DE69228879T2

DE69228879T2 - Amidino-derivate und ihre verwendung als no-synthase inhibitoren

Info

Publication number: DE69228879T2
Application number: DE69228879T
Authority: DE
Inventors: Richard Beams; Harold Hodson; Richard Palmer
Original assignee: Wellcome Foundation Ltd
Current assignee: Wellcome Foundation Ltd
Priority date: 1991-12-24
Filing date: 1992-12-23
Publication date: 1999-08-26
Anticipated expiration: 2012-12-24
Also published as: IL104212A; GR3030492T3; HUT70502A; GB9127376D0; HU217618B; JPH07502512A; WO1993013055A1; CA2126327A1; AU3169293A; AU669345B2; JP3171850B2; ZA9210018B; ES2130247T3; CA2126327C; CY2197B1; EP0618898B1; EP0618898A1; ATE178588T1; DK0618898T3; HU9401848D0

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Amidino-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung, pharmazeutische Zusammensetzungen, die diese enthalten, sowie deren therapeutische Verwendung, insbesondere deren Verwendung als Stickoxid-Synthase-Inhibitoren.
Es ist seit den frühen 80iger Jahren bekannt gewesen, daß die durch Acetylcholin herbeigeführte Vaskularrelaxation (Gefäßentspannung) vom Vorliegen des Endothelium abhängig ist, und diese Aktivität wurde einem labilen Humoralfaktor zugeschrieben, der als Endothelium-stämmiger Relaxationsfaktor (EDRF) bezeichnet wird. Die Aktivität von Stickoxid (NO) als ein Vasodilator (Gefäßerweiterungsmittel) ist seit mehr als 100 Jahren bekannt gewesen, und NO ist die wirkkomponente von Amylnitrit, Glyceryltrinitrit und weiterer Nitrovasodilatoren. Die kürzliche Identifikation von EDRF als NO (bzw. als dessen Quelle) ist mit dem Auffinden eines biochemischen Weges zusammengefallen, durch den NO aus der Aminosäure L-Arginin durch das Enzym NO-Synthase synthetisiert wird.
NO ist der endogene Stimulator der löslichen Guanylat-Zyklase und ist in einer Anzahl biologischer Aktionen zusätzlich zur Endothelium-abhängigen Relaxation involviert, einschließlich Zytotoxizität phagozyter Zellen und Zell-zu-Zell-Kommunikation im zentralen Nervensystem (siehe Moncada et al., Biochemical Pharmacology, 38, 1709-1715 (1989) und Moncada et al., Pharmacological Reviews, 43, 109-142 (1991)). Es wird nun angenommen, daß überschüssige NO-Erzeugung in einer Anzahl von Bedingungen und entsprechenden Zuständen eine Rolle spielen kann, insbesondere bei Bedingungen, die systemischen Über- bzw. Hochdruck wie toxischen Schock und eine Therapie mit bestimmten Zytokinen einschließen.
Die Synthese von NO aus L-Arginin kann durch das L-Arginin-Analog L- N-Monomethylarginin (L-NMMA) inhibiert werden, und es ist die therapeutische Verwendung von L-NMMA zur Behandlung von toxischem Schock und weiterer Typen systemischen Hochdrucks vorgeschlagen worden (WO 91/04024 und GB-A- 2240041). GB-A-2240041 lehrt die Verwendung von L-Iminoethylornithin zur Behandlung von Schockzuständen. Die therapeutische Verwendung bestimmter weiterer NO-Synthase-Inhibitoren neben L-NMMA für denselben Zweck ist ebenfalls in WO 91/04024 sowie in EP-A-0446699 vorgeschlagen worden.
Es ist kürzlich erkannt worden, daß es mindestens zwei Typen von NO- Synthase gibt, und zwar:
(i) ein konstitutives Ca&spplus;&spplus;/Calmodulin-abhängiges Enzym, das NO in Reaktion auf Rezeptor- oder physikalische Stimulation freisetzt;
(ii) ein Ca&spplus;&spplus;-unabhängiges Enzym, das nach Aktivierung von Gefäßweichmuskel, Makrophagen, Endothelialzellen und einer Anzahl weiterer Zellen durch Endotoxin und Zytokine induziert wird. Wenn sie einmal exprimiert ist, synthetisiert diese induzierbare NO-Synthase NO über lange Zeiträume.
Das durch das konstitutive Enzym freigesetzte NO wirkt als ein Transduktionsmechanismus, der verschiedenen physiologischen Reaktionen unterliegt. Das durch das induzible Enzym erzeugte NO ist wie ein zytotoxisches Molekül für Tumorzellen und einwandernde Mikroorganismen. Es scheint auch so zu sein, daß sich die gegenläufigen Effekte von überschüssiger NO- Erzeugung, insbesondere pathologische Gefäßerweiterung und Gewebeschädigung, weitgehend aus den Effekten von durch die induzible NO-Synthase synthetisiertem NO ergeben.
Die bisher zur Therapie vorgeschlagenen NO-Synthase-Inhibitoren und insbesondere L-NMMA sind in sofern nicht-selektiv, als sie sowohl die konstitutive als auch die induzible NO-Synthase inhibieren. Die Anwendung eines solchen nicht-selektiven NO-Synthase-Inhibitors erfordert große Sorgfalt, um die potentiell ernsthaften Konsequenzen einer Über-Inhibierung der konstitutiven NO-Synthase, einschließlich Hochdruck und möglicher Thrombose und Gewebeschädigung, zu vermeiden. Insbesondere im Fall der therapeutischen Anwendung von L-NMMA zur Behandlung von toxischem Schock ist empfohlen worden, den Blutdruck des Patienten ständig über die gesamte Behandlungsdauer hinweg zu überwachen. Während nicht-selektive NO-Synthase- Inhibitoren durchaus therapeutischen Nutzen aufweisen, vorausgesetzt, daß geeignete Vorkehrungen getroffen sind, wären somit NO-Synthase-Inhibitoren, die in dem Sinne selektiv sind, daß sie die induzible NO-Synthase in einem deutlich größeren Ausmaß als die konstitutive NO-Synthase inhibieren, von noch größerem therapeutischen Nutzen und viel leichter zu handhaben. Die vorliegende Erfindung betrifft Amidino-Derivate der Formel (I):
und Salze sowie pharmazeutisch geeignete Ester und Amide davon, worin gilt:
R¹ ist eine geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-, eine C&sub2;&submin;&sub6;- Alkenyl-, C&sub2;&submin;&sub6;-Alkinyl-, C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyl- oder eine C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyl-C&sub1;&submin;&sub6;- alkyl-Gruppe;
Q ist eine Alkylen-, Alkenylen- oder eine Alkinylen-Gruppe, die 3 bis 6 Kohlenstoffatome aufweist und gegebenenfalls mit einer oder mehreren C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl-Gruppen substituiert sein kann,
eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)pX(CH&sub2;)q-, worin p 2 oder 3, q 1 oder 2 und X S(O)x, worin x 0, 1 oder 2 ist, O oder NR² sind, worin R² H oder ein C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-Rest ist, oder
eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)rA(CH&sub2;)s-, worin r 0, 1 oder 2, s 0, 1 oder 2 und A ein 3- bis 6-gliedriger carbocyclischer oder heterocyclischer Ring sind, der gegebenenfalls mit einem oder mehreren geeigneten Substituenten wie mit einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy-, Hydroxy-, Halo-, Nitro-, Cyano-, Trifluor-C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl-, Amino-, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylamino- oder mit einem Di- C&sub1;&submin;&sub6;-alkylamino-Rest substituiert sein kann,
mit der Maßgabe, daß Q nicht -CH&sub2;CH&sub2;CH&sub2;- oder -CH&sub2;CH&sub2;CH&sub2;CH&sub2;-, wenn R' ein Methyl-Rest ist, oder nicht -CH&sub2;CH&sub2;CH&sub2;- ist, wenn R' ein Ethyl-Rest ist.
Die Verbindungen der Formel (I) können eine Anzahl von Asymmetriezentren im Molekül enthalten, abhängig von der genauen Bedeutung der verschiedenen Gruppen, und Formel (I) soll alle möglichen Isomeren einschließen. Ist die Gruppe Q ein Alkenyl-Rest wie -CH&sub2;CH=CHCH&sub2;-, sind sowohl die E- als auch die Z-Isomeren eingeschlossen. Die Verbindungen der Formel (I) enthalten alle ein Asymmetriezentrum in der Gruppe
und obwohl die natürliche L- oder (S)-Chiralität von Arginin bevorzugt ist, soll die Formel abermals alle möglichen Isomeren einschließen.
Die als ein carbocyclischer oder heterocyclischer Ring vorliegende Gruppe A kann gesättigt sein, eine ethylenische Ungesättigtheit einschließen oder aromatisch sein. Im Falle eines heterocyclischen Rings kann der Ring ein oder mehrere Heteroatome enthalten, die ganz allgemein aus N, O und S ausgewählt sind.
In den pharmazeutisch geeigneten Estern und Amiden der Verbindungen der Formel (I) ist die -CO&sub2;H-Endgruppe durch -CO&sub2;R³, worin R³ z. B. ein C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-, Aryl- oder ein Aryl-C&sub1;&submin;&sub3;-alkyl-Rest ist, bzw. durch -COR&sup4; ersetzt, worin R&sup4; der Rest einer geeigneten natürlichen oder synthetischen Aminosäure ist.
Gemäß einer Ausführungsform wird durch die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung der oben definierten Formel (I) oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes, Esters oder Amids davon zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung eines bedingten Zustands angegeben, bei dem es von Vorteil ist, die NO-Erzeugung aus L-Arginin durch die Wirkweise von NO-Synthase zu inhibieren.
Aktivität und Wirkvermögen einer Verbindung äls ein Inhibitor des Enzyms NO-Synthase können mit einem Assay ermittelt und bestimmt werden, wobei eine Makrophagenzellinie (J 774) induziert wird, um NO-Synthase mit Lipopolysaccharid (LPS) und γ-Interferon zu exprimieren, und es wird erzeugtes NO durch seine Reaktion mit Hämoglobin oder als Nitrit gemessen. Dieses Assay-Verfahren weist den Vorteil einer einfachen Durchführung auf, unterscheidet jedoch nicht zwischen selektiven und nicht-selektiven NO- Synthase-Inhibitoren. Selektivität kann durch die Anwendung eines Assay auf Basis aortischer Ringe der Ratte in vitro bestimmt werden. Der Basalton des Gewebes wird als eine Ankündigung der Aktivität der konstitutiven NO- Synthase herangezogen, wogegen LPS-induzierter Verlust von Ton, mediiert durch NO, als eine Ankündigung der Aktivität des induziblen Enzyms in Gefäßweichmuskelzellen herangezogen wird. Selektivität kann auch durch Anwendung eines Assay auf Basis der Messung des Blutdrucks der Ratte (konstitutives Enzym) und des Blutdrucks der Ratte in mit LPS-behandelten Ratten (induzibles Enzym) aufgezeigt und dargelegt werden. Die Verbindungen der Formel (I) zeigen Aktivität als Inhibitor von NO-Synthase in der J 774- Zellinie, und bei einer Anzahl von Verbindungen ist auch belegt worden, daß sie selektive Inhibitoren im aortischen Ring der Ratte sind, insbesondere ist bei ihnen belegt worden, daß sie um das etwa 10- bis 40-Fache wirksamere Inhibitoren der induziblen NO-Synthase als der konstitutiven NO- Synthase sind.
Krankheitszustände, bei denen es von Vorteil ist, NO-Erzeugung aus L- Arginin zu inhibieren, schließen systemischen Hoch- bzw. Überdruck im Zusammenhang mit septischem und/oder toxischen Schock, induziert durch eine große Vielzahl von Agentien, eine Therapie mit Zytokinen wie mit TNF, IL-1 und IL-2, und die Verabreichung als ein Adjuvans zur kurzzeitigen Immununterdrückung bei Transplantationstherapie ein.
Es gibt auch in zunehmenden Maße Belege dafür, daß ein drittes NO- Synthase-Enzym existiert, das bei Knorpeldegeneration eine Rolle spielen kann, die in bestimmten Krankheitszuständen wie Arthritis auftritt, und es ist ebenfalls bekannt, daß die NO-Synthese bei rheumatoider Arthritis erhöht ist. Demzufolge schließen weitere Krankheitszustände, bei denen es von Vorteil ist, die NO-Erzeugung aus L-Arginin zu inhibieren, Autoimmun- und/oder Entzündungsbedingungen bzw. entsprechende Zustände ein, die die Gelenke, z. B. bei Arthritis, betreffen.
Wie hier verwendet, soll der Begriff "Behandlung" eines Patienten Prophylaxe einschließen.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform werden durch die vorliegende Erfindung auch Verbindungen der oben definierten Formel (I) sowie pharmazeutisch geeignete Salze, Ester und Amide davon zur therapeutischen Verwendung, insbesondere zur Therapie von Bedingungen, bei denen es von Vorteil ist, eine aus L-Arginin durch die Wirkweise von NO-Synthase hervorgerufene NO-Erzeugung zu inhibieren, bereitgestellt.
Spezifische Beispiele der Gruppe R¹ schließen den Methyl-, Ethyl-, n- Propyl-, Isopropyl-, Cyclopropyl-, Propenyl-, n-Butyl-, t-Butyl-, Cyclobutyl- und den Cyclopropylmethyl-Rest ein.
Spezifische Beispiele der Gruppe A als einen carbocyclischen oder heterocyclischen Ring schließen den Cyclohexyl-, Cyclopentyl-, Cyclobutyl-, Cyclopropyl-, Cyclohexenyl-, Cyclopentenyl-, Cyclobutenyl-, Phenyl-, Pyridyl-, Piperidinyl-, Pyrrolyl-, Pyrrolidinyl-, Furanyl-, Tetrahydrofuranyl-, Thiazolyl-, Imidazolyl- und den Oxazolyl-Ring ein. In jedem Fall kann der Ring gegebenenfalls mit einem oder mehreren geeigneten Substituenten wie mit den oben genannten Substituenten substituiert sein.
Besondere Beispiele von Q als eine Alkylen-, Alkenylen- oder eine Alkinylen-Gruppe schließen Gruppen der Formeln ein:
(CH&sub2;)n-, worin n 3 bis 5 ist,
-(CH&sub2;)vCH=CH(CH&sub2;)w- und
-(CH&sub2;)vC C(CH&sub2;)w-, worin in jedem Fall v 0 bis 3 und w 0 bis 3 sind, mit der Maßgabe, daß die Gesamtsumme von v + w 2 bis 4 ist.
Eine bevorzugte Gruppe von Verbindungen der Formel (I) sind Verbindungen, in denen gilt:
R¹ ist der Methyl-Rest;
Q ist -(CH&sub2;)n-, worin n 5 ist,
-CH&sub2;CH=CHCH&sub2;-,
-(CH&sub2;)pX(CH&sub2;)q-, worin p 2 oder 3, q 1 oder 2 und X S(O)x, worin x 0, 1 oder 2, bevorzugter 0 ist, 0 oder NR² sind, worin R² H oder ein C&sub1;&submin;&sub6;- Alkyl-Rest, bevorzugter ein C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl-Rest ist, oder
-(CH&sub2;)rA(CH&sub2;)s-, worin r 1 oder 2, s 1 oder 2 und A ein 6-gliedriger carbocyclischer oder heterocyclischer Ring, bevorzugter einer der oben genannten spezifischen Ringe und am meisten bevorzugt der Cyclobutyl-, Phenyl- oder der Pyridyl-Ring sind,
mit der Maßgabe, daß die Gruppe
die natürliche L- oder (5)-Chiralität aufweist;
sowie pharmazeutisch geeignete Salze, Ester und Amide davon.
Eine ganz besonders bevorzugte Gruppe von Verbindungen der Formel (I) sind Verbindungen, in denen gilt:
R¹ ist der Methyl-Rest;
Q stellt -CH&sub2;CH=CHCH&sub2;-,
-(CH&sub2;)&sub2;SCH&sub2;- oder
- CH&sub2;ACH&sub2;- dar, worin A der Cyclopropyl-Rest ist;
sowie pharmazeutisch geeignete Salze, Ester und Amide davon.
Spezifisch bevorzugte Verbindungen der Formel (I) sind:
(±)-E-2-Amino-6-(1-iminoethylamino)hex-4-ensäure und
(S)-S-2-(1-Iminoethylamino)ethylcystein
sowie pharmazeutisch geeignete Salze, Ester und Amide davon.
Die vorliegende Erfindung schließt Verbindungen der Formel (I) in der Form von Salzen, insbesondere von Säureadditionssalzen, ein. Geeignete Salze schließen diejenigen ein, die sowohl mit organischen als auch mit anorganischen Säuren gebildet sind. Derartige Säureadditionssalze sind normalerweise pharmazeutisch geeignet, obwohl Salze von nichtpharmazeutisch geeigneten Salzen von Nutzen bei der Herstellung und Reinigung der einschlägigen Verbindung sein können. Somit schließen bevorzugte Salze diejenigen ein, die aus Salz-, Bromwasserstoff-, Schwefel-, Zitronen-, Wein-, Milch-, Brenztrauben-, Essig-, Bernstein-, Oxal-, Fumar-, Malein-, Oxalessig-, Methansulfon-, Ethansulfon-, p-Toluolsulfon-, Benzolsulfon- und aus Isethionsäuren gebildet sind. Salze der Verbindungen der Formel (I) können durch Reaktion der entsprechenden Verbindung in der Form der freien Base mit der entsprechenden Säure hergestellt werden.
Es ist zwar bezüglich der Verbindungen der Formel (I) möglich, daß sie als die Rohchemikalie zur Verabreichung gelangen, es ist aber bevorzugt, sie als eine pharmazeutische Formulierung bzw. Zubereitung darzureichen. Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird durch die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Formulierung bereitgestellt, die eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder Solvat davon, zusammen mit einem oder mehreren pharmazeutisch geeigneten Trägern dafür und gegebenenfalls mit einem oder mehreren weiteren therapeutischen Ingredientien, umfaßt. Der oder die Träger müssen "geeignet" in dem Sinne sein, daß sie mit den weiteren Ingredientien der Formulierung kompatibel und nicht schädlich für den jeweiligen Empfänger sind.
Die Formulierungen bzw. Zubereitungen schließen diejenigen ein, die sich zur oralen, parenteralen (einschließlich subkutanen, intradermalen, intramuskulären, intravenösen und intraartikularen), zur rektalen und topischen (einschließlich dermalen, bukkalen, sublingualen und intraokularen) Verabreichung eignen, wobei der am meisten geeignete Weg beispielsweise vom Zustand und der Störung des Empfängers abhängt. Die Formulierungen können in einfacher Weise in Einheitsdosierungsform vorliegen und mit jedem im einschlägigen Stand der Pharmazietechnik gut bekannten Verfahren hergestellt werden. Alle Verfahren schließen dabei eine Stufe ein, in der eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder Solvat davon ("Wirkbestandteil") mit dem Träger zusammengebracht werden, der einen oder mehrere zusätzliche Bestandteile enthält. Im allgemeinen werden die Formulierungen hergestellt, wobei man den Wirkbestandteil einheitlich und innig mit flüssigen Trägermitteln oder feinzerteilten festen Trägermitteln oder beiden zusammenbringt und dann, nötigenfalls, das Produkt zur gewünschten Formulierung formt.
Formulierungen der vorliegenden Erfindung, die sich zur oralen Verabreichung eignen, können als diskrete Einheiten wie als Kapseln, Arzneikapseln oder Tabletten, die jeweils eine vorbestimmte Menge des Wirkbestandteils enthalten, als ein Pulver oder als Körner, als eine Lösung oder Suspension in einer wäßrigen oder nicht-wäßrigen Flüssigkeit oder als eine Öl-in-Wasser- oder Wasser-in-Öl-Flüssigemulsion vorliegen. Der Wirkbestandteil kann auch als große Pille, Latwerge oder Paste vorliegen.
Eine Tablette kann durch Komprimieren oder Formgebung, gegebenenfalls mit einem oder mehreren zusätzlichen Ingredientien, hergestellt werden. Komprimierte Tabletten können durch in einer geeigneten Maschine durchgeführtes Komprimieren des Wirkbestandteils in einer frei-fließenden Form wie einem Pulver oder Körnern, gegebenenfalls vermischt mit einem Binder, Gleitmittel, inerten Verdünnungsmittel, Schmiermittel, oberflächenaktiven oder Dispergiermittel, hergestellt werden. Geformte Tabletten können durch in einer geeigneten Maschine durchgeführte Formgebung einer Mischung der gepulverten Verbindung, die mit einem inerten flüssigen Verdünnungsmittel befeuchtet ist, hergestellt werden. Die Tabletten können gegebenenfalls überzogen oder gekerbt und so zubereitet sein, daß sie eine langsame oder gesteuerte Freisetzung des darin enthaltenen Wirkbestandteils ergeben.
Formulierungen zur parenteralen Verabreichung schließen wäßrige und nicht-wäßrige sterile Injektionslösungen, die Antioxidantien, Puffer, Bakteriostatika und gelöste Stoffe enthalten können, die die Formulierung isotonisch mit dem Blut des Zielempfängers stellen, sowie wäßrige und nicht-wäßrige sterile Suspensionen ein, die Suspendier- und Verdickungsmittel enthalten können. Die Formulierungen können in Einheitsdosis- oder Mehrfachdosis-Behältnissen, z. B. versiegelten Ampullen und Fläschchen, vorliegen und in einem gefriergetrockneten (lyophilisierten) Zustand aufbewahrt und gelagert werden, wobei dann lediglich die Zugabe des sterilen flüssigen Trägers, z. B. von Kochsalzlösung oder von Wasser-zur- Injektion, unmittelbar vor der Anwendung erforderlich ist. Aus dem Stegreif zuzubereitende Injektionslösungen und -suspensionen können aus sterilen Pulvern, Körnern und Tabletten der vorher beschriebenen Art hergestellt und zubereitet werden.
Formulierungen zur rektalen Verabreichung können als ein Suppositorium mit den üblichen Trägermitteln wie Kakaobutter oder Polyethylenglykol vorliegen.
Formulierungen zur topischen Verabreichung im Mund, z. B. bukkal oder sublingual, schließen Lutschtabletten, enthaltend den Wirkbestandteil in einer Basis mit verbessertem Geschmack wie Sucrose und Acacia oder Tragacanth, und Pastillen ein, die den Wirkbestandteil in einer Basis wie Gelatine und Glycerin oder Sucrose und Acacia enthalten.
Bevorzugte Einheitsdosierungsformulierungen sind diejenigen, die eine wirksame Dosis, wie weiter unter näher erläutert, oder einen entsprechenden Bruchteil davon des Wirkbestandteils enthalten.
Es sollte klar sein, daß, zusätzlich zu den oben besonders genannten Bestandteilen, die Formulierungen der vorliegenden Erfindung weitere im Stand der Technik übliche Agentien enthalten können, die den Typ der einschlägigen Formulierung betreffen, beispielsweise können diejenigen, die sich zur oralen Verabreichung eignen, Geschmacksverbesserungsmittel enthalten.
Die Verbindungen der Erfindung können oral oder über Injektion mit einer Dosis von 0,1 bis 500 mg/kg pro Tag verabreicht werden. Der Dosisbereich für Erwachsene beträgt im allgemeinen 5 mg bis 35 g/Tag und vorzugsweise 5 mg bis 2 g/Tag. Tabletten oder andere Verabreichungsformen, welche in diskreten Einheiten bereitgestellt sind, können in einfacher Weise eine Menge der Verbindung der Erfindung enthalten, die beispielsweise in solchen Dosierungseinheiten oder als ein Mehrfaches derselben, enthaltend 5 bis 500 mg und gewöhnlich ca. 10 bis 200 mg, wirksam ist.
Die Verbindungen der Formel (I) werden vorzugsweise oral durch Injektion (intravenös oder subkutan) verabreicht. Die genaue einem Patienten verabreichte Menge an Verbindung liegt im Verantwortungsbereich des behandelnden Arztes. Allerdings hängt die verabreichte Dosis von einer Anzahl von Faktoren ab, einschließlich dem Alter und Geschlecht des Patienten, der zu behandelnden genauen Störung und ihrer Strenge. Auch wird der Verabreichungsweg schwanken, abhängig vom Zustand und der entsprechenden Strenge.
Die Verbindungen der Formel (I) können durch Reaktion einer Aminosäure der Formel (II):
oder eines geschützten Derivats davon mit einer Verbindung der Formel (III) hergestellt werden:
worin L eine abgehende Gruppe und R¹ und Q wie oben definiert sind, worauf jede vorhandene Schutzgruppe entfernt wird.
Geeignete abgehende Gruppen L schließen -OR&sup5; und -SR&sup5; ein, worin R&sup5; eine niedrigere Alkyl-Gruppe, z. B. ein C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl- und vorzugsweise ein Methyl- oder Ethyl-Rest, ist.
Die Verbindung der Formel (II) wird im allgemeinen in einer Form verwendet und eingesetzt, in welcher die Aminosäure-Funktionalität durch geeignete Schutzgruppen geschützt ist, und es ist diesbezüglich auf T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protectiv Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition, John Wiley and Sons Inc., 1991, zu verweisen. Die Schutzgruppen können dann in herkömmlicher Weise (loc. cit.) als entsprechende Endstufe des Verfahrens entfernt werden, um die Verbindungen der Formel (I) zu ergeben. Beispielsweise kann die Aminosäure-Funktionalität als das Kupfersalz geschützt werden, wobei dann die Entfernung der Schutzgruppe an einer Ionenaustauschsäule erfolgt, die angewandt wird, um anorganische Ionen aus der Reaktionsmischung zu entfernen.
Die Verbindungen der Formel (III) können in der Form der freien Base oder als ein Säureadditionssalz, z. B. als Hydrochlorid- oder Hydrojodidsalz, verwendet werden.
Die Reaktion wird im allgemeinen in einem geeigneten Lösungsmittel in der Gegenwart einer Base, z. B. eines Alkalimetallhydroxids wie Natriumhydroxid, vorzugsweise bei einem pH-Wert von ca. 9 bis 11 und im allgemeinen bei einer Temperatur von 0ºC bis zur Rückflußtemperatur des Lösungsmittels, vorzugsweise von 0 bis 50ºC, durchgeführt werden. Das bevorzugte Lösungsmittel ist Wasser, obwohl die Reaktion auch in einem polaren Lösungsmittel wie einem niedrigen Alkohol, z. B. Methanol oder Ethanol, oder in einem Amid, z. B. Dimethylformamid, entweder alleine oder in Mischung mit Wasser durchgeführt werden kann, wobei dies unter bestimmten Umständen vorteilhaft sein kann.
Die Verbindungen der Formel (1I) sind im allgemeinen bekannte Verbindungen, die in entsprechende geschützte Derivate in bekannter Weise überführt werden können. Die Imidate und Thioimidate der Formel (III) (L ist -OR&sup5; bzw. -SR&sup5;) sind ebenfalls im allgemeinen bekannte Verbindungen, und die Reaktion derartiger Verbindungen mit einem primären Amin ist beispielsweise diskutiert in The Chemistry of Amidines and Imidates, Vol. 2, Eds. Saul Patai and Zvi Rappaport, John Wiley and Sons Inc., 1991.
Die Erfindung wird nun durch die folgenden Beispiele noch weiter erläutert.

Beispiele

Bezugsbeispiel 1

(S)-N&sup5;-(1-Iminoethyl)ornithin-Hydrochlorid

L-Ornithin-Hydrochlorid (10,1 g, 60 mMol) wurde in heißem Wasser 10 ml) gelöst, und es wurde die Lösung bei 100º gerührt, wobei die Zugabe von Kupfercarbonat (7 g) in Anteilen 15 min lang durchgeführt wurde. Die dunkelblaue Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und filtriert, und es wurde der Rückstand mit Wasser (20 ml) gewaschen.
Die vereinigte Menge aus Filtrat und Waschlösungen wurden bei 5º gerührt, wobei die Zugabe von Ethylacetimidat-Hydrochlorid (11,1 g, 90 mMol) in Anteilen erfolgte; über die gesamte Zugabedauer hinweg wurde die Lösung bei einem pH-Wert von 10,5 gehalten, und zwar durch gleichzeitige Zugabe von 2 N wäßrigem Natriumhydroxid. Dann wurde die Lösung bei Raumtemperatur 1 h lang stehengelassen, mit 2 N wäßriger Salzsäure auf pH = 5 angesäuert und auf eine Säule (150 ml) aus Kationaustauschharz Bio-Rad AG 50W-X8 (Wasserstoff-Form) gegeben. Die Säule wurde mit Wasser gewaschen, bis das Eluat neutral war, und es wurde dann mit 0,5 N wäßrigem Ammoniak eluiert. Die Ninhydrin-positiven Fraktionen wurden vereinigt und unter vermindertem Druck bei 40ºC kurz verdampft, um Ammoniak zu entfernen. Die Lösung wurde dann vorsichtig auf pH = 4 mit 2 N wäßriger Salzsäure angesäuert und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft.
Der Rückstand wurde kristallisiert, wobei er in einer kleinen Menge Wasser gelöst, ein großes Volumen Ethanol zugefügt und die Mischung bei 4º einige Stunden lang stehengelassen wurden. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Ethanol gewaschen und in einem Exsikkator unter vermindertem Druck getrocknet, um die Titelverbindung als farblosen kristallinen Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 226 bis 228ºC zu ergeben.

Beispiel 2

(±)-E-2-Amino-6-(1-iminoethylamino)hex-4-ensäure-Hydrochlorid

Es wurden die Verfahrensweisen von Beispiel 1 angewandt, um E-4,5- Dehydrolysin-Hydrochlorid in die Titelverbindung zu überführen, die in einem amorphen Zustand, homogen durch TLC in einer Mischung aus Acetonitril/Wasser/Essigsäure (5 : 3 : 2), und mit einem NMR-Spektrum (D20) und einem Massenspektrum, die mit der vorgeschlagenen Struktur übereinstimmten, erhalten wurde.

Beispiel 3

(S)-S-2-(1-Iminoethylamino)ethylcystein-Hydrochlorid

Unter Anwendung der Verfahren von Beispiel 1 wurde (S)-S-2-(1- Amino)ethylcystein-Hydrochlorid (2 g, 10 mMol) in den Kupfer-Komplex überführt und mit Ethylacetimidat-Hydrochlorid (1,88 g, 15 mMol) umgesetzt. Das Produkt wurde, wie in Beispiel 1 beschrieben, isoliert, um die Titelverbindung als blaßgelben amorphen Feststoff, homogen durch TLC in einer Mischung aus Acetonitril/Wasser/Essigsäure (5 : 3 : 2), und mit einem NMR- Spektrum (D&sub2;O) und einem Massenspektrum, die mit der vorgeschlagenen Struktur übereinstimmten, zu ergeben.
Die Verbindungen der Beispiele 4 bis 9 wurden hergestellt, im wesentlichen mit den Verfahren von Beispiel 1, durch Reaktion des Kupfer- Komplexes der entsprechenden Aminosäure der Formel (II) mit dem relevanten Ethylalkammidat-Hydrochlorid.

Beispiel 4

(S)-N&sup6;-(1-Iminopropyl)lysin-Hydrochlorid

Die Titelverbindung wurde als hygroskopisches amorphes weißes Pulver isoliert, homogen durch TLC in einer Mischung aus Acetonitril/Wasser/Essigsäure (5 : 3 : 2).
Massenspektrum: (M+1)&spplus;, 202,0

Beispiel 5

(S)-N&sup6;-(α-Iminocyclopropylmethyl)lysin-Hydrochlorid

Die Titelverbindung wurde als hygroskopisches amorphes weißes Pulver isoliert, homogen durch TLC.
Massenspektrum: (M+1)&spplus;, 214,0

Beispiel 6

(±)-2-Amino-7-(1-iminoethylamino)heptansäure-Hydrochlorid

Die Titelverbindung wurde als amorphes Material erhalten, homogen durch TLC in einer Mischung aus Acetonitril/Wasser/Essigsäure (5 : 3 : 2).
Massenspektrum: (M+1)&spplus;, 202,0;
¹H-NMR (200 MHz, D&sub2;O): 1,22-1,43 (m, 2CH&sub2;), 1,50-1,70 (m, CH&sub2;), 1,75-1,90 (m, CH&sub2;), 2,1 (s, CH&sub3;), 3,10-3,20 (t, CH&sub2;), 3,60-3,72 (t, CH)

Beispiel 7

(±)-Z-2-Amino-6-(1-iminoethylamino)hex-4-ensäure-Hydrochlorid

Die Titelverbindung kristallisierte aus einer Mischung aus Ethanol und Wasser, um farblose Kristalle zu ergeben, Fp. = 223 bis 2250, homogen durch TLC in einer Mischung aus Methanol/0,880 Ammoniak (7 : 3).
Massenspektrum: (M+1)&spplus;, 186,0;
¹H-NMR (200 MHz, D&sub2;O): 2,22 (s, CH&sub3;), 2,66-2,76 (m, CH&sub2;), 3,80- 3,90 (t, CH), 3,80-4,00 (d, CH&sub2;), 5,70-5,80 (m, 2 CH)

Beispiel 8

(S)-N&sup5;-(1-Iminobut-2-yl)ornithin-Hydrochlorid

Die Titelverbindung kristallisierte aus Ethanol, enthaltend eine Spur Wasser, um einen kristallinen Feststoff mit Fp. = 202ºC, homogen durch TLC in einer Mischung aus Acetonitril/Wasser/Essigsäure (5 : 3 : 2), zu ergeben.
¹H-NMR (200 MHz, D&sub2;O): 1,21-1,29 (d, 2 CH&sub3;), 1,61-1,85 (m, CH&sub2;), 1,82-2,01 (m, CH&sub2;), 2,65-2,88 (s, CH), 3,25-3,39 (t, CH&sub2;), 3,74- 3,84 (t, CH)

Beispiel 9

(S)-N&sup5;-(a-Iminocyclopropylmethyl)ornithin-Hydrochlorid

Die Titelverbindung kristallisierte aus einer Mischung aus Ethanol und Wasser, um einen farblosen kristallinen Feststoff mit Fp. = 2,75 bis 2,77ºC, homogen durch TLC in einer Mischung aus Acetonitril/Wasser/Essigsäure (5 : 3 : 2), zu ergeben.
Massenspektrum: (M+1)&spplus;, 200;
¹H-NMR (200 MHz, D&sub2;O): 1,0-1,30 (m, 2 CH&sub2;), 1,60-2,05 (m, 2 CH&sub2;, CH), 3,25-3,40 (t, CH&sub2;), 3,70-3,85 (t, CH)

Biologische Meßergebnisse

Die Aktivität bestimmter Verbindungen der Formel (I) als NO-Synthase- Inhibitoren ist in den folgenden Assay-Verfahren bestimmt worden:
Konstitutives NO-Synthase-Verfahren von Rees et al., Br. J. Pharmacol., 101, 746-752 (1990)
Induzibles NO-Synthase-Verfahren, im wesentlichen gemäß Rees et al., Biochem. Biophys. Res. Co mm., 173, 541-547 (1990)
Die Ergebnisse waren die folgenden:

Claims

1. Amidino-Derivate der Formel (I):

worin gilt: R¹ ist eine geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-, eine C&sub2;&submin;&sub6;- Alkenyl-, C&sub2;&submin;&sub6;-Alkinyl-, C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyl- oder eine C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyl-C&sub1;&submin;&sub6;- alkyl-Gruppe;

Q ist eine Alkylen-, Alkenylen- oder eine Alkinylen-Gruppe, die 3 bis 6 Kohlenstoffatome aufweist und gegebenenfalls mit einer oder mehreren C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl-Gruppen substituiert sein kann,

eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)pX(CH&sub2;)q-, worin p 2 oder 3, q 1 oder 2 und X S(O)x, worin x 0, 1 oder 2 ist, O oder NR² sind, worin R² H oder ein C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-Rest ist, oder

eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)rA(CH&sub2;)s-, worin r 0, 1 oder 2, s 0, 1 oder 2 und A ein 3- bis 6-gliedriger carbocyclischer oder heterocyclischer Ring sind, der gegebenenfalls mit einem oder mehreren geeigneten Substituenten wie mit einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy-, Hydroxy-, Halo-, Nitro-, Cyano-, Trifluor-C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl-, Amino-, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylamino- oder mit einem Di- C&sub1;&submin;&sub6;-alkylamino-Rest substituiert sein kann,

mit der Maßgabe, daß Q nicht -CH&sub2;CH&sub2;CH&sub2;- oder -CH&sub2;CH&sub2;CH&sub2;CH&sub2;-, wenn R ein Methyl-Rest ist, oder nicht -CH&sub2;CH&sub2;CH&sub2;- ist, wenn R' ein Ethyl-Rest ist;

oder pharmazeutisch geeignetes Salz, pharmazeutisch geeigneter Ester, worin -CO&sub2;H durch -CO&sub2;R³ ersetzt ist, worin R³ aus einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-, Aryl- oder aus einem Aryl-C&sub1;&submin;&sub3;-alkyl-Rest ausgewählt ist, oder pharmazeutisch geeignetes Amid davon, worin -CO&sub2;H durch -OCR&sup4; ersetzt ist, worin R&sup4; der Rest einer Aminosäure ist.

2. Verbindung der Formel (I) gemäß Anspruch 1, worin gilt:

R¹ ist ein Methyl-, Ethyl-, n-Propyl-, Isopropyl-, Cyclopropyl-, Propenyl-, n-Butyl-, t-Butyl-, Cyclobutyl- oder ein Cyclopropymethyl-Rest;

Q ist eine Gruppe -(CH&sub2;)n-, worin n 3 bis 5 ist, eine Gruppe -(CH&sub2;)vCH=CH(CH&sub2;)w-, eine Gruppe -(CH&sub2;)vC C(CH2)w-, worin v 0 bis 3 und w 0 bis 3 sind, mit der Maßgabe, daß v + w 2 bis 4 ist; oder

Q ist eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)rA(CH&sub2;)s, worin r und s wie in Anspruch 1 definiert und A ein Cyclohexyl-, Cyclopentyl-, Cyclobutyl-, Cyclopropyl-, Cyclohexenyl-, Cyclopentenyl-, Cyclobutenyl-, Phenyl-, Pyridyl-, Piperidinyl-, Pyrrolyl-, Pyrrolidinyl-, Furanyl-, Tetrahydrofuranyl-, Thiazolyl-, Imidazolyl- oder ein Oxazoyly-Ring sind, wobei jeder Ring gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten, ausgewählt aus einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy-, Hydroxy-, Halo-, Nitro-, Cyano-, Trifluor-C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl-, Amino-, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylamin- oder aus einem Di-C&sub1;&submin;&sub6;- alkylamino-Rest, substituiert ist.

3. Verbindung der Formel (I) gemäß Anspruch 1 oder 2, worin gilt:

R¹ ist der Methyl-Rest;

Q ist -CH&sub2;CH=CHCH&sub2;-, -(CH&sub2;)pX(CH&sub2;)q-, worin p 2 oder 3, q 1 oder 2 und X S(O)x, worin x 0, 1 oder 2 ist, O oder NR2 sind, worin R² H oder ein C> 6-Alkyl-Rest ist, oder -(CH&sub2;)r(A(CH&sub2;)s, worin r 1 oder 2, s 1 oder 2 und A eine Cyclobutyl-, Phenyl- oder ein Pyridyl-Ring sind;

mit der Maßgabe, daß die Gruppe:

die natürliche L- oder (S)-Chiralität aufweist.

4. Verbindung der Formel (I) gemäß Anspruch 3, worin x 0 oder R² ein C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl-Rest sind.

5. Verbindung der Formel (I) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, worin gilt:

R¹ ist der Methyl-Rest;

Q ist -CH&sub2;CH=CHCH&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub2;SCH&sub2;- oder -CH&sub2;ACH&sub2;-, worin A der Cyclopropyl-Ring ist;

oder pharmazeutisch geeignetes Salz, pharmazeutisch geeigneter Ester, worin -CO&sub2;H durch -CO&sub2;R³ ersetzt ist, worin R³ aus einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl-, Aryl- oder aus einem Aryl-C&sub1;&submin;&sub3;-alkyl-Rest ausgewählt ist, oder pharmazeutisch geeignetes Amid davon, worin -CO&sub2;H durch -COR&sup4; ersetzt ist, worin R&sup4; der Rest einer Aminosäure ist.

6. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 zur therapeutischen Verwendung.

7. Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung eines Zustands, bei dem es von Vorteil ist, induzible NO-Synthese selektiv zu inhibieren.

8. Verwendung gemäß Anspruch 7, wobei der Zustand septischer Schock ist.

9. Verwendung gemäß Anspruch 7, wobei der Zustand eine Autoimmunkrankheit oder eine Entzündung ist.

10. Verwendung gemäß Anspruch 9, wobei der Zustand Arthritis ist.

11. Pharmazeutische Formulierung, umfassend eine Verbindung der in jedem der Ansprüche 1 bis 5 definierten Formel (I) oder pharmazeutisch geeignete Salze, Ester und Amide davon, zusammen mit einem oder mehreren pharmazeutisch geeigneten Trägern dafür.

12. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) gemäß jedem Anspruch 1 bis 5, wobei man eine Aminosäure der Formel (II):

oder ein geschütztes Derivat davon mit einer Verbindung der Formel (III) zur Reaktion bringt:

worin L eine abgehende Gruppe und R¹ und Q wie in jedem der Ansprüche 1 bis 5 definiert sind,

worauf jede vorhandene Schutzgruppe entfernt wird.