WO2004097407A1 - 血液凝固促進剤及び採血管 - Google Patents

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WO2004097407A1
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blood
blood coagulation
coagulation promoter
collection tube
bond
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Ryusuke Okamoto
Katsuya Togawa
Hironobu Isogawa
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Sekisui Chemical Co., Ltd.
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Definitions

  • the present invention relates to a blood coagulation promoter and a blood collection tube, and more particularly, to a blood coagulation promoter having excellent blood coagulation promoting properties and blood clot detachment properties, and a blood collection tube containing the blood coagulation promoting agent.
  • the target blood component is separated by coagulating blood collected in a blood collection tube and then performing centrifugation.
  • Such blood collection tubes have a blood coagulation-promoting property that coagulates the collected blood in a short period of time, prevents the clotted blood from adhering to the inner wall of the blood collection tube as a blood clot, and removes the attached blood clot. Blood clot detachment is required, and blood collection tubes with various processes applied to the inner wall of the tube have been reported.
  • Japanese Patent Publication No. 5-1095 discloses a blood coagulation promoter containing water-insoluble silicone oil, polybutylpyrrolidone and an adsorbent substance on the inner wall of a container made of a predetermined material.
  • An applied blood collection tube is disclosed.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 5-107372 discloses a blood collection tube in which a blood coagulation accelerator is applied to the inner wall of a container made of a predetermined material via a water-soluble silicone oil.
  • the present invention provides a blood coagulation accelerator capable of exhibiting both excellent blood coagulation accelerating property and excellent clot detachment property, and a sample containing the blood coagulation accelerator.
  • the purpose is to provide blood vessels.
  • the blood coagulation promoter comprises: a poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative; (a) an adsorbable inorganic substance; and (b) a bond between Arg and any amino acid residue and / or Lys in the peptide chain. It is characterized by containing at least one substance selected from the group consisting of hydrolases capable of hydrolyzing a bond with an arbitrary amino acid residue and polybutylpyrrolidone.
  • the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative may be combined with (a) an adsorbable inorganic substance and (b) a peptide chain to bind Arg to an arbitrary amino acid residue. And / or at least one substance selected from the group consisting of hydrolases capable of hydrolyzing the bond between Lys and any amino acid residue, and polybutylpyrrolidone, based on a total weight of 100 parts by weight And 3 to 10 to 3 parts by weight of a water-soluble silicone roll.
  • the blood coagulation accelerator according to the present invention preferably further contains partially saponified polyvinyl alcohol.
  • the composition further contains 3 to 10 to 7 parts by weight of a water-soluble silicone oil based on parts by weight.
  • the blood collection tube according to the present invention is characterized in that the blood coagulation promoter configured according to the present invention is contained in a container.
  • the blood coagulation promoter of the present invention a poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative
  • an adsorbable inorganic substance (b) a peptide chain comprising a hydrolase capable of hydrolyzing a bond between Arg and any amino acid residue and a bond between Z or Lys and any amino acid residue. It contains at least one substance selected from the group and polybutylpyrrolidone as essential components.
  • the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative used in the blood coagulation promoter of the present invention is used as a blood clot adhesion preventing component.
  • Examples of the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative include derivatives obtained by deriving various compounds from known polyoxyalkylenes, and examples thereof include a polyol derivative.
  • the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative preferably has low solubility in water or blood, and more preferably does not dissolve in water or blood.
  • the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative is used as a component for preventing blood clot adhesion.
  • the clot component after coagulation can be prevented from adhering to the inner wall of the container, and the movement of the clot is not restricted even during centrifugation. Can be separated.
  • the blood coagulation promoter of the present invention preferably contains a partially saponified polybutyl alcohol.
  • Partially saponified polyvinyl alcohol is used as a clot detachment component.
  • the partially saponified polyvinyl alcohol known compounds can be used, and examples thereof include a compound obtained by quenching polyvinyl acetate with sodium hydroxide.
  • the saponification degree of the partially saponified polyvinyl alcohol is preferably 75 to 98 mol%, and is 85 to 95 mol. / 0 is more preferable.
  • the degree of saponification of partially saponified polybutyl alcohol is 75 mol. /. If it is lower than the above value, partially saponified polybutyl alcohol may have an adverse effect on test values due to increased solubility in blood and surface activity.
  • the degree of polymerization of the partially saponified polyvinyl alcohol is preferably from 300 to 350, more preferably from 500 to 2,500. If the degree of polymerization of the partially saponified polyvinyl alcohol is less than 300, the solubility may be too high and the clot detachability may be reduced. On the other hand, when the degree of polymerization exceeds 350, the viscosity becomes too high, so that it may be difficult to uniformly coat the inner wall of the container.
  • the adsorptive inorganic substance used in the blood coagulation promoter of the present invention is used as a blood coagulation component.
  • the adsorptive inorganic substance is insoluble in water. To reduce the influence on the test results due to the insolubility of the adsorbable inorganic substance in water Can be.
  • the adsorptive inorganic substance is preferably in a powder form. Since the specific surface area of the adsorptive inorganic substance is increased by the powdery form of the adsorptive inorganic substance, the blood coagulation promoter of the present invention can coagulate blood in a shorter time.
  • the specific surface area of the adsorptive inorganic substance is 10 to 100 O g, and more preferably 50 to 500 m 2 / g.
  • the average particle size of the adsorptive inorganic substance is preferably 50; m or less, and more preferably 10 ⁇ m or less. If the average particle size of the adsorbable inorganic substance exceeds 50 m, it may be difficult to coagulate blood in a short time.
  • adsorptive inorganic substances examples include silica, glass, olefin, celite, bentonite and the like.
  • These adsorptive and inorganic substances may be used alone or in combination of two or more.
  • silica is preferably used.
  • This silicic acid is preferably in a powder form, and more preferably in a porous form containing 20% by weight or more of amorphous components.
  • silica is preferably hydrophobic.
  • the solubility in blood is reduced, preventing hemolysis.
  • the dispersibility in blood is improved, and blood can be coagulated in a short time.
  • the adsorptive inorganic substance preferably has high dispersibility in blood. Due to its high dispersibility in blood, blood can be coagulated in a shorter time.
  • the (b) hydrolase is a protease, and in the peptide chain,
  • a compound capable of hydrolyzing the bond between Arg and an arbitrary amino acid residue and the bond between Z or Lys and an arbitrary amino acid residue is used.
  • hydrolase examples include serine proteases such as trypsin, thrombin, and snake venom thrombin-like enzyme; thiol proteases such as cathepsin B and fusin; If the amount of the above-mentioned hydrolase is small, blood coagulation time may be prolonged or coagulation may be incomplete, and if the amount is large, the test value may be adversely affected.
  • the amount of the decomposing enzyme used is preferably 0.1 to 100 units per lmL of blood, and more preferably 5 to 50 units.
  • the blood coagulation promoter of the present invention may further contain an amino acid.
  • Amino acids are used in the present invention as stabilizers for the above-mentioned hydrolase, and for example, glycine, ⁇ -lanine, L-serine, L-tryptophan and the like are preferably used. If the amount of the amino acid is small, the effect of maintaining the stability of the hydrolase may be insufficient, and if the amount is large, the test value may be adversely affected. LO mg is preferred, and 0-5 to 5 mg is more preferred.
  • the blood coagulation promoter of the present invention may further contain an organic compound having an amine salt and / or a quaternary nitrogen.
  • the amine salt and the organic compound having a quaternary nitrogen function as a heparin neutralizer that adsorbs and neutralizes heparin and inactivates it.
  • the amine forming the amine salt may be any of primary, secondary and tertiary amines, and the acid forming the amine salt may be any of inorganic acids and organic acids.
  • inorganic acids include hydrohalic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid,
  • organic acid include formic acid and acetic acid.
  • the organic residue of the amine salt is usually an alkyl group, but may be a hydrocarbon group containing a different element such as an imino group or an ether group.
  • the amine salt may be an inner molecule salt. Specific examples of preferred amine salts include, for example, hexadecyldimethylamine hydrochloride, tetradecyl (aminoethyl) glycine, and the like.
  • Examples of the organic compound having a quaternary nitrogen include tetraalkylammonium.
  • a compound having an aryl group instead of an alkyl group, or a hydrocarbon containing a heterogeneous element such as an imino group or an ether group is used. It may be a compound having an elementary group.
  • Preferred organic compounds having a quaternary nitrogen include, for example, dodecyltrimethylammonium chloride, but organic polymers such as polycations having a quaternary nitrogen may also be used. If the amount of the above organic compound is small, blood containing heparin may not coagulate because heparin is not neutralized, and if it is large, the test value may be adversely affected. It is preferably from 0.05 to 1 O mg, more preferably from 0.01 to 5 mg.
  • the blood coagulation promoter of the present invention may further contain an anti-radiation solvent and / or an anti-plasmin agent.
  • anti-radiation solvent and / or anti-plasmin agent examples include aprochain, soybean trypsin inhibitor, ⁇ -aminocaproic acid, ⁇ -aminomethylbenzoic acid, aminomethylcyclohexanecarboxylic acid, etc., alone or in combination. Used. These are contained in the blood coagulation promoter in an amount that does not affect clinical tests using the obtained serum. It is.
  • aprotune is about 100-600 KIU (unit) per mL of blood
  • soybean trypsin inhibitor is about 500-4000 FU (unit) per mL of blood
  • ⁇ -aminocaproic acid, ⁇ — aminomethyl benzoic acid, cyclohexanecarboxylic acid aminomethyl sik port are all preferred is a ratio of about 1 X 1 0- 8 ⁇ 1 X 1 0- 2 g per blood lmL arbitrariness.
  • Polyvinylpyrrolidone used in the blood coagulation promoter of the present invention is used as a dispersant for dispersing (a) an adsorbable inorganic substance and (b) the hydrolase.
  • polypyrrolidone examples include N-bierpyrrolidone and the like.
  • the weight average molecular weight of polyvinyl / pyrrolidone is preferably from 10,000 to 600,000, more preferably from 30,000 to 500,000.
  • weight average molecular weight of polyvinylpyrrolidone is less than 10,000, hemolysis may be caused.
  • weight average molecular weight exceeds 600,000, the dispersibility of adsorbable inorganic substances and the like in blood is reduced, so that it may be difficult to coagulate blood in a short time.
  • polyvinylpyrrolidone preferably exhibits high solubility for the compound constituting the blood coagulation promoter of the present invention, and particularly preferably exhibits high solubility for water-soluble silicone oil.
  • the blood coagulation promoter of the present invention Due to its high solubility with the compounds constituting the blood coagulation promoter, the blood coagulation promoter of the present invention can exist in a stable state even when mixed with a solvent such as water, and these compounds can be used. It is possible to prevent the blood from hardly coagulating by adsorbing on the surface of the adsorptive inorganic substance.
  • each compound constituting the blood coagulation accelerator of the present invention is 100 parts by weight of the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative, and Alcohol 1 to 2 XI 0 4 parts by weight, and have contact to the adsorptive inorganic substance and peptide chains, the binding of the binding and / or L ys and any Amino acid residues of A rg and any amino acid residue hydrolyzed at least one substance 4 X 1 0 2 ⁇ 5 X 1 0 4 parts by weight selected from the group consisting of obtaining hydrolytic enzymes, and is preferably a port Ribyurupirori Don 2 X 1 02 ⁇ 4 X 10 4 parts by weight.
  • the partially saponified polybutyl alcohol is not blended, it is preferable that the blending amounts of the other compounds except for the partially saponified polybutyl alcohol are as described above.
  • the amount of the partially saponified polyvier alcohol is more preferably 10 to 2 ⁇ 10 3 parts by weight based on 100 parts by weight of the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative.
  • the bond between Arg and any amino acid residue and the bond between Z or Lys and any amino acid residue in the adsorbent inorganic substance and peptide chain with respect to 100 parts by weight of the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative are hydrolyzed.
  • at least one distribution total amount of a substance selected from the group consisting of capable of hydrolyzing enzymes is a 7 X 1 02 ⁇ 5 X 1 0 3 part by weight, the amount of polyvinyl Nirupirori Don, 5 X More preferably, it is from 102 to 4 X 103 parts by weight.
  • a small amount of water-soluble silicone oil may be added to the blood coagulation promoter of the present invention as an anticoagulant component.
  • the water-soluble silicone oil is not particularly limited as long as it is a silicone oil having a high hydrophilicity, and examples thereof include a silicone oil modified to be hydrophilic by introducing a polar group.
  • a polar group include a hydroxyl group, an amino group, a carboxy group, an epoxy group, a polyester group and the like.
  • silicone oil before denaturation examples include aliphatic silicone oils such as dimethylpolysiloxane and methylhydroxyenepolysiloxane, and aromatic silicone oils such as methylphenolpolysiloxane.
  • dimethylpolysiloxane modified with an ether group is preferably used.
  • water-soluble silicone oils may be used alone or as a mixture of two or more.
  • the compounding amount of the water-soluble silicone oil is determined by mixing the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative, ( a ) an adsorbable inorganic substance and (b) hydrolysis.
  • the total weight of at least one substance selected from the group consisting of enzymes and polyvinylpyrrolidone is preferably 3 ⁇ 10 to 3 to 7 parts by weight, and preferably 3 ⁇ 10 to 3 parts by weight. More preferably, the amount is 10 -2 to 5 parts by weight.
  • the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative, partially saponified polyvinyl alcohol, and ( a ) an adsorbable inorganic substance and (b) a hydrolase are used.
  • the water-soluble silicone oil is used in an amount of 3 ⁇ 10 _3 to 7 parts by weight based on a total of 100 parts by weight of at least one substance selected from the group consisting of and polybierpyrrolidone, 3 X 10—more preferably 2 to 5 parts by weight.
  • the inspection values may be adversely affected. If the amount is less than 3 ⁇ 10-3 parts by weight, it will be difficult to exert sufficient clot detachment property on the plug of the blood collection tube. Sometimes.
  • the blood collection tube of the present invention may contain a serum separating agent as necessary. Coagulation of blood is promoted by bringing the blood coagulation promoter of the present invention into contact with blood.
  • the method of bringing the blood coagulation accelerator into contact with the blood is not particularly limited.
  • a method of adding blood collected in a bottomed tubular container such as a blood collection tube containing the blood coagulation promoter of the present invention in advance and A method of adding the blood coagulation promoter of the present invention to a bottomed tubular container such as a blood collection tube containing the collected blood, and the like.
  • FIG. 1 is a front sectional view showing an example of a blood collection tube according to the present invention.
  • a blood coagulation accelerator 2 according to the present invention is housed in a bottomed tubular blood collection tube 1.
  • the blood collection tube 1 may be a vacuum blood collection tube containing the blood coagulation promoter 2.
  • a blood collection tube having a plug may be used.
  • a blood coagulation promoter is also applied to the plug.
  • the material of the blood collection tube is not particularly limited, and examples thereof include a resin such as polyethylene terephthalate, a metal, and glass.
  • the method of containing the blood coagulation promoter in the blood collection tube is not particularly limited.
  • a solution in which the blood coagulation promoter of the present invention is dispersed in a solvent such as water is applied to the inner wall of the blood collection tube, and then the solvent is dried. And the like.
  • a method of applying a blood coagulation accelerator to the inner wall of a blood collection tube include a spray method and a diving method.
  • the amount of the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative in the blood coagulation promoter after the blood coagulation promoter of the present invention is applied to the inner wall of the blood collection tube is 1 ⁇ 10 ⁇ 9 based on the area on the inner wall. ⁇ : LX 1 0 -5 g / c m2 are preferred, 1 X 1 0 - 8 ⁇ 1 X 1 0- 6 g / cm 2 is more preferable. It may become difficult that the amount of sparingly water-soluble polyoxyalkylene down derivative exerts + partial clot releasability against the inner wall of the tube is less than l X 1 0- 9 gZc m 2 . If the amount of the poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative exceeds 1 X 10 O-SgZcm 2 , the inspection value may be adversely affected.
  • the amount of partially hydrolyzed poly Bulle alcohol in blood coagulation promoter after the blood coagulation promoter is applied to the inner wall of the blood collection tube of the present invention the area on the inner wall as a criteria, 1 X 1 0- 9 ⁇ 1 X 10-5 g / cm2 is preferred, and lioio- 8 to lX10-SgZc mS is more preferred.
  • the amount of partially hydrolyzed poly Bulle alcohol may become difficult to exert sufficient blood clot releasability against the inner wall of the tube is less than 1 X 1 0- 9 cm 2. If the amount of partially saponified polybutyl alcohol exceeds 1 ⁇ 10-Sg / cm 2 , it may be difficult to coagulate blood in a short time because the dispersibility of the adsorbable inorganic substance is reduced.
  • the amount of polyvinylpyrrolidone in the blood coagulation promoter after the blood coagulation promoter of the present invention is applied to the inner wall of the blood collection tube is 1 X 10 -7 to l X 1 based on the area on the inner wall. 0- 4 g / cm 2 are preferred, 1 X 10- 6 ⁇ : LX 1 0- 5 g / c m2 is more preferable. If the amount of polyvinylpyrrolidone is less than 1 X 10-7 gZ cm2, the surface of the adsorptive inorganic substance will be covered with the anti-clot adhesion component, making it difficult to directly contact the blood, so that the blood will be coagulated in a short time It can be difficult '. If the amount of poly Bulle pyrrolidone exceeds 1 X 1 0- 4 g / c m2, it may become difficult to coagulate blood in a short time to lower the dispersibility of the adsorptive inorganic substance .
  • the amount of the water-soluble silicone oil in the blood coagulation promoter after the blood coagulation promoter of the present invention was applied to the wall of the blood collection tube was 1 ⁇ 10-1 based on the area on the inner wall.
  • the amount of water-soluble silicone oil is 1 X 10 -1. If it is less than g / cm2, it may be difficult to exert sufficient clot detachment property on the stopper when the blood collection tube has a stopper such as a rubber stopper. Also, the amount of silicone oil is 1 X 1 0 - exceeds 6 g Z c m2, it may adversely affect test values.
  • Examples of the method of coagulating blood using the blood collection tube of the present invention include, for example, a method of collecting blood in the blood collection tube of the present invention, sealing the blood, leaving it at room temperature to coagulate blood, and a method of coagulating blood. , And then adding an additive such as a serum separating agent to coagulate the blood.
  • the blood collection tube of the present invention is preferably one that can be subjected to a centrifugation operation after blood has coagulated. This makes it possible to easily separate the coagulated blood.
  • FIG. 1 is a front sectional view showing an example of a blood collection tube of the present invention.
  • the compounds used as components of the blood coagulation accelerator are as follows.
  • the blood coagulation promoter was prepared by mixing each compound with ion exchanged water as a solvent so as to have the compositions shown in Tables 1 and 2.
  • the time (unit: minutes) required for the blood to completely coagulate was measured.
  • the determination of coagulation was made at the time when the upper surface on the blood did not move even if the test blood collection tube was tilted, and the blood did not flow out even if it was kept upside down.
  • the same operation as described above except that the mixture was inverted by one rotation was also evaluated.
  • the test blood collection tubes obtained in Examples 13 to 24 first, the inside of the test blood collection tubes was evacuated and the pressure was adjusted so that the blood collection volume became 3 ml. And sealed. After collecting 3 ml of fresh human blood in the test blood collection tube, the mixture was inverted 5 times and left at 25 ° C.
  • the time (unit: minutes) required for the blood to completely coagulate from the end of the blood collection was measured.
  • the coagulation was judged at the time when the upper surface on the blood did not move even when the test blood collection tube was tilted and the blood did not flow out even when the blood collection tube was kept upside down.
  • the same operation as described above except that the mixture was inverted one rotation was also evaluated.
  • Adsorbable inorganic substance wt% 2.5 2.5 2.5 j 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 Hydrolase IU / mL 1.0 10.0 45.0
  • the blood coagulation accelerator of the present invention contains (a) an adsorbable inorganic substance and (b) at least one substance selected from the group consisting of a hydrolase, and polyvinylinopyrrolidone. It has a procoagulant property and can coagulate blood in a short time.
  • the blood coagulation promoter of the present invention contains a poorly water-soluble polyoxyalkylene derivative and, if necessary, a partially saponified polybutyl alcohol, and thus exhibits excellent clot detachment properties, and has been shown to have coagulated.
  • the blood can be prevented from adhering to the inner wall of the blood collection tube as a blood clot, and the adhered blood clot can be peeled off.
  • the blood coagulation promoter of the present invention exhibits both excellent blood coagulation promoting properties and excellent clot detachment properties.
  • the water-soluble silicone oil is further contained in an amount of 3 ⁇ 10 ⁇ 3 to 7 parts by weight with respect to 100 parts by weight, the blood clot exfoliating property on the inner wall of the tube is further enhanced.
  • the blood collection tube of the present invention contains the blood coagulation promoter of the present invention, it is possible to provide a blood collection tube having both enhanced blood coagulation promoting property and blood clot separation property.

Abstract

優れた血液凝固促進性と優れた血餅剥離性との双方を発揮することができる血液凝固促進剤、及びこの血液凝固促進剤が収容された採血管を提供する。難水溶性ポリオキシアルキレン誘導体、部分けん化ポリビニルアルコール、吸着性無機物並びにペプチド鎖において、Ａｒｇと任意のアミノ酸残基との結合及び／またはＬｙｓと任意のアミノ酸残基との結合を加水分解し得る加水分解酵素からなる群から選ばれる少なくとも１種類の物質と、ポリビニルピロリドン、及び好ましくは水溶性シリコーンオイルを含有することを特徴とする血液凝固促進剤、及び前記血液凝固促進剤が有底の管状容器に収容されていることを特徴とする採血管。

Description

明 細 書 血液凝固促進剤及び採血管 技術分野
本発明は、 血液凝固促進剤及び採血管に関し、 さらに詳しくは、 優れ た血液凝固促進性と血餅剥離性とを有する血液凝固促進剤、 及びこの血 液凝固促進剤が収容された採血管に関する。 背景技術
通常の血液検査では、 採血管に採取した血液を凝固させた後、 遠心分 離操作を行うことによって目的とする血液成分を分離している。
このような採血管には、 採取した血液を短時間で凝固させる血液凝固 促進性や、 凝固した血液が血餅として採血管の内壁に付着することを防 止し、 付着した血餅を剥離する血餅剥離性が求められており、 管の内壁 に種々の加工を施した採血管が報告されている。
例えば、 特公平 5 _ 1 0 0 9 5号公報には、 所定の材質からなる容器 の内壁に、 水に不溶性のシリコーンオイル、 ポリビュルピロリ ドン及ぴ 吸着性物質を含有する血液凝固促進剤が塗布された採血管が開示されて いる。
また、 特開平 5— 1 0 3 7 7 2号公報には、 所定の材質からなる容器 の内壁に、 水溶性シリコーンオイルを介して血液凝固促進剤が塗布され た採血管が開示されている。
上記のような凝固促進剤を採血管の内壁に塗布することによって、 採 取した血液を短時間で凝固させることができると共に、 管の内壁に血餅 が付着することを防止することができると報告されている。 しかしながら、 このような採血管では、 管の内壁に血餅が付着するの を防止するためには高濃度のシリコーンオイルを塗布する必要があった c すなわち、 採血管の内壁に塗布されるシリコーンオイルの濃度は 5. 0 X 1 0— 6〜1. 0 X 1 0— 5 g c m2と高濃度であった。 そのため、 高 濃度のシリコーンオイルの存在によって、 検査値に悪影響を与えるおそ れがあるという問題があった。
また、 これらの採血管が栓体を有する場合には、 採血管に採取した血 液を凝固させると血餅が栓体に付着してしまうという問題があった。 発明の開示
本発明は、 上記従来の問題点に鑑み、 優れた血液凝固促進性と優れた 血餅剥離性との双方を発揮することができる血液凝固促進剤、 及びこの 血液凝固促進剤が収容された採血管を提供することを目的とする。
本発明に係る血液凝固促進剤は、 難水溶性ポリオキシアルキレン誘導 体と、 （a) 吸着性無機物並びに （b) ペプチド鎖において、 Ar gと 任意のアミノ酸残基との結合及び または L y sと任意のアミノ酸残基 との結合を加水分解し得る加水分解酵素からなる群から選ばれる少なく とも 1種類の物質と、 ポリビュルピロリ ドンとを含有することを特徴と する。
本発明の血液凝固促進剤のある特定の局面では、 難水溶性ポリオキシ アルキレン誘導体と、 （a) 吸着性無機物並びに （b) ペプチド鎖にお いて、 A r gと任意のアミノ酸残基との結合及び/または Ly sと任意 のァミノ酸残基との結合を加水分解し得る加水分解酵素からなる群から 選ばれる少なくとも 1種類の物質と、 ポリビュルピロリ ドンとの合計重 量 1 00重量部に対して、 3 X 10— 3〜7重量部の水溶性シリコーンォ ィルがさらに含有されている。 本発明に係る血液凝固促進剤では、 好ましくは、 部分けん化ポリビニ ノレアルコールがさらに含有される。
本発明の血液凝固促進剤のある特定の局面では、 難水溶性ポリオキシ アルキレン誘導体と、 部分けん化ポリビニルアルコールと、 （a ) 吸着 性無機物並びに （b ) ペプチド鎖において、 A r gと任意のアミノ酸残 基との結合及び Zまたは L y sと任意のアミノ酸残基との結合を加水分 解し得る加水分解酵素からなる群から選ばれる少なくとも 1種類の物質 と、 ポリビュルピロリ ドンとの合計重量 1 0 0重量部に対して、 3 X 1 0一3〜 7重量部の水溶性シリコーンオイルがさらに含有されている。 本発明に係る採血管は、 本発明に従って構成された血液凝固促進剤が 容器内に収容されていることを特徴とする。
以下、 本発明を詳細に説明する。
本発明の血液凝固促進剤は、難水溶性ポリォキシアルキレン誘導体と、
( a ) 吸着性無機物並びに （b ) ペプチド鎖において、 A r gと任意の アミノ酸残基との結合及び Zまたは L y s と任意のアミノ酸残基との結 合を加水分解し得る加水分解酵素からなる群から選ばれる少なくとも 1 種類の物質と、 ポリビュルピロリ ドンとを必須成分として含む。
本発明の血液凝固促進剤に用いられる難水溶性ポリオキシアルキレン 誘導体は、 血餅付着防止成分として用いられている。
難水溶性ポリオキシアルキレン.誘導体としては、 公知のポリオキシァ ルキレンに種々の化合物を誘導した誘導体が挙げられ、 例えば、 ポリオ リ ン誘導体等が挙げられる。
難水溶性ポリォキシアルキレン誘導体は、 水や血液に対して溶解性が 低いことが好ましく、水や血液に対して溶解しないことがより好ましレ、。 また、 難水溶性ポリオキシアルキレン誘導体は、 血餅付着防止成分と して作用するので、 凝固した後の血餅成分が容器の内壁に付着すること を防止することができ、 遠心分離時においても血餅の移動が制限される ことなく血餅と血清とを良好に分離することができる。
本発明の血液凝固促進剤では、 好ましくは、 部分けん化ポリビュルァ ノレコールが含有される。 部分けん化ポリビエルアルコールは、 血餅剥離 成分として用いられる。
部分けん化ポリビエルアルコールとしては、 公知の化合物を使用する ことができ、 例えば、 ポリ酢酸ビ ルを水酸化ナトリウムによってけん ィ匕された化合物等が挙げられる。
部分けん化ポリビエルアルコールのけん化度は、 7 5〜9 8モル％で あることが好ましく、 8 5〜9 5モル。 /0であることがより好ましい。 部分けん化ポリビュルアルコールのけん化度が 7 5モル。 /。未満である と、 部分けん化ポリビュルアルコールが血液中への溶解性や界面活性作 用が高くなるために検査値に悪影響を与えるおそれがある。
また、 部分けん化ポリビュルアルコールのけん化度が 9 8モル％を超 えると、 十分な血餅剥離性を発揮することが困難となることがある。 また、 部分けん化ポリビニルアルコールの重合度は、 3 0 0〜3 5 0 0であることが好ましく、 5 0 0〜2 5 0 0であることがより好ましい。 部分けん化ポリビニルアルコールの重合度が 3 0 0未満であると、 溶 解性が高くなりすぎて血餅剥離性が低下することがある。 また、 重合度 が 3 5 0 0を越えると、 粘度が高くなり過ぎるので容器内壁に均一に塗 布することが困難になることがある。
本発明の血液凝固促進剤に用いられる （a ) 吸着性無機物は、 血液凝 固成分として用いられる。
吸着性無機物は水に不溶性であることが好ましい。 吸着性無機物が水 に不溶性であることによって、 検査結果に与える影響を小さくすること ができる。
また、 吸着性無機物は粉末状であることが好ましい。 吸着性無機物が 粉末状であることによって吸着性無機物の比表面積が増大するので、 本 発明の血液凝固促進剤はより短時間で血液を凝固させることができる。 吸着性無機物の比表面積は、 1 0〜 1 0 0 O
Figure imgf000007_0001
gであることが好ま しく、 5 0〜 5 0 0 m2/ gであることがより好ましい。
吸着性無機物の平均粒径は、 5 0； m以下であることが好ましく、 1 0 μ m以下であることが好ましい。 吸着性無機物の平均粒径が 5 0 m を越えると、 短時間で血液を凝固させることが困難になることがある。
このような吸着性無機物としては、 例えば、 シリカ、 ガラス、 力オリ ン、 セライ ト、 ベントナイ ト等が挙げられる。
これらの吸着性.無機物は単独で用いられてもよく、 2種以上が混合さ れて用いられてもよい。
これらの吸着性無機物のうち、 シリカが好適に用いられる。 このシリ 力は粉末状であることが好ましく、 無定形成分を 2 0重量％以上含有す る多孔質状であることがより好ましい。
また、 このようなシリカは疎水性であることが好ましい。 シリカが疎 水性であることによって、 血液中への溶解度が低下して溶血を防ぐこと ができるとともに、 血液中への分散性が向上して短時間で血液を凝固さ せることができる。
また、 吸着性無機物は、 血液中での分散性が高いことが好ましい。 血 液中での分散性が高いことによって、 より短時間で血液を凝固させるこ とができる。
上記吸着性無機物の量が少なくなると、 血液凝固の時間が長くなつた り、 凝固が不完全になることがあり、 多くなると検査値に悪影響を及ぼ すおそれがあるので、血液 1 m Lあたり 1 X 1 0— 6〜1 X 1 0—3 gが好 ましく、 1 X 1 0— 5〜 1 X 1 0— 4がより好ましい。
上記（b )加水分解酵素はプロテアーゼであり、ぺプチド鎖において、
A r gと任意のアミノ酸残基との結合及ぴ Zまたは L y sと任意のアミ ノ酸残基との結合を加水分解し得るものが用いられる。
上記加水分解酵素としては、 例えば、 トリプシン、 トロンビン、 蛇毒 トロンビン様酵素等のセリンプロテアーゼ；カテブシン B、 フイシン等 のチオールプロテアーゼ；キ二う "一ゼ I等の金属プロテアーゼ等が挙げ られ、 特にセリンプロテアーゼが好適に用いられる。 上記加水分解酵素 の量が少なくなると、 血液凝固の時間が長くなつたり、 凝固が不完全に なることがあり、多くなると検查値に悪影響を及ぼすおそれがあるので、 加水分解酵素の使用量は、 血液 l m Lあたり 0 . 1〜 1 0 0単位が好ま しく、 ◦. 5〜 5 0単位がより好ましい。
本発明の血液凝固促進剤には、 さらにアミノ酸が含有されていても良 い。 アミノ酸は、 本発明においては上記加水分解酵素の安定化剤として 用いられ、 例えばグリシン、 β 了ラニン、 L—セリン、 L—トリプト ファン等が好適に用いられる。 アミノ酸の量が少なくなると、 加水分解 酵素の安定性を保つ効果が不十分となるおそれがあり、 多くなると検査 値に悪影響を及ぼすおそれがあるので、 加水分解酵素 1単位あたり 0 . 0 1〜； L O m gが好ましく、 ◦. 0 5〜 5 m gがより好ましい。
本発明の血液凝固促進剤には、 さらにアミン塩及び または第 4級窒 素を有する有機化合物が含有されていても良い。 アミン塩及びノまたは 第 4級窒素を有する有機化合物は、 へパリンを吸着、 中和して不活性化 するへパリン中和剤として作用する。
上記アミン塩を構成するアミンは第 1級、 第 2級及び第 3級ァミンの いずれでもよく、 アミン塩を構成する酸も無機酸及び有機酸のいずれで もよい。 無機酸としては、 例えば、 塩酸等のハロゲン化水素酸、 硫酸、 亜硫酸等が挙げられ、 有機酸としては、 例えば、 ギ酸、 酢酸等が挙げら れる。 ァミン塩の有機残基は通常アルキル基であるが、 イミノ基ゃエー テル基等の異種元素を含む炭化水素基であってもよい。 アミン塩は、 分 子内塩でもよい。 好ましいァミン塩の具体例としては、 例えば、 へキサ デシルジメチルァミン塩酸塩や、 テトラデシル （ァミノェチル） グリシ ン等が挙げられる。
上記第 4級窒素を有する有機化合物としては、 例えば、 テトラアルキ ルアンモニゥムが挙げられるが、 アルキル基の代わりにァリ一ル基を有 する化合物や、 イミノ基もしくはエーテル基等の異種元素を含む炭化水 素基を有する化合物でもよい。 好ましい第 4級窒素を有する有機化合物 としては、 例えば、 ドデシルトリメチルアンモユウムクロライドが挙げ られるが、 第 4級窒素を有するポリカチオン等の有機重合体を用いても よい。 上記有機化合物の量が少なくなると、 へパリンが中和されないた めへパリンを含む血液が凝固しなくなることがあり、 多くなると検査値 に悪影響を及ぼすおそれがあるので、 血液 1 m Lあたり 0 . 0 0 5〜1 O m gが好ましく、 0 . 0 1〜 5 m gがより好ましい。
本発明の血液凝固促進剤には、 さらに抗線溶剤及び/または抗プラス ミン剤が含有されていてもよい。 これらにより、 血液の凝固反応過程で 拮抗的に生成してくるプラスミンのフイブリン分解作用が阻害される。 そのため血液の凝固が促進され、 さらに凝固においても凝固状態を安定 に保つことができる。
上記抗線溶剤及び または抗プラスミン剤としては、 例えば、 ァプロ チェン、 大豆トリプシンインヒビター、 ε—アミノカプロン酸、 ρ—ァ ミノメチル安息香酸、 アミノメチルシクロへキサンカルボン酸等が、 単 独であるいは組み合わされて用いられる。 これらは、 得られる血清を用 いた臨床検査に影響を及ぼさない程度の量で血液凝固促進剤中に含有さ れる。 例えば、 ァプロチュンは、 血液 lmLあたり約 1 00~600 K I U (単位） の割合で、 大豆トリプシンインヒビターは血液 1 mLあた り約 500〜4000 FU (単位） の割合で、 ε—アミノカプロン酸、 ρ—アミノメチル安息香酸、アミノメチルシク口へキサンカルボン酸は、 いずれも血液 lmLあたり約 1 X 1 0— 8〜 1 X 1 0— 2 gの割合が好ま しい。
本発明の血液凝固促進剤に用いられるポリビュルピロリ ドンは、 （a) 吸着性無機物や上記 （b) 加水分解酵素を分散させる分散剤として用い られる。
このようなポリ ビュルピロリ ドンと しては、 例えば、 N—ビエルピロ リ ドン等が挙げられる。
ポリビニ^/ピロリ ドンの重量平均分子量は 1万〜 60万であることが 好ましく、 3万〜 50万であることがより好ましい。
ポリビニルピロ リ ドンの重量平均分子量が 1万未満であると溶血を引 き起こすおそれがある。 また、 重量平均分子量が 60万を超えると血液 中における吸着性無機物等の分散性を低下させるため、 短時間で血液を 凝固させることが困難になることがある。
また、 ポリビニルピロリ ドンは、 本発明の血液凝固促進剤を構成する 化合物に対して高い溶解性を示すことが好ましく、 特に水溶性シリコー ンオイルに対して高い溶解性を示すことが好ましい。
血液凝固促進剤を構成する化合物との溶解性が高いことによって、 本 発明の血液凝固促進剤は、 水等の溶媒と混合しても安定した状態で存在 することができるとともに、 これらの化合物が吸着性無機物の表面に吸 着して血液が凝固しにくくなることを防止することができる。
本発明の血液凝固促進剤を構成する各化合物の配合量は、 難水溶性ポ リオキシアルキレン誘導体 1 00重量部に対し、 部分けん化ポリビュル アルコール 1〜2 X I 04重量部、 吸着性無機物並びにペプチド鎖にお いて、 A r gと任意のアミノ酸残基との結合及び/または L y sと任意 のァミノ酸残基との結合を加水分解し得る加水分解酵素からなる群から 選ばれる少なくとも 1種類の物質 4 X 1 02〜 5 X 1 04重量部、 及びポ リビュルピロリ ドン 2 X 1 02〜4 X 104重量部であることが好ましい。 なお、 部分けん化ポリビュルアルコールが配合されない場合には、 部分 けん化ポリ.ビュルアルコールを除いた他の化合物の配合量を上記の通り とすることが好ましい。
また、 上記の各配合量において、 難水溶性ポリオキシアルキレン誘導 体 1 00重量部に対する部分けん化ポリビエルアルコールの配合量は、 1 0〜 2 X 1 03重量部であることがより好ましい。
また、 難水溶性ポリオキシアルキレン誘導体 100重量部に対する吸 着性無機物並びにペプチド鎖において、 A r gと任意のアミノ酸残基と の結合及び Zまたは L y sと任意のアミノ酸残基との結合を加水分解し 得る加水分解酵素からなる群から選ばれる少なくとも 1種類の物質の配 合量は 7 X 1 02〜5 X 1 03重量部であることがより好ましく、 ポリビ ニルピロリ ドンの配合量は、 5 X 1 02〜4 X 1 03重量部であることが より好ましい。
また、 本発明の血液凝固促進剤には、 血餅付着防止成分として水溶性 シリコーンオイルを少量添加してもよい。
水溶性シリコーンオイルを用いることによって、 栓体を有する採血管 においては、 管の内壁に対してより優れた血餅剥離性を発揮するととも に、 栓体に対しても優れた血餅剥離性を発揮することができる。
水溶性シリ コーンオイルと しては、 親水性が高いシリコーンオイルで あれば特に限定されず、 例えば、 極性基の導入によって親水性に変性さ れたシリコーンオイル等が挙げられる。 このような極性基としては、 例えば、 水酸基、 アミノ基、 カルボキシ ル基、 エポキシ基、 ヱ一テル基等が挙げられる。
変性前のシリコーンオイルとしては、 例えば、 ジメチルポリシロキサ ン、メチルハイ ドロジエンポリシロキサン等の脂肪族シリコーンオイル、 メチルフ ノルポリシロキサン等の芳香族シリコーンオイル等が挙げら れる。
これらの水溶性シリコーンオイルのうち、 エーテル基によって変性さ れたジメチルポリシロキサンが好適に用いられる。
また、 これらの水溶性シリコーンオイルは単独で用いられてもよく、 2種以上が混合されて用いられてもよい。
また、 本発明の血液凝固促進剤が水溶性シリコーンオイルを含有する 場合、 水溶性シリコーンオイルの配合量は、 難水溶性ポリオキシアルキ レン誘導体と、 （a ) 吸着性無機物及び （b ) 加水分解酵素からなる群 から選ばれる少なくとも 1種類の物質と、 ポリビニルピロリ ドンとの合 計重量 1 0 0重量部に対して 3 X 1 0 -3〜 7重量部であることが好まし く、 3 X 1 0 -2〜5重量部であることがより好ましい。
なお、 前述した部分けん化ポリビュルアルコールも配合されている場 合には、 難水溶性ポリオキシアルキレン誘導体と、 部分けん化ポリビ- ルアルコールと、 （a ) 吸着性無機物及び （b ) 加水分解酵素からなる 群から選ばれた少なくとも 1種類の物質と、 ポリビエルピロリ ドンとの 合計 1 0 0重量部に対し、水溶性シリコーンオイルを 3 X 1 0 _ 3〜7重 量部とすることが好ましく、 3 X 1 0— 2〜 5重量部であることがより好 ましい。
水溶性シリコーンオイルの配合量が 7重量部を超えると検査値に悪影 響を及ぼす可能性がある。 また、 配合量が 3 X 1 0 -3重量部未満である と、 採血管の栓体に対して十分な血餅剥離性を発揮することが困難とな ることがある。
本発明の採血管には、 必要に応じて血清分離剤を収容しても良い。 本発明の血液凝固促進剤が血液と接触されることによって血液の凝固 が促進される。
血液凝固促進剤と血液とを接触させる方法としては特に限定されない 力 例えば、 ①予め本発明の血液凝固促進剤が収容された採血管等の有 底の管状容器に採取した血液を加える方法、 ②採取した血液が入った採 血管等の有底の管状容器に本発明の血液凝固促進剤を加える方法、 等が 挙げられる。
これらの方法のうち、 ①の方法が好適に用いられる。 なお、 このよう な予め血液凝固促進剤が収容された採血管も本発明の 1つの態様である。 図 1は、 本発明に係る採血管の一例を示す正面断面図である。 有底管状 の採血管 1内に、 本発明に係る血液凝固促進剤 2が収納されている。 採 血管 1は、 血液凝固促進剤 2を収容した真空採血管であってもよい。 また、 栓体を有する採血管であってもよい。 採血管が栓体を有してい る場合、 栓体にも血液凝固促進剤が塗布されていることが好ましい。 上記採血管の材質としては特に限定されないが、 例えば、 ポリエチレ ンテレフタレート等の樹脂、 金属、 ガラス等が挙げられる。
採血管に血液凝固促進剤を収容する方法は特に限定されないが、 例え ば、 水等の溶媒に本発明の血液凝固促進剤を分散させた溶液を採血管の 内壁に塗布した後、 乾燥によって溶媒を除去する方法等が挙げられる。 採血管の内壁に血液凝固促進剤を塗布する方法としては、 例えば、 ス プレー法やディッビング法等が挙げられる。
本発明の血液凝固促進剤が採血管の内壁に塗布された後の該血液凝固 促進剤中の難水溶性ポリオキシアルキレン誘導体の量は、 内壁上の面積 を基準として、 1 X 1 0 -9〜： L X 1 0 -5 g / c m2が好ましく、 1 X 1 0 - 8〜 1 X 1 0-6g/c m2がより好ましい。 難水溶性ポリオキシアルキレ ン誘導体の量が l X 1 0-9gZc m2未満であると管の内壁に対して + 分な血餅剥離性を発揮することが困難になることがある。 また、 難水溶 性ポリオキシアルキレン誘導体の量が 1 X l O-SgZcm2を超えると 検査値に悪影響を及ぼすおそれがある。
本発明の血液凝固促進剤が採血管の内壁に塗布された後の該血液凝固 促進剤中の部分けん化ポリビュルアルコールの量は、 内壁上の面積を基 準として、 1 X 1 0-9〜 1 X 1 0-5 g/ c m2が好ましく、 ι χ i o - 8〜 l X l O-SgZc mSがより好ましい。部分けん化ポリビュルアルコール の量が 1 X 1 0- 9 cm2未満であると管の内壁に対して十分な血餅 剥離性を発揮することが困難になることがある。 また、 部分けん化ポリ ビュルアルコールの量が 1 X 1 0- Sg/c m2を超えると、吸着性無機物 の分散性が低下するために短時間で血液を凝固させることが困難になる ことがある。
本発明の血液凝固促進剤が採血管の内壁に塗布された後の該血液凝固 促進剤中のポリ ビニルピロリ ドンの量は、 内壁上の面積を基準として、 1 X 1 0 -7~ l X 1 0-4g/c m2が好ましく、 1 X 10-6〜： L X 1 0-5 g/c m2がより好ましい。ポリビュルピロリ ドンの量が 1 X 1 0-7 gZ c m2未満であると吸着性無機物の表面が血餅付着防止成分で覆われて 血液と直接接触しにくくなるので短時間で血液を凝固させることが困難 ' になることがある。 また、 ポリビュルピロリ ドンの量が 1 X 1 0-4g/ c m2 を超えると、 吸着性無機物の分散性が低下するために短時間で血 液を凝固させることが困難になることがある。
本発明の血液凝固促進剤が採血管の內壁に塗布された後の該血液凝固 促進剤中の水溶性シリコーンオイルの量は、内壁上の面積を基準として、 1 X 1 0 - 1。〜 l X 1 0-6g/c ni2が好ましく、 1 X 10 -9〜 5 X 1 0 -7
2 g / c m2力 Sより好ましい。 水溶性シリコーンオイルの量が 1 X 1 0 -1。 g / c m2未満であると、 採血管をゴム栓等の栓体を有する場合、 栓体 に対して十分な血餅剥離性を発揮することが困難になることがある。 ま た、 シリコーンオイルの量が 1 X 1 0 -6 g Z c m2を超えると、 検査値に 悪影響を及ぼすおそれがある。
本発明の採血管を用いて血液を凝固させる方法としては、 例えば、 本 発明の採血管に血液を採取して密封した後、 室温で放置することによつ て血液を凝固させる方法や、 血液を採取した後、 血清分離剤等の添加剤 を添加して血液を凝固させる方法等が挙げられる。
また、 本発明の採血管は、 血液が凝固した後に遠心分離操作を行い得 るものが好ましい。 これによつて、 凝固した血液の分離を容易に行うこ とができる。 図面の簡単な説明
図 1は、 本発明の採血管の一例を示す正面断面図。 発明を実施するための最良の形態
以下、 実施例により本発明を具体的に説明するが、 本発明はこれらに 限定されるものではない。
以下の実施例及び比較例において、 血液凝固促進剤の配合成分として 用いた化合物は以下の通りである。
•難水溶性ポリォキシアルキレン誘導体
ポリプロピレンダリコールのグリセリン誘導体
(旭電化工業社製、 「アデ力カーポール G 4 0 0 0」 ）
-部分けん化ポリビュルアルコール
(けん化度 8 7 - 8 9モル％、 重合度 1 0 0 0 ) •ポリビニノレピロリ ドン
(重量平均分子量 4 5 0 0 0 )
-吸着性無機物
微粉末シリカ
·加水分解酵素
トロンビン
(持田製薬社製、 トロンビン持田）
'水溶性シリ コーンオイル
エーテル基によって変性されたジメチルポリシロキサン
(東レ 'ダウコーユング 'シリ コーン社製、 「 S F 8 4 1 0オイル J )
•溶媒
イオン交換水
[実施例 1〜 1 2、 比較例 1〜 3 ]
(血液凝固促進剤の調製）
溶媒であるイオン交換水に対して各化合物を表 1及び表 2に示す組成 となるように混合することによつて血液凝固促進剤を調製した。
(採血管の作製） ―
それぞれの実施例及び比較例によって得られた血液凝固促進剤の 2 0 m 1を内容量が 1 0 m lのポリエチレンテレフタレ一ト製の血清分離用 採血管からなる管状容器の内壁にスプレー法によって均一に塗布し、 風 乾することによって採血管を作製した。
各採血管を試験用採血管として、 以下の評価を行った。
(血液凝固時間の測定）
実施例 1 ~ 1 2及び比較例 1〜 3で得られた試験用採血管については、 試験用採血管に 3 m 1 のヒ ト新鮮血液を採取してパラフィルムによって 密封した後、 5回転倒混和して 2 5 °Cで放置した。 このとき、 採血終了
4 時点から血液が完全に凝固するのに要した時間（単位：分）を測定した。 凝固の判定は、 試験用採血管を傾けても血液上の上面が動かず、 さらに 逆さに保っても血液が流れ出ない時点とした。 また、 1回転倒混和した 以外は上記と同様に操作した場合についても評価した。 実施例 1 3〜2 4で得られた試験用採血管については、 まず、 試験用採血管の内部を排 気して採血量が 3 m l となるように圧力を調節し、 ブチルゴムの栓によ つて密栓を行った。 この試験用採血管に 3 m 1のヒ ト新鮮血液を採取し た後、 5回転倒混和して 2 5 °Cで放置した。 このとき、 採血終了時点か ら血液が完全に凝固するのに要した時間 （単位：分） を測定した。 凝固 の判定は、 試験用採血管を傾けても血液上の上面が動かず、 さらに逆さ に保っても血液が流れ出ない時点とした。 また、 1回転倒混和した以外 は上記と同様に操作した場合についても評価した。
(溶血 ·血餅の確認） ' 血液凝固測定を行った後の各々の試験用採血管を遠心分離機にセット し、 3 0 0 0 r p mの回転数で 5分間遠心分離を行い、 遠心分離された 血清の溶血の有無を目視によって観察した。 また、 遠心分離後の試験用 採血管の内壁やゴム拴に血餅が付着しているかを目視によって確認した c 血餅の付着または溶血が確認された場合は 「あり」 と判定し、 確認さ れなかった場合は 「なし」 と判定した。
(フ リチンの測定）
上記血液凝固時間の測定で 5回転倒混和した試験用採血管については、 遠心分離後の試験用採血管に対して既知濃度のフェリチン （5 6 n g / m l ) を含有する血清を 3 m 1添加してよく混和した後、 フェリチン測 定試薬 （デン力生研社製、 「F E R—ラテックス X 2」 ） を添加し、 自 動分析装置 （日立製作所社製、 「7 1 7 0 S」 ） によってフェリチンの 濃度 （単位： n g /m l ) を測定した。
5 表 2及び表 3にそれぞれの測定結果を示す c
表 1
Figure imgf000018_0001
表 2
Figure imgf000018_0002
6 表 3 実 ί g例 顺 単位
13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 蝤 mwリ シアルキレン^^ t% 0.1 0.3 0.2 0.2 0.2 0.2 0.1 0.3 0.2 0.1 0.2 0.2 一 水溶性シリコーンオイル wt% 0.05 0.05 0.01 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.01 ― . 0.2 0.001 ― 組部分けん化ホ °!)ビニルアルコ-ル Wt°/o 0.3 0.3 0.1 0.1 0.05 0.5 0.3 0.3 0.1 0.1 0.1 0.1 ― 成 ポリビニノレピロリ ドン wt% 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
吸着性無機物 wt% 2.5 2.5 2.5 j 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 加水分解酵素 IU/mL 1.0 10.0 45.0
イオン交換水 wt% 95.1 94.9 95.2 95.2 95.3 94.8 95.1 97.4 97.7 95.3 95.0 95.2
血液凝固時間 (分） 15 17 16 16 17 16 3 1 0.5 16 16 16 管壁血餅付着 なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし 混和 5回
ゴム栓血餅付着 なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし 評 溶血 なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし 価 血液凝固時間 (分） 16 19 17 18 20 19 4 1 0.5 18 19 19 結 管壁血餅付着 なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし
混和 1回
果 ゴム检血餅付着 なし なし なし なし なし なし なし なし なし あり なし あり
溶血 なし なし なし なし なし なし なし なし なし あり なし あり フェリチン^ ¾直 (ng/mL) ① 55 55 56 56 56 54 55 55 55 56 51 55 56
② 55 54 55 55 56 55 54 56 55 55 48 56" 56
産業上の利用可能性
本発明の血液凝固促進剤は、 （a ) 吸着性無機物及び上記 （b ) 加水 分解酵素からなる群から選ばれる少なくとも 1種類の物質と、 ポリビニ ノレピロリ ドンとを含有しているため、 優れた血液凝固促進性を発揮し、 短時間で血液を凝固させることができる。
また、 本発明の血液凝固促進剤は、 難水溶性ポリオキシアルキレン誘 導体と、 必要に応じて部分けん化ポリビュルアルコールとを含有してい るため、 優れた血餅剥離性を発揮し、 凝固した血液が血餅として採血管 の内壁に付着することを防止するとともに、 付着した血餅を剥離するこ とができる。
従って、 本発明の血液凝固促進剤は、 優れた血液凝固促進性と優れた 血餅剥離性との双方を発揮する。
また、 本発明の血液凝固促進剤において、 難水溶性ポリオキシアルキ レン誘導体と、 必要に応じて添加される部分けん化ポリ ビニルアルコー ルと、 吸着性無機物並びにペプチド鎖において、 A r gと任意のァミノ 酸残基との結合及び Zまたは L y sと任意のアミノ酸残基との結合を加 水分解し得る加水分解酵素からなる群から選ばれる少なくとも 1種類の 物質と、 ポリビュルピロリ ドンとの合計重量 1 0 0重量部に対して、 3 X 1 0 - 3〜 7重量部の水溶性シリコーンオイルをさらに含有している場 合、 管の内壁に対する血餅剥離性がより一層高められる。 加えて、 採血 管の栓体に対しても優れた血餅剥離性を発揮する。 さらに、 従来のよう な高濃度の水溶性シリコーンオイルを含有していないので、 溶血等が生 じ難い。 従って、 検査値に悪影響を与えることがない。
また、 本発明の採血管では、 本発明の血液凝固促進剤が収容されてい るので、 血液凝固促進性及び血餅分離性の双方が高められた採血管を提 供することができる。
8

Claims

求 の 範 囲
1 . 難水溶性ポリォキシアルキレン誘導体と、 吸着性無機物並びに ペプチド鎖において、 A r gと任意のアミノ酸残基との結合及び/また は L y sと任意のアミノ酸残基との結合を加水分解し得る加水分解酵素 からなる群から選ばれる少なくとも 1種類の物質と、 ポリビエルピロリ ドンとを含有することを特徴とする血液凝固促進剤。
2 . 難水溶性ポリオキシアルキレン誘導体と、 吸着性無機物並びに ペプチド鎖において、 A r gと任意のアミノ酸残基との結合及び/また は L y sと任意のアミノ酸残基との結合を加水分解し得る加水分解酵素 からなる群から選ばれる少なくとも 1種類の物質と、 ポリビュルピロリ ドンとの合計重量 1 0 0重量部に対して、 3 X 1 0— 3〜 7重量部の水溶 性シリコーンオイルをさらに含むことを特徴とする請求項 1に記載の血 液凝固促進剤。
3 . 部分けん化ポリビニルアルコールをさらに含有することを特徴 とする請求項 1に記載の血液凝固促進剤。
4 . 難水溶性ポリオキシアルキレン誘導体と、 部分けん化ポリビ- ルアルコールと、 吸着性無機物並びにペプチド鎖において、 A r gと任 意のアミノ酸残基との結合及ぴ _ または L y sと任意のアミノ酸残基と の結合を加水分解し得る加水分解酵素からなる群から選ばれる少なくと も 1種類の物質と、 ポリビエルピロリ ドンとの合計重量 1 0 0重量部に 対して、 3 X 1 0— 3〜7重量部の水溶性シリコーンオイルをさらに含む ことを特徴とする請求項 3に記載の血液凝固促進剤。
5 . 請求項 1〜4に記載の血液凝固促進剤が、 有底の管状容器内に 収容されてなることを特徴とする採血管。
9
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