DE2500653A1

DE2500653A1 - Verfahren zur messung des plasminogengehaltes durch bestimmung der bildung von fibrin in einer probe

Info

Publication number: DE2500653A1
Application number: DE19752500653
Authority: DE
Inventors: Eckart Dr Med Jacobi
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1975-01-09
Filing date: 1975-01-09
Publication date: 1976-07-15

Description

"Verfahren zur Messung des Piasminogengehaltes durch Bestimmung der Bildung von Fibrin in einer Probe" 1. Zusatz zu Patent . ... ... (Påtentanmeldung P 24 31 342.6) Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Messen des Plasminogengehaltes durch die Bestimmung der Bildung von Fibrin in einer Probe, bei dem antiplasminfreies, bzw. bis auf die Unwirksamkeit des Antiplasmin verdütBltes Plasma einem Plasminogen-Reagenz, das Fibrin und als Plasminaktivator Streptokinase enthält, zugesetzt und der Lösung anschließend Thrombin zugefügt wird, worauf die durch das Plasmin verzögerte Bildung von Fibrin durch die Bestimmung des Zeitpunktes seiner Verfestigung gemessen und durch Vergleich des normalen Verfesti.gtlnD*szeitpunktes der Plasminogengehalt bestimmt wird, nach Patent ...
(Patentanmeldung P 24 31 342.6).
Das Verfahren, den Plasminogengehalt von Patientenblut durch Bestimmung der Bildung von Fibrin in einer Probe zu messen, wobei die Bildung des Fibrins in einer Lösung von Fibrinogen und Antiplasminfreies, plasminaktivierten Probenplasma unter Beifügung von Thrombin verzögert und der Plasm:tiengehalt durch die Bestimmung der Verzögerung des Geriirnungszeitpunktes festgelegt wird, hat den wesentlichen Vorteil, daß es gegenüber bekannten Verfahren eine wesentliche Verkürzung der Meßzeit gestattet und sich daher für Routinezwecke eignet. Insbesondere elgnet sich dieses auch billigere Verfahren für Tests in der klinischen Diagnostik zur routinemäßigen Plasminogenbestimmung.
Durch die Verwendung eines Plasminogen-Reagenzes der angegebenen Art kommt man verhältnismäßig schnell und genau zu dem gewünschten Meßergebnis und vermindert gleichzeitig die Streptokinasemenge, wras zu einer Einsparung von Kosten führt.
Vor der eigentlichen Messung müssen aber der noch nicht gelöste Fibrinogensatz und die Streptokinase in Lösung gebracht werden. Üblicherweise werden ähnliche Reagenzen lyophilisiert, damit vor der Messung das Reagenz durch Zufügen von Aqua dest. schnell und einfach in Lösung gebracht werden kann. Beim Plasminogen-Reagenz ergibt sich die Schwierigkeit, daßzu wenig Substanz im Reagenz ist; diese macht in der Regel nur 0,4 % aus. Das hat zur Folge, daß das Lyophilisat schrumpft und deshalb keine reproduzierbaren Meßergebnisse erzielt werden.
Man kann nun zur Lyophilisation des Plasminogen-Reagenzes zwecks Substanzvermehrung die Fibrinogenkonzentration verdoppeln und durch Zusatz von Zucker eine Stab,lisation erreichen. Ein solches Verfahren hat aber einen Hauptnachteil.Zur Lösung des Lycphilisats sind zwei Schritte erforderlich, weil nach der Lösung in Aqua dest. das Reagenz m Puffer weiter verdünnt werden muß.
Der Erfindung liegt demgegenüber die Aufgabe zugrunde, zur Verbesserung des Hauptpatentes ein Verfahren zur Lyophilisation des Plas:rinogen-Reagenzes zu schaffen, das nur einen Lösungsschritt erfordert.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß dem Plasminogen-Reagenz als Stabilisator Rinderalbumin vor der Lyophilisation zugesetzt wird.
Als Stabilisator des Plasminogen-Reagenzes wird vorzugsweise eine 1 % ige Rinderalbuminlösung verwendet. Dabei löst man das Rirderalbumin in Puffer, bevor darin Rinderfibrinogen und Otreptokinase gelöst werden. Anschliesend wird in üblicher Weise lyophilisiert.
Im einzelnen kann man dabei wie folgt Vorgehen: Um eine 1 Sorge Rinderalbuminlösung zu erhalten, wird z.B.
500 mg käufliches RinReralbumin in 50 ml Tris-Puffer pH 8,0 eingerührt. Anschließend wird damit eine 0,4 %ige Rinderfibrincgenlösung hergestellt und Streptokinase 2000 E/ml zugefügt. Diese Lösung wird z.B. zu je 2 ml in Gefäße abgefülit, tiefgefroren und mit einem käuflichen Lyophilisator lyophilisiert.
Die durch das erfindungsgemäße Verfahren erzielbaren Vorteile bestehen vor allem darin, daß das Reagenz nach Wiederauflösen mindestens 3 Stunden stabil bleibt, so daß genügend Zeit bleibt, exakt reproduzierbare Meßergebnisse zu erzielen.
Durch das erfindungsgemäße Verfahren wird auch nur ein Lösungsschritt zur Auflösung des Lyophilisates erforderlich, was eine wesentliche Arbeitserleichterung bedeutet.
Patentansprüche

Claims

Patentansprüche 1. Verfahren zum Messen des Blasminogengehaltes durch die Bestimmung der Bildung von Fibrin in einer Probe, bei dem antiplasminfreies bzw. bis auf die Unwirksamkeit des Antiplasmins verdünntes Plasma einem Plasminogen-Reagenz, das Rinderfibrinogen und als Plasminaktivator Streptokinase bereits enthält, zugesetzt und der Lösung anschließend Thrombin zugefügt wird, worauf die durch das Plasmin verzögerte Bildung von Fibrin durch die Bestimmung des Zeitpunktes seiner Verfestigung gemessen und durch Vergleich des normalen Verfestigungszeit-punktes der Plasminogengehalt bestimmt wird, nach Patent . ... ... Patentanmeldung P 24 31 342.6) , d a -d u r c h g e k e n z e i c h n e t , daß dem Plasminogen-Reagenz als Stabilisator Rinderalbumin vor der Lyophilisation zugesetzt wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1 , d a d u r c h g e -k e n n z e i c h n e t , daß als Stabilisator eine 1 ziege Rinderalbuminlösung verwendet wird.
3. Verfahren nach den Ansprüchen 1 und 2 , d a d u r ch g e k e n n z e i c h n e t , daß das Rinderalbumin in Puffer gelöst wird, bevor in dieserLösung Rinderfibrinogen und Streptokinase gelöst werden, worauf lyophilisiert wird.
4. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 3, d a -d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , daß 500 mg Rinderalbumin in 50 ml Tris-Puffer pH 8,0 eingerührt und anschließend damit eine 0,4 ziege Rinderfibrinogenlösung hergestellt und Streptokinase 2000 E/ml zugefügt wird, worauf die Lösung in Gefäße abgefüllt, tiefgefroren und lyophilisiert wird.