NO852655L - Fremgangsmaate ved fremstilling av koaguleringsreagens for blodplasma i mikrokonsentrert tablettform. - Google Patents

Description

Som det fremgår av US patentskrift nr. 3 997 470, har det vært kjent å forme reagenser for analyse av biologiske prøver som tabletter. Oppfinnerne kjenner imidlertid ikke til noen tidligere kjente tabletter, særlig mikrokonsentrerte

tabletter, som inneholder koaguleringsreagenser for blodplasma.

Videre er fremgangsmåten som er beskrevet i det ovenfor nevnte US patentskrift en våtgranuleringsmetode som krever et bestemt overflateaktivt middel og en tørkeperiode for å drive av oppløsningsmiddelet som tablettens bestanddeler er oppløst i. Derfor krever fremgangsmåten ifølge US patentskrift nr. 3 997 470 nok et tidkrevende trinn som øker produk-sjonskostnadene, og som kan gjøre det nødvendig med varmetil-førsel.

Dessuten er størrelsen på blandingen eller partiet begrenset til den mengde blanding som kan tørkes i en enkel frysetørkerperiode. Typisk industripraksis begrenser størrelsen på en blanding eller et parti til det antall ampuller som kan oppbevares og lukkes innenfor kapasiteten til frysetørkeren som brukes.

Tidligere kjente fremgangsmåter for fremstilling av koaguleringsreagenser for blodplasma har typisk omfattet sam-menblanding til et preparat inkludert et fyllstoff, oppdeling av preparatet i aliquoter i ampuller, frysetørking av aliquotene i ampullene og forsegling av de frysetørkede aliquotene i ampullene. I et forsøk på å opprettholde ensartethet i blandingen har tiden til utmåling av aliquotene, påfylling av ampullene og forsegling av ampullene vært gjort så liten som mulig. Det er imidlertid ikke uvanlig å miste 10-15% eller mer av blandingen på grunn av uensartethet mellom ampullene som et resultat av uensartetheten i frysetørkeren under fryse-tørkingsprosessen .

Ett formål ved foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av tabletter av koaguleringsreagenser for blodplasma hvor størrelsen på blandingen ikke er begrenset av preparatmengden som kan frysetørkes.

Det er videre et formål å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av mikrokonsentrerte koaguleringsreagenser for blodplasma i tablettform som ikke krever bruken av et oppløsningsmiddel eller varme som kan være skadelig for koagu-ler ing sreagens ene .

Det er nok et ytterligere formål å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av tabletter av mikrokonsentrerte koaguleringsreagenser for blodplasma som er enkel og økonomisk.

Nok et annet formål er å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av tabletter av koaguleringsreagenser for blodplasma i mikrokonsentrert tablettform ved å belegge én bestanddel som er i granulær form, med en annen bestanddel.

Det er et annet formål ved foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe frysetørkede koaguleringsreagenser for blodplasma i mikrokonsentrert tablettform som er billige, og som har en lang lagringstid og er lettvinte i bruk.

Det er nok et annet formål å fremstille koaguleringsreagenser for blodplasma i mikrokonsentrert tablettform uten tap av virkningsegenskaper og/eller yteevne sammenlignet med frysetørkede ampuller med samme materialer.

Andre formål og fordeler vil fremgå nedenunder.

De ovenfor nevnte formål oppnås ved å fremstille

tabletter av frysetørkede, mikrokonsentrerte koaguleringsreagenser for blodplasma ved en fremgangsmåte for fremstilling av tabletter hvor de aktive koaguleringsreagenser for blodplasma frysetørkes og blandes med formgivende bestanddeler for tabletter eller sprøytes på partikler av frysetørket buffer. To eller flere partier av den frysetørkede reagensmasse tørr-blandes til en større produksjonsblanding før komprimering, granulering og forming til tabletter.

Foreliggende oppfinnelse er rettet på reagenser for bruk i - koagulas j onsprøver for blodplasma som utføres enten for medisinske diagnoseformål eller for overvåking av visse behandlinger med antikoagulerende legemiddel. Nærmere bestemt omfatter reagensene trombin, tromboplastin, cefalin og fire kontrollplasmaer. De fire kontrollplasmaer omfatter et normalt plasma, to unormale plasmaer og et plasma tilsatt heparin.

Fremgangsmåten vil først bli beskrevet med hensyn til utforming og produksjon av tabletter med bovint trombin. Andre typer trombin som f.eks. mennesketrombin, kan erstatte det bovine trombin.

Den beskrevne fremgangsmåte gir omtrent 1 000 tabletter hvor hver tablett har ca. 8 til 10 U.S.P. (United States Phar-macopeia) enheter bovint trombin. Det er åpenbart at antallet enheter pr. tablett og størrelsen på blandingen kan varieres uten at man fjerner seg fra det vesentlige ved oppfinnelsen. Den anvendte konsentrasjon på 8 til 10 U.S.P.-enheter trombin er valgt ettersom dette er den mengde som brukes ved tidsprøver for trombin i mange laboratorier og som resulterer i en trombintid på ca. 15 sekunder til ca. 18 sekunder i normalt, friskt plasma. Andre konsentrasjoner av trombin med andre resultater for trombintid kan brukes uten at man fjerner seg fra det vesentlige ved oppfinnelsen.

For letthets skyld kan bovintrombinet erverves i en ampulle med 1 0 000 U.S.P.-enheter. Det bovine trombin kan imidlertid skaffes tilveie i andre konsentrasjoner som f.eks. 100 000 U.S.P.-enheter pr. ampulle, og fortynnes. Alternativt kan bovint helblod skaffes tilveie og trombinet ekstraheres fra helblodet. Det bovine trombin har et pH-område på fra 6,5 til 8,5.

Det aktive reagens, bovint trombin, blandes med en buffer, en saltoppløsning, et antimikrobielt preserveringsmiddel og bovint serumalbumin til et ikke-spesifikt reagens som fryse-tørkes.

En foretrukket buffer er HEPES (N-2-hydroxyethyl-piperazin-N<1->2-ethansulfonsyre) som har en pH på ca. 8,0. Det er foretrukket å bruke en molarkonsentrasjon på 0,025M. Konsentrasjonen kan imidlertid variere fra mellom ca. 0,01M, hvor bufferen mister sin virkning, til ca. 0,6M, hvor bufferen begynner å virke inn på tidsprøven for trombin. pH i HEPES bør være ca. 6,2 til ca. 8,5. Andre buffere som kan brukes omfatter imidazol, tris-/tris-(hydroxymethy 1)-amino-methan/, glycin og andre buffere i 8,0-området.

Saltoppløsningen er en 0,85% natriumkloridoppløs-ning. Selv om konsentrasjonen i oppløsningen kan varieres, er det foretrukket å bruke 0,85%.

Det foretrukkede antimikrobielle preserveringsmiddel er thimerosal (natriumethylkvikksølv (II) thiosalicyat). Andre preserveringsmidler som f.eks. natriumazid kan imidlertid brukes. Det er foretrukket å bruke en 0,02% oppløsning av thimerosal. Konsentrasjonen kan imidlertid variere mellom ca. 0,01% og ca. 0,3%. Under 0,01% mister thimerosal sin virkning og over 0,3% er det ingen tilleggsvirkning.

Det bovine serumalbumin (BSA) reduserer trombinets tendens til å feste seg til ikke-siliciumtilsatt glass under trombinprøven, og det hjelper også til å stabilisere reagenset. Konsentrasjonen av BSA kan variere mellom ca. 0,005% og ca. 3,0%. Det er imidlertid foretrukket å bruke en konsentrasjon på 0,01%.

En oppløsning av bufferen, saltoppløsningen, preserveringsmiddelet og BSA dannes ved fortrinnsvis å blande én liter av HEPES, én liter av saltoppløsningen, 200 mg av thimerosal og ett gram av BSA. Mengden av buffer og saltoppløsning kan variere mellom ca. 500 ml og ca. to liter. Mengden av thimerosal kan varieres mellom ca. 100 mg og ca. 400 mg, og mengden av BSA kan varieres mellom ca. 0,5 g og ca. 3,0 g.

Denne oppløsning reguleres til en pH på ca. 8,0 ved tilsetning av 5N natriumhydroxyd. Deretter tilsettes 10 000 enheter av det bovine trombin til oppløsningen.

Oppløsningen frysetørkes deretter i løs masse. Opp-løsningen tørkes til et maksimalt fuktighetsinnhold på ikke mer enn ca. 1,0% til ca. 3,0%. Det frysetørkede reagens tørr-blandes med et bindemiddel og smøremiddel hvorved det dannes en blanding som skal komprimeres, granuleres og formes til tabletter. Smøremiddelet kan imidlertid tilsettes etter at det frysetørkede reagens og bindemiddelet er granulert.

Det foretrukkede bindemiddel er Di-Pac<®>. Di-Pac® fremstilles av ca. 97% sucrose og ca. 3,0% maltodextrin. Andre bindemidler som f.eks. sucrose, maltose, mannitol og lactose, kan imidlertid brukes. Dessuten kan andre sukkere, akasie, gelatin, povidon, methylcellulose, carboxymethylcellulose og hydrolyserte stivelsespastaer brukes sammen med det bovine trombin og andre koaguleringsreagenser.

Det foretrukkede smøremiddel er L-leucin. Andre smøremidler som kan brukes omfatter polyethylenglycol (PEG), magnesiumstearat og talkum, samt andre metallstearater, stearin-syre og hydrogenerte vegetabilske oljer.

Fortrinnsvis tørrblandes 20,0 vekt% av det fryse-tørkede reagens, 70,0% av bindemiddelet og 10,0% av smøremid-delet. Mengdene av disse bestanddeler kan imidlertid varieres fra ca. 7,0 til ca. 38,0% av det frysetørkede reagens, ca. 20,0 til ca. 90,0% av bindemiddelet og ca. 3,0 til ca. 12,0% av smøremiddelet. Helst foreligger det frysetørkede reagens i en mengde fra ca. 9,0 til ca. 35,0%, bindemiddelet i en mengde fra ca. 60,0 til ca. 80,0% og smøremiddelet i en mengde av ca. 5,0 til ca. 11,0%.

Den tørre blanding testes ved å sende et antall 25 mg store prøver av den tørre blanding gjennom en tidsprøve for trombin. Dersom prøvene gir et resultat som er mindre enn 15 sekunder, kan ytterligere Di-Pac ® tilsettes for a o fortynne blandingen og forlenge prøvetiden. Dersom resultatene av prø-vene er mer enn 18 sekunder, tilsettes ytterligere frysetørket reagens, som var holdt tilbake, til den tørre blanding for å nedsette prøvetiden. Prøvetiden kan også korrigeres ved å regulere størrelsen på prøven og derved mengden av tørr blanding i hver tablett. Det er imidlertid ønskelig å holde tab-lettstørrelsen mellom ca. 20 mg og ca. 35 mg. Nok en tidsprøve for trombin kan gjøres for å verifisere at reguleringen har bragt tidsperioden innenfor det ønskede område.

Etterat to eller flere av de tørre blandinger er blitt fremstilt og testet, kombineres de til en endelig produksj onsblanding. Produksjonsblandingen er selvsagt større enn den mengde preparat som kan frysetørkes i en satsvis fryse-tørker. Fordelen med en slik større produksj onsblanding og tablettene som erholdes fra denne blanding, er at reagenset kan brukes av et større antall laboratorier og derved lette sammenligninger mellom laboratoriene for å kontrollere kvali-teten.

De tørre blandinger har en lav løsmassedensitet og er ikke lett flytbare. Den tørre produksjonsblanding komprimeres derfor for å øke løsmassedensiteten. Den komprimerte blanding granuleres for å gjøre den flytbar og gjøre innholdet av små partikler minst mulig. Granulatene siktes for å regulere størrelsen på partiklene som brukes i fremgangsmåten for fremstilling av tabletter. Partiklene med for stor størrelse kan videre males opp og de små partikler kan på nytt komprimeres og på nytt granuleres.

Før tablettfremstiIlingen fra det granulerte materiale, tas det ut en prøve og nok en tidsprøve for trombin gjennomføres for å verifisere vektmengden av materiale som bør brukes pr. tablett. Om nødvendig reguleres størrelsen på tabletten slik at det fås et resultat mellom 15 og 18 sekunder som tidligere beskrevet.

Aktiviteten til oppløsningen av bovintrombin kan reguleres før frysetørking ved å teste aktiviteten i oppløs-ningen i en tidsprøve for trombin. Det er imidlertid funnet at aktiviteten kan reguleres på adekvat måte etter frysetør-king som tidligere beskrevet.

Mens den foretrukkede fremgangsmåte er blitt beskrevet, vil fjerning av visse bestanddeler som f.eks. saltoppløs-ningen, preserveringsmiddelet og BSA, gi en tilfredsstillende mikrokonsentrert tablett. Fraværet av slike bestanddeler kan imidlertid påvirke ikke-rekondisjonert stabilitet på lang sikt og rekondisjonert stabilitet på kort sikt.

Det neste reagens som skal omtales er tromboplastin. Tromboplastin er et fosfolipidekstrakt fra slike organer som kaninhjerne, menneskehjerne, apehjerne, kaninlunge, kveghjerne og oksehjerne. Tromboplastinet kan ekstraheres ved hjelp av den hurtigmetode som er kjent innen teknikken. En oppløsning av tromboplastinekstraktet dannes ved å oppløse omtrent 40,0 g av fosfolipidkildematerialet i 1 1 saltoppløsning. Fortrinnsvis er saltoppløsningen 0,5% natriumklorid. Konsentrasjonen av saltoppløsningen kan være fra ca. 0,25 til ca. 0,85%. Aktiviteten av fosfolipidekstraktet bestemmes ved å gjennomføre en protrombintidsprøve (PT-test) som er vel kjent innen teknikken. Resultatene bør være ca. 10 sekunder til ca. 13 sekunder med friskt, normalt plasma tilsatt citrat.

Det frysetørkede reagens dannes ved å blande fosfolipidekstraktet med en buffer, preserveringsmiddel og aktive-ringsmidler. Den foretrukkede buffer er 0,05M imidazol med en pH på ca. 7,35. Andre buffere som f.eks. tris, barbitol og andre buffere i pH 7,0-området kan brukes.

Det foretrukkede preserveringsmiddel er thimerosal i konsentrasjoner omtalt med tanke på bovintrombinet. Andre preserveringsmidler omfatter neomycinsulfat, natriumazid og fenol, eller andre som er kjent for å inhibere mikrobiell vekst.

Aktiveringsmidlene omfatter 0,0125M calciumklorid og manganklorid, magnesiumklorid eller andre som inneholder divalent metall. Konsentrasjonen av calciumkloridet kan variere mellom ca. 0,01M og 0,02M. Den foretrukkede konsentrasjon av divalent metall er 0,01M, men kan variere mellom ca. 0,005M og 0,02M.

En liter av hver av bufferen, calciumkloridet, det divalente metall og preserveringsmiddelet blandes og tilsettes til én liter av ekstraktet. En prøve av oppløsningen tas og en PT-test kjøres. Oppløsningen reguleres for å oppnå et PT-testresultat som ligger mellom ca. 10 sekunder og ca. 13 sekunder med friskt, normalt plasma tilsatt citrat.

Deretter frysetørkes reagensoppløsningen. Det fryse-tørkede reagens tørrblandes så med et bindemiddel og et smøre-middel.

Det foretrukkede bindemiddel er maltodextrin som f.eks. "AMAIZO LO-DEX 5". Andre bindemidler som f.eks. Di-Pac (B) , mannitol eller andre bindemidler omtalt naOr det gjelder bovint trombin kan brukes.

Et foretrukket smøremiddel er PEG. Andre smøremidler som imidlertid kan brukes, omfatter magnesiumstearat, L-leucin, glycin og siliciumoxyd som f.eks. Cab-O-Sil .

Fortrinnsvis tilsettes 3,0 vekt% av maltodextrinet og 3,0 vekt% av PEG til det frysetørkede reagens. Mengden av maltodextrin kan variere fra ca. 1,0 til ca. 10,0 vekt% og mengden PEG kan variere fra ca. 1,0 til 12,0 vekt%.

Dersom det brukes andre bindemidler, kan det være nødvendig å regulere den tilsatte mengde. Det kan være ønskelig å tilsette et desintegrasjonsmiddel som f.eks. stivelse, cellulose eller skummende blandinger.

Som ved det bovine trombinreagens, testes den tørre blanding, reguleres om nødvendig for å gi den korrekte test-resultattid og blandes deretter med andre tørre blandinger til en endelig produksjonsblanding som komprimeres, granuleres og formes til tabletter.

For å fremstille det aktiverte reagens for partiell tromboplastintid (APTT), kan cefalin ekstraheres fra kanin-h j erne ved hjelp av fremgangsmåten til Bell og Alton som er vel kjent. Ti gram av cefalinet blandes med én liter av en oppløsning av 0,85% natriumklorid og 0,02% thimerosal. Cefalinet og salt/preserveringsmiddel-oppløsningen homogeniseres i ett minutt. Konsentrasjonen av saltet og thimerosalet kan varieres og andre preserveringsmidler kan brukes som omtalt tidligere.

Det fremstilles en 0, 2M buffer (pH ca. 7,5) med 0,02% thimerosal og 0,85% natriumklorid. Den foretrukkede buffer er tris.

Det fremstilles en 10,0% maltodextrinoppløsning som inneholder desinfisert siliciumoxyd. Den foretrukkede maltodextrin er "AMAIZO LO-DSX 15". Konsentrasjonen av maltodextrinet kan variere fra mellom ca. 3,0% til ca. 20,0%. Konsentrasjonen av den desinfiserte siliciumoxyd bør være mellom ca. 8,0 g pr. 1 og ca. 16,0 g pr. 1. Den foretrukkede partikkelstørrelse til den desinfiserte siliciumoxyd er en størrelse som ikke er større enn 0,012 yum. Silicumoxyd i andre former og partikkel-størrelser kan likeledes brukes.

Cefalinoppløsningen blandes med bufferoppløsningen i et forhold på ca. 50 ml cefalinoppløsning til 950 ml av bufferoppløsningen. Blandingen omrøres i én time og det tas ut en prøve for å gjøre en PTT-test. Resultatet av PTT-testen bør være mellom ca. 60 sekunder og ca. 85 sekunder med friskt normalt plasma tilsatt citrat. Oppløsningen reguleres i nød-vendig grad for å gi den ønskede testtid.

Maltodextrinoppløsningen tilsettes så i forholdet ca. 500 ml cefalin/bufferoppløsning til 400 ml maltodextrin-oppløsning. Denne blanding omrøres i én time for å aktivere cefalinet. En APTT-test gjøres så for å bestemme aktiviteten til reagenset. Selv om forholdstallene ovenfor er foretrukket, kan de varieres. Deretter frysetørkes oppløsningen.

Det frysetørkede reagens tørrblandes med et smøre-middel. Fortrinnsvis er smøremiddelet 10,0 vekt% L-leucin. Mengden av L-leucinet kan varieres fra mellom ca. 1,0 til ca. 12,0 vekt%. Den tørre blanding kombineres deretter med én eller flere andre blandinger til en endelig produksjonsblan ding. En prøve av produksjonsblandingen testes for å bestemme mengden som skal brukes pr. tablett for å oppnå den korrekte testtid som er beskrevet tidligere.

Etterat tørrblandingen er komprimert og granulert, testes den på nytt for å bestemme den korrekte mengde som skal brukes pr. tablett. Deretter fremstilles det tabletter av den tørre blanding.

Det kan tilsettes opp til ca. 15,0 vekt% desintegra-sjonsmidler til de tidligere beskrevne trombin-, tromboplastin-og cef a 1 inreagenspreparater. Desintegras j onsmidlene som kan brukes omfatter cellulose, stivelse og skummende blandinger.

Koaguleringsreagenset for kontroll av normal plasma fremstilles ved sentrifugering og fjerning av plasmaet fra friskt normalt helblod tappet i citrat-fosfat-dextrose-adenin (CPDA-1). Forholdet mellom CPDA-1 og helblod er 63 ml CPDA-1 pr. 100 ml helblod, noe som er tidligere kjent. Ti ml HEPES tilsettes pr. 100 ml sentrifugert plasma. HEPES er fortrinnsvis 0,02M (pH 7,4) som inneholder 0,85% salt og 0,02% thimerosal. Det ble gjort tre prøver for å bestemme om plasmaet er akseptabelt. PT-testen bør, som tidligere beskrevet, gi en tid på ca. 10,0 sekunder til ca. 13,0 sekunder. APTT-testen bør, som tidligere beskrevet, gi en tid på ca. 28,0 sekunder til ca. 38,0 sekunder. Prøven på trombin-levringstid (TCT) bør, som tidligere beskrevet, gi en tid på ca. 15,0 til ca. 18,0 sekunder.

Kontrollene for unormal plasma fremstilles ved å adsorbere ut visse levringsfaktorer fra normal plasma med aluminiumhydroxyd eller bariumsulfat og sentrifugere plasmaet på kjent måte. Prøvetiden for kontrollen av unormal plasma på nivå I bør være ca. 16,0 til ca. 20,0 sekunder for PT-prøven, og ca. 55,0 til ca. 70,0 sekunder for APTT-prøven. Kontrollen for unormal plasma på nivå II bør gi ca. 26,0 til ca. 32,0 sekunder for PT-prøven, og ca. 80,0 til ca. 105,0 sekunder for APTT-prøven.

Heparin-kontrollplasmaet fremstilles ved å tilsette heparin til normalt plasma. Det tilsettes ca. 0,01 til ca. 0,5 heparinenheter pr. ml plasma for å fremstille heparin-kontrollplasmaet .

Etterat kontrollplasmaene er blitt fremstilt som omtalt ovenfor, frysetørkes de. Hvert frysetørket plasma tørr-blandes med et bindemiddel, et smøremiddel og et desintegrasjonsmiddel.

Det foretrukkede bindemiddel er en blanding av Di-Pac og sucrose eller trehalose. De relative forholdsmengder er ca. 10,0 vekt% Di-Pac<®>og ca. 2,0 vekt% sucrose eller trehalose. Mengden av Di-Pac<®>kan varieres fra ca. 5,0 til ca. 50,0%. Mengden av sucrose eller trehalose kan varieres fra ca. 0,5 til ca. 20,0%. Sucrosen eller trehalosen tilsettes fortrinnsvis til det på forhånd frysetørkede plasmapreparat. Andre bindemidler som kan brukes omfatter andre sukkere som f.eks. sucrose.

Det foretrukkede smøremiddel er PEG i en mengde av ca. 5,0 vekt%. Mengden av smøremiddel kan varieres mellom ca. 1,0 og ca. 15,0%. Andre smøremidler som kan brukes omfatter L-leucin, magnesiumstearat og glycin, så vel som andre kjente smøremidler. Dersom magnesiumstearat brukes, er det foretrukket å bruke mindre enn 1,0 vekt%.

Det kan tilsettes opp til ca. 5,0 vekt% desintegrasjonsmiddel til den tørre blanding. Desintegras j onsmidlene som kan brukes omfatter cellulosene og stivelsene, og skummende blandinger.

Som tidligere omtalt, kombineres deretter den tørre

tablettblanding med én eller flere andre tørre blandinger for å fremstille en endelig produksjonsblanding som komprimeres og granuleres. Det granulerte materiale testes for å bestemme den riktige tablettstørrelse, og det fremstilles tabletter.

Den ovenfor beskrevne fremgangsmåte kan modifiseres ved å sprøyte en oppløsning av frysetørket reagens og bindemiddel på partikler av bufferen. Selv om det kan være mulig å modifisere hver av de ovenfor beskrevne fremgangsmåter, vil bare fremstillingen av tromboplastintablettene bli beskrevet. En liter av den tidligere beskrevne imidazolbuffer frysetørkes. Dersom det divalente metall skal tas med i tabletten, tilsettes det til bufferoppløsningen før frysetørking i den konsentrasjon og de mengder som tidligere er angitt.

Omtrent 40 g av tromboplastinfosfolipidet oppløses i én liter 0,85% saltoppløsning. Ca. 2,0 vekt% av bindemiddelet, fortrinnsvis trehalose, tilsettes til tromboplastin/salt-opp-løsningen. Denne oppløsning sprøytes så på partikler av buffer og tørkes ved ca. 10°C under et høyvakuum på minst 30^um Hg i 24 timer.

Konsentrasjonen av trehalosen kan varieres mellom ca. 0,5 og ca. 10,0%. Buf f ermengden kan varieres mellom ca. 1,0% og ca. 10,0 vekt% som tidligere omtalt.

Etterat de sprøytede partikler er tørket, komprimeres de på nytt og granuleres på nytt. De tidligere angitte smøre-midler kan tørrblandes med de tørre, sprøytede partikler. Det er imidlertid foretrukket å tilsette ca. 3,0 vekt% PEG eller annet smøremiddel etter regranuleringen og før fremstillingen av tabletter.

Alternativt kan fremgangsmåten modifiseres ved å sprøyte bufferoppløsningen på partiklene av det frysetørkede reagens og bindemiddel. Tablettene fremstilt ved hjelp av de tidligere beskrevne fremgangsmåter har en vesentlig langsiktig ikke-rekonstituert stabilitet og kortsiktig rekonstituert stabilitet. Tablettene er lettvinte å bruke og håndtere. Lagring gjøres lettere på grunn av at tablettene er små. De oppløses lett, er lette å bruke og gir enhetlige resultater.

Fremstillingen av koaguleringsreagenser i tablettform reduserer pakningskostnadene. Tidligere ble koaguleringsreagenser frysetørket i ampuller som inneholdt små mengder av reagensene. Ikke bare er kostbarheten ved ampullene blitt eliminert, men mengden av hver reagensproduksjonsblanding er blitt økt, noe som ytterligere reduserer kostnadene.

Claims (41)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av mikrokonsentrerte koaguleringsreagenser for blodplasma i tablettform, karakterisert ved at det fremstilles en oppløsning som inneholder et aktivt koaguleringsreagens, opp-løsningen frysetørkes for å danne et frysetørket reagens, det tilsettes en buffer, et bindemiddel og et smøremiddel, det aktive reagens, bufferen og bindemiddelet komprimeres, det komprimerte materiale granuleres og det formes tabletter av det granulerte materiale.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at bindemiddelet tørr-blandes med det frysetørkede reagens før komprimeringen.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at bindemiddelet tilsettes til reagensoppløsningen før frysetørkingen.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det tilsettes et desintegrasjonsmiddel valgt fra gruppen bestående av cellulose, stivelse og skummende blandinger i en mengde som ikke er større enn ca. 15,0%.

5. Fremgangsmåte ifølge krav 1 , karakterisert ved at minst to tørre blandinger tørrblandes til en produksj onsblanding før komprimeringstrinnet.

6. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at koaguleringsreagenset er trombin, og at det tilsettes en saltoppløsning, et preserveringsmiddel eller bovint serumalbumin til det aktive reagens før frysetørkingen.

7. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det aktive reagens er trombin og at bufferen er HEPES-buffer med en pH som er på ca. 6,2 til 8,5.

8. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det aktive reagens er trombin og at bindemiddelet er valgt fra gruppen bestående av ca. 97,0% sucrose og ca. 3,0 maltodextrin, sucrose, maltose, mannitol og lactose, og at bindemiddelet tørrblandes med det frysetørkede aktive reagens før komprimeringen.

9. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det aktive reagens er trombin valgt fra gruppen bestående av bovint trombin og mennesketrombin med en pH på ca. 6,5 til ca. 8,5, at bufferen er HEPES med en pH på ca. 6,2 til ca. 8,5 og i en konsentrasjon på ca. 0,01M til 0,6M, at det tilsettes en saltoppløsning av ca. 0,85%, thimerosal i en konsentrasjon på ca. 0,02% og bovint serumalbumin i en konsentrasjon på ca. 0,01% til det aktive reagens før frysetørkingen, at bindemiddelet er ca. 97,0% sucrose og ca. 3,0% maltodextrin og tørrblandes med det fryse-tørkede reagens i en mengde på ca. 20,0 til ca. 90,0 vekt%, og at smøremiddelet er L-leucin i en mengde på ca. 1,0 til ca. 12,0 vekt%.

10. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det aktive reagens er et tromboplastin og at calciumklorid tilsettes til det aktive reagens før frysetørkingen.

11. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at et divalent metall tilsettes før komprimeringen.

12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, karakterisert ved at det divalente ion velges fra gruppen bestående av magnesium og mangan.

13. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at bindemiddelet tilsettes til det aktive reagens før frysetørkingen.

14. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at bindemiddelet tørrblandes med det frysetørkede aktive reagens.

15. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at bufferen velges fra gruppen bestående av imidazol, tris og barbitol.

16. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at det tilsettes et preserveringsmiddel til det aktive reagens før frysetørkingen.

17. Fremgangsmåte ifølge krav 16, karakterisert ved at preserveringsmiddelet velges fra gruppen bestående av thimerosal, neomycinsulfat, natriumazid og fenol.

18. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at bindemiddelet velges fra gruppen bestående av maltodextrin, mannitol og en blanding av ca. 97,0% sucrose og ca. 3,0% maltodextrin.

19. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at smøremiddelet velges fra gruppen bestående av polyethylenglycol, magnesiumstearat, L-leucin, glycin og siliciumoxyd.

20. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at bufferen er imidazol, at det tilsettes et divalent metall valgt fra gruppen bestående av magnesium og mangan, at preserveringsmiddelet er thimerosal, at det tilsettes ca. 1,0 til ca. 10,0% maltodextrin-bindemiddel til det aktive reagens før frysetørkingen, og at ca. 1,0 til ca. 12,0% polyethylenglycol-smøremiddel tørrblandes med det frysetørkede aktive reagens.

21 . Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det aktive reagens er cefalin og at en bindemiddeloppløsning som inneholder en akti-vator, blandes med reagensoppløsningen før frysetørkingen.

22. Fremgangsmåte ifølge krav 21, karakterisert ved at aktivatoren foreligger i partikkelform.

23. Fremgangsmåte ifølge krav 22, karakterisert ved at aktivatoren er desinfisert siliciumoxyd.

24. Fremgangsmåte ifølge krav 23, karakterisert ved at det desinfiserte siliciumoxyd har en størrelse som ikke er større enn 0,012^ um.

25. Fremgangsmåte ifølge krav 21, karakterisert ved at cefalinet blandes med en saltoppløsning som inneholder et preserveringsmiddel før frysetørkingen.

26. Fremgangsmåte ifølge krav 25, karakterisert ved at preserveringsmiddelet er thimerosal.

27. Fremgangsmåte ifølge krav 21, karakterisert ved at bufferen er tris og bindemiddeloppløsningen er en maltodextrinoppløsning.

28. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det aktive reagens er en plasmakontroll valgt fra gruppen bestående av friskt normalt plasma tappet i CPDA-1, en unormal kontroll som har mindre enn den normale mengde levringsfaktorer, og plasma tilsatt heparin.

29. Fremgangsmåte ifølge krav 28, karakterisert ved at bindemiddelet er en blanding av et sukker valgt fra gruppen bestående av trehalose og sucrose, og en blanding av ca. 97,0% sucrose og ca. 3,0% maltodextrin.

30. Fremgangsmåte ifølge krav 29, karakterisert ved at sukkeret foreligger i en mengde på ca. 0,5 til ca. 20,0 vekt% og at blandingen av sucrose og maltodextrin foreligger i en mengde av ca. 5,0 til ca. 50,0 vekt%.

31. Fremgangsmåte ifølge krav 29, karakterisert ved at sukkeret tilsettes til det aktive reagens før frysetørkingen og at blandingen av sucrose og maltodextrin tørrblandes med det frysetørkede aktive reagens.

32. Fremgangsmåte ifølge krav 28, karakterisert ved at smøremiddelet tørrblandes med det frysetørkede aktive reagens i en mengde på ca. 1,0 til ca. 15,0 vekt%.

33. Fremgangsmåte ifølge krav 28, karakterisert ved at smøremiddelet velges fra gruppen bestående av L-leucin, polyethylenglycol og glycin.

34. Fremgangsmåte ifølge krav 28, karakterisert ved at smøremiddelet ikke er mer enn ca. 1 vekt% magnesiumstearat.

35. Fremgangsmåte ifølge krav 28, karakterisert ved at opp til ca. 5,0 vekt% desintegrasjonsmiddel tørrblandes med det frysetørkede aktive reagens.

36. Fremgangsmåte ifølge krav 28, karakterisert ved at et sukker valgt fra gruppen bestående trehalose og sucrose i en mengde på ca. 0,5 til 20,0 vekt% tilsettes til det aktive reagens før frysetør-kingen, at et bindemiddel av ca. 97,0% sucrose og ca. 3,0% maltodextrin tørrblandes med det frysetørkede aktive reagens i en mengde fra ca. 5,0 til ca. 50,0 vekt%, og at det som smøremiddel anvendes polyethylenglycol som tørrblandes med det frysetørkede aktive reagens i en mengde på ca. 1,0 til ca. 15,0 vekt%.

37. Fremgangsmåte ifølge krav 36, karakterisert ved at opp til ca. 5 vekt% av et desintegras j onsmiddel tørrblandes med det frysetørkede aktive reagens.

38. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at bindemiddelet tilsettes til oppløsningen av det aktive reagens før frysetørkingen, bufferen frysetørkes, komprimeres og granuleres, og oppløsningen av aktiv reagens og bindemiddel sprøytes på den granulerte buffer før komprimeringstrinnet.

39. Fremgangsmåte ifølge krav 38, karakterisert ved at smøremiddelet tilsettes etter granuleringstrinnet og før fremstillingen av tabletter.

40. Fremgangsmåte ifølge krav 38, karakterisert ved at det som aktivt reagens anvendes tromboplastinfosfolipid som er oppløst i en calcium-kloridoppløsning, at det som bindemiddel anvendes trehalose i en mengde på ca. 1,0 til ca. 10,0 vekt%, at det tilsettes et divalent metall valgt fra gruppen bestående av magnesium og mangan til bufferen før frysetørkingen, at det som buffer anvendes imidazol med en pH på ca. 7,35, og at det som smøre-middel anvendes polyethylenglycol i en mengde på ca. 1,0 til ca. 12,0 vekt%.

41. Koaguleringsreagens for blodplasma i mikrokonsentrert tablettform, karakterisert ved at det omfatter et aktivt reagens valgt fra gruppen bestående av trombin, tromboplastin, celafin, friskt normalt plasma tappet i CPDA -1, unormalt plasma med mindre enn den normale mengde levringsfaktorer og plasma tilsatt heparin, en buffer valgt fra gruppen bestående av HEPES, imidazol, tris, glyein og barbitol, et bindemiddel og et smøremiddel.