KR20090092315A - ＩｇＡ 생산 촉진제 - Google Patents

ＩｇＡ 생산 촉진제

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KR20090092315A
KR20090092315A KR1020097014299A KR20097014299A KR20090092315A KR 20090092315 A KR20090092315 A KR 20090092315A KR 1020097014299 A KR1020097014299 A KR 1020097014299A KR 20097014299 A KR20097014299 A KR 20097014299A KR 20090092315 A KR20090092315 A KR 20090092315A
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KR
South Korea
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iga
cells
lactobacillus
iga production
amyloborus
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KR1020097014299A
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사토시 하치무라
히로키 간자토
시게루 후지와라
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칼피스가부시키가이샤
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Publication date
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Abstract

본 발명은, 파이어판의 기능을 높여 IgA의 생산을 촉진시키고, 사람 장관에 정착성을 갖는 락토바실러스속 세균 및 상기 락토바실러스속 세균 균체를 유효 성분으로 하는 IgA 생산 촉진제를 제공한다. 본 발명은, 락토바실러스 아밀로보러스의 균체를 유효 성분으로 하는 IgA 생산 촉진제, 특히, 락토바실러스 아밀로보러스가 CP1750주(FERM BP-10532)를 유효 성분으로 하는 IgA 생산 촉진제이다.

Description

ＩｇＡ 생산 촉진제{IgA production promoter}
본 발명은 IgA의 생산 촉진제에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 장내에서 효과적으로 작용하는 IgA 생산 촉진제에 관한 것이다.
IgA는, 타액, 장, 기관 등의 분비액 중에 존재하여 입안 및 소장 등의 점막으로부터 침입하는 미생물 및 알레르겐을 차단하는 등 점막 차단 기능의 증강에 있어서 중요한 역할을 갖는 분자인 것이 알려져 있다. 또한 IgA는 면역 기능이 미숙한 유아의 생체를 방어하기 때문에, 수동 면역으로서 모유 유래의 IgA가 유아의 면역 기능 보충에 사용되고 있는 것도 잘 알려져 있다.
한편, 유산균의 면역 수식 기능에 관해서는, 최근 여러 가지 보고가 이루어지고 있으며, 작용 기작이나 균종·균주에 의한 차이에 관한 정보도 조금씩 밝혀지게 되었다[참조: 히로타 테츠지: New Food Industry, Vol.32, No.10, p 9(1990)]. 그러나, 이러한 보고에 있어서도, 모든 면역 수식 기능을 커버하고 있는 것은 아니며, 또한, 모든 유산균종에 관해서 검토가 이루어지고 있는 것도 아니다. 따라서, 아직 전체상이 파악되지 않은 대단히 불완전한 정보가 수득되고 있는 것에 지나지 않는다. IgA의 분비를 촉진시키는 유산균에 관해서도 일부 검토가 이루어지고 있고, 특히, 비피도박테리움(Bifidobacterium)속 세균에 관해서는 유아 분변 중에서의 존재비가 높기 때문에, 유아에서는 어떠한 작용을 갖는 것으로 생각되고 있다. 비피도박테리움속 세균을 파이어판(Peyer's patch) 세포와 공배양하여, IgA 유도 활성이 높은 것을 선별하는 것과 같은 시도가 이루어지고 있다. 구체적으로는, 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)이나 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve)에 IgA의 분비 촉진 작용이 강한 균주가 존재하는 것이 보고되어 있다[참조: 일본 특허공개공보 제(평)02-280059]. 그러나, 비피도박테리움속 세균은 원래 사람 성인의 소장에는 거의 존재하지 않는 것이 알려져 있고, 따라서, 통상적으로는 파이어판과의 접촉도 거의 없을 것으로 예측된다. 실제로 개개로 선택된 이러한 균종·균주가 생체내에서(in vivo), 특히 사람의 장내에서 충분히 기능할 수 있는지 여부는 확인되고 있지 않다.
유산균을 일반적으로 검토한 경우, 락토바실러스(Lactobacillus)속 세균에 관해서는 IgA 생산과의 관련성을 시사하는 보고는 없으며, 특히 장관 면역에 중요한 작용을 갖는 파이어판이 존재하는 소장에 많이 존재하며, 정착성이 풍부한 락토바실러스속 균종·균주 IgA 생산 촉진 기능에 관해서 균종·균주간에 비교하여, 활성이 높은 균종·균주를 찾아내고자 하는 시도에 관한 보고는 볼 수 없다. 또한, 락토바실러스속 세균의 사람 장내 국재성에 관해서, 락토바실러스 아밀로보러스(Lactobacillus amylovorus, L. amylovorus)는, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 존소니(Lactobacillus johnsonii)와 함께 사람 플로라(flora)에 있어서 우세한 락토바실러스속 유산균인 것이 보고되어 있다[참조: Bioscience Microflora, 22(3), 75-83, 2003].
발명의 개시
본 발명은, 파이어판 등의 기능을 높여 IgA의 생산을 촉진시킬 수 있으며, 사람 장관에 정착성을 갖는 락토바실러스속 세균, 및 상기 락토바실러스속 세균의 균체를 유효 성분으로 하는 IgA 생산 촉진제를 제공한다.
본 발명자들은 사람의 장관에 존재하거나, 또는 존재하지 않는(사람 분변 유래의 것과 기타 유래의 것) 락토바실러스속의 몇가지 종의 균주를 사용하여 이들의 파이어판 세포에 대한 IgA 생산 촉진 활성을 측정하여 락토바실러스속 균종 간에 있어서 파이어판 세포의 IgA 생산 촉진 활성에 차가 확인되는 것을 밝혀내었다. 특히, 사람 장관 정착성의 락토바실러스속 균종 중에서, 락토바실러스 아밀로보러스가 IgA 생산 유도 활성이 풍부한 것을 밝혀내었다.
따라서, 본 발명은, 락토바실러스 아밀로보러스의 균체를 유효 성분으로 하는 IgA 생산 촉진제이다. 특히, 락토바실러스 아밀로보러스 CP1750주(FERM BP-10532)를 유효 성분으로 하는 IgA 생산 촉진제이다.
본 발명에 의해, 면역 차단을 증강시킬 수 있는 IgA 생산 촉진제가 제공된다. 따라서, 본 발명에 의해 면역 차단 증강을 목적으로 하는 면역 조절제, 식품 또는 사료(음료를 포함한다), 특히 발효유, 영양 식품, 기능성 식품, 특정 보건용 식품, 드링크제, 정제 등이 제공된다. 본 발명의 IgA 생산 촉진제에 의해, 화분(花粉), 진드기, 집먼지 등의 환경 알레르겐 외, 음식물 알레르겐이나 병원성의 미생물의 침입을 막기 위해서, 생체의 점막 차단 기능을 높일 수 있다.
[도 1] 여러 가지 락토바실러스속 세균의 IgA 생산 촉진 활성의 비교. 대조군은 균체를 포함하지 않는 PBS만을 첨가한 대조군이다. 막대는 표준 오차를 나타낸다.
본 발명은 알레르겐을 포함하는 항원 물질의 점막으로의 접촉을 저해하는 작용을 갖는 IgA의 유도능에 관해서 종래 알려져 있지 않았던 락토바실러스속 세균 균체를 유효 성분으로 하는, IgA 생산 촉진제이다. 본 명세서에 있어서「IgA 생산 촉진제」는 IgA의 생산을 촉진시키는 활성을 갖는 조성물을 의미한다. 또한, 본 발명의「IgA 생산 촉진제」는 IgA 생산 촉진을 목적으로 하는 한 특별히 용도는 한정되지 않으며, 예를 들면, 의약으로서, 또는, 식품(음료를 포함한다)으로의 첨가용으로서 사용할 수 있다. 특히, 본 발명의 IgA 생산 촉진제는, 장관의 면역 담당 조직과의 접촉의 기회가 높은 것으로 생각되는 장관 정착성이 풍부한 락토바실러스속 중에서도, 높은 IgA 생산 유도능이 확인된 락토바실러스 아밀로보러스의 균체를 유효 성분으로서 포함한다. 본 발명에 사용할 수 있는 락토바실러스 아밀로보러스의 균주에는, 락토바실러스 아밀로보러스 CP1750주가 포함된다. 락토바실러스 아밀로보러스 CP1750주는 2005년 3월 8일에 독립행정법인 산업기술종합연구소 특허생물기탁센터(일본 이바라키켄 쓰쿠바시 히가시 1초메 1-1 쓰쿠바 센트랄 6, 우편번호 305-8566)에 기탁되고, 수탁번호 FERM BP-10532가 부여되어 있다.
IgA는 일반적으로 파이어판을 포함하는 점막 조직에 의해서 많이 생산되고, 기관, 소장으로부터의 분비액이나 타액, 초유 중에 많이 나타나는 항체이다. 파이어판은 사람을 포함한 포유 동물의 소장의 점막에 존재하며, IgA 생산 세포를 다수포함하고 있는 조직이다. 본 발명자들은 사람 장내 플로라에 확인되는 여러 가지 락토바실러스속 세균, 및 사람 장내 플로라에는 거의 또는 전혀 존재하지 않는 여러 가지 락토바실러스속 세균의 균체 존재하에 파이어판을 배양하여, 파이어판 세포의 IgA 생산을 조사하고, 그 결과, 상기와 같이, 락토바실러스속 균종 간에 파이어판 세포의 IgA 생산 촉진 활성에 차가 확인되는 것을 밝혀내고, 사람 장내 플로라에 있어서 우세한 락토바실러스종 중에서도 엘.아밀로보러스가 특히 높은 IgA 생산 촉진 활성을 갖는 것을 밝혀내었다. 여러 가지 엘.아밀로보러스 균주의 균체 존재하에서 파이어판 세포를 공존 배양하고, 공존 배양하에서 파이어판 세포가 생산한 IgA량을 측정함으로써, 이들 엘.아밀로보러스 균주를 본 발명에 사용할 수 있는 것을 확인할 수 있다.
파이어판 세포에 대한 IgA 생산 촉진 활성은 예를 들면 이하와 같이 측정할 수 있다. 세균, 예를 들면 락토바실러스속 세균을 통상의 배지 및 조건, 예를 들면, MRS 배지[제조원: Difco]에서 약 37℃ 내지 45℃에서 12 내지 18시간 동안 배양하고, 원심에 의해 균체를 회수하고, 수득된 균체를 멸균수 또는 PBS 등의 적절한 버퍼로 세정한 후, 동결 건조시킨다. 동결 건조시킨 균체는 PBS 등의 적절한 버퍼에 현탁하고, 100℃에서 가열(예를 들면, 약 10분간)하여 살균 처리하고, 그 후의 측정을 위해 보존해 둘 수 있다. 한편, 파이어판 세포는 마우스의 소장으로부터 제조할 수 있다. 마우스의 소장을 콜라게나제(약 1mg/ml)를 포함하는, 파이어판에 대하여 적절한 배지, 예를 들면 RPMI 배지 중에 두고, 세포가 흩어질 때까지, 예를 들면 약 37℃에서 약 1시간 동안 교반한다. 수득된 세포 현탁액을 메쉬를 통과시켜 불필요한 잔사를 제거하고, 수득된 세포를 적절한 배지, 예를 들면 RMPI로 세정하여 파이어판 세포 제조물을 수득할 수 있다. 수득된 파이어판 세포는 적절한 배지, 예를 들면 5% FCS를 포함하는 RPMI 배지를 넣은 96웰 플레이트에 약 5x105세포/웰이 되도록 파종하여, 각 웰에 상기의 세균 균체를 약 10㎍/ml이 되도록 첨가하고, 5% CO2 대기 하에서 37℃에서 약 7일간 배양하여, 배양 상청액을 수득한다.
수득된 배양 상청액 중의 IgA량은 통상적인 방법에 따라서, 예를 들면 ELISA법 에 의해 측정할 수 있다. 예를 들면, 적절히 희석시킨 항-마우스 IgA 항체를 1차 항체로서 ELISA 플레이트에 50㎕ 정도 첨가하고, 4℃, 밤새 정치하여 코팅을 실시한다. 웰을 PBS-Tween 용액으로 세정한 후, 100㎕의 1% BSA/PBS-Tween 용액을 각 웰에 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 정치하여 블로킹을 실시한다. 웰을 세정후, IgA 표준품 또는 적절하게 희석시킨 샘플을 웰에 50㎕ 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 정치한다. 웰을 세정후, 1% BSA/PBS-Tween 용액으로 희석한 2차 항체, 예를 들면, 비오틴화 항-마우스 IgA를 웰에 50㎕ 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 정치한다. PBS-Tween으로 웰을 세정후, 1% BSA/PBS-Tween 용액으로 적절히 희석시킨 알칼리포스파타제 용액을 50㎕ 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 정치한다. PBS-Tween으로 웰을 세정후, 4-니트로페닐인산2나트륨을 디에탄올아민-염산 완충액(pH 8.9)에 1mg/ml이 되도록 용해시키고, 이들을 웰에 50㎕ 첨가하여 발색시키고, 405nm의 흡광도를 측정함으로써 각 웰 중의 생산된 IgA량을 측정할 수 있다.
이러한 방법에 의해서 밝혀진 파이어판에 대한 IgA 생산 촉진 활성이 우수한 엘.아밀로보러스 균주인 CP1750주(FERM BP-10532)는 사람 장관 친화성이 특히 높기 때문에, 사람, 특히 사람 장내에 있어서 대단히 높은 IgA 생산 촉진 활성을 나타내는 것이 기대되고, 본 발명의 IgA 생산 촉진제의 유효 성분으로서 특히 바람직하다.
어떠한 이론에도 속박될 의도는 없지만, 본 발명자들은 IgA 생산 유도능을 갖는 사람 장관 정착성의 유산균, 특히 엘.아밀로보러스를 포함하는 락토바실러스속 균종·균주는 파이어판 중의 항체 생산 세포에 대하여 IgA 생산을 촉진시키고, 게다가 IgA 생산 세포에 비특이적으로 작용하여 IgA 생산을 높임으로써, 항원을 보다 유효하게 처리할 수 있도록 하는 애주번트 활성을 포함하는 총 활성이 우수한 것이라고 생각하고 있다.
파이어판의 IgA 생산을 촉진시키는 활성을 갖는 것이 확인된 엘.아밀로보러스주, 예를 들면 CP1750주(FERM BP-10532)는 생균체, 사균체, 균체 파쇄물, 균체 용해물, 균체 분말을 포함하는 어떠한 형태라도, IgA 생산 촉진 활성을 상실하지 않는 한 본 발명의 IgA 생산 촉진제의 유효 성분으로서 사용할 수 있다. 따라서, 특히 명시적으로 나타내지 않는 한, 「엘.아밀로보러스의 균체」에는, 생균체, 사균체, 균체 파쇄물, 균체 용해물 및 균체 분말 그 밖의 어느 형태도 포함된다. 특히, 배양한 생균체 및 동결 건조시킨 엘.아밀로보러스 균체가 그 간편성의 점에서 이용 가치가 높을 것이다. 필요하면, 어느 형태에 관해서도, 상기한 방법에 의해 이들이 파이어판에 대하여 IgA 생산 촉진 활성을 갖는 것을 확인할 수 있다.
본 발명의 IgA 생산 촉진제를 의약으로서 사용하는 경우는, 엘.아밀로보러스의 균체 외, 기타 의약, 및, 약제학적으로 허용되는 일반적인 부형제 및 첨가제를 포함할 수 있다. 제형으로서는, 예를 들면 정제, 산제, 환제, 과립제, 캡슐제, 당의제 및 시럽제일 수 있으며, 이들은 통상적인 방법에 따라서 제조할 수 있다. 또한, 본 발명의 IgA 생산 촉진제는, 여러 가지 식품(음료를 포함한다) 또는 사료, 특히 발효유, 영양 식품, 기능성 식품, 특정 보건용 식품, 드링크제, 정제에 첨가할 수도 있다. 어느 형태라도, 본 발명의 IgA 촉진제의 기준 섭취량은 균체 질량(건조 질량)으로서, 1일당 20mg(건조 질량)(균체 수량으로서 약 1010개; 균체수는 콜터 카운터(Coulter counter) 계수기 등으로 계측할 수 있다) 이상이 바람직하다. 또는, 발효유, 발효즙으로서는, 100g 정도를 1일에 섭취하는 것이 바람직하다. 본 발명의 유효 성분인 엘.아밀로보러스는 사람의 소장내에 존재하는 유산균이기 때문에, 본 발명의 IgA 생산 촉진제를 다량으로 섭취하더라도 문제가 되는 부작용은 없을 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명의 IgA 생산 촉진제는 사람의 식품용으로서 적합하다. 즉, 본 발명의 IgA 생산 촉진제는 그대로 식품으로서, 또는, 식품에 첨가하여 사용하기에 적합하다.
본 발명에 사용하는 엘.아밀로보러스는 당업자에 잘 알려져 있는 배지 및 배양 조건에 따라서 배양할 수 있지만, 사람용의 의약, 식품 및 음료와 같은 사람에게 섭취시키는 제조물을 제작하는 것을 목적으로 하는 경우는, 사람이 섭취하여 유해하지 않은 배지, 예를 들면, 식품 규격 성분만으로 제작한 배지를 사용하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 엘.아밀로보러스를 식품 규격의 성분만으로 제조한 반합성 배지(종류는 불문)를 사용하여, 37 내지 45℃의 범위에 있어서 12 내지 18시간 동안 배양하고, 원심분리를 실시하여 균체를 회수하고, 계속해서 회수한 균체를 멸균수에 의해 원심 세정(필요에 따라서 세정을 반복한다)함으로써, 본 발명의 IgA 생산 촉진제의 유효 성분으로서 사용하는 엘.아밀로보러스 균체를 수득할 수 있다. 수득된 균체는, 그대로의 상태 내지 예를 들면 적절하게 덱스트린 등의 부형제를 가한 상태로 동결시키고, 동결 건조를 실시함으로써 생균체를 포함하는 식품 원료를 수득할 수 있다. 한편, 멸균수 세정 균체를 가열 살균한 후에, 그대로 또는 적절하게 덱스트린 등의 부형제를 가한 상태로 동결시키고, 동결 건조를 실시하거나, 또는 분무 건조를 실시하여 사균의 식품 원료를 수득할 수 있다. 이러한 균체 자체 또는 균체를 식품에 첨가하는 형태의 경우, 1일당 20mg 이상(건조 질량 환산)의 균체를 섭취할 수 있도록 여러 가지 식품 또는 의약을 제조하는 것이 바람직하다.
한편, 스타터용 배지에서 배양한 엘.아밀로보러스 배양물을 야채즙, 과즙, 보리즙, 미음, 유즙 및 이들의 혼합즙에 수 %, 예를 들면 3 내지 6% 첨가하고 37℃ 내지 45℃에서 발효시키고, 최종 산도 0.85 이상에서 냉각시켜 발효유, 발효즙 또는 혼합 발효즙을 수득할 수 있다. 수득된 생성물에 적절하게 감미료 및/또는 향료를 가하여 관능 특성을 갖추고, 그대로 냉장 제품 식품으로 할 수도 있으며, 또한 살균하여 저장 수명을 연장시킨 제품을 제조할 수 있다. 이러한 발효 산물의 경우, 발효 산물로서 100g정도/일의 양으로 경구 섭취하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 이러한 발효 산물 100g 중, 약 1010개의 엘.아밀로보러스 균체가 포함된다.
파이어판 세포를 본 발명의 IgA 생산 촉진제와 함께 배양하면, 그 배양액 중에 생산되는 IgA량이 유의적으로 증가한다(실시예 참조). 일반적으로 점막 조직 세포에 있어서 IgA의 생산이 잘 나타나기 때문에, 본 발명의 IgA 생산 촉진제는 파이어판 세포뿐만 아니라 다른 점막 조직에 있어서의 IgA 생산을 촉진시키는 작용이 있는 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명의 IgA 생산 촉진제를 경구 섭취함으로써 장관 점막뿐만 아니라 전신 점막계에서의 IgA의 생산을 촉진시킬 수 있으며, 전신 점막계의 감염 방어 기능을 증강시키고, 점막으로부터 침입하는 알레르겐을 차단하여, 음식물 알레르기를 포함한 알레르기 일반의 발증을 억제할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 IgA 생산 촉진제는 구강내의 IgA 생산을 촉진시킴으로써, 치주병균을 억제하고, 치주병의 개선·예방을 위해서도 사용할 수 있다. 본 발명의 IgA 생산 촉진제는 부작용이 거의 또는 전혀 없어 매우 안전하다. 이것에 가하여, 특히 CP1750주의 균체를 유효 성분으로 하는 IgA 생산 촉진제는, 사람 장관에 대하여 특히 친화성이 높기 때문에, 그 IgA 생산 촉진 활성은 특히 높은 것으로 생각된다.
실시예 1
1) 유산균 균체의 제조
사용한 종 및 균주는 이하와 같다.
L. rhamnosus A (락토바실러스 람노서스 A주)
L. reuteri A (락토바실러스 로이테리 A주)
L. plantarum A (락토바실러스 플란타룸 A주)
L. paracasei A (락토바실러스 파라카제이 A주)
L. paracasei B (락토바실러스 파라카제이 B주)
L. johnsonii A (락토바실러스 존소니 A주)
L. johnsonii B (락토바실러스 존소니 B주)
L. galinarum A (락토바실러스 갈리나룸 A주)
L. gasseri A (락토바실러스 가세리 A주)
L. gasseri B (락토바실러스 가세리 B주)
L. fermentum A (락토바실러스 퍼멘텀 A주)
L. crispatus A (락토바실러스 크리스파터스 A주)
L. buchneri A (락토바실러스 부흐네리 A주)
L. amylovorus CP1750 (락토바실러스 아밀로보러스 CP1750주)
L. acidophilus A (락토바실러스 아시도필러스 A주)
엘.아밀로보러스 CP1750는 출원인들의 표준 엘.아밀로보러스 보존 스톡으로부터 임의로 선택한 균주이다. 이들 락토바실러스속 균종·균주를 각각 MRS 배지[제조원: Difco Laboratories] 100ml 중에서 37℃에서 18시간 동안 배양후, 균체를 세정하여, 동결 건조시켰다. 동결 건조후, 약 1011개(약 100mg)의 건조 균체가 각각의 균주에 관해서 수득되었다. 동결 건조시킨 균체의 일부를 PBS에 현탁하고, 100℃에서 10분간 가열하여 살균 처리를 실시하여, 이후의 실험에 사용하였다.
2) 락토바실러스속 세균의 균체 존재하에서의 파이어판 세포의 배양
BALB/c 마우스(니혼쿠레아로부터 구입)로부터 소장을 적출하고, 여기에서 파이어판을 잘라내었다. 콜라게나제[제조원: Sigma]를 1mg/ml이 되도록 5% FCS-RPMI에 용해시키고, 여기에 잘라낸 파이어판을 넣고 37℃에서 1시간 동안 교반하였다. 세포가 흩어진다면, 세포 현탁액을 메쉬에 통과시켜 파편을 제거하고, 세포를 RPMI로 세정하여 파이어판 세포를 수득하였다. 파이어판 세포를 5% FCS-RPMI를 넣은 96웰 플레이트에 5×105세포/웰이 되도록 파종하였다. 여기에 1)에서 제조한 균체 현탁액을 10㎍/ml(균체 건조 질량)이 되도록 첨가하고, 5% FCS-RPMI 중 5% CO2 대기 하에서 37℃에서 배양하고, 7일간 배양후에 배양 상청액을 회수하였다.
3) 파이어판 세포로부터의 IgA 생산량의 측정
2)에서 수득된 배양 상청액 중의 IgA량을 ELISA법에 의해 측정하였다. 1차 항체(염소 항-마우스 IgA, Zymed Laboratories)를 0.1M Na2HPO4 용액으로 1000배 희석한 것을 ELISA 플레이트에 50㎕ 첨가하고, 4℃에서 밤새 정치하고 코팅을 실시하였다. 웰을 PBS-Tween 용액으로 세정한 후, 100㎕의 1% BSA/PBS-Tween 용액을 각 웰에 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 정치하고 블로킹을 실시하였다. 웰을 세정후, IgA 표준품(IgA; Purified Mouse Myeloma IgA, Zymed Laboratories) 또는 적절하게 희석한 샘플을 웰에 50㎕ 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 정치하였다. 웰을 세정후, 1% BSA/PBS-Tween 용액으로 희석한 2차 항체(IgA; 비오틴 항-마우스 IgA, 클론; C10-1, BD Pharmingen)를 웰에 50㎕ 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 정치하였다. PBS-Tween으로 웰을 세정후, 1% BSA/PBS-Tween 용액으로 1000배 희석한 알칼리포스파타제 용액[제조원: Zymed]을 50㎕ 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 정치하였다. PBS-Tween으로 웰을 세정후, 4-니트로페닐인산2나트륨[제조원: 도쿄카세이고교]을 디에탄올아민-염산 완충액(pH 8.9)에 1mg/ml가 되도록 용해시키고, 이들을 웰에 50㎕ 첨가하여 발색시켜 405nm의 흡광도를 측정하였다. 생산된 IgA량을, IgA 표준품의 데이터를 기준으로 하여 그래프화하였다(도 1).
IgA 생산 촉진 활성이 비교적 높았던 균주, 엘.로이테리 A, 엘.부흐네리 A, 엘.아밀로보러스 CP1750, 엘.아시도필러스 A (도 1 참조) 중, 엘.로이테리 A, 엘.부흐네리 A 및 엘.아시도필러스 A는 통상 사람의 소장에는 보이지 않는 종 또는 균주인데 대하여, CP1750주를 포함하여 엘.아밀로보러스는 사람 소장에 정착하는 유산균으로서, 사람 장내 플로라에 있어서 우세한 것을 알고 있다.
4) 엘.아밀로보러스 CP1750의 균학적 성질
시판 세균 동정 키트(Api50CH: Biomerieux 제조, 제품번호 50307)를 사용하여 엘.아밀로보러스 CP1750에 관해서 당의 자화성을 조사하였다. 결과를 이하의 표 1에 기재한다.
당 자화성*
글리세롤에리스리톨D-아라비노스L-아라비노스리보스D-크실로스L-크실로스아도니톨β-메틸-D-크실로시드갈락토스글루코스프럭토스만노스소르보스람노스둘시톨이노시톨만니톨소르비톨α-메틸-D-만노시드α-메틸-D-글루코시드N-아세틸글루코사민아미그달린알부틴 ---------++++--------+--
에스쿨린살리신셀로비오스말토스락토스멜리비오스사카로스트레할로스이눌린멜레지토스라피노스전분글리코겐크실리톨겐티오비오스D-투라노스D-릭소스D-타가토스D-푸코스L-푸코스D-아라비톨L-아라비톨글루코네이트2-케토-글루코네이트5-케토-글루코네이트 --+++-+---++--+----------
* +는 자화성 있음을 나타내고, -는 자화성 없음을 나타낸다.
또한 엘.아밀로보러스 CP1750는 45℃에서도 양호한 생육을 나타낸다.
참고문헌
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3. Bioscience Microflora, Vol.22, No.3, p 75-83 (2003)

Claims (4)

  1. 락토바실러스 아밀로보러스(Lactobacillus amylovorus)의 균체를 유효 성분으로 하는 IgA 생산 촉진제.
  2. 제1항에 있어서, 수탁번호 FERM BP-10532로 특정되는 락토바실러스 아밀로보러스 CP1750주의 균체를 유효 성분으로 하는, IgA 생산 촉진제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 식품으로의 첨가용인, IgA 생산 촉진제.
  4. 수탁번호 FERM BP-10532로 특정되는 락토바실러스 아밀로보러스 CP1750주.
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