JPH10206420A - 血液凝固促進剤及び血液検査用容器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】血液、更にはヘパリンを含む血液であっても、
短時間で凝固させるとともに、安定性に優れる血液凝固
促進剤、及び通常の血液検査だけでなく、ヘパリン投与
を受けている人工透析患者や血栓症患者の血液検査にお
ける血清の分取に好適に用いられる血液検査用容器を提
供する。 【解決手段】ペプチド鎖において、Ａｒｇと任意のアミ
ノ酸残基との結合及び／又はＬｙｓと任意のアミノ酸残
基との結合を加水分解しうる加水分解酵素、並びに並び
に分子内にアミノ基とカルボキシル基を有する化合物及
び／又はポリオールを含有する血液凝固促進剤。さら
に、アミン塩及び／又は第４級窒素を有する有機化合物
を含有する血液凝固促進剤。これらの血液凝固促進剤が
内部に収容された血液検査用容器。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、血液凝固促進剤に
関し、特にヘパリン投与を受けている患者から得られる
血液検体の凝固を促進する血液凝固促進剤、及び血液検
査用容器に関する。

【０００２】

【従来の技術】病気の予防や診断の目的で血液検査が一
般に行われているが、血液検査の多くは血清検査であ
る。その検査に要する血清は、通常、血液検査用容器に
採取した血液を凝固させた後、遠心分離によって比重の
異なる血餅から分離し、ピペットを用いて、あるいはデ
カンテーションにより採取している。被験者から採取し
た血液が凝固するには比較的長時間を必要とし、結果を
知るために再来院しなければならなかったり、特に緊急
に検査を実施する必要のある場合には問題となる。そこ
で、従来より血液凝固を短時間で行える凝固剤の検討が
なされてきた。

【０００３】また、人工透析を受けている患者や血栓症
患者の血液検体を扱う場合は、さらに別の問題が生じ
る。このような患者は、血栓防止のためにヘパリン投与
が行われるため、血液１０ｍｌあたり１〜２０単位程度
のヘパリンが存在する。このヘパリンは、血液中のアン
チトロンビンIII と結合してトロンビンの作用を著しく
阻害する。さらに、第 XII因子などの血液凝固因子の作
用をも阻害するといわれている。そのため、フィブリノ
ーゲンのフィブリンへの転化がおこらず、その結果、血
液が凝固せず、血清の分取が困難となる。

【０００４】これらの問題を解決するため、例えば、特
開昭５８−１４６０号公報には、硫酸プロタミンまたは
蛇毒に含まれるトロンビン様酵素を凝固促進剤として用
いた採血管が開示されている。しかしながら、硫酸プロ
タミンはヘパリン中和剤であるため、凝固作用は十分で
なく、また蛇毒に含まれるトロンビン様酵素はヘパリン
中和作用と凝固作用を有するものの安定性が十分でな
い。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記問題点を
解決するものであり、その目的は、血液、更にはヘパリ
ンを含む血液であっても、短時間で凝固させるととも
に、安定性に優れる血液凝固促進剤及び血液検査用容器
を提供することである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明１の血液凝固促進
剤は、加水分解酵素並びに分子内にアミノ基とカルボキ
シル基を有する化合物及び／又はポリオールを含有す
る。

【０００７】本発明１において、加水分解酵素はプロテ
アーゼであり、ペプチド鎖において、Ａｒｇと任意のア
ミノ酸残基との結合及び／又はＬｙｓと任意のアミノ酸
残基との結合を加水分解しうるものが用いられる。上記
加水分解酵素の量は、少なくなると血液凝固の時間が長
くなったり凝固が不完全になることがあり、多くなると
検査値に悪影響を及ぼす恐れがあるので、血液１ｍｌあ
たり０．１〜１００単位が好ましく、０．５〜５０単位
がより好ましい。

【０００８】上記加水分解酵素としては、例えば、トリ
プシン、トロンビン、蛇毒トロンビン様酵素等のセリン
プロテアーゼ；カテプシンＢ、フィシン等のチオールプ
ロテアーゼ；キニナーゼＩ等の金属プロテアーゼなどが
挙げられ、特にセリンプロテアーゼが好適に用いられ
る。

【０００９】本発明１において、上記分子内にアミノ基
とカルボキシル基を有する化合物は、直鎖でも環状でも
よい。上記分子内にアミノ基とカルボキシル基を有する
化合物及び／又はポリオールは、本発明においては上記
加水分解酵素の安定化剤として用いられ、その量は、少
なくなると加水分解酵素の安定性を保つ効果が不十分と
なり、多くなると検査値に悪影響を及ぼす恐れがあるた
め、加水分解酵素１単位当たり０．０１〜１０ｍｇが好
ましく、０．０５〜５ｍｇがより好ましい。

【００１０】上記分子内にアミノ基とカルボキシル基を
有する化合物としては、例えば、アミノメチル−シクロ
ヘキサンカルボン酸（トラネキサム酸）、グリシン、ア
ルブミン等が挙げられる。また上記ポリオールとして
は、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレン
グリコール等のグリコール類、グリセロール、シューク
ロース、デキストロース、ソルビトール、ゼラチン等の
糖類などが挙げられる。

【００１１】本発明２の血液凝固促進剤は、さらにアミ
ン塩及び／又は第４級窒素を有する有機化合物を含有す
る。本発明において、上記アミン塩及び／又は第４級窒
素を有する有機化合物は、ヘパリンを吸着・中和して不
活性化するヘパリン中和剤として作用する。上記アミン
塩を構成するアミンは第１級、第２級及び第３級アミン
のいずれでもよく、アミン塩を構成する酸も無機酸及び
有機酸のいずれでもよい。無機酸としては、例えば、塩
酸等のハロゲン化水素酸、硫酸、亜硫酸などが挙げら
れ、有機酸としては、例えば、ギ酸、酢酸などが挙げら
れる。アミン塩の有機残基は通常アルキル基であるが、
イミノ基やエーテル基等の異種元素を含む炭化水素基で
あってもよい。アミン塩は、分子内塩でもよい。好まし
いアミン塩の具体例としては、例えば、（Ｉ）式で表さ
れるヘキサデシルジメチルアミン塩酸塩や、（II）式で
表されるテトラデシルジ（アミノエチル）グリシン等が
挙げられる。

【００１２】

【化１】

【００１３】

【化２】

【００１４】上記第４級窒素を有する有機化合物として
は、例えば、テトラアルキルアンモニウムが挙げられる
が、アルキル基のかわりにアリール基を有する化合物や
イミノ基、エーテル基等の異種元素を含む炭化水素基を
有する化合物でもよい。好ましい第４級窒素を有する有
機化合物の具体例としては、例えば、（III ）式で表さ
れるドデシルトリメチルアンモニウムクロライドが挙げ
られる。

【００１５】

【化３】

【００１６】このような比較的低分子量の化合物のほ
か、第４級窒素を有する有機重合体も用いることができ
る。上記有機重合体としては、例えば、（IV）式で表さ
れる繰り返し単位を有するポリカチオンが挙げられる。

【００１７】

【化４】

【００１８】（ここで、Ｒ₁ 〜Ｒ₄ は水素またはアルキ
ル基、Ｘはハロゲン根又は酸根、Ｙはアルキレン基又は
−アルキレン基−ＳＯ₂ −を示し、繰り返し数は５〜２
０００である。）

【００１９】上記（IV）式で表される化合物のうち、特
に（Ｖ）式又は（VI）式で表される繰り返し単位を有す
るポリカチオンが好適である。

【００２０】

【化５】

【００２１】

【化６】

【００２２】上記アミン塩及び／又は第４級窒素を有す
る有機化合物（中和剤）は少なくなるとヘパリンが中和
されないためヘパリンを含む血液が凝固しなくなり、多
くなると検査値に悪影響を及ぼす恐れがあるので、血液
１ｍｌあたり０．００５〜１０ｍｇが好ましく、０．０
１〜５ｍｇがより好ましい。

【００２３】本発明１又は２の血液凝固促進剤は、血液
１ｍｌ当たり１×１０^-10 〜１×１０^-1ｇの割合で使用
される。少なくなると血液凝固促進効果が得られず、多
くなっても使用量に応じた効果は得られず、血液検査に
種々の影響を与える可能性がある。

【００２４】血液凝固促進剤中には、さらに抗線溶剤及
び／又は抗プラスミン剤が含有されてもよい。これらに
より、血液の凝固反応過程で拮抗的に生成してくるプラ
スミンのフィブリン分解作用が阻害される。そのため血
液の凝固が促進され、さらに凝固においても凝固状態を
安定に保つことができる。上記抗線溶剤及び／又は抗プ
ラスミン剤としては、従来より臨床で用いられているア
プロチニン、大豆トリプシンインヒビター、ε−アミノ
カプロン酸、ｐ−アミノメチル安息香酸、アミノメチル
シクロヘキサンカルボン酸等が、単独であるいは組み合
わせて用いられる。これらは、得られる血清を用いた臨
床検査に影響を及ぼさない程度の量で血液凝固促進剤中
に含有される。例えば、アプロチニンは、血液１ｍｌ当
たり約１００〜６００ＫＩＵ（単位）の割合で、大豆ト
リプシンインヒビターは血液１ｍｌ当たり約５００〜４
０００ＦＵ（単位）の割合で、そしてε−アミノカプロ
ン酸、ｐ−アミノメチル安息香酸及びアミノメチルシク
ロヘキサンカルボン酸は、いずれも血液１ｍｌ当たり約
１０^-2〜１０^-8ｇの割合となるように、血液凝固促進剤
中に含有される。

【００２５】血液を凝固させるには、例えば、容器中に
採取した血液に上記血液凝固促進剤を加えてもよいが、
本発明３の血液検査用容器は、予め上記本発明１又は２
の血液凝固促進剤が内部に収容されている。上記血液検
査用容器は、ガラス製であっても樹脂製であってもよ
い。また血液凝固促進剤は、例えば粉末状のまま使用し
てもよく、予め適当な溶媒に溶解もしくは分散させてお
いてもよい。高濃度の血液凝固促進剤が血液と接触して
蛋白成分を変性させるのを避けるために、血液凝固促進
剤を比表面積の大きい担体に担持させて、これを収容し
てもよい。

【００２６】上記担体としては、血液検査に有害な影響
を与えず、大きい比表面積を有するものであれば特に限
定されない。例えば、不織布、織布、樹脂ビーズ等が好
適である。このような担体に上記血液凝固促進剤を担持
させる方法としては、例えば、その溶液や分散液を担体
に塗布する方法、溶液や分散液中に担体を浸漬して含浸
させた後、乾燥させる方法の他、アラビアゴム等の適宜
の助剤を含む血液凝固促進剤の水分散液を調製し、これ
を急速凍結乾燥して血液凝固促進剤担持粒子状物を得る
方法などが挙げられる。

【００２７】このような血液凝固促進剤（血液凝固促進
剤担持担体を含む）を収容した血液検査用容器は、通常
の血液検査用容器のほか、真空採血管としても使用でき
る。この真空採血管は、通常のガラスもしくは合成樹脂
製採血管内部に上記血液凝固促進剤を収容し、排気し
て、ブチルゴム製等の密封性の優れた栓で密封すること
により調製される。

【００２８】本発明の血液凝固促進剤にはセリンプロテ
アーゼ等の加水分解酵素が存在するため、上記血液凝固
因子の活性化が促進され、短時間で血液が凝固する。さ
らに本発明２の血液凝固促進剤がヘパリンを含有する血
液に加えられると、血液中のヘパリンがアミン塩などの
中和剤に吸着・中和されて沈殿するため、ヘパリンのト
ロンビンや第ＸII因子に対する阻害作用がなくなる。そ
のため、血液は正常な凝固機能を回復する。血液凝固に
要する時間は、血液凝固促進剤中の加水分解酵素やその
安定化剤、及び中和剤の種類、量、使用する容器の材
質、血液中のヘパリンの量等により異なるが、合成樹脂
製容器を用いると通常１０〜２０分である。

【００２９】このように、正常血液のみならずヘパリン
が含有される血液も短時間のうちに凝固し、凝固状態が
安定に保たれうる。さらに血清と血餅との分離が容易と
なるため、分離採取された血清中に血餅成分が混在する
こともない。血餅成分の収縮度合いも十分であるため、
血清収率も高い。

【００３０】

【発明の実施の形態】次に、本発明の実施例を説明す
る。 （実施例１）加水分解酵素としてトロンビン（商品名：
トロンビン持田、持田製薬社製）、加水分解酵素の安定
化剤としてアミノメチル−シクロヘキサンカルボン酸
を、それぞれ１ｍｌ当たり２００００単位、２０００ｍ
ｇ含有する水溶液を調製し、血液凝固促進剤とした。次
いで上記血液凝固促進剤をポリエチレン製広口容器に密
閉し、２５℃で１か月静置した後、以下の実験を行っ
た。

【００３１】ポリエチレン製チューブ（１６φ×１０m
m）にヒト新鮮血を１０ｍｌ用意し、上記血液凝固促進
剤を２０μｌ滴下した後、緩やかに攪拌し２５℃で静置
した。この時の血液１ｍｌ当たりのトロンビン、アミノ
メチル−シクロヘキサンカルボン酸の含有量は、それぞ
れ４０単位、４ｍｇであった。

【００３２】次いで、上記のようにして調製した試料の
血液凝固時間を測定したところ、５分以内で血液凝固が
認められた。さらに、この試料を３０００ｒｐｍで１０
分間遠心分離を行ったところ、上層に清浄な血清を、下
層に血餅が得られた。

【００３３】（実施例２）加水分解酵素として蛇毒トロ
ンビン様酵素（商品名：レプチラーゼ、東菱薬品社
製）、加水分解酵素の安定化剤としてアミノメチル−シ
クロヘキサンカルボン酸を、それぞれ１ｍｌ当たり１０
０００単位、２０００ｍｇ含有する水溶液を調製し、血
液凝固促進剤とした。次いで上記血液凝固促進剤をポリ
エチレン製広口容器に密閉し、２５℃で１か月静置した
後、以下の実験を行った。

【００３４】ポリエチレン製チューブ（１６φ×１０m
m）にヒト新鮮血を１０ｍｌ用意し、上記血液凝固促進
剤を２０μｌ滴下した後、緩やかに攪拌し２５℃で静置
した。この時の血液１ｍｌ当たりの蛇毒トロンビン、ア
ミノメチル−シクロヘキサンカルボン酸の含有量は、そ
れぞれ２０単位、４ｍｇであった。以下、上記実施例１
と同様に実験を行ったところ、５分以内で血液凝固が認
められ、さらに遠心分離により、上層に清浄な血清を、
下層に血餅が得られた。

【００３５】（実施例３）加水分解酵素としてトロンビ
ン（商品名：トロンビン持田、持田製薬社製）、加水分
解酵素の安定化剤としてアミノメチル−シクロヘキサン
カルボン酸、アミン塩及び／又は第４級窒素を有する有
機化合物として下記式（ＶII）で表されるポリカチオン
を、それぞれ１ｍｌ当たり５０００単位、１２５ｍｇ、
５０ｍｇ含有する水溶液を調製し、血液凝固促進剤とし
た。次いで上記血液凝固促進剤をポリエチレン製広口容
器に密閉し、２５℃で１か月静置した後、以下の実験を
行った。

【００３６】ポリエチレン製チューブ（１６φ×１０m
m）にヘパリンを１単位／ｍｌ含有するヒト新鮮血を１
０ｍｌ用意し、上記血液凝固促進剤を２０μｌ滴下した
後、緩やかに攪拌し２５℃で静置した。この時の血液１
ｍｌ当たりのトロンビン、アミノメチル−シクロヘキサ
ンカルボン酸、下記式（ＶII）で表されるポリカチオン
の含有量は、それぞれ１０単位、０．２５ｍｇ、０．１
ｍｇであった。以下、上記実施例１と同様に実験を行っ
たところ、５分以内で血液凝固が認められ、さらに遠心
分離により、上層に清浄な血清を、下層に血餅が得られ
た。

【００３７】

【化７】

【００３８】（実施例４）加水分解酵素として蛇毒トロ
ンビン様酵素（商品名：レプチラーゼ、東菱薬品社
製）、加水分解酵素の安定化剤としてアミノメチル−シ
クロヘキサンカルボン酸、アミン塩及び／又は第４級窒
素を有する有機化合物としてテトラデシルジ（アミノエ
チル）グリシンを、それぞれ１ｍｌ当たり１００００単
位、５００ｍｇ、１００ｍｇを含有する水溶液を調製
し、血液凝固促進剤とした。次いで上記血液凝固促進剤
をポリエチレン製広口容器に密閉し、２５℃で１か月静
置した後、以下の実験を行った。

【００３９】ポリエチレン製チューブ（１６φ×１０m
m）にヘパリンを１単位／ｍｌ含有するヒト新鮮血を１
０ｍｌ用意し、上記血液凝固促進剤を２０μｌ滴下した
後、緩やかに攪拌し２５℃で静置した。この時の血液１
ｍｌ当たりの蛇毒トロンビン、アミノメチル−シクロヘ
キサンカルボン酸、テトラデシルジ（アミノエチル）グ
リシンの含有量は、それぞれ２０単位、１ｍｇ、０．２
ｍｇであった。以下、上記実施例１と同様に実験を行っ
たところ、５分以内で血液凝固が認められ、さらに遠心
分離により、上層に清浄な血清を、下層に血餅が得られ
た。

【００４０】（実施例５）加水分解酵素として蛇毒トロ
ンビン様酵素（商品名：レプチラーゼ、東菱薬品社
製）、加水分解酵素の安定化剤としてグリシンを、それ
ぞれ１ｍｌ当たり１００００単位、５００ｍｇ含有する
水溶液を調製し、血液凝固促進剤とした。次いで上記血
液凝固促進剤をポリエチレン製広口容器に密閉し、２５
℃で１か月静置した後、以下の実験を行った。

【００４１】ポリエチレン製チューブ（１６φ×１０m
m）にヒト新鮮血を１０ｍｌ用意し、上記血液凝固促進
剤を２０μｌ滴下した後、緩やかに攪拌し２５℃で静置
した。この時の血液１ｍｌ当たりの蛇毒トロンビン、グ
リシンの含有量は、それぞれ２０単位、１ｍｇであっ
た。以下、上記実施例１と同様に実験を行ったところ、
５分以内で血液凝固が認められ、さらに遠心分離によ
り、上層に清浄な血清を、下層に血餅が得られた。

【００４２】（実施例６）加水分解酵素として蛇毒トロ
ンビン様酵素（商品名：レプチラーゼ、東菱薬品社
製）、加水分解酵素の安定化剤としてポリエチレングリ
コール６０００を、それぞれ１ｍｌ当たり１００００単
位、５００ｍｇ含有する水溶液を調製し、血液凝固促進
剤とした。次いで上記血液凝固促進剤をポリエチレン製
広口容器に密閉し、２５℃で１か月静置した後、以下の
実験を行った。

【００４３】ポリエチレン製チューブ（１６φ×１０m
m）にヒト新鮮血を１０ｍｌ用意し、上記血液凝固促進
剤を２０μｌ滴下した後、緩やかに攪拌し２５℃で静置
した。この時の血液１ｍｌ当たりの蛇毒トロンビン、ポ
リエチレングリコール６０００の含有量は、それぞれ２
０単位、１ｍｇであった。以下、上記実施例１と同様に
実験を行ったところ、５分以内で血液凝固が認められ、
さらに遠心分離により、上層に清浄な血清を、下層に血
餅が得られた。

【００４４】（実施例７）加水分解酵素として蛇毒トロ
ンビン様酵素（商品名：レプチラーゼ、東菱薬品社
製）、加水分解酵素の安定化剤としてグリセロールを、
それぞれ１ｍｌ当たり１００００単位、５００ｍｇ含有
する水溶液を調製し、血液凝固促進剤とした。次いで上
記血液凝固促進剤をポリエチレン製広口容器に密閉し、
２５℃で１か月静置した後、以下の実験を行った。

【００４５】ポリエチレン製チューブ（１６φ×１０m
m）にヒト新鮮血を１０ｍｌ用意し、上記血液凝固促進
剤を２０μｌ滴下した後、緩やかに攪拌し２５℃で静置
した。この時の血液１ｍｌ当たりの蛇毒トロンビン、グ
リセロールの含有量は、それぞれ２０単位、１ｍｇであ
った。以下、上記実施例１と同様に実験を行ったとこ
ろ、５分以内で血液凝固が認められ、さらに遠心分離に
より、上層に清浄な血清を、下層に血餅が得られた。

【００４６】（比較例１）加水分解酵素としてトロンビ
ン（商品名：トロンビン持田、持田製薬社製）、アミン
塩及び／又は第４級窒素を有する有機化合物として上記
式（ＶII）で表されるポリカチオンを、それぞれ１ｍｌ
当たり５０００単位、５０ｍｇを含有する水溶液を調製
し、血液凝固促進剤とした。次いで上記血液凝固促進剤
をポリエチレン製広口容器に密閉し、２５℃で１か月静
置した後、以下の実験を行った。

【００４７】ポリエチレン製チューブ（１６φ×１０m
m）にヘパリンを１単位／ｍｌ含有するヒト新鮮血を１
０ｍｌ用意し、上記血液凝固促進剤を２０μｌ滴下した
後、緩やかに攪拌し２５℃で静置した。この時の血液１
ｍｌ当たりのトロンビン、上記式（ＶII）で表されるポ
リカチオンの含有量は、それぞれ１０単位、０．１ｍｇ
であった。以下、上記実施例１と同様に実験を行ったと
ころ、３０分以上経過しても血液凝固が認められず、ま
た遠心分離を行うと、上層の血清中に不十分な凝固を示
すフィブリンが認められた。

【００４８】（比較例２）加水分解酵素としてトロンビ
ン（商品名：トロンビン持田、持田製薬社製）を１ｍｌ
当たり２００００単位含有する水溶液を調製し、血液凝
固促進剤とした。次いで上記血液凝固促進剤をポリエチ
レン製広口容器に密閉し、２５℃で１か月静置した後、
以下の実験を行った。

【００４９】ポリエチレン製チューブ（１６φ×１０m
m）にヒト新鮮血を１０ｍｌ用意し、上記血液凝固促進
剤を２０μｌ滴下した後、緩やかに攪拌し２５℃で静置
した。この時の血液１ｍｌ当たりのトロンビンの含有量
は、４０単位であった。以下、上記実施例１と同様に実
験を行ったところ、３０分以上経過しても血液凝固が認
められず、また遠心分離を行うと、上層の血清中に不十
分な凝固を示すフィブリンが認められた。

【００５０】（実施例８）上記実施例１で得られた血液
凝固促進剤の２０μｌを、ポリエチレン製チューブ（１
６φ×１０mm）に塗布し乾燥させ、血液検査用容器を作
成した。上記血液検査用容器を、２５℃で１か月静置し
た後、以下の実験を行った。ヒト新鮮血を１０ｍｌ用意
し、これを上記血液検査用容器に入れ、緩やかに攪拌し
２５℃で静置した。この時の血液１ｍｌ当たりのトロン
ビン、アミノメチル−シクロヘキサンカルボン酸の含有
量は、実施例１と同じである。以下、上記実施例１と同
様にして実験を行ったところ、５分以内で血液凝固が認
められ、また遠心分離により、上層に清浄な血清を、下
層に血餅が得られた。

【００５１】（実施例９）上記実施例２で得られた血液
凝固促進剤の２０μｌを、ポリエチレン製チューブ（１
６φ×１０mm）に塗布し乾燥させ、血液検査用容器を作
成した。上記血液検査用容器を、２５℃で１か月静置し
た後、以下の実験を行った。ヒト新鮮血を１０ｍｌ用意
し、これを上記血液検査用容器に入れ、緩やかに攪拌し
２５℃で静置した。この時の血液１ｍｌ当たりの蛇毒ト
ロンビン、アミノメチル−シクロヘキサンカルボン酸の
含有量は、実施例２と同じである。以下、上記実施例１
と同様に実験を行ったところ、５分以内で血液凝固が認
められ、また遠心分離により、上層に清浄な血清を、下
層に血餅が得られた。

【００５２】（実施例１０）上記実施例３で得られた血
液凝固促進剤の２０μｌを、ポリエチレン製チューブ
（１６φ×１０mm）に塗布し乾燥させ、血液検査用容器
を作成した。上記血液検査用容器を、２５℃で１か月静
置した後、以下の実験を行った。ヘパリンを１単位／ｍ
ｌ含有するヒト新鮮血を１０ｍｌ用意し、これを上記血
液検査用容器に入れ、緩やかに攪拌し２５℃で静置し
た。この時の血液１ｍｌ当たりのトロンビン、アミノメ
チル−シクロヘキサンカルボン酸、上記式（ＶII）で表
されるポリカチオンの含有量は、実施例３と同じであ
る。以下、上記実施例１と同様に実験を行ったところ、
５分以内で血液凝固が認められ、また遠心分離により、
上層に清浄な血清を、下層に血餅が得られた。

【００５３】（実施例１１）上記実施例４で得られた血
液凝固促進剤の２０μｌを、ポリエチレン製チューブ
（１６φ×１０mm）に塗布し乾燥させ、血液検査用容器
を作成した。上記血液検査用容器を、２５℃で１か月静
置した後、以下の実験を行った。ヘパリンを１単位／ｍ
ｌ含有するヒト新鮮血を１０ｍｌ用意し、これを上記血
液検査用容器に入れ、緩やかに攪拌し２５℃で静置し
た。この時の血液１ｍｌ当たりの蛇毒トロンビン、アミ
ノメチル−シクロヘキサンカルボン酸、テトラデシルジ
（アミノエチル）グリシンの含有量は、実施例４と同じ
である。以下、上記実施例１と同様に実験を行ったとこ
ろ、５分以内で血液凝固が認められ、また遠心分離によ
り、上層に清浄な血清を、下層に血餅が得られた。

【００５４】（実施例１２）上記実施例５で得られた血
液凝固促進剤の２０μｌを、ポリエチレン製チューブ
（１６φ×１０mm）に塗布し乾燥させ、血液検査用容器
を作成した。上記血液検査用容器を、２５℃で１か月静
置した後、以下の実験を行った。ヒト新鮮血を１０ｍｌ
用意し、これを上記血液検査用容器に入れ、緩やかに攪
拌し２５℃で静置した。この時の血液１ｍｌ当たりの蛇
毒トロンビン、グリシンの含有量は、実施例５と同じで
ある。以下、上記実施例１と同様に実験を行ったとこ
ろ、５分以内で血液凝固が認められ、また遠心分離によ
り、上層に清浄な血清を、下層に血餅が得られた。

【００５５】（実施例１３）上記実施例６で得られた血
液凝固促進剤の２０μｌを、ポリエチレン製チューブ
（１６φ×１０mm）に塗布し乾燥させ、血液検査用容器
を作成した。上記血液検査用容器を、２５℃で１か月静
置した後、以下の実験を行った。ヒト新鮮血を１０ｍｌ
用意し、これを上記血液検査用容器に入れ、緩やかに攪
拌し２５℃で静置した。この時の血液１ｍｌ当たりの蛇
毒トロンビン、ポリエチレングリコール６０００の含有
量は、実施例６と同じである。以下、上記実施例１と同
様に実験を行ったところ、５分以内で血液凝固が認めら
れ、また遠心分離により、上層に清浄な血清を、下層に
血餅が得られた。

【００５６】（実施例１４）上記実施例７で得られた血
液凝固促進剤の２０μｌを、ポリエチレン製チューブ
（１６φ×１０mm）に塗布し乾燥させ、血液検査用容器
を作成した。上記血液検査用容器を、２５℃で１か月静
置した後、以下の実験を行った。ヒト新鮮血を１０ｍｌ
用意し、これを上記血液検査用容器に入れ、緩やかに攪
拌し２５℃で静置した。この時の血液１ｍｌ当たりの蛇
毒トロンビン、グリセロールの含有量は、実施例７と同
じである。以下、上記実施例１と同様に実験を行ったと
ころ、５分以内で血液凝固が認められ、また遠心分離に
より、上層に清浄な血清を、下層に血餅が得られた。

【００５７】（比較例３）上記比較例１で得られた血液
凝固促進剤の２０μｌを、ポリエチレン製チューブ（１
６φ×１０mm）に塗布し乾燥させ、血液検査用容器を作
成した。上記血液検査用容器を、２５℃で１か月静置し
た後、以下の実験を行った。ヘパリンを１単位／ｍｌ含
有するヒト新鮮血を１０ｍｌ用意し、これを上記血液検
査用容器に入れ、緩やかに攪拌し２５℃で静置した。こ
の時の血液１ｍｌ当たりのトロンビン、上記式（ＶII）
で表されるポリカチオンの含有量は、それぞれ１０単
位、０．１ｍｇであった。以下、上記実施例１と同様に
実験を行ったところ、３０分以上経過しても血液凝固が
認められず、また遠心分離を行うと、上層の血清中に不
十分な凝固を示すフィブリンが認められた。

【００５８】（比較例４）上記比較例２で得られた血液
凝固促進剤の２０μｌを、ポリエチレン製チューブ（１
６φ×１０mm）に塗布し乾燥させ、血液検査用容器を作
成した。上記血液検査用容器を、２５℃で１か月静置し
た後、以下の実験を行った。ヒト新鮮血を１０ｍｌ用意
し、これを上記血液検査用容器に入れ、緩やかに攪拌し
２５℃で静置した。この時の血液１ｍｌ当たりのトロン
ビンの含有量は、比較例２と同じである。以下、上記実
施例１と同様にして実験を行ったところ、３０分以上経
過しても血液凝固が認められず、また遠心分離を行う
と、上層の血清中に不十分な凝固を示すフィブリンが認
められた。

【００５９】

【発明の効果】本発明の血液凝固促進剤及び血液検査用
容器は、上述の通りであり、正常血液のみならずヘパリ
ンが含有される血液も短時間のうちに凝固させるととも
に、安定性に優れる。さらに、凝固状態が安定に保た
れ、血清と血餅との分離が容易となるため、分離採取さ
れた血清中に血餅成分が混在することもない。血餅成分
の収縮度合いも十分であるため、血清収率も高い。従っ
て、本発明の血液凝固促進剤及び血液検査用容器は、通
常の血液検査だけでなく、ヘパリン投与を受けている人
工透析患者や血栓症患者の血液検査における血清の分取
に好適に用いられる。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ペプチド鎖において、Ａｒｇと任意のアミ
   ノ酸残基との結合及び／又はＬｙｓと任意のアミノ酸残
   基との結合を加水分解しうる加水分解酵素、並びに分子
   内にアミノ基とカルボキシル基を有する化合物及び／又
   はポリオールを含有することを特徴とする血液凝固促進
   剤。
2. 【請求項２】さらに、アミン塩及び／又は第４級窒素を
   有する有機化合物を含有することを特徴とする請求項１
   記載の血液凝固促進剤。
3. 【請求項３】上記分子内にアミノ基とカルボキシル基を
   有する化合物が、アミノメチル−シクロヘキサンカルボ
   ン酸、グリシン、アルブミンよりなる群から選ばれる少
   なくとも１種であることを特徴とする請求項１又は２に
   記載の血液凝固促進剤。
4. 【請求項４】請求項１〜３のいずれか１項に記載の血液
   凝固促進剤が内部に収容された血液検査用容器。