DE69420872T2

DE69420872T2 - Hgh enthaltende pharmazeutische zubereitungen

Info

Publication number: DE69420872T2
Application number: DE69420872T
Authority: DE
Inventors: Fabrizio Samaritani
Original assignee: Applied Research Systems ARS Holding NV
Current assignee: Merck Serono SA
Priority date: 1994-06-17
Filing date: 1994-06-17
Publication date: 2000-01-13
Anticipated expiration: 2014-06-18
Also published as: GR3031687T3; WO1995035116A1; JP3829991B2; DK0804223T3; DE69420872D1; EP0804223B1; US5898030A; ES2139081T3; EP0804223A1; ATE184798T1; JPH10504531A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft menschliches Wachstumshormon (hGH) enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen. Genauer betrifft sie Zusammensetzungen aus saccharosestabilisiertem menschlichen Wachstumshormon. Es ist bekannt, daß die hochgereinigten Proteine nicht zeitstabil sind und beispielsweise im Gemisch mit Sacchariden, wie Lactose und Mannit, oder ansonsten mit Proteinen und Aminosäuren, wie Albumin und Glycin, stabilisiert werden.
Menschliches Wachstumshormon wird in der menschlichen Hirnanhangsdrüse sezerniert. Seine reife Form besteht aus 191 Aminosäuren, besitzt ein Molekulargewicht von 22.000 und ist somit dreimal so groß wie Insulin. Dieses Hormon ist ein lineares Polypeptid, das zwei Disulfidbrücken innerhalb der Kette enthält. Bis zum Aufkommen der rekombinanten DNA-Technik konnte hGH nur durch arbeitsaufwendige Extraktion aus einer begrenzten Quelle erhalten werden: die Hirnanhangsdrüsen menschlicher Leichen. Die sich daraus ergebende geringe Menge der Substanz beschränkt ihre Anwendung auf die Behandlung von hypophysärem Minderwuchs, obwohl vorgeschlagen wurde, daß die Substanz bei dar Behandlung von Verbrennungen, Wundheilung, Dystrophie, Knochenbruch, diffuser Magenblutungen und Pseudoarthrose nützlich ist. hGH kann in rekombinanten Wirtszellen in Mengen produziert werden, die adäquat sind, um hypophysären Minderwuchs und die anderen Zustände, bei denen es effektiv ist, zu behandeln.
Die hauptsächliche biologische Wirkung von hGH ist die Wachstumsförderung. Die betroffenen Organsysteme umfassen das Skelett, Bindegewebe, Muskeln und Eingeweide, wie Leber, Dünndarm und Nieren. Wachstumshormon übt seine Wir kung durch Wechselwirkung mit spezifischen Rezeptoren auf Zellmembrane aus.
Zusammensetzungen von lyophilisierten Proteinen sind in M. J. Pikal, Biopharm, Oktober 1990, 25-30, beschrieben. Es gibt beschriebene Beispiele von Wachstumshormonfomulierungen mit stabilisierenden Exzipientien, wie Mannit, Glycin, Arginin und Lactose.
Insbesondere wird die Lyophilisation in Gegenwart verschiedener Substanzen in ihrem amorphen Zustand, wie Zuckern, beschrieben, die die Zusammenbruchtemperatur erhöhen und den Erhalt kürzerer Lyophilisationszeiten erlauben. Jedoch ist es gemäß dem Autor nicht möglich, eine Standardformulierung für alle Proteine vorherzusehen, und die Wahl der besten Formulierung benötigt eine beachtliche Auswahlarbeit.
Das deutsche Patent DE 35 20 228 beschreibt bioaktive Proteine, einschließlich Wachstumshormone, in Formulierungen, die mit Polysacchariden, die repititive Maltotrioseeinheiten umfassen, stabilisiert sind.
Die WO 89/09614 beschreibt Formulierungen von menschlichem Wachstumshormon, das mit Glycin, Mannit und einem Puffer stabilisiert ist, wobei das Molverhältnis von Wachstumshormon : Glycin 1 : 50-200 beträgt.
Das US-Patent 5 I22 367 beschreibt ein System mit kontrollierter Freisetzung zur Verabreichung von Wachstumshormon, das das Protein und ein Polysaccharid, eingearbeitet in eine Polymermatrix, umfaßt.
Die EP-Patentanmeldung 210 039 beschreibt ein Implantat mit kontrollierter Freisetzung für die subcutane Verabreichung von Rinder- oder Schweinewachstumshormon an ein Tier in Form einer Matrix, die 40% Saccharose enthält.
Erfindungsgemäß kann hGH entweder natürlich oder synthetisch sein, d. h. produziert auf der Basis Rekombinanten- DNA-Technik, wobei die zuletzt genannte bevorzugt ist.
Die injizierbaren Formulierungen von menschlichem Wachstumshormon werden nach einem Verfahren erhalten, das ihre Lyophilisation umfaßt, um ein trockenes Pulver zu erhalten. Menschliches Wachstumshormon neigt in hohem Maße zur Denaturierung während des Lyophilisationsprozeßes, und es ist erwünscht, stabile Formulierungen zu erhalten, um einen längeren Lebenszyklus zu erhalten, wenn sie bei Raumtemperatur gelagert werden.
Damit Materialien wie hGH Pflegepersonal und Patienten zur Verfügung gestellt werden können, müssen diese Materialien als phamazeutische Präparate hergestellt werden. Solche Präparate müssen eine Aktivität für geeignete Zeitspannen aufrechterhalten, müssen in ihrem eigenen Anwendungsgebiet verträglich sein, um leicht und rasch einem Menschen verabreicht werden zu können, und müssen leicht herstellbar sein. In vielen Fällen werden pharmazeutische Formulierungen in gefrorener oder in lyophilisierter Form bereitgestellt. In diesem Fall muß die Zusammensetzung vor Gebrauch aufgetaut oder rekonstituiert werden. Die gefrorene oder lyophilisierte Form wird oft verwendet, um die biochemische Integrität und die Bioaktivität medizinischer Mittel, die in den Zusammensetzungen enthalten sind, unter einer breiten Vielzahl von Lagerbedingungen aufrechzuerhalten, wie von einem Fachmann auf dem Gebiet anerkannt wird, daß lyophilisierte Präparate oft die Aktivität besser als ihre flüssigen Gegenstücke beibehalten. Solche lyophilisierten Präparate werden vor Gebrauch durch Zugabe eines geeigneten pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittels, wie sterilem Wasser zur Injektion oder steriler physiologischer Kochsalzlösung und dergleichen, rekonstituiert.
Alternativ kann die Zusammensetzung in flüssiger Form bereitgestellt werden, die für die unmittelbare Verwendung geeignet ist. Wünschenswert ist eine Flüssigformulierung, die ihre Aktivität bei Langzeitlagerung beibehält.
Die gegenwärtige Formulierung von hGH verliert ihre Aktivität infolge der Bildung von Dimeren und Aggregaten höherer Ordnung (Makrobereich) während der Verarbeitung der Formulierung sowie während der Lagerung und der Rekonstitution. Andere chemische Veränderungen, wie Deamidierung und Oxidation, können auch nach Lagerung eintreten.
Menschliches Wachstumshormon kommt auf dem Markt in Formulierungen vor, die beispielsweise mit Mannit stabilisiert sind, SaizenR und GrormR, Serono.
Es wurde nun gefunden, daß Saccharose den hGH- Formulierungen, und insbesondere der Form dieses Glykoproteins, das mit der Rekombinanten-DNA-Technik hergestellt wurde, eine bessere Stabilität verleiht. Es wurde auch gefunden, daß Saccharose überraschenderweise die Bildung eines Präzipitats verhindert, wenn die rekonstituierten Lösungen geschüttelt werden.
Die Hauptaufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen, die ein festes inniges Gemisch aus menschlichem Wachstumshormon und einer stabilisierenden Menge an Saccharose allein umfassen.
Eine weitere Aufgabe ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur Herstellung der pharmazeutischen Zusammensetzung, umfassend die Stufe der Lyophilisation einer wäßrigen Lösung der Komponenten in den Behältern. Eine weitere Aufgabe ist die Bereitstellung einer Präsentationsform der pharmazeutischen Zusammensetzung, umfassend das feste Gemisch, hermetisch abgeschlossen in einer sterilen Form in nerhalb eines Behälters, der für die Lagerung vor Gebrauch geeignet ist und der für die Rekonstitution des Gemisches für injizierbare Substanzen geeignet ist.
Eine weitere Aufgabe ist die Bereitstellung einer Lösung für das feste Gemisch, das zu einer injizierbaren Lösung rekonstituiert wurde.
Um die Wirkung des Exzipiens auf die Stabilität der Wirkstoffe zu bewerten, wurden verschiedene Formulierungen mit rekombinantem hGH, die 5 oder 10 mg pro Phiole enthielten, mit verschiedenen Exzipientien hergestellt: Saccharose, Glycin, Mannit, Saccharose plus Mannit und Mannit plus Glycin.
Die Zusammensetzungen der verschiedenen Formulierungen, die hergestellt wurden, sind in den Tabellen 1 und 4 dargestellt. Die Herstellung des Lyophilisats wurde durch Verdünnen der Masse von hGH mit Lösungen, die die Stabilisatoren enthalten, hergestellt, wobei sich alle Substanzen in Puffern mit pH 7,5 befinden. Die so erhaltenen Lösungen wurden filtriert, auf das Endvolumen gebracht, in verschiedene Glasphiolen gefüllt und lyophilisiert.
Die Untersuchung der Stabilität solcher Formulierungen, die bei 4ºC, 25ºC, 37ºC und 25ºC 24 Wochen gelagert wurden, wurde durch Umkehrphasen-HPLC (RP-HPLC) gemäß dem von R. M. Riggin et al. Anal. Biochem., 167 : 199-209, 1987, beschriebenen Verfahren und Größenausschluß-HPLC (HPSEC) gemäß der U. S. Pharmacopeia Preview Nov.-Dez. 1990, S. 1253- 1261, bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2-3 und 5-6 dargestellt, wobei das Maß als prozentuale Wiedergewinnung von hGH in den verschiedenen Formulierungen ausgedrückt ist.
Das chromatographische Assayverfahren zur Bewertung der prozentualen Wiedergewinnung von hGH wurde, wie von Pikal in Pharmaceutical Research 8, S. 428 "Assays", beschrieben, durchgeführt.
In der Präformulierungsphase wurde die Wirkung des pH- Wertes und des Puffers auf die Stabilität des rhGH in gefriergetrockneter Form durch Bewerten der Stabilität bei 50ºC getestet. Die Tests wurden in verschiedenen Puffersystemen, die mit Essigsäure, Phosphorsäure, Bernsteinsäure, 0,01 M bei pH 6,00, 7,00 und 8,00 mit NaOH hergestellt worden waren, durchgeführt.
Die Ergebnisse zeigten, daß die rhGH-Stabilität durch den Puffer nicht beeinflußt wurde, die Formulierungen bei etwa pH 8,0 auf jeden Fall stabiler waren.
Der ausgewählte pH-Wert für die Zusammensetzungen war 7,5.
Sieben gefriergetrocknete Formulierungen mit rhGH-Konzentrationen von 5 mg/Phiole wurden dann hergestellt, wobei sowohl Phosphat als auch Succinatpuffer mit pH 7,5 verwendet wurden, um die Kompatibilität des Wirkstoffs mit verschiedenen Exzipientien (Saccharose 48,4 mg/Phiole, Mannit 36,4 mg/Phiole, Mannit/Glycin 25+4 mg/Phiole, Mannit/Saccharose 32+7,5 mg/Phiole) zu testen. Die Menge der Exzipientien wurde ausgewählt, um eine isotone Lösung nach Rekonstitution mit einem bakteriostatischen Lösungsmittel zu haben. Das Füllvolumen betrug 1 ml.
Proben, die unter sterilen Bedingungen hergestellt worden waren, wurden bei 50ºC, 37ºC, 25ºC und 4ºC für 24 Wochen gelagert und mittels HPSEC, Umkehrphasen-HPLC getestet. pH-Wert und Feuchtigkeitsgehalt wurden bestimmt.
Die Stabilität der rekonstituierten Lösung mit 0,3% m- Cresol und 0,9% Benzylalkohol bei 4ºC und 25ºC wurde ebenfalls untersucht.
Die HPSEC und RP-HPLC wurden wie vorstehend beschrieben durchgeführt.
Der pH-Wert wurde mit einem pH-Meter an eine Phiole, die mit 1 ml Wasser zur Injektion rekonstituiert worden war, bestimmt. Um den Feuchtigkeitsgehalt der lyphilisierten Phiolen zu bestimmen, wurde die Zusammensetzung einer Phiole in 1 ml 2-Isopropanol suspendiert, durch ein Anotop 10, 0,22 um Einwegfilter (Merck) filtriert und in ein Metrohm-Coulometer injiziert.
Die Ergebnisse der Stabilität, die mittels RP-HPLC getestet wurde (Riggin's Verfahren), sind in Tabelle 2 dargestellt. Die chromatographischen Profile der Formulierungen, die Saccharose enthalten (HGH/3 und HGH/7 von Tabelle 1) nach 24 Wochen bei 50ºC unterscheiden sich nicht von denjenigen, die zum Zeitpunkt 0 erhalten wurden.
Gleichzeitig wurde eine Reinigungsabnahme von 13-22% in den Formulierungen, die Mannit und Mannit+Glycin enthalten, gefunden.
In Tabelle 3 zusammengestellte Daten beziehen sich auf Ergebnisse, die mittels HPSEC-Analysen erhalten wurden. Keine Abnahme der prozentualen rhGH-Reinheit wurde in allen getesteten Formulierungen gefunden. Keine signifikante Variation des Feuchtigkeitsgehalts wurde während der Untersuchung in allen lyophilisierten getesteten Formulierungen gefunden.
Eine Abnahme des pH-Werts wurde bei 37ºC und 50ºC für die Chargen HGH/5 und HGH/7 von Tabelle 1 beobachtet.
Die Stabilität der rekonstituierten Lösungen wurde auch mittels RP-HPLC (Riggin's Verfahren) und HPSEC-Analysen untersucht.
Mit dem RP-HPLC-Verfahren wurde nach 5 Wochen bei 25ºC eine Reinheitsabnahme im Bereich von 30% bis 50% für Proben gefunden, die sowohl mit Benzylalkohol als auch mit m- Cresol rekonstituiert worden waren. Nach 7 Wochen bei 4ºC betrug die Variation etwa 14% in Gegenwart von Benzylalkohol und 4% - 8% mit m-Cresol.
Keine Variation wurde bei 4ºC mit dem HPSEC-Verfahren beobachtet; im Gegensatz dazu wurde eine Abnahme der rhGH- Reinheit von etwa 5% bei 25ºC für alle Formulierungen in Gegenwart von sowohl Benzylalkohol als auch m-Cresol gefunden.
Die Ergebnisse zeigen, daß Formulierungen, die Saccharose und Saccharose+Mannit enthielten, ein besseres Stabilitätsprofil zeigten, verglichen mit den anderen Formulierungen.
Auf der Basis der mit 5 mg in je Zusammensetzung erhaltenen Ergebnisse wurden Saccharose und Mannit für die Herstellung der fünf gefriergetrockneten Formulierungen (Tabelle 4), die 10 mg hGH/Phiole enthielten, gewählt, wobei Phosphatpuffer und Succinatpuffer bei pH 7,5 verwendet wurde, der mit 2,5 M NaOH eingestellt wurde. Eine Formulierung enthielt 68,4 mg/Phiole Saccharose (Füllvolumen 1 ml) in nur Phosphatpuffer, die anderen enthielten 102,6 mg/Phiole Saccharose (Füllvolumen 1,5 ml) und Mannit+Saccharose 130+40 mg/Phiole (Füllvolumen 1,5 ml) sowohl in Phosphat als auch in Succinatpuffer. Das optimale Verhältnis zwischen Saccharose und Mannit und das Füllvolumen zum Erhalt eines Produkts mit guten physikalischen Eigenschaften wurde auf der Basis eines vorläufigen Gefriertrocknungsversuches eingestellt. Das optimale Verhältnis Mannit-Saccharose, ausgedrückt als Resistenz des gefriergetrockneten Kuchens gegenüber hoher Temperatur, betrug 3 : 1, und das gefrierzutrocknende Maximalvolumen betrug 1,5 ml.
Die Formulierungen wurden Stabilitätstests unterworfen, indem die Proben bei 50ºC, 37ºC, 25ºC und 4ºC für 24 Wochen gelagert wurden. Die Proben wurden den folgenden analytischen Kontrollen unterworfen:
HPSEC, RP-HPLC (Riggin's Verfahren), pH-Wert und Feuchtigkeitsgehalt.
Die Stabilität der rekonstituierten Lösungen mit 0,3% m- Cresol und 0,9% Benzylalkohol bei 4ºC wurde für 4 Wochen überwacht.
Die Proben wurden den gleichen Kontrollen, die an der 5 mg-Dosierung wie vorstehend beschrieben durchgeführt wurden, unterworfen.
Die Analysen zeigten die folgenden Ergebnisse:
Die Formulierungen, die 68,4 mg/Phiole und 102,6 mg/Phiole Saccharose in Succinatpuffer enthielten und mittels RP- HPLC-Analysen getestet wurden, zeigten keine Abnahme der Reinheit nach 24wöchiger Lagerung bei allen getesteten Temperaturen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 dargestellt.
Die Bildung von Abbauprodukten wurde in den anderen Formulierungen, selbst nach 4/6wöchiger Lagerung bei 50ºC, beobachtet.
Keine Abnahme der prozentualen rhGH-Reinheit wurde in allen getesteten Formulierungen mittels HPSEC-Analysen gefunden, vergleiche Tabelle 6. Während der Untersuchung wurde keine Variation des pH-Werts und des Feuchtigkeitsgehaltes in allen getesteten Formulierungen beobachtet.
Untersuchungen an rekonstituierten Lösungen, die nur Saccharose enthielten, wurden ebenfalls mittels RP-HPLC (Riggin's Verfahren) und HPSEC-Analysen durchgeführt.
Nach 4 Wochen bei 4ºC wurde mit dem RP-HPLC-Verfahren eine Reinheitsabnahme von etwa 12% in Gegenwart von Benzylalkohol und 4% mit m-Cresol gefunden. Keine Abnahme der rhGH- Reinheit wurde bei 4ºC mit dem HPSEC-Verfahren in Gegenwart von sowohl Benzylalkohol als auch m-Cresol beobachtet.
Um die Effizienz des antimikrobiellen Präparates zu bewerten, wurden Phiolen der HGH/3-Formulierung von Tabelle 1 mit 1 ml eines bakteriostatischen Lösungsmittels (0,3% m- Cresol oder 0,9% Benzylalkohol) rekonstituiert. Sie wurden gemäß der Europäischen Pharmacopeia bis zu 21 Tage von dem Impfen getestet. Die Ergebnisse sind in den Tabellen 7 und 8 dargestellt.
Die minimale akzeptable Effizienz (Minimumkriterien) wurde für beide Konservierungslösungen erhalten. Die Ergebnisse, die zum Zeitpunkt 0 erhalten wurden, zu dem die Mikroorganismen nach Animpfen sowohl der Kochsalzlösung (0,9% NaCl) als auch der bakteriostatischen Lösung gezählt wurden, scheinen eine höhere Effizienz von m-Cresol gegenüber Benzylalkohol hauptsächlich für Staphylococcus und Pseudomonas anzuzeigen, die unmittelbar nach dem Animpfen von 90.000 auf 25.000 und von 78.000 auf 8000 UFC/ml jeweils verringert wurden (Tabelle 7).
Ferner verschwand Aspergillus in m-Cresol nach 14 Tagen nach dem Impfen (Tabelle 8) und Pseudomonas nach 6 Stunden.
Die vorstehenden Ergebnisse zeigen an, daß die Formulierung, die 68,4 mg Saccharose, Phosphatpuffer mit pH 7,5, Füllvolumen 1 ml, und Rekonstitution mit 0,3% Meta-Cresol 0,3% die einzige ist, die die beste Stabilität von rhGH sowohl bei einer Konzentration von 5 mg als auch 10 mg garantiert.

BEISPIEL DER PHARMAZEUTISCHEN HERSTELLUNG

Materialien: Reine Saccharose Ph Eur, BP, Nord, NF (Merck); H&sub3;PO&sub4; Suprapur (Merck); NaOH zur analytischen Verwendung (Merck); Wasser zur Injektion.
Als Behälter wurden die Phiolen DIN 2R (Borsilicatglas Typ I), Gummiverschlüsse (Pharmagummi W1816 V50) und Aluminiumringe und Flip-off-Caps (Pharma-Metal GmbH) verwendet.

Herstellung der rhGH-Lösung, die Saccharose enthält

(für 1000 Phiolen, die jeweils 10 mg hGH enthalten).
Saccharose (68,4 g), H&sub3;PO&sub4; (1,96 g) werden in Wasser zur Injektion (800 ml) aufgelöst, um die Saccharoseausgangslösung zu erhalten.
Die Masse des hGH (10 g) wird der Saccharoselösung zugesetzt, die nach Einstellen des pH-Wertes auf 7,5 mittels 2,5 M NaOH auf das Endvolumen von 1000 ml gebracht wurde. Die Lösung wird durch ein steriles 0,22 um Duraporefilter (Millipore) filtriert. Während des Verfahrens wird die Lösungstemperatur zwischen 4ºC und 8ºC gehalten. Die Lösungen, die verschiedene Exzipientien oder eine verschiedene Wirkstoffdosis enthalten, wurden auf ähnliche Weise hergestellt.

Auffüllen und Lyophilisation

Die Phiolen werden mit 1 ml steriler hGH-Lösung aufgefüllt, in den Gefriertrockner überführt und bei -45ºC mindestens 6 Stunden lang getrocknet. Die Lyophilisation wird bei der Temperatur von -45ºC mit einem Vakuum von 0,07 mBar begonnen. Das Erhitzen wird gemäß dem folgenden Schema durchgeführt: +10ºC für 12 Stunden, dann +35ºC bis zum Ende des Zyklus. Tabelle 1 PHIOLENZUSAMMENSETZUNG mit 5 mg Tabelle 2 Probengröße 5 mg,
M/S = Mannit + Saccharose
M = Mannit
M/G = Mannit + Glycin
S = Saccharose
W = Woche Tabelle 3 CHROMATOGRAPHISCHE REINHEIT von r HGH mittels HPSEC
M/S = Mannit + Saccharose
M = Mannit
M/G = Mannit + Glycin
S = Saccharose
W = Woche Tabelle 4 PHIOLENZUSAMMENSETZUNG mit 10 mg Tabelle 5 CHROMATOGRAPHISCHE REINHEIT von r-HGH mittels RP-HPLC (RIGGIN'S VERFAHREN)
S10/S/S/01 = SACCHAROSE / ESSIGSÄURE (FÜLLVOLUMEN 1,5 ml)
S10/S/F/1/01 = SACCHAROSE / PHOSPHAT (FÜLLVOLUMEN 1 ml)
S10/S/F/01 = SACCHAROSE / PHOSPHAT (FÜLLVOLUMEN 1,5 ml)
S10/SM/S/01 = SACCHAROSE + MANNIT / ESSIGSAURE (FÜLLVOLUMEN 1,5 ml)
S10/SM/S/01 = SACCHAROSE + MANNIT / PHOSPHAT (FÜLLVOLUMEN 1,5 ml)
Tabelle 6 CHROMATOGRAPHISCHE REINHEIT von r-HGH mittels HPSEC
S10/S/S/01 = SACCHAROSE / ESSIGSÄURE (FÜLLVOLUMEN 1,5 ml)
S10/S/F/1/01 = SACCHAROSE / PHOSPHAT (FÜLLVOLUMEN 1 ml)
S10/S/F/01 = SACCHAROSE / PHOSPHAT (FÜLLVOLUMEN 1,5 ml)
S10/SM/S/01 = SACCHAROSE + MANNIT / ESSIGSAURE (FÜLLVOLUMEN 1,5 ml)
S10/SM/S/01 = SACCHAROSE + MANNIT / PHOSPHAT (FÜLLVOLUMEN 1,5 ml)

Tabelle 7

Wirkung der antimikrobiellen Konservierung. 0,9% Benzylalkohol wurde als antimikrobieller Konservierungsstoff (PRES) in Phiolen mit hGH-Formulierungen verwendet (Probengröße). Der Test wurde gemäß der Europäischen Pharmacopeia durchgeführt und wurde bis 21 Tage nach dem Impfen verfolgt. Die 10 g. Reduktion wurde gegenüber UFC, gezählt beim Zeitpunkt 0 (ZT), in der Konservierungslösung berechnet.
N. T. = nicht getestet

Tabelle 8

Wirkung der antimikrobiellen Konservierung. 0,3% M-Cresol wurde als antimikrobieller Konservierungsstoff (PRES) in Phiolen mit hGH-Formulierungen verwendet (Probengröße). Der Test wurde gemäß der Europäischen Pharmacapeia durchgeführt und wurde bis 21 Tage nach dem Impfen verfolgt. Die 10 g. Reduktion wurde gegenüber UFC, gezählt beim Zeitpunkt 0 (ZT), in der Konservierungslösung berechnet.
N. T. = nicht getestet

Claims

1. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend ein festes inniges Gemisch aus menschlichem Wachstumshormon (hGH) und einer stabilisierenden Menge an Saccharose allein.

2. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin das feste innige Gemisch ein Lyophilisat ist.

3. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin das hGH rekombinant ist.

4. Pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, die 5 bis 10 mg/Phiole hGH enthält.

5. Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, umfassend die Herstellung einer wäßrigen Lösung der Komponenten, die Verteilung in Behältern und die Lyophilisation in den Behältern.

6. Verfahren nach Anspruch 5, wobei die wäßrige Lösung eine Pufferlösung, ausgewählt aus Acetatpuffer, Succinatpuffer und Phosphatpuffer, ist.

7. Verfahren nach Anspruch 6, wobei die Pufferlösung Phosphatpuffer ist.

8. Verfahren nach den Ansprüchen 6 oder 7, wobei der pH-Wert der Lösung im Bereich von 6,0 bis 8,0 liegt.

9. Pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 8, wobei der pH-Wert der Lösung 7, 5 beträgt.

10. Darreichungsformen der pharmazeutischen Zusammensetzung, umfassend das feste Gemisch nach einen der Ansprüche 1 bis 4, hermetisch eingeschlossen in einem sterilen Zustand in einem Behälter mit der Eignung für die Lagerung vor Gebrauch und zur Rekonstitution des Gemisches in einem Lösungsmittel oder in einer Lösung zur Injektion.

11. Lösung, umfassend das feste Gemisch nach Anspruch 10, rekonstituiert in einem Lösungsmittel oder einer Lösung zur Injektion.

12. Rekonstituierte Lösung nach Anspruch 11, umfassend 5 oder 10 mg/Phiole hHG, 68,4 mg/Phiole Saccharose und Phosphatpuffer mit pH 7, 5.

13. Lösung nach Anspruch 12, worin das Lösungsmittel ein bakteriostatisches Lösungsmittel ist.

14. Lösung nach Anspruch 13, worin das bakteriostatische Lösungsmittel 0,3% m-Cresol ist.