EA006018B1

EA006018B1 - Штамм молочно-кислых бактерий laktobacillus brevis cd2 dsm11988, синтезирующий аргининдезиминазу, и применение указанного штамма и других бактерий, синтезирующих данный фермент, для индукции апоптоза и/или уменьшения воспалительной реакции, и фармацевтическая композиция, содержащая такие бактерии

Info

Publication number: EA006018B1
Application number: EA200000856A
Authority: EA
Inventors: Клаудио Де Симоне
Original assignee: Атьял Фармасеутика Лда
Priority date: 1998-02-20
Filing date: 1998-10-13
Publication date: 2005-08-25
Also published as: US7147847B2; EP1058725A1; PT1058725E; KR100594569B1; US20030215429A1; CA2321263C; ES2303357T3; WO1999042568A1; SI1058725T1; DE69839351D1; ZA9811619B; CN1189560C; JP4253439B2; AU9644198A; BR9815677A; ATE391774T1; ITRM980103A0; CY1108112T1; DK1058725T3; DE69839351T2

Abstract

Раскрывается штамм молочно-кислых бактерий Lactobacillus brevis, синтезирующий аргининдезиминазу. Также раскрывается применение бактерий Lactobacillus brevis, экспрессирующих активность аргининдезиминазы, для индукции апоптоза и/или уменьшения воспалительной реакции, и фармацевтические или диетические композиции, содержащие такие бактерии.

Description

Настоящее изобретение относится к штамму Ьас1оЬас111из Ьгсу13. в большой степени наделенному аргининдезиминазой. Изобретение также относится к применению бактерий, наделенных аргининдезиминазой, для индукции апоптоза и/или уменьшения воспалительной реакции и фармацевтическим или диетическим композициям, которые содержат такие бактерии.

Баланс между клеточными популяциями в организме можно контролировать путем регуляции скорости пролиферации, или дифференцировки, или гибели составляющих клеток (СоШиз, М.К.Ь. е1 а1. А.Тгепбз ВюсНет. 8с1. 18:307, 1993). Гибель клеток во время эмбриогенеза, метаморфоза, гормонзависимой атрофии тканей и нормального оборота тканей относится к запрограммированной гибели клеток. В большей степени это явление происходит в результате апоптоза - процесса, который характеризуется конденсацией и сегментацией ядра, конденсацией и фрагментацией цитоплазмы и часто фрагментацией хромосомной ДНК в нуклеосомные единицы (8с11\\'аг1х. Ь.М. е1 а1. 1ттипо1. Тобау 14:582, 1993). В развитии млекопитающих апоптоз часто происходит тогда, когда клетки не получают внеклеточные сигналы к выживанию, необходимые для подавления внутриклеточной программы самоуничтожения; факторы выживания могут продуцироваться окружающими клетками другого типа (паракринный механизм) или того же типа (аутокринный механизм). Апоптоз имеет место во время эмбрионального развития, в частности, в сложных органах, где уничтожается определенная клеточная субпопуляция. Например, многие нейроны перемещаются в мозге во время развития наподобие того, как аутореактивные Т-лимфоциты удаляются из тимуса. У взрослых апоптоз происходит, в частности, в тканях, которые подвергаются обратимому увеличению таких, как гормонзависимые клетки молочной железы и простаты, после удаления гормона или после цитокинзависимого развития гематопоэтических клеток в костном мозге.

Широко изучены и описаны изменения, которые происходят в клетке во время апоптоза (Сойеп, 1.1. е1 а1. ЬаЬ. С1ш. Меб. 124:761, 1994). Апоптоз четко отличается от некроза, который соответствует изменениям, имеющим место, когда гибель клетки происходит в результате повреждения клетки. Фактически при некрозе поврежденные клетки набухают и разрываются, высвобождая их внутриклеточное содержимое, которое является токсичным по отношению к другим клеткам ткани, и запуская воспалительную ответную реакцию. В противоположность этому, фагоцитоз апоптотических тел происходит так быстро, что он не индуцирует распространение клеточного содержимого во внутриклеточном пространстве, в противном случае это вызывало бы перифокальное воспаление, типичное для некроза.

Недавно полученное в эксперименте доказательство указывает на то, что изменение выживаемости клеток вносит свой вклад в патогенез многих заболеваний человека, включая рак, вирусные заболевания, аутоиммунные заболевания, нейровегетативные нарушения и СПИД (Тйотрзоп, С.В. 8с1епсе 267:1456, 1995). Лечение, направленное на специфическое изменение апоптоза, может модифицировать естественное прогрессирование некоторых из этих заболеваний. Как химиотерапевтические агенты, так и облучение индуцируют гибель опухолевых клеток, в основном, вызывая повреждение ДНК, которое, в свою очередь, приводит к самоуничтожению клетки. Кроме того, многие опухоли сохраняют некоторые системы контроля физиологической гибели клеток, которые характерны для клеток, из которых они происходят. Например, рак простаты и рак молочной железы, соответственно, являются андроген- и эстрогензависимыми. Следовательно, антиандрогенная терапия при лечении рака простаты или удаление эстрогенов с помощью антиэстрогенов, таких как тамоксифен, при лечении рака молочной железы являются основными и общепринятыми методами. Оба эти метода индуцируют апоптоз в опухолевых клетках, выживаемость которых в противном случае зависит от андрогенов или эстрогенов. Кроме того, лечебные эффекты глюкокортикоидов, наблюдаемые у субъектов с лимфоидной лейкемией, можно отнести за счет индукции апоптоза; другие вещества, используемые для химиотерапии рака, такие как циклофосфамид, метотрексат, эторосид и цисплатина, индуцируют апоптоз в опухолевых клетках (Тйайе, и. е1 а1. ЛрорЮчз. Эгидз 54:511, 1997).

В предварительных исследованиях было показано, что молочно-кислые бактерии, находящиеся в продуктах питания и/или диетических/фармацевтических композициях, могут вызывать временное заселение в кишечнике и иметь целебное действие. Выживание во время прохождения через кишечник или адгезия к эпителию является важной при модификации иммунного ответа у хозяина (БсЫГГгш, ЕЛ. е1 а1. Ат. 1. СБп. ΝιιΙγ. 66:5153, 1997). Потенциально лечебные эффекты молочно-кислых бактерий включают в себя защиту от кишечных инфекций, стимуляцию выработки 1дА и ингибирование роста кишечных карцином, усиление активности 1дА, Т-клеток и макрофагов (Регб1доп, О. е1 а1. 1. Оаиу 8сг 78:1597, 1995). В условиях ίη У11го молочно-кислые бактерии проявляют способность стимулировать выработку альфаΕΝΕ, интерлейкина (1Ь)-6 и 1Ь-10 в части одноядерных клеток человека до уровня даже выше, чем выявлено при использовании липополисахарида (БР8) в качестве стимулирующего агента, подтверждая стимулирующее действие на неспецифический иммунитет у хозяина (М1е11шеп, М. е1 а1. 1пГес1. 1ттип. 64:5403, 1996). Было показано также, что молочно-кислые бактерии способны абсорбировать ίη уйго мутагенные вещества, присутствующие в продуктах питания после кулинарной обработки, подтверждая тем самым наблюдение, что введение молочно-кислых бактерий человеку снижает выделение мутагенного вещества после потребления жареного мяса и, таким образом, риск возникновения рака ободочной кишки (Ь1бЬеск, А. е1 а1. Еиг. 1. Сапсег Ргеу. 1:341, 1992). Эксперименты, проведенные с целью оценки влияния сквашенного с помощью ВШбоЬас1егшт ίηΓηηΙίκ, ВШбоЬас1егшт ЬШбит, ВШбоЬас1егшт апгтаПз, ЕасЮЬасШиз ааборШиз или ЕасЮЬасШиз рагасазе! молока на рост опухолевых клеток рака мо

- 1 006018 лочной железы МСЕ7, показали, что различные молочно-кислые продукты способны, хотя и в разной степени, ингибировать рост опухолевых клеток. Антипролиферативное действие не может быть связано с присутствием молочно-кислых бактерий в молочно-кислом продукте, с молоком или его отдельными фракциями, гипотезой является присутствие растворимого соединения, образуемого ех ηονο из молочнокислых бактерий во время ферментации молока, или трансформация под действием микроорганизмов некоторых компонентов молока в биологически активную форму (Βίίίϊ, А. е! а1. ΝιιΙγ. Сапсег 28:93, 1993).

Многие микроорганизмы используют аргинин в качестве источника углерода, азота и энергии. Аргининдезиминаза трансформирует аргинин в присутствии воды в цитруллин и аммиак. Эта ферментативная реакция встречается у различных патогенных и потенциально патогенных бактерий, таких как Ркеиботопак 5р. и ВасШи5 5р., и у некоторых типов микоплазм. Было показано, что эта система играет роль в экологии ротовой полости, в защите менее устойчивых к кислоте микроорганизмов во время снижения рН до 4 или даже более низких значений, в образовании зубного налета, во время гликолиза, вызванного бактериями, которые более резистентны к кислотности (Сштап, Т.М. Арр1. Εηνίτοη МктоЬю, 61:4494, 1995).

Были проведены исследования с аргининдезиминазой, которую можно получить из микоплазм, чтобы использовать при лечении рака (Такаки, Н. е! а1. 1рп. 1. Сапсег Ре5. 1:840, 1995). Микоплазмы являются микроорганизмами, которые близки к бактериям и которые, в отличие от последних, теряют клеточную стенку, и геном которых составляет примерно 1/6 генома Ε. сой; однако они могут быть патогенными для человека, животных и растений и, кроме того, ими трудно манипулировать ввиду отсутствия клеточной стенки. Таким образом, была осуществлена очистка фермента аргининдезиминазы, получаемого из микоплазм, который ведет себя как иммуноген и который не свободен от нежелательных эффектов при использовании ίη νί\Ό (МсСатгйу, 1.С. е! а1. И8-А-5 372942). Другие микроорганизмы, наделенные аргининдезиминазой (такие, например, как Р5еиботопа5 5р. и ВасШи5 5р.), нельзя использовать вследствие их потенциальной патогенности и пирогенности.

В настоящее время заявители неожиданно обнаружили, что некоторые бактерии богаты аргининдезиминазой, в частности грамположительные бактерии и некоторые грамотрицательные бактерии, и также некоторые штаммы молочно-кислых бактерий, в частности виды Ьас1оЬасШи5 Ьге\т5 или Ьас1оЬасШи5 ГеттеШит, особенно штамм Ьас1оЬасШи5 Ь^еν^5, относящийся к СЭ2. депонированный в Э8М - немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур СтЬН, Виг^-Мск, Германия, под номером Э8М 11988, способны индуцировать апоптоз, и, следовательно, их можно использовать для профилактики или лечения в клинических ситуациях, характеризующихся недостатком или отсутствием апоптоза или воспалением.

Неожиданно было обнаружено наличие у вышеуказанных бактерий аргининдезиминазы, способной индуцировать апоптоз, и их можно использовать как таковые или после приемлемой лиофилизации, или также после обработки ультразвуком. Действительно, согласно настоящему изобретению эти бактерии могут быть живыми или обработанными ультразвуком, и концентрация их может колебаться от 1х10 КОЕ до 1х10 КОЕ на грамм композиции, в зависимости от желаемого эффекта и количества аргининдезиминазы, которое они содержат. Те же бактериальные штаммы можно использовать для ослабления или полного прекращения воспалительной реакции, вызываемой окисью азота (N0). N0, которая синтезируется из Ьаргинина при участии синтазы окиси азота (N08), является внутри- и внеклеточным медиатором с многочисленными биологическими эффектами. Изменения в уровне активности синтазы N0 лежат в основе других многочисленных физиопатологических нарушений, таких как артериальная гипертония, почечная недостаточность, септический шок, расширение сосудов, вызванное гипоксией, спазм сосудов в результате субарахноидального кровотечения, деструкция нейронов при сосудистом инфаркте и другие нейродегенеративные нарушения, хронические воспалительные патологические процессы, анафилаксия и иммунодефицит. Аргининдезиминаза превращает аргинин в цитруллин и ΝΗ₃ без образования окиси азота и, следовательно, может оказывать противовоспалительное и лечебное или корригирующее действие, например, при нарушении всасывания в кишечнике и недостаточности поджелудочной железы с модуляцией, например, состояния метаболизма и питания у субъекта. В качестве неограничивающего примера можно привести такое, например, действие, как снижение уровней оксалатов и/или фосфатов в крови и моче.

Неограничивающими примерами заболеваний и нарушений, которые можно лечить и/или предупреждать при использовании бактерий, которые богаты аргининдезиминазой, являются опухоли вообще и, в частности, рак ободочной-прямой кишки, рак печени, глиома, нейробластома, чешуйчатая карцинома ротовой полости, лимфоидные опухоли, рак простаты, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак плевры и брюшины, тяжелая миастения, системная красная волчанка и другие аутоиммунные заболевания, включая таковые щитовидной железы, заболевания, характеризующиеся острым и/или хроническим воспалением, бронхиальная астма, воспалительные заболевания кишечника, гастриты, дуодениты, язвы желудка, язвы двенадцатиперстной кишки, пневмонии и плевриты, инфекции, возбудителями которых являются аденовирусы, бакуловирусы и вообще вирусы, заболевания, характеризующиеся острым и/или хроническим воспалительным и/или дегенеративным процессом в центральной и/или периферической нервной системе, панкреатит, эндомиокардиты и ишемическое нарушение (миокарда, сетчатки, мозга и почек), уролитиазы, нефрокальцинозы, гипероксалурия, гиперфосфатурия, нефротическое изменение в системном и/или региональном артериальном и/или венозном давлении, такое как портальная гипертен-зия, вагинозы и вагиниты, проктогеморроидальные воспаления, простатиты, синуситы и отиты, конъюнктивиты, гингивиты, периодонтопатия, анафилактические явления и иммунодефициты.

- 2 006018

Такие микроорганизмы, которые богаты аргининдезиминазой, можно использовать в отдельности или в сочетании друг с другом или с другими молочно-кислыми бактериями, такими как Ьас1оЬасШи8 ас1борЫ1и8, Ьас1оЬасШи8 Ьисйпсп. Ьас1оЬасШи8 сахек Ьас1оЬасШи8 са1епа£огте, Ьас1оЬасШи8 се11оЬю8И8. Ьас1оЬасШи8 сгкраШх. Ьас1оЬасШи8 сигуа1и8. БасЮЬасШих бе1Ьтиескп. Ьас1оЬасШи8 )еп5спп. Ьас1оЬасШи8 1с1с1ипапп. Ьас1оЬасШи8 шши1и8. БасЮЬасШщ ркнИагит. Ьас1оЬасШи8 годозае. БасЮЬасШих заНуапш. В1йбоЬас1етшт або1е8сеп1щ. В1йбоЬас1егшт апди1а1ит. В1йбоЬас1егшт ЬШбит. В1йбоЬас1егшт Ьгехе. В1йбоЬас1егшт саΐеηи1аΐит, В1йбоЬас1егшт бепйит. В1йбоЬас1егшт епсюпн. В1йбоЬас1епит ίηΓηηΐίκ. В1йбоЬас1егшт 1опдит. В1йбоЬас1егшт ркнИагит. В1йбоЬас1егшт р8еибоса1епи1а1ит. ВгйбоЬас1егшт р5еибо1опдит. §1гер1ососси8 1ас1к. §1тер1ососси8 гаГГшо1асШ. §1тер1ососси8 1йегторЫ1и8. АсИотшососсиз ГегтеШа. СуЮркада ГеттеШапз ВйобоГегах ГегтеШанх. Се11и1отопа§ ГеттеШапз и 2утотопа§ тоЬПк.

Бактерии согласно настоящему изобретению можно использовать также в сочетании с аргининдезиминазой. сфингомиелиназой или другими ферментами. с кортизоном. противовоспалительными. иммуномодулирующими. цитостатическими. иммунологическими. эндокринными. сосудистыми. обезболивающими и сосудорасширяющими препаратами. факторами роста. цитокинами. церамидами. витаминами и минеральными веществами. липидами. аминокислотами и углеводородами. лекарственными формами для кишечного использования и диетическими. пребиотическими и пробиотическими добавками и с наполнителями. обычно используемыми в фармацевтической промышленности или в области производства пищевых/диетических продуктов. Предпочтительной формой назначения является пероральное введение. но возможны также и местное. ректальное. интраназальное или парентеральное введения. Таким образом. композиция согласно изобретению может быть в виде пилюль или таблеток. капсул. гранул. суппозиториев. эмульсий. суспензий. наклеивающихся пластырей. кремов. мазей. аэрозолей. глазных примочек. полосканий для рта и гигиенического средства.

В представленных ниже неограничивающих иллюстративных примерах настоящее изобретение будет продемонстрировано в деталях.

Пример 1. Индукция апоптоза в различных клеточных системах.

Использовали клетки

1. Нормальные:

РВЬ (лимфоциты периферической крови человека)

Н827 (нормальные фибробласты человека)

НаСаТ (стабильные нормальные кератиноциты человека)

2. Опухолевые:

1итка1 (Т-клеточная лейкемия человека)

Р815 (мышиная мастоцитома)

1744 (мышиные опухолевые макрофаги)

Клетки культивировали в подходящей среде с сывороткой (10%) при 37°С (5% СО₂) в течение 18-72 ч в присутствии или в отсутствие обработанных ультразвуком препаратов Ь. Ьгеук в забуференном фосфатом физиологическом растворе (конечная концентрация клеточных суспензий: 100 мг/10 мл). В конце инкубирования клетки подсчитывали и определяли жизнеспособность на основе отсутствия окрашивания трипановым синим. Возможную индукцию апоптотической гибели клеток. обработанных бактериями. определяли на основе морфологии под световым микроскопом после окрашивания гематоксилин/эозином.

окрашивания акридиновым оранжевым/бромистым этидиумом. регистрируемого с помощью флуоресцентной микроскопии и цитофлуориметрии. и регистрации фрагментации ДНК с помощью электрофореза ДНК в агарозовом геле.

Таблица 1

Апоптоз. %

	Контроли	Ь. Ьгехк (СЭ2)
РВЬ	0	0
Н827	0	0
НаСаТ	0	0
1итса1	2-3	15-20
Р815	0	1-3
1744	о	1-3

Представленные выше данные четко указывают. что обработка в течение 14-18 ч обработанными ультразвуком бактериями согласно изобретению в значительной степени определяет индукцию апоптоза в опухолевых клетках. в то время как в нормальных анализированных клеточных системах она не приводит к возникновению какого-либо эффекта.

Пример 2. Демонстрация присутствия аргининдезиминазы в бактериальных штаммах.

Определяли активность аргининдезиминазы в некоторых бактериальных штаммах на основе превращения в водном растворе меченого аргинина в цитруллин и ИН₃. Наличие соответствующих ингибиторов (хлоргидрата метилового эфира Ь-И-нитроаргинина и Ь-валина). способных специфично ингиби

- 3 006018 ровать другие ферменты, которые участвуют в превращении аргинина (синтаза окиси азота и аргиназа, соответственно), дает возможность отнести определяемую ферментативную активность только за счет аргининдезиминазы, а не других ферментов. Кроме того, использование специфического ингибитора аргининдезиминазы (формамидина) дает возможность подтвердить правильность результатов.

Таблица 2

Активность аргининдезиминазы, выраженная в пмоль бразованного радиоактивного цитруллина/мг бактериального белка в минуту

Штамм бактерий	пмоль цитруллина/мг белка/мин
Ь. Ьгс\35 ΟΌ2	6,72
Ь. ГегшеШиш	0,46
Ь. са§е1	0,13
Ь. ас1борЫ1и8	0,002
Ь. р1ап!агит	0,05
В .ШПбит	0,03
8. ШегторШШх	0,020

Бактериальные штаммы считаются полезными для целей настоящего изобретения, если они характеризуются значениями выше, чем 0,1 пмоль цитруллина/мг бактериального белка/мин.

Присутствие ингибиторов синтазы окиси азота (Ь-ΝΑΜΕ, Ь-нитромонометиларгинин) или аргиназы (Ь-валин) ни в коей мере не влияет на ферментативную активность превращения аргинина в цитруллин, давая, таким образом, возможность отнести образование цитруллина, наблюдаемое в присутствии различных бактерий, к аргининдезиминазе. Кроме того, отсутствие в аналитической системе кальция и калмодулина, которые являются необходимыми для проявления активности конституциональной синтазы окиси азота, ни в коей мере не изменяет активность превращения аргинина у бактерий, дополнительно подтверждая, что ферментом, ответственным за последнее, является аргининдезиминаза.

Результаты, представленные ниже, показывают, что активность аргининдезиминазы, определенная у данных бактерий, способна дополнительно полностью ингибировать как активность конституциональной синтазы окиси азота (N08), так и таковую индуцибельной N08. возможно потому, что ее присутствие лишает субстрата (аргинина) различные формы синтазы окиси азота. Для этой цели экстракты мозжечка крыс и перитонеальные макрофаги крыс, стимулированные ίη νίίτο липополисахаридом Ε. сой (100 мг/мл) и интерфероном (100 Е/мл), соответственно, использовали в качестве положительных контролей для конституциональной N08 и для индуцибельной N08.

Таблица 3

Активность конституциональной и индуцибельной синтазы окиси азота и аргининдезиминазы

Проба	Цитруллин, пмоль/5 мкл
Мозжечок	0,24
Мозжечок + Б^АМЕ	0,01
Мозжечок + кальциевый хелатирующий агент	(ЕСТА) 0,01
Мозжечок + больше ингибитора калмодулина	(№13) 0,01
Мозжечок + Ь. ЬгетЕ ΟΌ2 (5 мкг)	0,72
Мозжечок + Ь. ЬгетЕ ΟΌ2 + Б^АМЕ	0,8
Мозжечок + Ь. ЬгетЕ ΟΌ2 + ЕСТА	0,74
Мозжечок + Ь. ЬгетЕ ΟΌ2 + №13	0,76
Мозжечок + Ь. ГегшеШиш (30 мкг)	0,38
Мозжечок + Ь. ГегшеШиш + Б^АМЕ	0,4
Мозжечок + Ь. ГегшеШиш + ЕСТА	0,4
Мозжечок + Ь. ГегшеШиш + №13	0,39
Необработанные макрофаги	0
Макрофаги + БР8 + IΕN	0,32
Макрофаги + БР8 + IΕN + Б^АМЕ	0
Макрофаги + Б. ЬгетЕ ΟΌ2 (5 мкг)	0,76
Макрофаги + Б. ЬгетБ ΟΌ2 + Б^АМЕ	0,78
Макрофаги + БР8 + IΕN + Б. ЬгетЕ ΟΌ2	0,81
Макрофаги + БР8 + IΕN + Б. ЬгетБ ΟΌ2 + Б^АМЕ	0,82
Макрофаги + Б. ГегтепШт (30 мкг)	0,4
Макрофаги + Б. ГегтепШт + Б^АМЕ	0,41
Макрофаги + БР8 + IΕN + Б. ГегтепШт	0,42
Макрофаги + БР8 + IΕN + Б. ГегтепШт + Б^АМЕ	0,4

- 4 006018

Становится очевидным, что не все бактерии обладают ферментативной активностью аргининдезиминазы на значительном уровне, пригодной для целей настоящего изобретения (табл. 2), и что штаммы, наделенные ею, ингибируют как конституциональную N08, так и индуцибельную N08, что подтверждается постоянным наличием высоких концентраций цитруллина, даже в присутствии специфических ингибиторов N08 двух типов (табл. 3).

Пример 3.

Лечили 4 пациентов, страдающих воспалением дивертикула, неспецифического воспаления резервуара повздошной кишки, которое чаще всего осложняется при длительном течении проявлением илеоано-анастомоза, вызывающего язвенный колит. Недавно предположили, что воспаление дивертикула является результатом воспаления, осуществляемого при участии N0. Субъектов-добровольцев лечили в течение 2 месяцев лиофилизированным препаратом Ь. Ьгеу18 СЭ2 в концентрации 5х10¹⁰ КОЕ/г через рот в дозе 6 г/день. До и после лечения брали пробы биопсии со слизистой дивертикула, которую подвергли гомогенизации, и затем определили цитруллин с помощью анализа превращения меченого аргинина в цитруллин.

Таблица 4 Влияние лечения СЭ2 на активность индуцибельной синтазы окиси азота в пробах биопсии кишечника от пациентов с воспалением дивертикула

	Цитруллин, пмоль/мг белка/мин
Пациенты	ТО	Т1
1	2,95	0,89
2	1,15	0,56
3	0,56	0,5
4	0,47	0,28
5	0,7	0,5

Лечение с СЭ2 привело к значительному снижению активности индуцибельной синтазы окиси азота.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Штамм молочно-кислых бактерий ЬасЮЬасШик Ьгеу18 СЭ2 Ό8Μ 11988, отличающийся активностью аргининдезиминазы, выраженной в пикомолях цитруллина/мг бактериальных белков/мин, не менее 0,1.
2. Применение штамма молочно-кислых бактерий ЬасФЬасШик Ьгеугк СЭ2 по п.1 отдельно или в сочетании с грамположительными и/или грамотрицательными бактериями, наделенными аргининдезиминазой, и/или в сочетании с аргининдезиминазой, сфингомиелиназой или другими ферментами, с кортизоном, противовоспалительными, иммуномодулирующими, цитостатическими, эндокринными, сосудистыми, обезболивающими и сосудорасширяющими препаратами, факторами роста, цитокинами, церамидами, витаминами и минералами, липидами, аминокислотами и углеводами, лекарственными формами для кишечного использования и диетическими, пребиотическими или пробиотическими добавками и фармацевтически и диетически приемлемыми наполнителями, для получения фармацевтической или диетической композиции, способной индуцировать апоптоз, и/или уменьшать воспалительную реакцию, и/или вызывать лечебный эффект при нарушении всасывания в кишечнике и недостаточности поджелудочной железы с изменением состояния метаболизма и/или питания у субъекта, который нуждается в соответствующем лечении.
3. Применение по п.2 для профилактики и лечения опухолей, в частности рака ободочной и прямой кишки, рака печени, глиомы, нейробластомы, чешуйчатой карциномы ротовой полости, лимфоидных опухолей, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака плевры и брюшины, тяжелой миастении, системной красной волчанки и других аутоиммунных заболеваний, в том числе заболеваний щитовидной железы, заболеваний, характеризующихся острым и/или хроническим воспалением, бронхиальной астмы, воспалительных заболеваний кишечника, гастритов, дуоденитов, язв желудка, язв двенадцатиперстной кишки, пневмоний и плевритов, вирусных инфекций, в том числе аденовирусных, бакуловирусных и др., заболеваний, характеризующихся острым и/или хроническим воспалительным и/или дегенеративным процессом в центральной и/или периферической нервной системе, панкреатитов, эндомиокардитов и ишемического нарушения (миокарда, сетчатки, мозга и почек), уролитиазов, нефрокальцинозов, гипероксалурии, гиперфосфатурии, изменения в системном и/или региональном артериальном и/или венозном давлении нефротической природы, такого как портальная гипертензия, вагинозов и вагинитов, проктогеморроидальных воспалений, простатитов, синуситов и отитов, конъюнктивитов, гингивитов, периодонтопатии, анафилактических явлений и иммунодефицитов.
4. Применение по любому из пп.2 и 3, согласно которому штамм ЬасФЬасШик Ьгеу18 СЭ2 используют совместно с молочно-кислыми бактериями, выбранными из группы, включающей в себя Ьас!оЬасШик ас1борЫ1и8, ЬасЮЬасШик Ьисйпсп. ЬасЮЬасШик сакец ЬасЮЬасШик са!епаГогше, Ьас!оЬасШи8 се11оЬю8И8, ЬасФЬасШик спкраФк, ЬасФЬасШик сигуаФк, ЬасЮЬасШик бе1Ьгиескп, ЬасФЬасШик _)еп8еип, Ьас!о- 5 006018

ЬасШик Ιαοΐιιηαηίί. Ьас1оЬасШик шшцФк, Ьас1оЬасШи8 р1ап!агит, Ьас1оЬасШик годокае, Ьас1оЬасШи8 кайуапик, В1ййоЬас1епцт айо1ексепйк, ВШйоЬас1егшт апдц1а1ит, ВШйоЬас1егшт Ыййит, ВШйоЬас1егшт Ьгеуе, ВШйоЬас1егшт са1епи1а1ит, В1ййоЬас1егшт йепйит, ВШйоЬас1егшт епскошг В1ййоЬас1егшт ίηГапОк, В1ййоЬас1егшт 1опдит, В1ййоЬас1епит р1ап!агит, В1ййоЬас1епит ркеийоса1епц1а1ит, В1ййоЬас1епит ркеийо1опдцт, 8!гер1ососсик 1асйк, 81гер1ососсик гаГйпо1асйк, 8!гер1ососсик 1йегторЫ1ик, ЛсИоттососсик ГегтеШа, СуЮрйада ГегтеШапк, ККойоГегах Гегтеп!апк, Се11и1отопак Гегтеп!апк и 2утотопак тоЬ1118.
5. Применение по любому из пп.2-4, согласно которому бактерии являются лиофилизированными или обработанными ультразвуком.
6. Фармацевтическая композиция, содержащая такое количество молочно-кислых бактерий по п.1, а также наделенных аргининдезиминазой грамположительных и грамотрицательных бактерий, или аргининдезиминазу, сфингомиелиназу, или другие ферменты, кортизон, противовоспалительные, иммуномодулирующие, цитостатические, эндокринные, сосудистые, обезболивающие и сосудорасширяющие препараты, факторы роста, цитокины, церамиды, витамины и минералы, липиды, аминокислоты и углеводороды, лекарственные формы для кишечного использования и диетические, пребиотические или пробиотические добавки и фармакологически и диетически приемлемые наполнители, которые эффективны для индукции апоптоза, и/или уменьшения воспалительной реакции, и/или оказания лечебного действия при нарушении всасывания в кишечнике и недостаточности поджелудочной железы с изменением состояния метаболизма и/или питания у субъекта, который нуждается в соответствующем лечении, причем указанную композицию можно вводить энтерально, местно, ректально, интраназально или парентерально для индукции апоптоза и/или уменьшения воспалительной реакции.
7. Композиция по п.6, содержащая лиофилизированные или обработанные ультразвуком бактерии.
8. Композиция по любому из пп.6-7, в которой концентрация бактерий составляет от 1х 10¹ КОЕ до 1х10¹³ КОЕ на грамм композиции.
9. Применение композиции по любому из пп.6-8 для профилактики и лечения опухолей, в частности рака ободочной и прямой кишки, рака печени, глиома, нейробластомы, чешуйчатой карциномы ротовой полости, лимфоидных опухолей, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака плевры и брюшины, тяжелой миастении, системной красной волчанки и других аутоиммунных заболеваний, в том числе заболеваний щитовидной железы, заболеваний, характеризующихся острым и/или хроническим воспалением, бронхиальной астмы, воспалительных заболеваний кишечника, гастритов, дуоденитов, язв желудка, язв двенадцатиперстной кишки, пневмонии и плевритов, вирусных инфекций, в том числе аденовирусных, бакуловирусных и др. заболеваний, характеризующихся острым и/или хроническим воспалительным и/или дегенеративным процессом в центральной и/или периферической нервной системе, панкреатитов, эндомиокардитов и ишемического нарушения (миокарда, сетчатки, мозга и почек), уролитиазов, нефрокальцинозов, гипероксалурии, гиперфосфатурии, изменения в системном и/или региональном артериальном и/или венозном давлении нефротической природы, такого как портальная гипертензия, вагинозов и вагинитов, проктогеморроидальных воспалений, простатитов, синуситов и отитов, конъюнктивитов, гингивитов, периодонтопатии, анафилактических явлений и иммунодефицитов.
10. Применение по п.9, согласно которому используют молочно-кислые бактерии, выбранные из группы, включающей в себя ЬасФЬасШик аайорййик, ЬасЮЬасШик Ьисйпеп, ЬасЮЬасШик саке1, ЬасФЬасШик са!епаГогте, ЬасЮЬасШик се11оЬюкик, ЬасФЬасШик спкраШк, ЬасФЬасШик сшуа1ик, ЬасФЬасШик Йе1Ьгиескй, ЬасФЬасШик )епкепй, ЬасФЬасШик 1е1сйтапй, ЬасФЬасШик шшцФк, ЬасЮЬасШик р1ап!агит, ЬасюЬасШик годокае, ЬасЮЬасШик кайуапик, В1ййоЬас1епит айо1ексепйк, В1ййоЬас1епит апдц1а1ит, ВгййоЬас1егшт Ыййит, В1ййоЬас1епит Ьгеуе, В1ййоЬас1епцт са1епц1а1ит, В1ййоЬас1епит йепйит, В1ййоЬас1егшт епскопн, В1ййоЬас1епит шГапйк, В1ййоЬас1ейцт 1опдит, В1ййоЬас1ейцт р1ап!агит, В1ййоЬас1епит ркеийоса1епц1а1ит, В1ййоЬас1епит ркеийо1опдцт, 81гер1ососсик 1асйк, 81гер1ососсик гаГйпо1асйк, 81гер1ососсик 1йегторЫ1ик, Ащйошшососсцк ГегтеШа, СуФрйада ГегтеШапк, ККойоГегах ГегтеШапк, Се11и1отопак ГегтеШапк и 2утотопак тоЬШк.