AT391792B - Verfahren zur herstellung eines diaetetischen mittels zur wirksamen hemmung und bekaempfung von clostridien - Google Patents

Description

Nr. 391 792

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines diätetischen Mittels zur wirksamen Hemmung und Bekämpfung von Clostridien.

Im menschlichen Dickdarm siedelt eine Vielzahl von Bakterienarten, darunter auch Clostridien. Sofern eine Normalbesiedelung (Eubiose) vorliegt, ist Clostridium perfringens der Hauptvertreter der im Darm nachweisbaren Clostridien. Unter bestimmten Umständen (z. B. nach Antibiotikagaben) kann es jedoch zu einer vorübergehenden oder auch dauerhaften Fehlbesiedelung des Darmkanals kommen, wobei oftmals Keime der Dickdarmflora auch in höhere Dünndarmbereiche aufsteigen können. Solche Fehlbesiedelungen werden als Dysbiosen bezeichnet Im Verlaufe solcher Fehlbesiedelungen vermehren sich Clostridien oftmals übermäßig, was für den Betroffenen stets mit sehr unangenehmen, ja sogar gefährlichen Folgen verbunden ist Clostridien spalten Kohlenhydrate nämlich unter heftiger Gasbildung, was sich im Auftreten massiver Blähungen manifestiert Dadurch könnnen Krankheitsbilder auftreten, die den Patienten in erheblichem Maße beeinträchtigen (z. B. Roemheld-Syndrom). Darüber hinaus sind Clostridien zur Bildung von Toxinen befähigt, die von der Darmwand aufgenommen werden und über den enterohepatischen Kreislauf einer Entgiftung zugeführt werden müssen. In jüngster Zeit ist auch bekannt geworden, daß einige Clostridienarten zumindest mitverantwortlich dafür sein können, daß in den westlichen Industrieländern Darmkrebs in wesentlich häufigerem Maße auftritt als in Entwicklungsländern. Und schließlich ist eine spezielle Clostridienart, nämlich CI. difficile, als Erreger der pseudomembranösen Colitis, einer oft fatal verlaufenden Erkrankung im Gefolge einer antibiotischen Therapie, erkannt worden.

Die DE-OS 2 928 376 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung eines Präparates zur Stimulierung der Lebenstätigkeit biologischer Objekte. Bei diesem Verfahren wird ein Nährmedium aus verschiedensten Bestandteilen durch Fermentation mit einem Gemisch von Bakterienstämmen und anschließender Abtrennung der Fermentation von der Biomasse das gewünschte Produkt erhalten.

Die US-PS 3 944 676 betrifft ein Verfahren zur Herstellung eiweißreicher Nahrungsmittel aus Sojabohnenschrot. Zur Gewinnung des koagulierten Ausgangsproduktes werden Mischungen aus verschiedenen Lactobazillen-Stämmen und/oder Streptokokken verwendet und anschließend der entstehende Sojabohnenquark abgetrennt.

In der FR-PS 2 353 235 wird die Herstellung eines Getreidekeimhydrolyseproduktes beschrieben, wobei aus einem Getreidekeimextrakt durch Zusatz von Amylasen durch Milchsäurebakterien vergärbare Kohlehydrate gebildet werden, welche in der Folge durch Lactobazillusarten zu Milchsäure abgebaut werden. Das Produkt ist ein fermentiertes Nahrungsmittel, der Gehalt an Lactobazillen verschiedener Subspezies ist gering.

Die Bekämpfung von Clostridien, sofern sie in vermehrtem Maße in der Intestinalflora anzutreffen sind, ist äußerst schwierig, und vorläufig gibt es hierfür noch keine geeignete Möglichkeit.

Aufgabe der Erfindung ist deshalb ein Verfahren zur Herstellung eines diätetischen Mittels zur wirksamen Hemmung und Bekämpfung von Clostridien. Zur Lösung dieser Aufgabe wird ein geeignetes Nährmedium wie Sojamilch, Molke oder Magermilch mit einer Reinkultur von Lactobazillus casei Subspezies rhamnosus ATCC 7469, DSM 20245, DSM 20247, DSM 20021, DSM 20022, DSM 20023, DSM 20178, DSM 20258 oder DSM 20012; Subspezies alactosus ATCC 27216 oder DSM 20006; Subspezies pseudoplantorum ATCC 25598, oder DSM 20008 oder Lactobacillus casei ATCC 393, DSM 20011 oder DSM 20312, vorzugsweise Lactobacillus casei Ssp. rhamnosus, und/oder von Lactobacillus confusus, wie L. confusus Stämme "Hoffmann", L. confusus DSM 20196 und 20194 beimpft, die Kultur bebrütet, kühlt und gegebenenfalls gefriertrocknet, wobei vorzugsweise in an sich bekannter Weise die Bebrütung während 15 bis 30 h bei einer Temperatur von 15 bis 45 °C und insbesondere bevorzugt die Bebrütung während 24 h bei einer Temperatur von 37 ± 2 °C durchgeführt wird, und daß man vorzugsweise den pH-Wert während der Züchtung zwischen 5,7 und 5,9 hält

Es wurde gefunden, daß Lactobacillus casei und Lactobacillus confusus das Wachstum von Clostridien, und zwar sowohl in vivo als auch in vitro, zu hemmen vermögen. Sämtliche für die erfindungsgemäße Herstellung des diätetischen Mittels verwendeten Bakterienstämme sind bekannt und jene Mikroorganismenstämme die mit DSM-Nummem versehen sind, sind bei der "Deutschen Sammlung für Mikroorganismen" hinterlegt.

Die Bebrützeit hängt von der Temperatur ab. Vorzugsweise wird während 15 bis 30 Stunden bei einer Temperatur von 15 bis 45 °C bebrütet und insbesondere während 24 Stunden bei 37 ± 2 °C. Die Bebrütung bei der für die Lactobazillus casei bzw. - confusus relativ hohen Temperaturen von 37 ± 2 °C führt zu einem optimalen Ergebnis in bezug auf das schnelle Wachstum der Bakterien. Während der Züchtung hält man den optimalen pH-Wert für die Züchtung der Reinkulturen der gewünschten Lactobazillus-Stämme zwischen 5,7 und 5,9, zweckmäßig durch Zugabe eines Alkali. Besonders geeignet ist Kalkmilch (Calciumhydroxidlösung), die man in der Regel zwei- bis viermal während der Züchtung zudosiert. Es wurde gefunden, daß das erfindungsgemäß hergestellte Mittel sich sehr gut zur Anwendung bei Menschen, aber auch bei Tieren eignet, bei denen eine bakteriologische Stuhluntersuchung ergeben hat, daß Clostridien deutlich vermehrt in der Darmflora vorhanden sind, wodurch starke Blähungen hervorgerufen werden. Nach Verabreichung des erfindungsgemäß hergestellten diätetischen Mittels beobachtet man in diesen Fällen in der Regel bereits in den ersten Tagen nach Einnahme einen deutlichen Rückgang der Blähungen. Eine gleichzeitig durchgeführte bakteriologische Stuhluntersuchung zeigt in diesen Fällen eine deutliche Abnahme der Anzahl der aus einer Stuhlprobe anzüchtbaren Clostridien.

Als geeignete Nährmedien kommen alle in physiologischer, diätetischer und geschmacklicher Hinsicht -2-

Claims (3)

1. Nr. 391792 geeigneten Nährlösungen in Betracht, vorzugsweise Milchprodukte, wie z. B. Sojamilch, die bevorzugt wird, oder Molke und insbesondere Magermilch. Die Nährmedien können mit weiteren Zusätzen, wie z. B. Hefeextrakt und/oder Peptonen und/oder anderen, die Verdauung fördernden Stoffen, versehen sein, vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 1 % Gew.-Vol., bezogen auf das fertige Nährmedium. Insbesondere bei Verwendung von 5 Magermilch, die üblicherweise als Trockenmagermilch und Wasser bereitet wird, hat sich ein Zusatz von Hefeextrakt und/oder Pepton als zweckmäßig erwiesen. Es kann auch ein Gemisch aus zwei oder mehreren der oben genannten geeigneten Nährmedien eingesetzt werden. Vorzugsweise setzt man 0,4 bis 0,6 Gew.-% Hefeextrakt und 0,4 bis 0,6 Gew.-% Pepton, bezogen auf das Volumen der Lösung, zu. Das erfindungsgemäß herstellbare diätetische Mittel kann noch weitere, diätetisch geeignete übliche Zusätze, 10 wie z. B. Glucose, ß-Lactose oder/und Lactulose enthalten. Das diätetische Mittel wird vorzugsweise in gefriergetrockneter Form aufbewahrt und gehandelt. Es enthält, bezogen auf den gefriergetrockneten Zustand, vorzugsweise 10^ bis 101®, insbesondere 10** bis 10^ lebende L. casei- bzw. confusus-Zellen pro Gramm. Das Mittel kann jedoch auch als (gekühlte) Kulturlösung direkt verwendet oder mit anderen diätetischen Mitteln gemischt werden. 15 Wenn das erfindungsgemäß hergestellte Mittel in gefriergetrockneter Form vorliegt, so erfolgt die Anwendung vorzugsweise so, daß etwa ein Teelöffel davon in einem Glas lauwarmen Wassers verrührt wird und diese Suspension sofort getrunken wird. Die Häufigkeit der Verabreichung richtet sich dabei insbesondere nach dem Vermehrungsgrad der Clostridien und dem Allgemeinzustand der Person. Sie erfolgt zweckmäßigerweise ein- bis dreimal pro Tag, vorzugsweise nach der Nahrungsaufnahme, z. B. nach dem Frühstück und gegebenenfalls nach 20 den übrigen Mahlzeiten. Das nachstehende Beispiel zeigt eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung. Beispiel Eine aus Sojamilchpulver und Wasser bereitete Nährlösung, der, bezogen auf die fertige Nährlösung, je 0,5 25 Gew.-% Hefeextrakt und Pepton zugesetzt wurden, wird mit einer Reinkultur von L. casei var. rhamnosus DSM 20245 beimpft Die Kultur wird während 24 Stunden bei einer Temperatur von 37 °C bebrütet Nach jeweils etwa 8 Stunden wird der pH-Wert auf 5,8 bis 5,9 nachgestellt durch Zusatz der erforderlichen Menge Kalkmilch. Danach wird die Kultur gekühlt und gefriergetrocknet Das auf diese Weise erhaltene Lyophilisat wird kühl gelagert. Zur Verabreichung wird das Produkt mit lauwarmem Wasser (ca. ein Teelöffel auf 1/41 Wasser) verrührt 30 und die erhaltene Suspension sofort getrunken. Anstelle von Sojamilch kann auch Magermilch und Molke verwendet werden. 35 PATENTANSPRÜCHE 40 1. Verfahren zur Herstellung eines diätetischen Mittels zur wirksamen Hemmung und Bekämpfung von Clostridien, dadurch gekennzeichnet, daß man ein geeignetes Nährmedium wie Sojamilch, Molke oder 45 Magermilch mit einer Reinkultur von Lactobacillus casei Subspezies rhamnosus ATCC 7469, DSM 20245, DSM 20247, DSM 20021, DSM 20022, DSM 20023, DSM 20178, DSM 20258 oder DSM 20012; Subspezies alactosus ATCC 27216 oder DSM 20006; Subspezies pseudoplantorum ATCC 25598, oder DSM 20008 oder Lactobacillus casei ATCC 393, DSM 20011 oder DSM 20312, vorzugsweise Lactobacillus casei Ssp. rhamnosus, und/oder von Lactobacillus confusus, wie L. confusus Stämme "Hoffmann", L. confusus 50 DSM 20196 und 20194 beimpft, die Kultur bebrütet, kühlt und gegebenenfalls gefriertrocknet, wobei vorzugsweise in an sich bekannter Weise die Bebrütung während 15 bis 30 h bei einer Temperatur von 15 bis 45 °C und insbesondere bevorzugt die Bebrütung während 24 h bei einer Temperatur von 37 + 2 °C durchgeführt wird, und daß man vorzugsweise den pH-Wert während da* Züchtung zwischen 5,7 und 5,9 hält.
2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Magermilch in Gegenwart von Hefeextrakt und/oder Pepton mit einer Reinkultur von L. casei var. rhamnosus beimpft und 24 h bei einer Temperatur von 37 ± 2 °C bebrütet.
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