JPH0449234A - 豚赤痢予防，治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は豚赤痢予防、治療剤に関し、詳細にはて示され
るグリセオビリジンまたはその無毒性塩たはその無毒性
塩に 化学式 で示されるビリドグリゼイン（エタマイシン）またはそ
の無毒性塩を有効成分として併用する豚赤痢予防、治療
剤に関するものである。

［従来の技術］ 豚赤痢は、トレボネーマ・バイオディセンテリエ（Ｔｒ
ｅｐｏｎｅｍａ　ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）によ
ってひきおこされる伝染性疾患であり、世界各地でその
発生が詔められている。

［発明が解決しようとする課題］ 豚赤痢予防、治療剤としては、これまで様々なものが提
案されているが、いずれも十分な効果を発揮し得るもの
はなかった。

［発明の目的］ 本発明の目的は、豚赤痢の予防、治療に極めて有効な豚
赤痢予防、治療剤を提供することにある。

［発明の構成］ 本発明は、前記化学式（Ｉ）で示されるグリセオビリジ
ンまたはその無毒性塩、或は該グリセオビリジンまたは
その無毒性塩と前記化学式（ＩＩ）で示されるビリドグ
リゼインまたはその無毒性塩を有効成分とする豚赤痢予
防、治療剤である。

上記化合物（Ｉ）、（ｕ）は既知の抗生物質であり、例
えばストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）の培養液から分離され、
優れた抗菌作用を有している。しかしながら、上記化合
物（１）、（ＩＩ）が豚赤痢予防、治療に有効であるこ
とは今まで知られていない。

［発明の説明］ 本発明者らは約６０００検体の発酵産物の中から、スク
リーニングすることによって、−放線菌の培養液中に生
産された上記（１）、（ＩＩ）の化合物またはこれらの
無毒性塩が、豚赤痢に対して従来の薬剤では達成されな
い顕著な予防、治療効果があることを見出し、本発明を
完成するに至フた。

本発明が完成されるに至った経緯を説明しつつ、本発明
の作用・効果を明らかにする。

まず本発明者らは、多くの抗生物質について多角的な検
討を加えた結果、豚赤痢予防、治療剤の場合には、生体
外での活性と生体内における臨床効果の間には、殆んど
相関性を認めることができないという知見が得られた。

例えばペニシリンＧ（ペニシリン系）、フラジリドンに
トロフラン系）、モネンシン（ポリエーテル系）等は、
生体外における最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）が夫々０．
７８．０．１　、０．２　　（μｇ／ｍｌ）であるが、
いずれも豚赤痢の予防、治療剤としては効果がない。ま
たリンコマイシンのＭＩＣは２５μｇ／ｍ　ｌであるが
、市販の豚赤痢予防、治療剤のうちでも優れた効果を発
揮している。即ち、生体外で豚赤痢病に対する抗菌活性
を示す抗生物質は多数知られているが、そのいずれが生
体内での豚赤痢の予防、治療に有効であるかを予測する
ことはほぼ不可能である。

ところで豚赤痢の場合、生体内での効果をスクリーニン
グする方法としては、従来マウスを使用した感染実験系
が知られている。この実験系では、効果のある化合物は
豚においても効果があり、逆にこの実験系で効果のない
化合物（或は効果の小さい化合物）は豚赤痢に対しても
同様の結果を示すという期待が大前提となっている。マ
ウスと豚という動物種の違いによる薬効の違いは、実際
問題として十分にあり得ることであるが、豚赤痢の生体
内の効果をスクリーニングする手段として豚を使用した
感染実験を行なうことは現実問題としてほとんど不可能
に近いと言える。こうしたことから、これまで豚赤痢に
対する予防、治療効果の予測はマウス系における実験結
果に基づいて行なわれているのが実情であるが、マウス
系におけるグリセオビリジンやピリドグリセイン夫々単
独での豚赤痢予防、治療効果は、従来公知の豚赤痢予防
、治療剤であるリンコマイシンよりも劣っていた。

ところが豚赤痢菌を人工感染させた豚を使用し、グリセ
オビリジンおよびビリドグリゼインの治療効果について
検討したところ、マウス系で得られていた結果とは逆に
、グリセオビリジンは従来のリンコマイシンよりも有効
であることが判明した。またビリドグリゼインについて
は、それ単独ではそれほど効果的ではないが、グリセオ
ビリジンと併用するとグリセオビリジンの治療効果を更
に助長することがわかった。これらの結果はマウス系で
の実験結果からは到底予測できないものであり、驚くべ
き意外な結果であった。

方、グリセオビリジンと構造的に非常に似ているパージ
ニアマイシンは、生体外での活性はグリセオビリジンと
それほど違わないが、生体内での効果（特に豚における
効果）においては、予測できないほどの大差が見出され
た。パージニアマイシンＭ（パージニアマイシンの主成
分）の化学構造は、下記化学式（ＩＩＩ　）の様に示さ
れるが、デブシベブチド抗生物質（ミカマイシン、パー
ジニアマイシン類）のグループに属し、グリセオビリジ
ン［前記化学式（Ｉ）］と非常に似ている。また豚赤痢
菌に対するＭＩＣも、グリセオビリジンが０．２〜１．
５６μｇ／ｍ　ｌで、パージニアマイシンが０．７８〜
１゜５６μｇ／ｒｒｒ　１となり、グリセオビリジンが
若干優れているとは言えるが、大きな差は肥められない
。

しかしながら、飼料添加投薬による豚赤痢の予防、治療
試験で両化合物を比較したところ、グリセオビリジンは
２．５ｐｐｍ添加でその効果を発揮するのに対し、パー
ジニアマイシンは５０　ｐｐｍ　添加でもその効果は認
められなかった。

これらの結果は、■生体外の活性から生体内の効果を予
測することは不可能であること、および■化学構造から
その効果を予測することはできない等を示すものである
と言える。化学構造が類似しているならば、薬効におい
ても同様の効果を発揮するであろうことを予測するのが
普通であるのに、上記結果は全く意外な事実であり、ま
た画期的な発見であると言える。

尚木発明者らが実験によって確認したところによると、
グリセオビリジンやビリドグリゼインは豚赤痢に対する
予防、治療効果を有するだけでなく、動物の成長促進作
用もあることがわ力）つた。

次に、ビリドグリゼイン（ＷＳ７５０５Ａ）とグリセオ
ビリジン（ＷＳ７５０５Ｂ）のＪ＃離方法の一例を示す
。

単離方法 ＷＳ７５０５生産菌株（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃ
ａｃａｏｉｓｗｂｓｐ、　ｃａｃａｏｉ　）の新鮮斜面
培養から、下記組成の前培養培地（６０ｍｌ培地／２２
５ｍ１容三角フラスコ）に菌を接種し、３０℃で４日間
振どう培養し、前培養液とする。画用いた生産菌株は、
工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている（微
工研菌寄第１０８６７号）。

前培養培地組成（ＡＰ１５） ＭＳ３６００　　　　　　　１％ シュークロース　　　　　　　１％ グルコース　　　　　　　　１％ ファーマメディア　　　　　１％ ペプトン　　　　　　　　０．５％ 脱脂大豆粉　　　　　　　　０．５％ ＣａＣ０，、、０，１％ 下記組成の本培養培地２０４２を仕込んだ３０１容ジヤ
ーフアメンターに、前記前培養液５本を接種し、３０℃
で５〜６日間通気攪拌培養する。尚本培養培地には、消
泡剤として培地２０ＩＬ当たり１０ｍ１のアデカノール
を添加した。

本培養培地組成（ＡＭ４７） パインデックス＃３　　　　　　　２％ビーナツツパウ
ダー　　　　　　　　１％コーンステイープリカー　　
　　　　　１％ＣａＣ０３（ｐＨを６．５に調整後）ｃ
、２％ジャーファメンター８基から得たブロク、１４５
１を濾過し、濾液１３５Ｉｌを得る。塩酸にて濾液のｐ
Ｈを６に調整後、酢酸エチル抽出を３回行ない、酢酸エ
チル要約１９Ｏｎを得る。これを濃縮後、ヘキサンにて
充填したシリカケル・カラム（Ｓｉｌｊｃａｇｅｌ　６
０．メルク社製）にかける。

ヘキサン：クロロホルムが１：１の画分でｗｓ７５０５
Ａ　（ビリドグリゼイン）が溶出され、クロロホルム：
メタノールが２０：１の画分でｗｓ７５０５Ｂ　（グリ
セオビリジン）が溶出される。

ＷＳ７５０５画分は濃縮後、シリカゲル・カラム（Ｓｉ
ｌｉｃａｒ　ＣＣ−４，マリンクロット社製）にかけ、
１：１のヘキサン−クロロホルムおよびクロロホルムで
溶出されてくる両分を濃縮し、塩化水素飽和アセトンを
加えて、室温に放置することにより、約３．５ｇの結晶
を得た。

ＷＳ７５０５Ｂ画分は濃縮後、少量のメタノールに溶解
し、濃縮放置することにより、約２．０ｇの結晶性白色
粉末を得た。

ＷＳ７５０５ＡおよびＷＳ７５０５Ｂは、ＬＩＶ、ＩＲ
，ＮＭＲおよびマス・スペクトルにより、夫々ビリドグ
リゼイン、グリセオビリジンと同定した。

本発明でい用いるグリセオビリジンやビリドグリゼイン
は、上述の如く無毒性塩の形態でも使用することができ
るが、この様な塩としては、無機酸（例えば塩酸、硫酸
、りん酸等）または有機酸（例えば蟻酸、酢酸、Ｐ−ト
ルエンスルホン酸。

クエン酸、シュウ酸等）等の酸との塩が挙げられる。

本発明の豚赤痢予防、治療剤の使用形態は様々考えられ
、前記（１）、（ＩＩ）の化合物またはこれらの無毒性
塩を、飼料や飲料水にそのまま又は各種希釈剤で希釈し
て添加してもよいし、各種剤型に調整しても良い。希釈
剤は担体ともになり得るものであり、この様な希釈剤と
しては、生理学的に無害であれば固体または液状を問わ
ず様々なものが使用できるが、できれば飼料の一部とな
り得るものが好ましい、固体の希釈剤としては、例えば
大麦粉、小麦粉、とうもろこし粉、大豆粉。

大豆粕、米ぬか、でん粉、もみがら、豆腐粕、ぶどう糖
、果糖、庶糖、＃母、魚粉、酸性白土等が挙げられ、液
状の希釈剤としては例えば水、生理食塩水、生理学的に
無害な有機溶媒等が挙げられるが、これらに限定される
訳ではない。また製剤を調整するに当たっては、前記（
１）、（ｎ）の化合物またはこれらの無毒性塩を、担体
または希釈剤としての精製水、若しくは生理食塩水やバ
ッファー溶液中に溶解してそのまま液剤として使用する
か、或は得られた溶液に結合剤を添加１．た後各種剤型
に適用させる様に調整することにより行なう。このとき
の剤型としては、カプセル剤。

ペースト剤１錠剤、丸剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の各
種のものが含まれる。

尚本発明の豚赤痢予防、治療剤には、各種の補助剤を適
宜添加しても良く、この様な補動剤としては分散剤、乳
化剤、懸濁剤等が挙げられる。その他、防腐剤、殺菌剤
、酵素製剤、乳酸菌製剤。

ビタミン、ミネラル、アミノ酸等を配合しても良く、或
は他の抗生物質を併用する様にしてもよい。

次に実施例を示し、本発明の豚赤痢予防、治療剤の効果
を具体的に明らかにする。

［実施例〕 実施例１ ンビトロ活性 試験菌を５％羊血液添加トリブチケース・ソイ寒天平板
上で、４２℃、７２時間嫌気的に発育させた。適当量の
０．１　Ｍ燐酸緩衝食塩水を各寒天平板に注ぎ、試験菌
の細胞浮遊液を作り、最終的に細胞密度１０６コロニー
形成単位（ＣＦＬＪ）／ｍｌに調製した。試験化合物の
倍数希釈液を含有した５％羊血液添加トリブチケース・
ソイ寒天平板を新たに調整し、該平板上に前記細胞浮遊
液をタイピング接種器（Ｍｕｌｔｉｐｏｉｎｔ　Ｉｎｏ
ｃｕｌａｔｏｒ）で接種した。そして、ガスバックＶ去
（ＢＢＬ法）で、４２℃、７２時間嫌気培養した後、Ｍ
ＩＣ値を測定した。

尚試験菌としてはトレボネーマ・バイオディセンテリエ
の各種菌株を用いた。また試験化合物としては、本発明
のグリセオビリジンとビリドグリゼインの他、公知の豚
赤痢治療剤であるリンコマイシン、カルバドックス、化
学構造がグリセオビリジンと類似で公知の飼料添加物で
あるパージニアマイシン等を用いた。

その結果を第１表に示すが、グリセオビリジンとビリド
グリゼインの間には明らかに相乗作用が認められた。ま
たグリセオビリジン単独とパージニアマイシンは、非常
に近いＭＩＣ値を示した。

実施例２ ５週令のマウス（ｄｄＹ系、雄）を用い、感染３日前か
ら試験終了まで１１００ｐｐのスペクチノマイシンを飲
水投与した。そして５％羊血液添加トリブチケース・ソ
イ寒天平板上で発育させたトレボネーマ・バイオディセ
ンテリエＡＴＣＣ３１２１２（約１０’個）をマウスに
経口感染させた。感染後、１日目および２日目に各種試
験化合物を１日１回経日没与し、感染後４日目に赤痢尿
意マウスに対する試験化合物の効果を次の桜にして調べ
た。

感染マウスの盲腸を取り出し、病変の有無を観察した後
、盲腸内容物を、選択薬剤（スベクチノマイシン４００
　ｕ　ｍ／ｍｌ、コリスチン２５μｇ／ｌｌ１ｌおよび
バンコマイシン２５μｓ／ｍｌ）を添加した５％羊血液
添加トリプチケース・ソイ寒天平板上に塗抹し、ガスバ
ック法で４２℃、７２時間嫌気培養した。そして寒天平
板上にトレポネーマ・バイオディセンテリエのコロニー
形成が生じないマウスを治癒マウスと見なした。

その結果を第２表に示す６第２表から次の様に考察する
ことができる。即ち、グリセオビリジンおよびビリドグ
リゼインは夫々単独では対照薬剤のリンコマイシンやカ
ルバドックスよりも効果が劣っていたが、グリセオビリ
ジンとビリドグリゼインを併用したものは、生体外活性
における相乗作用以上に著しい相乗作用が認められた。

またパージニアマイシンでは、生体外活性ではグリセオ
ビリジンと同様のＭＩＣ値を示していたが、生体内での
効果は全く認められない。

第２表（マウスの系による各ｆ！薬剤の治療効果）実施
例３ 験的豚　痢に対する療　果 この実験では、約８ｋｇのＳＰＦ豚（ラントレース＋ラ
ージホワイト雑種、雄）を使用した。豚は、上底式プラ
スチックネット床を敷いたステンレス製ゲージ（９０ｘ
９０ｃｒＡ）で、１頭または２頭ずつ飼育し、第３表に
示す組成の基礎飼料（ＳＤ子豚用代用乳９日本配合飼料
株式会社）および水を自由に摂取させた。尚上記基礎飼
料は、第３表に示す原材料の他、ビタミンＢ８、ビタミ
ンＢ２、ビタミンＢｅ、ビタミンＢ１□、ニコチン酸、
コリン、パントテン酸、ビオチン、葉酸、ビタミンＡ１
ビタミンＤ３％　ビタミンＥ１ビタミンに３、硫酸鉄、
炭酸亜鉛、硫酸マンガン、硫酸銅、硫酸コバルト、沃素
酸カルシウムを夫々若干添加したものである。

感染の１８時間前から絶食させた豚に、トレボネーマ・
バイオディセンテリエＡＴＣＣ３１２１２の液体培養菌
（約１０９個）を強制的に胃内接種した。接種後１週間
前後で、金側とも臨床徴候（水様および／または粘液性
出血性下痢）を示した。豚赤痢発症後２日から４日経過
し、症状が改善しないことを確認した豚に対し、試験化
合物を投与した。投与方法は、２日間、１日１回の割合
で強制的に胃内投与する方法（強制投薬）と、基礎飼料
に一定濃度混合して自由に摂取させる方法（飼料添加投
薬）の２通りで実施した。投与後、７日間、糞便の観察
と、糞便中のトレボネーマ・バイオディセンテリエの菌
数の測定を行なった。

強制投薬における結果を第４表に示す。第４表から明ら
かな様に、グリセオビリジン単独、またはグリセオビリ
ジンとビリドグリゼインの混合物の投与では、投薬量１
．０ｍｇ／ｋｇｘ　２で２頭中２頭が治癒し、投薬量０
．１ｍｇ／ｋｇｘ　２では２頭中１頭だけが治癒した。

またグリセオビリジン単独よりも混金物の方が若干価れ
た効果を示したが、マウスにおける効果で認められた様
な著しい相乗作用は無かった。これに対し、対照薬剤の
リンコマイシンにおいては、投与量０．１ｍｇ／ｋｇｘ
　２回では２頭中２頭とも効果はなく、投与量１．２５
ｍｇ／ｋｇ　ｘ　２回で２頭中１頭だけ治癒した。また
カルバドックスでは、投与量１．０Ｂ／ｋｇｘ　２回で
２頭とも効果はなかった。

飼料添加投与における効果を第５表に示す。

第５表から明らかな様に、グリセオビリジンを２．５ｐ
ｐｍ投薬した実験群では、４頭中３頭が正常便まで回復
し、その内の２頭は糞便中の菌も消失していた。またグ
リセオビリジンの５　ｐｐｍ投薬では、２頭中２頭が治
癒していた。これに対し、対照薬剤のリンコマイシンで
は％５１’ｌ’ｌ”の投薬で２頭中１頭は正常便まで回
復したが糞便中の菌は消失しておらず、完全に治癒して
いるとは言えなかった。またセデカマイシンを２．５ｐ
ｐｍ投薬した場合は、２頭中２頭とも効果はなかった。

これらの結果から、豚における実験的豚赤痢では、グリ
セオビリジンとビリドグリゼインとの相乗作用はそれほ
ど認められなかったが、市販のいずれの豚赤痢治療剤よ
りも優れた効果を示した。

実施例４ 第 表 （部用基礎飼料） ６日令ブロイラーひな（チャンキ一種、雄）４０羽を２
群に分け、夫々グリセオビリジンとビリドグリゼイン添
加群、対照群（無投薬群）とした（各群１０羽ずつ２ゲ
ージに分け　計２０羽）。各群に、第６表に示す基礎飼
料を不断給飼し、それらの体重と食料消費量を１週間観
察した。

その結果を第７表に示すが、グリセオビリジンとビリド
グリゼインの混合物の添加群では、増体重、飼料要求率
ともに対照群に比較して改善されているのがわかる。

傘１）ヒ゛タミン・プレミックスはヒ゛タミンＡ、Ｂ、
。

Ｂ２．Ｂｅ、Ｂ１２．０３およびＥ、ビオチン、葉酸な
らびにパントテン酸カルシウムを含有する。

幸２）ミネラル・プレミックスは硫酸第一鉄、硫酸マン
ガン、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸コバルトおよび沃化カリ
ウムを含有する。

［発明の効果］ 以上述べた如く本発明によれば、豚赤痢に極めて有効な
豚赤痢予防、治療剤が実現できた。また本発明の治療剤
は動物の成長促進剤としても有効であり、グリセオビリ
ジンやビリドグリゼインのこれまで知られていなかった
特性を有効に利用することができる様になった。

出願人　　藤沢薬品工業株式会社

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）グリセオビリジンまたはその無毒性塩を有効成分
   とすることを特徴とする豚赤痢予防、治療剤。
2. （２）グリセオビリジンまたはその無毒性塩と、ビリド
   グリゼインまたはその無毒性塩を有効成分とすることを
   特徴とする豚赤痢予防、治療剤。