DE69824016T2 - Fermentierte sojamilch hergestellt mit bifidobacterium breve yit 4065 - Google Patents

Fermentierte sojamilch hergestellt mit bifidobacterium breve yit 4065 Download PDF

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Description

  • Technisches Gebiet
  • Die vorliegende Erfindung betrifft Bifidobacterium breve, das hervorragend eine Lagerung überlebt und fermentierte Sojamilch mit angenehmem Geschmack, die dasselbe enthält.
  • Allgemeiner Stand der Technik
  • Seit langer Zeit wurde eine Fermentation von Sojamilch mit Hilfe von Mikroorganismen durchgeführt, um eine geschmackliche Verbesserung von Sojamilch, die einen charakteristischen Bohnengeruch oder Grasgeschmack aufweist, zu erreichen. In dem Verlauf einer solchen Fermentationsbehandlung wurde eine Vielzahl von Mikroorganismen eingesetzt, wie z. B. Milchsäurebakterien, Hefen, Bacillus natto, Essigsäure-Bakterien und Aspergillus. Es wurde davon berichtet, dass in den meisten solchen Behandlungen fermentierte Produkte erhalten wurden, die angenehmen Geschmack aufwiesen.
  • Von Sojamilch war bekannt, dass es die Proliferation oder Fortpflanzung von Mikroorganismen fördert, die zu der Gattung oder Genus Bifidobacterium (im Folgenden als Bifidobakterien bezeichnet) gehören, möglicherweise aufgrund von Sojabohnen-Oligosacchariden, die in Sojamilch enthalten sind (Yoichi KOBAYASHI et al., "Intestinal Flora and Food Factors", S. 69, 1984, herausgegeben von Gakkai Shuppan Center).
  • In der Zwischenzeit wurde eine Vielzahl von Untersuchungen durchgeführt in Bezug auf die Brauchbarkeit von Bifidobakterien. Zum Beispiel wurde bewiesen, dass die Verabreichung von einer lebenden Bakterienzubereitung (Bifidobacterium breve) einen heilenden Effekt auf refraktäre pädiatrische Diarrhöe zeigt, und ein möglicher Mechanismus dafür der Verbesserung der Darmflora zugeschrieben werden kann. Außerdem wurde gefunden, dass eine Verabreichung der Zubereitung an Erwachsene zu einer Verringerung von Fäulnisprodukten in Fäkalien und Fäulnisprodukten erzeugenden Bakterien zur Folge hat. Außerdem wurde ein das Immunsystem aktivierender Effekt von Bifidobakterien ebenso aufgeklärt. Daher nimmt man an, dass Bifidobakterien förderlich sind für die menschliche oder humane Gesundheit durch Verbesserung der Darmumgebung (herausgegeben von Tomotari MITSUOKA, "Study of Bifidobacteria", 1994).
  • Daher wurde eine Vielzahl von Produkten, die Bifidobakterien einsetzen, entwickelt, und gleichzeitig wurden Anstrengungen unternommen, um ein fermentiertes Sojamilch-Produkt zu entwickeln, das zahlreiche Bifidobakterien enthält und das auch eine Zahl lebens fähiger Zellen oder Bakterien [viable count] (hohe Überlebensrate) aufrechterhält während des Zeitraums, der benötigt wird für die Verteilung des Produkts.
  • Da Bifidobakterien jedoch Milchsäure und Essigsäure in einem molaren Verhältnis von 1 : 1,5 erzeugen durch einen Metabolismus oder Stoffwechsel von Zucker, neigen Bifidobakterien dazu, durch selbst hergestellte Säure zu Grunde zu gehen oder zu sterben. Daher ist das Wachstum davon auf eine gewisse Zahl lebensfähiger Bakterien oder Zellen (viable count) oder mehr und Beibehaltung der Anzahl lebensfähiger Zellen oder Bakterien (viable count) schwierig.
  • Um das oben genannte Problem zu lösen, wurde vorgeschlagen, ein Bifidobakterium von hoher Überlebensrate einzusetzen (japanisches Patent Nr. 2563197).
  • Obwohl das eingesetzte Bifidobakterium eine verbesserte Überlebensrate zeigt im Vergleich zu einem herkömmlichen Bifidobakterium, kann das eingesetzte Bakterium jedoch nicht über einen Wert von 1 × 109 Zellen/ml oder mehr proliferiert oder fortgepflanzt werden, und eine Beibehaltung einer Zahl lebender Zellen oder Bakterien (viable count) von mindestens 1 × 108 Zellen/ml nach 14 Tagen Lagerung ist schwierig.
  • Daher ist es eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Bifidobakterium bereitzustellen, das einen gewissen Grad von einer Anzahl lebensfähiger Teilchen (viable count) selbst nach Lagerung über einen gewissen Zeitraum aushält. Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, eine fermentierte Sojamilch bereitzustellen, die das Bifidobakterium enthält.
  • Offenbarung der Erfindung
  • Unter dem Gesichtspunkt des oben stehenden führten die Erfinder der vorliegenden Erfindung weitreichende Untersuchungen durch und entdeckten ein Bifidobakterium, das die oben genannten Erfordernisse für die Anzahl lebensfähiger Zellen oder Bakterien (viable count) erfüllt, und sie fanden auch, dass eine fermentierte Sojamilch mit angenehmem Geschmack und einer hohen Zahl lebensfähiger Zellen oder Bakterien (viable count) hergestellt werden kann durch die Verwendung des Bifidobakteriums. Die vorliegende Erfindung wurde auf der Basis dieser Ergebnisse vollendet.
  • Demzufolge beschreibt die vorliegende Erfindung das Bifidobacterium breve YIT 4065, das eine Zahl lebensfähiger Zellen oder Bakterien (viable count) von 1 × 109 Zellen/ml oder mehr unmittelbar nach einem Kultivieren in oder auf einem Sojamilch-Medium zeigt, und eine Zahl lebensfähiger Zellen oder Bakterien (viable count) von 1 × 108 Zellen/ml oder mehr nach einer Lagerung bei 10°C über einen Zeitraum von 14 Tagen zeigt. Die Erfindung stellt eine fermentierte Sojamilch bereit, die den B. breve YIT 4065-Stamm enthält.
  • Kurze Beschreibung der Figuren
  • 1 ist eine graphische Darstellung, welche die Überlebensfähigkeit von Bakterien zeigt, die in Sojamilch enthalten sind. 2 ist eine graphische Darstellung, welche die Überlebensfähigkeit von dem YIT 4065-Stamm in fermentierter Sojamilch zeigt.
  • Beste Ausführungsformen zur Ausführung der Erfindung
  • Das Bifidobacterium breve YIT 4065 zeigt eine bemerkenswerte hohe Überlebensrate in einem Sojamilch-Medium und nachdem es auf einen Wert von 1 × 109 Zellen/ml gewachsen ist, hält es eine Zahl lebensfähiger Bakterien oder Zellen (viable count) von 1 × 108 Zellen/ml oder mehr selbst nach Lagerung bei 10°C über einen Zeitraum von 14 Tagen aufrecht.
  • Beispielhafte Mikroorganismen, die zu Bifidobacterium breve gehören, schließen einen Mikroorganismus ein, der YIT 4065 bezeichnet wird und hinterlegt ist als FERM BP-6223 (ursprüngliches Hinterlegungsdatum: 29. Februar 1996) beim Nationalen Institut für Biowissenschaften und Human-Technologie, Agentur oder Kommission für Industrielle Wissenschaft und Technologie [National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology] (Adresse: 1–3, Higashi, 1-chome, Tsukuba-shi, Ibarakiken 305-0046 JAPAN) gemäß dem Budapester Vertrag. Das Bakterium wird auf die folgende An und Weise hergestellt.
  • Kultivierte Zellen (1,5 × 109 Zellen) von Bifidobacterium breve YIT 4006 (hinterlegt als FERM BP-752 (ursprüngliches Hinterlegungsdatum: 28. Januar 1977) beim Fermentations-Forschungs-Institut, Agentur oder Kommission für Industrielle Wissenschaft und Technologie, Ministerium des Internationalen Handels und Industrie [Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry] (Adresse: 1–3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken 305-0046 JAPAN) gemäß dem Budapester Vertrag) werden in 50 mM Phosphat-Puffer (pH 7,0) suspendiert, und eine gleiche oder äquivalente Menge von einer 5 μg/ml-Lösung von NTG (N-Methyl-N'-nitro-Nnitrosoguanidin) wird mit der Suspension gemischt. Die erhaltene Mischung wird bei 37°C 30 Minuten lang aufbewahrt. Nach Entfernung des NTG durch Waschen, werden die erhaltenen zu einer Umformung oder Mutation behandelten Zellen auf ein 14%-Vollmilchpulver-Medium (Hefeextrakt-Gehalt: 0,03%) okuliert oder eingeimpft und bei 37°C kultiviert, bis der pH 4,5–4,7 erreicht. Eine klare Lösung oder Brühe oder Liquor (fine liquor) wird zu dem kultivierten Produkt in einer Menge von 8% gegeben, und die Mischung wird in Teströhrchen gegossen. Jedes Teströhrchen wird mit einem Butylgummi-Stopfen verschlossen und bei 10°C gelagert. Die Zahl lebensfähiger Zellen oder Teilchen (viable count) wird über die Zeit gemessen unter Verwendung eines modifizierten Rogosa Agar-Mediums. Wenn die Zahl lebensfähiger Zellen oder Teilchen (viable count) etwa 1% erreicht, wird das gelagerte Produkt wieder auf ein 14%-Vollmilchpulver-Medium (Hefeextrakt-Gehalt: 0,03%) okuliert oder eingeimpft und bei 37°C kultiviert, bis der pH 4,5–4,7 erreicht. Nach Zugabe von Zucker zu dem kultivierten Produkt wird die Mischung wieder gelagert. Dieses Verfahren von Lagern, Zählen, Okulieren oder Einimpfen, Kultivieren wird viermal wiederholt, und aus dem auf diese Weise erhaltenen fermentierten Produkt wird ein Stamm als Bifidobacterium breve YIT 4065 abgetrennt, der eine verbesserte Überlebensfähigkeit zeigt.
  • Zusätzlich zu der oben genannten Eigenschaft in Bezug auf die Überlebensfähigkeit zeigt Bifidobacterium breve YIT 4065 die folgenden mykologischen Eigenschaften.
  • Von dem Bakterium ist nachgewiesen, dass es pleomorph ist; d. h. stäbchenartig oder verzweigend durch Beobachtung unter einem optischen Mikroskop, und es ist Gram-positiv. Wenn das Bakterium anaerob kultiviert wird auf einem modifizierten Rogosa-Agar-Medium, wird eine weiße und glänzende Kolonie gebildet, während es, wenn es auf ähnliche Weise auf einem Milch-Medium kultiviert wird, Milchsäure und Essigsäure zu geronnener Milch gebildet werden. Die Katalase-Aktivität ist negativ.
  • Das Bakterium zeigt positive Fermentationsaktivität gegenüber Ribose, Fructose, Galactose, Sucrose, Maltose, Cellobiose, Lactose, Melibiose, Raffinose, Melezitose und Salicin und negative Aktivität gegenüber Arabinose, Xylose, Trehalose, Mannitol, Sorbitol und Inulin.
  • Die fermentierte Sojamilch der vorliegenden Erfindung wird hergestellt durch Fermentation von Sojamilch unter Verwendung des zuvor genannten Bifidobacterium breve.
  • Die Sojamilch, die als ein Rohmaterial in der vorliegenden Erfindung dient, wird vorzugsweise hergestellt aus unbehandelten Sojabohnen, die Öle und Fette enthalten, entfetteten Sojabohnen, Sojabohnen-Flakes etc. Entfettete Sojabohnen können als ein Ausgangsmaterial oder Rohmaterial dienen.
  • Sojamilch kann hergestellt werden durch Eintauchen des Roh- oder Ausgangsmaterials in Wasser; einem Zermahlen bzw. groben Zerquetschen, Zerdrücken oder Zerstoßen unter Zugabe von heißem Wasser, das gegebenenfalls 0,5 bis 1,0 Gew.-% (im Folgenden einfach als "%" bezeichnet) von Natriumcarbonat enthält; einem Entfernen von okara (Bohnen-Quark-oder Bonen-Käse-Abfall); und Sterilisation durch Wärme. Die Herstellung von Sojamilch ist jedoch nicht auf dieses Verfahren beschränkt, und die Sojamilch, die in dieser Erfindung verwendet wird, kann auch auf irgend eine andere Art und Weise hergestellt werden.
  • Zu der Sojamilch können Nährstoffe zugegeben werden, die für das Wachstum von Bakterien benötigt werden, wie z. B. Zucker, der Nahrung einverleibt wird, z. B. Sucrose, Glucose, Fructose oder Invertose; Fleischextrakt; Pepton; Hefeextrakt; und Peptid, um eine Nachbehandlung mit einem Bakterium durchzuführen. Außerdem können Säuren dem Nahrungsmittel einverleibt werden, wie z. B. Zitronensäure, Äpfelsäure, Ascorbinsäure, Milchsäure und Essigsäure, um den optimalen pH für ein Ziel-Bakterium zu realisieren.
  • Keine Beschränkung wird hinsichtlich des Verfahrens der Fermentation auferlegt, und eine Fermentation kann unter typischen Bedingungen durchgeführt werden. Zum Beispiel, wenn Bifidobacterium breve YIT 4065 auf die zuvor genannte Sojamilch okuliert oder eingeimpft wird, kann eine Kultivierung bei 37°C für etwa 20 bis 22 Stunden durchgeführt werden, bis der pH etwa 4,5–4,7 erreicht. Die Fermentation kann unter Bedingungen ausgeführt werden, die in geeigneter Weise ausgewählt werden gemäß den Kultur- oder Kultivierungsbedingungen, wie z. B. Steh- oder stationäre oder nicht-bewegte Kultur, Spinner- oder Schleuderkultur, Schüttelkultur und aerobe Kultur.
  • Obwohl die fermentierte Sojamilch der vorliegenden Erfindung hergestellt wird durch Zugabe von Bifidobacterium breve YIT 4065 zu Sojamilch, können andere Bifidobakterien oder andere Mikroorganismen zusätzlich zugegeben werden. Beispiele von solchen Mikroor ganismen schließen Bakterien ein, wie z. B. Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus, Leuconostoc, Bacillus, Acetobacter und Gluconobacter; Hefen, wie z. B. Saccharomyces, Candida, Rhodotorula, Pichia, Schizosaccharomyces, Torula und Zygosaccharomyces; und filamentöse Pilze, wie z. B. Aspergillus, Eurotium, Monascus, Mycol, Neurospora, Penicillium und Rhizopus.
  • Die auf diese Weise erhaltene fermentierte Sojamilch der vorliegenden Erfindung kann als ein Nahrungsmittel dienen so wie sie ist, oder sie kann in ein orales Pharmazeutikum oder Arzneimittel geformt oder zubereitet oder gebildet werden und kann ferner ein üblicherweise eingesetztes Additiv oder Zusatzstoff enthalten. Beispiele von solchen Additiven oder Zusatzstoffen schließen Saccharide, Proteine, Fette und Öle, Vitamine, Pflanzenextrakt, tierisches Extrakt; Bakterienextrakt; Parfums oder Duftstoffe und Farbstoffe ein. Außerdem kann die fermentierte Sojamilch der vorliegenden Erfindung in irgendeine Form verarbeitet werden, wie z. B. eine Flüssigkeit, Paste, ein Schwamm oder Feststoff. Zusätzlich zu einem Sojamilchgetränk kann die fermentierte Sojamilch in eine Vielzahl von Nahrungsmittel-Produkten verarbeitet werden, wie z. B. Sojamilch-Joghurt, Sojamilch-Pudding und Tofu (Sojabohnen-Quark oder -Käse).
  • Beispiele
  • Die vorliegende Erfindung wird nun in weiteren Einzelheiten durch Beispiele beschrieben.
  • Beispiel 1
  • Sojamilch (Produkt von Shikoku Kakoki, Feststoffgehalt 12,0%, rohes Fett 2,48%, rohes Protein 4,71%) wurde mit Dampf bei 100°C 90 Minuten lang sterilisiert.
  • Eine Subkultivierung wurde mehrere Male unter Verwendung von Sojamilch durchgeführt, die hergestellt wurde unter anaeroben Bedingungen, um dadurch zwei Bifidobacterium breve-Okula oder -Impfkeime herzustellen und zwei Bifidobacterium longum-Okula oder –Impflceime, die in 1 gezeigt sind. Jedes dieser Okula oder Impfkeime wurde auf die zuvor genannte sterilisierte Sojamilch in einer Menge von 0,5 bis 2% an- oder eingeimpft oder okuliert, und kultiviert, bis der pH 4,6 erreichte.
  • Nach Zugabe von Glucose zu dem fermentierten Produkt in einer Menge von 5% wurde die Mischung bei 10°C unter anaeroben Bedingungen gelagert. Die lebenden Zellen wurden gezählt, und die Ergebnisse sind in 1 gezeigt.
  • Beide Bifidobacterium breve-Proben zeigten eine Zahl lebender Zellen oder Bakterien (viable count) von 1 × 109 Zellen/ml unmittelbar nach der Herstellung eines fermentierten Produkts. Das Bifidobacterium breve ATCC 15700 zeigte jedoch kein Aufrechterhalten einer lebensfähigen Zahl von Zellen oder Bakterien von 1 × 108 Zellen/ml nach Lagerung über einen Zeitraum von 14 Tagen.
  • Auch die zwei Bifidobacterium longum-Proben konnten die Zahl lebensfähiger Zellen oder Teilchen nicht aufrechterhalten.
  • Das Bifidobacterium breve YIT 4065 (FERM BP-6223) hielt eine Zahl lebensfähiger Teilchen von 1 × 108 Zellen/ml oder mehr nach der Lagerung aufrecht und stellte eine fermentierte Sojamilch bereit von hervorragender Zahl lebensfähiger Zellen oder Teilchen (viable count) und hervorragender Überlebensrate.
  • Beispiel 2
  • Sojamilch (Produkt von Shikoku Kakoki, Feststoffgehalt 12,0%, rohes Fett 2,78%, rohes Protein 5,03%) (7 L) wurde in ein 10-L-Gefäß- oder -Flaschen-Fermenter gegeben und mit Dampf bei 100°C 90 Minuten lang sterilisiert.
  • Eine Subkultivierung wurde mehrere Male durchgeführt unter Verwendung von Sojamilch, die unter anaeroben Bedingungen hergestellt wurde, um dadurch Bifidobacterium breve-Okula oder -Impfkeime herzustellen. Jeder Impfkeim oder jedes Okulum wurde in einer Menge von 0,5% okuliert oder eingeimpft und kultiviert, bis der pH 5,3 erreichte.
  • Nach der Zugabe einer Siruplösung (1,5 L), die Aspartam (0,13%) und Zitronensäure (1,1%) enthielt, zu dem fermentierten Produkt in einer Menge von 5%, wurde die Mischung bei 10°C unter anaeroben Bedingungen gelagert. Lebende Zellen wurden gezählt und der Geschmack untersucht, und die Ergebnisse sind in 2 gezeigt.
  • Das Bifidobacterium breve YIT 4065 hielt eine Zahl lebender Bakterien von 1 × 108 Zellen/ml oder mehr nach Lagerung bei 10°C über einen Zeitraum von 14 Tagen aufrecht, und die fermentierte Sojamilch, die unter Verwendung derselben hergestellt wurde, wies einen hervorragenden Geschmack auf.
  • Industrielle oder gewerbliche Anwendbarkeit
  • Das Bifidobacterium breve YIT 4065 zeigt eine anfängliche Zahl lebender Zellen oder Bakterien von 1 × 109 Zellen/ml oder mehr und hielt eine Zahl lebender Zellen von 1 × 108 Zellen/ml oder mehr nach Lagerung bei 10°C über einen Zeitraum von 14 Tagen aufrecht und ist daher ein bemerkenswert hervorragendes Bifidobakterium, das zur menschlichen oder humanen Gesundheit beiträgt durch Verbesserung der Darmumgebung.
  • Die fermentierte Sojamilch, die das Bifidobacterium breve YIT 4065 einsetzt, enthält eine hohe Konzentration an Bifidobakterium, das eine Vielzahl von möglichen Verwendungen aufweist, und vorteilhafterweise eine große Zahl lebender Zellen oder Bakterien aufrechterhält während einer Lagerung ohne eine drastische Verringerung in der Zahl lebender Zellen oder Bakterien.

Claims (3)

  1. Fermentierte Sojamilch, enthaltend Bifidobacterium breve das YIT 4065 bezeichnet wird und hinterlegt ist als FERM BP-6223 beim Nationalen Institut für Biowissenschaften und Human-Technologie, Agentur oder Kommission für Industrielle Wissenschaft und Technologie.
  2. Verwendung der fermentierten Sojamilch wie sie in Anspruch 1 definiert ist für die Herstellung von einem Nahrungsmittel oder einem oralen Pharmazeutikum.
  3. Verwendung nach Anspruch 2, wobei das Nahrungsmittel ein Getränk, Sojamilch-Joghurt, Sojamilch-Pudding oder Tofu (Sojabohnen-Quark oder Sojabohnen-Käse) ist.
DE69824016T 1997-09-04 1998-08-11 Fermentierte sojamilch hergestellt mit bifidobacterium breve yit 4065 Expired - Lifetime DE69824016T2 (de)

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