DE60209806T2

DE60209806T2 - 2-amino-thiazolinderivate und ihre verwendung als hemmstoffe der induzierbaren no-synthase

Info

Publication number: DE60209806T2
Application number: DE60209806T
Authority: DE
Inventors: Antony Bigot; Jean-Christophe Carry; Serge Mignani
Original assignee: Aventis Pharma SA
Current assignee: Aventis Pharma SA
Priority date: 2001-11-09
Filing date: 2002-11-07
Publication date: 2006-11-02
Anticipated expiration: 2022-11-08
Also published as: BR0206354A; US20070203337A1; IL161841A0; DE60209806D1; US7227022B2; EP1446393B1; EP1446393A1; MXPA04003695A; PL370324A1; IL161841A; US20030166646A1; MA27078A1; RU2004117526A; US6953796B2; US20040157843A1; DK1446393T3; JP2005526005A; NO20033129L; US6699867B2; HRP20040400A2

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von 2-Aminothiazolin-Derivaten der Formel (I)
oder ihrer pharmazeutisch akzeptablen Salze als Inhibitoren der induzierbaren NO-Synthase.
Die Erfindung hat die Verwendung von 2-Amino-thiazolin-Derivaten der Formel (I) und ihren pharmazeutisch akzeptablen Salzen für die Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen, die für die Vorbeugung und Behandlung von Erkrankungen vorgesehen sind, bei denen eine abnormale Produktion von Stickstoffmonoxid (NO) durch Induktion von induzierbarer NO-Synthase (NOS-2 oder iNOS) impliziert ist, die pharmazeutischen Zusammensetzungen, welche die neuen 2-Amino-thiazolin-Derivate und ihre pharmazeutisch akzeptablen Salze enthalten sowie die neuen 2-Amino-thiazolin-Derivate und ihre pharmazeutisch akzeptablen Salze zum Gegenstand.
Das Stickstoffmonoxid (NO) ist ein verbreitetes Radikal, das bei zahlreichen physiologischen und pathologischen Prozessen impliziert ist. Es wird durch Oxidation von L-Arginin synthetisiert, einer Reaktion, die durch eine Familie von Enzymen, der sogenannten Synthase von Stickstoffmonoxid oder NO-Synthase (NOS) katalysiert wird, als Referenz im Internationalen System der Nomenklatur von Enzymen unter der Nummer E.C. 1.14.13.39 aufgenommen.
Es sind drei Isoformen von NOS bekannt, von denen zwei konstitutiv sind und eine induzierbar ist:

– Eine neuronale NOS (NOS-1 oder nNOS) wurde isoliert und geklont, ursprünglich ausgehend von Nervengewebe, worin dieses Enzym konstitutiv ist. Das NOS-1 produziert NO als Antwortreaktion auf verschiedene physiologische Stimuli wie die Aktivierung von membranären Rezeptoren gemäß einem Mechanismus, der von Calcium und Calmodulin abhängt.
– Eine induzierbare NOS (NOS-2 oder iNOS) kann als Antwort auf immunologische Stimuli induziert werden, wie beispielsweise Cytokine oder bakterielle Antigene in verschiedenen Zellen wie beispielsweise den Makrophagen, den endothelialen Zellen, den Hepatocyten, den glialen Zellen sowie einer großen Zahl von anderen Typen von Zellen. Die Aktivität von dieser Isoform wird durch Calcium nicht reguliert. Deshalb produziert sie große Mengen von NO über eine lange Dauer, wenn dies einmal induziert ist.
– Eine endotheliale NOS (NOS-3 oder eNOS) ist konstitutiv und von Calcium/Calmodulin abhängig. Sie wurde ursprünglich in den Zellen des vasculären Endotheliums identifiziert, wo sie NO erzeugt als Antwort auf physiologische Stimuli wie die Aktivierung von membranären Rezeptoren.

Das durch die neuronalen und endothelialen konstitutiven Isoformen produzierte NO (NOS-1 und NOS-3) ist im allgemeinen in die Funktionen der interzellularen Signalisierung impliziert. Die endothelialen Zellen, welche die innere Wandung von Blutgefäßen auskleiden, induzieren beispielsweise die Relaxation der darunter liegenden glatten Muskelzellen über die Produktion von NO. Sie beteiligen sich auf diese Weise an der Regulierung des arteriellen Druckes.
Das durch die induzierbare Isoform NOS-2 in großen Mengen produzierte NO ist unter anderem in die pathologischen Phänomene impliziert, die mit akuten und chronischen inflammatorischen Prozessen bei einer großen Vielzahl von Geweben und Organen assoziiert sind.
Eine exzessive Produktion von NO durch Induzierung von NOS-2 beteiligt sich auf diese Weise an degenerativen Erkrankungen des Nervensystems, wie beispielsweise Plaque-Sklerose, fokale oder globale cerebrale Ischämie, cerebrale oder spinale Traumata, Parkinson-Krankheit, Huntington-Krankheit, Alzheimer-Krankheit, amyotrophische Lateralsklerose, Migräne, Depression, Schizophrenie, Angstzustände, Epilepsie. In gleicher Weise ist die Induktion von NOS-2 außerhalb des Zentralnervensystems bei zahlreichen Erkrankungen mit inflammatorischen Komponenten impliziert, wie beispielsweise Diabetes, Atherosklerose, Myokarditis, Arthritis, Arthrose, Asthma, Reizdarm-Syndrom, Crohn-Krankheit, Peritonitis, Gastro-Oesophagus-Rückfluß, Uveitis, Syndrom nach Guillain-Barre, Glomerulo-Nephritis, erythematöser Lupus, Psoriasis. Das NOS-2 ist ebenfalls impliziert beim Wachstum von gewissen Tumorformen, wie beispielsweise bei Epitheliomen, Adenokarzinomen oder Sarkomen, und bei Infektionen durch intrazelluläre oder extrazelluläre Bakterien, gram-positiv oder gram-negativ.
Bei allen Situationen, wo eine Überproduktion von NO schädlich ist, erscheint es somit wünschenswert, die Produktion von NO durch die Verabreichung von Substanzen, die fähig sind, das NOS-2 zu inhibieren, herabzusetzen. Jedoch ist es unter Berücksichtigung der bedeutenden physiologischen Rollen, welche die konstitutive Isoform NOS-3 insbesondere bei der Regulierung des arteriellen Druckes spielt, von entscheidender Bedeutung, daß die Isoform NOS-2 so wenig als möglich die Isoform NOS-3 beeinträchtigt. Es ist nämlich bekannt, daß die Verabreichung von nicht selektiven Inhibitoren der Isoformen von NOS zu einer Gefäßverengung und einer Zunahme des arteriellen Druckes führt (Moncada, S., Palmer, R.M.J. und Higgs, E.A., Biosynthesis of nitric oxide from L-arginine: a pathway for the regulation of cell function and communication, Biochem. Pharmacol., 1989, 38: 1709–1715). Diese Auswirkungen auf das cardiovasculäre System sind in dem Maße gefährlich, wo sie die Zufuhr von Nährstoffen zu den Geweben verringern. Demzufolge betrifft die vorliegende Erfindung Verbindungen, die eine Inhibitorwirkung gegenüber NOS-2 aufweisen, die signifikant größer ist als ihre Inhibitorwirkung gegenüber NOS-3.
Inhibitoren von NOS, die sich von Thiazolin ableiten, sind insbesondere in den Patentanmeldungen WO 94/12165, WO 95/11231 und WO 96/14842 beschrieben.
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von 2-Aminothiazolin-Derivaten der Formel (I), in der
entweder Y ein Methylen (CH₂) ist und X ausgewählt wird unter den folgenden Gruppen: O, NH, N-Alkyl(C1-C4), N-Bn, N-Ph, N-(2-Py), N-(3-Py), N-(4-Py), N-2-pyrimidyl, N-5-pyrimidyl, S, SO, SO₂, CH₂ oder CHPh;
oder Y ein Carbonyl (C=O) ist und X ausgewählt wird unter den folgenden Gruppen: NH, N-Ph, N-(2-Py), N-(3-Py), N-(4-Py), N-2-pyrimidyl oder N-5-pyrimidyl,
für die Herstellung von Arzneimitteln, die nützlich sind für die Vorbeugung oder Behandlung von Erkrankungen, bei denen eine abnormale Produktion von Stickstoffmonoxid (NO) durch Induktion von induzierbarer NO-Synthase (NOS-2 oder iNOS) impliziert ist.
Bei den vorstehenden Definitionen und bei denen, die folgen enthalten die Reste Alkyl 1 bis 4 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette. Die Abkürzungen Bn, Py, Ph bezeichnen jeweils Benzyl, Pyridyl, Phenyl.
Die Verbindungen der Formel (I) weisen ein oder mehrere asymmetrische Kohlenstoffatome auf und können somit in Form von Racematen, Enantiomeren und Diastereoisomeren vorliegen, die selbst ebenfalls sowie ihre Mischungen einen Teil der Erfindung bilden.
Außerdem können die Verbindungen der Formel (I) in Form von Tautomer (Ia) vorliegen:
Diese Tautomere bilden ebenfalls einen Teil der Erfindung.
Unter den nützlichen Verbindungen der Formel (I) gemäß der Erfindung kann man die folgenden Verbindungen nennen:
4-(Morpholin-4-ylmethyl)-4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylamin
4-(Piperazin-1-ylmethyl)-4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylamin
4-(4-Methyl-piperazin-1-ylmethyl)-4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylamin
ihre Racemate, Enantiomeren, Diastereoisomeren, Tautomeren sowie ihre pharmazeutisch akzeptablen Salze.
Unter den nützlichen und ganz besonders bevorzugten Verbindungen der Formel (I) kann man die folgende Verbindung nennen:
4-(4-Methyl-piperazin-1-ylmethyl)-4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylamin,
ihr Racemat, ihre Enantiomeren, Tautomeren sowie ihre pharmazeutisch akzeptablen Salze.
Die Erfindung betrifft ebenfalls die pharmazeutischen Zusammensetzungen, die als Wirkstoff ein Derivat der Formel (I) enthalten, in der Y entweder ein Methylen (CH₂) ist und X ausgewählt wird unter den folgenden Gruppen: O, NH, N-Alkyl(C1-C4), N-Bn, N-Ph, N-(2-Py), N-(3-Py), N-(4-Py), N-2-pyrimidyl, N-5-pyrimidyl, S, SO, SO₂, CH₂ oder CHPh; oder Y ein Carbonyl (C=O) ist und X ausgewählt wird unter den folgenden Gruppen: NH, N-Ph, N-(2-Py), N-(3-Py), N-(4-Py), N-2-pyrimidyl oder N-5-pyrimidyl, sowie ihre Racemate, Enantiomeren, Diastereoisomeren und ihre Mischungen, ihr Tautomer und ihre pharmazeutisch akzeptablen Salze.
Die Verbindungen der Formel (I) können durch Cyclisierung eines Derivates der Formel (II)
in der X und Y die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) besitzen, hergestellt werden.
Diese Cyclisierung erfolgt im allgemeinen mit Hilfe einer Säure wie Chlorwasserstoffsäure im wäßrigen Medium und bei einer Temperatur von etwa 100 °C. Vorzugsweise verwendet man 6 N Chlorwasserstoffsäure.
Die Derivate der Formel (II) können nach dem folgenden Reaktionsschema erhalten werden:
In diesen Formeln besitzen X und Y die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I), Ra ist eine Schutzgruppe für die Aminfunktion wie sie beschrieben ist von T.W. GREENE, Protective groups in Organic Synthesis, J. Wiley-Interscience Publication (1991), vorzugsweise ein Rest Acetyl oder tert.-Butoxycarbonyl, und Rb ist ein Reest Alkyl (1-4C) oder Alkoxycarbonyl, vorzugsweise Methyl, Ethyl oder Isobutyloxycarbonyl.
Die Reaktion a erfolgt im allgemeinen in Anwesenheit einer Lewis-Säure wie Eisen(III)-chlorid, in einem Lösungsmittel wie Dichlormethan oder Acetonitril sowie bei einer Temperatur zwischen einschließlich 10 °C und der Siedetemperatur des Reaktionsmediums. Wenn X NH darstellt, so kann X zuvor durch eine Schutzgruppe für die Aminfunktion mono-geschützt werden, wie von T.W. GREENE, Protective groups in Organic Synthesis, J. Wiley-Interscience Publication (1991) beschrieben, vorzugsweise durch einen Rest tert.-Butoxycarbonyl.
Die Reaktion b zur Reduktion erfolgt vorzugsweise mit Hilfe eines Hydrids wie Natriumborhydrid oder Lithiumaluminiumhydrid in einem aliphatischen Alkohol (1-4C) oder Tetrahydrofuran sowie bei einer Temperatur zwischen einschließlich 0 °C und 30 °C.
Die Reaktion c zum Abspalten der Schutzgruppe erfolgt mit einem entsprechenden Mittel zum Abspalten bei den Verbindungen, in denen Ra eine Schutzgruppe für die Aminfunktion ist, durch jede dem Fachmann bekannte Methode und insbesondere wie sie von T.W. GREENE, Protective groups in Organic Synthesis, J. Wiley-Interscience Publication (1991) beschrieben sind. Wenn die Schutzgruppe ein Rest Acetyl ist, so erfolgt diese Reaktion vorzugsweise mit Hilfe einer Säure wie wäßriger Chlorwasserstoffsäure und bei einer Temperatur von etwa 100 °C. Wenn die Schutzgruppe ein Rest tert.-Butyloxycarbonyl ist, so erfolgt diese Reaktion mit Hilfe von Chlorwasserstoffsäure in Dioxan und bei einer Temperatur von etwa 20 °C.
Die Reaktion d erfolgt durch Einwirkung von tert.-Butylisothiocyanat in einem inerten Lösungsmittel wie einem aliphatischen Alkohol (1-4C) (vorzugsweise Methanol, Ethanol), gegebenenfalls in Anwesenheit eines tertiären Amins wie Triethylamin und bei einer Temperatur zwischen einschließlich 20 °C und der Siedetemperatur des Reaktionsmediums.
Die Verbindungen der Formel (I), in denen X entweder SO₂ oder SO darstellt, können durch direkte Oxidation der Verbindung der Formel (I) erhalten werden, in der X S darstellt. Diese Oxidation erfolgt nach bekannten Methoden der Oxidation von Schwefelderivaten, wie von M. HUDLICKY, Oxidation in Organic Chemistry, ACS Monograph, 186, 252–263 (1990) beschrieben. Man arbeitet beispielsweise durch Einwirkung einer organischen Persäure oder einem Salz einer organischen Persäure (Percarbonsäure oder Persulfonsäure, insbesondere Perbenzoesäure, 3-Chlor-perbenzoesäure, 4-Nitro-perbenzoesäure, Peressigsäure, Pertrifluoressigsäure, Perameisensäure, Monoperphthalsäure) oder einer mineralischen Persäure oder einem Salz einer mineralischen Persäure (beispielsweise Period säure oder Perschwefelsäure), in einem inerten Lösungsmittel wie einem chlorierten Lösungsmittel (beispielsweise Chloroform oder Dichlormethan) sowie bei einer Temperatur zwischen einschließlich 0 °C und 20 °C. Man kann ebenfalls Wasserstoffperoxid oder ein Periodat (beispielsweise Natriumperiodat) verwenden, in einem inerten Lösungsmittel wie einem niederen aliphatischen Alkohol, Wasser oder einer Mischung dieser Lösungsmittel sowie bei einer Temperatur zwischen einschließlich 0 °C und 20 °C. Diese Produkte können auch ausgehend von den entsprechenden Verbindungen der Formel (II) hergestellt werden, die selbst nach dem folgenden Reaktionsschema erhalten werden:
Die Reaktion a zur Oxidation erfolgt nach den bekannten Methoden zur Oxidation von Schwefelderivaten wie bereits oben beschrieben.
Die Reaktion b zum Abspalten der Schutzgruppe erfolgt bei den Verbindungen, in denen Ra eine Schutzgruppe für die Aminfunktion ist, durch jede dem Fachmann bekannte Methode zur Abspaltung und insbesondere wie sie von T.W. GREENE, Protective groups in Organic Synthesis, J. Wiley-Interscience Publication (1991) beschrieben sind. Wenn die Schutzgruppe ein Rest Acetyl ist, so erfolgt diese Reaktion vorzugsweise mit Hilfe von wäßriger Chlorwasserstoffsäure und bei einer Temperatur von etwa 100 °C. Wenn die Schutzgruppe ein Rest tert.-Butyloxycarbonyl ist, so erfolgt diese Reaktion mit Hilfe von Chlorwasserstoffsäure in Dioxan und bei einer Temperatur von etwa 20 °C.
Die Reaktion c erfolgt durch Einwirkung von tert.-Butylisothiocyanat in einem inerten Lösungsmittel wie einem aliphatischen Alkohol (1-4C) (vorzugsweise Methanol, Ethanol), gegebenenfalls in Anwesenheit eines tertiären Amins wie Triethylamin und bei einer Temperatur zwischen einschließlich 20 °C und der Siedetemperatur des Reaktionsmediums.
Die Verbindungen der Formel (I) werden isoliert und können nach üblichen bekannten Methoden gereinigt werden, beispielsweise durch Kristallisation, Chromatographie oder Extraktion.
Die Enantiomeren der Verbindungen der Formel (I) können durch Aufspaltung der Racemate erhalten werden, beispielsweise durch Chromatographie über eine chirale Kolonne gemäß PIRCKLE W.H. et coll., asymmetric synthesis, vol. 1, Academic Press (1983) oder durch Bildung der Salze oder durch Synthese ausgehend von chiralen Vorläufern. Die Diastereoisomeren können nach bekannten klassischen Methoden hergestellt werden (Kristallisation, Chromatographie oder ausgehend von chiralen Vorläufern).
Die Verbindungen der Formel (I) können gegebenenfalls in Additionssalze mit einer Mineralsäure oder organischen Säure überführt werden, und zwar durch Einwirkung einer derartigen Säure in einem organischen Lösungsmittel wie einem Alkohol, einem Keton, einem Ether oder einem chlorierten Lösungsmittel. Diese Salze bilden ebenfalls einen Teil der Erfindung.
Als Beispiele für pharmazeutisch akzeptable Salze können die folgenden Salze genannt werden: Benzolsulfonat, Hydrobromid, Hydrochlorid, Citrat, Ethansulfonat, Fumarat, Gluconat, Iodat, Isethionat, Maleat, Methansulfonat, Methylen-bis-β-oxynaphthoat, Nitrat, Oxalat, Pamoat, Phosphat, Salicylat, Succinat, Sulfat, Tartrat, Theophyllinacetat und para-Toluolsulfonat.
Die Verbindungen der Formel (I) sind Inhibitoren der induzierbaren NO-Synthase oder NO-Synthase vom Typ 2 (NOS-2) und somit nützlich bei der Vorbeugung und Behandlung von Störungen, die mit einer exzessiven Produktion von NO verbunden sind, wie beispielsweise Plaque-Sklerose, fokale oder globale cerebrale Ischämie, cerebrale oder spinale Traumata, Parkinson-Krankheit, Huntington-Krankheit, Alzheimer-Krankheit, amyotrophische Lateralsklerose, Migräne, Depression, Schizophrenie, Angstzustände, Epilepsie, Diabetes, Atherosklerose, Myokarditis, Arthritis, Arthrose, Asthma, Reizdarm-Syndrom, Crohn-Krankheit, Peritonitis, Gastro-Oesophagus-Rückfluß, Uveitis, Syndrom nach Guillain-Barre, Glomerulo-Nephritis, erythematöser Lupus, Psoriasis, Wachstum von gewissen Tumorformen, wie beispielsweise bei Epitheliomen, Adenokarzinomen oder Sarkomen, und bei Infektionen durch intrazelluläre oder extrazelluläre Bakterien, gram-positiv oder gram-negativ.
Ihre Aktivitäten als Inhibitoren von NOS-2 und NOS-3 wurde bestimmt durch Messung der Konversion von [³H]-L-Arginin zu [³H]-L-Citrullin durch jeweils eine enzymatische Fraktion NOS-2, extrahiert aus Lungen von Ratten oder Mäusen, die zuvor mit Lipopolysacchariden (10 mg/kg i.p. 6 Stunden vor der Entnahme des Gewebes) behandelt wurden, und durch eine kommerzielle Präparation von NOS-3 Rekombinante vom Rind.
Die Verbindungen wurden 20 bis 30 Minuten lang bei 37 °C in Anwesenheit von 5 μM (für die Aktivität NOS-2) oder 10 μM (für die Aktivität NOS-3) von [³H]-L-Arginin, 1 mM NADPH, 15 μM Tetrabiopterin, 1 μM FAD, 0,1 mM DTT in einem Puffer HEPES (50 mM, pH 6,7), der 10 μg/l Calmodulin und 1,25 mM CaCla enthält, wenn die Aktivität NOS-3 gemessen wurde, inkubiert. Die Inkubation wurde durch Zugabe von kaltem Puffer HEPES (100 mM, pH 5,5), der 10 mM EGTA und 500 mg eines kationischen Ionenaustauscherharzes (AG50W-X8, Gegenion: Na⁺) enthält, beendet, um das [³H]-L-Arginin von dem [³H]-L-Citrullin zu trennen. Nach 5 Minuten Dekantieren wurde die in der flüssigen Phase verbliebene Radioaktivität in einem Szintillationszähler in Anwesenheit von einem geeigneten flüssigen Szintillationsmittel gemessen. Die Ausbeute der Gewinnung des gebildeten [³H]-L-Citrullins konnte unter Verwendung von L-[Ureido-¹⁴C]-Citrullin als externem Standard eingeschätzt werden.
Die Aktivität NOS-2 oder NOS-3 wurde in Picomol(en) von gebildetem [³H]-L-Citrullin pro Minute und pro Milligramm Protein, das in dem Reaktionsmedium enthalten ist, ausgedrückt.
In diesem Test beträgt für das Enzym NOS-2 die CI₅₀ der Verbindungen der Formel (I) unter oder gleich 10 μM.
Die Selektivität wird durch das Verhältnis CI₅₀ NOS-3/CI₅₀ NOS-2 gemessen. Diese Selektivität beträgt über 45.
Die Verbindungen der Formel (I) weisen eine geringe Toxizität auf. Ihre DL₅₀ beträgt über 40 mg/kg auf subkutanem weg bei der Maus.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Erfindung.
Beispiel 1
4-(4-Methyl-piperazin-1-ylmethyl)-4,5-dihydro-thiazol-2-ylamin-Trihydrochlorid
Eine Suspension von 0,42 g N-(tert.-Butyl)-N'-[2-hydroxy-1-(4-methylpiperazin-1-yl-methyl)-ethyl]-thioharnstoff in 3,9 cm³ einer wäßrigen 6 N Lösung von Chlorwasserstoffsäure wird 5 Stunden lang auf eine Temperatur von etwa 100 °C erhitzt. Nach dem Abkühlen wird das Reaktionsmedium dann unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 55 °C bis zur Trockne konzentriert. Anschließend wird der erhaltene Schaum in einem Exsikkator 4 Stunden lang unter Vakuum (2 kPa) getrocknet. Man erhält auf diese Weise 0,47 g 4-(4-Methyl-piperazin-1-ylmethyl)-4,5-dihydro-thiazol-2-ylamin-Trihydrochlorid in Form eines sehr hygroskopischen, spröden Schaumes von weißer Farbe.
NMR-Spektrum ¹H [300 MHz, (CD₃)₂SO d6, mit Zusatz von einigen Tropfen CD₃COOD d4, δ in ppm]: 2, 55 bis 2,90 (mf : 4H); 2,80 (s : 3H); 2,95 bis 3,30 (mf : 4H); 3,30 bis 3,60 (mf : 2H); 3,40 (dd, J = 11,5 und 5,5 Hz : 1H); 3,69 (dd, J = 11,5 und 7,5 Hz : 1H); 4,51 (mt : 1H).
N-(tert.-Butyl)-N'-[2-hydroxy-1-(4-methylpiperazin-1-yl-methyl)ethyl]-thioharnstoff
Zu einer Lösung von 1 g 2-Amino-3-(4-methyl-piperazin-1-yl)-1-propanol-Hydrochlorid in 20 cm³ wasserfreiem Ethanol und 1,43 cm³ Triethylamin gibt man 0,78 cm³ tert.-Butylisothiocyanat. Dann wird die Reaktionsmischung 42 Stunden lang unter inerter Atmosphäre bei einer Temperatur von etwa 20 °C gerührt und anschließend 1 Stunde und 30 Minuten lang auf eine Temperatur von etwa 50 °C erwärmt. Nach dem Abkühlen auf eine Temperatur von etwa 20 °C wird das Reaktionsmedium unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 30 °C eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird in 10 cm³ Wasser und 40 cm³ Dichlormethan aufgenommen. Danach wird die wäßrige Phase zweimal mit 30 cm³ Dichlormethan extrahiert. Die organischen Phasen werden vereinigt, mit 15 cm³ Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und danach unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 20 °C eingedampft. Man erhält auf diese Weise 0,42 g N-(tert.-Butyl)-N'-[2-hydroxy-1-(4-methylpiperazin-1-yl-methyl)-ethyl]thioharnstoff in Form eines weißen Schaumes.
Infrarot-Spektrum zwischen Plättchen von KBr:
3279; 3075; 2939; 2806; 1533; 1459; 1359; 1295; 1204; 1010 und 821 cm^–1.
2-Amino-3-(4-methyl-piperazin-1-yl)-1-propanol-Hydrochlorid
Eine Suspension von 0,89 g N-[2-Hydroxy-1-(4-methyl-piperazin-1-ylmethyl)-ethyl]-acetamid in 10,3 cm³ einer wäßrigen 6 N Lösung von Chlorwasserstoffsäure wird 3 Stunden lang auf eine Temperatur von etwa 100 °C erhitzt. Nach dem Abkühlen auf eine Temperatur von etwa 60 °C wird das Reaktionsmedium filtriert und das Filtrat unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 60 °C eingedampft. Man erhält auf diese Weise 1 g 2-Amino-3-(4-methyl-piperazinyl)-1-propanol-Hydrochlorid in Form eines klebrigen, beigefarbenen Schaumes Farbe.
Infrarot-Spektrum (KBr):
3337; 2955; 2637; 2522; 1617; 1457; 1062; 1009 und 962 cm^–1.
N-[2-Hydroxy-1-(4-methyl-piperazin-1-ylmethyl)-ethyl]-acetamid
Eine Lösung von 3,27 g 2-(Acetylamino)-3-(4-methyl-piperazin-1-yl)-propansäure-methylester in 100 cm³ wasserfreiem Methanol wird auf eine Temperatur von etwa 10 °C abgekühlt, und anschließend gibt man mit einem Spatel 0,76 g Natriumborhydrid hinzu. Danach wird die Reaktionsmischung 5 Stunden lang bei einer Temperatur von etwa 20 °C gerührt, anschließend gibt man von neuem 0,26 g Natriumborhydrid hinzu und setzt das Rühren für weitere 38 Stunden fort. Dann gießt man 5 cm³ Wasser in die Reaktionsmasse, die danach unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 30 °C konzentriert wird. Die erhaltene, verbleibende Paste wird mit Dichlormethan verrieben und der unlösliche Anteil filtriert. Danach wird das Filtrat unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 20 °C konzentriert. Der Rückstand wird durch Chromatographie unter einem Druck von Argon von 60 kPa über eine Kolonne mit Kieselgel (Granulometrie 40–63 μm; Durchmesser 5 cm; Höhe 19 cm) gereinigt, indem man mit aufeinanderfolgenden Mischungen von Dichlormethan/Methanol/Ammoniak (20 %) (98/2/0, 95/5/0,1, 90/10/0,2, 80/20/0,25, 50/50/0,25 Vol.) elu iert. Die das erwartete Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und anschließend unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 40 °C konzentriert. Man erhält auf diese Weise 0,92 g N-[2-Hydroxy-1-(4-methyl-piperazin-1-ylmethyl)ethyl]-acetamid in Form einer gelben Flüssigkeit.
IR-Spektrum CH₂Cl₂:
3621; 3429; 3352; 2944; 2803; 1657; 1513; 1460; 1284; 1050; 1011 und 816 cm^–1.
2-(Acetylamino)-3-(4-methyl-piperazin-1-yl)-propansäuremethylester
Zu einer unter inerter Atmosphäre gerührten Lösung von 8,57 g 2-Acetamidoacrylsäure-methylester in 500 cm³ Dichlormethan gibt man 6,65 cm³ N-Methylpiperazin und danach 0,97 g Eisen(III)chlorid und rührt das Ganze 66 Stunden lang bei einer Temperatur von etwa 20 °C. Anschließend gießt man 300 cm³ einer wäßrigen Lösung von Natriumsulfat in die Reaktionsmischung, die dann kräftig gerührt und über Celite filtriert wird. Nach dem Dekantieren wird die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und dann unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 40 °C bis zur Trockne konzentriert, um eine Flüssigkeit von orangener Farbe zu ergeben. Die wäßrige Phase wird dreimal mit 150 cm³ Dichlormethan extrahiert und alle organischen Extrakte vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet und anschließend unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 20 °C konzentriert, um ein gelbes Öl zu ergeben. Die zwei Zwischenprodukte, die aus den zwei organischen Phasen stammen, werden vereinigt und durch Chromatographie unter einem Druck von Argon von 50 kPa über eine Kolonne mit Kieselgel (Granulometrie 40–63 μm; Durchmesser 5 cm; Höhe 25 cm) gereinigt, indem man mit aufeinanderfolgenden Mischungen von Dichlormethan/Methanol/Ammoniak (20 %) (99/1/0, 97/3/0, 90/10/0,25, 80/20/0,25 Vol.) eluiert. Die das erwartete Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und anschließend unter reduziertem Druck (2 kPa) bei einer Temperatur von etwa 30 °C konzentriert. Man erhält auf diese Weise 3,3 g 2-(Acetylamino)-3-(4-methyl-piperazin-1-yl)-propansäuremethylester in Form einer gelben Flüssigkeit.
IR-Spektrum CCl₄:
3437; 3318; 2941; 2798; 1749; 1685; 1499; 1458; 1374; 1286; 1204; 1168 und 1014 cm^–1.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen gemäß der Erfindung bestehen aus einer Verbindung der Formel (I) oder einem Isomer oder einem Tautomer oder einem Salz einer derartigen Verbindung, in reinem Zustand oder in Form einer Zusammensetzung, in der sie mit jedem anderen pharmazeutisch akzeptablen Produkt, das inert oder physiologische aktiv sein kann, assoziiert ist. Die Arzneimittel gemäß der Erfindung können auf oralem, parenteralem, rektalem oder topischem Wege angewendet werden.
Als feste Zusammensetzungen für die orale Verabreichung können Tabletten, Pillen, Pulver (Gelatinekapseln, Briefchen) oder Granulate verwendet werden. In diesen Zusammensetzungen wird der Wirkstoff gemäß der Erfindung unter einem Strom von Argon mit einem oder mehreren inerten Verdünnungsmitteln vermischt, wie Stärke, Cellulose, Saccharose, Lactose oder Kieselerde. Diese Zusammensetzungen können ebenfalls andere Substanzen als die Verdünnungsmittel enthalten, beispielsweise ein oder mehrere Gleitmittel wie Magnesiumstearat oder Talk, einen Farbstoff, eine Umhüllung (Dragees) oder einen Lack.
Als flüssige Zusammensetzungen für die orale Verabreichung kann man pharmazeutisch akzeptable Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Sirups und Elixiere verwenden, die inerte Verdünnungsmittel wie Wasser, Ethanol, Glycerin, Pflanzenöle oder Paraffinöl enthalten. Diese Zusammensetzungen können auch andere Substanzen als diese Verdünnungsmittel enthalten, beispielsweise Netzmittel, Süßstoffe, Verdickungsmittel, Aromastoffe oder Stabilisatoren.
Die sterilen Zusammensetzungen für die parenterale Verabreichung können vorzugsweise als wäßrige Lösungen oder nichtwäßrige Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Als Lösungsmittel oder Trägerstoff kann man Wasser, Propylenglycol, ein Polyethylenglycol, Pflanzenöle, insbesondere Olivenöl, injizierbare organische Ester, beispielsweise Ethyloleat, oder andere geeignete organische Lösungsmittel verwenden. Diese Zusammensetzungen können ebenfalls Zusatzstoffe enthalten, insbesondere Netzmittel, isotonische Mittel, Emulgatoren, Dispersionsmittel und Stabilisatoren. Die Sterilisation kann auf verschiedene Art und Weise erfolgen, beispielsweise durch aseptische Filtration, durch Einbringen von sterilisierenden Mitteln in die Zusammensetzung, durch Bestrahlung oder durch Erhitzen. Sie können ebenfalls in Form von festen sterilen Zusammensetzungen hergestellt werden, die im Augenblick ihrer Anwendung in sterilem Wasser oder in jedem anderen sterilen injizierbaren Medium aufgelöst werden können.
Die Zusammensetzungen für die rektale Verabreichung sind Suppositorien oder Rektalkapseln, die außer dem Wirkstoff auch Füllstoffe wie Kakaobutter, halbsynthetische Glyceride oder Polyethylenglycole enthalten.
Die Zusammensetzungen für die topische Verabreichung können beispielsweise Cremes, Lotionen, Augentropfen, Mundwässer, Nasentropfen oder Aerosole sein.
In der Humantherapeutik sind die Verbindungen gemäß der Erfindung insbesondere nützlich bei der Behandlung und/oder Vorbeugung von Plaque-Sklerose, fokaler oder globaler cerebraler Ischämie, cerebralen oder spinalen Traumata, Parkinson-Krankheit, Huntington-Krankheit, Alzheimer-Krankheit, amyotrophischer Lateralsklerose, Migräne, Depression, Schizophrenie, Angstzuständen, Epilepsie, Diabetes, Atherosklerose, Myokarditis, Arthritis, Arthrose, Asthma, Reizdarm-Syndrom, Crohn-Krankheit, Peritonitis, Gastro-Oesophagus-Rückfluß, Uveitis, Syndrom nach Guillain-Barre, Glomerulo-Nephritis, erythematösem Lupus, Psoriasis, Wachstum von gewissen Tumorformen, wie beispielsweise bei Epitheliomen, Adenokarzinomen oder Sarkomen, und von Infektionen durch intrazelluläre oder extrazelluläre Bakterien, gram-positiv oder gram-negativ.
Die Dosierungen richten sich nach der gewünschten Wirkung, der Dauer der Behandlung und dem angewendeten Weg der Verabreichung.
Sie betragen im allgemeinen zwischen 1 mg und 100 mg pro Tag auf oralem Weg beim Erwachsenen, mit Einheitsdosen, die von 0,5 mg bis 50 mg Wirkstoff reichen.
Im allgemeinen wird der Arzt die geeignete Dosierung in Abhängigkeit von Alter, Gewicht und anderen individuellen Faktoren des zu behandelnden Patienten festlegen.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen Zusammensetzungen gemäß der Erfindung.
BEISPIEL A

Man stellt nach üblicher Technik Kapseln mit 50 mg Wirkstoff und der folgenden Zusammensetzung her:

– Verbindung der Formel (I)	50 mg
– Cellulose	18 mg
– Lactose	55 mg
– kolloidale Kieselerde	1 mg
– Natrium-Carboxymethylstärke	10 mg
– Talk	10 mg
– Magnesiumstearat	1 mg

BEISPIEL B
Man stellt nach üblicher Technik Tabletten mit 50 mg Wirkstoff und der folgenden Zusammensetzung her:

– Verbindung der Formel (I) 50 mg

– Lactose 104 mg

– Cellulose 40 mg

– Polyvidon 10 mg

– Natrium-Carboxymethylstärke 22 mg

– Talk 10 mg

– Magnesiumstearat 2 mg

– kolloidale Kieselerde 2 mg

– Mischung von Hydroxymethylcellulose, Glycerin, Titanoxid (72–3, 5–24,5) zu 1 Filmtablette von 245 mg
BEISPIEL C

Man stellt eine Injektionslösung mit 10 mg Wirkstoff und der folgenden Zusammensetzung her:

– Verbindung der Formel (I)	10 mg
– Benzoesäure	80 mg
– Benzylalkohol	0,06 ml
– Natriumbenzoat	80 mg
– Ethanol 95%	0,4 ml
– Natriumhydroxid	24 mg
– Propylenglycol	1,6 ml
– Wasser	zu 4 ml

Claims

Verbindungen der Formel (I)
in der entweder Y ein Methylen (CH₂) ist und X ausgewählt wird unter den folgenden Gruppen: O, NH, N-Alkyl(C1-C4), N-Bn, N-Ph, N-(2-Py), N-(3-Py), N-(4-Py), N-2-pyrimidyl, N-S-pyrimidyl, S, SO, SO₂, CH₂ oder CHPh; oder Y ein Carbonyl (C=O) ist und X ausgewählt wird unter den folgenden Gruppen: NH, N-Ph, N-(2-Py), N-(3-Py), N-(4-Py), N-2-pyrimidyl oder N-5-pyrimidyl, mit der Maßgabe, daß die Reste Alkyl(C1-C4) 1 bis 4 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette umfassen und die Abkürzungen Bn, Py, Ph jeweils Benzyl, Pyridyl, Phenyl kennzeichnen, sowie ihre Racemate, Enantiomeren, Diastereoisomeren und ihre Mischungen, ihre Tautomeren und ihre pharmazeutisch akzeptablen Salze.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie ausgewählt wird unter: 4-(Morpholin-4-ylmethyl)-4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylamin 4-(Piperazin-1-ylmethyl)-4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylamin 4-(4-Methyl-piperazin-1-ylmethyl)-4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylamin sowie ihre Racemate, Enantiomeren, Diastereoisomeren und ihre Mischungen, ihre Tautomeren und ihre pharmazeutisch akzeptablen Salze.
Verbindung nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie ausgewählt wird unter: 4-(4-Methyl-piperazin-1-ylmethyl)-4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylamin, ihren Racematen, ihren Enantiomeren, Tautomeren sowie ihren pharmazeutisch akzeptablen Salzen.
Verbindung nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3, verwendet zur Herstellung eines Arzneimittels.
Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie in einem pharmazeutisch akzeptablen Medium eine Verbindung, wie in irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, umfaßt.
Arzneimittel nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß es mindestens eine Verbindung, wie in irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, enthält für seine therapeutische Anwendung bei der Behandlung von Erkrankungen, bei denen eine anormale Produktion von Stickstoffmonoxid (NO) durch Induktion von induktibler NO-Synthase (NOS-2) einbezogen ist.
Arzneimittel nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß es mindestens eine Verbindung, wie in irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, enthält für seine therapeutische Anwendung bei der Behandlung der Parkinson-Erkrankung.
Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) wie in Anspruch 1 definiert, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Derivat der Formel (II)
cyclisiert, in der X und Y die gleichen Bedeutungen besitzen wie in Anspruch 1.
Verfahren zur Herstellung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Cyclisierung im sauren Medium bei einer Temperatur von etwa 100 °C erfolgt.
Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß das saure Medium vorzugsweise 6 N Chlorwasserstoffsäure ist.
Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (II) wie in Anspruch 8 definiert und worin X und Y die gleiche Bedeutung besitzen wie in Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindungen der Formel (IIa)
worin Ra eine Schutzgruppe für die Aminformation ist und Rb einen Rest Alkyl(1-4C) oder Alkoxycarbonyl darstellt, der Einwirkung eines Reduktionsmittels unterzieht, um die Verbindung der Formel (IIb)
zu erhalten, die man der Einwirkung eines Mittels zur Abspaltung der Schutzgruppe unterzieht, um eine Verbindung der Formel (IIc)
zu erhalten, die man der Einwirkung von tert.-Butylisothiocyanat unterzieht, um eine Verbindung der Formel (II)
zu erhalten.
Als Zwischenprodukte die Verbindungen der Formeln (II), (IIa), (IIb), (IIc) wie in Anspruch 11 definiert, mit Ausnahme der folgenden Produkte: N-[2-Hydroxy-1-(4-phenyl-piperazin-1-ylmethyl)-ethyl]-thiobenzamid Methyl-2-(N-CBZ-amino)-3-morpholino-propionat Boc-DL-β-4-morpholinyl-alanin-methylester Methyl-2-acetamido-3-piperidino-propanoat Methyl-2-acetamido-3-morpholino-propanoat Ethyl-2-(N-benzyl-amino)-3-piperidino-propanoat Ethyl-2-(N-benzyl-amino)-3-morpholino-propanoat
Als Zwischenprodukte N-(tert.-Butyl)-N'-[2-hydroxy-1-(4-methyl-piperazin-1-ylmethyl)-ethyl]-thioharnstoff; N-[2-Hydroxy-1-(4-methyl-piperazin-1-ylmethyl)-ethyl]-acetamid; 2-(Acetylamino)-3-(4-methyl-piperazin-1-yl)-propansäuremethylester.