KR950006614B1 - 혈액응고 촉진방법 - Google Patents

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Abstract

내용 없음.

Description

혈액응고 촉진방법
본 발명은 혈액응고 촉진방법에 관한 것으로, 특히, 혈액응고 제XII인자를 포함한 세린 프로티아제 전구체의 활성화를 촉진하는 것과 상기 전구체의 활성화에 의해 생산된 세린 프로티아제 효소활성 촉진제 또는 이를 포함하는 조성물을 사용하는 혈액응고 촉진방법에 관한 것이다.
혈청 생화학 검사, 혈청 면역학 검사 및 혈구 검사를 포함한 혈액검사의 확산과 함께 검사기술의 현저한 향상은 질병의 예방과 조기진단에 크게 기여하고 있다. 대부분의 혈액검사는 혈청검사이며, 이러한 검사에 필요한 혈청은 일반적으로 혈액검사용 용기에 수집하고, 정치하여 응고시킨 다음, 원심 분리하여 혈청보다 비중이 다른 혈병(혈구와 피브린의 혼합물인 겔상 물질)으로부터 분리하고, 혈청을 피펫을 사용하거나 또는 경사분리로 수집하여 얻을 수 있다.
피검자로부터 수집된 혈액이 응고되기까지는 비교적 장시간이 소요된다. 예를 들면, 혈액을 비교적 짧은 시간내에 응고시키는 유리제 검사용기를 사용하더라도 응고되기까지는 40 내지 60분이 소요되며, 만약 합성수지로 만든 검사용기를 사용하면 용기를 4시간 이상 정치하여 두어야 한다. 이러한 이유로, 검사에 필요한 혈청을 신속하게 얻을 수 없다는 문제점이 있었다. 이것은, 특히 긴급하게 검사하여야 될때에 문제가 된다.
이 때문에, 혈액을 신속하게 응고시키기 위한 혈액응고 촉진제가 사용되고 있다. 제XII인자는 혈액응고에 관계되는 단백질 가수분해 효소(세린 프로티아제) 전구체의 어느 하나의 형태이고, 이것이 활성화됨으로써 혈액중의 다른 혈액응고 인자가 연쇄적으로 활성화되어 혈액이 응고되기 시작한다. 제XII인자의 활성촉진제로서는 통상적으로 유리, 카올린, 벤토나이트, 실리카 및 다른 무기 미립자 또는 콜로이드입자 그리고 엘라그산이 알려져 있다. 또한 이들은 응고기능 검사의 한 종류인 활성화 부분 트롬보프라스틴 시간(APTT)을 측정하기 위한 시약의 한 성분으로도 사용된다. 그러나, 이들을 혈액 응고 촉진제로 사용하여도 이들의 순도와 조성의 차이에 의해 혈액 응고시간과 같은 시험에 대한 결과치가 일관성이 없게된다. 또한, 이들 혈액응고 촉진제를 사용하여 혈액을 응고시키면 혈액혈청과 혈병의 분리효과는 불완전하며, 따라서 혈청을 얻기 위해 원심분리를 하면 혈병의 일부 성분이 혈청중에 혼재하게 되는 단점을 갖게 되는 것이다.
혈액투석을 받는 환자나 또는 혈전증을 가진 환자의 혈액으로부터 혈청을 얻을 경우에 또 다른 문제가 발생한다. 이러한 환자에게는 혈병의 생성을 방지하기 위해 헤파린을 투여하기 때문에, 이들 혈액 10ml당 1내지 20단위의 헤파린이 존재하게 된다. 이 헤파린은 혈액중의 항트롬빈 Ⅲ과 결합하여 트롬빈의 효과를 강력히 억제한다. 또한 헤파린은 제XII인자를 포함한 혈액응고 인자의 효과를 억제하는 것으로 알려져 있다. 이러한 이유 때문에, 피브리노겐은 피브린으로 전환되지 않으며, 따라서 혈액은 응고하지 않게 된다. 비록 상기에서 언급한 혈액응고 촉진제가 가해진 경우에도 혈액은 실제로 응고되지 않으며, 따라서 혈청을 얻기가 어렵게 된다.
상기한 문제점을 해소하기 위하여, 본 발명의 발명자는 일본국 특허출원공개 (소)60-115519호 공보에서 카르보닐기가 실질적으로 동일 평면상에서 상호 인접된 구조인 다음 일반식(Ⅰ)을 가지는 유기 환식 화합물을 제안하였으며, 이 화합물이 혈액응고 촉진제로 사용될 수 있는 가수분해 효소 활성 촉진제로 유용하다는 것을 제시하였다.
Figure kpo00001
(단, A는 환식 화합물의 잔기를 나타낸다.)
상기한 화합물의 예로서는 산화된 알킬 갈레이트, 산화된 엘라그산 등이 있다. 이들 화합물은 혈액응고 제XII인자를 비효소적으로 활성화시키며, 혈액이 비교적 짧은 시간내에 응고되도록 한다. 얻어지는 효과는 통상적인 혈액응고 촉진제를 사용함으로써 얻을 수 있는 것보다 더 강하다. 또한 발명자는 이들 화합물이 주성분이거나 또는 여러 종류의 첨가제가 이들 화합물에 첨가된 혈액응고 촉진제를 제안하였었다. 예를 들면 혈액응고를 더욱 증진시키는 공촉진제(Co-accelerator)로서 단백질 가수분해 효소를 함유하는 혈액응고 촉진제에 대하여 이미 특허출원(일본국 특허출원공개 (소)60-174952호 공보)하였으며, 헤파린을 공급받는 환자의 혈액중의 헤파린이 중화되도록 헤파린 중화제를 함유하는 혈액응고 촉진제에 대하여 이미 특허출원(일본국 특허출원공개 (소)60-27858호 공보)하였다.
트립신, 트롬빈 및 카텝신 B를 포함하는 모든 종류의 프로티아제가 혈액응고를 촉진하기 위한 단백질 가수분해효소로 사용될 수 있다. 이들 단백질 가수분해효소는 혈액중의 혈액응고 인자의 활성화를 촉진시키는 작용을 하며, 혈액은 급속히 응고된다. 상술한 헤파린 중화제로서는 알킬아민 염산염을 포함하여, 아민염 및/또는 4급 질소를 가지는 화합물을 사용할 수 있다. 이러한 화합물을 함유하는 혈액응고 촉진제를 사용하면 상술한 아민염 등이 헤파린을 흡착하고, 중화하여 헤파린을 불활성화시키며, 더 나아가, 일반식(Ⅰ)의 구조를 갖는 화합물은 혈액중의 혈액응고 제XII인자를 활성화시켜, 단시간 내에 혈액을 응고시킬 수 있다.
상술한 바와 같이, 일반식(Ⅰ)의 화합물을 주성분으로 함유하는 혈액응고 촉진제를 사용함으로써 건강한 사람 또는 헤파린이 투여된 환자로부터 채취한 혈액으로부터 단시간내에 응고된 혈액으로부터 혈청을 얻을 수 있게 되었다. 혈액이 응고되는데 소용되는 시간에는 큰 차가 없다. 그러나 일반식(Ⅰ) 구조의 화합물은 혈액의 일부 성분과 상호 작용하고, 임상 실험으로부터 얻은 자료에 영향을 미치고 있어서 혈액응고 촉진제의주성분으로서 일반식(Ⅰ)의 화합물의 사용은 한정되게 된다.
상기한 선행 기술의 단점을 해소시키기 위하여, 본 발명은 다음 일반식(Ⅰ)로 표시되며, 실질적으로 동일 평면상에 상호 인접한 카르보닐기를 가지는 착체의 리간드 화합물인, 0,0-리간드 하나이상과 배위 결합을 형성할 수 있는, 알칼리금속 이외의 금속을 함유하는 금속 착체와 ;
Figure kpo00002
(단, A는 환식 화합물의 잔기를 나타낸다.) :
약학적으로 허용되는 담체를 포함하여 이루어지는 가수분해 효소 활성 촉진제 조성물을 혈액과 접촉시키는 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법을 제공한다.
본 발명은 또한 다음 일반식(Ⅰ)로 표시되며, 실질적으로 동일 평면상에 상호 인접한 카르보닐기를 가지는 착체의 리간드 화합물인, 0,0-리간드 하나이상과 배위 결합을 형성할 수 있는, 알칼리금속 이외의 금속을 함유하는 금속 착화합물을, 비표면적이 큰 담체 존재하에서, 혈액과 접촉시키는 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법을 제공한다.
Figure kpo00003
(단, A는 환식 화합물의 잔기를 나타낸다.)
바람직한 실시형태에서 가수분해효소가 세린 프로티아제이다. 또한 바람직한 실시형태에 가수분해효소가 혈액응고 제XII인자이다.
본 발명의 혈액응고 촉진제는 상술한 가수분해효소 활성촉진제를 함유한다.
바람직한 실시형태에서 혈액응고 촉진제는 공촉진제로서 가수분해효소를 더욱 함유하며, 가수분해효소는 펩티드 쇄상의 알기닌과 어느 아미노산 잔기와의 결합을 또는 라이신과 어느 아미노산 잔기와의 결합을 가수분해할 수 있는 효소이다.
바람직한 실시형태에서, 상기한 혈액응고 촉진제에 함유되는 가수분해효소는 세린 프로티아제, 티올 프로티아제 및 금속 프로티아제로부터 선택된 1종 이상의 효소이다.
바람직한 실시형태에서, 혈액응액 촉진제는 아민염 및/또는 4급 질소를 가지는 유기화합물을 추가로 함유한다.
또한, 바람직한 실시형태에서, 혈액응고 촉진제에는 항피브리놀리시스제 및/또는 항 플라스민제가 추가로 함유된다.
이러한 이유로 인하여, 본 발명에 의하면,
(1) 우수한 혈액응고 촉진제가 될 수 있는 가수분해효소 활성촉진제를 제공하는 목적이 가능하고,
(2) 상술한 가수분해효소 활성촉진제를 용이하게 제조하고 정제할 수 있으며,
(3) 비교적 열에 대해 안정하기 때문에 장기간 저장할 수 있는 가수분해효소 활성촉진제를 얻게되고,
(4) 가수분해효소 활성촉진제를 함유하여 단시간 내에 혈액응고를 촉진시키는 혈액응고 촉진제를 제공하게 되며,
(5) 혈청과 혈병의 양호한 분리 효과를 주고, 혈병으로부터 혈청을 고수율로 분리시키는 혈액응고 촉진방법을 제공하며,
(6) 혈청을 모든 종류의 생화학 실험과 임상실험에 사용할때 신뢰도를 가지고 항상 정확한 결과를 제공할 수 있도록 혈청을 변화시키지 않는 혈액응고 촉진방법을 제공하며,
(7) 비록 혈액이 헤파린을 함유하더라도 신속한 응고를 증진하고, 응고후 까지도 안정하고 혈청을 우수하게 분리할 수 있는 혈액응고 촉진방법을 제공하는 등의 목적을 달성할 수 있다.
본 발명의 가수분해효소 활성촉진제 조성물에 함유되는 금속착체인, 일반식(Ⅰ)로 표시되는 화합물은 동원소 환식 화합물 또는 이종원소 환식화합물이 될 수 있으며, 또한 그들은 단환식 또는 다환식 화합물일 수도 있다.
Figure kpo00004
(단, A는 환식 화합물의 잔기를 나타낸다.)
이들 환식화합물로서는 일반식(Ⅰ)로 표시되는 두개의 카르보닐기를 함유하는 육원자환 또는 오원자환이 바람직하다.
동원소 환식화합물중에서 바람직한 육원자 환식화합물로는 일반식(Ⅱ)로 표시되는 o-퀴논을 가지는 화합물을 들수 있다.
Figure kpo00005
여기서, R1, R2, R3및 R4는 독립적으로 수소, 탄화수소, 극성기 또는 다환식화합물 잔기를 나타낸다.
일반식(Ⅱ)는 탄화수소에 한정되지 않으며, 알킬기 그리고 특히 1 내지 18개의 탄소원자를 가지는 알킬기가 바람직하다. 극성 치환기의 예로는 카르복실기, 카르복실산 에스테르, 히드록실기, 아미노산, 메르캅토기 등이며, 그러나 이들에만 한정되는 것은 아니다. o-퀴논 환을 가지는 화합물로서는, o-퀴논 그리고 다음 일반식(Ⅲ) 내지 (Ⅶ)로 표시되는 다른 화합물을 들수 있다.
[산화된 알킬갈레이트]
Figure kpo00006
(여기서 R5는 알킬이다.)
[부분 산화된 엘라그산]
Figure kpo00007
[완전 산화된 엘라그산]
Figure kpo00008
[부분 산화된 1,4-디(3,4-디히드록시페닐)2,3-디메틸부탄]
Figure kpo00009
[완전 산화된 1,4-디(3,4-디히드록시페닐)2,3-디메틸부탄]
Figure kpo00010
동원소환식 화합물에 속하는 오원환식 화합물의 바람직한 예는 다음 구조식(Ⅷ)로 표시되는 1,2,3-트리케토히드로인덴이다.
Figure kpo00011
이종원소 환식 화합물로서는 예를 들면 다음에 표시한 일반식(Ⅸ)의 화합물을 들수 있다.
Figure kpo00012
여기서, R6는 수소 또는 탄화수소, 다환식화합물 부분이고, R7과 R8은 독립적으로 수소, 극성기 또는 여러 환식화합물 부분이다. 탄화수소와 극성기는 일반식(Ⅱ)으로 기술한 바와 같다.
일반식(Ⅸ)로 표시한 화합물의 바람직한 예는 다음에 표시한 이사틴이다.
Figure kpo00013
착화합물을 형성하는 금속은 알카리금속을 제외한 0,0-리간드를 가지는 금속이다. Fe, Co, Ni, Al등을 함유한 착화합물은 취급하기가 용이하므로 이들이 바람직하다.
본 발명의 가수분해효소 활성 촉진제인 금속 착화합물은 상기한 금속이온을 함유하는 염용액을 상술한 리간드가 되는 화합물(Ⅰ)에 가하여 수득할 수 있다. 예를 들면, 염산염, 황산염 등의 수용액을 단독으로 가함으로써, 또는 이들 수용액의 혼합물을 가함으로써 금속 착화합물을 반응생성물로서 수득할 수 있다. 이 반응생성물은 용액의 pH를 적절히 조정함으로써 침전물로서 회수되며, 반응생성물을 용액의 형태로 사용할 수도 있다. 예를 들면, 산화된 프로필갈레이트-철 착화합물은 산화된 프로필갈레이트를 함유한 용액과 염화철 용액의 혼합물로부터 얻어진다.
이러한 금속 착화합물에는 할로겐 라디칼, 황산 잔기, 질산잔기 및 암모늄 잔기중의 1종 이상을 함유하는 리간드가 존재할 수 있으며, 물도 상기 리간드에 포함시킬 수 있다.
본 발명의 혈액응고 촉진제는 상술한 가수분해효소 활성촉진제 이외에 다른 가수분해효소를 공촉진제로 함유할 수 있다. 이 가수분해효소는 펩티드 쇄상의 알기닌과 어느 아미노산 잔기 또는 라이신과 어느 아미노산 잔기와의 결합을 가수분해할 수 있는 프로티아제이다. 이러한 프로티아제의 예로는 트립신, 트롬빈, 사독 트롬빈-유사 효소 등과 같은 세린 프로티아제, 카텝신 B와 피신 등과 같은 티올 프로티아제, 키나아제(Ⅰ)등과 같은 금속 프로티아제가 있다. 특히, 세린 프로티아제가 사용하기에 적합하다. 이들 프로티아제를 단독으로 사용해도 혈액응고 촉진작용을 가지며, 상술한 가수분해효소 활성촉진제(금속 착화합물)와 함께 공촉진제로서 사용하면 혈액응고의 활성화는 더욱 빨라진다.
상술한 가수분해 효소를 함유할때에는, 금속 착화합물 100중량부에 대하여 상기 효소(101~1010단위) 10-2~107중량부의 비율로 포함시킨다. 효소가 너무 적게 포함되더라도, 금속 착화합물이 존재하는 경우에는, 혈액응고는 촉진되나, 상술한 비율로 효소가 제공된 경우와 비교하면 그 효과는 매우 적다. 만약 과잉 첨가하면, 상술한 비율로 얻을 수 있는 효과 만큼 얻어지지 않는다.
또한, 본 발명의 혈액응고 촉진제내에는 아민염 및/또는 4급 질소를 함유하는 유기화합물이 존재한다. 이 유기화합물은 헤파린 상에 흡착되고, 이것을 중화시키는 헤파린 중화제로서 사용된다. 아민염을 구성하는 아민으로는, 1급, 2급 및 3급 아민 모두 적당하며, 아민염 구조내의 산은 유기산이나 또는 무기산이 될 수 있다. 무기산으로서는 할로겐화수소산, 황산, 아황산 등이 사용될 수 있으며, 유기산으로서는 포름산, 아세트산 등이 사용된다. 흔히 아민염의 유기잔기는 알킬기이나 다른 원소를 포함하는 아미노기, 예테르기 등과 같은 탄화수소기일 수도 있다. 또한 아민염은 분자내염일 수도 있다.
아민염의 바람직한 예로서, 예를 들면 헥사데실디메틸아민 염산염 테트라데실디(아미노에틸) 글리신이다.
Figure kpo00014
4급 질소를 가지는 유기화합물의 한 예는 4급 알킬 암모늄이다. 또한 이미노기, 에테르기 등과 같은 다른 원소를 함유하는 탄화수소기를 가지는 혼합물, 또는 알킬기 대신에 알릴기를 가지는 화합물도 허용될 수 있다. 바람직한 예는 구조식(XIII)으로 표시되는 도데실 트리메틸암모늄 클로라이드이다.
Figure kpo00015
이들 비교적 저분자량을 가지는 화합물 이외에, 4급 질소를 가지는 유기중합체를 사용하는 것도 가능하다. 이러한 중합체로서, 일반식(XIV)로 표시되는 반복단위를 가지는 고분자 양이온(polycation)을 언급할 수 있다.
Figure kpo00016
여기서, R9~R12는 수소 또는 알킬기이고, X는 할로겐기 또는 산 잔기이고, Y는 알킬렌기 또는 알킬렌기 -SO2-이며, 상술한 반복단위는 5~2,000회 반복한다.
일반식(XIV)의 화합물에서, 구조식(XV)와 구조식(XVI)으로 표시되는 반복단위를 가지는 고분자 양이온이 특히 바람직하다.
Figure kpo00017
Figure kpo00018
헤파린-중화제가 함유되는 경우에는, 비율은 금속 착화합물 100중량부에 대하여 상기 중화제 5~10,000중량부가 된다. 만약 중화제가 충분하지 못하고, 그리고 혈액이 헤파린을 함유하고 있으면, 헤파린은 완전 중화되지 못하므로, 혈액은 응고되지 않는다. 만약 중화제가 너무 많이 존재하면, 상술한 비율로 얻는 것과 같은 효과는 기대할 수 없다.
본 발명의 혈액응고 촉진제 중에는 항피브리놀시스제 및/또는 할플라스민제가 포함될 수 있다. 아프로티닌, 대두 트립신 억제제, ε-아미노카프로산, p-아미노메틸벤조산, 4-(아미노메틸)시클로헥산 카르복실산 등은 임상적으로 사용되고 있으며, 항프브리놀리시스제 및/또는 항플라스민제로 사용될 수 있다. 이들은 단독으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 예를 들면 아프로티닌은 혈액 ml당 약 100~600KIU의 비율로 사용된다. 대두 트립신 억제제는 혈액 ml당 약 500~4,000FU의 비율로 사용된다. ε-아미노카프로산, p-아미노메틸벤조산 그리고 4-(아미노메틸)-시클로헥산 카르복실산 모두 혈액 ml당 약 10-2~10-8g의 비율로 혈액응고 촉진제에 사용한다.
본 발명의 혈액응고 촉진제는 혈액 ml당 1×10-10내지 1×10-1g의 범위내의 비율로 사용된다. 만약 비율이 너무 적으면, 혈액응고 촉진 효과는 얻을 수 없다. 만약 과잉이면, 사용량에 비례되는 결과는 얻지 못한다.
본 발명의 혈액응고 촉진제가 사용될 때에 검사할 혈액을 함유하는 용기는 유리 또는 수지가 될수 있다. 혈액을 용기에 채취한 후에 혈액응고 촉진제를 혈액에 가해도 되며, 또한 혈액응고 촉진제를 미리 용기내에 넣은 후에 혈액을 채취하여 넣어도 된다. 본 발명의 혈액응고 촉진제는 분말 형태일 수도 있고 또한 미리 적합한 용매에 용해시킨 용액일 수도 있다. 혈액응고 촉진제는 분말형태로 또는 고농도 용액 형태로 사용되며, 혈액 일부가 고농도의 혈액응고 촉진제와 접촉하게 되면, 혈액의 단백질이 변성될 위험이 있으므로 상술한 혈액응고 촉진제는 비표면적이 큰 담체에 지지되어 있어야 한다.
이러한 목적으로 사용되는 담체는 혈액 검사 결과에 대하여 악 영향이 없고, 그리고 담체가 비표면적이 큰 한에 있어서는 특별히 한정할 필요는 없다. 예를 들면, 물, 생리 식염수, 부직포, 직물, 수지 비드, 아라비아검등이 사용되기에 적합하다. 이러한 담체에 혈액응고 촉진제를 유지시키기 위해서, 예를 들면, 촉진제 용액 또는 현탁액을 담체에 처리하거나 또는 담체를 촉진제 용액이나 또는 현탁액에 침지시키고 이어서 건조시킨다. 아라비아검과 같은 적절한 조제를 함유하는 물로 혈액응고 촉진제의 현탁액을 만든 다음, 동결 건조하면, 혈액응고 촉진제가 분말의 형태로 얻어지게 된다.
본 발명에서 사용되는 가수분해효소 활성촉진제는 단백질을 분해하는 효소 활성촉진제이며, 특히 세린 프로티아제의 촉진제이다. 세린 프로티아제는 펩티드 쇄상의 알기닌과 모든 아미노산 잔기와의 결합 또는 라이신과 어느 아미노산 잔기와의 결합을 가수분해에 의해 절단하는 능력을 가지고 있다. 본 발명의 가수분해 효소 활성 촉진제를 혈액응고 촉진제에 사용하면, 첫번째로 세린 프로티아제의 전구체의 한 종류인 제XII인자가 활성화되고, 이어서 활성화된 제XII인자의 효소반응은 더욱 촉진되며, 이어서 혈액중의 다른 혈액응고 인자가 활성화됨에 따라 혈액은 단시간내에 응고하게 된다. 혈액응고 촉진제내에 공촉진제로서 세린 프로티아제 및/또는 단백질을 가수분해하는 다른 효소가 존재할 때에는 혈액중의 응고인자의 활성화는 더욱 촉진된다. 혈액응고 촉진제 내에 함유되는 가수분해효소 활성촉진제는 단백질을 가수분해하는 이들 요소의 반응을 촉진시키는 것으로 생각된다. 이 결과, 혈액은 단시간 내에 응고하게 된다.
아민염 또는 4급 질소를 가지는 유기화합물이 혈액 응고 촉진제내에 함유되면, 이 혈액응고 촉진제는 헤파린을 함유한 혈액을 응고시키는데 사용될 수 있다. 이러한 혈액응고 촉진제를 헤파린을 함유하는 혈액에 가하면, 아민염 등의 중화제가 헤파린을 흡착, 중화 그리고 침전시키므로, 헤파린에 의한 트롬빈과 제XII인자의 억제를 제거할 수 있다. 이러한 이유로, 혈액이 응고하는 정상적 기능이 회복된다. 부가하여, 본 발명의 혈액응고 촉진제 내에 함유되는 가수분해효소 활성촉진제(금속 착화합물)는 혈액중의 제XII인자를 활성화시키는 능력을 가지고 있다. 따라서, 정상의 혈액을 처리할 경우 혈액은 급속히 응고하게 된다.
항피브리놀리시스제 및/또는 항플라스민제가 상술한 아민염 등에 추가하여 함유되면, 혈액의 응고반응과 경쟁하는 플라스민에 의한 피브린의 분해는 억제된다. 이러한 이유로, 혈액의 응고는 촉진되고, 나아가서는 응고후의 응고물은 안정성을 갖게 된다.
혈액응고 촉진제 내에 함유되는 금속 착화합물과 여러 종류의 중화제에 의거하여, 혈액응고 촉진제의 양, 사용된 용기의 재질, 혈액중의 헤파린의 양 등에 따라 혈액의 응고시간이 변화한다. 금속 착화합물이 유일한 주성분이고 용기가 합성수지로 되어 있으면, 소요되는 시간은 일반적으로 20~30분이다. 공촉진제로서 가수분해 효소가 함유되어 있으면, 같은 조건하에서 약 3~7분이 걸린다. 헤파린을 함유하는 혈액을 처리할 때에는 같은 조건하에서 응고하는데 약 20~40분이 걸린다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 혈액응고 촉진제를 사용함으로써 통상의 혈액 그리고 헤파린을 함유한 혈액을 단시간 내에 응고시킬 수 있다. 혈병은 만족스럽게 응집하고, 혈병과 혈청의 분리효과는 우수하다. 따라서 혈청은 수득할때에 혈병은 혈청과 섞이지 않으며, 혈청을 고수율로 얻을 수 있다.
본 발명의 혈액응고 촉진제의 주성분이 되는 화합물은 금속 착화합물이다. 이것을 본 발명자가 이미 공개한 혈액응고 촉진제에 함유된 유기환식화합물과 비교할때에 열안정성은 더욱 증가된다. 따라서, 본 발명의 혈액응고 촉진제를 압력솔 살균처리와 같은 것을 실시해도, 이들의 작용성능은 감소되지 않는다. 또한, 이 촉진제를 장시간 저장할 수도 있다. 상술한 유기환식화합물을 혈액응고 촉진제로서 사용하면 일부 혈청 성분이 변성될 위험이 있으나, 본 발명에 의한 혈액응고 촉진제에 함유된 화합물은 혈액중의 성분과 반응하지 않으므로, 정확한 시험 결과를 얻을 수 있다.
[실시예 1-1]
산화한 n-프로필 갈레이트-철 착화합물(혈액응고 촉진제)을 0.1중량%의 농도로 함유시킨 생리 식염수 분산액 50㎕를 시판의 폴리메틸메타크릴레이트제 튜브에 넣고, 즉시 채혈한 인체 혈액 5ml를 첨가한 다음 튜브를 23℃에서 방치하고, 혈병이 형성되기 시작하여 혈청이 나타나는 시간을 측정하여 혈액응고 시간으로 하였다. 혈청이 나타나는 즉시, 시료를 원심분리기에 넣고 1,000×g에서 5분간 원심분리한 다음, 혈청의 분리효과를 육안으로 관찰하였다. 얻어진 결과는 표 1과 같다. 실시예 1-2 내지 1-8 및 비교실시예 1-1 및 1-2이 결과도 표 1에 기재된 바와 같다.
[실시예 1-2]
혈액응고 촉진제로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 1-1에서와 동일하게 하였다.
[실시예 1-3]
혈액응고 촉진제로서 1,2,3-트리케토히드로인덴의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 1-1에서와 동일하게 하였다.
[실시예 1-4]
혈액응고 촉진제로서 이사틴의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 1-1에서와 동일하게 하였다.
[실시예 1-5]
혈액응고 촉진제로서 산화된 1,4-디(3,4-디히드록시페닐)2,3-디메틸부탄의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 1-1에서와 동일하게 하였다.
[실시예 1-6]
철 착화합물 대신에, 코발트 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 1-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 1-7]
철 착화합물 대신에, 니켈 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 1-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 1-8]
철 착화합물 대신에, 알루미늄 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 1-2에서와 동일하게 하였다.
[비교실시예 1-1]
혈액응고 촉진제를 사용하지 않는것 이외에는, 실시예 1-1에서와 동일하게 하였다.
[비교실시예 1-2]
유리로 만든 튜브를 사용하고, 혈액응고 촉진제는 사용하지 않았다. 기타의 조건은 실시예 1-1에서와 동일하게하였다.
[표 1]
Figure kpo00019
[실시예 2(1-1)]
혈액응고 인자를 촉진하는 물질로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 철 착화합물과 혈액응고 촉진제로서 트립신을 각기 0.5중량%의 농도로 함유하는, 생리 식염수 분산액을 제조하였다. 갓 채취한 인체혈액(3ml)을 시판의 폴리에틸렌제 플레인 튜브에 넣고 상기한 혈액응고 촉진제 용액 30ml를 가하였다. 이 플레인 튜브를 실온에서 정치하고 혈액이 유동성을 상실하는데 요하는 시간을 측정하여 혈액응고 시간으로 하였다. 응고후 시료를 3,000rpm에서 5분간 원심분리하고 혈청의 분리효과를 육안으로 평가하였다. 결과는 표 2와 같다. 실시예2(1-2) 내지 2(4-3)의 결과도 표 2에 기재된 바와 같다.
[실시예 2(1-2)]
트롬빈을 공촉진제의 가수분해효소로서 사용하고 혈액응고 촉진제의 생리 식염수 분산액은 상기 효소의 농도가 500유니트/ml이 되도록 제조하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(1-3)]
공촉진제의 가수분해효소로서 사독(Snake venom)트롬빈-유사 효소를 공촉진제의 가수분해효소로서 사용하고, 혈액응고 촉진제의 생리 식염수 분산액은 상기 효소의 농도가 0.005중량%가 되도록 제조하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(2-1)]
금속 착화합물로서 1,2,3-트리케토히드로인덴의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(2-2)]
금속 착화합물로서 1,2,3-트리케토히드로인덴의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-2)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(2-3)]
금속 착화합물로서 1,2,3-트리케토히드로인덴의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-3)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(3-1)]
금속 착화합물로서 산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(3-2)]
금속 착화합물로서 산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-2)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(3-3)]
금속 착화합물로서 산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-3)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(4-1)]
금속 착화합물로서 이사틴의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(4-2)]
금속 착화합물로서 이사틴의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-2)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(4-3)]
금속 착화합물로서 이사틴의 철 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-3)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(5-1)]
금속 착화합물로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 코발트 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다. 얻어진 결과는 표 3에 기재하였다. 실시예 2(5-2) 내지 2(7-3)의 결과도 표 3에 기재된 바와 같다.
[실시예 2(5-2)]
금속 착화합물로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 코발트 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-2)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(5-3)]
금속 착화합물로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 코발트 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-3)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(6-1)]
금속 착화합물로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 코발트 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(6-2)]
금속 착화합물로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 니켈 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-2)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(6-3)]
금속 착화합물로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 니켈 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-3)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(7-1)]
금속 착화합물로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 알루미늄 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(7-2)]
금속 착화합물로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 알루미늄 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-2)에서와 동일하게 하였다.
[실시예 2(7-3)]
금속 착화합물로서 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 알루미늄 착화합물을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-3)에서와 동일하게 하였다.
[비교실시예 2-1]
혈액응고 촉진제로서 트립신만을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[비교실시예 2-2]
혈액응고 촉진제로서 트롬빈만을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-2)에서와 동일하게 하였다.
[비교실시예 2-3]
혈액응고 촉진제로서 트롬빈-유사 효소만을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-3)에서와 동일하게 하였다.
[비교실시예 2-4]
혈액응고 촉진제를 사용하지 않은 것 이외에는, 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[비교실시예 2-5]
혈액응고 촉진제는 사용하지 않고, 용기는 유리제품을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 2(1-1)에서와 동일하게 하였다.
[표 2]
Figure kpo00020
[표 3]
Figure kpo00021
[표 4]
Figure kpo00022
[실시예 3-1]
산화한 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 철 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XVI의 화합물)을 함유하는 수성 분산액을 제조하였다. 폴리아세테이트 부직포를 상기 분산액에 함침시키고, 완전히 건조하였다. 부직포 각 ㎠에 함유된 상기 두가지 성분은 10-4g이었다.
2유니트/ml의 농도의 헤파린이 함유된, 갓 채취한 인체 혈액 8ml를 시판의 폴리에틸렌제 10ml용 튜브에 넣고 상기한 성분을 함유한 부직포 1㎠을 넣고 온화하게 교반한 다음, 20℃에서 정치하였다.
전체 혈액이 유동성을 상실하는데 요하는 시간을 측정하여 혈액응고 시간으로 하였다.
혈액이 응고된 즉시, 3000rpm의 속도로 5분간 원심분리하고 혈청의 분리효과를 육안으로 평가하였다. 피펫을 사용하여 혈청을 수집하고, 수집된 용적으로 혈청의 수율을 추정하였다. 이들 결과는 표 5와 같다. 실시예 3-2 내지 3-10 및 비교실시예 3의 결과도 표 5에 기재한 바와 같다.
[실시예 3-2]
산화된 n-프로필 갈레이트-철 착화합물 및 테트라데실디(아미노에틸)글리신을 각기 0.5중량% 및 0.2중량%의 농도로 함유하는 생리 식염수 분산액을 제조하였다.
시판의 폴리에틸렌제 10ml용 튜브에 ml당 헤파린 2유니트를 함유하는 갓 채취한 인체혈액 8ml를 주입하고 상기한 분산액 80㎕를 첨가하였다. 기타의 처리는 실시예 3-1에서와 동일하게 하여 얻은 결과를 평가하였다.
[실시예 3-3]
이사틴 철 착화합물 1g, 헥사데실디메틸아민 염산염 0.4g 및 담체로서 평균직경 1.5mm인 폴리스티렌 비드 1kg을 분산을 위한 보조제로서 소량의 에탄올과 함께 잘 혼합한 다음, 혼합물을 건조하였다. 혈액응고 촉진제상에 흡착된 상기 입상물 1g 중에는 이사틴 철 착화합물 10-3g 및 헥사데실디메틸아민 염산염 0.4×10-3g이 함유되었다.
시판의 폴리에틸렌제 10ml용 튜브에 ml당 헤파린 2유니트를 함유하는 갓 채취한 인체혈액 8ml를 주입하고 혈액응고 촉진제상에 흡착된 상기한 입상물 1g을 가한 다음, 시료를 실시예 3-1에서와 같이 처리하고 평가하였다.
[실시예 3-4]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물 및 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 각기 o-퀴논의 철 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XV의 화합물)을 사용하였다. o-퀴논의 철 착화합물 및 고분자 양이온은 각기 0.5중량% 및 0.4중량%의 농도로 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 3-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 3-5]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물 및 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 각각 1,2,3-트리케토히드로인덴의 철 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XVI의 화합물)을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 3-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 3-6]
테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 도데실트리메틸암모늄 클로라이드를 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 3-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 3-7]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물 및 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 산화된 1,4-디(3,4-디히드록시페닐)2,3-디메틸부탄의 철 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XV의 화합물)을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 3-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 3-8]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물 및 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 산화된 엘라그산(Ⅴ)의 코발트 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XV의 화합물)을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 3-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 3-9]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물 및 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 산화된 엘라그산(Ⅴ)의 니켈 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XV의 화합물)을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 3-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 3-10]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물 및 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 산화된 엘라그산(Ⅴ)의 알루미늄 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XV의 화합물)을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 3-2에서와 동일하게 하였다.
[비교실시예 3]
시판의 폴리에틸렌계 10ml용 튜브에 ml당 헤파린 2유니트를 함유하는 갓 채취한 인체혈액 8ml를 주입한 다음, 혈액응고 촉진제는 첨가하지 않고 실시예 3-1에서와 동일한 처리를 하여 얻은 결과를 평가하였다.
[표 5]
Figure kpo00023
[실시예 4-1]
폴리에스테르 부직포를 산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 철 착화합물, 고분자 양이온(구조식XVI의 화합물) 및 아프로티닌을 함유하는 수성분산액에 침지시킨 다음 완전하게 건조하였다. 부직포 ㎠당 철 착화합물 4×10-4g, 고분자 양이온 4×10-4g 및 아프로티닌 500KIU가 함유되었다.
시판의 폴리에틸렌제 5ml용 튜브에 ml당 헤파린 1.01IU를 함유하는 갓 채취한 인체 혈액 2ml를 주입한 후 상기한 성분이 흡착된 부직포 1㎠을 첨가하고 온화하게 교반한 다음 20℃에서 정치하였다. 1시간 후 또는 30분 후 혈청을 채취하여 피브린 및 피브린노겐 분해생성물(FDP)을 분석하였다. 결과는 표 6과 같다. 1시간 또는 30분 경과후 FDP의 분석결과는 차이가 없었다. 즉, 이것은 혈병의 분해 반응이 억제된 것을 나타내는 것이다. 실시예 4-2 내지 4-10 및 비교실시예 4의 결과도 표 6에 기재된 바와 같다.
[실시예 4-2]
산화된 n-프로필 갈레이트의 농도가 0.5중량%, 테트라데실디(아미노에틸)글리신의 농도가 0.5중량% 및 아프로티닌의 농도가 10,000KIU/ml가 되도록 생리 식염수 분산액을 제조하였다.
시판의 폴리에틸렌제 5ml용 튜브에 헤파린 1.0IU를 함유하는 갓 채취한 인체 혈액 2ml를 주입하고, 상기한 분산액 50㎕를 첨가하였다. 시료를 실시예 4-1에서와 같이 처리하여 얻어진 결과를 평가하였다.
[실시예 4-3]
이사틴 1g, 헥사데실디메틸아민 염산염 0.4g, 4-(아미노메틸) 시클로헥산카복실산 50mg 및 담체로서 평균 직경 1.5mm의 폴리스티렌 비드 1kg을 분산용 보조제로서 소량의 에탄올과 함께 충분히 혼합하고 건조하였다.
시판의 폴리에틸렌제 5ml용 튜브에 ml당 헤파린 1.0IU를 함유하는 갓 채취한 인체 혈액 2ml를 주입하고, 상기한 혈액응고 촉진제 0.3g을 첨가하였다. 시료를 실시예 4-1에서와 같이 처리하여 얻어진 결과를 평가하였다.
[실시예 4-4]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물, 테트라데실디(아미노에틸)글리신 및 아프로티닌 대신에, o-퀴논의 철 착화합물, 고분자 양이온(구조식XV의 화합물) 및 ε-아미노카프로산을 사용하였다. o-퀴논이 철 착화합물, 고분자 양이온 및 ε-아미노카프로산은 각기 0.5중량%, 0.5중량% 및 0.1중량%의 농도로 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 4-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 4-5]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물, 테트라데실디(아미노에틸)글리신 및 아프로티닌 대신에, 1,2,3-트리케토히드로인덴, 고분자 양이온(구조식XVI의 화합물) 및 ε-아미노카프로산을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 4-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 4-6]
테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 도데실트리메틸암모늄 클로라이드를 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 4-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 4-7]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물, 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 1,4-디(3,4-디히드록시페닐) 2,3-디메틸부탄의 산화된 철 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XV의 화합물)을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 4-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 4-8]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물, 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 산화된 엘라그산(Ⅴ)의 코발트 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XV의 화합물)을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 4-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 4-9]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물, 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 산화된 엘라그산(Ⅴ)의 니켈 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XV의 화합물)을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 4-2에서와 동일하게 하였다.
[실시예 4-10]
산화된 n-프로필 갈레이트의 철 착화합물, 테트라데실디(아미노에틸)글리신 대신에, 산화된 엘라그산(Ⅴ)의 알루미늄 착화합물 및 고분자 양이온(구조식XV의 화합물)을 사용하였다. 기타의 조건은 실시예 4-2에서와 동일하게 하였다.
[표 6]
Figure kpo00024
[실시예 4-11]
실시예 4-1 내지 4-10에 기술된 혈액응고 촉진제 전부를 제조하였다. 촉진제를 각기 채혈용 튜브에 넣고 헤파린이 함유된 갓 채취한 인체 혈액을 상기 튜브에 주입하였다. 튜브를 온화하게 교반하고 20℃에서 정치한 다음 혈액 전체가 유동성을 상실하는데 요하는 시간을 측정하여 혈액응고시간으로 하였다. 모든 실시예에서, 혈액은 35 내지 40분 이내에 응고되었다. 혈액이 응고된 후, 시료를 즉시 3000rpm의 속도로 5분간 원심분리하고 혈청의 분리 효과를 육안으로 평가하였다. 또한 피펫으로 혈청을 수집하여 조사하였다. 모든 실시예에서, 혈청의 분리효과 및 혈청의 수율은 우수하였다.
[실시예 5-1]
산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 착화합물 0.1중량%를 함유하는 생리 식염수 분산액 50㎕를 시판의 폴리메틸메타크릴레이트제 튜브에 넣고, 갓 채취한 인체 혈액 5ml를 첨가하고 튜브를 23℃에서 정치하였다. 혈액이 완전히 응고되면 시료를 1000×g에서 5분간 원심분리하여 혈청을 혈병으로부터 분리시켰다. 분리된 혈청내에 존재하는 뇨산(UA), 포스포리피드(PL) 및 트리글리세라이드(TG)를 측정하였다. 결과는 표 7과 같다. 이하에 기술한 비교실시예 5-1 및 5-2에서 얻어진 결과도 표 7에 기재한 바와 같다.
[비교실시예 5-1]
이 실시예는 구조식(Ⅴ)의 산화된 엘라그산을 혈액응고 촉진제로서 사용하는 것 이외는 실시예 5-1에서와 같이 수행하였다.
[비교실시예 5-2]
이 실시예는 혈액응고 촉진제의 분산액을 사용하지 않는것 이외는 실시예 5-1에서와 같이 수행하였다.
비교실시예 5-2와 비교해 보면, UA, PL 및 TG는 금속 착화합물을 혈액응고 촉진제로서 사용한, 실시예 5-1로부터 얻은 혈청에서 정확하게 측정할 수 있으나, 금속 착화합물을 형성하지 않는 산화된 엘라그산을 사용한 비교실시예 5-1로부터 얻은 혈청중이 UA, PL 및 TG의 함유량은 정확하게 측정할 수 없다는 것을 표 7에서 알 수 있다(즉, 이 비교실시예의 혈청중의 UA, PL 및 TG의 함유량은 비교실시예 5-2에서 얻어진 혈청중의 UA, PL 및 TG의 함유량 보다 낮다). 이러한 사실은 비교실시예 5-1의 혈액응고 촉진제가 혈청중 상기한 성분들의 함량을 측정하는데 악영향을 미치고 있음을 의미하는 것이다.
[표 7]
Figure kpo00025
[실시예 6]
산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)의 철 착화합물(혈액응고 촉진제)을 0.1중량%로 함유하는 수성분산액 5ml를 경질 유리튜브에 넣고 2기압하에 121℃에서 1시간 동안 열처리하였다. 상기 혈액응고 촉진제는 상기한 바와 같은 열처리전 및 후 전혀 변성되지 않았다.
[비교실시예 6]
산화된 엘라그산(구조식Ⅴ의 화합물)을 0.1중량%로 함유하는 수성분산액 5ml를 경질 유리튜브에 넣고 실시예 6에서와 동일한 방법으로 가압하에서 열처리하였다. 가압 열처리된 흑갈색의 산화된 엘라그산은 가압 열처리 후 황백색으로 변하였다. 더우기 이 산화물은 물에 용해하는데, 이것은 산화물이 변성된 것을 의미하는 것이다.
당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진자는 본 발명의 범주를 벗어나지 않고, 다양한 변형을 용이하게 할 수 있을 것이다. 따라서, 본 명세서에 첨부된 청구범위는 명세서의 상세한 설명에 한정시키기 위한 것이 아니라, 본 발명에 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진자가 균동물로서 취급할 수 있는 모든 특징을 포함하여, 본 발명에 내재하는 특허 가능한 신규성의 모든 특징을 포괄적으로 기술한 것임을 알아야 한다.

Claims (11)

  1. 다음 일반식(Ⅰ)로 표시되며, 실질적으로 동일 평면상에 상호 인접한 카르보닐기를 가지는 착체의 리간드 화합물인, 0,0-리간드 하나이상과 배위 결합을 형성할 수 있는, 알칼리금속 이외의 금속을 함유하는 금속 착화합물과 ;
    Figure kpo00026
    (단, A는 환식 화합물의 잔기를 나타낸다.) ;
    약학적으로 허용되는 담체를 포함하여 이루어지는 가수분해 효소 할성 촉진제 조성물을 혈액과 접촉시키는 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기한 가수분해효소가 세린 프로티아제인 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기한 가수분해효소가 혈액응고 제XII인자인 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기한 약학적으로 허용되는 담체가 물, 생리 식염수, 부직포, 직물, 수지비드, 아라비아 검증에서 선택된 1종 이상의 담체인 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  5. 다음 일반식(Ⅰ)로 표시되며, 실질적으로 동일 평면상에 상호 인접한 카르보닐기를 가지는 착체의 리간드 화합물인, 0,0-리간드 하나이상과 배위 결합을 형성할 수 있는, 알칼리금속 이외의 금속을 함유하는 금속 착화합물과 ;
    Figure kpo00027
    (단, A는 환식 화합물의 잔기를 나타낸다.) ; 공촉진제로서의 가수분해효소와 ; 그리고 약학적으로 허용되는 담체를 포함하여 이루어지는 가수분해 효소 활성 촉진제 조성물을 혈액과 접촉시키는 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기한 가수분해효소가 세린 프로티아제, 티올 프로티아제 및 금속 프로티아제중에서 선택된 1종이상의 효소인 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  7. 제5항에 있어서, 상기한 촉진제 조성물이 아민염 또는 4급 질소를 가지는 유기 화합물을 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  8. 제5항 또는 제7항에 있어서, 상기한 촉진제 조성물이 항 피브리놀리시스제 및 항플라스민제중 1종 이상을 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  9. 제5항에 있어서, 상기한 약학적으로 허용되는 담체가 물, 생리 식염수, 부직포, 직물, 수지비드, 아라비아 검증에서 선택된 1종 이상의 담체인 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  10. 제5항에 있어서, 상기한 가수분해효소가 펩티드 쇄상의 알기닌과 어느 아미노산 잔기와의 결합 또는 라이신과 어느 아미노산 잔기와의 결합을 가수분해할 수 있는 효소인 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
  11. 다음 일반식(Ⅰ)로 표시되며, 실질적으로 동일 평면상에 상호 인접한 카르보닐기를 가지는 착체의 리간드 화합물인, 0,0-리간드 하나이상과 배위 결합을 형성할 수 있는, 알칼리금속 이외의 금속을 함유하는 금속 착화합물을, 비표면적이 큰 담체 존재하에서, 혈액과 접촉시키는 것을 특징으로 하는 혈액응고 촉진방법.
    Figure kpo00028
    (단, A는 환식 화합물의 잔기를 나타낸다.)
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE140034T1 (de) * 1990-04-17 1996-07-15 Analytical Control Syst Inc Koagulationsassays und reagenzien
JPH08510057A (ja) * 1993-11-04 1996-10-22 デイド、インターナショナル、インコーポレイテッド 血液凝固の活性化部分トロンボプラスチン時間テストのための活性化剤成分としての及び血液凝固障害の検出のためのテトラヒドロキシキノン類
US6245573B1 (en) * 1998-02-12 2001-06-12 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Rapid assessment of the coagulant activity of blood
WO2001097826A2 (en) * 2000-06-16 2001-12-27 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Hemostatic compositions, devices and methods
US6632678B2 (en) * 2001-01-03 2003-10-14 Sienco, Inc. Method for performing activated clotting time test with reduced sensitivity to the presence of aprotinin and for assessing aprotinin sensitivity
FR2822462B1 (fr) * 2001-03-23 2005-07-15 Stago Diagnostica Composes activateurs de la coagulation endogene utilisation pour l'exploration de la coagulation endogene
CA2504603C (en) * 2002-11-19 2012-11-13 Sekisui Chemical Co., Ltd. Plasma or serum separation membrane and filter apparatus including the plasma or serum separation membrane
CN106883273B (zh) * 2017-02-22 2019-06-18 南京林业大学 双黄酮-钴配合物及其制备方法和应用
JP6863651B1 (ja) * 2019-12-18 2021-04-21 積水メディカル株式会社 血液採取容器
CN114921447B (zh) * 2022-07-01 2023-12-12 可孚医疗科技股份有限公司 酶试剂的制备方法及含该酶试剂的凝血酶原时间检测卡

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3093659A (en) * 1956-06-20 1963-06-11 Pfizer & Co C Antifungal and insecticidal halokojic acid metal complexes
US3177237A (en) * 1963-07-01 1965-04-06 Du Pont Silicon and germanium chelates of tropolones
US3647842A (en) * 1969-03-20 1972-03-07 Chevron Res Stabilization of cobalt carbonyl compounds by oxygen-dentated ligands
US4329498A (en) * 1979-09-11 1982-05-11 Allied Corporation Preparation of 6-aminocaproic acid via muconic acid mononitrile
US4329798A (en) * 1980-07-29 1982-05-18 Edwards Gerald D Tooth construction for digging buckets
JPS6011519A (ja) * 1983-06-30 1985-01-21 Nisshinbo Ind Inc 導電性多孔質構造体
JPS6027858A (ja) * 1983-07-25 1985-02-12 Sekisui Chem Co Ltd 血清と血餅との分離方法
GB8410290D0 (en) * 1984-04-19 1984-05-31 Callingham B A Pharmaceutical compositions
JPS60174952A (ja) * 1984-02-21 1985-09-09 Sekisui Chem Co Ltd 血液凝固促進剤
JPS60186760A (ja) * 1984-03-05 1985-09-24 Sekisui Chem Co Ltd 血液凝固促進剤
JPH0627858A (ja) * 1990-12-04 1994-02-04 Ricoh Co Ltd 画像形成装置
JP3203567B2 (ja) * 1992-06-26 2001-08-27 株式会社トキメック 加速度計

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