DE69106549T2

DE69106549T2 - Thrombin-Zusammensetzung zur oralen Verabreichung.

Info

Publication number: DE69106549T2
Application number: DE69106549T
Authority: DE
Inventors: Seishichi Hata; Yasuyuki Kunihiro; Ryo Tanaka; Koji Yamada
Original assignee: Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1990-03-01
Filing date: 1991-03-01
Publication date: 1995-06-22
Anticipated expiration: 2011-03-02
Also published as: US5149540A; JPH03255035A; CA2037325A1; EP0444692A1; AU643753B2; ES2069761T3; DK0444692T3; ATE116858T1; DE69106549D1; AU7199291A; JPH0813750B2; EP0444692B1

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf eine für die orale Verabreichung formulierte stabile Thrombinzusammensetzung, welche für die Behandlung von Hämorrhagie im oberen Magen-Darm-Kanal verwendet wird, selbst bei Raumtemperatur während einer langen Zeitdauer stabil ist, ausgezeichnete Löslichkeit besitzt und auf einfacher Art oral verabreicht werden kann.
Thrombin ist ein Blutkoagulationsfaktor, welcher gut bekannt ist und direkt auf Fibrinogen unter Umwandlung dieses in Fibrin in den Endstufen der Blutkoagulation wirkt. Wenn Fibrinogen in dem Blut vorhanden ist, wird an der Hämorrhagie-Stelle vorhandenes Blut rasch koaguliert, wobei das Ende eines verletzten Blutgefäßes ein Koagulum bildet. Die Blutklumpenmasse zieht sich in Anwesenheit von Thrombozyten zusammen, so daß das Ende des Blutgefäßes verschlossen wird, und die Blutung vollständig aufhört.
Thrombin wird hergestellt, indem Thromboplastin mit Prothrombin, welches aus menschlichem Blut oder Rinderblut hergestellt worden ist, in Anwesenheit von Calciumionen kombiniert wird. Eine Thrombinzusammensetzung ist bis jetzt hergestellt worden, indem eine Phiole mit einer Lösung der Zusammensetzung gefüllt wurde und gefriergetrocknet wurde.
Herkömmliche Thrombinzusammensetzungen sollen unterhalb von 10ºC gelagert werden, weil Lagerung bei Raumtemperatur zu einer Verringerung der physiologischen Aktivität führt (The Pharmacopeia of JAPAN, 11. Auflage). Wenn diese Zusammensetzung verwendet wird, wird sie im allgemeinen verabreicht, indem eine Lösung der Zusammensetzung in isotonische Natriumchloridlösung (50 bis 1000 Thrombineinheiten pro Milliliter) gesprüht wird, oder indem der Inhalt der Phiole entnommen wird und das Pulver auf den Blutungsbereich gestreut wird (die "Einheit" ist gemäß NIH definiert).
Wenn die Zusammensetzung für die Behandlung der Blutung in dem oberen Magen-Darm-Kanal verwendet wird, wird die Zusammensetzung in einer geeigneten Pufferlösung in 200 bis 400 Thrombineinheiten pro Milliliter gelöst, und die sich ergebende Lösung wird oral verabreicht.
Wenn jedoch, wie zuvor angegeben, die Thrombinzusammensetzung für die Behandlung des oberen Magen-Darm-Kanals verwendet wird, wird sie mehrere Male pro Tag in Abständen von einigen Stunden verabeicht. Deshalb ist es wünschenswert, eine Zusammensetzung zu entwickeln, welche von den Patienten selbst in einfacher Weise oral verabreicht werden kann.
Zu diesem Zwecke ist es notwendig, eine Zusammensetzung zu entwickeln, in der Thrombin selbst dann stabil ist, wenn es bei Raumtemperatur gelagert wird, selbst wenn die Zusammensetzung nicht in einem verschlossenen Behälter, wie beispielsweise einer Phiole enthalten ist.
Daneben werden die meisten Phiolenpräparationen für die Injektion verwendet, und es besteht die Gefahr, daß die in einer Phiole hergestellte Thrombinzusammensetzung durch eine Unaufmerksamkeit in medizinischen Einrichtungen injiziert werden könnte. Um diese Gefahr zu vermeiden, wurden solche Vorsichtsmaßnahmen, wie beispielsweise Kennzeichnen der Phiole mit einer bestimmten Etikette, getroffen. Wenn jedoch keine Phiole verwendet würde, wäre diese besondere Vorsichtsmaßnahme unnötig. Darüber hinaus bestehen bei der Thrombinzusammensetzung in einer Phiole insofern Probleme, als daß es unbequem für den Patienten ist, die Phiole zu tragen, und ihre Handhabung kompliziert ist, weil die Phiole unterhalb von 10ºC gelagert werden sollte.
Thrombinzusammensetzungen für die Behandlung von Hämorrhagie im Magen- Darm-Kanal, welche orale Verabreichung auf einfache Weise erlauben, sind als Stand der Technik in den offengelegten japanischen Patentanmeldungen mit den Nummern Hei 1-93536 und Hei 1-121224 offenbart. Die zuert genannte Zusammensetzung ist durch Zubereitungen charakterisiert, die mit erst im Darm löslichen Überzügen versehen sind, und die zuletzt genannte ist dadurch charakterisiert, daß sie eine alkalische Substanz enthält, wodurch die Inaktivierung von Thrombin im Magen verhindert wird. Im Hinblick auf die Stabilität der Thrombinzusammensetzungen während der Lagerung offenbaren diese Entgegenhaltungen jedoch Stabilität an einem kalten Platz nur während einer Dauer von 21 Tagen, aber sie offenbaren nicht die Stabilität unter Raumtemperaturbedingungen.
DE-A-38 09 991 bezieht sich auf die Vermeidung des Thrombinaktivitätsverlustes einer wäsrigen Thrombinlösung, um in der Lösung enthaltene Viren zu inaktivieren. Als Mittel zur Verhinderung des Aktivitätsverlusts sind Zucker und Zuckeralkohole, beispielsweise Saccharose und D-Mannit genannt.
Im Unterschied zur Offenbarung der DE-A-38 09 991 ist die feste Thrombinzusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung, welche für die Behandlung von Hämorrhagie im oberen Magen-Darm-Kanal verwendet werden kann, während einer Dauer von mindestens drei Jahren bei Raumtemperatur stabil.
EP-A- 0 204 045 offenbart ein Tablettierungsverfahren zum Herstellen von Rinderthombin, umfassend Mischen von 10.000 Einheiten Rinderthrombin mit einem Puffer, physiologischer Kochsalzlösung, einem antimikrobiellen Stabilisierungsmittel und etwa 0,5 g bis etwa 3,0 g Rinderserumalbumin unter Bildung eines generischen Reagenses, welches lyophilisiert wird, Trockenmischen des lyophilisierten Reagenses mit einem Bindemittel wie beispielsweise Sucrose oder Mannit, und einem Gleitmittel unter Bildung einer Mischung, welche zu verdichten, granulieren und tablettieren ist.
Demgemäß ist es Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine stabile Thrombinzusammensetzung für die orale Verabreichung zur Verfügung zu stellen, welche sich für die Behandlung von Hämorrhagie im oberen Magen-Darm- Kanal eignet, ausgezeichnete Löslichkeit besitzt oral auf einfache Weise verabreicht werden kann und selbst bei Raumtemperaturbedingungen stabil ist.
Diese Aufgabe wird durch zur Verfügungstellung einer hämostatischen festen Zusammensetzung nach Anspruch 1 gelöst.
Als Ergebnis umfangreicher Untersuchungen haben die Erfinder festgestellt, daß durch Verwenden von Thrombin als hämostatischer Bestandteil in Verbindung mit einem bestimmten pharmazeutisch geeigneten Stabilisator und Träger eine stabile Thrombinzusammensetzung für die orale Verabreichung hergestellt werden kann, welche ausgezeichnete Löslichkeit besitzt, oral auf einfache Weise verabreicht werden kann und selbst unter Raumtemperaturbedingungen während einer langen Zeitdauer stabil ist. Die vorliegende Erfindung löst diese Aufgaben durch zur Verfügungstellung einer stabilen Thrombinzusammensetzung für die orale Verabreichung, welche Thrombin als hämostatischen Bestandteil und einen bestimmten pharmazeutisch geeigneten Stabilisator und Träger umfaßt, welcher ausgezeichnete Löslichkeit besitzt.
Bei der vorliegenden Erfindung kann jedes Thrombin mit physiologischer Aktivität verwendet werden. Im allgemeinen kann Thrombin verwendet werden, welches durch Verbinden von Kalziumsalzen und Thromboplastin mit Prothrombin, welches aus Rinderplasma oder aus menschlichem Plasma extrahiert oder gereinigt wurde, hergestellt worden ist. Daneben kann Thrombin auch in Form von gefriergetrockneten Pulvern oder in einer hochkonzentrierten Lösung verwendet werden.
Herkömmliche Thrombinzusammensetzungen sind in Phiolen hergestellt worden, aber diese Zusammensetzungen weisen die vorhergehenden Probleme auf, besonders wenn sie für die orale Verabreichung verwendet werden.
Um diese Probleme zu lösen, können die Thrombinzusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung in Form von beispielsweise Pulvern, feinem Granulat, Granalien und Tabletten, wünschenswerterweise Pulvern, feinem Granulat oder Granalien vorliegen.
Die Thrombinzusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung für die orale Verabreichung wird mit bestimmten pharmazeutisch geeigneten Stabilisatoren und Trägern hergestellt. Stabilisatoren, welche bei der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, sind Gelatine, Albumin, Glyzin, vorzugsweise Gelatine oder Glyzin. Es gibt keine besondere Beschränkung im Hinblick auf die bei der vorliegenden Erfindung zu verwendende Gelatine, solange wie sie durch Behandeln von Knochen, Häuten, Ligamenten oder Sehnen vom Tier mit einer Säure oder einem Alkali, Extrahieren des sich ergebenden Kollagens mit Wasser während des Erhitzens, Trocknen des Extraktes bei vermindertem Druck und Trocknen des sich ergebenden Gels hergestellt wird. Die Menge an Stabilisator beträgt 5 bis 100 mg, vorzugsweise 10 bis 50 mg, pro 10.000 Einheiten Thrombin.
Träger, welche verwendet werden, sind Sucrose oder D-Mannit, vorzugsweise Sucrose.
Die Gründe dafür, daß Sucrose oder Zuckeralkohol als Träger verwendet wird, sind folgende. Zuerst wird in dem Fall, daß Zusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung hergestellt werden, wenn die Trocknungsstufe Erhitzen während einer langen Zeitdauer umfaßt, die Aktivität des Thrombins herabgesetzt. Somit ist ein Träger, bei dem Trocknen während einer langen Zeitdauer nicht erforderlich ist, nötig. Wenn der Träger gemäß der vorliegenden Erfindung verwendet wird, kann die Granulierung mit einem geringen Feuchtigkeitsgehalt durchgeführt werden, so daß die Trocknungszeit verkürzt ist.
Der zweite Grund liegt darin, einen Träger mit ausgezeichneter Wasserlöslichkeit und welcher frei von Niederschlägen ist, zur Verfügung zu stellen. Das bedeutet, daß die vorliegende Zusammensetzung bei Verwendung für die Behandlung einer Hämorrhagie im oberen Magen-Darm-Kanal in einem geeigneten Lösungsmittel wie beispielsweise Pufferlösung, Milch, isotonischer Natriumchloridlösung oder destilliertem Wasser gelöst wird, und daß die Lösung für die Behandlung verwendet wird. Wenn in diesem Fall etwas Substanz nicht gelöst wird, sondern als Niederschlag verbleibt, wird der physiologisch aktive Bestandteil auf der unlöslichen Substanz adsorbiert, so daß ausreichende pharmazeutische Wirkungen nicht erwartet werden können, oder die physikalische Unordnung selbst nach Verabreichung der Zusammensetzung verbleibt.
Die Menge an Sucrose oder D-Mannit, welche hier als Träger verwendet wird, beträgt 0,1 bis 2 g, vorzugsweise 0,5 bis 1 g, pro 10.000 Einheiten Thrombin.
Wenn die vorliegende Zusammensetzung für die Behandlung einer Hämorrhagie im oberen Magen-Darm-Kanal verwendet wird, wird die Zusammensetzung in einem geeigneten Lösungsmittel, wie zuvor beschrieben, beispielsweise Pufferlösung, Milch, isotonischer Natriumchloridlösung oder destilliertem Wasser gelöst, und die Lösung wird in einer Konzentration von 50 bis 1000 Einheiten Thrombin pro ml verabreicht. In diesem Fall kann erforderlichenfalls und gewünschtenfalls auch ein Antazidum in Kombination verwendet werden.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann die Thrombinaktivität während einer langen Zeitdauer selbst bei Raumtemperatur beibehalten und besitzt ausgezeichnete Stabilität. Wenn die vorliegende Zusammensetzung in einem geeigneten Lösungsmittel wie beispielsweise Pufferlösung, Milch, isotonischer Natriumchloridlösung oder destilliertem Wasser gelöst wird, wird die Zusammensetzung innerhalb einer Minute gelöst, und es wird kein Niederschlag beobachtet. Darüberhinaus verringert sich die Thrombinaktivität in der Lösung nicht innerhalb von 24 Stunden.
Im nachfolgenden ist die Zusammensetzung im einzelnen unter Bezugnahme auf Testbeispiele beschrieben, und die Testergebnisse der vorliegenden Erfindung sind im nachfolgenden beschrieben.

Testbeispiel 1

Experiment in Bezug auf die Stabilisatorwirkung

Etwa 1 g der Zusammensetzung, welche im nachfolgend beschriebenen Beispiel 1 oder Vergleichsbeispiel 1 hergestellt wird, wird in einen verschlossenen Behälter gebracht. Man läßt den Behälter unter strengen Bedingungen bei 60ºC während einer Zeitdauer von 7 Tagen bis 2 Monaten stehen. Während dieser Zeitdauer wird die Abnahme der Thrombinaktivität jeder Zusammensetzung bestimmt, um die Stabilität des Thrombins in Anwesenheit oder Abwesenheit des Stabilisators zu vergleichen.
Die Thrombinaktivität wird mit Hilfe eines modifizierten Verfahrens von The Pharmacopeia of JAPAN, 11. Auflage, bestimmt. Der Wert der Thrombinaktivität vor Stehenlassen der Zusammensetzung beträgt 100 und der Wert der Thrombinaktivität wird bestimmt, nachdem man die Zusammensetzung während einer festgelegten Zeitdauer hat stehenlassen.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 dargestellt. Tabelle 1 Getestete Zusammensetzung Dauer Beispiel Vergleichsbeispiel Tage Monat Monate
Die numerischen Werte zeigen die Thrombinaktivität nach dem Stehenlassen, wenn die Thrombinaktivität vor dem Stehenlassen 100 beträgt.
Wie aus Tabelle 1 ersichtlich ist, zeigt die Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung einen bemerkenswerten Stabilisierungseffekt durch Zugabe des Stabilisators bei der vorliegenden Erfindung, selbst wenn sie bei hoher Temperatur gelagert wird.

Testbeispiel 2

Experiment bezüglich der Stabilität bei Lagerung während einer langen Zeitdauer

Etwa 1 g der Zusammensetzung, welche in dem später beschriebenen Beispiel 2 hergestellt wird, wird in einen Beutel gefüllt, welcher aus einer Lage zusammengesetzt ist, die durch Laminieren einer Aluminiumfolie mit Cellophan und Kunststoff hergestellt worden ist, und der Beutel wird unter Erhitzen verschlossen. Der Beutel wird unter den Bedingungen von 40ºC (± 1ºC), relativer Feuchtigkeit von 75% (± 5%) und unter Raumtemperaturbedingungen 1 bis 6 Monate basierend auf den von Drug approval and licensing Procedures in JAPAN herausgegebenen Acceleration Test Standards gelagert. Während dieser Zeitdauer wird die Thrombinaktivität der Zusammensetzung bestimmt.
Die Bestimmung der Thrombinaktivität wird wie im Testbeispiel 1 durchgeführt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Tabelle 2 Dauer Getestete Zusammensetzung Bedingungen für die Lagerung Monat Monate Beispiel Raumtemperatur
Die numerischen Werte zeigen die Thrombinaktivität nach dem Stehenlassen, wenn die Thrombinaktivität vor dem Stehenlassen 100 beträgt.
Wie aus Tabelle 2 ersichtlich ist, ist die Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung selbst unter den Bedingungen von 40ºC (± 1ºC) und relativer Feuchtigkeit von 75% (± 5%) während 6 Monaten stabil. Die Zusammensetzung besitzt ausgezeichnete Stabilität, und aufgrund der vorhergehenden Ergebnisse kann angenommen werden, daß sie mindestens 3 Jahre bei Raumtemperatur stabil ist.

Testbeispiel 3

Löslichkeit der Zusammensetzung und Stabilität in einem Lösungszustand

Etwa 1 g der im nachfolgend beschriebenen Beispiel 2 hergestellten Zusammensetzung wird jeweils in einen Becher von 100 ml gefüllt, und es werden jeweils 50 ml destilliertes Wasser, isotonische Natriumchloridlösung, Phosphatpufferlösung bzw. Milch hinzugegeben. Während milden Rührens werden die Zeitdauer für die Auflösung (d.h. die Zeitdauer, bis das Vorhandensein von Pulver am Boden des Bechers nicht bemerkt wird) und die Eigenschaften der sich ergebenden Lösung beobachtet.
Darüber hinaus läßt man diese Lösungen bei Raumtemperatur stehen, und es wird die Thrombinaktivität in jeder Lösung bis zu 24 Stunden gemessen.
Die Bestimmung der Thrombinaktivität wird wie im Testbeispiel 1 durchgeführt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 dargestellt. Tabelle 3 Lösungsmittel Zeit für die Auflösung und Eigenschaften der Lösung Stunden danach Destilliertes Wasser Isotonische Natriumchloridlösung Phosphatpufferlösung Milch Die Zusammensetzung war innerhalb einer Minute gelöst; es wurde kein Niederschlag beobachtet.
Die numerischen Werte zeigen die Thrombinaktivität nach dem Stehenlassen, wenn die Thrombinaktivität vor dem Stehenlassen 100 beträgt.
Wie aus Tabelle 3 ersichtlich ist, ist die Löslichkeit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung äußerst hoch, und es werden keine unlöslichen Niederschläge bemerkt. Die erfindungsgemäße Zusammensetzung ist in Bezug auf orale Verabreichung ausgezeichnet. Zusätzlich ist die Thrombinaktivität in den Lösungen, in denen die Zusammensetzung gelöst ist, während langer Zeitperioden stabil, und die Zusammensetzung ist geeignet.

[Beispiele]

Als nächstes wird die vorliegende Erfindung unter Bezugnahme auf die Beispiele und Vergleichsbeispiele beschrieben.
In den Beispielen wird eine durch Kombination von Kalziumsalz und Thromboplastin mit Prothrombin, welches aus Rinderserum extrahiert und gereinigt worden ist, hergestellte Thrombinlösung mit einer spezifischen Aktivität von 1000 Einheiten/mg Protein in einer Konzentration von 10.000 Einheiten/ml hergestellt und verwendet.

Beispiel 1

Thrombin 20.000.000 Einheiten
Glyzin 30 g
Gelatine 20 g
Sucrose entsprechende Menge
Insgesamt 1000 g
Glycin wird zu einer Thrombinlösung hinzugegeben und gelöst. Durch Gefriertrocknen wird ein Pulver erhalten. Sucrose wird zu dem sich ergebenden Pulver hinzugefügt. Die Mischung wird gemischt und gerührt. Unter Mischen und Rühren wird eine Lösung von Gelatine in destilliertem Wasser auf die Mischung unter Erhalt von Granalien gesprüht. Nach dem Trocknen mit einem Trockner unter Erhitzen werden die Granalien unter Erhalt von feinem Granulat gesiebt.

Beispiel 2

Thrombin 20.000.000 Einheiten
D-Mannit 30 g
Gelatine 20 g
Sucrose entsprechende Menge
Insgesamt 1000 g
D-Mannit wird zu einer Thrombinlösung gegeben und gelöst. Durch Gefriertrocknen wird ein Pulver erhalten. Sucrose wird zu dem sich ergebenden Pulver gegeben. Die Mischung wird gemischt und gerührt. Unter Mischen und Rühren wird eine Lösung von Gelatine in destilliertem Wasser auf die Mischung unter Erhalt von Granalien gesprüht. Nach dem Trocknen mit einem Trockner unter Erhitzen werden die Granalien unter Erhalt von feinem Granulat gesiebt.

Vergleichsbeispiel 1

Thrombin 20.000.000 Einheiten
Sucrose entsprechende Menge
Insgesamt 1000 g
Eine Thrombinlösung wird unter Erhalt eines Pulvers gefriergetrocknet. Sucrose wird zu dem sich ergebenden Pulver gegeben. Die Mischung wird gemischt und gerührt. Unter Mischen und Rühren wird destilliertes Wasser auf die Mischung unter Erhalt von Granulat gesprüht. Nach dem Trocknen mit einem Trockner unter Erhitzen werden die Granalien unter Erhalt von feinem Granulat gesiebt.

Claims

1. Eine hämostatische feste Zusammensetzung, umfassend: eine hämostatisch wirksame Menge Thrombin, 5 bis 100 mg mindestens einer Komponente als Stabilisator aus der Gruppe aus Gelatine, Albumin und Glyzin pro 10.000 Einheiten Thrombin und 0,1 bis 2 g mindestens einer Komponente als Träger aus der Gruppe aus Sucrose und D-Mannit pro 10.000 Einheiten Thrombin.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Menge des Stabilisators 10 bis 50 mg pro 10.000 Einheiten Thrombin beträgt, und die Menge des Trägers 0,5 bis 1 g pro 10.000 Einheiten Thrombin beträgt.

3. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, wobei der Stabilisator Gelatine ist, und der Träger Sucrose ist.

4. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Zusammensetzung in Form von Granalien, feinem Granulat oder Pulvern vorliegt.

5. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Zusammensetzung eine geeignete Form für die orale Verabreichung darstellt.

6. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Zusammensetzung 1 bis 6 Monate bei Raumtemperatur und relativer Feuchtigkeit von 70 bis 80% stabil ist.

7. Verfahren zum Herstellen einer hämostatischen festen Zusammensetzung, umfassend Kombinieren einer hämostatisch wirksamen Menge Thrombin als aktiven Bestandteil mit 5 bis 100 mg mindestens einer Komponente als Stabilisator aus der Gruppe aus Gelatine, Albumin und Glyzin pro 10.000 Einheiten Thrombin und mit 0,1 bis 2 g mindestens einer Komponente als Träger aus der Gruppe aus Sucrose und D-Mannit pro 10.000 Einheiten Thrombin.

8. Stabile hämostatische feste Zusammensetzung für die Verwendung als Medikament umfassend: eine hämostatisch wirksame Menge Thrombin, 5 bis 100 mg mindestens einer Komponente als Stabilisator aus der Gruppe aus Gelatine, Albumin und Glyzin pro 10.000 Einheiten Thrombin und 0,1 bis 2 g mindestens einer Komponente als Träger aus der Gruppe aus Sucrose und D- Mannit pro 10.000 Einheiten Thrombin.

9. Verwendung einer Zusammensetzung nach den Ansprüchen 1 bis 6 für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von Hämorrhagie.

10. Verwendung einer Zusammensetzung nach Anspruch 9, wobei die Hämorrhagie im oberen Magen-Darm-Kanal vorliegt.

11. Verwendung einer Zusammensetzung nach Anspruch 9 oder 10, wobei die Zusammensetzung oral verabreicht wird.