DE69626684T2

DE69626684T2 - Metallproteinasehemmer, diesen enthaltende pharmazeutische zusammensetzung und dessen pharmazeutische verwendung und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE69626684T2
Application number: DE69626684T
Authority: DE
Inventors: E. Scott ZOOK; Jr. Raymond Dagnino; E. Michael DEASON; L. Steven BENDER; J. Michael MELNICK
Original assignee: Agouron Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Agouron Pharmaceuticals LLC
Priority date: 1995-12-08
Filing date: 1996-12-05
Publication date: 2004-04-29
Anticipated expiration: 2016-12-06
Also published as: EP1095936B1; ES2233275T3; AU725831C; DE69633947T2; AP2001002270A0; EA199800541A1; GEP20012388B; MY117290A; ID17624A; AP1368A; OA10794A; IL143674A0; HUP9902092A3; MX9804457A; IL134816A0; IL138027A; CZ292942B6; CN1207734A; KR19990072009A; AP1288A

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf eine Verbindung, die Metalloproteinasen inhibiert, im Besonderen Matrixmetalloproteinasen mit Tumornekrosefaktor-α Convertase, und ein pharmazeutisch geeignetes Salz und Verwendungen davon.
Matrixmetalloproteinasen ("MMPs") sind eine Familie von Enzymen, die ohne darauf beschränkt zu sein Collagenasen, Gelatinasen, Matrilysin und Stromelysin einschliessen, und beim Abbau und der Remodulierung von Bindegewebe beteiligt sind. Diese Enzyme werden in einer Anzahl Zelltypen gefunden, die in Bindegewebe gefunden werden oder damit assoziiert sind, wie z. B. Fibroblasten, Monozyten, Makrophagen, Endothelzellen und metastasierende Tumorzellen. Sie teilen ebenfalls eine Reihe von Eigenschaften, einschließlich Zink- und Kalziumabhängigkeit, Sekretion als Zymogene, und eine 40–50%-ige Homologie in der Aminosäuresequenz.
Matrixmetalloproteinasen bauen Proteinbestandteile der extrazellulären Matrix ab, z. B. die Proteinbestandteile, die in der Hülle von Gelenken gefunden werden, im interstitiellen Bindegewebe, der Basalmembran, in Bindegewebe und Ähnlichem. Diese Proteine schließen Kollagen, Proteoglycan, Fibronectin und Lamanin mit ein.
Kollagen ist das hauptsächliche strukturelle Protein von Geweben aus Säugetieren, und umfasst ein Drittel des gesamten Proteins in Säugetierorganismen und ist ein essentieller Bestandteil vieler Matrixgewebe, einschließlich Knorpel, Knochen, Sehnen und Haut. Interstitielle Kollagenasen katalysieren die anfängliche (geschwindigkeitsbestimmende) Spaltung der nativen Kollagentypen I, II, III und X. Diese Enzyme spalten Kollagen in zwei Fragmente, die spontan bei physiologischen Temperaturen denaturieren. Die Denaturierung von Kollagen schließt die Umwandlung der streng gewundenen Helix in eine zufällig gewundene Helix mit ein, die als Gelatin bezeichnet wird. Diese Gelatinfragmente (denaturiertes Kollagen) wird dann einer weiteren Spaltung und einem Abbau durch weniger spezifische Enzyme unterworfen. Das reine Ergebnis der Kollagenasespaltung ist daher der Verlust der strukturellen Integrität im Matrixgewebe (Kollagenkollaps), ein essentiell irreversibler Prozess.
Die Gelatinasen schließen zwei verschiedene und dennoch hoch verwandte Enzyme mit ein: ein 72-Kilodalton (kDa) Enzym und ein 92-Kilodalton Enzym. Das erstere wird durch Fibroblasten freigesetzt während das letztere durch mononukleare Phagozyten, Neutrophile, Epithelzellen der Hornhaut, Tumorzellen, Zytotrophoblasten und Keratinozyten freigesetzt wird. Beide Enzyme bauen Gelatine ab (denaturiertes Kollagen), Kollagen Typ IV (Basalmembran) und V, Fibronectine (multifunktionelle Glykoproteine mit hohem molekularen Gewicht, die in weichem Bindegewebe und in Basalmembranen gefunden werden) und unlösliches Elastin (hoch quervemetzte hydrophobe Proteine, die in Druck widerstehenden Fasern von Bindegeweben aus Säuretieren gefunden werden).
Stromelysine (1 und 2) schneiden eine große Anzahl an Matrixsubstraten, einschließlich Lamanin, Fibronectinen, Proteoglycanen und die Kollagentypen IV und IX (nicht-helikal).
Matrilysin (vermutliche Metalloproteinase oder PUMP) baut ebenfalls eine große Anzahl an Matrxsubstraten ab, einschließlich Proteoglycanen, Gelatinen, Fibronectinen, Elastinen und Lamanin. Matrilysin wurde in mononuklearen Phagozyten, Gewebefragmenten der Gebärmutter aus Ratten und Tumorzellen gefunden.
In normalen Geweben ist die Aktivität von Matrixmetalloproteinasen hoch reguliert. Daraus resultiert, dass der Zusammenbruch des Bindegewebes, der durch diese Enzyme vermittelt wird, grundsätzlich in einem dynamischen Gleichgewicht mit der Synthese von neuem Matrixgewebe steht.
In einer Reihe von Bedingungen von pathologischen Krankheiten führt die Deregulation von Matrixmetalloproteinaseaktivität jedoch zum kontrollierten Zusammenbruch der extrazellulären Matrix. Diese Erkrankungsbedingungen schließen Arthntis (z. B. rheumatoide Arthritis und Osteoarthritis), periodontale Erkrankung, aberrante Angiogenese, Tumormetastase und Invasion, Vereiterung von Gewebe (z. B. corneale Vereiterung, gastritische Vereiterung oder epidermale Vereiterung), Knochenerkrankung, HIV-Infektion und durch Diabetes verursachte Komplikationen mit ein.
Es wurde festgestellt, dass die Verabreichung von Matrixmetalloproteinaseinhibitoren die Rate des Bindegewebsabbaus reduziert und dabei zu einem wünschenswerten the rapeutischen Effekt führt. Beispielsweise wurde in Cancer Res., Band 53, Seite 2087 (1993) gezeigt, dass ein synthetischer Matrixmetalloproteinaseinhibitor eine in vivo Wirksamkeit bei einem murinen Modell für Eierstockkrebs aufweist und eine augenfällige Aktionsweise zeigt, die mit der Inhibition der Matrixremodellierung übereinstimmt. Das Design und die Verwendung von MMP-Inhibitoren wurden beispielsweise im J. Enzyme lnhibition, 2, 1–22 (1987); Progress in Medical Chemistry 29, 271–334 (1992); Current Medicinal Chemistry, 2, 743–762 (1995); Exp. Opin. Ther. Patents, 5, 1287–1296 (1995); und Drug Discovery Today, 1, 16–26 (1996) zusammengefasst.
Matrixmetalloproteinaseinhibitoren sind ebenfalls Gegenstand einer Vielzahl von Patenten und Patentanmeldungen, einschließlich US-Patent Nr. 5,189,178; US-Patent Nr. 5,183,900; US-Patent Nr. 5,506,242; US-Patent Nr.5,552,419; US-Patent Nr. 5,455,258; europäische Patentanmeldung Nr. 0 438 223; Europäische Patentanmeldung Nr. 0 276 436; WIPO Internationale Veröffentlichung Nr. WO 92/21360; WIPO Internationale Veröffentlichung Nr. WO 92/06966; WIPO Internationale Veröffentlichung Nr. WO 92/09563; WIPO Internationale Veröffentlichung Nr. WO 96/00214; WIPO Intemationale Veröffentlichung Nr. WO 95/35276; und WIPO Internationale Veröffentlichung Nr. WO 96/27583.
WO 96/33172 bezieht sich auf Arylsulfonylhydroxaminsäurederivative als Matrixmetalloproteinaseinhibitoren oder TNF Inhibitoren sowie die Verwendung dieser Verbindungen in der Behandlung von Krankheiten, die durch Matrixmetalloproteinaseaktivität charakterisiert werden oder Krankheiten, die die Produktion von TNF mit einschließen. WO 96/33172 beschreibt Substituenten wie beispielsweise ausschließlich unsubstituierte oder alkoxysubstituierte Arylsubstituenten.
Tumomekrosefaktor-α ("TNF-α") ist ein Zytokin, das als ein 28-Kilodalton Vorläuferprotein hergestellt und in einer aktiven Form von 17-Kilodalton freigesetzt wird. Diese aktive Form kann eine große Anzahl von schädlichen Effekten in vivo vermitteln, einschließlich Entzündung, Fieber, kardiovaskuläre Effekte, Hämorrhagie, Koagulation und akute Phasenantwort, ähnlich zu denen, die während akuten Infektionen und Schockzuständen beobachtet werden. Die chronische Verabreichung von TNF-α kann Kachexie oder Anorexie verursachen; eine Anreicherung an überschüssigem TNF-α kann fatal sein.
TNF-α Convertase ist eine Metalloproteinase, die in der Biosynthese von TNF-α, involviert ist. Die Inhibition von TNF-α Convertase inhibiert die Produktion von TNF-α.
Da übermässige TNF-α Produktion in verschiedenen Erkrankungsbedingungen beobachtet wird, einschließlich Multipler Sklerose, Arthritis und Krebs, die durch MMPvennittelten Bindegewebsabbau charakterisiert werden, sind Verbindungen, die beiderseits MMPs und TNF-α Convertase inhibieren besonders vorteilhaft für die Behandlung oder Prophylaxe von Erkrankungsbedingungen, in die beide Mechanismen involviert sind. Obwohl Verbindungen, die beiderseits MMP Aktivität und TNF-α Produktion inhibieren, in WIPO internationale Patentanmeldung Nr. WO 94/24140 und WO 94/02466 beschrieben wurden, gibt es immer noch einen Bedarf für effektive MMP und/oder TNFα Convertase inhibierende Agenzien.
Aufgrund ihrer wünschenswerten therapeutischen Effekte gibt es einen Bedarf für effektive Inhibitoren von Metalloproteinaseaktivität. Die vorliegende Erfindung ist daher auf eine bestimmte Verbindung gerichtet, die Metalloproteinasen inhibiert, wie z.. B. MMPs und TNF-α Convertase, ihre phannazeutisch geeigneten Salze, pharmazeutische Verbindungen enthaltend diese und Verfahren zur Verwendung derselben, sowie ein Verfahren, das zu deren Herstellung geeignet ist. Zusätzlich Merkmale und Vorteile der Erfindung werden im Weiteren in der folgenden Beschreibung offenbart und werden teilweise aus der Beschreibung offensichtlich sein oder können durch die Anwendung der Erfindung gelernt werden.
Um diese und andere Vorteile zu erreichen stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung bereit, die 3(S)-N-hydroxy-4-(-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid ist oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.
Die vorliegende Erfindung ist ebenfalls auf eine pharmazeutische Verbindung gerichtet, die eine therapeutisch effektive Menge der Verbindung 3(S)-N-hydroxy-4-(-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid enthält oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder eine Lösung davon und ein pharmazeutisch geeigneter Träger, Verdünnungsmittel, Hilfsstoff oder Arzneistoffträger.
Die vorliegende Erfindung ist ebenfalls auf die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindung gerichtet oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zu Inhibierung der Aktivität einer Metalloproteinase.
Die vorliegende Erfindung richtet sich ebenfalls auf ein in vitro Verfahren zur Inhibierung der Aktivität einer Metallproteinase, die das Kontaktieren der Metalloproteinase mit einer effektiven Menge der erfindungsgemäßen Verbindung oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon umfasst.
Ein "pharmazeutisch geeignetes Lösungsmittel" soll ein solches Lösungsmittel sein, das die biologische Effektivität und Eigenschaften der biologisch aktiven Bestandteile einer erfindungsgemäßen Verbindung beibehalten werden.
Beispiele von pharmazeutisch geeigneten Lösungen schließen die erfindungsgemäße Verbindung in der Kombination mit Wasser, Isopropanol, Ethanol, Methanol, DMSO, Ethylacetat, Essigsäure, oder Ethanolamin mit ein, ohne aber darauf beschränkt zu sein.
Im Falle von festen Formulierungen soll verstanden werden, dass die erfindungsgemäße Verbindung in verschiedenen Formen auftreten kann, wie z. B. als stabile und metastabile kristalline Formen und isotrope und amorphe Formen, die alle von der vorliegenden Erfindung umfasst sein sollen.
Ein "pharmazeutisch geeignetes Salz" soll als ein solches Salz verstanden werden, das die biologische Effektivität und Eigenschaften der freien Säure und Basen beibehält und die nicht biologisch oder anderweitig unerwünscht sind.
Beispiele pharmazeutisch geeignete Salze schließen Sulfate, Pyrosulfate, Bisulfate, Phosphate, Monohydrogenphosphate, Dihydrogenphosphate, Metaphosphate, Pyrophosphate, Chloride, Bromide, Iodide, Acetate, Propionate, Decanoate, Caprylate, Acrylate, Formate, Isobutyrate, Caproate, Heptanoate, Propiolate, Oxalate, Malonate, Succinate, Suberate, Sebacate, Fumarate, Maleate, Butyne-1,4-dioate, Hexyne-1,6-dioate, Benzoate, Chlorobenzoate, Methylbenzoate, Dinitrobenzoate, Hydroxybenzoate, Methoxybenzoate, Phthalate, Sulfonate, Xylensulfonate, Phenylacetate, Phenylpropionate, Phenylbutyrate, Citrate, Lactate, γ-Hydroxybutyrate, Glycolate, Tartrate, Methansulfonate, Propansulfonate, Naphthalen-1-sulfonate, Naphthalen-2-sulfonate und Mandelate mit ein, ohne darauf beschränkt zu sein.
Im Fall, dass die erfindungsgemäße Verbindung eine Base ist, kann das gewünschte Salz durch jedes im Stand der Technik bekannte geeignete Verfahren hergestellt werden, einschließlich der Behandlung der freien Base mit einer anorganischen Säure, wie z. B. Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure und Ähnlichem, oder mit einer organischen Säure, wie z. B. Essigsäure, Maleinsäure, Succinsäure, Mandelsäure, Fumarsäure, Malonsäure, Pyrovatsäure, Oxalsäure, Glycolsäure, Salicylsäure, Pyranosidylsäure wie z. B. Glucoronsäure und Galacturonsäure, alpha-Hydroxysäuren, wie z. B. Zitronensäure und Tartarsäure, Aminosäuren wie z. B. Aspartatsäure und Glutaminsäure, aromatische Säuren wie z. B. Benzoesäure und Zimtsäure, und Sulfonsäuren wie z. B. Paratoluolsulfonsäure oder Ethansulfonsäure.
Im Fall, dass die erfindungsgemäße Verbindung eine Säure ist, kann das gewünschte Salz durch jedes geeignete im Stand der Technik bekannte Verfahren hergestellt werden, einschließlich der Behandlung der freien Säure mit einer anorganischen oder organischen Base, wie z. B. ein Amin (primäres, sekundäres oder tertiäres), einem Alkalimetall oder Erdalkalimetallhydroxid oder ähnlichem. Illustrierende Beispiele geeigneter Salze schließen organische Salze mit ein, die von Aminosäuren wie z. B. Glycin und Arginin, Ammoniak, primären, sekundären und tertiären Aminen, und cyclischen Aminen wie z. B. Piperidin, Morpholin und Piperazin, und anorganischen Salzen, die von Natrium, Kalzium, Kalium, Magnesium, Mangan, Eisen, Kupfer, Zink, Aluminium und Lithium abgeleitet sind.
Die erfindungsgemäße Verbindung liegt als ein einzelnes Stereoisomer vor.
Das Hydroxamat tragende Kohlenstoffatom befindet sich in der "S" Konfiguration. Es ist für einen Fachmann selbstverständlich, dass die Konfiguration eine Konsequenz der Sequenzregeln des Cahn-Ingold-Prelog-Systems darstellt. Wie allgemein einem Fachmann verständlich, ist eine optisch reine Verbindung, die ein chirales Zentrum (z. B. ein asymmetrisches Kohlenstoffatom) besitzt eine solche Verbindung, die essentiell aus einem von zwei möglichen Enantiomeren besteht (z. B. ist enantiomerenrein) und eine op tisch reine Verbindung, die mehr als ein chirales Zentrum enthält, ist eine solche Verbindung, die beiderseits diastereomerenrein und enantionemerenrein vorliegt. Vorzugsweise wird die Verbindung der vorliegenden Erfindung in einer Form verwendet, die mindestens 90% optisch rein ist, d. h. in einer Form, die mindestens 90% eines einzelnen Isomers (80% Enantiomerenüberschuss ("e. e.") oder Diastereomerenüberschuss ("d. e.")), enthält, noch bevorzugter mindestens 95% (90% e. e. oder d. e.), noch bevorzugter mindestens 97,5% (95% e. e. oder d. e.), und am meisten bevorzugt mindestens 99% (98% e. e. oder d. e.) enthält.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich weiterhin auf ein in vitro Verfahren zur Inhibierung von Metalloproteinaseaktivität, beispielsweise in Geweben von Säuretieren, durch das Verabreichen einer erfindungsgemäßen Verbindung oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon. Die Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindung als ein Inhibitor der Metalloproteinaseaktivität, z. B. der Aktivität von MMPs (einschließlich Stromelysinen, Kollagenasen, Gelatinasen und/oder Matrilysin) und/oder TNF-α Convertase, kann mit Hilfe eines Verfahrens gemessen werden, das einem Fachmann zur Verfügung steht, einschließlich in vivo und/oder in vitro Assays. Beispiele geeigneter Assays zur Messung der Aktivität schließen solche mit ein, die in Band 147, Seite 437 (1985), Anal. Biochem., Band 180, Seite 110 (1989), FEBS Band 98, Seite 263 (1992) und Europäische Patentanmeldung Nr. 0 606 046 beschrieben wurden. Die Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon kann mit Hilfe jedes anerkannten Verfahrens zur Verabreichung durchgeführt werden, das einem Fachmann zur Verfügung steht. Illustrative Beispiele von geeigneten Verabreichungsvertahren schließen oral, nasale, parenterale, topikale, transdermale und rektale Verabreichungen mit ein. Bevorzugterweise ist das Verabreichungsvertahren oral.
Die erfindungsgemäße Verbindung oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder Solvat kann als pharmazeutische Zusammensetzung in jeder geeigneten pharmazeutischen Form verabreicht werden, die einem Fachmann bekannt ist. Geeignete pharmazeutische Formen schließen feste, halbfeste, flüssige oder lyophilisierte Formulierungen, wie z. B. Tabletten, Pulver, Kapseln, Suppositorien, Suspensionen und Aerosole mit ein, ohne jedoch darauf beschränkt zu sein. Vorzugsweise ist die pharmazeutische Form eine Tablette oder Kapsel zur oralen Verabreichung. Die pharmazeutische Zusammensetzung kann ebenfalls geeignete Arzneistoffträger, Verdünnungsmittel, Hilfsmittel und Träger sowie andere pharmazeutisch aktive Agenzien in Abhängigkeit von der beabsichtigten Verwendung mit einschließen.
Geeignete Verfahren zur Herstellung geeigneter pharmazeutischer Formen der pharmazeutischen Zusammensetzung sind Fachleuten bekannt. Beispielsweise können pharmazeutische Herstellungen durch folgende konventionelle Techniken eines pharmazeutischen Chemikers hergestellt werden, die Schritte einschließen wie Mischen, Granulieren und Pressen für Tablettenformen, falls erforderlich oder Mischen, Füllen und Auflösen der Bestandteile in geeigneter Weise, um die gewünschten Produkte zur oralen, parenteralen, topikalen, intravaginalen, intranasalen, intrabronchialen, intraokularen, intraauralen und/oder rektalen Verabreichung zu erhalten. Illustrative Beispiele solcher Verfahren schließen die in Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Ausgabe (1990) beschriebenen Verfahren mit ein.
Feste oder flüssige pharmazeutisch geeignete Träger, Verdünnungsmittel, Hilfsmittel oder Arzneistoffträger können in der pharmazeutischen Zusammensetzung verwendet werden. Beispielhafte feste Träger schließen Stärke, Laktose, Kalziumsulfatdihydrat, Terra alba, Sucrose, Talk, Gelatin, Agar, Pectin, Akazia, Magnesiumstearat und Stearinsäure mit ein. Beispielhafte flüssige Träger schließen Sirup, Erdnussöl, Olivenöl, Salzlösung und Wasser mit ein. Der Träger oder das Verdünnungsmittel können ein geeignetes Material zur verzögerten Freisetzung, wie z. B. Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat allein oder in Kombination mit einem Wachs beinhalten. Falls ein flüssiger Träger verwendet wird, kann die Herstellung in Form eines Sirups, Elixiers, Emulsion, einer Weichgelatinkapsel oder ein sterilen injizierbaren Flüssigkeit (z. B. Lösung) oder einer nicht-wässrigen oder wässrigen flüssigen Suspension sein.
Eine Dosis der pharmazeutischen Zusammensetzung enthält mindestens eine therapeutisch effektive Menge der aktiven Verbindung oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes oder Solvats und besteht vorzugsweise aus einer oder mehreren pharmazeutischen Dosierungseinheiten. Eine beispielhafte Dosierungseinheit für einen Säugetierwirt enthält eine Menge von 0,1 Milligramm bis zu 500 Milligramm der aktiven Verbindung pro Kilogramm Körpergewicht des Wirts, vorzugsweise 0,1 bis 200 Milligramm, noch bevorzugter 50 Milligramm oder weniger, und am stärksten bevorzugt etwa 10 Milligramm oder weniger pro Kilogramm des Gewichts des Wirts. Die ausgewählte Dosis kann ei nem Säugetier, z. B. einem menschlichen Patienten, bei dem eine Behandlung mittels Inhibition von Metalloproteinaseaktivität erforderlich ist, durch jegliches bekannte Verfahren zur Verabreichung der Dosis verabreicht werden einschließlich topikal, z. B. als Salbe oder Creme; oral; rektal, z. B. als ein Suppositorium; parenteral durch Injektion; oder kontinuierlich durch intravaginale, intranasale, intrabronchiale, intraaurale oder intraokulare lnfusion.
Die Menge der zu verabreichenden erfindungsgemäßen Verbindung und/oder des Salzes wird in Abhängigkeit einer Reihe von Faktoren variieren, einschließlich der zu inhibierenden spezifischen Metalloproteinase, des Grades an gewünschter Inhibition, die Charakteristika des Säugetiergewebes, in dem die Inhibition gewünscht ist, die metabolische Stabilität und Aktivität der besonderen verwendeten erfindungsgemäßen Verbindung und dem Verfahren der Verabreichung. Ein Fachmann kann leicht eine geeignete Dosierung anhand der im Stand der Technik beschriebenen Verfahren bestimmen. Vorzugsweise wird eine Menge der erfindungsgemäßen Verbindung oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes zwischen 0,1 mg/kg Körpergewicht und 100 mg/kg Körpergewicht pro Tag verabreicht.
Die erfindungsgemäße Verbindung und deren Salz kann durch Anwendung von Verfahren hergestellt werden, die im Stand der Technik bekannt sind, und unter Verwendung von leicht verfügbaren Ausgangsmaterialien. Beispielhafte Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung werden unten beschrieben.
Die folgenden speziellen Beispiele sollen die Erfindung veranschaulichen und nicht verwendet werden, um den Bereich der Erfindung so einzuschränken wie durch die anhängigen Ansprüche definiert.
Beispiel 1. Prozess zur Herstellung von 3(S)-N-hydroxy-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1.4-thiazin-3-carboxamid
1(a) Über das Intermediat 3(S)-Dimethylthexylsilyl 2,2-Dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat
Schritt 1. Herstellung von 4-Phenoxypyridin
Phenol (2,82 kg, 30 M) wird auf 50°C erhitzt und 4-Chloropyridinhydrochlorid (1,5 kg, 10 mol) wird zugegeben. Die erhaltene Lösung wird für 15 Stunden bei 150°C erhitzt. Die dunkle bemsteinfarbige Lösung wird auf 25°C abgekühlt und in 3 M wässrige Natriumhydroxidlösung gegossen (16 L). Die wässrige Phase wird mit Dichlormethan (3 × 4 L) extrahiert. Die vereinigten organische Phase wird mit 1 M Natriumhydroxid (2 × 4 L) Wasser (4 L) und Salzlösung (4 L) gewaschen und anschließend über Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt und das verbleibende Öl in Hexan (6 L) gelöst. Die Mischung wurde unter Rühren auf –60°C gekühlt und der resultierende Feststoff wurde durch Filtration gesammelt und getrocknet, um 1,1 kg an 4-Phenoxypyridin (64% Ausbeute) zu ergeben. Schmp. 46–49°C.¹H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.45 (dd, J = 1.5, 8 Hz, 2H), 7.41 (dd, J = 12, 12 Hz, 2H), 7.28 (dd, J = 12, 1H), 7.06 (d, J = 12 Hz, 2H), 6.84 (dd, J = 1.5, 8 Hz, 2H).
Schritt 2. Herstellung von 4-[(Pyrid-4-yl)oxy]benzensulfonsäure 3a
Zu einer kräftig gerührten Lösung on 4-Phenoxypyridin (1 kg) in trockenem 1,2-Dichlorethan (3 L) wird bei –10°C unter Argonatmosphäre Chlorosulfonsäure (974 mL) langsam zugegeben. Die Rate der Zugabe von Chlorosulfonsäure wurde so angepasst, dass die Reaktionstemperatur unter 0°C bleibt. Nachdem die Hälfte der Chlorosulfonsäure zugegeben wurde, stoppte die exotherme Reaktion. Das Kühlbad wurde entfemt und Zugabe von Chlorosulfonsäure wurde über drei Stunden fortgesetzt, während sich die Reaktionslösung auf Raumtemperatur erwärmte. Unter ständigem Spülen mit inertem Gas wird die kräftig gerührte Reaktionsmischung auf 45°C erhitzt. Mittels einer Analyse durch Dünnschichtchromatografie wurde festgestellt, dass nach 20 Stunden kein Startmaterial mehr vorhanden war.
Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und unter Rühren langsam in kaltes Eiswasser (5 L) gegossen. Tribasisches Kaliumphosphat (212 g) wurde in fester Form zur Mischung zugegeben und diese wurde 10 Minuten lang gerührt gefolgt von der Zugabe von Natriumhydroxid (2 M) bis zu einem pH von 2. Nach einstündigem Rühren wurde der pH auf 7 durch die Zugabe von Natriumhydroxid geändert (2 M). Die Bewegung wurde für fünf Minuten fortgesetzt, dann wurde die organische Schicht abge zogen und verworfen. Die Mischung wurde ein zweites Mal mit Dichlormethan (2 L) extrahiert, die Mischung wurde für fünf Minuten bewegt, und die organische Schicht wurde abgezogen und entsorgt. Die verbleibende wässrige Mischung wurde durch Zugabe von Dichlormethan (6 L), Tetrabutylammoniumbromid (940 g), und Natriumhydroxid (2 M) bis zu einem pH von 7 extrahiert. Die Mischung wurde für fünf Minuten bewegt und die organische Schicht (unten) wurde in einen Kolben abgeleitet. Die Extraktionsprozedur wurde zweimal wiederholt. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert, und die Lösung wurde unter Vakuum bis zu einem Öl aufkonzentriert. Das verbleibende Öl wurde mit 20% Ethanol in Ethylacetat (8 l, trocken) aufgelöst und Salzsäuregas wurde bis zu einem pH von 1 zugegeben. Der Feststoff wurde abfiltriert und der Filterkuchen mit 20% Ethanol in Ethylacetat (2 L) gewaschen. Der Feststoff wurde unter Vakuum bei 45°C für 15 Stunden getrocknet, um 4-[(Pyrid-4-yl)oxy]benzensulfonsäure 3a (1,3 kg) als einen weißen pulvrigen Feststoff zu erhalten.
Schmp. dec. > 275°C
Anal. calc. für C₁₁H₉NO₄S: C, 52.58; N, 3.61; N, 5.57; S, 12.76. Bestimmt: C, 52.50; H 3.69; N, 5.51; S, 12.67.
¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.86 (dd, J = 1.5, 7.4 Hz, 2 H), 7.84 (dd, J = 1.5, 7 Hz, 2H), 7.54 (dd, J = 1.5, 7.4 Hz, 2H), 7.35 (dd, J = 1.5, 7 Hz, 2H).
Schritt 3. Herstellung von 4-[(Pyrid-4-yl)oxy]benzensulfonylchloridhydrochlorid 4a
Zu einer Suspension von 4-[(Pyrid-4-yl)oxy]benzensulfonsäure 3a (1,3 kg) in Acetonitril (8 L) wurde N,N-Dimethylformamid (12,35 mL) zugesetzt und die visköse Reaktionsmischung wurde auf 75°C erhitzt. Über einen Zeitraum von 30 Minuten wurde Thionylchlorid (756 mL) zur Reaktionsmischung zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde langsam weniger viskös und wurde nach 45 Minuten homogen, was andeutete, dass die Reaktion vollständig war. Ein Teil des Lösungsmittels (4 L) wurde unter Vakuum verdampft und t-Butylmethylether (4 L) wurde zugegeben. Die erhaltene Aufschlämmung wurde unter inerter Atmosphäre filtriert. Der Filterkuchen wurde mit t-Butylmethylether (2 L) gewaschen und der Feststoff unter Vakuum getrocknet, um 4-[(Pyrid-4-yl)oxy]benzensulfonylchloridhydrochlorid 4a (1,35 kg) als einen luftigen gebrochen weißen Feststoff aus perlenden Flocken zu ergeben: Schmp. 182°C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.87 (d, J = 7 Hz, 2H), 8.24 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.43 (d, J = Hz, 2 H).
Schritte 4 und 5. Herstellung von 3(S)-Dimethylhexylsilyl 2 2-Dimethyltetrahydro-2H-1.4-thiazin-3-carboxylat
Unter Argonatmosphäre wird D-Penicillamin (375 g, 2,51 mol) in trockenem N,N-Dimethylformamid (2,8 L) suspendiert und 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (413 mL, 2,76 mol) wurden zugegeben, um eine klare Lösung zu ergeben. Während die Temperatur zwischen 20–30°C gehalten wurde, wurde Dimethylhexylsilylchlorid (543 mL, 2,76 mol) tropfenweise zugegeben. Nach 1,5 Stunden Rühren wurde 1,2-dichlorethan (593 mL, 7,53 mol) auf einmal zugegeben. 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (788 mL, 5,27 mol) wurde über eine Stunde zugegeben, während die Temperatur zwischen 25 bis 30°C gehalten wurde. Die resultierende Mischung wurde bei 20°C für drei Stunden gerührt und dann auf 0°C in einer Mischung aus Wasser (8 L), t-Butylmethylether (2 L) und Hexan (2 L) abgekühlt. Nach fünfminütigem Rühren wurden die Phasen getrennt und die wässrige Phase wurde mit zusätzlichem t-Butylmethylether (2 L) und einer Mischung aus Hexanen (2 L) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel unter Vakuum entfernt, um 878 g (110% Ausbeute) an rohem 3(S)-Dimethylhexylsilyl 2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat als ein dickes gelbes Öl zu erhalten. ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃)δ 3.65 (s, 1H), 3.42–3.37 (m, 1H), 2.98–2.83 (m, 2H), 2.30–2.22 (m, 1H), 1.69– 1.58 (m, 1H), 1.42 (s, 3H), 1.31 (s, 3H), 0.92–0.86 (m, 12H), 0.34 (s, 3H), 0.30 (s, 3 H).
Schritte 6 und 7. Herstellung von 3(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2 2-dimethyl-tetrahydro-2H-1.4-thiazin-3-carboxylsäure
Unbearbeitetes 3(S)-Dimethylhexylsilyl 2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat (878 g, 2,51 mol) und 4-Methylmorpholin (547 mL, 4,98 mol) wurden in trockenem Dichlormethan (14 L) aufgelöst und die Lösung wurde auf –20°C gekühlt. 4-[(pyrid-4-yl)oxy]benzensulfonylchloridhydrochlorid 4a (690 g, 2,26 mol) wurden zugegeben und die Mischung wurde langsam auf 20°C erwärmt und für 12 Stunden bei 20°C belassen. Die erhaltene rote Suspension wurde in Wasser (8 L) gegossen. Die Phasen wurden getrennt und die organische Schicht über Natriumsulfat getrocknet, filtriert, und das Lösungsmittel unter Vakuum entfernt. Es wurden 1,4 kg (117% Ausbeute) von 3(S)-Dimethylhexylsilyl-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat als ein rotes Öl erhalten, welches ohne Aufreinigung oder Charakterisierung verwendet wird.
Das verbleibende rote Öl wurde in Methanol (14 L) aufgelöst und die Lösung wurde unter Rückfluss eine Stunde lang erhitzt, wobei ein Präzipitat gebildet wurde. Die Mischung wurde auf 4°C gekühlt und das Präzipitat wurde durch Filtration gesammelt, mit Methanol gewaschen und getrocknet, um 575 g (62% Ausbeute) von 3(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäure als einen schwach pinkfarbenen Feststoff zu ergeben: Schmp. dec. > 235°C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.60 (dd, J = 1.5, 5 Hz, 2H), 7.86 (d, J = 8.5, 2H), 7.39 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.11 (dd, J = 1.5, 5 Hz, 2H), 4.3 (s, 1H), 4.03 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.75 (ddd, J = 2.2, 13, 13 Hz, 1H), 3.02 (ddd, J = 3, 12.5, 13 Hz, 1H), 2.62 (d, J = 14 Hz, 1H), 1.52 (s, 3 N), 1.35 (s, 3H).
Schritt 8. Herstellung von 3(S)-N-hydroxy-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid
Eine Suspension von 3(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäure (700 g, 1,71 mol) in Dichlormethan (7 L) wurde auf –65°C gekühlt. Oxalylchlorid (170 mL, 2,05 mol) wurde schnell zugegeben. Das Kühlbad wurde entfernt und die Mischung wurde bei 20°C für 15 Stunden gerührt. Die erhaltene Lösung wurde über 1,25 Stunden zu einer Lösung von Hydroxylamin zugegeben (1,05 l einer 50 -igen wässrigen Lösung, 17,15 mol) in Tetrahydrofuran (3,5 L) und t-Butylalkohol (1,8 L), wobei die Temperatur zwischen 5 und 20°C gehalten wurde. Die erhaltene Mischung wurde bei 20°C für 15 Stunden gerührt und anschließend in 1 M wässrige Natriumhydroxidlösung (10 L) bei 5°C gegossen. Die Phasen wurden getrennt und die wässrige Phase wurde mit t-Butylmethylether (4 L) extrahiert. Die wässrige Phase wurde durch Celite filtriert und der pH auf 8,5 durch Zugabe von gesättigter wässriger Ammoniumchloridlösung und konzentrierter Salzsäure eingestellt. Die erhaltene Suspension wurde für 3 Stunden gerührt. Der Feststoff wurde durch Filtration gesammelt, mit Wasser gewa schen und getrocknet, um 625 g (92% Ausbeute) an rohem Produkt zu erhalten. Das Rohmaterial wurde in einer Mischung aus Ethanol, Wasser und Dichlormethan rekristallisiert, um 466 g (70% Ausbeute) an 3(S)-N-hydroxy-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid als einen weißen, kristallinen Feststoff zu erhalten: Schmp. 184–186° mit Gasentwicklung; ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 10.69 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.93 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.57 (dd, J = 1.5, 4.5 Hz, 2H), 7.83 (dd, J = 2.7 Hz, 2H), 7.37 (dd, J = 2.7 Hz, 2H), 7.11 (dd, J = 1.5, 4.5 Hz, 2H), 4.06 (s, 1H), 4.07 (ddd, J = 25, 12.5, 12.5 Hz, 1H), 3.91 (ddd, J = 3, 2.2, 12 Hz, 1H), 2.98 (ddd, J = 3.7, 13, 13.5 Hz, 1H), 2.7 – 2.55 (m, 1H), 1.49 (s, 3 H), 1.22 (s, 3H).
Beispiel 1(b). Über t-Butyl 3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat
Schritt 4A. 3(S)-2,2-Dimethyltetrathydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäure 11
Zu einer gerührten Suspension an D-Penicillamin (14,92 g), in 1,2-Dichlorethan (300 mL) und N,N-Dimethylformamid (2 mL) bei 0°C wurden 1,8-Diazabicyclo [5.4.0]undec-7-en (22,4 mL) gefolgt von Trimethylsilylchlorid (19,0 mL) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde für 3 Stunden lang gerührt, während sie sich langsam auf Raumtemperatur erwärmten. Zur homogenen Lösung wird 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (29,9 mL) über 10 Minuten hinzugegeben und die Reaktion erwärmte auf 47°C. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und für weitere 17,5 Stunden gerührt. Methanol (10 mL) wurde zur Reaktionsmischung zugegeben nach 10 Minuten Rühren wurde ein Präzipitat gebildet. Die Reaktionsmischung wurde filtriert und das präzipitierte Material mit einer minimalen Menge an Methanol gewaschen. Der Feststoff wurde unter Vakuum bei 50°C für 6 Stunden getrocknet, um 3(S)-2,2-Dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäure (16,18 g) als einen weißen pulverigen Feststoff zu ergeben: Schmp. dec > 212°C; ¹H NMR (300 MHz, D20): δ 3.71 (s, 1H), 3.68-3.60 (m, 1H), 3.27 – 3.01 (m, 2H), 2.78 – 2.64 (m, 1H), 1.45 (s, 3H), 1.42 (s, 3H).
Schritt 4a wurde ebenfalls wie folgt durchgeführt:
Zu einer gerührten Suspension von D-Penicillamin (14,92 g) in 1,2 Dichloroethan (150 mL) und Dimethylformamid (15 mL) bei Raumtemperatur wurde Trimethylsilylchlorid (19 mL) über 30 Minuten lang zugegeben und die Reaktion auf 43°C erwärmt. Zur erhaltenen viskosen Suspension wurde 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (22,4 mL) in einer konstanten Rate über 4 Stunden hinzugegeben und während der Zugabe erwärmt sich die Reaktion auf 48°C. Die Reaktionsmischung wurde langsam auf Raumtemperatur abgekühlt und für weitere 2 Stunden gerührt. Zur Reaktionsmischung wurde Isopropanol (75 mL) zugegeben und diese Mischung wurde für 3 Stunden gerührt während ein Präzipitat gebildet wurde. Die Reaktionsmischung wurde filtriert und das präzipitierte Material mit Isopropanol (100 mL) gewaschen. Der Feststoff wurde unter Vakuum bei 50°C für 6 Stunden getrocknet, um das Produkt 3(S)-2,2-Dimethyl-thiomorpholin-3-carboxylsäure (15,47 g) als einen weißen pulverigen Feststoff zu ergeben.
Schritt 5A. Herstellung von t-Butyl-3(S)-2 2-dimethvl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat
Ein 2 L Einhalshalskolben wurde mit Dioxan (320 mL) und 3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2N-1,4-thiazin-3-carboxylsäure (28 g, 0,1 mol) befällt. Die Suspension wurde vor der Zugabe von konzentrierter Schwefelsäure (23 mL, 0,6 mol) über einen Zulauftrichter auf 0°C über 10 Minuten abgekühlt. Die Kühlung wurde entfernt und flüssiges Isobutylen (200 mL, 2,2 mol) wurde zur Suspension hinzugegeben. (Isobutylen wurde in einem getrennten Messzylinder bei –20°C aus einer 400 g Vorratsflasche kondensiert). Das Gas wurde unter Rückfluss bei Raumtemperatur mit einem Doppelwandkondensator unter Verwendung –50°C kaltem Ethanol aus einem zirkulierenden Kryobad behandelt. Das Rühren wurde 19 Stunden lang vor der Aufarbeitung fortgesetzt. Die Reaktion wurde in eine kalte, biphasische Mischung, die Ethylacetat (400 mL) und 2 M Natriumbicarbonatlösung (1 L) enthält, gegossen. Die organischen Phasen wurden isoliert und die wässrigen Phasen wiederum mit Ethylacetat (200 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Salzlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Filtrieren wurde das Lösungsmittel unter Vakuum konzentriert, um t-Butyl-3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat als ein Öl zu ergeben, das sich beim Stehen vertestigte. (32.7 g, 89% Ausbeute): ¹H NMR (300 MHz, CDCl3) 3.42 (s, 1H), 3.2–3.35 (m, 1H), 2.7–2.85 (m, 2H), 2.05–2.2 (m, 1H), 1.37 (s, 6H), 1.3 (s, 3H), 1.2 (s, 3H).
Schritt 6. t-Butyl-(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl-2,2-dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat
3(S)-t-Butyl-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat (2,31 g, 0,01 mol) wurde mit Methylenchlorid (25 mL) und 4-Methylmorpholin (2,42 mL, 0,022 mol) kombiniert, um eine Lösung zu ergeben. Zu dieser Lösung wurde 4-[(Pyrid-4-yl)oxyjbenzensulfonylchloridhydrochlorid (3,22 g, 0,0105 mol) hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde zu einer orangefarbenen Suspension, begleitet von einer milden exothermen Reaktion. Die Reaktion wurde nach vierstündigem Rühren bei Raumtemperatur in Ethylacetat (300 mL) gegossen. Die organischen Phasen wurden mit 2N Natriumhydroxid (50 mL) und Salzlösung (50 mL) vor dem Trocknen über Natriumsulfat gewaschen. Die Lösung wurde filtriert und anschließend unter Vakuum konzentriert, um t-Butyl 3(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat als einen gelben Feststoff zu ergeben (4,4 g, 94% Ausbeute). ¹H NMR (300 MHz, CDCl3) 8.55 (d, 2H), 7.80 (dd, 2H), 7.17 (dd, 2H), 6.92 (dd, 2H), 4.37 (s, 1H), 4.07 (dd, 1H), 3.89 (dt, 1H), 3.15 (dt, 1H), 2.45 (d, 1H), 1.63 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.33 (s, 9H).
Schritt 7. Herstellung von 3(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäurehydrochlorid
Ein 100 mL Kolben wurde mit Dioxan ( 20 mL) und 3(S)-t-Butyl-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat (4,37 g, 0,0094 mol) befällt. Dazu wurden 4 M Hydrogenchlorid in Dioxan (20 mL, 0,08 mol) zugegeben und die Mischung wurde bis zum Rückfluss erhitzt. Nach 4 Stunden bei Rückfluss wurde die Reaktionsmischung gekühlt und filtriert, um 3(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäurehydrochlorid (3,6 g, 81%) als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H NMR (300 MHz, CDCl3) 8.82 (d, 2H), 8.15 (d, 2 H), 7.5–7.6 (m, 4H), 4.4 (s, 1H), 4.15 (dd, 1H), 3.85 (dt, 1H), 3.16 (dt, 1H), 3.16 (dt, 1H), 2.55 (d, 1H), 1.64 (s, 3H), 1.39 (s, 3H).
Beispiel 1(c). über Methyl 3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat
Schritt 5. Herstellung von Methyl 3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat
Zu einer gerührten Lösung von 1,2-Dibromethan (1,03 mL) in 10 mL an trockenem N,N-Dimethylformamid bei 25°C wurden über eine Stunde mittels einer Kanüle eine Lösung von D-Penicillaminmethylesterhydrochlorid (2 g) und 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (4,5 mL) in 20 mL an trockenem N,N-Dimethylformamid zugegeben. Die Reaktion wurde für zwei Stunden gerührt, anschließend in Natriumbicarbonatlösung gegossen und mit Ethylacetat (3 × 100 mL) extrahiert, die organischen Fraktionen wurden vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert, dann wurde Isooctan zugegeben und das Lösungsmittel entfernt. Der verbleibende Stoff wurde für 24 Stunden einem Vakuum ausgesetzt, um Methyl 3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2N-1,4-thiazin-3-carboxylat (1.41 g) als ein leicht gelbes Öl zu ergeben: ¹H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 3.68 (s, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.39–3.30 (m, 1H), 2.95–2.80 (m, 2H), 2.31–2.18 (m, 1H), 1.38 (s, 3H), 1.27 (s, 3 H).
Schritt 6. Herstellung von Methyl 3(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2 2-dimethyltetrahydro-2H-1.4-thiazin-3-carboxylat
Zu einer Lösung von Methyl 3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat (0,756 g) in Dichlormethan (20 mL) wurden bei Raumtemperatur 4-Methylmorpholin (0,44 mL), gefolgt von 4-[(pyrid-4-yl)oxy]benzensulfonylchloridhydrochlorid 4a ( 1,28 g) zugegeben. Die Reaktion wurde für 24 Stunden gerührt und anschließend in pH 7 Puffer (100 mL) gegossen und mit Ethylacetat (3 × 100 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel unter Vakuum entfemt. Der verbleibende Rest wurde auf Kieselerde chromatografiert und mit 40% Ethylacetat in Dichlormethan eluiert. Die produkthaltigen Fraktionen wurden vereinigt und das Lösungsmittel entfemt. Ein Minimum an Dichlormethan wurde zugegeben, gefolgt von Hexanen. Das Lösungsmittel wurde langsam entfernt, was eine Kristallisierung von Methyl 3(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)2,2-dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat (1.06 g) als einen kristallinen weißen Festkörper bewirkte: Schmp. 151°C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 8.55 (dd, J = 1.5, 5 Hz, 2H), 7.76 (dd, J = 2, 6.5 Hz, 2H), 7.17 (dd, J = 2, 6.5 Hz, 2H), 6.89 (dd, J = 1.5, 5 Hz, 2H), 4.47 (s, 1H), 4.10 (ddd, J = 1.5, 1.7, 12.5 Hz, 1H), 3.79 (ddd, J = 3, 12.5, 12.5 Hz, 1 H), 3.46 (s, 3H), 3.18 (ddd, J = 4, 13, 13.5 Hz, 1H), 2.48 (ddd, J = 2.5, 3, 14 Hz, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.29 (s, 3H).
Schritt 7. Herstellung von 3(S)-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2.2-dimethyltetrahydro-2N-1.4-thiazin-3-carboxylsäure
Eine Lösung von Methyl 3(S)-4-4((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat (15 g, 35,5 mmol) in 6 mol wässriger hydrochloriger Säure (74 mL) wurden unter Rückfluss über 15 Stunden erhitzt. Die Mischung wurde leicht abgekühlt und der pH auf 6 durch die Zugabe von 3 M wässriger Natriumhydroxidlösung und 50%-iger wässriger Natriumhydroxidlösung eingestellt. Die erhaltene Suspension wurde auf 20°C abgekühlt und das Präzipitat durch Filtration gesammelt, mit Wasser (200 mL) gewaschen, und getrocknet, um 3(S)-4-(4-pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dmethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäure (9) als einen weißen Feststoff mit einem Gewicht von 13,3 g (92% Ausbeute) zu ergeben.
Beispiel 1(d). Über Allyl 3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat
Schritt 5a. Herstellung von Allyl 3(S)-2.2-Dimethvl-tetrahydro-2H-1.4-thiazin-3-carboxylat 7
Ein 50 mL Kolben wurde mit einem Heizmantel, einer Dean-Stark-Falle und einem Rückflusskondensator ausgestattet und mit 3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäure 11 (0,87 g, 0,005 mol) befällt. Dazu wurden Benzen (20 mL), Paratoluolsulfonsäuremonohydrat (0,856 g, 0,0045 mol), und Schwefelsäure (0,14 mL, 0,0025 mol) zugegeben. Die Reaktion wurde für 16 Stunden unter Rückfluss gehalten, um eine bernsteinfarbene Lösung zu ergeben, während 0,2 mL an Wasser als Azeotrop vorlagen. Die Heizung wurde entfernt und die Reaktion wurde in Wasser (25 mL) gegossen. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt und mit Methylenchlorid (25 mL) vereinigt. Der pH wurde von 1 bis 9 mit 1 N Natriumhydroxidlösung eingestellt. Die organische Phase wurde getrocknet und das Lösungsmittel unter Vakuum entfemt, um Allyl 3(S)-2,2-Dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat als ein farbloses Öl zu ergeben (0.47 g, 44% Ausbeute). ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) 1.24 (s, 3H), 1.42 (s, 3H), 2.3–2.36 (d, 1 H), 2.8–2.9 (dt, 1H), 2.92–3.1 (dt, 1H), 3.3–3.4 (m, 1H), 3.65 (s, (1H), 4.7 (d, 2H), 5.3–5.5 (m, 2H), 5.8–6.1 (m, 1H).
Schritt 6. Herstellung von Allyl 3(S)-4-(4-((Pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyltetrahydro-2H-1.4-thiazin-3-carboxylat
4-[(4-Pyridyl)oxy]benzensulfonylchloridhydrochlorid 4a (610 mg, 2,0 mmol) wurden in trockenem Acetonitril (10 mL) suspendiert und Kaliumcarbonat (550 mg, 4,0 mmol) wurden zugegeben. Nach 30 minütigem Rühren wurde eine Lösung von 3(S)-2,2-Dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat (430 mg, 2,0 mmol) in Acetonitril (5 mL) tropfenweise über 15 Minuten zugegeben. Die Mischung wurde bei 20°C für 24 Stunden gerührt. Die Mischung wurde in pH 7 Puffer abgeschreckt und der pH wurdeauf 7 mit 2 molarer hydrochloriger Säure eingestellt. Die Mischung wurde mit Methylenchlorid (2 × 25 mL) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit Salzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt, was 3(S)-4-(4-((Pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat als einen gelben Feststoff ergab, der 700 mg (78% Ausbeute) wog.¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) 8.53 (d, J = 5 Hz, 2H), 7.78 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 8 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8 Hz, 2H), 5.84–5.71 (m, 1H), 5.30–5.22 (m, 2H), 4.49 (s, 1H), 4.35 (d, J = 5 Hz, 2H), 4.10 (ddd, J = 1.5, 1.5, 9 Hz, 1H), 3.78 (ddd, J = 1.5, 12, 12 Hz, 1H), 3.18 (ddd, J = 1.5, 12, 12 Hz, 1H), 2.43 (ddd, J = 1.5, 1.5, 12 Hz, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.31 (s, 3H).
Schritt 7. Herstellung von 3(S)-4-(4-((Pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl-2,2-dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäure
Zu einer Lösung von Allyl 3(S)-4-(4-((Pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylat (0,150 g) in Ethylacetat (3 mL) bei 0°C wurde N-Methylanilin (0,071 mL) gefolgt von Tetrakis(triphenylphosphin)palladium(0) (0,0076 g) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde für zwei Stunden bei 0°C gerührt, Hexane (4 mL) wurden zugegeben, und der Feststoff wurde abfiltriert und im Vakuum getrocknet, um 3(S)-4-(4-((Pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl-2,2-dimethyl-tetrahydro-2N-1,4-thiazin-3-carboxylsäure (0,085 g) als einen weißen Feststoff zu ergeben.
Beispiel 18
(a) 3(S)-N-Hydroxy-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid
Schritt 1. Zu einer gerührten Lösung von D-Penicillamin in d 20 mL trockenem DMF wurde Diisopropylethylamin (1,74 mL) gefolgt von Trimethylsilylchlorid (1,52 mL), das tropfenweise zugegeben wurde. Nach 30 Minuten wurde Diazabicyclo[4.2.0]undecan (4,48 mL) zu klaren Lösung zugegeben, und die erhaltene Lösung wurde langsam über eine Kanüle über einen Zeitraum von einer Stunde zu einer Lösung von 1,2-Dibromethan (0,95 mL) in 20 mL an trockenem DMF bei 50°C übertührt. Nachdem die Zugabe vollständig war, wurde die Lösung für eine weitere Stunde bei 50°C erhitzt und anschließend auf 0°C abgekühlt. Zu der genührten Lösung wurde N-Methylmorpholin (1,00 mL) gefolgt von 9-Fluorenylmethoxycarbonylchlorid (2,84 g) zugegeben und die Lösung wurde bei –20°C 16 Stunden belassen. Weitere 0,5 g an 9-Fluorenylmethoxycarbonylchlorid wurden zugegeben und die Lösung wurde für eine weitere Stunde bei 0°C gerührt und anschließend mit 1 mL an Wasser abgeschreckt. Die Reaktion wurde zwischen 3 : 1 Ethylacetat : Hexan (200 mL) und 0,2 N wässriger Natriumbisulfatlösung (200 mL) partitioniert. Die organische Phase wurde mit weiteren 0,2 N wässriger Natriumbisulfatlösung (150 mL) und mit Salzlösung (50 mL) gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und aufkonzentriert. Der Rest wurde durch Chromatografie auf 150 g Silicagel aufgereinigt, und mit 25% bis 35% Ethylacetat : Hexan enthaltend 0,5% Essigsäure eluiert. Die produkthaltigen Fraktionen wurden aufkonzentriert, um einen Sirup zu ergeben, der durch Toluol zweifach konzentriert war, und letztendlich durch t-Butylmethylether : Isooctan, um 2,84 g an 3(S)-4-(9-Fluorenylmethoxy-carbonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäure als einen weißen Feststoff zu ergeben.
Schritt 2. Zu einer Lösung von 3(S)-4-(9-Fluorenylmethoxy-carbonyl)-2,2-dimethyltetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxylsäure (2,98 g) in 20 mL an Dichlormethan wurde O(t-Butyldiphenyl-silyl)hydroxylamin (2,71 g) bei 0°C gefolgt von EDC Hydrochlorid (1,58 g) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei 0°C bis 25°C für 16 Stunden gerührt und anschließend zwischen 1 : 1 Ethylacetat : Hexan (200 mL) und 0,2 N pH 7 Phosphatpuffer (100 mL) partitioniert. Die organische Phase wurde mit Salzlösung gewaschen, ü ber Natriumsulfat getrocknet und aufkonzentriert. Der Rest wurde mit Hilfe von Chromatografie auf 150 g Silicagel aufgereinigt, und mit 20% bis 30% Ethylacetat : Hexan eluiert, um nach Konzentration aus Dichlormethan : Isooctan, 3(S)-N-(t-Butyldiphenylsilyl)oxy-4-(9-fluorenylmethoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid (4,42 g) als einen weißen Feststoff zu erhalten.
Schritt 3. Zu einer Lösung von 3(S)-N-(t-Butyldiphenylsilyl)oxy-4-(9-fluorenylmethoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid (4,33 g) in THF (10 mL) wurde Diethylamin (5 mL) zugegeben. Nach einer Stunde war die Lösung aufkonzentriert und der Rest wurde einer Chromatografie auf 75 g Silicagel unterzogen, und mit Ethylacetat eluiert, um 3(S)-N-(t-Butyldiphenylsilyl)oxy-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid (2,11 g) als einen klebrigen festen Schaum zu erhalten.
Schritt 4. Zu einer Lösung von 4-Phenoxypyridin (6,84 g) in 20 mL an 1,2 Dichlorethan wurden bei 0°C 8 mL Chlorosulfonsäure tropfenweise zugegeben. Nach zehn Minuten wurde das Eisbad entfernt und man ließ die Lösung auf 25°C erwärmen. Nach einer weiteren Stunde wurde die Lösung auf 40°C für drei Stunden erhitzt und anschließend auf 25°C gekühlt und Oxalylchlorid (4,4 mL) wurde zugegeben. Die Lösung wurde für 16 Stunden auf 50°C erhitzt, und anschließend wurde eine weitere Menge von 2,2 mL an Oxalylchlorid zugegeben. Nach fünf weiteren Stunden bei 5°C wurde die Lösung auf 25°C abgekühlt und unter schnellem Rühren in 250 mL Diethylether gegossen. Nach einer Minute ließ man den Feststoff absetzen und der Überstand wurde dekantiert. Der Rest wurde in 3 : 1 Toluol : Dichlormethan (250 mL) bei etwa 5°C suspendiert und 50 mL von 1,6 M wässriger K₃PO₄ wurde unter Rühren zugegeben. Nach etwa 30 Sekunden wurde die Mischung in einen Scheidetrichter übertührt und die Phasen wurden getrennt. Die organische Phase wurde mit 25 mL an 1 N Phosphatpuffer mit einem pH von 7 und mit 10 mL an Salzlösung gewaschen, und die vereinigten wässrigen Phasen wurden mit 50 mL Toluol extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natrumsulfat getrocknet und anschließend durch ein Glasfibertilter filtriert. Zu dem Filtrat wurde sofort 11 mL von 4 M HCl in Dioxan gegeben und die Lösung wurde anschließend aufkonzentrtert. Eine teilweise Konzentrierung von Dichlormethana-Butylmethylether und Filtration ergab 2,11 g an 4-((Pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonylchloridhydrochlorid.
Schritt 5. Zu einer Lösung von 3(S)-N-(t-Butyldiphenylsilyl)oxy-2,2-dimethyl-tetrahydro-2N-1,4-thiazin-3-carboxamid (2,11 g) in Dichlormethan (20 mL) bei 0°C wurde N-Methylmorpholin (1,35 mL) gefolgt von 4-((Pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonylchloridhydrochlorid (1,71 g) zugegeben. Die Lösung wurde bei 0°C für drei Stunden gerührt und anschließend bei 25°C für vier Stunden. Die Reaktion wurde zwischen 3 : 1 Ethylacetat : Hexan (150 mL) und 0,5 N pH 7 Phosphatpuffer (50 mL) aufgeteilt. Die organische Phase wurde mit weiterem Puffer und mit Salzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. Der Rest wurde auf 150 g Silicagel chromatografiert und mit 30% bis 50% Ethylacetat : Dichlormethan eluiert, um nach teilweiser Konzentrierung aus Dichlormethan : Isooctan 3(S)-N-(t-Butyldiphenylsilyl)oxy-4-(4-((pyrid-4-yl)oxybenzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid (2,36 g) als einen schwach gelben Feststoff zu ergeben.
Schritt 6. Zu einer Lösung von 3(S)-N-(t-Butyldiphenylsilyl)oxy-4-(4-((pyrid-4-yl)oxybenzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid (2,25 g) in Methanol (10 mL) wurden 5 mL einer 10%-igen Lösung an konzentriertem HCl in Methanol zugegeben. Nach einer Stunde bei 25°C wurde die Lösung mit Methanol (50 mL) verdünnt und mit Amberlite IRA-68 schwach basischem Harz (etwa 15 mL) behandelt, bis der pH mit 7,2 bestimmt wurde. Das Harz wurde durch Filtration entfernt und gut mit Methanol gewaschen, anschließend wurde das Filtrat auf etwa 10 mL konzentriert. Zugabe von 10 mL an t-Butylmethylether ergab ein voluminöses Präzipitat, welches durch Filtration gesammelt wurde, um 1,19 g eines gebrochen weißen Feststoffes zu ergeben. Der Feststoff wurde in 50 mL an 10%-igem Methanol in Ethylacetat aufgelöst und durch ein 0,45 um Spritzenfilter filtriert, um Partikelspuren zu entfernen. Das Filtrat wurde teilweise auf etwa 20 mL aufkonzentriert, mit weiterem Ethylacetat verdünnt und wieder auf etwa 20 mL konzentriert. Das kristalline Präzipitat wurde durch Filtration gesammelt und im Vakuum getrocknet, um 3(S)-N-Hydroxy-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzensulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazin-3-carboxamid (0,97 g) als einen weißen Feststoff zu ergeben: Schmp 149,8°C.
Anal. calc. für C₁₈H₂₁N₃O₅S₂. 0.5H₂O: C, 49.47; H, 5.19; N, 9.63; S, 14.67; Bestimmt: C, 49.49; H, 5.15; N, 9.37; S, 14.41.
Die Ergebnisse, die während biologischer Test mit der erfindungsgemäßen Verbindung erhalten wurden, werden im Folgenden beschrieben.
BIOLOGISCHE DATEN Enzymassays
Die enzymatische Aktivität von Stromelysin wurde durch die Verwendung einer modifizierten Version eines Resonanzenergietransferfluorgenassays bestimmt, wie er in FEBS, Band 296 (3), Seite 263 (1992) beschrieben wurde. Das MCA-Peptidsubstrat wird unten gezeigt. Die fluoreszierende MCA-Gruppe wird durch Resonanzenergietransfer zur 2,4-Dinitrophenylgruppe gequencht. Matrixmetalloproteinasen spalten dieses Substrat an der Gly-Leu-Bindung. Die Spaltung resultiert in einem Verlust an Energietransfer und einem großen Anstieg in der Fluoreszenz der MCA-Gruppe.
7-Methoxycumarin-4-yl-acetyl-Pro-Leu-Gly-Leu-3-(2,4-dinitrophenyl)-L-2,3-diaminoproprionyl-Ala-Arg-NH₂
Der MCA-Assay wurde bei 37°C in Puffer durchgeführt, der 50 mmol Tricin (pH 7,5), 10 mmol CaCl₂, 200 mmol NaCl und 1% DMSO mit folgenden Konzentrationen an Matrixmetalloproteinase enthält: 1,4 nM Stromelysin, 0,063 nM Matrilysin, und 0,030 nmol Gelatinase A. Die Konzentration an MCA Substrat betrug in einem endgültigen Volumen von 1,6 mL 10 oder 20 uM. Die Fluoreszenzdaten wurden mit einem Perkin-Elmer LS- 5B und LS-5B-Spektrofluormeter mit λ_Anregung = 328 nm und λ_Emission = 393 nm gesammelt. Die Spektrofluorimeter waren mit einem IBM-kompatiblem Mikrocomputersystem verbunden.
Kompetitive Inhibitionsanalysen
Der K_m für das MCA Peptidsubstrat mit der Matrixmetalloproteinase ist ziemlich hoch und übersteigt seine Löslichkeit unter Testbedingungen. Konsequenterweise wurde der offensichtliche K_i (K_i,aPP) bestimmt, um die Stärke der Inhibition zu bestimmen. Gleichwohl wäre in diesem Fall, K_i,aPP essentiell gleich zu K_i, da [S] << K_m. Zur Bestimmung von K_i,aPP wurde die Konzentration des Inhibitors bei einer konstanten und niedrigen Konzentration des Substrats variiert und die steady-state-Rate der Fluoreszenzänderung bestimmt. In den meisten Fällen wurde aufgrund der Anwesenheit eines Liganden kein absorbierender Quench beobachtet. Für langsam bindenden Inhibitoren wurde der Start von Inhibitionskurven für mindestens 45 Minuten gesammelt, so dass das Gleichgewichtsstadium etabliert wurde. Steady-state-Raten von Fluoreszenzänderungen wurden durch Anpassung einer Kurve an eine Gleichung für einen einzelnen exponentiellen Abfall erhalten, der eine lineare Phase enthält. Der angepasste Wert der linearen Phase wurde als steady-state-Rate verwendet. Die steady-state-Raten wurden an die Michaelis-Gleichung, die kompetitive Inhibition beschreibt, durch nicht lineare Methoden angepasst. Die Daten aus der stark bindenden Inhibition wurden analysiert und der K_iaPP wurde durch Anpassen der Daten an die Gleichung für starke Bindungen von Morrison See (Biochem. Biophys. Acta, Band 185, Seiten 269–286 (1969)) durch nicht lineare Verfahren bestimmt.
Die Ergebnisse der oben beschriebenen Tests werden unten in Tabelle 1 gezeigt.
Tumormodelle
Primäre subkutane Tumore wurden in weiblichen BDF₁ Mäusen durch trocare Inokkulation der murinen Linie für Lewis Lungenkarzinome (NIH) etabliert. Diese Linie produziert spontane Lungenmetastasen, die aus dem primären Tumor entstehen. Das Wachstum des primären Tumors wurde durch Messung der Länge und Breite des subkutanen Tumors unter der Verwendung eines Calipers beobachtet; Lungenmetastasen wurden am Ende des Experiments (22 Tage nach der Tumorimplantation) durch die Entfernung der Lungen und das Zählen der Läsionen durch die Verwendung eines dissektierenden Mikroskops gezählt. Die Testverbindung wurde täglich verabreicht, z. B. anfänglich 24 Stunden nach der Tumorimplantation (Tag 1) und durch das Fortsetzen bis zum Tag 21. Die Volumina der primären Tumore und die Anzahl an Lungenmetastasen wurde mit Kontrolltieren durch die Verwendung von ANOVA verglichen, gefolgt von einem Vergleich der Werte durch die Verwendung der F Statistik. Alle Wirkstoffe wurde bei 50 mg/kg, z. B. täglich, Tag 1–Tag 21, verabreicht.
Arthritismodell
Kürzlich zuvor eingefrorene bovine nasale Knorpelstückchen, die ungefähr 20 mg wiegen, wurden in Polyvinylschwämme, die mit Mycobacterium tuberculosis imprägniert waren, eingebettet und subkutan in weibliche Lewis-Ratten implantiert. Die Dosierung wurde 9 Tage nach der Implantation begonnen und die Knorpelstückchen wurden etwa eine Woche später geerntet. Die Knorpelstückchen wurden gewogen und anschließend hydrolysiert und der Hydroxyprolingehalt wurde gemessen. Die Effektivität wurde durch den Vergleich der mit der Verbindung behandelten Gruppen mit denen mit einem Träger behandelten Kontrollen bestimmt.

Claims

Eine Verbindung, die 3(S)-N-hydroxy-4-(4-((pyrid-4-yl)oxy)benzenesulfonyl)-2,2-dimethyl-tetrahydro-2H-1,4-thiazine-3-carboxamide ist oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend: (a) eine therapeutisch effektive Menge der in Anspruch 1 definierten Verbindung oder ein pharmazeutisch geeignetes Solvat davon; und (b) einen pharmazeutisch geeigneten Träger, Verdünnungsmittel, Hilfsmittel oder Arzneistoffträger.
Verwendung der Verbindung gemäß Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Inhibierung der Aktivität einer Metalloproteinase.
Ein in vitro Verfahren zur Inhibierung der Aktivität einer Metalloproteinase, umfassend das Inkontaktbringen der Metalloproteinase mit einer effektiven Menge der in Anspruch 1 definierten Verbindung oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon.