клетки стимулируют 250 нг/мл гй-8СЕ в течение 15 мин. После стимуляции клетки лизируют и осуществляют иммунопреципитацию с помощью анти-с-кй антитела. Уровни фосфотирозина и белка определяют с помощью вестерн-блоттинга.
Анализ пролиферации МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид).
Клетки МО7Е подвергают сывороточному голоданию и предварительно обрабатывают соединением, как описано для экспериментов с фосфорилированием. Клетки пересевают в концентрации 4х105 клеток/лунку в 96-луночном планшете, в 100 мкл КРМ1 + 10% сыворотка. гй-8СЕ (100 нг/мл) добавляют и планшет инкубируют в течение 48 ч. Через 48 ч добавляют 10 мкл 5 мг/мл МТТ [3-(4,5-диметилтиазол-2ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид] и инкубируют в течение 4 ч. Добавляют кислотный изопропанол (100 мкл 0,04 н. НС1 в изопропаноле) и измеряют оптическую плотность при длине волны 550 нм.
Анализ апоптоза.
Клетки МО7Е инкубируют +/- ЗСЕ (фактор стволовых клеток) и +/-соединение в 10% ЕВЗ с гй-СМСЗЕ (10 нг/мл) и гй-1Ь-3 (10 нг/мл). Образцы анализируют через 24 и 48 ч. Для измерения активированной каспазы-3 образцы промывают РВЗ и делают проницаемыми с помощью ледяного 70% этанола. Клетки затем окрашивают РЕ(фикоэритрин)-коньюгированным поликлональным кроличьим антителом против активной каспазы-3 и анализируют с помощью ЕАС8 (клеточный анализатор по интенсивности флуоресценции, Пиогексепсе-асОм-Ией се11 койег). Для измерения расщепленной РАКР (поли-АДФ-рибозилполимераза) образцы лизируют и анализируют с помощью вестерн-блоттинга с анти-РАКР антителом.
Дополнительные анализы.
Дополнительные анализы, которые могут быть использованы для оценки соединений по настоящему изобретению, включают, без ограничения, био-Дк-1-анализ, анализ химерного рецептора ЕСЕ рецептор-НЕК2 в целых клетках, био-кгс-анализ, био-1ск анализ и анализ измерения функции фосфорилирования гак. Протоколы для каждого из этих анализов могут быть найдены в заявке США № 09/099842, которая включена сюда путем ссылки, включая любые графические материалы.
Измерение клеточной токсичности.
Лекарственные соединения должны быть более сильнодействующими в ингибировании рецепторной тирозинкиназной активности, чем в проявлении цитотоксического эффекта. Мера эффективности и клеточной токсичности соединения может быть получена путем определения терапевтического индекса, то есть 1С50/ЬП50. 1С50, доза, необходимая для достижения 50% ингибирования, может быть измерена с использованием стандартных методик, таких как те, которые описаны здесь. кО50. доза, которая дает 50%-ную токсичность, может также быть измерена с помощью стандартных методик (Мокктап, 1983, ί. 1ттипо1. Меккобк, 65:55-63), путем измерения количества высвободившейся ЙЭН (лактатдегидрогеназа) (1<огхеше\\ък| апб Са11е\\'аег1 1983, к 1ттипо1. Меккойк, 64:313. Эескег апб Ьоктапп-Маййек, 1988, ί. 1ттипо1. Меккобк, 10 115:61) или путем измерения летальной дозы на животных моделях. Соединения с большим терапевтическим индексом предпочтительны. Терапевтический индекс должен быть больше чем 2, предпочтительно по меньшей мере 10, более предпочтительно по меньшей мере 50.
Специалист в данной области с легкостью поймет, что настоящее изобретение хорошо адаптировано для осуществления задач и достижения упомянутых, а также присущих ему целей и преимуществ. Молекулярные комплексы и способы, методики, пути лечения, молекулы, конкретные соединения, описанные здесь, в настоящее время отражают предпочтительные воплощения, являются иллюстративными и не предназначены для ограничения объема изобретения. Специалисты в данной области смогут осуществлять изменения в этом изобретении или придумывать другие способы его использования, которые входят в идею настоящего изобретения и определяются объемом формулы изобретения.
Специалисту в данной области будет очевидно, что могут быть сделаны различные замены и модификации в раскрытом здесь изобретении без отступления от объема и сущности изобретения.
Все патенты и публикации, упомянутые в описании, являются показателями уровня специалистов в данной области, на которых рассчитано изобретение. Все патенты и публикации включены сюда путем ссылки до такой степени, как если бы каждая отдельная публикация была специально и отдельно указана как включенная путем ссылки.
Изобретение, иллюстративно описанное здесь, может быть применено на практике удобным образом в отсутствие любого элемента или элементов, ограничения или ограничений, которые конкретно здесь не раскрыты. Таким образом, например, в каждом случае здесь любой из терминов содержащий, состоящий по существу из и состоящий из может быть заменен любым из двух других терминов. Термины и выражения, которые использованы, использованы в качестве терминов описания, а не огра
- 68 007186 ничения, и при применении таких терминов и выражений отсутствует намерение исключить любые эквиваленты показанных и описанных признаков или их частей, при этом подразумевается, что возможны различные модификации в рамках заявленного изобретения. Таким образом, следует понимать, что, хотя настоящее изобретение конкретно описано предпочтительными воплощениями и возможными признаками, специалистами в данной области могут осуществляться модификация и варьирование идей, описанных здесь, и что такие модификации и вариации рассматриваются как входящие в объем настоящего изобретения, который определен прилагаемой формулой изобретения.
В дополнение, когда признаки или аспекты изобретения описаны в виде групп Маркуша, специалисту в данной области будет понятно, что изобретение, таким образом, также характеризуется любым конкретным членом или подгруппой членов группы Маркуша. Например, если X описан как выбранный из группы, состоящей из брома, хлора и иода, то притязания на X, являющийся бромом, и притязания на X, являющийся бромом и хлором, полностью описаны.
Другие воплощения входят в объем прилагаемой формулы.
Claims (19)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Соединение формулы (I) где Я1 выбран из группы, состоящей из водорода, галогено, алкила, галогеноалкокси, циклоалкила, гидрокси, алкокси, -С(О)Я8 и -0(0)ΝΚ12Κ13;Я2 выбран из группы, состоящей из водорода, галогено, алкила, тригалогенометила, гидрокси, алкокси и -С(О)Я8;Я3, Я4 и Я5 представляют собой независимо водород или алкил;Ζ представляет собой арил, гетероарил, гетероцикл или -ΝΚ.Ά6. где Я15 и Я16 независимо представляют собой водород или алкил; либо Я15 и Я16 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоаминогруппу;Я6 выбран из группы, состоящей из водорода или алкила;Я7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила и гетероарила;Я8 выбран из группы, состоящей из гидрокси и алкокси;1213 1213Я и Я независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила и арила; либо Я и Я вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоамино;или его фармацевтически приемлемая соль;при условии, что это соединение не представляет собой и где алкил означает СцСюалкил, возможно замещенный галогеном или гидрокси;циклоалкил означает Сз_§ моноциклическое кольцо или Сц.12 конденсированное или полициклическое кольцо, где одно или более чем одно из колец может содержать одну и более чем одну двойную связь, но ни одно из колец не имеет полностью сопряженной пи-электронной системы;арил означает моноциклическую или конденсированную полициклическую Сб-12 кольцевую группу, имеющую полностью сопряженную пи-электронную систему и возможно замещенную одним или более чем одним галогено или циано;гетероарил означает моноциклическую или конденсированную кольцевую группу из 5-12 атомов, содержащую 1-4 кольцевых гетероатома, выбранных из Ν, О или 8, имеющих полностью сопряженную пи-электронную систему и возможно замещенную гидрокси;гетероциклил означает насыщенное циклическое кольцо из 3-8 атомов, в котором один или два кольцевых атома представляют собой гетероатомы, выбранные из Ν, О или 8(О)П (где и представляет собой целое число от 0 до 2), где один или два С атома гетероцикла возможно могут быть замещены карбонильной группой и где гетероциклическое кольцо возможно замещено одним незамещенным С]Сдалкилом или двумя незамещенными С] -Сдалкилами;-69 007186 гетероциклоамино означает насыщенное циклическое кольцо из 3-8 атомов, в котором по меньшей мере один из кольцевых атомов представляет собой азот и возможно один или два дополнительных кольцевых атома представляют собой гетероатомы, выбранные из Ν, О или 8(О)П (где и представляет собой целое число от 0 до 2), где один или два атома С могут быть возможно замещены карбонильной группой и где гетероциклоамино кольцо возможно замещено одним незамещенным С^Сдалкилом или двумя незамещенными С^Сдалкилами; и арилокси означает -О-С6.12арил или О-гетероарил.
- 2. Соединение по п.1, гдеК1 выбран из группы, состоящей из водорода, галогено, алкила, циклоалкила, гидрокси, алкокси, -С(О)К8 и -С(О)ЫК12К13;К2 выбран из группы, состоящей из водорода, галогено, алкила, тригалогенометила, гидрокси, алкокси;К3, К4 и К5 представляют собой независимо водород или алкил;Ζ представляет собой арил, гетероарил, гетероцикл или -ΝΚ15Κ16, где К15 и К16 независимо представляют собой водород или алкил; либо К15 и К16 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоаминогруппу;К6 выбран из группы, состоящей из водорода или алкила;К7 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, арила, и гетероарила;К8 выбран из группы, состоящей из гидрокси и алкокси;1213 1213К и К независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила и арила, либо К и К вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероцикл;или его фармацевтически приемлемая соль.
- 3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
№ соединения Структура Название 2Ν I Η 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-ди гидро-индол(3)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид 3Ν О 0Η %° Η 2,4-Диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(3)-илиденметил]-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пропил)-амид 4Ν 0 οη %° Η 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид 5Ν 0 - и η Χν 0 Η 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-индолилиденметил]-2,4-диметил-1 Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пропил)-амид 6Ν 0 % уАааэ Η ΟΗ Ν=Ν Η 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-илиденметил]-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил)-амид 7Ν 0 η •Чу/Α,^Α^ Η ΟΗ Ν=Ν ργγ>οΗ Η 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индолилиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)-амид 8Ν 0 η Η Η 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индолилиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З- [1,2,3]триазол-1 -ил-пропил )-амид -700071869Ν н / χΑ Η 0 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-индолилиденметил]-2,4-диметил-1 Н-пирролЗ-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)-амид — X Η Η ) ΧΧΑ ΟΗ Ν=Ν 11Ν а 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-5- но-/ Γ Ά > у ΗΝ метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- Κ>=0 ил]метилен}-2-оксо-М-фенил-2,3- Η дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид αΛ _ Ύ =οΗ Η 4 <Αν Η 12Ν υ но-/ (3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-Н-метил-2-оксо-2,3- \ 7 ΗΝ, дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид Η \ Α° ΓΛ ο V ^ΙΑ οΗ η «α ΝΗ 13Ν а (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-5- ΗΟ-2 метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- / \ / 7 ΗΝ ил]метилен}-1М-(2-гидроксиэтил)-2- Η \ Α° χ£ оксо-2,3-дигидро-1 Н-индол-5- 0 )/ карбоксамид ΗΟ^~Ν-Αγ >=οΗ η 4 ΧΝ Η 14Ν Λ М-[3-(диэтиламино)-2-гидроксипропил]- 4-(4-фторфенил)-2-метил-5-{[5- к НО-/ (морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо-1,2- ϊ >ΗΙ? дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}- Η Л/Ч) 1 Н-пчррол-З-карбоксамид 0 Ύ Υ>οΗ Χ~ΝΗ 15Ν Λ 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-3-(4- Εχ НО/ фторфенил)-5-метил-1 Н-пиррол-2- ( / ΗΝ ил]метилен}-М-изопропил-2-оксо-2,3- Η Ν ) дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид Λχ Α [>=ο Η Η ^ΝΗ 16Ν υ 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-3- Ε , НО -/ (2,4-дифторфенил)-5-метил-1 Н- С./ΗΝ пиррол-2-ил]метилен}-2-оксо-М-фенил- Ζ1 2,3-дигидро-1Н-индол-5-карбоксамид ал 4Ν><' >οΗ • Η ΆΧΝΗ 17Ν а ) 3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-3- Ε ΗΟ-Ζ (2,4-дифторфенил)-5-метил-1 Н- Λ Υ 2 Λην Υ Α° пиррол-2-ил]метилен}-М-(2- Н'-ч^ Λ® гидро ксиэтил)-2-оксо-2,3-ди гидро-1 Н- ΗΟ^ζ-'Ν+γ' ΑΤ οΗ индол-5-карбоксамид • Η 4 ΑνΛ Η -71 00718618Ν 0 УЧ о I 3-{[3-(4-цианофенил)-4-({[3(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5метил-1 Н-пиррол-2-ил]метилен}-!Ч,Мдиметил-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол5-карбоксамид н <ζΛ ΗΝ У Н >=0 ΝΗ 19Ν ч? ф но~2 4-(4-цианофенил)-М-[3-(диэтиламино)- 2-гидроксипропил]-2-метил-5-{[5- (морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо-1,2- Г)н1? дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}- Н 1 Н-пиррол-З-карбоксамид 0 г ТТ>=о ЧдЧш 20Ν У 3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2- ск ноЧ гидрокси пропил]амино}карбонил)-5- л»? метил-1 Н-пиррол-2-ил]метилен}-2- н 1Х° оксо-1М-фенил-2,3-дигидро-1Н-индол-5- Сч 0 |ί н τ^νθ карбоксамид н и 21Ν У 3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2- С1. н°Ч гидрокси пропил]амино}карбонил)-5- «ПД метил-1Н-пиррол-2-ил]метилен}-М- Нч λ—( У=° ν ХА изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1Н- л А н >=° индол-5-карбоксамид н ν 'ΝΗ 22Ν н η Ν-Λ 9 г-Л' уУ °н 5-[(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил )-2,4- χ диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид н Хд /== N Н э 23Ν Нп Ν-Ν ЧДч ДТн 0Н 5-[5-хлор-2-оксо-1.2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-Ы-[2-гидрокси- 3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4- 01^5¾ и гА Н д диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 24Ν Н Ν-Ч Дгй он Н-[2-гидрокси-3-(2Н-тетразол-2ил)пропил]-2,4-диметил-5-{[2-оксо-5трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗН- рХР °'Ю У Н индол-3-илиден]метил}-1Н-пиррол-3- Ъ ^-ΝΛ Н =0 карбоксамид 25Ν ν-ν • N 0 АЧ он • Н 5-[(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-1Ч-[2-гидрокси- 3-(1 Н-тетразол-1 -ил)пропил]-2,4- ΡΆ· X диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид Хд )= N Н э 26Ν Н Ν--ν· 0. ,-ДиГ дЧдн Η 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси- 3-(1 Н-тетразол-1-ил)пропил]-2,4- У Н диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид -7200718627Ν П ο Η*/ \ ΛνΑ Ηνυ 0Η ΎγΟ Η Щ2-гидрокси-3-(1 Н-тетразол-1ил)пропил]-2,4-диметил-5-{[2-оксо-5· трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-3карбоксамид 28Ν \>~Λη °Η Αζθπ Η М-[3-[2,6-диметилморфолин-4-ил]-2- гидроксипропил}-5-[(5-фтор-2-оксо-1,2дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2, 4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоксамид 29Ν с|гА Η 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-1Ч-{3-[2,6диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипропил}-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид 30Ν χ ς Ρ \ Ж0Η Φ уЛЛн 11 Χ>ο Η Ы-{3-[2,6-диметилморфолин-4-ил]-2гидроксилропил}-2,4-Диметил-5-{[2□ксо-5-(трифторметокси)-1,2-дигидроЗН-индол-3-илиден]метил}-1Н-пиррол3-карбоксамид 34Ν °+ν X / Η\/1 η 0Η ° 0/+0 Η Χζ=--Ν Η 5-{(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси3-(3-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1ил)пропил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоксамид 35Ν °Ьг χ °Κ Φ Μΐ 0Η° τ Ί/п^ οννΛ_ η 1 1 '“θ η Ы-[2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]-2,4· диметил-5-{(2)-[2-оксо-5-(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗН-индол-3илиден]метил}-1 Н-пиррол-3карбоксамид 36Ν V “η+ Η 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-Ы-[2-гидрокси- 3-(3-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1ил)пропил]-2,4-Диметил-1Н-пиррол-3карбоксамид 37Ν 0% Η 1М-[3-(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)- 2-гидроксипропил]-2,4-диметил-5-[(2оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-3-илиден)метил]-1Н-пиррол-3-карбоксамид 38Ν 0 Η. ΕίΛνΎ^Ο·0 Χ^νΧ-η он ρυ>4 Η I ΙΑο Ο-Ν Η Ν-[3-(1,1 -диоксидотиоморфол ин-4-ил)- 2-гидроксипропил]-5-[(5-фтор-2-оксо- 1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид 39Ν 0 μ ΥΑν'^'Ο-.Ο \ХАН он <Α) οιννΛ= Η Ά^ν Η 5-[(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[3-(1,1диоксидотиоморфолин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид 40Ν 0 Η УА^А-О γήΛ η οη ο 3(4^1 Η Τ Τ>ο Η 5-[(5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ь4-[3-(1,1 диоксидотиоморфол ин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид -73 00718647Ν ΝΛ иН н 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол*3- илиденметил)-2,4-диметил-1Н-лиррол- 3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-З- ([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-прэпил]-амид 48Ν Ν-Λ Г* С νΥ>οΗ Χν н 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-Зилиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид 49Ν мА, хА-А он Η 2,4-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидро-индол-3илиденметил)-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,213]триазоло(4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид 50Ν № МА+н 0Н Ργ^γ-ζ/н н 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-3- илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-пропил]-амид 51Ν р- XXн он схх н 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол-Зилиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-пропил]-амид 52Ν ,, н 2,4-диметил-5-(2-оксо-5- | трифторметокси-1,2-дигидро-индол-Зилиденметил)-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1-ил)-пролил]-амид - 4. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
№ соединения Структура Название 23 о АА М и νν >=ο Η 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(3/)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид 33 О ААН он +° н ( Т >0 Η 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-Зморфолин-4-ил-пролил)-амид 43 0 ТХй+Ар! ΑΧ о» н 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-лропил)амид 58 о νΑ-ΥΑ-Ί Αν А он 3А®Х Н У Υ>° 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-ДИметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-З-морфолин-4-ил-пропил)амид -7400718663 О А X н ОН Ν=Ν оЧ н 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-1Н-пиррол3-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З[1,2,3]триазол-1-ил-пропил)-амид 78 о X Х^ Н ОН Ν=Ν * ΧΧ'-Ν Н 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-Диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1-илпропил)-амид 83 _Д А н ОН Ν=Ν /? Ν И 11>о н 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-индол- (32)-илиденметил]-2,4-Диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1-илпропил)-амид 93 О X, Х^н он ν=ν Вг4^4\_ Н \Ζ^ν н 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидро-индол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2гидрокси-3-[1,2,3]триазол-1 -илпропил)-амид - 5. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
113 αΑ н ч но-/ Ан/ /ч /7 м С н (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-2-оксо-М-фенил-2,3дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид 128 (32)-(3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-5- но-/ метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- θ ΗΝ ил]метилен}-М-метил-2-оксо-2,3- =0 дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид о Ιι Ν N Ч Т X Η >=Ο н XX -ΝΗ 133 υ (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-5- НО-/ метил-З-фенил-1 Н-пиррол-2- Γ >ΗΙ? ил]метилен}-И-(2-гидроксиэтил)-2- ΖΙ оксо-2,3-дигидро-1 Н-индол-5- ° / карбоксамид ΗΟ^ζ^·^ ίΤ> =οΗ Н ΧΧ-ν Η 145 и 1Ч-[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]-4-(4-фторфенил)-2- Ε НО-/ метил-5-{(г)-[5-(морфолин-4- < \ ΗΝ илкарбонил)-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН- (Χο Ζχ индол-3-илиден]метил}-1Н-пиррол-3- О /Г карбоксамид оС? οΗ -75 007186153 ΑΑ η Ε V? НО-/ )ην2 αΛ=° ΛΑ Υ4· Η =0 (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-3-(4фторфенил)-5-метил-1 Н-пиррол-2ил]метилен}-Ы-изопропил-2-оксо-2,3дигидро-1 Н-индол-5-карбоксамид Α- / -ΝΗ 163 \ (3/)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-3- Ρ. НО-/ (2,4-дифторфенил)-5-метил-1 Н- / ρ ΛΑ Λ ΑΟ /Γί пиррол-2-ил]метилен}-2-оксо-Ы- фенил-2,3-дигидро-1 Н-индол-5- ΟΑ Η ο ΑΑ Λ=οΗ -ΝΗ карбоксамид 173 Α (32)-3-{[4-({[3-(диэтиламино)-2- гидроксипропил]амино}карбонил)-3- Ρχ НО—/ (2,4-дифторфенил)-5-метил-1 Н- Γ / ΗΝχ пиррол-2-ил]метилен}Л-(2- Ρ ~~\ ^=0 ΓΛ гидроксиэтил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н- 0 Η Ό ί Η Ν^ =οΗ индол-5-карбоксамид 183 (32)-3-{[3-(4-цианофенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2- X. Η<Α гидроксипропил]амино}карбонил)-5- Α ΗΝ ,>=ο метил-1Н-пиррол-2-ил]метилен}-М,№ диметил-2-оксс-2,3-дигидро-1Н-индол- Α 4νΑ д'ус ' %Ανη Η 5-карбоксамид 193 υ 4-(4-цианофенил)-Н-[3-(диэтиламино)- 2-гидроксипропил]-2-метил-5-{(г)-[5- Λ ΗΟ-Ζ (морфолин-4-илкарбонил)-2-оксо-1,2- ί! » ΗΝ дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}- \=г: \ ζ=° η 1 Н-пиррол-З-карбоксамид 0 Γ оСА ΝΗ 0 203 (3/)-3-{[3-(4-хлорфенил)-4-({[3- (диэтиламино)-2- С ΗΟ-( гидроксипропил]амино}карбонил)-5- \ / у ΗΝ метил-1 Н-пиррол-2-ил]метилен}-2- \ Α ΛΑ Ν Η 0 оксо-М-фенил-2,3-дигидро-1Н-индол- ΟΑ Η Α- ί 'ΝΗ 5-карбоксамид -76007186218 У с\ нол Η ΗΝ ΐ 1 н СА-νη (3Ζ)-3-{[3-(4-χπορφθΗππ)-4-({[3(диэтиламино)-2гидроксипропил]амино}карбонил)-5метил-1Н-пиррол-2-ил]метилен}-Низопропил-2-оксо-2,3-ди гидро-1 Ηиндол-5-карбоксамид 223 N'-4 О ,__/—Ν-Ν УЛ 0Н I X >=° Н 5-[(Ζ)-(5-φτορ-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-1Ч-[2-гидрокси- 3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4- диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 233 Ν-Д Ό Γ^'Ν αΎΥνοΗ Η 5-[(г)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-[\|-[2-гидрокси3-(2Н-тетразол-2-ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 248 1ЧД 0 ^/^’Ν \Αν 'ημ Ρ_Ρ ΟΧ Η 0Η ρί С Ν °Ο5-Η Ο-Ν Η Ь4-[2-гидрокси-3-(2Н-тетразол-2ил)пропил]-2,4-Диметил-5-{(7)-[2-оксо5-трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид 253 Αν )~Ля 0Η р>/чД Η 1 ΧΑο Η 5-[(Ζ)-(5-φτορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-[2-гидрокси3-(1 Н-тетразол-1 -ил)пропил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 263 №Ν· ο ζ-νΑ 0Η Ο^Ν Η 5-[(Ζ)-(5-χπορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-Ы-[2-гидрокси- , 3-( 1 Н-тетразол-1 -ил)пропил]-2,4- ! диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 1 273 Ν--Ν. ,Ν 0 4? >СЙ 0Η τ ίΓ “ΥΥΐ-ο Ο·Ν Η ^[2-гидрокси-3-(1 Н-тетразол-1ил)προπил]-2,4-диметал-5-{(Ζ)-[2-οκсο5-трифторметокси)-1,2-Дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид [~283 I νΑ А'АД >Хн 0Η _ // Ν^ ΤΧ>οΗ Η М-{3-[(2К,68)-2,6-диметилморфолин-4- ил]-2-гидроксипропил}-5-[(2)-(5-фтор- 2-оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-З- илиден)метил]-2,4-диметил-1Н- пиррол-3-карбоксамид ! ί 293 ДАн 0Η αΌ>οΗ Η 5-[(Ζ)-(5-χηορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-М-{3-[(2 К,68)2,6-диметилморфолин-4-ил]-2гидроксипролил}-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид -77007186305 г ЬХн 0Н^ н ϊ;ρ=ο н Ν-{3-[(2Κ,65)-2,6-диметилморфолин-4ил]-2-гидроксипропил}-2,4-диметил-5{(г)-[2-оксо-5-(трифторметокси)-1,2дигидро-ЗН-индол-3-илиден]метил}- 1 Н-пиррол-З-карбоксамид г315 ++ У~йн 'он 0 ХХ>он 5-[(Ζ)-(5-φτορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]~1Ч-((2К)-2- гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]- 2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 328 О ++ У?~й он0 Η 5-[(2)-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-Н-[(2К)-2гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазол идин-1 -ил)пропил]- 2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 338 V х °К <= УЛй ''ОН ° Ϋ Их П>оН Н И-[(2Р)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазол идин-1 -ил)пропил ]2,4-диметил-5-{(г)-[2-оксо-5(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид 348 0 У1~н ™0 Г'тА υΗ-°η Η 5-[(г)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-М-[(28)-2гидрокси-3-(3-мети л-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]- 2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 358 ++ X 4 +Γ V Ρ У<й ОН 0 ρ+ρ +1« Τ β Ν Ох/ч£ Η л I >=Ο •Η М-[(25)-2-гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]2,4-диметил-5-{(2)-(2-оксо-5(трифторметокси)-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден]метил}-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид 365 ч г ν УСн он 0 // У 0Ιγγ>οΗ %Αν Η 5-[(Ζ)-(5-χπορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-Н-[(25)-2- гидрокси-3-(3-метил-2,5диоксоимидазолидин-1-ил)пропил]2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 375 αχ Η Ν-[3-(1,1 -диоксидотиоморфолин-4-ил)2-гидроксипропил]-2,4-диметил-5-[(2)(2-оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-1 Н-пиррол-Зкарбоксамид 385 ο У-ΑνΆνΆ·0 /ν+η он -0 χχ>° Η Ν-[3-(1,1 -диоксидотиоморфолин-4-ил)2-гидроксипропил]-5-[(2)-(5-фтор-2оксо-1,2-дигидро-ЗН-индол-Зилиден)метил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид 395 0 \νΛΝ'>^Ν^3·.Ο >^να-η он '-/•ь ΟΙ^χ^Ζ Η Τ Γ >ο Η 5-[(Ζ)-(5-χπορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗНиндол-3-илиден)метил]-1Ч-[3-(1,1 диоксидотиоморфолин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид 405 Ο Лкн ОН Вг^^П Η I £ >о Η 5-[(2)-(5-бром-2-оксо-1,2-ди гидро-3 Ниндол-3-илиден)метил]-1Ч-[3-(1,1диоксидотиоморфолин-4-ил)-2гидроксипропил]-2,4-диметил-1 Нпиррол-3-карбоксамид -78007186413 О 5-[(2)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-Ы-[(28)-2гидрокси-З-морфолин-4-илпропил]2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 423 О АЛ он О Лт>=о н 5-[(2)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-М-[(2К)-2гидрокси-З-морфолин-4-илпропил]2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 433 О ЛА он н Т II /=° 5-[(Ζ)-(5-χηορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-Ы-[(2К)-2гидрокси-З-морфолин-4-илпропил]2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид 443 0 ΛλΗ^Ο Н ΛΑ-ΝΗ 5-[(Ζ)-(5-χπορ-2-οκοο-1,2-дигидро-ЗН- индол-3-илиден)метил]-1М-[(25)-2гидрокси-З-морфолин-4-илпропил]2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоксамид - 6. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
473 N•4 οΛΪ> СН Η 5-(5-(/)-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-([1,2,3]триазоло(4,5Ь]пиридин-3-илокси)-пропил]-амид 483 Эти он ЧА-Г! н 5-(5-(Ζ)-χπορ-2-οκοο-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-([1,2,3]триазоло[4,5Ь]пиридин-3-илокси)-лропил]-амид 493 ν-α о αΌ ΑΛ ААр н 2,4-(2)-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидро-индол-Зилиденметил)-1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты [2-гидрокси-З([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3илокси)-пропил]-амид 503 ,0’ сЧ н °н \γΓ я 1 Т>=о н 5-(5-(2)-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-(3-окси-бензотриазол-1ил)-пропил]-амид 513 ЛГн он ЧА'м Н 5-(5-(2)-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил- 1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2гидрокси-3-(3-окси-бензотриазол-1 ил)-пропил]-амид 523 ζο* μ-Ν* фРъ Э~СН он н 2,4-И-диметил-5-(2-оксо-5трифторметокси-1,2-дигидро-индол-З- | илиденметил)-1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты [2-гидрокси-3-(3окси-бензотриазол-1 -ил)-пропил]-амид | -79007186 - 7. Соединение формулы (1а)К2 представляет собой фтор и находится в положении 5 индолинонового кольца и Ζ представляет собой морфолин-4-ил;К6 и К7 представляют собой метил и стереохимия по *С представляет собой (8).
- 8. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из
№ соеди- нения Структура Название 45Ν Ό>· н 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил )-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты (2-гидрокси-З-морфолин4-ил-пропил)-метил-амид 458 н 5-((2)-5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты ((3)-2-гидрокси-3- I морфолин-4-ил-пропил)-метил- | амид 468 V и 5-((2)-5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1 Н-лиррол-З-карбоновой кислоты ((К)-2-гидрокси-3- морфолин-4-ил-пропил)-метил- . амид - 9. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение или соль по пп.1, 2, 3, 4, 5, 6 или 8 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
- 10. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение или фармацевтически приемлемую соль по п.7 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
- 11. Способ модуляции каталитической активности протеинкиназы, при котором указанную протеинкиназу приводят в контакт с соединением или солью по любому из пп. 1, 3 или 6.
- 12. Способ по п. 11, где указанная протеинкиназа выбрана из группы, состоящей из рецепторной тирозинкиназы, нерецепторной тирозинкиназы и серинтреонинкиназы.
- 13. Способ лечения или предупреждения расстройства, связанного с протеинкиназой, у организма, при котором указанному организму вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции, содержащей соединение или соль по любому из пп. 1, 3 или 6 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
- 14. Способ по п.13, где указанное расстройство, связанное с протеинкиназой, выбрано из группы, состоящей из расстройства, связанного с рецепторной тирозинкиназой, расстройства, связанного с нерецепторной тирозинкиназой, и расстройства, связанного с серинтреонинкиназой.
- 15. Способ по п. 13, где указанное расстройство, связанное с протеинкиназой, выбрано из группы, состоящей из расстройства, связанного с рецептором эпителиального фактора роста (ЕОГК), расстройства, связанного с рецептором тромбоцитарного фактора роста (ΡϋΟΓΚ), расстройства, связанного с рецептором инсулиноподобного фактора роста (ЮРК), и расстройства, связанного с киназой печени эмбриона (Як).
- 16. Способ по п.13, где указанное расстройство, связанное с протеинкиназой, представляет собой рак, выбранный из группы, состоящей из плоскоклеточного рака, астроцитомы, саркомы Капоши, глиобластомы, рака легкого, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, меланомы, рака яичников, рака проста-80007186 ты, рака молочной железы, мелкоклеточного рака легкого, глиомы, рака ободочной и прямой кишки, рака мочеполовых путей и рака желудочно-кишечного тракта.
- 17. Способ по п. 13, где указанное расстройство, связанное с протеинкиназой, выбрано из группы, состоящей из диабета, аутоиммунного расстройства, гиперпролиферативного расстройства, рестеноза, фиброза, псориаза, болезни Гиппеля-Линдау, остеоартрита, ревматоидного артрита, ангиогенеза, воспалительного расстройства, иммунологического расстройства и сердечно-сосудистого расстройства.
- 18. Способ по и. 13, где указанный организм представляет собой человека.
- 20. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения или фармацевтически приемлемой соли по и. 19 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US26868301P | 2001-02-15 | 2001-02-15 | |
| US31236101P | 2001-08-15 | 2001-08-15 | |
| PCT/US2002/004407 WO2002066463A1 (en) | 2001-02-15 | 2002-02-15 | 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200300793A1 EA200300793A1 (ru) | 2004-04-29 |
| EA007186B1 true EA007186B1 (ru) | 2006-08-25 |
Family
ID=26953263
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200300793A EA007186B1 (ru) | 2001-02-15 | 2002-02-15 | Производные 3-(4-амидопиррол-2-илметилиден)-2-индолинона в качестве ингибиторов протеинкиназ |
Country Status (41)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US6653308B2 (ru) |
| EP (1) | EP1370554B1 (ru) |
| JP (1) | JP3677501B2 (ru) |
| KR (1) | KR100884858B1 (ru) |
| CN (1) | CN100338059C (ru) |
| AP (1) | AP1718A (ru) |
| AR (1) | AR042586A1 (ru) |
| AT (1) | ATE307128T1 (ru) |
| AU (1) | AU2002247133B2 (ru) |
| BG (1) | BG108098A (ru) |
| BR (1) | BR0207494A (ru) |
| CA (1) | CA2438314C (ru) |
| CR (1) | CR7056A (ru) |
| CZ (1) | CZ20032414A3 (ru) |
| DE (1) | DE60206736T2 (ru) |
| DK (1) | DK1370554T3 (ru) |
| EA (1) | EA007186B1 (ru) |
| EE (1) | EE200300385A (ru) |
| ES (1) | ES2251580T3 (ru) |
| GE (1) | GEP20053600B (ru) |
| HK (1) | HK1059621A1 (ru) |
| HR (1) | HRP20030657B1 (ru) |
| HU (1) | HUP0303146A3 (ru) |
| IL (2) | IL157418A0 (ru) |
| IS (1) | IS2411B (ru) |
| MA (1) | MA26997A1 (ru) |
| MX (1) | MXPA03007367A (ru) |
| MY (1) | MY126235A (ru) |
| NO (1) | NO326604B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ527572A (ru) |
| OA (1) | OA12834A (ru) |
| PE (1) | PE20021006A1 (ru) |
| PL (1) | PL364176A1 (ru) |
| RS (1) | RS51026B (ru) |
| SI (1) | SI1370554T1 (ru) |
| SK (1) | SK11332003A3 (ru) |
| TN (1) | TNSN03055A1 (ru) |
| TW (1) | TWI324155B (ru) |
| UA (1) | UA75635C2 (ru) |
| WO (1) | WO2002066463A1 (ru) |
| ZA (2) | ZA200306335B (ru) |
Families Citing this family (72)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6861442B1 (en) * | 1998-12-30 | 2005-03-01 | Sugen, Inc. | PYK2 and inflammation |
| AR042586A1 (es) * | 2001-02-15 | 2005-06-29 | Sugen Inc | 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa |
| TWI259081B (en) * | 2001-10-26 | 2006-08-01 | Sugen Inc | Treatment of acute myeloid leukemia with indolinone compounds |
| BR0307721A (pt) * | 2002-02-15 | 2005-01-25 | Upjohn Co | Processo para preparação de derivados de indolinona |
| WO2003097854A2 (en) * | 2002-05-17 | 2003-11-27 | Sugen, Inc. | Novel biomarkers of tyrosine kinase inhibitor exposure and activity in mammals |
| AR042042A1 (es) * | 2002-11-15 | 2005-06-08 | Sugen Inc | Administracion combinada de una indolinona con un agente quimioterapeutico para trastornos de proliferacion celular |
| US20040209937A1 (en) * | 2003-02-24 | 2004-10-21 | Sugen, Inc. | Treatment of excessive osteolysis with indolinone compounds |
| DE10334582A1 (de) * | 2003-07-28 | 2005-02-24 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von Maleinsäureanhydrid |
| PL1670785T3 (pl) * | 2003-10-02 | 2010-12-31 | Pharmacia & Upjohn Co Llc | Sole i polimorfy podstawionego pirolem związku indolinonowego |
| EP1680401A2 (en) | 2003-10-24 | 2006-07-19 | Schering Aktiengesellschaft | Indolinone derivatives and their use in treating disease-states such as cancer |
| WO2005053614A2 (en) * | 2003-11-26 | 2005-06-16 | The Scripps Research Institute | Advanced indolinone based protein kinase inhibitors |
| WO2005111023A1 (en) | 2004-05-14 | 2005-11-24 | Pfizer Products Inc. | Pyrimidine derivatives for the treatment of abnormal cell growth |
| US20060009510A1 (en) * | 2004-07-09 | 2006-01-12 | Pharmacia & Upjohn Company Llc | Method of synthesizing indolinone compounds |
| CN113952338A (zh) * | 2005-02-03 | 2022-01-21 | 综合医院公司 | 治疗吉非替尼耐药性癌症的方法 |
| RU2007135167A (ru) * | 2005-03-23 | 2009-03-27 | Пфайзер Продактс Инк. (Us) | Комбинированная терапия с использованием анти-ctla4-антитела и индолинона для лечения рака |
| CA2604357C (en) | 2005-04-26 | 2012-01-17 | Pfizer Inc. | P-cadherin antibodies |
| KR20080017058A (ko) * | 2005-05-26 | 2008-02-25 | 더 스크립스 리서치 인스티튜트 | 향상된 인돌리논계 단백질 키나제 억제제 |
| UY29783A1 (es) | 2005-09-07 | 2007-04-30 | Pfizer | Anticuerpos monoclonales humanos para la quinasa-1 tipo receptor de activina |
| US20090012085A1 (en) * | 2005-09-20 | 2009-01-08 | Charles Michael Baum | Dosage forms and methods of treatment using a tyrosine kinase inhibitor |
| CA2621809A1 (en) * | 2005-09-22 | 2007-04-05 | The Scripps Research Institute | Alkoxy indolinone based protein kinase inhibitors |
| CN101389331A (zh) * | 2005-12-29 | 2009-03-18 | 斯克里普斯研究学院 | 基于吲哚满酮的氨基酸衍生物的蛋白激酶抑制剂 |
| RS20080525A (en) | 2006-05-09 | 2009-09-08 | Pfizer Products Inc., | Cycloalkylamino acid derivatives and pharmaceutical compositions thereof |
| US20070282318A1 (en) * | 2006-05-16 | 2007-12-06 | Spooner Gregory J | Subcutaneous thermolipolysis using radiofrequency energy |
| EP2061772A4 (en) * | 2006-09-11 | 2011-06-29 | Curis Inc | MULTIFUNCTIONAL SMALL MOLECULES AS PROLIFERATION-ACTIVE ACTIVE SUBSTANCES |
| US7928136B2 (en) | 2006-09-11 | 2011-04-19 | Curis, Inc. | Substituted 2-indolinone as PTK inhibitors containing a zinc binding moiety |
| WO2008033562A2 (en) | 2006-09-15 | 2008-03-20 | Xcovery, Inc. | Kinase inhibitor compounds |
| CA2683804A1 (en) * | 2007-04-13 | 2008-10-23 | Dana Farber Cancer Institute, Inc. | Receptor tyrosine kinase profiling |
| WO2008145398A1 (en) * | 2007-06-01 | 2008-12-04 | Pfizer Italia S.R.L. | 4-arylpyrrole substituted 2-indoline derivatives active as protein kinase inhibitors |
| WO2009014941A1 (en) * | 2007-07-24 | 2009-01-29 | Shenzen Chipscreen Bioscience, Ltd. | 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors |
| CL2008002793A1 (es) * | 2007-09-20 | 2009-09-04 | Cgi Pharmaceuticals Inc | Compuestos derivados de amidas sustituidas, inhibidores de la actividad de btk; composicion farmaceutica que los comprende; utiles en el tratamiento del cancer, trastornos oseos, enfermedades autoinmunes, entre otras |
| US20100256392A1 (en) * | 2007-11-21 | 2010-10-07 | Teva Pharmaceutical Industries Ltd. | Polymorphs of sunitinib base and processes for preparation thereof |
| KR20100119582A (ko) * | 2008-03-31 | 2010-11-09 | 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 | 수니티닙 및 이의 염을 제조하는 방법 |
| US8158656B2 (en) * | 2008-05-16 | 2012-04-17 | Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. | 2-indolinone derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors |
| CA2725001C (en) | 2008-05-23 | 2014-05-13 | Jiangsu Chiatai Tianqing Pharmaceutical Co., Ltd. | Dihydroindolone derivatives |
| BRPI0914942A2 (pt) * | 2008-06-30 | 2015-08-11 | Cylene Pharmaceuticals Inc | Compostos de oxindol |
| US20100029491A1 (en) * | 2008-07-11 | 2010-02-04 | Maike Schmidt | Methods and compositions for diagnostic use for tumor treatment |
| CA2731605A1 (en) | 2008-07-24 | 2010-01-28 | Teva Pharmaceutical Industries Ltd. | Sunitinib and salts thereof and their polymorphs |
| US8211901B2 (en) | 2009-05-22 | 2012-07-03 | Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. | Naphthamide derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors |
| CN101906076B (zh) | 2009-06-04 | 2013-03-13 | 深圳微芯生物科技有限责任公司 | 作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的萘酰胺衍生物、其制备方法及应用 |
| KR20120106935A (ko) | 2009-07-13 | 2012-09-27 | 제넨테크, 인크. | 암의 치료를 위한 진단 방법 및 조성물 |
| FR2948940B1 (fr) * | 2009-08-04 | 2011-07-22 | Servier Lab | Nouveaux derives dihydroindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| WO2011027249A2 (en) | 2009-09-01 | 2011-03-10 | Pfizer Inc. | Benzimidazole derivatives |
| US20110064670A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-17 | Genentech, Inc. | Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer agent |
| CA2772670A1 (en) | 2009-09-17 | 2011-03-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods and compositions for diagnostics use in cancer patients |
| WO2011073521A1 (en) | 2009-12-15 | 2011-06-23 | Petri Salven | Methods for enriching adult-derived endothelial progenitor cells and uses thereof |
| EP2550263A4 (en) | 2010-03-23 | 2013-07-24 | Univ Johns Hopkins | COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING NEURODEGENERATIVE DISEASE |
| WO2011153224A2 (en) | 2010-06-02 | 2011-12-08 | Genentech, Inc. | Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer |
| CN103180737A (zh) | 2010-07-19 | 2013-06-26 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 鉴定响应抗癌疗法的可能性升高的患者的方法 |
| KR20130126576A (ko) | 2010-07-19 | 2013-11-20 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항암요법에 반응할 가능성이 증가된 환자를 확인하는 방법 |
| WO2012012750A1 (en) | 2010-07-23 | 2012-01-26 | Trustees Of Boston University | ANTI-DEsupR INHIBITORS AS THERAPEUTICS FOR INHIBITION OF PATHOLOGICAL ANGIOGENESIS AND TUMOR CELL INVASIVENESS AND FOR MOLECULAR IMAGING AND TARGETED DELIVERY |
| WO2012042421A1 (en) | 2010-09-29 | 2012-04-05 | Pfizer Inc. | Method of treating abnormal cell growth |
| WO2012052948A1 (en) | 2010-10-20 | 2012-04-26 | Pfizer Inc. | Pyridine- 2- derivatives as smoothened receptor modulators |
| EP2694058B1 (en) * | 2011-04-08 | 2015-11-04 | Beta Pharma, Inc. | New indolinone protein kinase inhibitors |
| WO2012158810A1 (en) * | 2011-05-17 | 2012-11-22 | Principia Biopharma Inc. | Tyrosine kinase inhibitors |
| CA2847540C (en) | 2011-09-22 | 2016-05-17 | Pfizer Inc. | Pyrrolopyrimidine and purine derivatives |
| LT3181567T (lt) | 2012-09-10 | 2019-07-25 | Principia Biopharma Inc. | Pirazolpirimidino junginiai kaip kinazės slopikliai |
| CN103274986A (zh) * | 2013-06-20 | 2013-09-04 | 湖南欧亚生物有限公司 | 一种舒尼替尼中间体的合成和精制方法 |
| FR3008411B1 (fr) * | 2013-07-12 | 2015-07-03 | Servier Lab | Nouveau sel de la 3-[(3-{[4-(4-morpholinylmethyl)-1h-pyrrol-2-yl]methylene}-2-oxo-2,3-dihydro-1h-indol-5-yl)methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione, sa preparation, et les formulations qui le contiennent |
| UA115388C2 (uk) | 2013-11-21 | 2017-10-25 | Пфайзер Інк. | 2,6-заміщені пуринові похідні та їх застосування в лікуванні проліферативних захворювань |
| MX2016010754A (es) | 2014-02-21 | 2017-03-03 | Principia Biopharma Inc | Sales y forma solida de un inhibidor btk. |
| WO2015155624A1 (en) | 2014-04-10 | 2015-10-15 | Pfizer Inc. | Dihydropyrrolopyrimidine derivatives |
| MX2016014143A (es) | 2014-04-30 | 2017-02-15 | Pfizer | Derivados de diheterociclo enlazado a cicloalquilo. |
| WO2016001789A1 (en) | 2014-06-30 | 2016-01-07 | Pfizer Inc. | Pyrimidine derivatives as pi3k inhibitors for use in the treatment of cancer |
| SG11201704808VA (en) | 2014-12-18 | 2017-07-28 | Principia Biopharma Inc | Treatment of pemphigus |
| CN104592143B (zh) * | 2015-01-23 | 2017-04-05 | 四川大学 | 一种噁唑烷酮类化合物的制备方法 |
| TW201718572A (zh) | 2015-06-24 | 2017-06-01 | 普林斯匹亞生物製藥公司 | 酪胺酸激酶抑制劑 |
| WO2017009751A1 (en) | 2015-07-15 | 2017-01-19 | Pfizer Inc. | Pyrimidine derivatives |
| PE20181017A1 (es) | 2015-08-31 | 2018-06-26 | Dong A Socio Holdings Co Ltd | Compuestos heteroarilo y su uso como farmacos terapeuticos |
| CN106928114B (zh) * | 2015-12-31 | 2020-07-28 | 韶远科技（上海)有限公司 | 含有脲基的环状手性氨基类化合物及其可放大工艺和用途 |
| IL293621B2 (en) | 2016-06-29 | 2023-09-01 | Principia Biopharma Inc | Modified release formulations of 2-[3-[4-amino-3-(2-fluoro-4-phenoxy-phenyl)pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-1-yl]piperidine-1-carbonyl]-4 -Methyl-4-[4-(oxane-3-yl)piperazine-1-yl)penta-2-ananitrile |
| KR20210068479A (ko) * | 2018-10-05 | 2021-06-09 | 아이크노스 사이언스 에스.에이. | Map4k1 억제제로서의 사용을 위한 인돌리논 화합물 |
| WO2023081923A1 (en) | 2021-11-08 | 2023-05-11 | Frequency Therapeutics, Inc. | Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof |
Family Cites Families (100)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL104796C (ru) | 1957-08-19 | |||
| DE878539C (de) | 1939-08-17 | 1953-06-05 | Hoechst Ag | Verfahren zur Herstellung von Methinfarbstoffen |
| US2622960A (en) * | 1948-03-16 | 1952-12-23 | A P W Products Company Inc | Glyoxal treatment of absorbent paper to improve wet strength |
| BE507136A (ru) | 1950-11-18 | |||
| BE553661A (ru) | 1955-12-23 | |||
| BE558210A (ru) | 1956-06-08 | |||
| NL251055A (ru) | 1959-04-29 | |||
| FR1398224A (fr) | 1964-05-06 | 1965-05-07 | Ici Ltd | Procédé de teinture de matières textiles de polyacrylonitrile |
| US3308134A (en) | 1965-10-22 | 1967-03-07 | Mcneilab Inc | Spiro(indan-2, 3'-indoline)-1, 2'-diones |
| US3551571A (en) | 1967-05-19 | 1970-12-29 | Endo Lab | Methods for reducing pain,reducing fever and alleviating inflammatory syndromes with heteroaromatic pyrrol-3-yl ketones |
| US3564016A (en) | 1968-03-07 | 1971-02-16 | Endo Lab | Method of decarbonylation |
| US4070366A (en) | 1968-06-12 | 1978-01-24 | Canadian Patents & Development Limited | Alkylation process |
| FR1599772A (ru) | 1968-09-17 | 1970-07-20 | ||
| US3922163A (en) | 1970-01-30 | 1975-11-25 | Upjohn Co | Organic compounds and process |
| US3715364A (en) | 1970-12-28 | 1973-02-06 | Merck & Co Inc | Nitroimidazole carboxamides |
| DE2159363A1 (de) | 1971-11-30 | 1973-06-14 | Bayer Ag | Antimikrobielle mittel |
| DE2159361A1 (de) | 1971-11-30 | 1973-06-14 | Bayer Ag | Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel |
| DE2159362A1 (de) | 1971-11-30 | 1973-06-14 | Bayer Ag | Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel |
| DE2159360A1 (de) | 1971-11-30 | 1973-06-14 | Bayer Ag | Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel |
| GB1384599A (en) | 1972-05-04 | 1975-02-19 | Colgate Palmolive Co | Coloured detergent compositions |
| JPS4918256A (ru) * | 1972-06-09 | 1974-02-18 | ||
| US3880871A (en) | 1973-09-27 | 1975-04-29 | Squibb & Sons Inc | Isothiocyanophenyl substituted imidazoles |
| US4002643A (en) | 1975-06-27 | 1977-01-11 | Mcneil Laboratories, Inc. | Preparation of β-acyl pyrroles |
| US4002749A (en) | 1975-08-12 | 1977-01-11 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Substituted indolinones |
| US4053613A (en) | 1975-09-17 | 1977-10-11 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | 1,3,thiazolinyl and 1,3 thiazinyl substituted indolinones |
| GR73560B (ru) | 1979-02-24 | 1984-03-15 | Pfizer | |
| US4376110A (en) | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| US4343923A (en) | 1980-08-07 | 1982-08-10 | Armstrong World Industries, Inc. | Process for reducing the acid dye uptake of polyamide textile materials with N-acylimidazole compound |
| CH646956A5 (de) | 1981-12-15 | 1984-12-28 | Ciba Geigy Ag | Imidazolide. |
| EP0095285A1 (en) | 1982-05-21 | 1983-11-30 | Sumitomo Chemical Company, Limited | N-acylimidazoles, their production and use |
| DE3310891A1 (de) | 1983-03-25 | 1984-09-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue indolinon-(2)-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte |
| US4489089A (en) | 1983-04-06 | 1984-12-18 | American Cyanamid Company | Substituted N-[ω-(1H-imidazol-1-yl)alkyl]-amides |
| DE3480392D1 (en) | 1983-04-29 | 1989-12-14 | Ciba Geigy Ag | Imidazolides and their use as curing agents for polyepoxides |
| DE3415138A1 (de) | 1984-04-21 | 1985-10-31 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | N-(azolylcarbamoyl)-hydroxylamine und diese enthaltende fungizide |
| DE3426419A1 (de) | 1984-07-18 | 1986-01-23 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue oxindol-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte |
| US4560700A (en) | 1985-02-08 | 1985-12-24 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Pyrrole-3-carboxylate cardiotonic agents |
| JPH078851B2 (ja) | 1985-07-29 | 1995-02-01 | 鐘淵化学工業株式会社 | ３−フエニルチオメチルスチレン誘導体 |
| US4966849A (en) | 1985-09-20 | 1990-10-30 | President And Fellows Of Harvard College | CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression |
| WO1993012786A1 (en) | 1986-07-10 | 1993-07-08 | Howard Harry R Jr | Indolinone derivatives |
| US4853404A (en) | 1986-10-13 | 1989-08-01 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Phenoxyacetic acid derivatives composition and use |
| WO1988007035A1 (en) | 1987-03-11 | 1988-09-22 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Hydroxystyrene derivatives |
| US5202341A (en) | 1987-03-11 | 1993-04-13 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Hydroxystyrene compounds having tyrosine kinase inhibiting activity |
| US5089516A (en) | 1987-03-11 | 1992-02-18 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | 1-phenyl-3,5-pyrazolidinedione hydroxystyrene compounds which have tyrosine kinase inhibiting activity |
| US5043348A (en) | 1987-04-24 | 1991-08-27 | Cassella Aktiengesellschaft | Pyrrolealdehydes, their preparation and their use |
| US5217999A (en) | 1987-12-24 | 1993-06-08 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase |
| DE3808071A1 (de) | 1988-03-11 | 1989-09-21 | Basf Ag | Verfahren zur herstellung von acylierten imidazolen |
| US4868304A (en) | 1988-05-27 | 1989-09-19 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Synthesis of nitrogen heterocycles |
| CA1339784C (en) | 1988-06-23 | 1998-03-31 | Shinya Inoue | Pyrrolecarboxylic acid derivatives |
| JPH06104658B2 (ja) | 1988-06-23 | 1994-12-21 | 三菱化成株式会社 | ピロールカルボン酸誘導体 |
| DE3824658A1 (de) | 1988-07-15 | 1990-01-18 | Schering Ag | N-hetaryl-imidazolderivate |
| GB8816944D0 (en) | 1988-07-15 | 1988-08-17 | Sobio Lab | Compounds |
| US5084280A (en) | 1988-12-15 | 1992-01-28 | Chapman Chemical Company | Wood preservation composition and method |
| DE3902439A1 (de) | 1989-01-27 | 1990-08-02 | Basf Ag | Pflanzenschuetzende mittel auf basis von 1-aryl- bzw. 1-hetarylimidazolcarbonsaeureestern |
| US5047554A (en) | 1989-04-18 | 1991-09-10 | Pfizer Inc. | 3-substituted-2-oxindole derivatives |
| DE69031649T2 (de) | 1989-07-25 | 1998-02-26 | Taiho Pharmaceutical Co Ltd | Oxoindolderivate |
| US5258357A (en) | 1989-10-07 | 1993-11-02 | Basf Aktiengesellschaft | Carboxamides, their preparation and their use as herbicides |
| CA2032421A1 (en) | 1989-12-20 | 1991-06-21 | Mitsubishi Chemical Corporation | Pyrrolealdehyde derivative |
| GB9004483D0 (en) | 1990-02-28 | 1990-04-25 | Erba Carlo Spa | New aryl-and heteroarylethenylene derivatives and process for their preparation |
| CA2012634A1 (en) | 1990-03-20 | 1991-09-20 | Hassan Salari | Tyrphostins for treatment of allergic, inflammatory and cardiovascular diseases |
| US5196446A (en) | 1990-04-16 | 1993-03-23 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase |
| US5302606A (en) | 1990-04-16 | 1994-04-12 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase |
| CH680293A5 (ru) * | 1990-06-26 | 1992-07-31 | Lonza Ag | |
| IT1247509B (it) | 1991-04-19 | 1994-12-17 | Univ Cagliari | Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus |
| US5480883A (en) | 1991-05-10 | 1996-01-02 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Bis mono- and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase |
| DE69222637T2 (de) | 1991-05-10 | 1998-02-26 | Rhone Poulenc Rorer Int | Bis mono- und bicyclische aryl- und heteroarylderivate mit inhibierender wirkung auf die egf und/oder pdgf-rezeptor tyrosinkinase |
| GB9115160D0 (en) | 1991-07-12 | 1991-08-28 | Erba Carlo Spa | Methylen-oxindole derivatives and process for their preparation |
| US5124347A (en) | 1991-07-31 | 1992-06-23 | Warner-Lambert Co. | 3-5-ditertiarybutylphenyl-4-hydroxymethylidene derivatives of 1,3-dihydro-2H-indole-2-ones as antiinflammatory agents |
| WO1993007751A1 (en) | 1991-10-18 | 1993-04-29 | Monsanto Company | Fungicides for the control of take-all disease of plants |
| US5389661A (en) | 1991-12-05 | 1995-02-14 | Warner-Lambert Company | Imidazole and 1,2,4-triazole derivatives with angiotensin II antagonist properties |
| US5322950A (en) | 1991-12-05 | 1994-06-21 | Warner-Lambert Company | Imidazole with angiotensin II antagonist properties |
| AU661533B2 (en) | 1992-01-20 | 1995-07-27 | Astrazeneca Ab | Quinazoline derivatives |
| FR2689397A1 (fr) | 1992-04-01 | 1993-10-08 | Adir | Utilisation des dérivés de la 3-(3,5-Ditert-Butyl-4-Hydroxybenzylidenyl) Indoline-2-one pour l'obtention de médicaments. |
| DE4211531A1 (de) | 1992-04-06 | 1993-10-07 | Cassella Ag | Verfahren zur Herstellung von Pyrrolderivaten |
| FR2694004B1 (fr) | 1992-07-21 | 1994-08-26 | Adir | Nouvelles 3-(Hydroxybenzylidényl)-indoline-2-ones et 3-(hydroxybenzylidényl)-indoline-2-thiones, leurs procédés de préparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. |
| US5565324A (en) | 1992-10-01 | 1996-10-15 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags |
| US5330992A (en) | 1992-10-23 | 1994-07-19 | Sterling Winthrop Inc. | 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones |
| GB9226855D0 (en) | 1992-12-23 | 1993-02-17 | Erba Carlo Spa | Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation |
| JP3507124B2 (ja) | 1993-05-26 | 2004-03-15 | 塩野義製薬株式会社 | ベンジリデン誘導体の製造法 |
| EP0632102B1 (de) | 1993-06-28 | 1997-04-02 | Bayer Ag | Massefärben von Kunststoffen |
| US5332736A (en) | 1993-11-01 | 1994-07-26 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Anti-convulsant aroyl aminoacylpyrroles |
| US5610173A (en) | 1994-01-07 | 1997-03-11 | Sugen, Inc. | Formulations for lipophilic compounds |
| GB9507298D0 (en) | 1995-04-07 | 1995-05-31 | Pharmacia Spa | Substituted indolylmethylene-oxindale analogues as tyrosine kinase inhibitors |
| US5880141A (en) | 1995-06-07 | 1999-03-09 | Sugen, Inc. | Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease |
| US5786488A (en) | 1996-11-13 | 1998-07-28 | Sugen, Inc. | Synthetic methods for the preparation of indolyquinones |
| JP3246712B2 (ja) | 1995-11-15 | 2002-01-15 | 株式会社トクヤマ | エテニルアミド化合物の製造方法 |
| DE19602525A1 (de) * | 1996-01-25 | 1997-08-07 | Starck H C Gmbh Co Kg | Sphärische Keramikformkörper, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie deren Verwendung |
| EP0788890A1 (en) | 1996-02-06 | 1997-08-13 | Agfa-Gevaert N.V. | Dyes and dye-donor elements for thermal dye transfer recording |
| CA2206201A1 (en) | 1996-05-29 | 1997-11-29 | Yoshiaki Isobe | Pyrazole derivatives and their pharmaceutical use |
| EP0923546B1 (de) | 1996-08-01 | 2003-11-26 | Merckle GmbH | Acylpyrroldicarbonsäuren und acylindoldicarbonsäuren sowie ihre derivate als hemmstoffe der cytosolischen phospholipase a2 |
| US6133305A (en) | 1997-09-26 | 2000-10-17 | Sugen, Inc. | 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity |
| IL139934A (en) | 1998-05-29 | 2007-10-31 | Sugen Inc | History 2 - Indulinone converted to pyrrole and pharmaceutical preparations containing them |
| US6462072B1 (en) | 1998-09-21 | 2002-10-08 | Gpi Nil Holdings, Inc. | Cyclic ester or amide derivatives |
| CA2354543A1 (en) | 1998-12-14 | 2000-06-22 | Cellegy Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for the treatment of anorectal disorders |
| JP2002532492A (ja) | 1998-12-17 | 2002-10-02 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | サイクリン−依存性キナーゼ、特にｃｄｋ２のインヒビターとしての４−アルケニル（及びアルキニル）オキシドール |
| TR200101745T2 (tr) * | 1998-12-17 | 2002-05-21 | F.Hoffmann-La Roche Ag | 4,5-Azolo-oksindoller |
| US6284894B1 (en) | 1998-12-18 | 2001-09-04 | Nycomed Imaging As | Preparation of allylic aromatic compounds |
| MY130363A (en) * | 2000-02-15 | 2007-06-29 | Sugen Inc | "pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors" |
| MY128450A (en) | 2000-05-24 | 2007-02-28 | Upjohn Co | 1-(pyrrolidin-1-ylmethyl)-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives |
| AR042586A1 (es) * | 2001-02-15 | 2005-06-29 | Sugen Inc | 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa |
| BR0307721A (pt) * | 2002-02-15 | 2005-01-25 | Upjohn Co | Processo para preparação de derivados de indolinona |
-
2002
- 2002-02-14 AR ARP020100509A patent/AR042586A1/es unknown
- 2002-02-15 AU AU2002247133A patent/AU2002247133B2/en not_active Ceased
- 2002-02-15 TW TW091102595A patent/TWI324155B/zh not_active IP Right Cessation
- 2002-02-15 EA EA200300793A patent/EA007186B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-02-15 CA CA2438314A patent/CA2438314C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-15 JP JP2002565978A patent/JP3677501B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-15 UA UA2003087745A patent/UA75635C2/uk unknown
- 2002-02-15 RS YUP-717/03A patent/RS51026B/sr unknown
- 2002-02-15 US US10/076,140 patent/US6653308B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-15 KR KR1020037010772A patent/KR100884858B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-02-15 DK DK02714897T patent/DK1370554T3/da active
- 2002-02-15 NZ NZ527572A patent/NZ527572A/en unknown
- 2002-02-15 SK SK1133-2003A patent/SK11332003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2002-02-15 OA OA1200300211A patent/OA12834A/en unknown
- 2002-02-15 DE DE60206736T patent/DE60206736T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 CZ CZ20032414A patent/CZ20032414A3/cs unknown
- 2002-02-15 EP EP02714897A patent/EP1370554B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 AT AT02714897T patent/ATE307128T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-02-15 AP APAP/P/2003/002836A patent/AP1718A/en active
- 2002-02-15 HU HU0303146A patent/HUP0303146A3/hu unknown
- 2002-02-15 ES ES02714897T patent/ES2251580T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 BR BR0207494-0A patent/BR0207494A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-02-15 GE GE5287A patent/GEP20053600B/en unknown
- 2002-02-15 WO PCT/US2002/004407 patent/WO2002066463A1/en active IP Right Grant
- 2002-02-15 SI SI200230238T patent/SI1370554T1/sl unknown
- 2002-02-15 CN CNB028066804A patent/CN100338059C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-15 PL PL02364176A patent/PL364176A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2002-02-15 IL IL15741802A patent/IL157418A0/xx active IP Right Grant
- 2002-02-15 MX MXPA03007367A patent/MXPA03007367A/es active IP Right Grant
- 2002-02-15 MY MYPI20020528A patent/MY126235A/en unknown
- 2002-02-15 EE EEP200300385A patent/EE200300385A/xx unknown
- 2002-02-15 PE PE2002000134A patent/PE20021006A1/es not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-07-08 TN TNPCT/US2002/004407A patent/TNSN03055A1/en unknown
- 2003-08-14 HR HR20030657A patent/HRP20030657B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2003-08-14 ZA ZA2003/06335A patent/ZA200306335B/en unknown
- 2003-08-14 IL IL157418A patent/IL157418A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-08-14 IS IS6913A patent/IS2411B/is unknown
- 2003-08-14 NO NO20033608A patent/NO326604B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-08-14 CR CR7056A patent/CR7056A/es unknown
- 2003-08-15 MA MA27282A patent/MA26997A1/fr unknown
- 2003-08-15 BG BG108098A patent/BG108098A/bg unknown
- 2003-09-08 US US10/656,907 patent/US7179910B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-03-25 HK HK04102229A patent/HK1059621A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2004-07-14 ZA ZA200405615A patent/ZA200405615B/en unknown
-
2006
- 2006-08-28 US US11/511,981 patent/US7256189B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-07-18 US US11/779,807 patent/US7582756B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA007186B1 (ru) | Производные 3-(4-амидопиррол-2-илметилиден)-2-индолинона в качестве ингибиторов протеинкиназ | |
| ES2290117T3 (es) | Inhibidores de proteina quinasa 2-indolina sustituida con pirrol. | |
| US7053086B2 (en) | 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors | |
| AU2002247133A1 (en) | 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors | |
| US7053114B2 (en) | Prodrugs of a 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |