JPH02218618A

JPH02218618A - トロンビン粉末製剤

Info

Publication number: JPH02218618A
Application number: JP1039212A
Authority: JP
Inventors: Taiji Sekiyama; 泰司関山; Michiyo Ko; 康　美智代; Yuichi Mizukami; 勇一水上; Tetsuya Hashimoto; 哲哉橋本; Shoichi Miyake; 三宅　正一; Hiromichi Bito; 尾藤　博道
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1989-02-21
Filing date: 1989-02-21
Publication date: 1990-08-31

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（利用分野）本発肌は賦形剤として乳糖を用いることを特徴とするト
ロンビン粉末製剤に関する。

（従来技術）トロンビンはフィブリノゲンに作用してフィブリンを生
成することにより血液凝固作用を生じる。

このため、臨床的には外科領域にふいて局所止血剤とし
て使用されている。

現在市販のトロンビン製剤は凍結乾燥品であり、用時、
そのままあるいは適当な溶媒に溶解して局所的に投与さ
れる。

このトロンビンはまれに経口投与される。すなわち、上
部消化器出血の場合、トロンビン溶液として投与される
。

（発明が解決しようとする問題）しかし、トロンビン製剤の従来の剤型は、トロンビンを
分注後に凍結乾燥したものである。従って一般注射剤と
同様に管瓶に入っており、注射剤と間違い易い形態とな
っている。また、トロンビンの静注は汎発性血管向凝固
症候群等の重篤な副作用を引き起こす可能性もある。こ
うして従来のトロンビン製剤は剤型としては好ましいも
のではなく、何らかの改善を求められていた。

本発明者らはこうした課題を克照するためにトロンビン
製剤の剤型について検討を行った結果、トロンビン粉末
に賦形剤として乳糖を添加混合することにより得られる
粉末製製剤がトロンビンの力価を低下せず、保存安定性
を保ち、しかも粉末分注が容易であることを見出し、本
発明を完成した。

（問題点を解決するための手段）本発明にふけるトロンビンは、トロンビンとしての生物
活性または生理活性を有するもの、たとえば血漿蛋白を
分画して得られるものあるいは遺伝子工学により得られ
るものである。

すなわち、ヒトの血漿から精製したプロトロンビンにＣ
ａ２＋の存在下で、トロンボプラスチンなどを作用させ
て調製したものを用いることができる。

また、市販の薬局方収載品を用いてもよい。

また、トロンビンとしては、その比活性が１００〜１０
００単位／■蛋白程度のものを使用することが好ましい
。その精製方法は公知の手段を用いることができる。

トロンビンは加熱処理しておくことが望ましい。

その場合、好ましくは、溶液状態で加熱処理される。

具体的に溶液状態での加熱処理について説明する。

トロンビン含有水溶液における、トロンビンの濃度とし
ては５００〜５０００単位／−（特に１０００〜３００
０単位／ｒｎｌ）が好ましく、また溶液のｐＨとしては
５〜８．５（特に５．６〜７．６）が例示される。この
場合、安定化剤を用いることが好ましい。安定化剤とし
て用いられる糖としては、単糖類（グルコース、マンノ
ースなど）、三糖類（マンドース、ショ糖、乳糖など）
、糖アルコール（ソルビトーノペマンニトール、キシリ
トールなど）などが好適なものとして例示される。

糖の添加量としては、トロンビン５００〜５０００単位
／ｒｎｌ当たり、６０〜１００ｗ／ｖ％（好ましくは８
０〜１００ｗ／ｖ％）が例示される。

さらに安定化効果を高めるためには、アミノ酸を添加す
ることが好ましい。本発明で用いられるアミノ酸として
は、中性アミノ酸（グリシン、セリン、スレオニンなど
）、酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸など
）、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジンなど）などが
挙げられる。

アミノ酸の添加量としては、トロンビン５００〜５００
０単位／−当たり、０．０５〜５Ｍ（好ましくは１〜４
Ｍ）が例示される。

また、その他の公知の添加剤（例えば、塩化カルシウム
、クエン酸ナトリウムなど）を用いることもできる。

加熱処理における加熱温度は、ウィルスを不活化するに
十分な温度であり、たとえば加熱温度は通常５０〜７０
℃、好ましくは６０℃程度であり、加熱時間は、通常１
（１分〜２０特開、好ましくは５〜１５時間程度である
。

加熱処理後、−旦、透析等により加熱安定化剤を除去ま
たは希釈することが好ましい。

次いで、凍結乾燥を施す。その際、安定化剤を用いても
よい。安定化剤としては有機酸またはその塩等が挙げら
れる。

トロンビン含を水溶液における、トロンビンの濃度とし
ては５００〜１００００単位／ｍｌ（特に１０００〜３
０００単位／証）が好ましく、また溶液のｐＨとしては
５〜１０．０（特に５．６〜７．６）が例示される。

を機成としては、炭素数２〜８のカルボン酸であること
が好ましい。このような有機酸として具体的には酢酸、
プロピオン酸、酪酸、吉草酸、シニウ酸、マロン酸、コ
ハク酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸等が例示さ
れる。好ましくはクエン酸である。そして、これら有機
酸の塩としてはアルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウ
ム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩など）
が例示される。その添加量としてはトロンビン溶液５０
０〜５０００ＲＬ位／ｒｒＬＩ！当たり０．００４〜Ｉ
　Ｍ　（好ましくは０．０１〜ＬＭ）程度である。

安定化剤を添加後、除菌濾過を行い、凍結乾燥を施して
トロンビンを粉末化する。

このトロンビン粉末に賦形剤として乳糖を添加混和し、
トロンビン粉末製剤を調製する。

その添加量としては、トロンビン５００〜１万単位あた
り、５０〜１０００ｍｇ程度が例示される。言い換える
と、本製剤１ｍｇ当たりトロンビン活性が１０単位程度
となるように調製される。

こうして得られた粉末製剤は所望により、さらに公知の
製剤化技術により製剤化（散剤、頚粒剤、錠剤、カプセ
ル剤等）された後に単位包装されるが、好ましくは、粉
末分注方式によりスティック包装に供せられる。

本発明製剤の効能・効果としては、通常の結紮によって
止血困難な小血管、毛細血管及び実質臓器からの出血（
例えば、外傷に伴う出血、手術中の出血、骨性出血、膀
胱出血、抜歯後の出血、鼻出血、及び上部消化管からの
出血など）等の止血促進が挙げられる。

また、用法・用量としては、通常、出血局所に、生理食
塩液に溶かした溶液（トロンビンとして５０〜１．００
０単位／−）を噴霧もしくは潅注するか、又は粉末のま
まで撒布する。上部消化管出血の場合には、適・当な緩
衝剤に溶かした溶液（トロンビンとして２００〜４００
単位／ｒｎ１．）を経口投与する。なお、出血の部位及
び程度により適宜増減する。

（効　果）本発明のトロンビン粉末製剤は、賦形剤として乳糖を用
いることにより、トロンビンの力価が低下せず、保存安
定性を保ち、しかも粉末分注が容易となる。また溶解性
も良好である。

このため、本発明製剤は、手軽に開封ができ、患者によ
□て使用しやすく、静注用と間違えることもないスティ
ック包装に用いることが可能となる。

従って、本発明製剤は、スティック包装等を用いて、臨
床使用時に大いに有用と考える。

（実施例）以下、本発明を実施例および実験例により説明するが、
本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

実施例１正常人血漿から、塩化バリウム吸着法とＤＲＡＢ　−セ
ファデックス　カラムクロマトグラフィー法〔バジャ、
ニス、ピー、ら、ジャーナル　オブバイオロジカル　ケ
ミストリー（Ｂａｊａｊ、　Ｓ、　Ｐ、　、　ｅｔａｌ
、、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　３２４８．７７２９
　（１９７３）］によりプロトロンビンを精製し、この
プロトロンビンに人胎盤より調製したトロンボプラスチ
ン、人血漿及び塩化カルシウム液を加え、トロンビン変
換して、粗製トロンビン（１■蛋白当たりのトロンビン
活性１０単位）を得た。この粗製トロンビンをＳＰ−セ
ファデックス　カラムクロマトグラフィー法〔ランドブ
ラッド、アール、エル１．バイオケミストリー（Ｌｕｎ
ｄｂｌａｄ、Ｒ，Ｌ、、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）
、　　１０゜２５０１　（１９７１）　）により精製し
、この精製トロンビンを濃縮後、１０ｈ＋Ｍクエン酸緩
衝液（ｐ）１７．０）に対し透析し、トロンビン溶液（
３５００単位／ｄ、１■蛋白当たりのトロンビン活性５
００単位）を調製した。

このトロンビン溶液４５ｒｒＬｌ当たり、ショ糖６５ｇ
およびアルギニン２７ｇを添加（終濃度は、トロンビン
１５００単位／ｒＩｔｌ、ショ糖６５ｗ／ｖ％、アルギ
ニン２７Ｉｌｌｉ／Ｖ％）し、水酸化ナトリウムでｐＨ
を５．９に調製した。

この溶液を６０℃で２０時間加熱処理した後、０，１Ｍ
クエン酸緩衝液（ｐＨ６，７）で透析した。この溶液を
濃縮し、濾過した後に、トロンビン溶液（１１００単位
／ｍｌ）を調製した。さらに除菌濾過し、凍結乾燥した
。さらに、賦形剤として乳糖を、トロンビン活性が１０
単位／　ｍｇ　）ロンビン粉末となるように添加混和し
た。

このトロンビン粉末製剤を５℃で１ケ月保存したが、液
状（外観ン、トロンビン活性、セルロースアセテート膜
電気泳動、ゲル濾過の項目につき試験した結果、著明な
変化はみられず、トロンビンは安定であることがわかっ
た。

実施例２冷エタノール法によるコーンの画分■＋■の抽出残渣を
生理食塩水で抽出し、得られた抽出物を用いて実施例１
と同様に操作し、トロンビン粉末製剤を得た。

実験例１賦形剤がトロンビン粉末製剤の水への溶解性に与える影
響を調べた。賦形剤としては、乳糖の他に、トウモロコ
シデンプン、結晶セルロース、カルボキシメチルスター
チＮａ、カルボキシメチルセルロースＮａ、寒天を用い
た。トロンビン粉末製剤の調製方法は実施例１に準じて
行った。

各種粉末製剤５０００単位（５００ｍｇ）を精製水１０
ｍに室温で溶解させて、溶解性を調べた（第１表）。

第１表実験例２賦形剤がトロンビン粉末製剤の保存安定性に与える影響
を調べた。賦形剤としては、乳糖の他に寒天を用いた。

トロンビン粉末製剤の調製方法は実施例１に準じて行っ
た。

各種粉末製剤を３７℃で１カ月間保存し、残存するトロ
ンビン活性を測定し、活性残存率を算出したく第２表）
。

第２表

Claims

【特許請求の範囲】

賦形剤として乳糖を用いることを特徴とするトロンビン
粉末製剤。