FI119357B

FI119357B - Sienilääke, siihen soveltuva yhdiste ja menetelmä niiden valmistamiseksi

Info

Publication number: FI119357B
Application number: FI980023A
Authority: FI
Inventors: Hiroki Kodama; Yoshimi Niwano; Kazuo Kanai; Masanori Yoshida
Original assignee: Nihon Nohyaku Co Ltd
Priority date: 1995-07-08
Filing date: 1998-01-07
Publication date: 2008-10-31
Also published as: LU90190B1; NO980055D0; FI980023A0; IN185384B; AT407832B; NZ311796A; ZA965745B; CN1194582A; IL122618A0; DE19681478B4; WO1997002821A2; DE19681478T1; EP0839035B1; IL122618A; AU697571B2; SE9800016D0; KR100386491B1; GB2317615A; SE9800016L; CA2226214C

Description

119357

Sienilääke, siihen soveltuva yhdiste ja menetelmä niiden valmi stami seksi

Tekninen alue 5 Tämä keksintö koskee sienilääkettä, menetelmää my- koosien ehkäisemiseksi tai hoitamiseksi kyseistä sienilääkettä käyttämällä, uutta optisesti aktiivista johdosta ja sen suolaa sekä menetelmää kyseisen johdoksen valmistamiseksi .

10 Alan tausta

Tunnetaan monenlaisia atsoliyhdisteitä, joilla on sientenvastainen vaikutus. Esimerkiksi julkaisussa JP-A 60-218 387 on esitetty atsoliyhdisteitä, jotka vastaavat seuraavaa kaavaa a (termi "JP-A" tarkoittaa tässä käytet-15 tynä tutkimatonta julkaistua japanilaista patenttihakemusta) : («,

Lisäksi julkaisussa JP-A 62-93 227 on mainittu ky- ·* · :seisten yhdisteiden olevan käyttökelpoisia sienilääkkeinä.

ί M 20 Julkaisussa JP-A 2-275 877 on lisäksi tuotu esille, että • · määrättyjen, edellä mainittuihin imidatsoliyhdisteisiin • · · ;***; kuuluvien yhdisteiden optisesti aktiivisilla muodoilla on ··· noin 1,4 kertaa suurempi vaikutus Trichophyton mentagro- • · · phytes -sientä vastaan kuin niiden raseemisilla muodoilla.

• · · 25 Keksinnön kuvaus . . Yksi tämän keksinnön päämäärä on tarjota käytettä- • · · '·*·’ viksi sienilääkkeitä, jotka sisältävät optisesti aktiivi- • · *··* siä yhdisteitä, joilla on parempi sientenvastainen vaiku- ·*·., tus kuin niiden raseemisilla muodoilla.

.***. 30 Toinen tämän keksinnön päämäärä on tarjota opti- ·*» ·. sesti aktiivisia yhdisteitä, menetelmä niiden valmista- • Φ· ···! miseksi ja menetelmä niiden käyttämiseksi.

• · • · · • · • ♦ 2 119357

Edellä mainitut ja muut tälle keksinnölle asetetut päämäärät on saavutettu farmaseuttisen koostumuksen avulla, joka sisältää vaikuttavana aineosanaan (R)--(E)-[4-(2,4 -dikloorif enyyli) -1,3 -di t iolan- 2 -yl ideeni ] -1 - imidat so -5 lyyliasetonitriiliä (jota nimitetään tästä eteenpäin yhdisteeksi B) tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa yhdistettynä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantaja- tai laimennusaineen kanssa.

Lisäksi edellä mainitut ja muut tälle keksinnölle 10 asetetut päämäärät on saavutettu yhdisteen B tai sen suolan avulla.

Lisäksi edellä mainitut ja muut tälle keksinnölle asetetut päämäärät on saavutettu sellaisella menetelmällä yhdisteen B valmistamiseksi, jossa optisesti aktiivisen 15 glykolijohdoksen, joka vastaa seuraavaa kaavaa II, cferc,x (II) 20 ^ jossa X1 ja X2 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin tar-koittaa metaanisulfonyylioksiryhmää, bentseenisulfonyyli- • m oksiryhmää, p-tolueenisulfonyylioksiryhmää tai halogeeni- • * .···. atomia; • · 25 tai sen kanssa ekvivalenttisen yhdisteen annetaan reagoida yhdisteen kanssa, joka vastaa seuraavaa kaavaa III: • · · • · t

MSx/CN

>=\ ^ (III} MS7 :X: 30 ··· jossa M tarkoittaa aikai imet ali latomia.

:·. Lisäksi edellä mainitut ja muut tälle keksinnölle • ♦♦ ]···. asetetut päämäärät on saavutettu sellaisella menetelmällä * · *” mykoosin ehkäisemiseksi tai hoitamiseksi, jossa mainitun 35 ehkäisyn tai hoidon tarpeessa olevalle ihmiselle tai eläi- • · • « « • ·♦ • · 3 119357 melle annetaan farmaseuttisesti vaikuttava määrä yhdistettä B tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa yhdistettynä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantaja- tai lai-mennusaineen kanssa.

5 Lisäksi edellä mainitut ja muut tälle keksinnölle asetetut päämäärät on saavutettu käyttämällä yhdistettä B tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseen.

Paras tapa keksinnön soveltamiseksi käytännössä 10 Yhdiste B on esitetty yksityiskohtaisesti alla.

Yhdiste B:

Cl^^Cl

l'S^-Sv_/CN

15 L-s^n-^

IH

Tämän keksinnön tekijät ovat havainneet, että yhdisteellä B ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävillä suoloilla, nimittäin R-enantiomeereillä, on moninkertainen 20 vaikutus dermatofyyttejä vastaan, erityisesti hyvin herkkiä kantoja vastaan, suhteessa vastaavien raseemisten ·’·*· seosten vaikutukseen ja että yhdisteellä B, jota ei ole • « : kuvattu missään kirjallisuudessa ja joka on uusi yhdiste, · .···. on erinomainen sientenvastainen vaikutus, mikä ei ollut • · ,·», 25 odotettavissa vastaavien raseemisten seosten perusteella.

• · Näin ollen on tehty tämä keksintö.

• · ·

Yhdiste B on hyvin herkkä erityisesti Trichophyton • * · *' ' rubrumia kohtaan. Sen sientenvastainen vaikutus on 2 - 4 kertaa niin suuri kuin vastaavien raseemisten seosten vai- • · V.: 30 kutus.

• · ·

Yhdiste B voidaan valmistaa alla kuvatulla menetel- mällä.

• ·» · * * · • · • · · · • · · · • · * · · * * • · 119357 4 CU/^CI MSv

^Xi + MS^O

U, Wn 5 (li) en·} ci^-cl 10 __ Ls/^n^

~N

(B) 15 Kaaviossa X1 ja X2 ovat samoja tai erilaisia ja kum pikin tarkoittaa metaanisulfonyyli^^^kmää, ^entseeni sulfonyylioksi ryhmää, p-tolueenisulfonyylioksiryhmää tai halogeeniatomia ja M tarkoittaa alkalimetalliatomia. Esimerkkejä halogeeniatomeista, joita Xi tai X2 voi tarkoit-20 taa, ovat fluoriatomi, klooriatomi/ bromiatomi ja jodiato-mi. Esimerkkejä alkalimetalliatomeista, joita M voi tar-koittaa, ovat Li, Na ja K.

• * [·.’ Yhdiste B voidaan toisin sanoen, samalla tavalla • ** kuin julkaisussa JP-A 2-275 877 on kuvattu, valmistaa an- • · ”* 25 tamalla optisesti aktiivisen glykolijohdoksen, jolla on *;··’ kaavan II kuvaama S-konfiguraatio, tai sen kanssa ekviva- • · · ***** lenttisen yhdisteen reagoida ditiolaattisuolan kanssa, jo- V * ka vastaa kaavaa III.

Ditiolaattisuola, joka vastaa kaavaa III, voidaan :V: 30 valmistaa antamalla alla kuvatun 1-syaanimetyyli-imidatso- O lin rea9°ida biilidisulfidin kanssa emäksen ja inertin ..* liuotteen ollessa läsnä.

• · • ♦ t

C.: /CN HSv/CH

35 N'% + CS. -► «M H7 (m) 119357 5

Kaaviossa M on edellä esitetyn määritelmän mukainen.

Edellä kuvatussa reaktiossa voidaan käyttää mitä inerttejä liuotteita tahansa, kunhan ne eivät estä reak-5 tion kulkua. Esimerkkejä mainitunlaisista liuotteista ovat alkoholit (esim. metanoli, etanoli, isopropanoli), pooli-set liuotteet [esim. dimetyylisulfoksidi (DMSO), dimetyy-liformamidi, asetonitriili] , vesi ja mainittujen liuottei-den seokset.

10 Esimerkkejä emäksestä ovat natriumkarbonaatti, ka liumkarbonaatti, natriumhydroksidi ja kaliumhydroksidi. Niitä voidaan käyttää sellaisinaan kiinteässä muodossa tai inerttiin liuotteeseen tehdyn liuoksen muodossa. Emäksen määrä (mol) voi olla 2-8 kertaa, edullisesti 4-6 ker- 15 taa, niin suuri kuin 1-syaanimetyyli-imidatsolin määrä (mol) .

Kaavaa II vastaavaa yhdistettä voidaan käyttää yhtä Suuri moolimäärä kuin 1-syaanimetyyli-imidatsolia tai ylimäärin viimeksi mainittuun nähden.

20 Reaktiolämpötila voi olla 0 - 100 °C ja on edulli sesti suunnilleen sama kuin huoneenlämpötila. Reaktioaika voi vaihdella 0,5 tunnista 24 tuntiin.

• t ·\· Tulokseksi saatava yhdiste on geometristen isomee- • · .··1. rien E ja Z seos ja haluttu E-isomeeri voidaan eristää ja • · · .···, 25 puhdistaa esimerkiksi silikageelipylväskromatograf iällä • · V'.' jakokiteyttämällä. Esimerkkejä puhdistukseen jakokiteyttä- § · 1 mällä ja uudelleenkiteyttämällä soveltuvista liuotteista I 9 » '·1 1 ovat etanoli, etyyliasetaatti, eetteri, heksaani, asetoni, ja mainittujen liuotteiden seokset, mutta nämä esimerkit • · ·,·.1 30 eivät ole rajoittavia, «ti

Optisesti aktiivisia lähtöyhdisteitä, jotka vastaa- :1. vat kaavaa II, voidaan valmistaa alla kuvatuilla tunne- • · · ,···, tuilla menetelmillä 1-3.

• · «·· ·· • · · « • · t « · • M • · 119357 6

Menetelmä 1

Cl Cl Cl Cl Halogenointiaine igr _ (§r.r0„ ——.

5 Π ____ Aktivointiaine

^OH

io ^VX' m.

OI)

Kaaviossa X, ja X2 ovat edellä esitetyn määritelmän mukaisia.

15 Kaavan II mukaisia yhdisteitä voidaan toisin sanoen valmistaa antamalla (S)-1-(2,4-dikloorifenyyli)etaani-1,2- diolin, joka voidaan saada aikaan 2,4-diklooristyreenistä tunnetulla menetelmällä [J. Org. Chem. Soc. 57 (1992) 2768], reagoida sopivan halogenointiaineen (esim. tionyy- 20 likloridin, fosforitribromidin, hiilitetrakloridi-trife- nyylifosfiiniyhdistelmän) tai aktivointiaineen (esim. me- IV. taanisulfonyylikloridin, tolueenisulfonyylikloridin, bent- ]·.*· seenisulfonyylikloridin) kanssa.

• ··

Menetelmä 2 * · 25

V:! Cl^^^Cl Cl!,—,C[ HX

K ( — - :V: 30 • · 1;·.. —. TgL..x ^OH .

···:* 35 (IV) (Ha) * · • · t « «« • · 119357 7

Kaaviossa X tarkoittaa klooriatomia tai bromiatomia ja X2 on edellä esitetyn määritelmän mukainen.

Kuten yllä on kuvattu, kaavaa II vastaavia yhdisteitä, joissa X1 on klooriatomi tai bromiatomi (ts. yhdis-5 teitä, jotka vastaavat kaavaa Ha), voidaan valmistaa antamalla (R)-1-(2,4-dikloorifenyyli)styreenioksidin, joka voidaan saada aikaan 2,4-diklooristyreenistä tunnetulla menetelmällä [J. Am. Chem. Soc. 113 (1991) 7063], reagoida vetyhalogenidin kanssa kaavaa IV vastaavan halogeenialko-10 holin valmistamiseksi ja antamalla halogeenialkoholin sitten reagoida sopivan halogenointiaineen (esim. tionyyli-kloridin, fosforitribromidin, hiilitetrakloridi-trifenyy-lifosfiiniyhdistelmän) tai aktivointiaineen (esim. metaani sulfonyylikloridin, tolueenisulfonyylikloridin, bentsee-15 nisulfonyylikloridin) kanssa.

Menetelmä 3

Kaavaa II vastaavia yhdisteitä, joissa X2 on kloori-tai bromiatomi (ts. yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa Hb), voidaan valmistaa alla kuvatulla menetelmällä 3.

20 ci CI^CI c1yätci lv :Λ: 0 ^ a :···! „ (VO (V) (lib) β···Λ 2b • # "t Kaaviossa X tarkoittaa klooriatomia tai bromiatomia « · « * · * ]a X. on edellä esitetyn määritelmän mukainen.

• · · 1

Haluttuja yhdisteitä voidaan toisin sanoen saada aikaan antamalla kaavaa V vastaavan halogeenialkoholin, \V 30 joka voidaan valmistaa 2,4-dikloorifenasyylihalogenidista • e· tunnetulla menetelmällä [Modern Synthetic Methods 5 (1989) ϊ\## 115], reagoida sopivan halogenointiaineen (esim. tionyyli- ,*··, kloridin, fosforitribromidin, hiilitetrakloridi-trifenyy- • ♦ *·' lifosfiiniyhdistelmän) tai aktivointiaineen (esim. metaa-

IM

···· • · • * · • ·· • « 119357 8 nisulfonyylikloridin, tolueenisulfonyylikloridin, bentsee-nisulfonyylikloridin) kanssa.

Tämän keksinnön mukaiset koostumukset ovat sieni-lääkkeitä, joita voidaan käyttää ihmisellä tai eläimellä 5 esiintyvän sieni-infektion parantamiseen. Niitä voidaan käyttää esimerkiksi sellaisen paikallisen sieni-infektion, limakalvon sieni-infektion ja yleisen sieni-infektion parantamiseen, jonka aiheuttaja on esimerkiksi jokin sukuihin Trichophyton, Candida ja Aspergillus kuuluvista sie-10 nistä.

Yhdistettä B ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa käytetään kumpaakin pelkästään tai kyseistä yhdistettä ja farmaseuttisesti hyväksyttävää kantaja- tai lai-mennusainetta sisältävän koostumuksen muodossa. Niistä 15 muodostetaan valmisteita, jotka soveltuvat annettaviksi suun kautta tai muulla tavoin, kuten nestemäinen formula, tabletti, emulsio, salva, voide, lotion ja (puuro)haude.

Annettava määrä voi olla mikä tahansa sopiva määrä, joka määräytyy iän, ruumiinpainon ja antomuodon mukaan, 20 mutta on tavallisesti vähintään 0,05 mg, edullisesti 0,5 -50 mg, kilogrammaa kohden ruuminpainoa vuorokaudessa ai- ·*·*· kuisten yleishoidon ollessa kysymyksessä ja aine voidaan • · .·. : antaa yhdellä kertaa ja useassa erässä vuorokauden aikana.

• · ,···. Paikallisen hoidon tapauksessa, esimerkiksi ulkoi- • ♦ Ϊ**·' 25 sesti käytettäessä, vaikuttavan aineosan pitoisuus on • · edullisesti vähintään 0,001 %, vielä edullisemmin 0,1 - t · · ·.· 2 %. Hoidossa käytettävä määrä on edullisesti 30 - 100 mg/ • · · _ • · · 2 • cm .

Tämän keksinnön mukaista sientenvastaista ainetta • · V,· 30 voidaan käyttää muiden sientenvastaisten aineiden tai an- eee tibakteeristen aineiden, kuten amfoterisiini B:n, trikomy- ··. siinin, varitotiinin ja klotrimatsolin, kanssa sekoitettu- * ·« *.·. na.

• · • * "* Esimerkkejä 35 Tätä keksintöä valaistaan nyt yksityiskohtaisemmin • « !,*·· seuraavin esimerkein, formulointiesimerkein ja testausesi- 119357 9 merkein, mutta tulisi käsittää, että keksintö ei rajoitu niihin. Ellei toisin ole ilmoitettu, kaikki prosenttiluvut ovat painoprosentteja.

Esimerkki 1 5 Yhdisteen B valmistus menetelmällä 3 la. (S)-1-(2,4-dikloorifenyyli)-2-bromietanolin valmistus

Cl^^vCl elves'Cl

10 -- ^Ö^y-OH

o ^-3r

Kuivaan tetrahydrofuraaniin (THP, 5 ml) lisättiin (S) -3,3-difenyyli-l-metyylitetrahydro-lH, 3H-pyrrolo [1,2-15 c] [1,3,2]-oksatsaborolia (300 mg), ja seokseen lisättiin sitten lämpötilassa -20 °C pisaroittain boraani-THF-liuosta (1,0 mol/1, 8 ml). Samassa lämpötilassa lisättiin vielä pisaroittain liuos, joka sisälsi 2,4-dikloorifenasyylibro-midia (2,7 ml) THFissa (8 ml). Syntynyt seos lämmitettiin 20 huoneenlämpötilaan ja sitä sekoitettiin sitten 3 tuntia. Sen jälkeen lisättiin metanolia (10 ml) ylimääräisen bo- ··,·. raanin hajottamiseksi, ja sitten reaktioseos kaadettiin • · *. \ veteen ja uutettiin eetterillä. Orgaaninen kerros pes- • *1« I,,’ tiin vedellä ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaa- • · *;;;* 25 tiliä. Liuote tislattiin pois alennetussa paineessa ja • φ **··* jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelipyl- *.V väässä (etyyliasetaatin ja n-heksaanin seos, 1:3), jolloin ··· V · saatiin haluttua tuotetta (2,5 g), jonka optinen puhtaus oli 80 %ee.

iV: 30 Ib. (S) - [1- (2,4-dikloorifenyyli)-2-bromietyyl±]me- ·***: taanisulfonaatin valmistus st· *

*···: clT6lcl clToTCI

SX^-r-OH -- ti^y-0S0,CHI

35 *"Br ^ Br * · * • ·· • · 119357 10 (S)-1-(2,4-dikloorifenyyli)-2-bromietanoli (1,6 g) liuotettiin dikloorimetaaniin (30 ml) ja liuokseen lisättiin sitten trietyyliamiinia (660 mg). Sen jälkeen liuokseen lisättiin vielä pisaroittain metaanisulfonyyliklori-5 dia (750 mg) jäillä samalla jäähdyttäen. Tunti huoneenlämpötilassa sekoittamisen jälkeen reaktioseos pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuote tislattiin pois alennetussa paineessa, jolloin saatiin haluttu yhdiste raakatuotteena (1,9 g). Tulokseksi saatu 10 raakatuote käytettiin puhdistamattomana seuraavaan reaktioon.

le. (R) -(-) -(E)-[4-(2,4-dikloorifenyyli)-1,3-ditio-lan-2-ylideeni]-1-imidatsolyyliasetonitriilin (yhdisteen B) valmistus 15 α^γΟί clTr:rrcl iQJ^-OSO.CH, -- L- Br

20 N

DMSO:iin (10 ml) lisättiin kaliumhydroksidia (440 mg) ja muodostuneeseen liuokseen lisättiin pisaroittain ja • s .·. · vesihauteessa samalla jäähdyttäen liuos, joka valmistet- * ·· tiin liuottamalla 1-syaanimetyyli-imidatsoli (300 mg) ja X* 25 hiilidisulfidi (210 mg) DMSO:iin (5 ml), mitä seurasi tun-

• S

*;··* nin sekoitus huoneenlämpötilassa ditiolaattiliuoksen ai- • 1 · · *·*.* kaansaamiseksi. Tulokseksi saatu ditiolaattiliuos lisät- • s* V : tiin sitten pisaroittain liuokseen, joka valmistettiin liuottamalla (S)- [1-(2,4-dikloorifenyyli)-2-bromietyyli]-:V: 30 metaanisulfonaattiraakatuote (950 mg) DMSO:iin (10 ml), vesihauteessa samalla jäähdyttäen. Kaksi tuntia huoneen- o« lämpötilassa sekoittamisen jälkeen reaktioseos kaadettiin • *·· jääveteen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen ker- • * *·;·* ros pestiin vedellä ja kuivattiin sitten vedettömällä mag- t,|j* 35 nesiumsulfaatilla. Sen jälkeen liuote tislattiin pois • · • · · • ·· • · 119357 11 alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografi-sesti silikageelipylväässä [etyyliasetaatin (AcOEt) ja n-heksaanin seos, 2:1]. Tulokseksi saatu kiteinen aine kiteytettiin uudelleen liuoteseoksesta, joka koostui etyyli-5 asetaatista ja n-heksaanista, jolloin saatiin haluttua tuotetta (350 mg), jonka optinen puhtaus oli 95 %ee. Esimerkki 2

Yhdisteen B valmistus menetelmällä 1 2a. (S) -1- (2,4-dikloorifenyyli)etaani-1,2-bismetaa- 10 nisulfonaatin valmistus

Ckr«YC1' cl'TnTCl [Oi. 0H - k0H *-OS0:CH, 15 (S)-1-(2,4-dikloorifenyyli)-1,2-etaanidioli (1,5 g; optinen puhtaus 98 %ee), joka valmistettiin tunnetulla menetelmällä [J. Org. Chem. 57 (1992) 2768], ja trietyyli-amiini (3,1 g) liuotettiin dikloorimetaaniin (50 ml) ja 20 liuokseen lisättiin pisaroittain metaanisulfonyylikloridia (3,3 g) jäillä samalla jäähdyttäen. Kaksi tuntia huoneen- .. . lämpötilassa sekoittamisen jälkeen reaktioseos pestiin ve- » * » \ \ dellä ja orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä magne- • « * ** " siumsulfaatilla. Liuote tislattiin pois alennetussa pai- * **♦ *.·.* 25 neessa, jolloin saatiin haluttu yhdiste raakatuotteena ··· (2,6 g). Tulokseksi saatu raakatuote käytettiin puhdista- • » *.·,* mattomana seuraavaan reaktioon.

:T: 2b. (R) --(E)-[4-(2,4-dikloorifenyyli)-1,3-ditio- lan-2-ylideeni]-1-imidatsolyyliasetonitriilin (yhdisteen 30 B) valmistus • · ··· ·" ciy^ci cl'TriT/C1 V 35 ^OSOiCHi ·:· 35 v__ .

.... N

• * e e * • «· • · 119357 12 DMSO:iin (20 ml) lisättiin kaliumhydroksidia (1,09 grammaa) ja muodostuneeseen liuokseen lisättiin pisaroit-tain ja vesihauteessa samalla jäähdyttäen liuos, joka valmistettiin liuottamalla 1-syaanimetyyli-imidatsoli (750 5 mg) ja hiilidisulfidi (520 mg) DMSO:iin (10 ml), mitä seurasi tunnin sekoitus huoneenlämpötilassa ditiolaattiliuok-sen aikaansaamiseksi. Tulokseksi saatu ditiolaattiliuos lisättiin sitten pisaroittain liuokseen, joka valmistettiin liuottamalla (S)-1-(2,4-dikloorifenyyli)etaani-1,2-10 bismetaanisulfonaattiraakatuote (2,61 g) DMSO:iin (20 ml), vesihauteessa samalla jäähdyttäen. Kaksi tuntia huoneenlämpötilassa sekoittamisen jälkeen reaktioseos kaadettiin jääveteen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömällä magnesium-15 sulfaatilla, ja sitten liuote tislattiin pois alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silika-geelipylväässä (AcOEt:n ja n-heksaanin seos, 2:1). Tulokseksi saatu kiteinen aine kiteytettiin uudelleen liuote-seoksesta, joka koostui etyyliasetaatista ja n-heksaanis-20 ta, jolloin saatiin haluttua tuotetta (1,2 g), jonka optinen puhtaus oli 99 %ee. Edellä annetuissa esimerkeissä optinen puhtaus laskettiin pinta-alaprosenttiluvusta HPLC-käyrästä, joka saatiin käyttämällä optisesti aktiivista • ·· I./ HPLC-pylvästä [Chiralcel OD (tavaramerkki, Daicel Chemical "f 25 Industry Ltd.)].

• · ***** Formulointiesimerkki 1 • · *·*.* Yhdiste B 10 osaa • · · V : Magnesiumstearaatti 10 osaa

Laktoosi 80 osaa ί ϊ ! 30 Yllä mainitut aineosat sekoitettiin keskenään ta- * · :*"*: saisesti ja seoksesta muodostettiin jauheita tai hienoja • · · ./ hiukkasia, jolloin saatiin aikaan pulverivalmiste.

• ·· • ·· • » • · ·«· ♦ ··· «··» • · • · · • ·· • · 119357 13

Fonnulointiesimerkki 2

Yhdiste B 50 osaa Tärkkelys 10 osaa

Laktoosi 15 osaa 5 Etyyliselluloosa 20 osaa

Polyvinyylialkoholi 5 osaa

Vesi 30 osaa

Yllä mainitut aineosat sekoitettiin keskenään tasaisesti ja niitä vaivattiin, ja sen jälkeen seos jauhet-10 tiin. Tulokseksi saadut hiukkaset seulottiin, jolloin saatiin rakeinen valmiste.

Formulointiesimerkki 3

Yhdiste B 0,5 osaa

Ioniton pinta-aktiivinen aine 2,5 osaa 15 Fysiologinen suolaliuos 97 osaa

Yllä mainitut aineosat kuumennettiin ja sekoitettiin keskenään ja sen jälkeen steriloitiin, jolloin saatiin aikaan injektiovalmiste.

Fonnulointiesimerkki 4 20 Yhdiste B 0,01 osaa 0,5 % karboksimetyyliselluloosa 99,99 osaa Ensin mainittu aineosa suspendoitiin jälkimmäiseen, • » · jolloin saatiin aikaan suspensio.

• M

!..* Fonnulointiesimerkki 5 • * "I 25 Yhdiste B 1 osa • · *;··* Polyeteeniglykoli 400 99 osaa • · · *·*·* Yllä mainitut aineosat sekoitettiin keskenään yh-

»M

*.* * disteen B liuottamiseksi, jolloin saatiin aikaan siveltä väksi soveltuva nestemäinen valmiste.

* : Ϊ 3 0 Fonnulointiesimerkki 6 • ·

Yhdiste B 2 osaa ···

Polyeteeniglykoli 400 49 osaa • ·· *... Polyeteeniglykoli 4000 49 osaa t · **;·’ Yllä mainitut aineosat sekoitettiin keskenään kuu- ·* 35 mentamalla yhdisteen B liuottamiseksi ja aikaansaatu seos jäähdytettiin, jolloin saatiin aikaan salva.

• e 119357 14

Formulointiesimerkki 7

Yhdiste B 3 osaa 1,2-propaanidioli 5 osaa

Glyserolistearaatti 5 osaa 5 Valaanpääöljy 5 osaa

Isopropyylimyristaatti 10 osaa

Polysorbaatti 4 osaa

Yllä mainittujen aineosien seos kuumennettiin ja jäähdytettiin ja siihen lisättiin 68 osaa vettä samalla 10 sekoittaen, jolloin saatiin aikaan voide. Formulointiesimerkki 8

Yksi osa yhdistettä B, 5 osaa bentsyyliaikoholla, 30 osaa etanolia ja 47 osaa propeeniglykolia sekoitettiin keskenään yhdisteen B liuottamiseksi. Muodostuneeseen 15 liuokseen lisättiin sitten vesiliuos, joka sisälsi 1 osan Hiviswako 104:ää (tavaramerkki, Wako Junyaku Co., Ltd.) ja 15 osaa puhdistettua vettä, homogeenisen liuoksen aikaansaamiseksi. Sen jälkeen liuokseen lisättiin 1 osa di-iso-propanoliamiinia samalla sekoittaen, jolloin saatiin gee-20 livalmiste.

Formulointiesimerkki 9

Yksi osa yhdistettä B liuotettiin 5 osaan bentsyy- · lialkoholia ja 5 osaan dietyylisebasaattia ja liuokseen • *· I,.* lisättiin 5 osaa setyylialkoholia, 6 osaa stearyylialkoho- 1 lia, 1 osa sorbitaanimonostearaattia ja 8 osaa polyoksi- e e *···* etyleenimonostearaattia, mitä seurasi kuumennus lämpöti- • e · V.* laan 70 °C viimeksi mainittujen aineosien liuottamiseksi.

• et

Vi Muodostuneeseen homogeeniseen liuokseen, jota pidettiin lämpötilassa 70 °C, lisättiin lämpötilaan 70 °C kuumennet- ϊΥϊ 30 tua puhdistettua vettä, mitä seurasi jäähdytys samalla ;***· sekoittaen, jolloin saatiin voidekoostumus.

··· ,.* Testausesimerkki 1 S **1 \tt In vitro -aktiivisuus Trichophyton-lajikkeita vas- '···* taan ··· 35 Pienimmät inhibitoriset pitoisuudet (MIC:t) määri- ·*·,; tettiin kaksinkertainen liemilaimennus -menetelmällä (mak- • · 119357 15 romenetelmällä) käyttämällä Sabouraud'n glukoosilientä, joka sisälsi 1 %:n baktopeptonia ja 4 % glukoosia. Kuhunkin putkeen, jotka sisälsivät 9,8 ml lientä, lisättiin 0,1 ml kutakin testattavaa yhdistettä liuotettuna DMSO:iin 5 ja 0,1 ml konidiosuspensiota (1-106 konidiota/ml). Pantiin merkille sienikasvusto 7 vuorokauden inkuboinnin jälkeen, joka tehtiin lämpötilassa 27 °C. MIC määritettiin pienim-pänä lääkeainepitoisuutena, joka esti näkyvän sienikasvuston. Tulokset on esitetty taulukossa 1.

10

Taulukko 1 _MIC (ua/ml)_

Raseeminen

Kanta_Yhdiste B_yhdiste B_TBF

15 A

IFO 5466 0,02 0,04 0,02 IFO 5809 0,005 0,02 0,01 IFO 5810 0,005 0,01 0,005 IFO 5811 0,01 0,04 0,01 20 IFO 5929 0,01 0,02 0,01 TIMM 1189 0,01 0,02 0,01 f\: TIMM 1814 0,02 0,04 0,01 TIMM 1815 0,02 0,04 0,02 * · TIMM 1817 0,01 0,02 0,01 ··· .·*·. 25 TIMM 2789 0,0025 0,01 0,0025 • Il

B

• · · IFO 5467 0,0025 0,005 0,005 • IFO 5807 0,0025 0,01 0,005 IFO 5808 0,0025 0,01 0,005 • · · *·’·’ 30 IFO 6203 0,0013 0,005 0,0025 • · · IFO 6204 0,0025 0,01 0,005 ·*·„ IFO 9185 0,0013 0,0025 0,0025 • .*··. TIMM 1822 0,00063 0,0025 0,0025 TIMM 1823 0,0013 0,05 0,0025 ··" 35 TIMM 1824 0,0013 0,005 0,0013 • · :.**i TIMM 1830 0,00063 0,0013 0,00063 119357 16

Selityksiä: A = Trichophyton mentagrophytes B = Trichophyton rubrum TBF = (E)-N-(6,6-dimetyyli~2-hepten-4-ynyyli)-N-metyyli-1-5 naftaleenimetaaniamiinihydrokloridi (geneerinen nimi : ter-binafiini)

Raseeminen yhdiste B on yhdisteen B raseeminen seos.

jalka impi antoi ti in Sabouraud'n glukoosiagarmaljal-10 le, joka sisälsi antibiootteja, ja suoritettiin 14 vuorokauden viljely lämpötilassa 27 °C. Iholohkot, jotka sallivat sienen kasvun, katsottiin viljelypositiiviseksi ja jalka (jalkapohja + kinner), jossa esiintyi useampia kuin yksi viljelypositiivinen iholohko, katsottiin sieniposi-15 tiiviseksi. Lisäksi määriteltiin infektion voimakkuus pistein, jotka perustuivat viljelypositiivisten iholohkojen lukumäärään. Toisin sanoen pistemääräksi annettiin +10, + 9, +8, +7, +6, +5, +4, +3, +2, +1 tai 0 tutkituista 10 iholohkosta viljelypositiivisiksi havaittujen iholohkojen 20 lukumäärän mukaan. Tilastolliset analyysit sienipositii-visten jalkojen osuuden ja infektion keskimääräisen voi- • · · • V makkuuden määrittämiseksi tehtiin Fisherin tarkalla toden- : näköisyystestillä ja vastaavasti Mannin-Whitneyn U-tes- :***: tiliä. Tulokset on esitetty taulukossa 2.

• ·« • · · • m • · • · · • · • · 1 • · * · • · · • · · * 1 · • · • 1 · • · 1 * · II» • · • 1 • · · * · • « * · · • · · • · • · « · * «··· · • · · • ·1 • · 119357

Taulukko 2 17

Infektioxkeekimääräinen Sienipositiivisuusaste voimakkuus

Positiivisten jalkojen 5 määrä/jalkojen koko-

Testiryhmä naismäärä (%) Jalkapohja Kinner

0,5 % yhdistettä A 2/10 (20)A,B +0,3A,B 0A'B

1 % yhdistettä A 0/10 (0)A'B'C 0A'B 0A,B

10 1 % raseemista

yhdistettä A 4/10 (40)A'B +0,6A,B +0,2A'B

Käsittelemätön 10/10 (100) +7,7 +5,4 PEG 400 10/10 (100) +7,9 +4,9 15 Huomautuks ia: A: p < 0,01 käsittelemätöntä vertailuryhmää vastaan.

B: p < 0,01 PEG 400:11a käsiteltyä vertailuryhmää vastaan. 0: p < 0,05 1-prosenttisella raseemisella yhdisteellä A käsiteltyä ryhmää vastaan.

20 Käsittelemättömän ryhmän sienipositiivisuusaste oli aa · • V 100 % ja sieniä havaittiin kaikissa infektoiduissa jalois- • · : *.: sa. Mitä tulee infektion keskimääräiseen voimakkuuteen, :***; suuri arvo +7,7 saatiin jalkapohjasta, mutta se oli +5,4 • · a ·*’*; 25 kintereessä. Tämä osoittaa siten suuntauksen, että infek- a·· tioaste oli kintereessä pienempi kuin jalkapohjassa. Lähes .···, samat tulokset saavutettiin PEG 400:11a käsitellyssä ryh- a a a mässä eikä liuotteella havaittu parantavaa vaikutusta.

, , 1-prosenttisella raseemisella yhdisteellä A osoittautui • · a *·]·* 30 olevan merkittävä parantava vaikutus käsittelemättömään a a *···* ryhmään ja PEG:11a käsiteltyyn ryhmään verrattuna, mutta sienipositiivisuuden aste oli 40 % ja infektion keskimaa- a räinen voimakkuus jalkapohjassa ja kintereessä oli 0,6 % a·· *. ja vastaavasti 0,2 % ja sieniä havaittiin neljässä inoku- aaa 35 loiduista 10 jalasta. 0,5-prosenttisella yhdisteellä A ka- aa* a aa a a 119357 18 sitellyssä ryhmässä sienipositiivisuusaste oli 20 %, mikä osoittaa, että yhdisteen A vaikutus oli kaksinkertainen 1-prosenttisen raseemisen yhdisteen A vaikutukseen nähden, ja 1-prosenttisella yhdisteellä A käsitellyssä ryhmässä 5 saavutettiin se merkittävä vaikutus, että kaikki infektoidut jalat parantuivat sieninegatiivisiksi, toisin sanoen saavutettiin mykologisesti täydellinen parantuminen.

Yhdisteen A ja raseemisen yhdisteen A välinen vertailu osoitti selvästi, että yhdisteellä A oli merkittä-10 västi suurempi parantava vaikutus kuin raseemisella yhdisteellä A samana pitoisuutena ja että verrattaessa 0,5-pro-senttista yhdistettä A ja 1-prosenttista raseemista yhdistettä A, jotka olivat vaikuttavan aineosan (A.I.) suhteen, joka oli yhdiste A, pitoisuudeltaan samanlaisia, yhdis-15 teellä A oli kaksi kertaa suurempi vaikutus kuin 1-prosenttisella raseemisella yhdisteellä A. Mitä tulee MIC-arvoon testauksessa käytetyn T. mentagrophytes TIMM 2789 -kannan suhteen, on selvää, että yhdisteen A sienenvastai-nen vaikutus in vitro oli 4-kertainen raseemisen yhdisteen 20 A vaikutukseen nähden, ja että tämä ero sienenvastaisessa vaikutuksessa heijastui myös parannustestiin, jossa käy- ·· t • V tettiin in vivo -infektiomallia.

Testausesimerkki 2 • ·

Zn vitro -aktiivisuus Candida albicansia vastaan *·· ;***; 25 MIC:t määritettiin kaksinkertainen liemilaimennus ··· -menetelmällä (mikromenetelmällä) käyttämällä RPMI 1640 • · · • · ,···. -alustaa, joka oli puskuroitu morfolinopropaanisulfoniha- * * ·

polla niin, että hapon loppupitoisuus oli 0,165 mol/1 (pH

.. 7,0). Tasapohjaisten mikromaljojen kuhunkin syvennykseen • » » 30 pipetoitiin 100 μΐ hiivasolususpensiota (1*10 - 5*10 so- • · *···* lua/ml) ja 100 μΐ yhdistettä sisältävää elatusalustaa. 48 tunnin inkuboinnin jälkeen, joka tehtiin 35 °C:n lämpöti- • .***. lassa, mitattiin sameus kustakin syvennyksestä aallonpi- • · ·, tuudella 630 nm. MIC määritettiin pienimpänä lääkeainepi- • t · ·*·· 35 toisuutena, joka sai aikaan sienikasvuston 80-prosenttisen • · » • ·· • f 119357 19 inhibition (mitattuna sameuden lisääntymisenä) . Tulokset on esitetty taulukossa 2.

Taulukko 2 5 _MIC (uq/ntl)_

Kasaaminen

Kanta_Yhdiste B yhdiste B_TBF_FCZ

IFO 0197 0,0625 0,125 >32,0 0,25 IFO 0579 0,0313 0,0625 >32,0 0,125 10 IFO 1269 0,0625 0,0625 4,0 0,25 IFO 1270 0,25 0,25 >32,0 0,25 IFO 1385 0,0625 0,125 >32,0 0,25 IFO 1386 0,125 0,25 >32,0 0,5 TIMM 3163 16,0 >32,0 >32,0 16,0 15 TIMM 3164 0,5 0,5 >32,0 2,0 TIMM 3165 2,0 4,0 >32,0 >32,0 TIMM 3166 1,0 4,0 >32,0 8,0

Selitys: 20 FCZ = 2-(2,4-difluorifenyyli)-1,3-bis (1H-1,2,4-triatsol-l-yyli)-2-propanoli (geneerinen nimi: flukonatsoli) aa · aaa a a a a : Testausesimerkki 3 • s

Yhdisteen B in vitro -aktiivisuus Aspergillus fund- • aa 25 gatusia vastaan aaa MIC:t määritetettiin kaksinkertainen agarlaimennus .···, -menetelmällä käyttämällä kasitoniagaria, joka sisälsi aaa 0,9 % baktokasitöniä, 1 %:n baktohiivauutetta, 2 % glukoo-siä, 0,1 % KH2P04:a, 0,1 % Na2HP04:a, 1 %:n Na3C6H507:ää ja *·]·* 30 1,6 % agaria. Silmukallinen kutakin inokulaattia (1-106 a a *·;·* konidiota/ml) levitettiin viiruiksi yhdistettä sisältäväl- j*\. le agarmaljalle ja pantiin merkille sienikasvusto 48 tun- :***: nin inkuboinnin jälkeen, joka tehtiin lämpötilassa 35 °C.

aaa *. MIC määritettiin pienimpänä lääkeainepitoisuutena, joka aaa a aaa» a a aaa a aa a a 20 1 1 9357 esti näkyvän sienikasvuston. Tulokset on esitetty taulukossa 3.

Taulukko 3 5 _MIC laa/ml)_

Raseeminen

Kantia_Yhdiste B yhdiste B_TBZ_ITZ

TIMM 0063 0,00063 0,0013 1,28 0,04 TIMM 0078 0,00063 0,0013 1,28 0,04 10 TIMM 1728 s0,00031 0,00063 1,28 0,08 TIMM 1767 0,00063 0,0013 1,28 0,08

Selitys: ITZ = (±)-l-s-butyyli-4-{p-{4-[p-(2R1,4S1)-2-(2,4-dikloo-15 rifenyyli) -2- (lH-l,2,4-triatsol-l-yylimetyyli) -1,3-diokso-lan-4-yyli]metoksi Jfenyyli}-l-piperatsinyylijfenyyli-del-ta2-!, 2,4-triatsolin-5-oni (geneerinen nimi: itrakonatsoli) »» · • · · • · • · t · • 1 1 • ·· • · • te • · • · «··

Ml • · • · *·· t · • · · • · · • ·

St·

* « I

• · · • ·

• · I

• · I • ·

«M

• · • · • es * • · • · • · · ··· • · • · * · · * f t1 * ··♦· · • 1 · • ·« « ·

Claims

119357 Patentt ivaatImukset

1. Farmaseuttinen koostumus, tunnettu siitä, että se käsittää vaikuttavana aineosanaan (R) - (-) - (E) - [4-5 (2,4-dikloorifenyyli)-1,3-ditiolan-2-ylideeni]-1-imidatso- lyyliasetonitriiliä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa yhdistettynä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantaja-tai laimennusaineen kanssa.

2 . (R)--(E)-[4-(2,4-dikloorifenyyli)-1,3-ditio- 10 lan-2-ylideeni]-1-imidatsolyyliasetonitriili tai sen suola.

3. Menetelmä (R)(E)-[4-(2,4-dikloorifenyyli)-1,3-ditiolan-2-ylideeni]-1-imidatsolyyliasetonitriilin valmistamiseksi, joka vastaa seuraavaa kaavaa (B), clvÄrcl iQJ-ySwCN m 15 tunnettu siitä, että menetelmä käsittää sen, ♦ · I *t ·[ että optisesti aktiivisen glykolijohdoksen, joka vastaa seu- • · · ** 1· raavaa kaavaa (II) , ··2 !...: 20 • · • · 1 « i t • · ,···, jossa Xi ja X2 ovat samoja tai erilaisia ja kumpi- • · *" kin tarkoittaa metaanisulfonyylioksiryhmää, bentseenisulfo- M ! 3 25 nyy li oksi ryhmää, p-tolueenisulfonyylioksiryhmää tai halogee- t·· niatomia; • 1· • • tn t • · · 2 • ♦· 3 • ♦ 119357 tai sen kanssa ekvivalenttisen yhdisteen annetaan reagoida ditiolaattisuolan kanssa, joka vastaa seuraavaa kaavaa (m) : liSwCH («n “M 5 jossa M tarkoittaa alkalimetalliatomia.

4. (R)-(-)-(E)-[4-(2,4-dikloorifenyyli)-1,3-ditio-lan-2-ylideeni]-1-imidatsolyyliasetonitriilin tai sen farma- 10 seuttisesti hyväksyttävän suolan käyttö, valinnaisesti yhdistettynä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantaja- tai lai-mennusaineen kanssa, lääkkeen valmistamiseksi mykoosin ehkäisemistä tai hoitoa varten.

5. (R)-(-)-(E)-[4-(2,4-dikloorifenyyli)-1,3-ditio-15 lan-2-ylideeni]-1-imidatsolyyliasetonitriilin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan käyttö farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseen. ·· · * · · • t • i • 9 • · · • ·· * · **· t · • · 9·· 9«· 9 9 • I ··· 9 * • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9*9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 999 9 9 9 9 999 9 99 9 9 9 99 9 999 9 9 9 9 999 9 9 999 9 9999 1 9 9 9 9 9 99 9 9 119357