DE4228525A1 - Verfahren zur herstellung von l-phenylalanin durch rekombinate e.coli - Google Patents
Verfahren zur herstellung von l-phenylalanin durch rekombinate e.coliInfo
- Publication number
- DE4228525A1 DE4228525A1 DE4228525A DE4228525A DE4228525A1 DE 4228525 A1 DE4228525 A1 DE 4228525A1 DE 4228525 A DE4228525 A DE 4228525A DE 4228525 A DE4228525 A DE 4228525A DE 4228525 A1 DE4228525 A1 DE 4228525A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- coli
- phenylalanine
- plasmid
- kccm
- mwpwj
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
- C12P13/222—Phenylalanine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/848—Escherichia
- Y10S435/849—Escherichia coli
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Her
stellung von L-Phenylalanin mittels rekombinanten
Escherichia coli (im folgenden mit E. coli bezeichnet). Ins
besondere betrifft die Erfindung einen neuen E. coli Stamm,
welcher ein Plasmid zur Herstellung von L-Phenylalanin ent
hält, sowie ein Verfahren zur Herstellung von L-Phenylalanin
mittels des neuen Mikroorganismus.
L-Phenylalanin gehört zu den essentiellen Aminosäuren und
kann für die synthetische Herstellung von ASPARTAME®, einem
Süßstoff, verwendet werden. Es gibt viele bekannte Verfahren
zur Herstellung von L-Phenylalanin unter Verwendung von Mi
kroorganismen. Z.B. offenbaren die JP-A-37-6345 und die
JP-A 60-1 60 890 ein Verfahren zur Herstellung von
L-Phenylalanin unter Verwendung von Brevibacterium oder
Corynebacterium sp., welche Tyrosin benötigen. Die JP-A-55-1 65 797
offenbart ein ähnliches Verfahren unter Verwendung
von E. coli, welches Tyrosin benötigt und welches resistent
gegen Tryptophananaloge ist. KR-A-88-11 331 und 88-11 332
offenbaren ein ähnliches Verfahren unter Verwendung von E.
coli, welches eine Revertante von Tyrosin- und
Tryptophanauxotrophen ist und resistent ist gegenüber
Phenylalanin, Tyrosin sowie Tryptophananalogen. KR-A-89-3682
und 89-3714 offenbaren Verfahren zur Herstellung von
Phenylalanin mittels rekombinanten E. coli, welche die Ko
pienzahl eines Genes verstärken, welches für ein geschwin
digkeitsbegrenzendes Enzym kodieren.
Dementsprechend ist es Aufgabe der vorliegenden Erfindung,
einen neuen E. coli Stamm zur Verfügung zu stellen, welcher
hohe Ausbeuten an Phenylalanin, insbesondere L-Phenylalanin
erzeugen kann.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es ein
Verfahren zur Herstellung von Phenylalanin, insbesondere
L-Phenylalanin mittels eines rekombinanten E. coli Stammes zur
Verfügung zu stellen.
Dabei kann der rekombinante E. coli Stamm transformiert wer
den mit einem neuen Plasmid pMW16, welcher zwei Promotoren
und einen temperatursensitiven Repressor zum Manifestieren
eines pheA-Genes und eines aroF-Genes enthält.
Chorismatmutase-p-prephenatdehydratase wird kodiert durch
das pheA-Gen und 3-Desoxy-D-arabinoheptulosonat·7-
phosphatsynthase wird durch das aroF-Gen kodiert.
Ein Vorteil der vorliegenden Erfindung liegt darin begrün
det, ein replizierbares rekombinantes Plasmid pMW16 zur Ver
fügung zu stellen, welches in der Lage ist, E. coli derart
zu transformieren, daß ein transformiertes E. coli ein hohes
Phenylalaninproduktionsniveau aufweist.
Ein weiterer Vorteil der vorliegenden Erfindung liegt darin
begründet, daß ein Verfahren für die Herstellung von
Phenylalanin in hohen Ausbeuten zur Verfügung gestellt wird,
welches die Kultivierung des neuen E. coli Stammes der vor
liegenden Erfindung in einem Kulturmedium umfaßt.
Weitere Vorteile und Merkmale der vorliegenden Erfindung er
geben sich aufgrund der Beschreibung von Ausführungsbeispie
len sowie anhand der Zeichnung.
Es zeigt:
Fig. 1 die Stoffwechselwege zur Biosynthese von
aromatischen Aminosäuren in E. coli; und
Fig. 2 Schritte zum Herstellen eines rekombinanten
Plasmids pMW16 und dessen Restriktionskarte.
Die aroF- und pheA-Gene zur Verwendung bei der
L-Phenylalanin-Produktion stammen aus E. coli MWPWJ 304 (KCCM
10,013).
Im folgenden wird detailliert auf die Zeichnungen zum Zwecke
der Verdeutlichung der vorliegenden Erfindung Bezug genom
men. Wie in Fig. 1 gezeigt, wird der Prozeß zur Herstellung
von L-Phenylalanin unter Verwendung des rekombinanten Plas
mids, kontrolliert durch Enzymwirkung in E. coli Zellen. Ei
nes der Enzyme, welches die Reaktion steuert, ist
Chorismatmutase-p-prephenatdehydratase. Eines der anderen
Enzyme, welche die Reaktion steuert, ist das Enzym 3-Desoxy-
D-arabinoheptulosonat·7-phosphatsynthase (im folgenden mit
"DAHP-Synthase" bezeichnet). Die DAHP-Synthase existiert in
Form von drei Isoenzymen, welche durch das aroF-, aroG- bzw.
das aroH-Gen kodiert werden. In der vorliegenden Erfindung
wird ein PL-Promotor eines Lambdaphagen, mit jedem Gen ver
bunden, um die Manifestation von pheA und aroF extrem zu
steigern, und ein temperatursensitiver Repressor wird ver
wendet, um die Manifestation des Genes zu steuern.
Wie in Fig. 2 gezeigt, wird das Verfahren zur Herstellung
des Pasmids pMW16 beschrieben in "Recombinant DNA-Methodo
logy and Molecular Cloning, A Laboratory Manual". Das rekom
binante Verfahren für die Herstellung des Plasmids pMW16
wird beschrieben in "Molecular Cloning, A Laboratory Manual"
(T. Maniatis et al.) und Current Protocols in Molecular
Biology (Frederick M. Ausubel et al.).
Demzufolge wird ein neuer Stamm MWPWJ 304 zur Verwendung bei
der Herstellung von L-Phenylalanin erhalten. Der neue Stamm
MWPWJ 304 wurde bei der Korean Fermentation Culture Collec
tion am 20. Dezember 1991 gemäß den Bedingungen des Budape
ster Übereinkommens hinterlegt und wurde mit der
Hinterlegungsnummer KCCM 10,013 versehen.
Die vorliegende Erfindung wird jetzt im Detail im Zusammen
hang mit den folgenden Beispielen beschrieben, welche als
erläuternd und nicht als die Erfindung beschränkend dienen
mögen.
pMW12 (US-PS-50 08 190 und 50 30 567), ein rekombinantes
Plasmid, enthaltend das pheA-Gen und das aroF-Gen, wird mit
EcoRV in Medium Salz Restriktionsenzympuffer (50 mM Natrium
chlorid, 10 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM Magnesiumchlorid und
1 mM Dithiothreitol) bei 37°C für 16 Std. verdaut. Die
verdaute DNA wird mit einer Phenol-Chloroformmischung behan
delt und durch Ethanol präzipitiert, um linearisierte Plas
mid-DNA herzustellen. Diese Plasmid-DNA wird behandelt mit
alkalischer Phosphatase aus Kalbsintestinum (im folgenden
mit "CIP" bezeichnet), um zu verhindern, daß die lineari
sierte Plasmid DNA sich selbst ligiert.
Das Plasmid pPLC 2833 wird verdaut durch die Restriktionsen
zyme Hae II und Bam HI und ein 0,26 Kb PL-Fragment wird aus
einem Agarosegel mit einem niedrigen Schmelzpunkt erhalten
und wird gereinigt. Das 0,26 Kb PL-Fragment mit einem kohä
siven Ende wird mit T4-DNA-Polymerase im Reaktionspuffer (50
mM Tris-HCl (pH 8,0), 5 mM Magnesiumchlorid, 5 mM
Dithiothreitol, 50 µg/ml Rinderserumalbumin (BSA), 100 µM
dATP, 100 µM dGTP, 100 µM dCTP und 100 µM dTTP) bei einer
Temperatur von 11°C für 20 Min. behandelt, um glatte Enden
zu bilden.
Das Phosphatase behandelte, linearisierte Plasmid pMW12 des
oben erwähnten Schrittes (1) wird mit dem PL-Promo
torfragment mit den glatten Enden an beiden Enden des oben
erwähnten Schrittes (2) in einer Menge von 1:3 gemischt und
mit T4-DNA-Ligase bei einer Temperatur von 16°C für 16 Std.
behandelt, um die Fragmente zu ligieren. Das kombinierte re
kombinante Plasmid wird mittels eines herkömmlichen
Calciumchloridverfahrens in E. coli MWEC 203-7 transformiert,
welche Phenylalanin zum Wachstum benötigen. Der transfor
mierte Stamm wird in MM-Kulturmedium, enthaltend 50 µg/ml
Kanamycin-Antibiotikum (10 g Glukose, 4 g Ammoniumsulfat, 2
g monobasisches Kaliumphosphat, 1 mg Thiamin-HCl, 0,5 g
Fumarsäure, 20 g Agar, 1 l destilliertes Wasser und pH 7,4)
kultiviert. Das rekombinante Plasmid pMW14 wird getrennt von
dem kultivierten Stamm, welcher auf dem MM-Kulturmedium, 50
µg/ml Kanamycin enthaltend, wuchs.
Ein Plasmid pMK5, enthaltend ein temperatursensitives Re
pressor CI857-Gen wird mit dem Restriktionsenzym Bgl II be
handelt und ein 0,9 Kb-DNA-Fragment wird aus einem 0,9%
Agarosegel erhalten und dann mit T4-DNA-Polymerase behan
delt, um glatte Enden zu bilden. Das Plasmid pMW14 des oben
erwähnten Schrittes (3), welches kombiniert ist mit dem PL-
Promotor vor dem aroF-Gen, wird mit Dra III verdaut und mit
CIP behandelt, um die 5′-Phosphatgruppen zu entfernen. An
schließend wird das behandelte Plasmid pMW14 mit dem CI857-
Fragment gemischt, welches an beiden Enden glatte Enden auf
weist, und mittels T4-DNA-Ligase verbunden. Das rekombinante
Plasmid wird in E. coli HB101 transformiert, um pMW15 zu er
zeugen.
Das isolierte rekombinante Plasmid pMW15 wird verdaut mit
Bam HI und Bgl II und behandelt mit T4-DNA-Ligase, um pMW16
zu erzeugen. Das pMW15-Plasmid enthält das gesamte tyrA-Gen.
In pMW16 wird ein 0,7 Kb Fragment des tyrA-Genes davon ent
fernt. Das rekombinante Plasmid pMW16 wird transformiert in
einen temperatursensitiven Tyrosinmangelstamm (tyrosine
leaky strain), E. coli MWWJ 304 (KFCC 10737, hinterlegt bei
der Korean Fermentation Culture Collection, 30. August, 1991)
und wird dann kultiviert in Kulturmedium, welches 50 µg/ml
Kanamycin enthält, bei 37°C für 24 Std. Unter den
transformierten Stämmen mit pMW16, wurde der beste Stamm,
welcher L-Phenylalanin herstellt, MWPWJ 304 (KCCM 10,013,
hinterlegt bei Korean Culture of Microorganismus, 20. Dezem
ber 1991) isoliert. Die biochemischen Eigenschaften des
neuen Stammes MWPWJ 304 (KCCM 10,013) sind dieselben, wie
jene des Wirtsstammes MWWJ 304 (KFCC 10,737). Jedoch erfor
dert der neue Stamm MWPWJ 304 mehr Tyrosin zum Wachstum und
Herstellen von L-Phenylalanin, verglichen mit dem Wirtsstamm
MWWJ 304. Ebenfalls sind die L-Phenylalanin-Ausbeute und die
Aktivität der DAHP-Synthase bei dem neuen Stamm MWPWJ 304
erhöht.
Die Enzymaktivität und Ausbeute von L-Phenylalanin des neuen
Stammes MWPWJ 304 sind erhöht, wenn man mit dem vorliegenden
Stamm, wie in den Tabellen I und II gezeigt, vergleicht:
Die obigen Daten wurden erhalten durch ein Meßverfahren nach
I. Shiio et al. (Journal of Biochemistry, 75, 987-997,
1974). Die Enzymaktivität von MWPWJ 304 (KCCM 10,013) ba
siert auf derjenigen des MWPEC 13-60 (KCTC 8337 P). Die Kul
turmedien von MWWJ 304, (KFCC 10,737) und MWPWJ 304 (KCCM
10,013) enthielten, zusätzlich 100 mg/l an L-Tyrosin, verg
lichen mit denjenigen des MWPEC 13-60.
(A) Stamm
MWPWJ 304 (KCCM 10,013)
MWPWJ 304 (KCCM 10,013)
(B) Kulturmedium
Glukose|3% | |
Trypton | 1% |
Bactohefeextrakt | 1% |
Natriumchlorid | 0,1% |
Kanamycin | 10 mg/l |
pH | 7,0 |
(C) Fermentationsmedium | |
Glucose|6% | |
Kaliumsulfat | 0,04% |
Ammoniumsulfat | 2% |
Natriumcitrat | 0,05% |
Fumarsäure | 0,05% |
Magnesiumchlorid | 0,08% |
monobasisches Kaliumphosphat | 0,1% |
dibasisches Kaliumphosphat | 0,1% |
Bactohefeextrakt | 0,1% |
Mononatriumglutamat | 0,05% |
Kobaltchlorid | 0,1 mg/l |
Zinksulfat | 1 mg/l |
Manganchlorid | 2 mg/l |
Calciumchlorid | 5 mg/l |
Eisen(III)-Chlorid | 20 mg/l |
L-Tyrosin | 300 mg/l |
Thiaminhydrochlorid | 10 mg/l |
Nikotinsäure | 10 mg/l |
pH | 7,0 |
40 ml des Kulturmediums wird in einem 500 ml Testkolben ge
geben und bei 120°C für 20 Min. autoklaviert. Nach dem Ste
rilisieren wird der neue E. coli Stamm MWPWJ 304 (KCCM
10,013) in den Kolben inokuliert und bei 37°C für 16 Std.
unter Schütteln kultiviert. Das Fermentationsmedium wird
hergestellt unter Verwendung der oben erwähnten Formulie
rung. Anschließend wird 3,5% Calciumcarbonat, welches sepa
rat autoklaviert wurde, dem Fermetationsmedium zugegeben und
2 ml Impflösung (seed broth) wird dazugegeben, das
Fermentationsmedium wird bewegt und bei 37°C 36 Std. fermen
tiert. Nach Beendigung der Fermentation hat sich die
L-Phenylalaninmenge auf 16,2 g/l angereichert.
Der (A) Stamm, (B) Kulturmedium und (C) Fermentationsmedium
mit Ausnahme von 400 mg/l L-Tyrosin sind dieselben, die in
den Beispielen 1 und 2 verwendet wurden.
1 l Fermentationsmedium wird in einen 2 l Fermenter gegeben
und 15 Min. bei 120°C autoklaviert. Der neue Stamm MWPWJ 304
(KCCM 10,013) wird zu 50 ml Kulturmedium in einem 500 ml
Kolben hinzugefügt und bei 37°C 16 Std. unter Schütteln kul
tiviert, wobei 50 ml der Kulturlösung in den Fermenter unter
1000 rpm und 1,0 vvm (Sauerstoffrate) bei 37°C für 48 Std.
gegeben wurde. Während der Fermentation wird ein pH von 7,0
aufrechterhalten, durch Zugeben von Ammoniumhydroxid und ei
ner 60%igen Glukoselösung, welche dem Fermenter dreifach zu
gegeben wird, wenn das Glukoseniveau unter 1% fällt.
Die gesamte Glukosemenge, welche in der Fermentierung ver
wendet wird, beträgt 185 g/l. L-Phenylalanin wird erhalten
in einer Konzentration von 50,8 g/l. 1 l Fermentationslösung
wird gereinigt mittels eines herkömmlichen Verfahrens, bei
spielsweise durch Absorption an Ionenaustauschharz und Iso
lieren mit Ammoniumhydroxid, um 45,7 g/l L-Phenylalanin als
Rohkristalle zu gewinnen.
Beispiel 3 wurde wiederholt mit Ausnahme, daß 27 l Kultur in
eine 50 l Fermentationsvorrichtung gegeben wurde und 1,3 l
der Kulturlösung in die Fermentationsvorrichtung unter 450
rpm und 1,0 vvm gegeben wurde. Die hergestellte
L-Phenylalaninmenge beträgt 49,1 g/l.
Es wird verstanden, daß die vorliegende Erfindung auf ver
schiedene Arten variiert werden kann.
Claims (9)
1. Replizierbares rekombinantes Plasmid mit einer Plasmid-
DNA, welche zwei Promotoren und einen temperatursensi
tiven Repressor enthält, zum Manifestieren eines pheA-
Genes, welches kodiert für Chorismatmutase-p-prephenat
dehydratase und ein aroF-Gen, welches kodiert für 3-
Desoxy-D-arabinoheptulosonat·7-phosphatsynthase, wobei
das rekombinante Plasmid als das Plasmid pMW16 identi
fiziert wird, welches in E. coli MWPWJ 304 (KCCM
10,013) enthalten ist, welches in der Lage ist, E. coli
zu transformieren, um ein transformiertes E. coli mit
einer optimalen Phenylalanin-Herstellungskapazität, zu
erzeugen.
2. Plasmid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
die Promotoren Lambda PL-Promotoren sind.
3. Plasmid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
der temperatursensitive Repressor ein CI857-Repressor
ist.
4. E. coli MWPWJ 304 (KCCM 10,013) welches eine optimale
Phenylalanin-Produktionskapazität aufgrund der darin
enthaltenen pheA- und aroF-Gene aufweist.
5. Verfahren zur Herstellung von Phenylalanin, welches den
folgenden Schritt umfaßt:
Kultivieren eines E.coli Stammes MWPWJ304 (KCCM 10013), welcher das Plasmid gemäß Patentanspruch 1 enthält, in einem Kulturmedium.
Kultivieren eines E.coli Stammes MWPWJ304 (KCCM 10013), welcher das Plasmid gemäß Patentanspruch 1 enthält, in einem Kulturmedium.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß
die Kultivierung in Gegenwart von Zucker durchgeführt
wird.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß
der Zucker Glukose ist.
8. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß
die Kultivierung bei einer Temperatur von 37°C durchge
führt wird.
9. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß
L-Phenylalanin hergestellt wird.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1019910015909A KR940011838B1 (ko) | 1991-09-12 | 1991-09-12 | 유전자 조작 미생물 발효에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE4228525A1 true DE4228525A1 (de) | 1993-06-09 |
DE4228525C2 DE4228525C2 (de) | 1994-11-03 |
Family
ID=19319858
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE4228525A Expired - Fee Related DE4228525C2 (de) | 1991-09-12 | 1992-08-27 | Verfahren zur Herstellung von L-Phenylalanin durch rekombinante E.coli |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5304475A (de) |
JP (1) | JPH05244956A (de) |
KR (1) | KR940011838B1 (de) |
DE (1) | DE4228525C2 (de) |
FR (1) | FR2681330B1 (de) |
GB (1) | GB2259512B (de) |
IT (1) | IT1257392B (de) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5776736A (en) * | 1992-12-21 | 1998-07-07 | Purdue Research Foundation | Deblocking the common pathway of aromatic amino acid synthesis |
RU2229514C2 (ru) * | 2000-11-13 | 2004-05-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" | 3-дезокси-d-арабиногептулозонат-7-фосфатсинтаза и фрагмент днк, кодирующий 3-дезокси-d-арабиногептулозонат-7-фосфатсинтазу из methylophilus methylotrophus |
CN102015995B (zh) | 2008-03-03 | 2014-10-22 | 焦耳无限科技公司 | 产生碳基目的产物的二氧化碳固定工程微生物 |
US8048654B2 (en) * | 2010-06-09 | 2011-11-01 | Joule Unlimited Technologies, Inc. | Methods and compositions for the recombinant biosynthesis of fatty acids and esters |
ES2560281T3 (es) | 2008-10-17 | 2016-02-18 | Joule Unlimited Technologies, Inc. | Producción de etanol por microorganismos |
US20110020867A1 (en) * | 2009-07-20 | 2011-01-27 | Joule Unlimited, Inc. | Constructs And Methods For Efficient Transformation Of Micro-Organisms For Production Of Carbon-Based Products Of Interest |
CN103074292B (zh) * | 2013-01-22 | 2014-07-09 | 江南大学 | 一种高产l-苯丙氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR890003682A (ko) * | 1987-08-21 | 1989-04-17 | 에른스트 알테르 | 아닐리노페닐티오우레아, 아닐리노페닐이소티오우레아, 아닐리노페닐카르보디이미드,이들을 함유하는 조성물 및 이들의 해충 방제 용도 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60160890A (ja) * | 1984-01-30 | 1985-08-22 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | L−フエニルアラニンの製造法 |
JPS61247392A (ja) * | 1985-02-04 | 1986-11-04 | エンジニツクス インコ−ポレ−テツド | 2種またはより多くのアミノ酸を同時に産生できる組換え微生物 |
US4783213A (en) * | 1986-10-16 | 1988-11-08 | Stauffer Chemical Company | Certain 2-(2-substituted benzoyl)-4-(substituted oxy or substituted thio)-1,3-cyclohexanediones |
KR890003680A (ko) * | 1986-10-16 | 1989-04-17 | 죤 알.페넬 | 2-(2-치환 벤조일)-4-(치환)-1,3-시클로헥산디온 및 그 제조방법과 이를 이용한 조성물 및 식물체의 억제방법 |
KR890003682B1 (ko) * | 1987-03-26 | 1989-09-30 | 주식회사 미원 | 유전자조작 미생물에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 |
KR890003714B1 (ko) * | 1987-03-26 | 1989-09-30 | 주식회사 미원 | 유전자 조작 미생물에 의한 l-페닐알라닌 제조방법 |
IL87542A (en) * | 1987-08-28 | 1993-01-31 | Uniroyal Chem Co Inc | Arylenediamino substituted triazine derivatives, processes for the preparation thereof and compositions containing the same |
-
1991
- 1991-09-12 KR KR1019910015909A patent/KR940011838B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-03-12 US US07/851,682 patent/US5304475A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 FR FR9209146A patent/FR2681330B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1992-08-27 DE DE4228525A patent/DE4228525C2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-09-04 IT ITTO920742A patent/IT1257392B/it active IP Right Grant
- 1992-09-10 GB GB9219344A patent/GB2259512B/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-09-10 JP JP4241745A patent/JPH05244956A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR890003682A (ko) * | 1987-08-21 | 1989-04-17 | 에른스트 알테르 | 아닐리노페닐티오우레아, 아닐리노페닐이소티오우레아, 아닐리노페닐카르보디이미드,이들을 함유하는 조성물 및 이들의 해충 방제 용도 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR940011838B1 (ko) | 1994-12-26 |
GB2259512B (en) | 1995-06-21 |
JPH05244956A (ja) | 1993-09-24 |
ITTO920742A1 (it) | 1994-03-04 |
ITTO920742A0 (it) | 1992-09-04 |
KR930006159A (ko) | 1993-04-20 |
GB9219344D0 (en) | 1992-10-28 |
GB2259512A (en) | 1993-03-17 |
FR2681330B1 (fr) | 1996-01-12 |
FR2681330A1 (fr) | 1993-03-19 |
US5304475A (en) | 1994-04-19 |
IT1257392B (it) | 1996-01-15 |
DE4228525C2 (de) | 1994-11-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE3891417C5 (de) | Verfahren zur Veränderung eines L-Threonin produzierenden Mikroorganismus und Verwendung eines so erhaltenen Mikroorganismus zur Herstellung von L-Threonin | |
EP0472869B1 (de) | Neue Plasmide aus Corynebacterium glutamicum und davon abgeleitete Plasmidvektoren | |
DE3027922C2 (de) | ||
EP0435132B1 (de) | Verfahren zur fermentativen Herstellung von Aminosäuren, insbesondere L-Lysin, dafür geeignete Mikroorganismen und rekombinante DNA | |
DE4228525C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von L-Phenylalanin durch rekombinante E.coli | |
DE69532485T2 (de) | Trehalose-freisetzendes Enzym, dafür kodierende DNA, Herstellung und Verwendung | |
DE69732875T2 (de) | Herstellung und Verwendung von L-Ribose-Isomerase | |
DE3688311T2 (de) | Verfahren zum Züchten von rekombinanten Zellen. | |
DE3423899C2 (de) | ||
DE69017331T2 (de) | Verfahren und Materialien für eine phe A-"feedback inhibition"-Resistenz. | |
CH640268A5 (en) | Process for the preparation of filamentous hybrid phages, novel hybrid phages and their use | |
DE69126141T2 (de) | Verfahren zur herstellung von 4-hydroxy-l-prolin | |
DE2757980C2 (de) | ||
DE2411209C2 (de) | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Valin | |
EP0751218B1 (de) | Saccharose-Stoffwechsel-Mutanten | |
DE3785119T2 (de) | Verfahren zur herstellung von aminosaeuren. | |
DE69010256T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von L-Ornithin durch Fermentation. | |
DE3878421T2 (de) | Verfahren zur herstellung von carnitin. | |
EP0369029A1 (de) | Verfahren zur herstellung von l-alanin | |
DE3882413T2 (de) | L-Valin produzierender Mikroorganismus und ein Verfahren zur Herstellung von L-Valin durch Gärung. | |
DE2746939A1 (de) | Glucose isomerierendes enzym | |
DE3135803A1 (de) | "fermentatives verfahren zur herstellung von l-isoleucin" | |
DE3331860C2 (de) | ||
DE4136389A1 (de) | Verfahren zur herstellung von glutarylacylase in grossen mengen | |
DE3889143T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von L-Phenylalanin durch rekombinantes E.coli. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
ON | Later submitted papers | ||
8110 | Request for examination paragraph 44 | ||
8125 | Change of the main classification |
Ipc: C12N 15/73 |
|
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |