DE69431194T2

DE69431194T2 - Amidino-derivate nützlich als no synthase-hemmer

Info

Publication number: DE69431194T2
Application number: DE69431194T
Authority: DE
Inventors: F. Fok; S. Tjoeng; Keith Webber
Original assignee: GD Searle LLC
Current assignee: GD Searle LLC
Priority date: 1993-10-21
Filing date: 1994-10-18
Publication date: 2002-12-12
Anticipated expiration: 2014-10-19
Also published as: ATE222100T1; WO1995011014A1; CA2170735A1; AU8078394A; DK0724435T3; US5821267A; EP0724435B1; EP0724435A1; DE69431194D1; JPH09504524A; ES2181726T3; PT724435E

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Amidinoderivate und ihre Verwendung in der Therapie, insbesondere ihre Verwendung als Stickoxidsynthaseinhibitoren.
Seit den frühen 1970'er Jahren ist bekannt, dass die vaskuläre Relaxation, die durch Acetycholin hervorgerufen wird, von der Anwesenheit des Endothels abhängt, und diese Aktivität wurde einem labilen humoralen Faktor, der als sich von Endothel ableitender Relaxationsfaktor bezeichnet wurde, zugeordnet (EDRF, abgeleitet vom angelsächsischen endotheliumderived relaxing factor). Die Aktivität von Stickoxid (NO) als Vasodilatator ist seit über 100 Jahren gut bekannt, und NO ist die aktive Komponente von Amylnitrit, Glyceryltrinitrit und anderen Nitrovasodilatatoren. Die kürzliche Identifizierung von EDRF, wie auch NO, hat sich mit der Entwicklung eines biochemischen Weges überschritten, gemäß dem NO aus der Aminosäure L-Arginin durch das Enzym NO-Synthase synthetisiert wird.
NO ist der endogene Stimulator der löslichen Guanylatcyclase und nimmt an einer Reihe biologischer Wirkungen, zusätzlich zu der Endothelium-abhängigen Relaxation, einschließlich der Cytotoxizität phagozytischer Zellen und der Zellen-zu-Zellen-Kommunikation im zentralen Nervensystem, teil (vergleiche Moncada et al., Bichemical Pharmacology, 38, 1709-1715 (1989), und Moncada et al., Pharmacological Reviews, 43, 109-142 (1991)). Man nimmt jetzt an, dass eine überschüssige NO-Bildung bei einer Reihe von Zuständen eine Rolle spielt, insbesondere bei Zuständen, die eine systemische Hypotension, wie einen toxischen Schock, involvieren, und bei der Therapie mit bestimmten Cytokinen.
Die Synthese von NO aus L-Arginin kann durch das L-Arginin-Analoge, L-N- Monomethyl-Arginin (L-NMMA) inhibiert werden, und die therapeutische Verwendung von L- NMMA ft die Behandlung von toxischem Schock und anderen Typen systemischer Hypertension wurde vorgeschlagen (WO 91/04024 und GB-A-2240041). Die therapeutische Verwendung bestimmter anderer NO-Synthase-Inhibitoren, außer L-NMMA für den gleichen Zweck wurde ebenfalls in WO 91/04024 und EP-A-0446699 vorgeschlagen.
Es wurde kürzlich offensichtlich, dass es mindestens drei Arten von NO-Synthasen wie folgt gibt:
(i) ein konstitutives Ca&spplus;&spplus;/Calmodulin-abhängiges Enzym, das im Endothelium lokalisiert ist, das NO als Antwort auf einen Rezeptor oder physikalische Stimulierung freisetzt;
(ii) ein konstitutives Ca&spplus;&spplus;/Calmodulin-abhängiges Enzym, das im Gehirn lokalisiert ist, das NO als Antwort auf einen Rezeptor oder physikalische Stimulation freisetzt; und
(iii) ein Catunabhängiges Enzym, welches nach Aktivierung der vaskulären glatten Muskeln, Makrophagen, Endothelzellen und einer Reihe anderer Zellen durch Endotoxin und Cytokine induziert wird. Nachdem diese induzierbare NO-Synthase einmal exprimiert wurde, synthetisiert sie NO während langer Zeiten.
Das NO, das durch konstitutive Enzyme freigesetzt wird, wirkt als Transduktionsmechanismus, der verschiedenen physiologischen Antworten unterliegt. Das NO, das durch das induzierbare Enzym gebildet wird, ist ein cytotoxisches Molekül für Tumorzellen und eindringende Mikroorganismen. Es scheint ebenfalls so zu sein, dass die nachteiligen Wirkungen überschüssiger NO-Bildung, insbesondere pathologische Vasodilatation und Gewebeschaden, hauptsächlich durch die Wirkungen von NO hervorgerufen werden, das durch induzierbare NO- Synthase synthetisiert wird.
Es hat zunehmend den Anschein, dass NO an der Degeneration von Knorpel teilnimmt, die in bestimmten Zuständen, wie Arthritis, stattfindet, und es ist ebenfalls bekannt, dass die NO-Synthese bei rheumatoider Arthritis zunimmt. Dementsprechend umfassen weitere Krankheitsbilder, bei denen es von Vorteil ist, die NO-Bildung aus L-Arginin zu inhibieren, Autoimmuno- und/oder inflammatorische Zustände, die die Gelenke beeinflussen, beispielsweise Arthritis.
Krankheitsbilder, bei denen es ein Vorteil ist, die NO-Bildung aus L-Arginin zu inhibieren, umfassen systemische Hypotension, assoziiert mit septischem und/oder toxischem Schock, induziert durch eine Vielzahl von Mitteln, die Therapie mit Cytokinen, wie TNF, IL-1 und IL-2; und als Adjuvans für die kurzzeitige Immunosuppression bei der Transplantationstherapie. Weitere Krankheitsbilder, bei denen es ein Vorteil ist, die NO-Bildung aus L-Arginin zu inhibieren, umfassen Autoimmunkrankheiten und/oder infiammatorische Zustände, wie solche, die die Gelenke beeinflussen, beispielsweise Arthritis, weiterhin infiammatorische Darmkrankheit, kardiovaskuläre Ischämie, Diabetes, Hyperalgesie (Allodynia), cerebrale Ischämie (sowohl lokale Ischämie, thrombotischer Schlaganfall, und globale Ischämie, sekundär bis zum Herzstillstand), und andere ZNS-Störungen, die durch NO vermittelt werden.
Einige der NO-Synthase-Inhibitoren, die für die therapeutische Verwendung vorgeschlagen wurden, und insbesondere L-NMMA, sind nicht selektiv, da sie sowohl die konstitutive als auch die induzierbare NO-Synthase inhibieren. Wenn die Verwendung einen solchen nichtselektiven NO-Synthase-Inhibitor erfordert, muss große Sorgfalt walten gelassen werden um zu vermeiden, dass potentiell ernste Folgen bei einer Überinhibierung der konstitutiven NO- Synthase, einschließlich Hypertension und mögliche Thrombose- und Gewebeschäden, auftreten. Insbesondere ist es bei der therapeutischen Verwendung von L-NMMA für die Behandlung von toxischem Schock empfohlen, dass der Patient einer kontinuierlichen Blutdruckmessung während der Behandlung ausgesetzt sein muss. Während nichtselektive NO-Synthase- Inhibitoren therapeutische Verwendung besitzen, vorausgesetzt, dass die geeigneten Vorsichtsmaßnahmen ergriffen werden, wären NO-Synthase-Inhibitoren, die in dem Sinne selektiv sind, dass sie die induzierbare NO-Synthase in beachtlich stärkerem Ausmaß als die konstitutive NO- Synthase inhibieren, von noch größerem therapeutischen Nutzen und leichter zu verwenden.
In der EP-A-0 518 819 wird die Verwendung selektiver LTB-4-Antagonisten- Leukotrienen beschrieben. In WO-A-93 03714 wird die Wichtigkeit von Guanidin für die Behandlung von Diabetes beschrieben. In WO-A-92 14453 wird die Depletion und/oder Blockierung der Synthese von sympathetischem Norepinephrin beschrieben.
In WO 94/12165, WO 94/14780, WO 93/13055, EP0446699A1 und dem U. S. -Patent Nr. 5 132 453 werden Verbindungen beschrieben, die die Stickoxidsynthese inhibieren und bevorzugt die induzierbare Isoform der Stickoxidsynthase inhibieren.
Die Erfindung betrifft allgemein die Verwendung von Verbindungen, die bevorzugt die induzierbare Isoform der Stickoxidsynthase gegenüber den konstitutiven Isoformen der Stickoxidsynthase inhibieren oder modulieren für die Herstellung eines Arzneimittels zur Inhibierung oder Modulierung der Stickoxidsynthese, insbesondere für die Erniedrigung der Stickoxidgehalte in einem Subjekt, das eine solche Erniedrigung benötigt.
Die Erfindung betrifft die Verwendung einer Verbindung der Formel
und ihrer Salze und pharmazeutisch annehmbaren Ester und Prodrugs (Proarzneimittel) davon, worin
A einen C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkyl-, C&sub2;-C&sub2;&sub0;-Alkenyl-, C&sub2;-C&sub2;&sub0;-Alkinylgruppe, Alkylthioalkylgruppe, Alkyloxyalkylgruppe, Alkylsulfonylalkylgruppe, Phenylalkylgruppe, Phenylalkenylgruppe, Biphenylalkylgruppe oder Pyrrolyl, Pyridinyl, Pyrazolyl, Triazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Indolyl, Thiophenyl, Furanyl, Tetrazolyl, 2-Pyrrolinyl, 3- Pyrrolinyl, Pyrrolindinyl, 1,3-Dioxolanyl, 2-Imidazolinyl, Imidazolidinyl, 2-Pyrazolinyl, Pyrazolidinyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, 1,2,3-Oxadiazolyl, 1,2,3-Triazolyl, 1,3,4-Thiadiazolyl, 2H- Pyranyl, 4H-Pyranyl, Piperidinyl, 1,4-Dioxanyl, Morpholinyl, 1,4-Dithianyl, Thiomorpholinyl, Pyrazinyl, Piperazinyl, 1,3,5-Triazinyl, 1,3,5-Trithianyl, Benzimidazonyl, Chinolinyl, bedeutet, worin jede der Gruppen gegebenenfalls durch einen oder mehrere der folgenden Substituenten, wie Alkyl, Alkoxy, Hydroxy, Halogen, Nitro, Cyano, Halogenalkyl, Carbonsäure, Carboxamid, Amino, Alkylamino oder Dialkylamino substituiert sein kann; und
R H oder eine C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkylgruppe bedeutet, für die Herstellung eines Arzneimittels, das zur Behandlung von Krankheiten nützlich ist, die durch exzessive NO-Bildung verursacht werden.
Die Verbindungen der Formel (I) und die Zubereitungen, die die Verbindungen der Formel (I) enthalten, sind nützlich als Inhibitoren für Stickoxidsynthase. Diese Verbindungen inhibieren ebenfalls bevorzugt die induzierbare Form gegenüber der konstitutiven Form um das mindestens 3Fache.
Zustände, in denen es günstig ist, die NO-Produktion zu inhibieren, umfassen systemische Hypotension, die mit septischem und/oder toxischem Schock einhergeht, welcher durch eine Vielzahl von Mitteln, Therapie mit Cytokinen, wie z. B. TNF, IL-1 und IL-2 induziert wird, Autoimmunkrankheiten und/oder inflammatorische Krankheiten, die die Gelenke befallen, wie z. B. Arthritis, Diabetes und inflammatorische Bowel-Krankheit.
Eine erfindungsgemäße bevorzugte Ausführungsform ist die Verwendung gemäß Anspruch 1, worin:
A Alkyl mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, eine Alkenylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkinylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkylthioalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, Alkyloxyalkyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkylsulfonylalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Phenylalkylgruppe, Phenylalkenylgruppe, Biphenylalkylgruppe oder Pyrrolyl, Pyridinyl, Pyrazolyl, Triazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Indolyl, Thiophenyl, Furanyl, Tetrazolyl, 2-Pyrrolinyl, 3- Pyrrolinyl, Pyrrolindinyl, 1,3-Dioxolanyl, 2-Imidazolinyl, Imidazolidinyl, 2-Pyrazolinyl, Pyrazolidinyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, 1,2,3-Oxadiazolyl, 1,2,3-Triazolyl, 1,3,4-Thiadiazolyl, 2H- Pyranyl, 4H-Pyranyl, Piperidinyl, 1,4-Dioxanyl, Morpholinyl, 1,4-Dithianyl, Thiomorpholinyl, Pyrazinyl, Piperazinyl, 1,3,5-Triazinyl, 1,3,5-Trithianyl, Benzimidazonyl, Chinolinyl bedeutet,
und wobei jede Gruppe gegebenenfalls substituiert sein kann durch einen oder mehrere der folgenden Substituenten: Alkyl mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Alkoxy mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Hydroxy, Halogen, Nitro, Cyano, Halogenalkyl, Carboxyl, Carboxamid, Amino, Monoalkylamino oder Dialkylamino; und
R H oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet.
Eine weitere bevorzugte erfindungsgemäße Ausführungsform ist die Verwendung einer Verbindung der Formel (I)
worin A Niedrigalkyl mit 2 bis 10 Kohlenstoffatomen, Alkenyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkylthioalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, Alkyloxyalkyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkylsulfonylalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen oder Pyrrolyl, Pyridinyl, Pyrazolyl, Triazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Indolyl, Thiophenyl, Furanyl, Tetrazolyl, 2-Pyrrolinyl, 3-Pyrrolinyl, Pyrrolindinyl, 1,3-Dioxolanyl, 2- Imidazolinyl, Imidazolidinyl, 2-Pyrazolinyl, Pyrazolidinyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, 1,2,3- Oxadiazolyl, 1,2,3-Triazolyl, 1,3,4-Thiadiazolyl, 2H-Pyranyl, 4H-Pyranyl, Piperidinyl, 1,4- Dioxanyl, Morpholinyl, 1,4-Dithianyl, Thiomorpholinyl, Pyrazinyl, Piperazinyl, 1,3,5-Triazinyl, 1,3,5-Trithianyl, Benzimidazonyl, Chinolinyl bedeutet, und wobei jeder der Substituenten gegebenenfalls substituiert sein kann durch eine oder mehrere der folgenden Gruppen C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkyl, Alkoxy, Halogenalkyl oder Halogen, Nitro; und
worin R H oder eine niedrige Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet.
Die vorliegende Erfindung betrifft bevorzugt die Verwendung von Verbindungen, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: Cyclopropylcarbamidin, Isopropylcarbamidin, 1- Propylcarbamidin, Ethylcarbamidin, 2-Methoxyacetamidin, 3-Amidinopyridin, 2- Amidinothiophen, 2-Amidinofuran, 2-Chloracetamidin, Isobutylcarbamidinhydrochlorid, Benzylthioacetamidinhydrochlorid, Heptadecylcarbamidinhydrochlorid, Undecylcarbamidinhydrochlorid, 1-Brom-6-carbamidylhexanhydrochlorid, 1-Chlor-4-carbamidylbutanhydrochlorid, 2- Carbamidyl-3-bromthiophenhydrochlorid, 2-Amidyl-3,4-dimethyl-5-carbamidylthiophenhydrochlorid, Styrylcarbamidinhydrochlorid, 2-Carbamidylnorbornanhydrochlorid, 2-Chlor-5- carbamidylnorbornan-Hydrochlorid, 2-Phenylbutyramidin-Hydrochlorid, 2,6-Dimethyl-7- carbamidylhepta-2,6-dienhydrochlorid, 2-Methyl-2-nitro-4-carbamidylbutanhydrochlorid, Acetamidin, für die Herstellung eines Arzneimittels, das für die Behandlung von Krankheiten nützlich ist, die durch exzessive NO-Bildung verursacht werden.
Die Erfindung umfasst Verbindungen der allgemeinen Formel (I) in Form der Salze, insbesondere der Säureadditionssalze. Geeignete Salze umfassen solche, die sowohl mit organischen als auch mit anorganischen Säuren gebildet sind. Solche Säureadditionssalze werden normalerweise pharmazeutisch annehmbare Salze sein, obgleich Salze, die nicht pharmazeutisch annehmbare Salze sind, bei der Herstellung und Reinigung der in Frage kommenden Verbindung nützlich sein können. Somit umfassen bevorzugte Salze solche, die gebildet werden mit Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff-, Schwefel-, Zitronen-, Wein-, Phosphor-, Milch-, Brenztrauben-, Essig-, Bernstein-, Oxal-, Fumar-, Malein-, Oxalessig, Methansulphon-, Ethansulphon-, p-Toluolsulphon-, Benzolsulphon- und Isethionsäuren. Salze von Verbindungen der Formel (I) können durch Umsetzung der geeigneten Verbindung in Form der freien Base mit der geeigneten Säure hergestellt werden.
Obgleich die Verabreichung der Verbindungen der Formel (I) als Rohchemikalie möglich ist, ist es bevorzugt, sie als pharmazeutische Zubereitung zu präsentieren. Die Erfindung betrifft daher gemäß einer weiteren Ausführungsform pharmazeutische Zubereitungen, die eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon zusammen mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Trägern dafür und gegebenenfalls einem oder mehreren anderen therapeutischen Bestandteilen enthalten. Der beziehungsweise die Träger müssen in dem Sinne "annehmbar" sein, dass sie mit den anderen Bestandteilen der Zubereitung verträglich sind und für den Rezipienten davon nicht schädlich sind.
Die Zubereitungen umfassen solche, die für orale, parenterale (einschließlich subcutane, intradermale, intramuskuläre, intravenöse und intraartikuläre), rektale und topische (einschließlich dermale, bukkale, sublinguale und intraoculare) Verabreichung geeignet sind, obgleich der geeignetste Weg von beispielsweise dem Zustand und der Krankheit des Rezipienten abhängen kann. Die Zubereitung kann zweckdienlich in Dosiseinheitsformen vorliegen, und sie kann nach irgendwelchen der auf dem Pharmaziegebiet gut bekannten Verfahren hergestellt werden. Alle Verfahren umfassen die Stufe, bei der eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon ("aktiver Bestandteil") mit dem Träger, der eine oder mehrere Hilfsbestandteile enthalten kann, assoziiert wird. Im Allgemeinen werden die Zubereitungen hergestellt, indem der aktive Bestandteil mit dem flüssigen Träger oder mit einem fein verteilten, festen Träger oder beiden, sofern erforderlich, einheitlich und in innigen Kontakt gebracht wird und, sofern erforderlich, das Produkt zu der gewünschten Zubereitung verformt wird.
Erfindungsgemäße Zubereitungen, die für die orale Verabreichung geeignet sind, können als diskrete Einheiten, wie Kapseln, Briefchen oder Tabletten, die je eine vorbestimmte Menge an aktivem Bestandteil enthalten, als Pulver oder Granulate oder als Lösung oder Suspension in einer wässrigen Flüssigkeit oder in einer nichtwässrigen Flüssigkeit oder als Öl in Wasser- Flüssigkeitsemulsion oder als Wasser-in-Öl-Flüssigkeitsemulsion, vorliegen. Der aktive Bestandteil kann ebenfalls als Bolus, elektuär oder als Paste, vorliegen.
Eine Tablette kann durch Verpression oder Verformung, gegebenenfalls mit einem oder mehreren Hilfsbestandteilen, hergestellt werden. Verpresste Tabletten können hergestellt werden, indem der aktive Bestandteil in frei fließender Form, die als Pulver oder Granulat, gegebenenfalls vermischt mit einem Bindemittel, Gleitmittel, inerten Verdünnungsmittel, schmierenden Mittel, oberflächenaktiven Mittel oder Dispersionsmittel, verpresst wird. Verformte Tabletten können hergestellt werden, indem in einer geeigneten Vorrichtung ein Gemisch aus der gepulverten Verbindung, angefeuchtet mit einem inerten flüssigen Verdünnungsmittel, verformt wird. Die Tabletten können gegebenenfalls beschichtet oder eingekerbt werden, und sie können so formuliert werden, dass eine langsame oder kontrollierte Freisetzung des aktiven Bestandteils darin möglich ist.
Zubereitungen für die parenterale Verabreichung umfassen wässrige und nichtwässrige, sterile Injektionslösungen, die Antioxidantien, Puffermittel, bakteriostatische Mittel und gelöste Stoffe, die die Zubereitung mit dem Blut des beabsichtigten Rezipienten isotonisch machen, enthalten, und wässrige und nichtwässrige sterile Suspensionen, die Suspensionsmittel und/oder Verdickungsmittel enthalten können. Die Zubereitungen können in Dosiseinheitsform oder in Behältern für mehrere Dosiseinheiten, beispielsweise als versiegelte Ampullen und Phiolen, vorliegen, und sie können in gefriergetrocknetem (lyophilisiertem) Zustand gelagert werden, der nur die Zugabe eines sterilen, flüssigen Trägers, beispielsweise Salzlösung, Wasser für die Injektion, unmittelbar vor der Verwendung erfordert.
Extemporäre Injektionslösungen und Suspensionen können aus sterilen Pulvern, Granulaten und Tabletten der zuvor beschriebenen Art hergestellt werden.
Zubereitungen für die rektale Verabreichung können als Suppositorien mit den üblichen Trägern, wie Kakaobutter oder Polyethylenglykol, hergestellt werden.
Zubereitungen für die topische Verabreichung in den Mund, beispielsweise bukkal oder sublingual, umfassen Lutschbonbons, die den aktiven Bestandteil in einem Geschmacksgrundstoff, wie Saccharose und Akazia oder Traganth, enthalten, und Pastillen, die den aktiven Bestandteil in einem Grunstoff, wie Gelatine und Glycerin oder Saccharose und Akazia, enthalten.
Bevorzugte Einheitsdosiszubereitungen sind solche, die eine wirksame Dosis, wie zuvor beschrieben, oder eine geeignete Fraktion davon des aktiven Bestandteils enthalten.
Es soll bemerkt werden, dass zusätzlich zu den oben besonders erwähnten Bestandteilen die erfindungsgemäßen Zubereitungen andere Mittel, die üblicherweise auf diesem Gebiet hinsichtlich des Typs der fraglichen Zubereitung enthalten sein können, beispielsweise solche, die für die orale Verabreichung geeignet sind; diese können Geschmacks- beziehungsweise Aromamittel umfassen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden oral oder über Injektion in einer Dosis von 0,1 bis 500 mg/kg pro Tag verabreicht. Der Dosisbereich für erwachsene Menschen beträgt allgemein 5 mg bis 2 g/Tag. Tabletten oder andere Formen der Präsentation, vorhanden als diskrete Einheiten, können zweckdienlich eine Menge an erfindungsgemäßer Verbindung enthalten, die in solchen Dosismengen wirksam ist, oder sie können ein Vielfaches davon enthalten, beispielsweise Einheiten, die 5 mg bis 500 mg, üblicherweise 10 mg bis 200 mg, enthalten.
Verbindungen der Formel (I) werden bevorzugt oral oder durch Injektion (intravenös oder subcutan) verabreicht. Die genaue Menge der Verbindung, die einem Patienten verabreicht wird, wird von der Verantwortung des behandelnden Arztes abhängen. Jedoch wird die verwendete Dosis von einer Reihe von Faktoren, einschließlich dem Alter und Geschlecht des Patienten, der genau zu behandelnden Krankheit und ihrer Schwere abhängen. Ebenfalls kann der Verabreichungsweg von dem Zustand und seiner Stärke abhängen.
Beispiele von C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkylgruppen umfassen Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n- Butyl, Isobutyl, sek.-Butyl, tert.-Butyl, Pentyl, Isoamyl, Hexyl, Octyl und ähnliche.
Beispiele geeigneter C&sub2;-C&sub2;&sub0;-Alkenylgruppen umfassen Propenyl, Buten-1-yl, Isobutenyl, Penten-1-yl, 2-2-Methylbuten-1-yl, 3-Methylbuten-1-yl, Hexen-1-yl, Hepten-1-yl und Octen-1- yl und ähnliche.
Beispiele geeigneter C&sub2;-C&sub2;&sub0;-Alkynylgruppen umfassen Ethinyl-, Propinyl-, Butin-1-yl-, Butin-2-yl-, Pentin-1-yl-, Pentin-2-yl-, 3-Methylbutin-1-yl-, Hexin-1-yl-, Hexin-2-yl-, Hexin-3 - yl-, 3,3-Dimethylbutin-1-yl-Gruppen und ähnliche.
Der Ausdruck "Alkoxy", alleine oder in Kombination, bedeutet eine Alkylethergruppe, worin der Ausdruck Alkyl die oben gegebene Definition besitzt, und am meisten bevorzugt 1 bis 4 Kohlenstoffatome enthält. Beispiele geeigneter Alkylethergruppen umfassen Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy, n-Butoxy, Isobutoxy, sek.-Butoxy, tert.-Butoxy und ähnliche.
Der Ausdruck "Halogen" bedeutet Fluor, Chlor, Brom und Iod.
Der Ausdruck "Prodrug" bedeutet eine Verbindung, die in vivo aktiver gemacht wird.
Die folgende Beispiele erläutern die Erfindung. Einige der beschriebenen Verbindungen sind aus den angegebenen Quellen öffentlich erhältlich. Zusätzliche erfindungsgemäße Verbindungen wurden in den angegebenen Publikationen beschrieben oder werden hier vollständig beschrieben. Beispiel 1 2-Methylsulfonylacetamidin-Hydrochlorid
In einen 250 ml-Kolben werden 5 g (0,042 mol) 2-Methylsulfonylacetonitril und 75 ml wasserfreies Ethanol gegeben. Diese Lösung wird auf 0ºC in einem Eisbad gekühlt, während wasserfreies HCl bis zur Sättigung durchgeblasen wird. Dieses Gemisch kann sich langsam bei konstantem Rühren im Verlauf einer Zeit von 24 Stunden erwärmen. Das Reaktionsgemisch wird auf ein verringertes Volumen konzentriert, mit Ethylether verdünnt und filtriert, wobei 5,5 g Ethylimidat als farbloser Feststoff erhalten werden. Das Imidat wird zu 20 ml wasserfreiem Ethanol gegeben und auf 0ºC gekühlt. Zu diesem Reaktionsgemisch werden 80 ml Ethanol, zuvor mit wasserfreiem Ammoniak gesättigt, zugegeben. Das Gemisch wird verschlossen aufbewahrt und für drei Tage gerührt. Das Reaktionsgemisch wird dann auf ein verringertes Volumen konzentriert, mit Ethylether verdünnt und filtriert, wobei 4,7 g (65%) 2-Methylsulfonylcetamidinhdrochlorid als farbloser Feststoff (F. 186 bis 194ºC) erhalten werden. Beispiel 2 Cyclopropylcarbamidin; Lancaster Synthesis Inc. Beispiel 3 Isopropylcarbamidin; C. R. Hauser und C. J. Eby, J. Am. Chem. Soc. 79, 725-727 (1957). Beispiel 4 1-Propylcarbamidin; R. Almquist, R. A. Huggins und R. A. Woodbury, J. Pharmacol. 89, 271-288 (1947). Beispiel 5 Ethylcarbamidin; ibid. Beispiel 6 2-Methoxyacetamidin; BELG. 645062, 1964. Beispiel 7 3-Amidinopyridin; Ryan Scientific. Beispiel 8 2-Amidinothiophen; Ryan Scientific. Beispiel 9 2-Amidinofuran; T. J. Schwan und K. O. Ellis, J. Pharm. Sci. 64(2), 337-338 (1975). Beispiel 10 2-Chloracetamidin; Transworld Chemical Inc. Beispiel 11: Isobutylcarbamidinhdrochlorid; J. Gen. Chem. 14, 280-291 (1944)
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus Isovalerylnitril, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird. 1H-NMR(D&sub2;O) 0,9 (d, 6H), 2,05 (m, 1H), 2,25 (d, 2H); Massenspektrum, M + H = 101; Elementaranalyse, berechnet für C&sub5;H&sub1;&sub3;N&sub2;C&sub1;&sub2; + 1/10 N&sub1;H&sub4;C&sub1;&sub1;: C, 42,30; H, 9,51; N, 20,72. Gefunden C, 42,45, H, 9,47, N, 20,69. Beispiel 12: Bezylthioacetamidinhdrochlorid; Fr. 1 429 279
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus Benzylthioacetonitril, wobei die Titelverbindung als fast farbloser Feststoff erhalten wird. 1H-NMR(D&sub2;O) 3,35 (s, 2H), 3,73 (s, 2H), 7,22 (m, 5H); Massenspektrum, M + H = 181. Beispiel 13: Heptylcarbamidinhdrochlorid; Chem. Abst. 41 : 5468i
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus Heptylcyanid, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 143. Beispiel 14: Heptadecylcarbamidinhdrochlorid; J. Chem. Soc. 738-742 (1947)
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus Heptadecylcyanid, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 283. Beispiel 15: Undecylcarbamidinhdrochlorid; Chem. Abst. 51 : 12808f
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus Undecylcyanid, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 199.

Beispiel 16 : 1-Brom-6-carbamidylhexanhydrochlorid

Hergestellt wie in Beispiel 1 aus 1-Brom-6-cyanohexan, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 207. Beispiel 17: X-10191 l-Chlor-4-carbamidylbutanhydrochlorid
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus 1-Chlor-4-cyanobutan, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 135. Beispiel 18: 2-Carbamidyl-3-bromthiophenhydrochlorid
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus 2-Cyano-3-bromthiophen, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 205. Beispiel 19 : 2-Amidyl-3,4-dimethyl-5-carbamidylthiophenhydrochlorid
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus 2-Amidyl-3,4-dimethyl-5-cyanothiophen, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 198. Beispiel 20: Styrylcarbamidinhydrochlorid; J. Am. Chem. Soc. 78, 1434-7 (1956)
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus Cinnamonitril, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 147. Beispiel 21: 2-Carbamidylnorbornanhydrochlorid
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus 2-Norbornancarbonitril, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 139. Beispiel 22 : 2-Chlor-5-carbamidylnorbornanhydrochlorid
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus 2-Chlor-5-cyanonorbornan, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 173. Beispiel 23 : 2-Phenylbutyramidinhydrochlorid; Compt. Rend. 246, 2905-6 (1958)
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus 2-Phenylbutyronitril, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 163. Beispiel 24: 2,6-Dimethyl-7-carbamidylhepta-2,6-dienhydrochlorid
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus 2,6-Dimethyl-7-cyanohepta-2,6-dien, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 167. Beispiel 25: 2-Methyl-2-nitro-4-carbamidylbutanhydrochlorid
Hergestellt wie in Beispiel 1 aus 2-Methyl-2-nitro-4-cyanobutan, wobei die Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wird, Massenspektrum, M + H = 160. Beispiel 26: Acetamidin; Aldrich

Biologische Werte

Die Aktivität der oben angegebenen Verbindungen als NO-Synthase-Inhibitoren wurde gemäß der folgenden Assays bestimmt:

Citrullin-Assay für Stickoxidsynthase

Die Stickoxidsynthaseaktivität wurde gemessen, indem die Umwandlung von [3H]- Arginin in [3H]-Citrullin verfolgt wurde. Induzierbare Mäuse-Stickoxidsynthase (miNOS) wurde aus einem Extrakt von LPS-behandelten RAW-264,7-Zellen und teilweise gereinigt durch DEAE-Sepharosechromatographie hergestellt. Die konstitutive Rattengehirn-Stickoxidsynthase (rnNOS) wurde aus einem Extrakt von Rattencerebellum und teilweise gereinigt durch DEAE- Sepharosechromatographie hergestellt. Enzym und die Inhibitoren wurden bei 37ºC 15 Minuten in einem Reaktionsvolumen von 100 ul mit den folgenden Komponenten, die zum Anlassen der Reaktion zugegeben wurden, inkubiert: 50 mM Tris (pH 7,6), 1 mg/ml Rinderserumalbumin, 1 mM DTT, 2 mM CaCl&sub2;, 10 uM FAD, 10 uM Tetrahydrobiopterin, 30 uM L-Arginin, welches L-[2,3-3H]-Arginin bei 300 cpm/pmol und 1 mM NADPH enthielt. Für die konstitutive NOS wurden 50 nM Calmodulin ebenfalls zugegeben. Die Reaktion wurde durch Zugabe eines kalten Stoppuffers, enthaltend 10 mM EGTA, 100 mM HEPES, pH 5,5, und 1 mM Citrullin beendigt. [3H]-Citrullin wurde durch Chromatographie an Dowex 50 W X-8-Kationenaustauschharz abgetrennt, und die Radioaktivität wurde mit einem Flüssigkeitsszintillationszähler bestimmt.

RAW-Zellen-Nitritassay

RAW-264,7-Zellen wurden zur Konfluenz auf eine Gewebe-Kulturplatte mit 96 Vertiefungen plattiert und über Nacht (17 h) in Anwesenheit von LPS zur Induzierung von NOS gezüchtet. Eine Reihe von 3 bis 6 Vertiefungen wurde unbehandelt gelassen und diente als Kontrolle für die Subtraktion des nichtspezifischen Hintergrunds. Die Medien wurden aus jeder Vertiefung entfernt, und die Zellen wurden zweimal mit Krebs-Ringers-Hepes (25 mM, pH 7,4) mit 2 mg/ml Glucose gewaschen. Die Zellen wurden dann auf Eis gegeben und mit 50 ul Puffer, enthaltend L-Arginin (30 uM) +/- Inhibitoren während 1 h inkubiert. Der Assay wurde durch Erwärmen der Platte auf 37ºC in einem Wasserbad während 1 h initiiert. Die Bildung von Nitrit durch intracellulare iNOS ist mit der Zeit linear. Zur Beendigung des cellularen Assays wurde die Platte der Zellen auf Eis gestellt, und der Nitrit-enthaltende Puffer wurde entfernt und auf Nitrit analysiert, wobei die zuvor publizierte fluoreszierende Bestimmung für Nitrit verwendet wurde. Alle Werte sind der Durchschnitt von Triplikatvertiefungen und werden mit dem Hintergrund-subtrahierten und induzierten Satz der Zellen (100% Wert) verglichen. TABELLE I
* hiNOS-Daten
** hecNOS-Daten
@ = bei
Aus der vorherigen Beschreibung sind für den Fachmann leicht die wesentlichen Merkmale der Erfindung ersichtlich, und es können verschiedene Änderungen und Modifizierungen der Erfindung, angepasst auf verschiedene Verwendungen und Krankheitsbilder, gemacht werden, ohne dass der Rahmen der vorliegenden Erfindung verlassen wird.

Claims

1. Verwendung einer Verbindung der Formel

und deren Salze und pharmazeutisch annehmbaren Ester und Prodrugs, worin:

A eine C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkyl-, C&sub2;-C&sub2;&sub0;-Alkenyl-, C&sub2;-C&sub2;&sub0;-Alkinylgruppe, Alkylthioalkylgruppe, Alkyloxyalkylgruppe, Alkylsulfonylalkylgruppe, Phenylalkylgruppe, Phenylalkenylgruppe, Biphenylalkylgruppe oder Pyrrolyl, Pyridinyl, Pyrazolyl, Triazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Indolyl, Thiophenyl, Furanyl, Tetrazolyl, 2- Pyrrolinyl, 3-Pyrrolinyl, Pyrrolidinyl, 1,3-Dioxolanyl, 2- Imidazolinyl, Imidazolidinyl, 2-Pyrazolinyl, Pyrazolidinyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, 1,2,3-Oxadiazolyl, 1,2,3- Triazolyl, 1,3,4-Thiadiazolyl, 2H-Pyranyl, 4H-Pyranyl, Piperidinyl, 1,4-Dioxanyl, Morpholinyl, 1,4-Dithianyl, Thiomorpholinyl, Pyrazinyl, Piperazinyl, 1,3,5-Triazinyl, 1,3,5-Trithianyl, Benzimidazonyl, Chinolinyl bedeutet, wobei jede Gruppe gegebenenfalls durch einen oder mehrere der folgenden Substituenten, wie Alkyl, Alkoxy, Hydroxy, Halogen, Nitro, Cyano, Halogenalkyl, Carboxyl, Carboxamid, Amino, Alkylamino oder Dialkylamino substituiert sein kann; und

R H oder eine C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkylgruppe bedeutet,

zur Herstellung eines Arzneimittels, das für die Behandlung von Krankheiten nützlich ist, die durch exzessive NO- Bildung verursacht werden.

2. Verwendung nach Anspruch 1, worin:

A eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, eine Alkenylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkinylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkylthioalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkyloxyalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkylsulfonylalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Phenylalkylgruppe, Phenylalkenylgruppe, Biphenylalkylgruppe oder Pyrrolyl, Pyridinyl, Pyrazolyl, Triazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Indolyl, Thiophenyl, Furanyl, Tetrazolyl, 2-Pyrrolinyl, 3- Pyrrolinyl, Pyrrolidinyl, 1,3-Dioxolanyl, 2-Imidazolinyl, Imidazolidinyl, 2-Pyrazolinyl, Pyrazolidinyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, 1,2,3-Oxadiazolyl, 1,2,3-Triazolyl, 1,3,4- Thiadiazolyl, 2H-Pyranyl, 4H-Pyranyl, Piperidinyl, 1,4- Dioxanyl, Morpholinyl, 1,4-Dithianyl, Thiomorpholinyl, Pyrazinyl, Piperazinyl, 1,3,5-Triazinyl, 1,3,5-Trithianyl, Benzimidazonyl, Chinolinyl bedeutet, wobei jede Gruppe gegebenenfalls durch einen oder mehrere der folgenden Substituenten: Alkyl mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Alkoxy mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Hydroxy, Halogen, Nitro, Cyano, Halogenalkyl, Carboxyl, Carboxamid, Amino, Monoalkylamino oder Dialkylamino substituiert sein kann; und

R H oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet.

3. Verwendung nach Anspruch 1, worin A Niedrigalkyl mit 2 bis 10 Kohlenstoffatomen, Alkenyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkylthioalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, Alkyloxyalkyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Alkylsulfonylalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen oder Pyrrolyl, Pyridinyl, Pyrazolyl, Triazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Indolyl, Thiophenyl, Furanyl, Tetrazolyl, 2- Pyrrolinyl, 3-Pyrrolinyl, Pyrrolidinyl, 1,3-Dioxolanyl, 2- Imidazolinyl, Imidazolidinyl, 2-Pyrazolinyl, Pyrazolidinyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, 1,2,3-Oxadiazolyl, 1,2,3- Triazolyl, 1,3,4-Thiadiazolyl, 2H-Pyranyl, 4H-Pyranyl, Piperidinyl, 1,4-Dioxanyl, Morpholinyl, 1,4-Dithianyl, Thiomorpholinyl, Pyrazinyl, Piperazinyl, 1,3,5-Triazinyl, 1,3,5-Trithianyl, Benzimidazonyl, Chinolinyl bedeutet, und wovon jeder gegebenfalls durch eine oder mehrere der folgenden C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkyl, Alkoxy, Halogenalkyl oder Halogen, Nitro substituiert sein kann; und

R H oder eine Niedrigalkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet.

4. Verwendung einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus: Cyclopropylcarbamidin; Isopropylcarbamidin; 1-Propylcarbamidin; Ethylcarbamidin; 2- Methoxyacetamidin; 3-Amidinopyridin; 2-Amidinothiophen; 2- Amidinofuran; 2-Chloracetamidin, Isobutylcarbamidinhydrochlorid, Benzylthioacetamidinhydrochlorid, Heptadecylcarbamidinhydrochlorid, Undecylcarbamidinhydrochlorid, 1-Brom-6-carbamidylhexanhydrochlorid, 1-Chlor-4-carbamidylbutanhydrochlorid, 2-Carbamidyl-3-bromthiophenhydrochlorid, 2-Amidyl-3,4-dimethyl-5-carbamidylthiophenhydrochlorid, Styrylcarbamidinhydrochlorid, 2-Carbamidylnorbornanhydrochlorid, 2-Chlor-5-carbamidylnorbornanhydrochlorid, 2-Phenylbutyramidinhydrochlorid, 2,6-Dimethyl-7- carbamidylhepta-2,6-dienhydrochlorid, 2-Methyl-2-nitro-4- carbamidylbutanhydrochlorid, Acetamidin, zur Herstellung eines Arzneimittels, das für die Behandlung von Krankheiten nützlich ist, die durch exzessive NO-Bildung verursacht werden.