JPS6383670A - 血液検査用容器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は血液検査用容器、特にヘパリン投与を受けてい
る患者から得らｈる血液検体の凝固を促進することの出
来る血液検査用容器に関する。

（従来の技術） 検査技術の目覚ましい進歩とあいまって血清生化学検査
、血清免疫学検査、血球検査などの血液検査が広く普及
し、病気予防や早期診断に役立っている。血液検査の多
くは血清検査であり、その検査に要する血清は、通常、
血液検査用容器に採取した血液を凝固させた後、遠心分
離によって、比重の異なる血餅（フィブリンと血球が混
合したゲル様塊状物）から分離し、ピペットを用いて、
あるいはデカンテーシヨンにより採取している。

被験者から採取された血液が凝固するには比較的長時間
を必要とする。例えば、血液凝固時間が比較的短いとさ
れるガラス製検査容器を用いても血液が凝固するまでに
４０〜６００を必要とし、合成樹脂製検査容器を用いる
と、実に４時間以上の放置時間が必要となる。そのため
、検査に必要な血清を迅速に確保できないという欠点を
有する。これは、特ｒ−緊急に検査を実施する必要のあ
る場合に間■となる。

このように、従来の血ｌｌｔ什収法によれば、血液凝固
に長時間を要するという問題のほか、凝固した全血を遠
心分離にかけて分離するときに血清と血餅とが良好に分
離しにくいという問題もある。分離状態が悪いと、血清
部分なピペットで吸い上げる場合および／もしくけデカ
ンチーシランを行う場合に、たとえ細心の注意を払って
も、赤血球の混入が避けられない。その結果、臨床検査
結果に悪影響をおよぼしたり、再度遠心分離する必要を
生じる。

人工透析を受けている患者や血栓症患者の血液検体をあ
つかう場合は、さらに、別の問題が生じる。このような
患者は、血栓防止のためにへ／（リン投与が行われるた
め、血液１０１ｎ！あたり１〜２０単位のへ）曵リンが
存在する。このへノ嘴リンは、血液中のアンチトロンビ
ン■と結合して、トロンビンの作用を著しく阻害する。

さらに、第ＸＩＩ因子などの血液凝固因子の作用をも阻
害するといわｈている。そのため、フィブリノーゲンの
フィブリンへの転化が起こらず、その結果、血液が凝固
しない。それゆえ、血清の分取が困難となる。

こｈらの問題を解消するため、発明者は、（ａ）下記一
般式（１）で示さｈｌかつ、該式中の隣接するカルボニ
ル基が実質的に同一平面上に存在する環式有機化合物と
（ｂ）アミン塩および／または、第４級窒素を有する有
機化合物とを含有する血液凝固促進剤を提案した（特開
昭６０−２７８５８号公報）。

（ここで、Ａｆｌ環式化合物の残基を示す）。

（１）式で示される化合物としては、例えば、没食子酸
アルキルエステル酸化物、エラジン酸酸化物などが挙げ
らｈる。アミン塩および／または第４級窒素を有する有
機化合物としてはアルキルアミン塩酸塩などが用いられ
る。これらの化合物を含有する血液凝固促進剤を用いる
と、含有される上記アミン塩などがヘパリンを吸着・中
和して不活性化し、かつ（Ｉ）式で示される化合物が血
液中の血液凝固第ＸＩＩ因子を活性化して短時間で血液
を凝固させることができる。

しかしながら、凝固後時間が経過すると血漿中に存在す
る分解酵素の作用により、フィブリンの凝固塊が溶解さ
れ始めることになり、従って凝固後の経時的な安定性に
ついての問題点が残されていた。

（発明が解決しようとする問題点） 発明者は上記血液凝固促進剤をさらに検討し、ヘノ曵リ
ンを含有しない血液のみならず、ヘノ曵リンを含有する
血液をも速やかに凝固させることが出来、さらに凝固後
における安定性をも向上させうる血液検査用容器の開発
を試みた。本発明の目的は、ヘパリン含有の有無にかか
わらず血液を速やかｒ−凝固させ得ることが出来、凝固
後の安定性も良好でかつ血清分離性のよい血液検査用容
器を提供することにある。

（問題点を解決するための手段および作用）本発明の血
液検査用容器は、（、）下記一般式で示され、かつ、該
式中の隣接するカルボニル基が実質的に同一平面上に存
在する環式有機化合物（１）を配位子とする金属錯体、
（ｂ）アミン塩および／または第４級窒素を有する有機
化合物と、（Ｃ）抗線溶剤又は抗プラスミン剤を含有す
る血液凝固促進剤を内部に存在させており、そのことに
より上記目的が達成される。

（ここで、ＡＶｉ環式化合物の残基を示す）。

本発明において用いられる血液凝固促進剤の１成分であ
る金属鉛体の配位子である上記（１）式で表される化合
物は、同素環式化合物であっても異部環式化合物であっ
てもよく、また、早々式化合物であっても、多環式化合
物であってもよい。このような環式化合物としては、上
記２個のカルボニル炭素を含む環が６員環またＶｉ５員
環であることが好ましい。

同案環式化合物のうち好ましい６員環式化合物としては
下記一般式（６）で示される０−キノン環を有する化合
物が挙げらｈる。

ｔ Ｒ。

（ここで、Ｒ％Ｒ，ＲおよびＲは、水素、炭化水素基、
極性置換基または多環式化合物における残基を示す）。

上記式において炭化水素基は特に限定さｈないが、アル
キル基、特に炭素数１〜１８のアルキル基が好ましい。

極性置換基も特に限定されない。例、ｔば、カルボキシ
ル基、カルボン酸エステル基、水酸基、アミノ酸、メル
カプト基などがある。０−キノン環を有する化合物とし
ては、０−キノンをはじめ、下記式（至）〜（６）で示
さｈる化合物が挙げら九る。

没食子酸アルキルエステル酸化物 Ｈ （ここで、Ｒ６はアルキル基を示す。）エラジン酸部分
酸化物 リ ニラジン酸完全酸化物 １・４−ジ（３・４−ジヒドロキシフェニル）２拳３−
ジメチルブタン部分酸化物 ＨｏＣＨ３ＣＨ３ （Ｍ） ｌ・４−ジ（３−４−ジヒドロキシフェニル）２・３−
ジメチルブタン完全酸化物 同素環式化合物のうち５員環式化合物の好ましい具体例
としては、下記式（１１）で示される１・２・３−トリ
ケトヒドロインデンが挙げられる。

異部環式化合物としては、例えば、次の一般式（ｆｆ）
で示される化合物が挙げられる。

Ｉ （ここで、Ｒ６は水素、炭化水素または多環式化合物に
＄ける残基を示し、Ｒ４およびＲｅは水素、炭化水素基
、極性置換基または多環式化合物における残基を示す。

炭化水素基詔よび極性置換基については（■）式と−同
様である。） （ｒｌ）式で示される化合物の好ましい具体例としては
、例えば、次式で表されるイサチンがある。

錯体な形成する金属は、０、〇−配位性を有するアルカ
リ金属以外の金属である。特ｔこＦｅ、Ｃｏ。

Ｎｉ、ＡＩ　などを含む錯体が取り扱いが容易であるた
め好適である。本発明に用いられる金属錯体は上記配位
子となる化合物（Ｉ）に上記金属イオンを含む塩溶液、
例えば塩酸塩、硫酸塩などの水溶液を単独で或はこれら
の水溶液を混合して加えることにより、反応生成物とし
て得ることが出来る。

該反応生成物は、溶液のＰＨを適宜Ｓ、７整することに
より、沈澱物として取り出し、これを使用することも出
来るが、溶液状態のまま使用することも可能である。例
えば、没食子酸プロピル酸化物の鉄錯体は、 釦赤床廿；没食子酸プロピル酸化物を含む溶液に塩化第
二鉄溶液を混合することにより得られる。このような金
属錯体には、錯体内部の電気的中性を保つためにハロゲ
ン根、硫酸根、硝酸根、アンモニウム根の１種または２
種以上を含む配位子が含有されていてもよい。水が配位
子としで含有されていてもよい。

本発明において用いられる血液凝固促進剤に含有される
アミン塩および／または第４級屋素を有する有機化合物
はヘパリンを吸着・中和して不活性化するヘパリン中和
剤として作用する。アミン塩を構成するアミンは第１級
、第２級および第３級アミンのいずれでもよ（、アミン
塩を構成する酸も無機酸および有機酸のいずれてもよい
。無機酸としては、塩酸などのハロゲン化水素酸、硫飯
、亜硫酸などがあり、有機酸としてはキ酸、酢酸などが
ある。アミン塩の有機残基は通常アルキル基であるが、
イミノ基やエーテル基などの異種元素を含む炭化水素基
であってもよい。アミン塩は、分子内塩であってもよい
。

好ましいアミン塩の具体例としては、例えば、（ＸＩ）
式で表されるヘキナデシルジメチルアミン塩酸塩や、　
（Ｘｌｌ）式で表されるテトラデシルジ（アミノエチル
）グリシンがある。

Ｃ＋ｓ　Ｈａｓ　−ＮＨ（ＣＨＩ　）　２・ＣＩ　　　
　　（ＸＩ）ＣｕＨｕＮＨＣＨｚＮＨｚＮＨＣＨ２ＣＨ
ｇＮＨｘＣＨ２ＣＯＯ（ＸＩ　Ｉ　）：５４級窒素を有
する有機化合物には、例えばテトラアルキルアンモニウ
ムがある。アルキル基の代わりにアリール基を有する化
合物やイミノ基、エーテル基なとの異種元素を含む炭化
水素基を有する化合物であってもよい。好ましい具体例
としては、例えば（ＸＩＩＩ）式で表されるドデシルト
リメチルアンモニウムクロライドがある。

Ｃ＋ｚＨｚｓＮ（ＣＨｓ）ｍ−ＣＩ−（Ｘｌｌｌ）この
ような比較的低分子試の化合物のほか、第４級窒紫を有
する有機重合体も利用されうる。このような重合体とし
ては、一般式（ＸＩＶ）で表される縁り返し単位を有す
るポリカチオンが挙げられる。

（ここで、Ｒｓ〜ＲＩ２は水素またはアルキル基、Ｘは
ハロゲン根または酸根、Ｙはアルキレン基または−アル
キレン基−８Ｏ！−を示し、上記単位の繰り返し数は５
〜２０００である。） （ＸＩＶ）で示される化合物のうち、特に（ＸＶ）また
は（ＸＶＩ）で表される繰り返し単位を有するポリカチ
オンが好適である。

一方、抗線溶剤又は抗プラスミン剤としては、従来より
臨床で用いられているアプロチニン、大豆トリプシンイ
ンヒビター、ε−アミノカプロン６１２、Ｐ−アミノメ
チル安息香酸、アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸
などを単独であるいは適宜組合わせて用いればよい。

本発明において、血液凝固促進剤は血液１ｍｔあたりＩ
　Ｘ　１Ｏ−１Ｏ〜Ｉ　Ｘ　１０−１　ｇ　（７）割合
テ使用すレル。

過少であると血液凝固促進効果が得られない。過剰であ
っても使用態に応じた効果は得られない。

又、本発明で用いられる血液凝固促進剤においては、前
記環式有機化合物１００重量部に対し、前記アミン塩又
は第４級窒素を有する有機化合物か５〜１０，０００重
量部の割合で含有されるのが血液の凝固促進の点で好ま
しく、又、抗線溶剤又は抗プラスミン剤は臨床上の推奨
量で用いるのが好ましい。例えば、アプロチニンは血液
１ｍｔあたり約１００〜６００　Ｋ　Ｉ　Ｕ　（、単位
）の使用量で、大豆トリプシンインヒビターは血［１ｍ
ｔあたり約５００〜４０００ＦＵ（単位）の使用ユで、
又、ε−アミノカプロン酸、Ｐ−アミノメチル安息香酸
やアミノメチルシクロへ牛サンカルボン酸については、
血液１ｍｔあたり約１０−２〜１０”ｇの使用量で用い
るのが好ましい。

本発明の血液検査用容器はガラス製であっても樹脂製で
あってもよい。

血液凝固促進剤を血液検査用容器の内部に存在させるに
は粉末状のものを、あるいは適当な溶媒に溶解もしくは
分散させたものを容器に収容するか、または容器内壁面
に塗布すればよい。

高濃度の血液凝固促進剤が血液と接触して蛋白成分を変
性させるのを避けるために、血液凝固促進剤を比表面積
の大きい担体に担持させ、これを容器に収容することも
可能である。

このような担体としては、血液検査に有害な影響を与え
ず、大きい比表面積を有するものであれば、特に限定さ
れない。例えば、不織布、織布、Ｗ脂ビーズなどが好適
に用いられる。このような担体に上記血液凝固促進剤を
担持させるには、例えば、その溶液や分散液を担体に塗
布したり、溶液や分散液中に担体を浸漬して含浸させた
後、乾燥させる。アラビアゴムなどの適宜の助剤を含む
血液凝固促進剤の水分散液を調製し、これを急速凍結乾
燥して血液凝固促進剤担持粒子状物を得ることもできる
。

本発明の血液検査用容器にヘパリンを含有する血液を採
取すると血液中のヘパリンが、アミン塩などの中和剤に
吸着・中和されて沈澱するためヘパリンのトロンビンや
第Ｘｌｌ因子に対する阻害作用がなくなる。そのため、
血液は正常な凝固機能を回復する。さらに、血液凝固促
進剤に含有される金属錯体は血液中の第Ｘｌｌ因子に作
用してこれを活性化させる能力を有する。第Ｘｌｌ因子
の活性化により短時間のうちに連鎖反応的に血液凝固が
進行し、最終的にはプロトロンビンの活性化によって生
成されたトロンビンがフィブリノーゲンに作用し、不溶
性のフィブリン網を形成して血液凝固が完了する。血液
凝固に要する時曲は血液凝固促進剤中の金属錯体や中和
剤のｄ類、血液凝固促進剤の量、使用する容器の材質、
血液中のヘパリンの量などにより異なるが、合成樹脂製
容器を用いると通常、２０〜４０分である。さらに、抗
線溶剤又は抗プラスミン剤は、血液の凝固反応過程で拮
抗的に生成してくるプラスミンのフィブリン分解作用を
阻害し、凝固を確実なものとし、又、凝固後においても
凝固状態を安定に保つことが出来る。このように、正常
血液のみならずヘパリンが含有される血液も短時間のう
ちに凝固させることが出来、凝固後の状態を安定に保ち
つる。さらに、血清と血餅との分離が容易となるため、
分離採取された血清中に血餅成分が混在する問題も解消
される。血餅成分の収縮度合も充分であるため、血清収
率も高い。

本発明の血液検査用容器に用いられる血液凝固促進効果
主要な成分として金属錯体が用いられているため、発明
者が先に開発した血液凝固促進剤に含有される環式有機
化合物（１）に比べて、さらに熱安定性に優れて怠り、
オートクレーブ滅菌等により、その効果が損われること
がなく、長期間の保存性も良好である。又、上記環式有
機化合物を血液凝固促進剤に用いたときには、血液中の
金属成分と錯体を形成し血清成分に変化を与えるｔそれ
があるが、本発明の血液凝固促進剤に含有される化合物
は血液中の金属成分と反応することがないため、より正
確な検査値が得られる。

本発明の血液検査用容器は、真空採血管としても利用さ
れ得る。真空採血管は、血液凝固促進剤を存在させた容
器内部を排気し、密封性に優れた栓、たとえばブチルゴ
ム製の栓で密封することにより調製される。

（実施例） 以下に本発明を実施例につき説明する。

実施例１ エラジン酸酸化物（前記（マ）式で示される化合物）の
鉄錯体とポリカチオン（（ＸＶＩ）式で示される化合物
）とアプロチニンとを含む水分散液をポリエステル系不
織布に含浸させ、充分に乾燥させた。

不織布ｌ−あたりの上記各成分の艦はいずれも４Ｘ　１
０−４ｇ　、　４　Ｘ　１０−４ｇ、　５００ＫＩＵで
あった。該不織布１ｃＩＫを５ｍｔポリエチレン裂スピ
ッツに収容したものを調整した。該血液検査容器に、ヘ
パリンをＬ　ＯＩＵ／ｍｔの濃度で含有する入断鮮血２
ｒｎｔを注入し、緩やかにかき混ぜた後、２０Ｃで放置
した。放置１時間後、及び３０時間後の血清を分取し、
フィブリノーゲン及びフィブリン分解産物（以下ＦＤＰ
と略す。）の測定を行なった。この結果を第１表に示す
が、１時間後と３０時間後のＦＤＰ測定値に差異がなく
、血餅の分解反応がよく抑制されていることがわかる。

実施例２〜１０、比較例の結果も合わせて第１表に示す
。

実施例２ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物の鉄錯体とテトラデシルジ
（アミノエチル）グリシンおよびアプロチニンとをそれ
ぞれα５重ｆｆ１９６、ｑ５重量％および１００ＯＯＫ
ＩＵ／ｒｒＬｔの濃度で含有する生理食塩水分散液を調
製した。該分散液５０μｔを市販の５ｒｎＬポリエチレ
ン製スピツツに収容し、乾燥させたものを調製した。該
スピッツにヘパリンをＬＯＩＵ／ｍＡの濃度で含む入断
鮮血２ｍＡを注入し、実施例１と同様に処理し評価を行
った。

実施例３ イサチンの鉄錯体１ｇｓヘキサデシルジメチルアミン塩
酸塩α４ｇ１アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸５
０ｍｇおよび平均粒径Ｌ５麿のポリスチレンビーズ担体
１に９を少量のエタノールを分に収容したものを調製し
た。該スピッツにヘパリンをＬ　ＯＩＵ／ｍｔの！１度
で含有する入断鮮血２ｍｌを注入し、実施例１と同様に
処理し、評価を行った。

実施例４ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物の鉄錯体、テトラデシルジ
（アミノエチル）グリシンおよびアプロチニンの代わり
にＯ−キノンの鉄錯体、ポリカチオン（（ＸＶ）式で表
わされる化合物）およびε−アミノカプロン酸を各々へ
５重量％、α５ｆｆｉ量％、詔よびαＩＭ量％の割合で
用いたこと以外は実施例２と同様にした。

実施例５ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物の鉄錯体、テトラデシルジ
（アミノエチル）グリシンおよびアプロチニンの代わり
に、１・２・３−トリケトヒドロインデンの鉄錯体、ポ
リカオチン（（ＸＶＩ）式で示される化合物）詔よびε
−アミノカプロン酸を用いたこと以外は実施例２と同様
にした。

実施例６ テトラデシルジ（アミノエチル）グリシンの代わりにド
デシルトリメチルアンモニウムクロライドを用いたこと
以外は実施例２と同様にした。

実施例７ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物の鉄錯体およびテトラデシ
ルジ（アミノエチル）グリシンの代わりに１の４−ジ（
３−４−ジヒドロキシフェニル）２・３−ジメチルブタ
ン酸化物の鉄錯体およびポリカチオン（（ＸＶ）式で示
される化合物）を用いたこと以外は実施例２と同様にし
た。

実施例８ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物の鉄錯体およびテトラデシ
ルジ（アミノエチル）グリシンの代わりにエラジンＩ！
！酸化物（マ）のコバルト錯体およびポリカチオン（（
ＸＶ）式で示される化合物）を用いたこと以外は実施例
２と同様にした。

実施例９ 没食子酸ｎ−プロピルθ化物の鉄錯体およびテトラデシ
ルジ（アミノエチル）グリシンの代わりにエラジン酸酸
化物（ｆ）のニッケル錯体右よびポリカチオン（（Ｘｖ
）式で示される化合物）を用いたこと以外は実施例２と
同様にした。

実施例１０ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物の鉄錯体＄よびテトラデシ
ルジ（アミノエチル）グリシンの代わりにエラジン酸酸
化物（マ）のアルミニウム錯体詔よびポリカチオン（Ｃ
ＸＶ）式で示される化合物）を用いたこと以外は実施例
２と同様にした。

比較例１ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物の鉄錯体とテトラデシルジ
（アミノエチル）グリシンをそれぞれへ５重量％、α５
重麓％の濃度で含有する生理食塩水分散液を調製した。

該分散液５０μｔを市販の５αポリエチレン製スピツツ
に収容し、乾燥させた。

該スピッツにヘパリンをＬ　ＯＩＵ／ｍｔの濃度を含む
大所鮮血２ｍｔを注入し、実施例１と同様に処理し評価
を行った。

実施例１１ 各実施例１〜ｌＯにおける血液検査用容器の調整と該容
器への入断鮮血の注入を行い、緩やかに攪拌後、２０σ
で放置して、全血が完全に流動しなくなるまでに要する
時間、すなわち血液凝固時間を測定した所、いずれの実
施例でも３５〜４０分で凝固した。又、血液凝固後、直
ちに３０００回転／分の回転速度で５分間遠心分離し、
血清分離状態を観察すると共にピペットによる血清の採
取状況を調べた所、いずれの実施例においても血清分離
性及び血清収量は良好な結果を示した。

（発明の効果） 本発明によれば、このように、通常の血液検体のみなら
ずヘパシンを含有する血液をも速やかに凝固させうる血
液検査用容器が得られる。血清と血餅との分離状態も良
好であり、しかも、血液凝固促進剤が血清成分を変化さ
せることがないため、血清を用いた各種検査の検査値が
常時正確かつ安定に得られつる。血液凝固促進剤に含有
される金属ね体は比較的熱に安定であるため、血液凝固
促進剤の長期保存も容易である。さらに凝固後に３ける
凝固状態を安定に保つことか出来る。このような血液検
−容器は、ヘパリン投与を受けている人工透析患者や血
栓症患者の血液検査時の血清の分取に好適に用いられる
。

以　　上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、（ａ）下記一般式で示され、かつ、該式中の隣接す
   るカルボニル基が実質的に同一平面上 に存在する環式有機化合物（ I ）を配位子とする金属
   錯体、 （ｂ）アミン塩および／または第４級窒素を有する有機
   化合物、および （ｃ）抗線溶剤又は抗プラスミン剤を含有する血液凝固
   促進剤を内部に存在させたことを 特徴とする血液検査用容器。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （ここで、Ａは環式化合物の残基を示す）。