DK176599B1 - Antifungalt middel, forbindelse til dette, fremgangsmåde til fremstilling af denne og metode til dets anvendelse - Google Patents

Description

DK 176599 B1 i

Teknisk område

Denne opfindelse angår et antifungalt middel, et hidtil ukendt optisk aktivt derivat og et salt deraf samt en fremgangsmåde til fremstilling af derivatet.

5

Baggrundsteknik og nærmeste kendte teknik

Der kendes forskellige azolforbindelser med antifungal aktivitet. Eksempelvis beskriver JP-A-60-218387 imidazolforbindelser repræsenteret af nedenstående formel (a) (betegnelsen "JP-A" betyder i denne 10 sammenhæng en "ikke undersøgt offentliggjort JP patentansøgning"): R^rSw® (a)

^=N

15

Derudover beskriver JP-A-62-93227 at sådanne forbindelser er nyttige som antifungale midler. Ydermere beskriver JP-A-2-275877, at de optisk aktive forbindelser blandt specifikke forbindelser ud af de ovenfor nævnte imidazolforbindelser besidder en antifungal aktivitet mod 2 0 Trichophyton mentagrophytes, der er omtrent 1,4 gange aktiviteten af de racemiske forbindelser deraf.

Skriftet EP-A1-0 218 736 beskriver forbindelser med formlen (I), hvor R kan udgøres af en i tabel 1 anført substituent nr. 53 i en racemisk blanding indeholdende forbindelse B nedenfor, idet denne kendte race-25 miske blanding har antimykotisk virkning. Det har imidlertid overraskende vist sig, at (R)-isomeren af denne forbindelse har en markant forbedret effekt i forhold til nævnte kendte forbindelse.

Beskrivelse af opfindelsen 3 0 Et mål for denne opfindelse er at tilvejebringe antifungale midler omfattende optisk aktive forbindelser med en bedre antifungal aktivitet end racemiske forbindelser deraf.

Et andet mål for denne opfindelse er at tilvejebringe de optisk aktive forbindelser, en fremgangsmåde til fremstilling af dem og en 3 5 metode at benytte dem på.

DK 176599 B1 2

Disse og andre mål for denne opfindelse er blevet nået ved hjælp af et farmaceutisk præparat, omfattende som aktiv ingrediens R-(-)-(E)~ [4-(2,4-dichlorphenyl)-l,3-dithiolan-2-yliden]-l-imidazolylacetonitril (herefter omtalt som "forbindelse (B)") eller et farmaceutisk acceptabelt salt 5 deraf; sammen med en/et farmaceutisk acceptabel(t) bærer eller fortyndingsmiddel.

Ydermere er disse og andre mål for denne opfindelse blevet nået ved hjælp af forbindelse (B) eller et salt deraf.

Derudover er disse og andre mål for denne opfindelse blevet nået 10 ved hjælp af en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelse (B), der omfatter at lade et optisk aktivt glycolderivat, der er repræsenteret af nedenstående formel (II) eller et ækvivalent deraf, reagere med et dithiolatsalt, der er repræsenteret af nedenstående formel (III): 15 LQX_--x, (I1) k-x, i hvilken formel Xi og X2 er ens eller forskellige og hver repræsenterer en methansulfonyloxygruppe, en benzensulfonyloxygruppe, en p-toluensulf-onyloxygruppe eller et halogenatom:

20 MSv/CN

/—\ (III) MS7

— H

i hvilken formel M repræsentereret alkalimetalatom.

2 5 Stadig yderligere er disse og andre mål for denne opfindelse blevet nået ved hjælp af en fremgangsmåde til forhindring eller behandling af mykose, der omfatter til et menneske eller dyr, der behøver en sådan forhindring eller behandling, at indgive en farmaceutisk effektiv mængde af forbindelse (B) eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf; eventuelt 3 0 sammen med en/et farmaceutisk acceptabel(t) bærer eller fortyndings- middel.

Endelig er disse og andre mål for denne opfindelse blevet nået ved hjælp af anvendelse af forbindelse (B) eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf til fremstilling af et farmaceutisk præparat.

35 DK 176599 B1 3

Bedste nr1øvplspsfnrpi-foj_0pQn^p[sen

Forbindelse (B) er vist detaljeret nedenfor 5 I „/“Λ \_ /

— iV

10

De herværende opfindere har fundet, at forbindelse (B) og farmaceutisk acceptable saite deraf, mere detaljeret (R)-enantiomerer, har en antifungal aktivitet, der er adskillige gange større end for racemiske blandinger deraf mod dermatophytes, især stærkt følsomme 15 stammer, og at forbindelse (B), der ikke findes beskrevet i nogen litteratur og er en hidtil ukendt forbindelse, har en overlegen antifungal aktivitet, der ikke kunne forventes ud fra de racemiske blandinger deraf.

På denne måde blev opfindelsen gjort.

Forbindelse (B) giver især en stærkt følsom virkning på 20 Trichophyton rubrum. Dens antifungale aktivitet herpå er 2 til 4 gange sa stor som for dens racemiske blandinger.

_ , . , . . , .... _ ved den nedenfor illustrerede

Forbindelse (B) kan fremstilles veu fremgangsmåde.

25 Cl Cl MSv/® eg.* * u (li) (Π[) 30 Cl CI|gtrSwG.: _, \_ / 35 <B> " 4 DK 176599 B1 I formlerne er Xi og X2 ens eller forskellige, og hver betegner en methansulfonyloxygruppe, en benzensulfonyloxygruppe, en p-toluen-sulfonylgruppe eller et halogenatom; og M angiver et alkalimetalatom.

Eksempler på halogenatomet repræsenteret af Xi og X2 inkluderer et 5 fluoratom, et chloratom, et bromatom og et iodatom. Eksempler på alkalimetalatomet repræsenteret af M inkluderer Li, Na og K.

Dette vil sige, at forbindelse (B) pi samme måde som beskrevet i JP-A-2-275877 kan fremstilles ved at lade et optisk aktivt glycolderivat med en (S)-konfiguration og angivet ved formel (II) eller et ækvivalent 10 deraf reagere med et dithiolatsalt repræsenteret af formel (III).

Dithiolatsaltet repræsenteret af formel (III) kan fremstilles ved at lade det nedenfor viste 1-cyanomethylimidazol reagere med carbon-disulfid i nærvær af en base og et inert opløsningsmiddel.

15

/CN MSwCN

Ί- CSi --

^ N N

20 (ΠΙ) I formlen er M som ovenfor defineret.

2 5 Der kan benyttes alle mulige inerte opløsningsmidler i den ovenfor nævnte reaktion, så længe de ikke hæmmer reaktionens fremadskriden.

Eksempler derpå inkluderer alkoholer (eksempelvis methanol, ethanol og isopropanol), polære opløsningsmidler (eksempelvis dimethylsulfoxid (DMSO), dimethylformamid og acetonitril), vand og blandinger af så- 3 0 danne opløsningsmidler.

Eksempler på basen inkluderer natriumcarbonat, kaliumcarbonat, natriumhydroxid og kaliumhydroxid. De kan benyttes som sådan på fast form eller som en opløsning i et inert opløsningsmiddel. Mængden (i mol) af basen kan vælges i området fra 2 til 8 gange, foretrukket 4 til 6 gange 3 5 mængden (i mol) af 1-cyanomethylimidazol.

5 DK 176599 B1

Forbindelsen repræsenteret af formel (II) kan benyttes i en ækvimolær mængde eller som et overskud i forhold til 1-cyano-methylimidazol.

Reaktionstemperaturen kan vælges i området fra 0 til 100°C og 5 ligger foretrukket omkring stuetemperatur. Reaktionstiden kan vælges i området fra 0,5 til 24 timer.

Den opnåede forbindelse er en blanding af de geometriske E- og Z-isomerer, og den ønskede E-isomer kan isoleres og renses ved hjælp af eksempelvis silicagelsøjlechromatografi eller fraktioneret krystallisering.

10 Eksempler på opløsningsmidler til rensning ved fraktioneret krystallisering og om krysta I lisering inkluderer ethanol, ethylacetat, ether, hexan, acetone og blandinger af disse opløsningsmidler, men disse er ikke begrænsende.

De optisk aktive udgangsforbindelser repræsenteret af formel (II) 15 kan fremstilles ved de nedenfor illustrerede kendte processer 1 til 3.

Proces 1:

Cl Λ Cl CK/'-'-y Cl halogenerende middel^ IQ! _s- aktiverende middel

20 » ^OH

2 5 Λ2 (II) I formlen er Xi og X2 som ovenfor defineret.

De kan således fremstilles ved at lade (S)-l-(2,4-dichlorphenyl)- 3 0 ethan-l,2-diol, der kan opnås ud fra 2,4-dichlorstyren ved en kendt fremgangsmåde [J. Org. Chem. Soc., 57:2768 (1992)], reagere med et egnet halogenerende middel (eksempelvis thionylchlorid, phosphor-tribromid eller carbontetrachlorid/triphenylphosphin) eller et aktiverende middel (eksempelvis methansulfonylchlorid, toluensulfonylchlorid eller 35 benzensulfonylchlorid).

DK 176599 B1 6

Proces 2:

Cl y^yc1 Ci Ci HX

et — ®Ci5o — 5 '

Cl^----- Cl er , _ ia 10 U, (IV) (Ha) I formlen repræsenterer X et chloratom eller et bromatom; og X2 15 er som ovenfor defineret.

Som ovenfor illustreret kan forbindelser repræsenteret af formel (II), i hvilken Xi er et chloratom eller et bromatom (nemlig forbindelserne repræsenteret af formel (Ha)), fremstilles ved at lade (R)-l-(2,4-di-chlorphenyl)styrenoxid, der kan opnås ud fra 2,4-dichlorstyren ved en 20 kendt fremgangsmåde [J. Am. Chem. Soc., 113:7063 (1991)], reagere med et hydrogenhalogenid til fremstilling af en halogenalkohol repræsenteret af formel (IV) og derefter at lade halogenalkoholen reagere med et egnet haiogenerende middel (eksempelvis thionylchlorid, phosphor-tribromid eller carbontetrachlorid/triphenylphosphin) eller et aktiverende 2 5 middel (eksempelvis methansulfonylchlorid, toluensulfonylchlorid eller benzensulfonylchlorid), 30 35 7 DK 176599 B1

Proces 3:

Forbindelserne repræsenteret af formel (II), i hvilken X2 er et chlor- eller bromatom (nemlig forbindelserne repræsenteret af formel (Ilb)), kan fremstilles ved den nedenfor viste proces 3.

5

C! Cl Cl^^^C! CI^n^CI

η kv 10 U Λ Λ CVO (V) Gib) I formlen repræsenterer X et chloratom eller et bromatom; og Xi 15 er som ovenfor defineret.

De ønskede forbindelser kan således opnås ved at lade en halogenalkohol repræsenteret med formel (V), der kan syntetiseres ud fra et 2,4-dichlorphyenacylhalogenid ved en kendt proces [Modern Synthetic Methods, 5:115 (1989)], reagere med et egnet halogenerende 2 0 middel (eksempelvis thionyichlorid, phosphortribromid eller carbontetra- chlorid/triphenylphosphin) eller et aktiverende middel (eksempelvis meth-ansulfonylchlorid, toluensulfonylchlorid eller benzensulfonylchlorid).

Præparaterne er nyttige antifungale midler til helbredelse af mykotiske infektioner hos mennesker eller dyr. De kan eksempelvis 25 benyttes til at helbrede lokale mykotiske infektioner, mykotiske infektioner i slimhinder og almene mykotiske infektioner, der eksempelvis er forårsaget af fungi af slægterne Trichophyton, Candida, og Aspergillus.

Forbindelse (B) og et farmaceutisk acceptabelt salt deraf benyttes hver for sig alene eller på form af et præparat omfattende forbindelsen og 3 0 en farmaceutisk acceptabel bærer eller fortyndingsmiddel. De formgives til præparater, der er egnede til oral eller ikke-oral indgivelse såsom væskeformuleringer, tabletter, emulsioner, salver, cremer, lotioner og grødomslag.

Den indgivne mængde kan være en hvilken som helst passende 3 5 mængde, der retter sig efter alder, kropsvægt og indgivelsesform, men 8 DK 176599 B1 den er normalt på mindst 0,05 mg og foretrukket fra 0,5 til 50 mg for hver 1 kg kropsvægt pr, dag til en almen behandling af voksne, og midlet kan indgives på en gang eller opdelt adskillige gange i løbet af en dag.

I tilfælde af lokale behandlinger, eksempelvis på form af topisk 5 påføring, er koncentrationen af den aktive ingrediens foretrukket mindst 0,001%, mere foretrukket fra 0,1 til 2%. Mængden ti! behandling er foretrukket fra 30 til 100 mg pr. cm2.

Det antifungale middel ifølge denne opfindelse kan benyttes i opblanding med andre antifungale midler eller antibakterielle midler 10 såsom amphotericin B, trichomycin, varitotin og clotrimazol.

-Eksempler

Opfindelsen vil nu blive illustreret mere detaljeret under reference til de følgende eksempler, formuleringseksempler og forsøgseksempler, 15 men det bør forstås, at opfindelsen ikke skal betragtes som begrænset dertil. Med mindre andet er angivet, er alle procentangivelser på vægtbasis.

FKSFMPFI Ί 2 0 Fremstilling af forbindelse (B) ved hjælp af proces 3: l-(a), Fremstilling af (S)-l-(2,4-dichlorphenyl)-2-bromethanol:

Cl 'v^O'V' Cl « ©ς,ΒΓ _ isr 0 ^3r

Til 5 ml vandfrit tetrahydrofuran (THF) satte man 300 mg (S)-3,3- 3 0 diphenyl-l-methyltetrahydro-lH,3H-pyrrolo[l,2-c][l,3,2]oxazaborol og satte derefter ved -20°C dråbevis 8 ml 1,0 M boran-THF opløsning dertil.

Ved samme temperatur tilsatte man yderligere dertil dråbevis en opløsning af 2,7 g 2,4-dichlorphenacylbromid i 8 ml THF. Den opnåede blanding blev opvarmet til stuetemperatur og derefter holdt under 35 omrøring i 3 timer. Man satte nu 10 ml methanol hertil fosr at nedbryde DK 176599 B1 9 overskud af boran, hvorefter reaktionsblandingen blev udhaeldt i vand og ekstraheret med ether. Det organiske lag blev vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev bortdestilieret under reduceret tryk, og remanensen blev renset ved silicagel-5 søjlechromatografi (ethylacetat/n-hexan = 1/3) til opnåelse af 2,5 g af det ønskede produkt med en optisk renhed på 80%ee.

l-(b). Fremstilling af (S)-l-(2,4-dichlorphenyl)-2-bromethanol: clTnTcl --► ^^.-'0S0;CH3

Ur ^Br 15 I 30 ml methylenchlorid opløste man 1,6 g (S)-l-(2,4-dichlor-phenyl)-2-bromethanol, hvorefter man satte 660 mg triethylamin til opløsningen. Derefter satte man under isafkøling dråbevis dertil 750 mg 2 0 methansulfonylchlorid. Efter en times omrøring ved stuetemperatur blev reaktionsblandingen vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev bortdestilieret under reduceret tryk til opnåelse af 1,9 g af et råprodukt af den ønskede forbindelse. Det opnåede råprodukt blev benyttet til den næste reaktion uden rensning.

25 l-(c). Fremstilling af (R)-(-)-(E)-[4-(2,4-dichlorphenyl)-l,3-dithiolan-2-yliden]-l-imidazolylacetonitril (Forbindelse (B)):

Clv/^Cl C1 Y^TCl 30 ISS-oso.cH: —-

^ N

35 10 DK 176599 B1

Til 10 ml DMSO satte man 440 mg kaliumhydroxid og tilsatte under afkøling på et vandbad dråbevis dertil en opløsning fremstillet ved opløsning af 300 mg 1-cyanomethylimidazol og 210 mg carbondisuifid i 5 ml DMSO fulgt af omrøring i 1 time ved stuetemperatur til fremstilling af 5 en dithiolatopløsning. Den opnåede dithiolatopløsning blev derefter dra-bevis sat til en opløsning fremstillet ved at opløse 950 mg af råproduktet af (S)-l-[2,4-dichlorphenyl)-2-bromethyl]methansuifonat i 10 ml DMSO under afkøling på et vandbad. Efter to timers omrøring ved stuetemperatur blev reaktionsblandingen udhældt i isvand og ekstraheret 10 med ethylacetat. Det organiske lag blev vasket med vand og blev derefter tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Derefter blev opløsningsmidlet bortdestilleret under reduceret tryk. Remanensen blev renset ved silica-gelsøjlechromatografi (ethylacetat (AcOEt)/n-hexan = 2/1). De opnåede krystaller blev omkrystailiseret fra et blandet opløsningsmiddel af 15 ethylacetat-n-hexan ti! opnåelse af 350 mg af det ønskede produkt med en optisk renhed på 95%ee.

FKSFMPFI ?

Fremstilling af forbindelse (B) ved hjælp af proces 1: 2 0 2-(a). Fremstilling af (S)-l-(2,4-dichlorphenyl)-ethan-l,2-bismethan- sulfonat:

Ckf^CI Cly^Ci 25 ^γΟΗ--► ^k.-0S0:CK3 ^OH ’-OSO.CHj 30 Man opløste 1,5 g (S)-l-(2,4-dichlorphenyl)-l,2-ethandiol (optisk renhed 98%ee) syntetiseret ved en kendt fremgangsmåde [J. Org.

Chem., 57:2768 (1992)] og 3,1 g triethylamin i 50 ml methylenchlorid og satte under isafkøling dråbevis 3,3 g methansulfonylchlorid til opløsningen. Efter to timers omrøring ved stuetemperatur blev reaktions- 3 5 blandingen vasket med vand, og det organiske lag blev tørret over DK 176599 B1 11 vandfrit magnesiumsutfat. Opløsningsmidlet blev bortdestilleret under reduceret tryk til opnåelse af 2,6 g af et råprodukt af den ønskede forbindelse. Det opnåede råprodukt blev benyttet til den næste reaktion uden rensning.

5 2-(b). Fremstilling af (R)-(-)-(E)-[4-(2,4-dichlorphenyl)-l,3-dithiolan-2-yliden]-l-imidazolylacetonitril (Forbindelse (B)):

10 Cl^^Cl CIYr^rCI

LQJ—t--0$0,CH3--► ^oso.ch.

— N

15

Til 20 ml DMSO satte man 1,09 g kaliumhydroxid og satte hertil under afkøling på et vandbad dråbevis en opløsning fremstillet ved at opløse 750 mg 1-cyanomethylimidazol og 520 mg carbondisulfid i 10 ml DMSO fulgt af omrøring i 1 time ved stuetemperatur til fremstilling af en 20 dithiolatopløsning. Under afkøling på et vandbad blev den opnåede dithiolatopløsning derefter dråbevis sat til en opløsning fremstillet ved at opløse 2,61 g af råproduktet af (5)-1-(2,4-dichlorphenyl)ethan-l,2-bismethansulfonat i 20 ml DMSO. Efter to timers omrøring ved stuetemperatur blev reaktionsblandingen udhældt i isvand og ekstraheret 25 med ethylacetat. Det organiske lag blev vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat, hvorefter opløsningsmidlet blev bortdestilleret under reduceret tryk. Remanensen blev renset ved silicagelsøjlechro-matografi (AcOEt/n-hexan = 2/1). De opnåede krystaller blev omkrystalliseret fra et blandet opløsningsmiddel af ethylacetat-n-hexan = 2/1 til 3 0 opnåelse af 1,2 g af det ønskede produkt med en optisk renhed på 99%ee. I de oven-nævnte eksempler blev den optiske renhed beregnet ud fra det procentiske areal ved HPLC under anvendelse af en optisk aktiv HPLC kolonne (Chiralcel OD (JP varemærke, Daicel Chemical Industryk Ltd.)).

35 DK 176599 B1 12 FORMIH FRTNGSFKSFMPFI 1

Forbindelse (B) 10 dele

Magnesiumstearat 10 dele

Lactose 80 dele 5 De ovenfor nævnte ingredienser blev blandet grundigt sammen, og blandingen blev viderebehandlet til et pulver eller fine partikler til op-nåelse af et pulverpræparat.

FORMH1 FRTNfi-SFKSFMPFI ? 10 Forbindelse (B) 50 dele

Stivelse 10 dele

Lactose 15 dele

Ethylcellulose 20 dele

Polyvinylalkohol 5 dele 15 Vand 30 dele

De ovenfor nævnte ingredienser blev grundigt sammenblandet og æltet, hvorefter blandingen blev formalet. De opnåede partikler blev siet til opnåelse af et granulpræparat.

20 EQRMIU FRIIMGSFKSEMPFI 3

Forbindelse (B) 0,5 del

Ikke ionisk overfladeaktivt middel 2,5 dele

Fysiologisk saltvandsopløsning 97 dele

De ovenfor nævnte ingredienser blev opvarmet og blandet og 25 derefter steriliseret til opnåelse af et injektionspræparat.

FORMIH FRTIMfiSFKSF-MPFL-A

Forbindelse (B) 0,01 del 0,5% carboxymethylcelluiose 99,99 dele 3 0 Den førstnævnte blev suspenderet i den sidstnævnte til opnåelse af en suspension.

35 DK 176599 B1 13 FORMIILF-RINfiSEKSEMPEi 5

Forbindelse (B) 1 del

Polyethylenglycol 400 99 dele

De ovenfor nævnte ingredienser blev blandet til opløsning af 5 forbindelse (B) og til opnåelse af et væskepræparat til påmaling.

FfiRMIH FRTNfiSFKSFMBFI-fi

Forbindelse (B) 2 dele

Polyethylenglycol 400 49 dele 10 Polyethylenglycol 4000 49 dele

De ovenfor nævnte ingredienser blev blandet under opvarmning med henblik på opløsning af forbindelse (B), hvorefter den opnåede blanding blev afkølet til opnåelse af en salve.

15 FORMIII FBTHnSFkSFMPFI 1

Forbindelse (B) 3 dele 1,2-propandiol 5 dele

Glycerolstearat 5 dele

Spermaceti 5 dele 2 0 Isopropylmyri5tat 10 dele

Polysorbat 4 dele

En blanding af de ovenfor nævnte ingredienser blev opvarmet og afkølet, og man satte dertil 68 dele vand under omrøring til opnåelse af en creme.

25

FflRMHI FRTNfiCFICCFMPFI «

Man blandede 1 del forbindelse (B), 5 dele benzylaikohol, 30 dele ethanol og 47 dele propylenglycol til opnåelse af opløsning af forbindelse (B). Derefter satte man en vandig opløsning omfattende 1 del Hiviswako 3 0 104 (JP varemærke, Wako Junyaku Co., Ltd.) og 15 dele renset vand til opnåelse af en ensartet opløsning til denne opløsning. Derefter satte man dertil 1 del diisopropanolamin under omrøring til opnåelse af et gelpræparat.

35 DK 176599 B1 14 FORMIII FRTNfiSFKSFMPFI 9

Man opløste 1 del forbindelse (B) i 5 dele benzylalkohol og 5 dele diethylsebacat og satte dertil 5 dele ætylalkohol, 6 dele stearylalkohol, 1 del sorbitanmonostearat og 8 dele polyoxyethylenmonostearat fulgt af 5 opvarmning til 70DC til opløsning deraf. Til den opnåede ensartede opløsning, der blev holdt ved 70°C, satte man renset vand opvarmet til 70°C fulgt af afkøling under omrøring til opnåelse af et cremepræparat.

EQRSØGSFKSFMPFI 1 10 in vitro aktivitet mod Trichophyton spp.:

Man bestemte de minimale inhibitoriske koncentrationer (MIC'er) ved den dobbelte makro-urt fortyndingsmetode med Sabouraud's glucoseurt udgjort af 1% bactopepton og 4% glucose. Til hvert forsøgsglas indeholdende 9,8 ml af urten satte man 0,1 ml af hver /Γ 15 prøveforbindelse opløst i DMSO og 0,1 ml afen conidiesuspension (1x10 conidier/ml). Man iagttog fungusvæksten efter inkubation i 7 dage ved 27°C. Værdien af MIC blev bestemt som den laveste medikamentkoncentration, der forhindrede en synlig fungusvækst. Resultaterne er vist i tabel 1. (Forbindelse (A) har en 2-chiorphenylgruppe, hvor forbin- 20 delse (B) har en 2,4-dichlorphenylgruppe).

25 30 35 15 DK 176599 B1 TABFI..1 _MIC (Mg/ml) ____

Forbin- Forbin- Racemisk Racemisk

Stamme deise (A) delse (B) forbindelse forbin-_____(A)__delse (B) TBF

A

IFO 5466 0,02 0,02 0,04 0,04 0,02 I FO 5809 0,005 0,005 0,01 0,02 0,01 IFO 5810 0,005 0,005 0,01 0,01 0,005 IFO 5811 0,02 0,01 0,04 0,04 0,01 IFO 5929 0,01 0,01 0,02 0,02 0,01 TIMM 1189 0,01 0,01 0,04 0,02 0,01 T1MM 1814 0,02 0,02 0,04 0,04 0,01 ΊΠΜΜ 1815 0,02 0,02 0,04 0,04 0,02 TIMM 1817 0,02 0,01 0,04 0,02 0,01 TIMM 2789 0,005 0,0025 0,01 0,01 0,0025

B

IFO 5467 0,0013 0,0025 0,005 0,005 0,005 IFO 5807 0,0025 0,0025 0,01 0,01 0,005 IFO 5808 0,0025 0,0025 0,01 0,01 0,005 IFO 6203 0,0025 0,0013 0,005 0,005 0,0025 IFO 6204 0,0025 0,0025 0,01 0,01 0,005 IFO 9185 0,0013 0,0013 0,0025 0,0025 0,0025 TIMM 1822 0,0013 0,00063 0,005 0,0025 0,0025 TIMM 1823 0,0025 0,0013 0,01 0,05 0,0025 TIMM 1824 0,0013 0,0013 0,005 0,005 0,0013 TIMM 1830 0,00063 0,00063 0,0013 0,0013 0,00063 (Noter) A; Trichophyton mentagrophytes 5 B: Trichophyton rubrum TBF:(E)-N-(6,6-dimethyl-2-hepten-4-yny[)-N-methy!-l- naphthalenmethanamin, hydrochlorid (almindeligt navn: terbinafin)

Racemisk forbindelse (A) og (B) er racemiske blandinger af hen-10 holdsvis forbindelse A) og (B).

16 DK 176599 B1 FORSØfiSFKSFMPFI 7

In vitro antifungal aktivitet mod Candida albicans:

Man bestemte værdier af MIC ved den dobbelte mikro-urt fortyndingsmetode med RPMI 1640 pufret med morpholinopropan-5 sulfonsyre til en sfutmolaritet på 0,165 M (pH 7,0). Man pipetterede 100 pi af en gærcellesuspension (1 til 5 x 103 ce!ler/ml) og 100 pi af det forbindelsesholdige medium i hver brønd på fladbundede mikrotiterplader.

Efter inkubation i 48 timer ved 35°C målte man turbidi-teten for hver brønd ved 630 nm. Man bestemte værdien af MIC som den laveste me-10 dikamentkoncentration, der viste 80% inhibition af en kontrol fungal-vækst (som målt ved vækst i turbiditet). Resultaterne er vist i tabel 2.

TÅRFI 3 __MIC (pg/ml) __ _______

Forbin- Forbin- Race- Racemisk delse delse misk for- forbin-

Stamme (A) (B) bindelse delse (B) TBF FCZ

____(A)______ IFO 0197 0,0625 0,0625 0,25 0,125 >32,0 0,25 IFO 0579 0,0313 0,0313 0,0625 0,0625 >32,0 0,125 IFO 1269 0,0625 0,0625 0,125 0,0625 4,0 0,25 IFO 1270 0,25 0,25 1,0 0,25 >32,0 0,25 IFO 1385 0,0625 0,0625 0,25 0,125 >32,0 0,25 IFO 1386 0,125 0,125 0,25 0,25 >32,0 0,5 TIMM 4,0 16,0 16,0 >32,0 >32,0 16,0 3163 0,25 0,5 0,5 0,5 >32,0 2,0 TIMM 2,0 2,0 4,0 4,0 >32,0 >32,0 3164 1,0 1,0 2,0 4,0 >32,0 8,0

TIMM

3165 TIMM

3166 1111 III

(Note) FCZ:2-(2,4-difluorphenyl)-l,3-bis(lH-l,2,4-triazol-l-yl)-2-15 propanol (alment navn: fluconazol) FORSØfiSFKSFMPFI 3

In vitro antifungal aktivitet af forbindelse (B) mod Aspergillus fumigatus·.

Man bestemte MIC-værdier ved den dobbelte agarfortyndings-2 0 metode med casitoneagar, hvis sammmensætning var 0,9% bacto-casitone, 1% bacto-gærekstrakt, 2% glucose, 0,1% KH2P04, 0,1% 17 DK 176599 B1

Na2HP04, 1% Na3C6HsC>7 og 1,6% agar. En sløjfefuld af hvert inoculum 1 x 10s conidier/ml) blev udstrøget på agarpladen indeholdende en forbindelse, og man iagttog fungusvækst efter inkubation i 48 timer ved 35°C. Værdien af MIC blev bestemt som den laveste medikament-5 koncentration, der forhindrer en synlig fungusvækst. Resultaterne er vist i tabel 3.

TABFI 3 _ MIC (pg/ml) __

Forbin- Forbin- Race- Racemisk delse delse (B) misk for- forbin-

Stamme (A) bindelse delse (B) TBZ ITZ

____(A)____ ΉΜΜ 0,00063 0,00063 0,0013 0,0013 1,28 0,04 0063 0,00063 0,00063 0,0013 0,0013 1,28 0,04 TIMM 0,0013 <0,00031 0,0013 0,00063 1,28 0,08 0078 0,0013 0,00063 0,0025 0,0013 1,28 0,08 ΉΜΜ 1728 '

TIMM

1767 11 || 10 (Note) ITZ:(±)-l-sec-Butyl-4-[p-[[2R*,4S*]-2-(2,4-dichlorphenyl)- 2-(lH-l,2,4-triazol-l-ylmethyl)-l,3-dioxolan-4-yl]meth- ") oxy]phenyl]-l-piperazinyl]phenyl-A -l,2,4-triazolin-5-on (alment navn: itraconazol).

15

Claims (4)

1. Farmaceutisk præparat, omfattende som aktiv ingrediens R-(-)-(E)-[4-(2,4-dichlorphenyl)-l,3'-dithiolan-2-yliden]-l-imidazolacetonitril eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf; sammen med en/et far- 5 maceutisk acceptabel(t) bærer eller fortyndingsmiddel.

2. Forbindelsen R-(-)-(E)-[4-(2,4-dichlorphenyl)-l,3-dithiolan-2-yl-iden]-l-imidazolacetonitril eller et salt deraf.

3. Fremgangsmåde til fremstilling af R-(-)-(E)-[4-(2,4-dichlor-phenyl)“l,3-dithiolan-2-yliden]-l-imidazolacetonitril repræsenteret af den 10 følgende formel (B): WN 15 der omfatter at lade et optisk aktivt glycolderivat, der er repræsenteret af nedenstående formel (II) eller et ækvivalent deraf, reagere med et dithiolatsalt, der er repræsenteret af nedenstående formel (III): 'Ngi!.,, 20. v Λ1 i hvilken formel Xi og X2 er ens eller forskellige og hver repræsenterer en methansulfonyloxygruppe, en benzensulfonyloxygruppe, en p-toluensulf-onyloxygruppe eller et halogenatom: MSs/CN 25 y—V (III) “N i hvilken formel M repræsenterer et alkalimetalatom.

4. Anvendelse af R-(-)-(E)-[4-(2,4-dichlorphenyl)-l,3-dithiolan-2-30 yliden]-l-imidazolacetonitril eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf til fremstilling af et farmaceutisk præparat.