DE1517787A1

DE1517787A1 - Enzympraeparat und Verfahren zu seiner Herstellung

Info

Publication number: DE1517787A1
Application number: DE19661517787
Authority: DE
Inventors: Seizo Hisada; Hiroyuki Mima
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1965-12-06
Filing date: 1966-12-03
Publication date: 1970-01-29
Also published as: US3515642A; FR1503267A

Description

Köln, den «30,11.1966 Fu/Ax/et

Takada Chemical Industries, Ltd.

27, Doahomaohi 2-ohonv&, Hlgashi-ku, Osaka (Japan).

Bnzympräparat; und Verfahren asu seiner Herstellung

Die Erfindung bezieht sioh auf die Verwendung von Sorbit zur Stabili*i©3?ung von Enzymen und die hierbei erhaltenen stabilen festen Bnssympräparate, in denen da» !Enzym gemeinsam mit dem Sorbit vorliegt» ^

¹ '■ '■■(■■' ι

Zgthlreiche Enzymarten, z.B. ikjajlaie, ^roteasf_t Iiipase uflw«!_f werden in der Fahrungsmitttlindue^rie_t für pharmazeutlsohe' Zwecke und zum Kochen im Haushalt verwendet· Fast alle Enzympräparäte weiden als Pulver verwendet, da diese Enzyi» . gegenübei* Wasser, Wärme, Druck usw. sehr instabil sind. Auf der anderen Seite sind feste Enzympräparate, z.B. Tabletten, Granulat oder Pillen, insbesondere für den pharmazeutischen Gebrauch erwünscht, weil sie bequem sind 'in der Herstellung der Zubereitungen einschließlich des Auftrages von enteralen Überzügen, bei der Verabfolgung, .beim Versand und auch in Bezug auf Verhinderung der Unverträglichkeit mit anderen finbezogenen Medikamenten«

/Die Enzymaktivität -wird 3fdooh beim 'iablettieren, bei der Herstellung von Granulat und Pillen erheblich verringert. Beispielsweise wird die lazymaktivität von handelsublioh/ear

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ORIGINAL INSFtCTED

Diastase durch den Pressendruok von 2 t/em² beim direkten Tablettieren In allgemeinen auf 60 bi· 70Ji der ursprUng-Hohen Aktivität verringert.

I· wurde nun gefunden« daß die Verschlechterung der Anzymaktlvität beim Tablettleren» Granulieren oder bei der Her- »teilung von Pillen verhindert werden kann, wenn da· Bnzym gerneIneam mit Sorbit verwendet wird. Ferner wurde gefunden, dafl ein festes Enzympräparat, das das Bnzym zusammen mit Sorbit enthält, lange Zelt lagerbeständig 1st.

Die Erfindung betrifft demgemäß die Verwendung von Sorbit zur Stabilisierung von Enzymen, die hierbei erhaltenen stabilen festen Enzympräparate und die Herstellung dieser Enzympräparate ohne wesentliche* Vereohlechterung der Enzymaktlvltät unter Verwendung von Wasser als einzigem Lösungsmittel.

Oemäfl der Erfindung wird das in Bnzympräparaten enthaltene Enzym gegen die beim Tablettieren, Granulieren oder bei der Herstellung von Pillen auftretenden Einflüsse mit Hilfe von Sorbit stabilisiert, der mit dem Enzym kombiniert wird. Die Kombination von Sorbit mit dem Enzym kann beispielsweise duroh Auflösen oder Suspendieren des Enzyme In einer wäßrigen SorbitlÖsung und anschließende Pulverisierung der wäßrigen Lösung oder Suspension durch Gefriertrocknen, Zerstäubungstrocknen, Ausfällung mit Äthanol erfolgen. Das so erhaltene stabile Bnzympulver kann ohne wesentliche Verschlechterung der EnzymaktivltHt zu Tabletten, Granulat oder Pillen verarbeitet werden. Das stabile Enzympulver kann auch duroh Auflösen in Sorbit oder duroh Zusatz 4iner wäßrigen ösuag zu einer wäSrigen Bnsymlöeung und ansqhlie0ende Pulverlslqrung der wäßrigen Lösung oder Suspension hergestellt werden. Ferner 1st es möglich, das unbehandelte Bnzympulver mit einer wäßrigen Sorbitlösung zu kneten und die Masse anschließend zu tablettieren, zu granulieren oder zu Pil lea su verarbeiten. Bei diesen Verfahren kann die wäßrige Lösung außerdem ein mit Wasser misohb&res organisches

ORIGINAL INSPECTED

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Lösungsmittel, wie Methanol, Äthanol, Isopropanol und Butylalkohol, enthalten. Als wässrige Enzymlösung wird zweckmäßig die Enzymlösung gebraucht, die bei der abschließenden Reinigungsbehandlung bei der Herstellung des Enzyms erhalten wird.

Die Konzentration des Enzyms kann nach Belieben gewählt werden, jedoch ist es für die Gewinnung des Pulvers aus der Lösung zweokmäßig, mit der Sättigungskonzentration oder in deren Nähe zu arbeiten. Eine suspendierte Enzymlösung ist für die Zwecke der Erfindung ebenfalle verwendbar. Der Sorbit kann in einer Menge im* Bereich von 0,1 bis 50 Gew.-Jt dee Enzymgehaltes verwendet werden, wobei ein Bereich von 1 bis 10 Gew.-Jt am zweckmäßigsten ist. Als Enzyme, die gemäß der Erfindung stabilisiert werden können, kommen beispielsweise Aaylase, Protease, Lipase, Invertase, Papain, Trypsin, Pepsin und Pancreatin infrage.

Die erfindungsgemäßen festen Enzympräparate können in üblicher Welse zu Tabletten, Granulat oder Pillen verarbeitet werden. Natürlich können unschädliche Streckmittel, wie Calciumphoephat, Lactose und Dextrin, verwendet werden. Ferner können die so hergestellten Snzympräparate mit üblichen überzügen versehen werden.

Das erfindungsgemäße feste Enzympräparat hat Im wesentlichen die gleiche Enzymaktivität wie das eingesetzte Enzympulver ; oder die eingesetzte Enzymlösung und bewahrt diese Enzymaktivität für lange Zeit.

In den folgenden Beispielen sind die Temperaturen unkorrigiert, und die Mengenangaben beziehen sich auf das Gewicht.

Beispiel 1

1. JEr.zym: " >

Im Handel erhältliches Enzympräparat ("Biotamilase strong" ..'orenzeiclien der Nagase ft Co., Ltd., Japan), bestehend •n;s 1 Teil kristallinem Enzym (Gemisch von Amylase und

Protease) und 8 Teilen Calciumphosrhat. 909085/1308 "

2. Gepreßte Tabletten» Vergleiohsprodukt» Eine wässrige Löaung von 20 Gewichteteilen Enzym in 25 Volumteilen Wasser wird durch Gefrier-' trocknung in ein Pulver umgewandelt. Die Tabletten wer-

, den aus dem gefriergetrookneten Pulver unter verschiedenen Drucken der üldruck-Tablettiermaschine gepreßt.

Probe 1: Eine wässrige lösung von 20 -Gewiohtsteilen Enzym und 1 Gewichtsteil Sorbit in 25 Raumteilen Wasser wird gefriergetrocknet und in der gleichen V/eise wie bei der Vergleichsprobe tablettiert»

" Probe 21 Eine wässrige Lösung von 20 Gewichtsteilen Enzym und 6,6 Gewichtsteilen Sorbit in 25 Raumteilen Wasser wird gefriergetrocknet und in der gleichen Weise wie das Vergleichsprodukt tablettiert.

3. Methoden: Die Proteaseaktivität des Kontrollprodukte

und der Proben wird nach der Methode von Kunitz ermittelt (Journal of General Physiology 3K)> Seite 291 (1947)). Die Amylaseaktivität wird nach der Methode von Wohlgemuth ermittelt (Biochemische Zeitschrift £, Seite 1 (1903)). Diese Enzymaktivität wird als Prozentsatz der Enzymaktivität des durch Gefriertrocknen erhaltenen Pulvere angegeben.
>

4. Ergebnisse«

Enzymaktivität Protease_t % Amylase, f>

Preßdruck der Tablettiermaschine, t/cm² 12 3 12

Versrleichsrrodukt 86,2 78,8 74,6 83,θ' 72,5 68,2.

Probe 1 100,8 102,2 107,8 103,1 102,9 103,1

trobe 2 98,2 98,3 101,2 93,6 94,3 98,8'·

-beispiel 2
1. Lnzym und Methoden» wie in Beispie] 1

BAD ORIGINAL 9a9885/1308

2. Gepreßte Tabletten»
Vergleiohsprodukti wie in Beispiel 1

Probet Das duroh Gefriertrocknung erhaltene Pulver der Probe 1 von Beispiel 1 wird mit 10 Ί* Magneaiummetasilioat-aluminat (magnesium meta-siliea-alumio acid) auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise tablettiert,

3. Ergebnisse j

Enaymaktivität, *

Preßdruck der Tablettiermaeohine, t/om 1

Vergleiohaprodukt 80 68 61

Probe 92 85 07

Lagerbeständigkeitι Die Amylaseaktivität der Probe (Breßdruck 1 t/om ) naoh Lagerung fur 2 Monate bei einer relativen Feuchtigkeit von 50 i> und bei 40⁰C beträgt (Vergleichsprodukt 60 ^).

Beispiel 5

1. Enzym»

Im Handel erhältliches Enzympräparat, das Amylase und Protease enthält ("Biodiastaee 1000", Warenzeichen der Amano Seiyaku Oo· Ltd·).

2. Gepreßte Tablettent '

Vergleichsproduktt Nur mit dem Enzym hergestellt· Tabletten. ⁺⁺

Probe 11 Tabletten aus 95 % ln*ym und 5 % Sorbit ⁺ Probe 21 Tabletten ait 90 1* Enzym und 10 t Sorbit . Probe J ι Tabletten mit 80 % Enzym und 20 % Sorbit

+ Auf die in Beiepitl 1 beschrieben· Weise hergestellt·

++ Auf die in Beispiel 1 beβohriebene Weise hergestellt, wobei jedoch das Pulver aus der wässrigen Enzymlöeung 909885/1308

durch Ausfällung mit Äthanol und nicht durch Gefriertrocknung erhalten" wurde.

3· Methoden! wie in Beispiel 1

4. Ergebnissei	• Beispiel 4	Enzymaktivität	2	3	(Araylase), $>
			87	69
Preßdruck der Tablettier-		1	95	89	4
maschine, t/cm		83	97	—	«.
Vergleichsprodukt	' 92	106	-	-
Probe 1	-			97
Probe 2	—			105
Probe 3

1. Enzym und Methoden! wie in Beispiel 2.

2· Gepreßte Tabletten»

Vergleicheproduktt Tabletten aus 100 $ Enzym ++

Probe 1i Tabletten aus 90 °/o Enzym und 10 # Sorbit ⁺⁺⁺

Probe 2» Tabletten aus 70 # Enzym, 10 % Sorbit und
20 % Magnesiuioaibisilicat-aluminat ⁺⁺⁺

Probe 3» Tabletten aus 90 # Enzym und 10 f> Sorbit ⁺⁺
Probe 3ι Tabletten aus 95 % Enzym und 5 # Sorbit ⁺

+ Herstellung auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise·]

++ Herstellung auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise»/ jedooh Gewinnung des Pulvers aus der wässrigen Enzym·* lösung durch fällung mit Äthanol und nicht durch j Gefriertrocknung. i

Herstellung auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise, jedooh Gewinnung des Pulvers aus der wässrigen Enzym-* lösung duroh ZerstSttnmgstrocknung. <

ORIGINAL INSPECTED

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3. Ergebnisses	Beispiel 5	Ensymaktivi tät	(Amylase) ,^6

Preßdruck der Tablettier-	2	4
masohine, t/cm	79	72
Vergleichaprodukt	97	97
Probe 1	95	95
Probe 2	97	97
Probe 3	93	90
Probe 4

1. Enzymι

Saure Protease, hergestellt gemäß Beispiel 3 der USA-Patentschrift 3 097 145.

2. Tabletten!

Vergleichsprodukt: Tabletten aue 100 # Enzym. Frobei Tabletten aus 95 fi Enzym und 5 % Sorbit, hergestellt gemäß Beispiel

3. Methoden! wie in Beispiel

4. Ergebnissei

Enzymaktivität (Protease),!

Preßdruck der Tablettier-	Beispiel 6	1	CVi	3
2 masohine, t/cm		83	59	64
Vergleichsprodukt	95	107	97
Probe

1. Enaym und Methoden! wie in Beispiel 5«

2. Tabletten:

Ensym Sorbit Magnesium-metasilicat-56 ja aluainat« f>

Vergl.Produkt 1

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BAD ORIGINAL

Vergl	•Produkt	CVJ	50	5	5	,5
Probe	1		95		CVJ
Probe			47,

50

Herstellung der Tabletten auf die in Beispiel 1^beschriebene Weise, jedoch Gewinnung des Pulvers aus der Enzymlösung durch Zerstäubungstrocknung.

3. Ergebnisse»

Enzymaktivität,

Preßdruck der 'fablettier-	Beispiel 7	2	4	*
iflaschine, t/cm		62,6	55,7
Vergleichsprodukt 1	69,9	68,8
Vergleichsprodukt 2	92,4	91,2
Probe 1	95,2	88,8
Probe 2

1. Enzym und Methoden» wie in Beispiel

2. Tabletten»

	Enzym	Sorbit	ΛϋΖ	Ifagneeium-	Trocknungs	"-
		$		metasilicat-	methode
				aluminat, #
Vergl.Produkt	100			Fällung mit
				Äthanol
Probe 1	95	5		Zerstäubungs
				trocknung
Probe 2	85	5	10	dto.
I robe 3	95	5		Gefriertrock
				nung
I robe 4	90	10		Fällung mit
				/ithanol
. Ergebnisse:
		;/r;:-jktivität ι
Preßdruck der "χ	ablettiei
maschine, t/cm^		2 4

Vergleichaprodukt

64

56

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bad original

151778?

Probe 1	Beispiel θ	95	99	40 Tage
Probe 2	93	92	50
Probe 3	98	97	100
Probe 4	98	97	90
iagerbeständigkeit bei 50 jT	relativer Feuchtigkeit
4O⁰C.
	20 Tage
Vergleiohsprodukt	82
Probe 1	ibi
Probe 2	94

1. Enzym und Methodeni wie in Beispiel 1

2. Granulat ι

Beatandteil	Vergl#Produk1	t Probe *
Enzym	60	60
Cellulosepulver	23	23
fructose	30	30
Magnesium-metasilicat- aluminat	30	30
V/asser	60	20
Sorbit		20

Das Enzym, Cellulosepulver, die Fructose und das Magnesiummetasilicat-aluminat werden gemischt, mit Wasser (Vergleichsprodukt) oder einer wässrigen Sorbitlösurig (Probe)
granuliert und bei 40⁰G getrocknet.

3. Ergebnisse:

Enzymaktivit:. t, y>

urn prünglich Granulat nach 2 Lionaten bei

759» rel.Peuchtifrk. ·

und 40 C

Vergleichsprodukt 100 40,2 35,0

Probe 1ÜÜ Ü4,6 72,5 !

909885/1308 ^BAD

- ίο -

Beispiel 9

1. Enzym und Methoden» wie in Beispiel 1,

2. Pillen»

Das gemäß Beispiel 8 hergestellte Granulat (naß) vard zu Pillen verarbeitet und dann bei 40 C getrocknet.

3. Ergebnisse«

Enzymaktivitätt $

ursprünglich Pillen

Vergleichsprodukt 100 40,0

Probe 100 84,3

BAD ORIGINAL 909885/1308

Claims

Patentansprüche

1) Mindestens ein Enzym enthaltendes festes Enzympräparat« gekennzeichnet durch einen Oehalt an Sorbit.

2) Enzympräparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet» da8 es dureh Verfestigung aus einer wässrigen, das Enzym und den Sorbit enthaltende Lösung oder Suspension gewonnen ist.

3) Enzympräparat nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Sorbit im Präparat in Mengen im Bereich von 0,1 bis 50 Oew.-jG, vorzugsweise 1 bis 10 Qew.-£, bezogen auf das Oewloht des Enzyms, vorliegt*

4) Enzympräparat nach eine« der vorhergehenden Ansprüche» dadurch gekennzeichnet, dafi es in einer zur weiteren Verwendung geeigneten Form, insbesondere in Form eines Pulvers, Qranulata, von Tabletten oder rillen, vorliegt.

5) Verfahren zur Herstellung des Enzympräparats nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daβ Enzym und Sorbit in Form einer wässrigen Lösung oder Suspension miteinander in Kontakt gebracht werden und daß das Präparat durch Verfestigung aus der Lösung gewonnen wird.

6) Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, das die das Enzym und den Sorbit enthaltende Lösung oder Suspension in ein Pulver überführt und das Pulver zu Tabletten, einem Granulat oder Pillen geformt wird.

7). Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daa .ein Bttzympulver mit elfter wässrigen Sorbitlösung durchgeknetet und die Mischung zu Tabletten, einem Oranulat ' oder Pillen gefortet *

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