DE3413489A1

DE3413489A1 - Mitomycin c-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und sie enthaltende, pharmazeutische mittel

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Publication number: DE3413489A1
Application number: DE19843413489
Authority: DE
Inventors: Yulin Convent Station N.J. Chiang; Terrence William Fayetteville N.Y. Doyle; Dolatrai Mohanlal Fayetteville N.Y. Vyas
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1983-04-11
Filing date: 1984-04-10
Publication date: 1984-10-11
Also published as: KR890001488B1; ES531338A0; IT1176003B; ATA122384A; NL8401104A; AU2595184A; DK183984A; MX9202850A; CH661273A5; FI841380A0; FR2543953A1; IE57348B1; FI78701C; FI841380A; CA1285567C; PT78399B; CY1533A; ES8602798A1; MY102071A; PT78399A

Description

POSTFACH 7BO. D-8O0O MÜNCHEN Λ3 ZUGELASSENE VERTRETER BEIM

EUROPÄISCHEN PATENTAMT EUROPEAN PATENT ATTORNEYS

TELEFON: (Ο89) 2 71 65 83

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München, 10. April 1984

UNSERE AKTE: M/2 5 045 OUR REF:

BETREFF: RE

Bristol-Myers Company

345 Park Avenue New York 10154 U.S.A.

Mitomycin C-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und sie enthaltende, pharmazeutische Mittel

AO

Die Erfindung betrifft Mitomycin-Derivate, die eine Disulfidgruppe enthalten. Diese Verbindungen sind Mitomycin C-Derivate, bei denen die Aminogruppe in 7-Stellung einen organischen Substituenten aufweist, welcher eine Disulfidgruppe enthält. Die Erfindung betrifft ferner pharmazeutische Mittel sowie ein Verfahren zur Herstellung der genannten Verbindungen.

Der systematische Name für Mitomycin C gemäß Chemical Abstracts ist:

[iaR-(iaa,8ß,8aa,8ba)]-6-Amino-8-[((aminocarbonyl)-oxy)-methyl]-1,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methyl-arizino[2',3',3,4]-pyrrolo[1,2-a]indol-4,7-dion.

Danach wird das Azirinopyrroloindol-Ringsystem wie folgt numeriert:

2 la

Chemical Abstracts j

In der Mitomycin-Literatur wird auch häufig ein Trivialname für das zuvor genannte Ringsystem verwendet, das verschiedene charakteristische Substituenten der Mitomycine aufweist. Dieser Trivialname lautet Mitosan.

Für die vorliegende Beschreibung wurde dieses Nomenklatursystem benutzt. Dabei wird das Azirinostickstoff-

1a 7

atom als N und das Ringaminostickstoffatom als N bezeichnet. Hinsichtlich der stereochemischen Konfiguration der erfindungsgemäßen Verbindungen gilt folgendes. Werden die erfindungsgemäßen Verbindungen mit dem Basisnamen "Mitosan" bezeichnet oder werden die erfindungsgemäßen Verbindungen durch die Strukturformel wiedergegeben, dann besitzen sie die stereochemische Konfiguration von Mitomycin C.

Mitomycin C ist ein durch Fermentation hergestelltes Antibiotikum. Es wird derzeit mit Zustimmung der Food and Drug Administration für die Therapie disseminierter Adenocarcinome des Magens oder der Pankreas in Kombination mit anderen zugelassenen Chemotherapeutika verkauft. Es wird auch zur palliativen Behandlung eingesetzt, wenn andere Behandlungen nicht anschlagen (Mutamycin^ ', Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13201, Physicians¹ Desk Reference 35.Ed., 1981, Seiten 717 und 718). Mitomycin C und seine Herstellung durch Fermentation ist Gegenstand der US-PS 3 660 578, die mehrere Prioritäten und insbesondere eine in Japan vom 6. April 1957 in Anspruch nimmt.

Die Strukturen von Mitomycin A, B, C und von Porfiromycin wurden zuerst von J.S.Webb et al. von den Lederle Laboratories Division American Cyanamld Company, J.Amer. Chem.Soc, 84, 3185-3187 (1962), veröffentlicht. Eine der in dieser Strukturuntersuchung eingesetzten, chemischen Transformationen, um die Beziehung zwischen Mitomycin A und Mitomycin C aufzuklären, war die Überführung letzterer Verbindung, 7-9a-Dimethoxymitosan, durch Umsetzung mit Ammoniak zu ersterer Verbindung, 7-Amino-9a-methoxymitosan. Es hat sich herausgestellt, daß der Ersatz der 7-Methoxygruppe von Mitomycin A eine Umsetzung darstellt, die für die Herstellung von aktiven Antitumorderivaten von Mitomycin C von beträchtlichem Interesse ist« Die nachstehenden Literaturstellen und Patente befassen sich alle mit der Umwandlung von Mitomycin A zu einem Mitomycin C-Derivat, dessen Aminorest in 7-Stellung substituiert ist. Diese Mitomycin C-Derivate besitzen Antitumor-Aktivitat.

Matsui et al. "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968);

Kinoshita et al., J.Med.Chem.i4, 103-109 (1971); Iyengar et al., J.Med.Chem. 24, 975-981 (1981); Iyengar, Sami, Remers und Bradner, Abstracts of Papers, 183rd Annual Meeting of the American Chemical Society, März 1982, Nr. MEDI 72;

Iyengar et al., J.Med.Chem.1983t 26, 16-20; Iyengar et al., Abstracts of Papers, 185th Annual Meeting of the American Chemical Society, März 1983, No.MEDI 82.

Die folgenden Patente befassen sich mit der Herstellung von in 7-Stellung substituierten Aminomitosan-Derivaten durch die Umsetzung von Mitomycin A, Mitomycin B oder eines N^1a-substituierten Derivats davon mit einem primären oder sekundären Amin:

US-PS 3 332 944 US-PS 3 420 846 5 US-PS 3 450 705 US-PS 3 514 452 US-PS 4 231 936 US-PS 4 268 676 BE-PS 893 162.
10

Mitomycin C-Derlvate mit einem substituierten Aminorest in 7-Stellung sind auch durch direkte Biosynthese hergestellt worden, indem man Fermentationsbrühen mit verschiedenen primären Aminen versehen hat und die übliche Mitomycin-Fermentation durchgeführt hat (C.A.Claridge et al., Abst. of the Annual Meeting of Amer.Soc.for Microbiology 1982. Abs. 028).

Mitomycin C ist das hauptsächlich bei der Fermentation erhaltene Mitomycin und ist das kommerziell erhältliche Produkt. Zur Umwandlung von Mitomycin C in Mitomycin A_f welche Verbindung für die Herstellung semi-synthetischer, substituierter Amino-Analoga von Mitomycin C verwendet wird, führt man nach dem derzeitigen technologischen Stand gemäß den obengenannten Patenten und Veröffentlichungen folgende Umsetzungen durch. Man hydrolysiert Mitomycin C zu dem entsprechenden 7-Hydroxymitosan. Diese Verbindung ist sehr instabil. Dann methyliert man diese Substanz mit Diazomethan. Die Handhabung letzterer Verbindung ist bekanntlich sehr gefährlich. Bei einem Versuch, die Verwendung von Diazomethan für die Methylierung zu vermeiden, wurden 7-Acyloxymitosane eingesetzt (Kyowa Hakko Kogyo K. K. JA-PS J5 6073-085, Farmdoc Nr.56227 D/31), um Mitomycin C-Analoga zu synthe-

35 tisieren.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, Derivate bereitzustellen, die aktiver und insbesondere weniger toxisch sind als Mitomycin C.

Gegenstand der Erfindung sind Mitomycin C-analoge Verbindungen, die an dem Stickstoffatom in 7-Stellung einen organischen Dithio-Substituenten besitzen. Diese Verbindungen können durch die nachstehende, allgemeine Formel wiedergegeben Werdens

Ii _i

CH₂OCNH₂ i

I T-- . - R

worin FP eine organische Gruppe bedeutet, nämlich die strukturelle Komponente eines organischen Thiols der

Formel R-⁷SH, und AIk₂ und R die unten angegebenen Bedeutungen besitzen. Diese Verbindungen können in alternativer Weise durch die nachstehenden Formeln I und II beschrieben werden:

Il

CH₂OCNH₂

(D

und

8 \

R -SS-AIk₂ - N

H,C

(ID

,-N - R

worm

₁ eine gerade oder verzweigte Alkylenkette mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, falls R⁷ über ein Kohlenstoffatom an AIk₁ gebunden ist, oder 2 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, falls R' über ein Schwefel-, Sauer stoff- oder Stickstoffatom an Alk,, gebunden ist, wobei

7 im letzteren Fall R und -SS- mit unterschiedlichen Kohlenstoffatomen verbunden sind,

eine gerade oder verzweigte Alkylenkette

mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, die gewünschtenfalls durch einen Substituenten R substituiert ist, wobei die an den Rest Alk_ gebundenen Schwefel- und Stickstoffatome und jeder gegebenenfalls vorhandene Substituent R , falls er über ein Sauerstoff-, Schwefeloder Stickstoffatom an AIk₂ gebunden ist, an verschiedene Kohlenstoffatome des Restes AIk₂ gebunden sind.

AIk₁ und AIk₂ eine Doppelbindung enthalten können,

R ein Wasserstoff atom, eine Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl- oder Benzoylgruppe bedeutet, wobei die Benzoylgruppe gegebenenfalls durch eine Niedrigalkyl-, Niedrigalkoxy-, Halogen-, Amino- oder Nitrogruppe substituiert ist,

7
R eine Hydroxyl-, Halogen- oder Amino gruppe; eine Alkylamino- oder Dialkylamino gruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen; eine Alkanoylaminogruppe; eine Benzoylamino- oder durch A substituierte Benzoylaminogruppe; eine Naphthoylamino- oder durch A substituierte Naphthoylaminogruppe; eine Cycloalkyl- oder durch A substituierte Cycloalkylgruppe mit jeweils 3 bis 8 Ringgliedern;

eine Cycloalkenyl- oder durch A substituierte Cycloalkenylgruppe mit jeweils 5 bis 8 Ringgliedern; eine Phenyl- oder durch A substituierte Phenylgruppe; eine Naphthyl- oder durch A substituierte Naphthylgruppe; eine heterocyclische Gruppe, die unter heteroaromatischen und heteroalicyclischen Gruppen ausgewählt ist, welche 1 bis 2 Ringe, 3 bis 8 Ringglieder in jedem Ring und 1 bis 4 Heteroatome, ausgewählt unter Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel, enthalten;

eine Alkoxy- oder Alkylthiogruppe mit jeweils 1 bis 6 Kohlenstoffatomen; eine Carboxy gruppe; eine Alkoxycarbonylgruppe mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen; eine Phenoxycarbonyl- oder durch A substituierte Phenoxycarbonylgruppe; eine Phenoxy- oder durch A substituierte Phenoxygruppe; eine Naphthoxy- oder durch A substituierte Naphthoxygruppe; eine Alkoxycarbonylaminogruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen; eine Guanidinogruppe; eine Ureido (-NHCONH₂)-Gruppe; eine N-Alkylureylen (-NHCONH-alkyl)-Gruppe mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen; eine N-Haloalkylureylengruppe mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen;

eine N -Haloalkyl-N -nitrosoureylengruppe mit 3 "bis 7 Kohlenstoffatomen; und eine Dialkylaminocarbonylgruppe mit 3 bis 13 Kohlenstoffatomen bedeutet, wobei der Substituent A ausgewählt ist unter 1 bis 2 Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl-, Niedrigalkoxy-, Halogen-, Amino-, Hydroxy- oder Nitrogruppen, und

R⁸ eine Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen; eine Alkenyl- oder Alkinylgruppe mit jeweils 3 bis 12 Kohlenstoffatomen; eine Cycloalkyl- oder durch A substituierte Cycloalkylgruppe mit 3 bis 8 Ringgliedern; eine Cycloalkenylgruppe mit 5 bis 8 Ringgliedern; eine Phenyl- oder durch A substituierte Phenylgruppe; eine Naphthyl- oder durch A substituierte Naphthylgruppe; oder eine heterocyclische Gruppe, ausgewählt unter heteroaromatischen und heteroalicyclischen Gruppen mit 1 bis 2 Ringen, 3 bis 8 Ringgliedern in jedem Ring und 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt unter Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel, bedeutet, wobei der Substituent A ausgewählt ist unter 1 bis 2 Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl-, Niedrigalkoxy-, Halogen-, Amino-, Hydroxy- oder Nitrogruppen; oder R zusammen mit dem benachbarten Schwefelatom eine S-Cysteinylgruppe darstellt, wobei diese S-Cysteinylgruppe verestert sein kann, in ein Salz überführt sein kann oder in eine Peptidbindung eingebunden sein kann.

Es hat sich gezeigt, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen experimentell erzeugte Tumore bei Tieren inhibieren. Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden hergestellt, indem man ein Aminodisulfid der allgemeinen Formeln III oder IV

R⁷AIk₁-SS-AIk₂NH₂ oder R⁸-SS-Alk₂NH₂

5 (HI) (IV)

mit einem Mitosan-Derivat der allgemeinen Formel V

Y	O	^CH₂	0 Il OCNH₂
• J	I Il	L0CH3
H₃C	O	^fLJ>-	- R

15 (V) j

umsetzt, wobei Y eine durch ein primäres Amin leicht ersetzbare Gruppe bedeutet, wobei man ein N'-substituiertes Mitomycin C-Derivat erhält. Derartige Mitosan-Derivate sind u.a. Mitomycin A und seine homologen Verbindungen der allgemeinen Formel (V) _t worin Y eine Ni edrigalkoxy gruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet. Weiter zählt dazu das Derivat der allgemeinen Formel (V), worin Y eine Amidinogruppe der allgemeinen

25 Formel VI bedeutet ^

R³R⁴N-C=N- (VI)

worin

R^ ein Wasserstoffatom (bevorzugt), eine Niedrigalkyl-, Phenyl-, Niedrigalkylphenyl-, Niedrigalkoxyphenyl-, Halophenyl-, Aminophenyl- oder Nitrophenylgruppe bedeutet, und

R³ und R unabhängig voneinander eine Niedrig-

alkylgruppe bedeuten oder zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, Pyrrolidin; 2- oder 3-

Niedrigalkylpyrrolidin; Piperidin; 2-, 3- oder 4-Niedrigalkylpiperidin; 2,6-Diniedrigalky!piperidin; Piperazin; in 4-Stellung substituiertes Piperazin (wobei der Substituent in 4-Stellung eine Alkyl- oder Carbalkoxygruppe mit jeweils 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, eine Phenyl-, Methylphenyl-, Methoxyphenyl-, Halophenyl-, Nitrophenyl- oder Benzylgruppe bedeutet); Azepin; 2-, 3-, 4- oder 5-Niedrigalkylazepin; Morpholin, Thiomorpholin; Thiomorpholin-1 -oxid oder Thiomorpholin-1,1-dioxid darstellen,

wobei jede der zuvor genannten Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl- und Niedrigalkoxygruppen 1 bis 6 Kohlenstoff-

15 atome enthält.

Letztere Verbindungen sind Amidino-Derivate von Mitomycin C.

Die Umsetzung des Mitosan-Derivats der allgemeinen Formel (V) und des Aminodisulfids der allgemeinen Formel (III) oder (IV) führt man in einem wasserfreien, flüssigen, organischen Reaktionsmedium bei einer Temperatur von etwa -15°C bis +50⁰C durch. Die Temperatur liegt vorzugsweise zwischen 0 und 20⁰C. Jedes wasserfreie, flüssige, organische Reaktionsmedium kann eingesetzt werden, solange es bei den Reaktionsbedingungen stabil ist und die Umsetzung nicht nachteilig beeinflußt. Man setzt 1 bis 4 Mol-Anteile des Aminodisulfids der Formeln (III) oder (IV) mit dem Mitosan-Reaktanten der allgemeinen Formel (V) um. Vorzugsweise verwendet man äquimolare Mengen der beiden Reaktanten. Man läßt mehrere Stunden, vorzugsweise etwa 8 bis 50 Stunden, reagieren. Das Produkt gewinnt man chromatographisch. Man kann dabei zweckmäßigerweise das flüssige, organische Reak-

tionsmedium verdampfen und den Rest chromatographieren.

Die Aminodisulfide der allgemeinen Formeln (Ill)ünd (IV) sind bekannte Verbindungen und können nach verschiedenen Verfahren hergestellt werden. Sie können beispiels-

«7

weise durch Umsetzung des geeigneten Thiols R Alk.« SH

8
oder R SH mit einem Bunte-Salz der allgemeinen Formel

10 (VII)

NH₂AIk₂SSO₃Na (VII)

oder mit einem Sulfenylthiocarbonat der allgemeinen Formel (VIII)

NH₂AIk₂SSCOCH₃ (VIII)

hergestellt werden.

Klayman et al., Journal of Organic Chemistry. 29, 3737-3738 (1964), haben die folgenden Verbindungen nach dem Bunte-Salz-Verfahren hergestellt:

2-Aminoethyl-n-butyldisulfid 2-Aminoethy1-n-hexyldisulfid 2-Aminoethyl-n-octyldisulfid 25 2-Aminoethyl-n-decyldisulfid 2-Aminoethyl-phenyldisulfid
2-Aminoethyl-benzyldisulfid.

Das bevorzugte Lösungsmittel zur Umsetzung des Bunte-Salzes mit dem Thiol ist Methanol. Bei Verwendung dieses Lösungsmittels liegen die bevorzugten Temperaturen zwischen 0 und -10⁰C. Mit anderen Lösungsmitteln sind höhere Temperaturen erforderlich. Der Hauptnachteil dieses Verfahrens besteht darin, daß sich symmetrische Disulfide als Nebenprodukte bilden, wahrscheinlich als Ergebnis

der Disproportionierung des gewünschten, gemischten Disulfids.
5

Die gemischten Disulfid-Ausgangsverbindungen der allgemeinen Formeln (III) und (IV) stellt man vorzugsweise her, indem man ein geeignetes Thiol mit einem SuIfenylthiocarbonat der allgemeinen Formel (VIII) umsetzt. Dieses Verfahren ist von S.J. Brois et al, Journal of the American Chemical Soeciety 92, 7269-7270 (1970), beschrieben. Bei diesem Herstellungsverfahren gibt man im allgemeinen das Thiol zu einer Methanollösung des Aminoalkylsulfenylthiocarbonats der allgemeinen Formel (VIII) und führt die Umsetzung bei einer Temperatur von 0 bis 25°C durch. Je nach verwendetem, speziellem Thiol kann die Umsetzung schlagartig oder innerhalb von mehreren Stunden ablaufen. Das Fortschreiten der Reaktion kann man verfolgen, indem man mißt, wieviel nichtumgesetztes Thiol sich im Reaktionsgefäß befindet. Ist die Umsetzung träge, kann man eine katalytische Menge Triethylamin als Reaktionsbeschleuniger zugeben.

Nachstehend sind repräsentative Thiole der Formeln R^AIk₁SH oder R⁸SH aufgeführt, die durch Umsetzung mit dem Bunte-Salz der allgemeinen Formel (VII) oder mit Sulfenylthiocarbonat der allgemeinen Formel (VIII) zu Zwischenverbindungen der allgemeinen Formeln (III) und (IV) umgesetzt werden können. Letztere Verbindungen können wiederum, wie hier beschrieben, in die erfindungsgemäßen Verbindungen überführt werden. Bei den nachstehend aufgeführten Thiolen, die eine Aminogruppe enthalten, ist es im allgemeinen wünschenswert, diese Verbindungen zuerst in eine geschützte Form zu überführen, vorzugsweise in das ß-(Trimethylsilyl)-ethoxycarbonylamino-

Derivat, bevor man diese Verbindungen in die Zwischenverbindungen der allgemeinen Formel (III) oder (IV) überführt und mit der Mitosan-Zwischenverbindung der allgemeinen Formel (V) umsetzt. Die ß-(Trimethylsilyl)-ethoxycarbonylamino-Gruppe kann man dann anschließend durch Behandlung mit Tetraethylammoniumchlorid in Acetonitril abspalten [L.A.Carpino et al., J.C.S.Chem.Comm., 358 (1978)]. Man erhält dabei die gewünschte, freie Aminoverbindung der allgemeinen Formel (i) oder (II).

HSCH₃, HSCH₂CH₃, HSCH₂CH₂CH₃, HSCH(CH₃)₂, HS (CH₂ HS-CH-CH₂CH₃, HSCH₂CH(CH₃)₂,
CH₃

CH₃
HS-C-CH,, HS-<1 , HS'

^{3 N}

, HS-<1 ,

. HS-CH₂-/~\_t HS-CH₂-CH=CH₂, HS-CH₂-CH=

HS-CH₂-C=CH, HS-CH₂-C=C-CH₃, HS(CH₂)_n0R¹ (n = 2-4, R¹ = 0

H, CCH₃, CH₃)_; 25 0

HS(CH₂)_nCXR (n=1-3;X=0, NH, NR¹; R, R¹=H, CH₃) ,

HS(CH₂) NH₂ (n=2-4)₇ 0

HS(CH₂)_nNHR¹ (n=2-4; R¹=CH₃, CH₂CH₃, CH₂CH₂CH₃, CCH₃),

HS(CH₂)_nNR¹R²(n=2-4; R¹ZR^=CH₃, CH₂CH₃), CH₃ CH₃ CH₃ CH₃

HS-CH-CH₂NH₂, HS-C-CH₂NH₂, HS-CH₂-CH-NH₂, HS-CH₂-C-NH₂ ,

CH₃ CH₃

CH₃

HS-CH₂CH₂SCH₃, HS-CH₂CH₂NHC(CH₃)₃, HS-CH₂-C-CH₂NHR¹(R¹= J CH₃

H, CH₃, CCH₃),

43- ΊΙ'

HS-CH₂CH₂-NH- ζ~\

HS-CH₂CH₂-N

.CH₂

I (CH₉)

2'η

10 HS

CH₂NR¹R² -CH-CH₂NR¹R² (R¹ =Η, CH₃; R²=H, CH₃)

Λ /«1

HS-CH₉-CH-CH₅NHR¹ (R =Η, CH,) . NHR¹

CH₂NH₂

HS-CH₂-CH-CH₂NH₂, HS-CH₂-CH-CH₂NH₂, HS-CH₂-CH-NH₂,

COH

OH

CO₂H

HS-CH₂-CH-CH₂-NH₂, HS-CH₂-CH-CH₂-CO₂H,

NH₂

CO₂H

HS-CH₂CH₂CH NH,

HS(CH,

CH₂CO₂H

"NHR

(η=1-3; R²=H, CH₃J R¹=H, CH₃),

HS-Ch=CH-NHCCH₃, HS-<1 , HS-CH₂CH₂-N-CH₃ ,

NH₂ OCH₃

HS-CH₂-CH-CH₂NH_{2 ;} OCH

CH,

HS-CH,

NH,

₃ NH

HS-CH₉-C - C - NH₉ 2 , 2

CH,

NH

HS-CH₂-CH-C-NH₂
OCH,

HS-

NH,

HS-CH₂-

NH

CH

15

HS-CH₂-CH-CH₂OH _; OH HS-CH₂-CH=Ch-CH₂NH₂

HS-CHo-C-CHoNH

o ,

CH₃
HS-CH₂CHCh₂CH₂NH₂

5-Thio-D-glucosej

CH,

HS-CH₂-CH-CH₂NH₂ _} OH

H HS-CH₂-C-CH₂OH ,

NHo

₃ HS-CH₂-CH-CH₂OH _y

CH₃

HS-CH₀-CHo-0-C-CH, CH₃

HS-CH₂CH₂-NH-^ j]

HS-Γ N)-OCH

3 ■>

NH,

HS-//

NHCH, 20

HS-^N-NHCCH,

HS-</ N)-

HS- (( I

CH^ 30

N-N

34Ί3489

[O4O3

1*

HS-

(X=N, 0; Y=H X=S; Y=H, Cl, OCH₂CH₃) ^J

HS-<

HS-'

HS

HS-,

HS

HS N-N

-^ %- NH₂ (X=NH, S) JL

HS

N(CH₃)₂

HS-CH₂-CH=CH-^ λ

HS-CH₂-

-NHCCH,

(n=1, 2)

HS-(CH₂V^

20 HS-(CH₂)_n-<_x))-NH

N(CH,)

j)₂

HS-CHp-

HS-CH₂-^_n

(R¹=0CH₂CH₃

(X=O, S, NH) (X=O, S, NH) (X=O, S, NH) (X=O, S, NH) (X=O, S, NH)

(R¹=H,

HS-CH,

,-Or¹ (R¹=H, CH₃) ,

HS-CH-CH₂-N X

HS-CH, HS-CH.

Rl

R¹

-/^ NR¹

/—\

—\ NR V_V

25

30 HS-CHp-² (X=O, NH, NCH₃)

(R¹=N,

(R¹=H,

(R¹=H, CH₃) ,

(n=1-3; m=1-3) (R²=H, CH₃; R¹=H, CH₃, NH₂) (R¹=H, CH₃) _f

3b

HS

NH.

(R¹=H, CH₃)

HS

CH, ι ->

2 3

10 HS

HS

•N

-OH , OH

OH ^

NHCCH,

Il 3

Wirksamkeit gegenüber P-588 Mäuseleukämie

Tabelle I enthält die Ergebnisse von Laboruntersuchungen mit weiblichen CDF₁-Mäusen, denen intraperitoneal ein Tumor-Inokulum von 10 Ascites-Zellen von P-388 Mäuseleukämie implantiert worden war. Die Mäuse wurden mit verschiedenen Dosen entweder einer Testverbindungen der allgemeinen Formeln I oder II oder mit Mitomycin C behandelt. Die Verbindungen wurden intraperitoneal injiziert. Gruppen von sechs Mäusen wurden für jede Dosierungsmenge verwendet. Die Mäuse wurden mit einer einzelnen .Dosis der Verbindung am Tag der Inokulation behandelt. Bei allen Versuchsreihen wurde eine Gruppe von zehn Mäusen mit Kochsalzlösung behandelt. Diese Mäuse dienen als Kon-

trolle. Die mit Mitomycin C behandelten Gruppen dienten als positive Kontrolle. Es wurde ein 30 Tage-Protokoll angefertigt, in das die mittlere Überlebensdauer (mean survival time) in Tagen eingetragen wurde, welche für jede Mäusegruppe bestimmt wurde. Es wurde auch die Anzahl der Überlebenden am Ende der 30 Tage eingetragen. Die Mäuse wurden vor der Behandlung und wiederum am Tag 6 gewogen. Die Gewichtsveränderung wurde als Maß der Arzneimitteltoxizität angesehen. Es wurden Mäuse mit einem Gewicht von jeweils 20 g verwendet. Ein Gewichtsverlust von bis zu etwa 2 g wurde als nicht übermäßig betrachtet. Die Ergebnisse sind ausgedrückt als % T/C. Das ist das Verhältnis der mittleren Überlebensdauer der behandelten Gruppe zu der mittleren Überlebensdauer der mit Kochsalz behandelten Kontrollgruppe mal 100. Die mit Kochsalz behandelten Kontrolltiere starben gewöhnlich innerhalb von 9 Tagen. Die "maximale Wirkung".in der folgenden Tabelle ist ausgedrückt als % T/C. Es ist auch die diese Wirkung hervorrufende Dosis angegeben. Die in Klammern angegebenen Werte wurden mit Mitomycin C als positive Kontrolle in dem gleichen Experiment erhalten. Somit kann die relative Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen gegenüber Mitomycin bewertet werden. Als Minimumwirkung, ausgedrückt als % T/C, wurde ein Wert von 125 angesehen. Die in der nachstehenden Tabelle angegebene minimale wirksame Dosis ist diejenige Dosis, die zu einem % T/C von etwa 125 führt. Die in allen Fällen in der Spalte "durchschnittliche Gewichtsänderung" aufgeführten beiden Werte bezeichnen die durchschnittliche Gewichtsänderung pro Maus bei der maximalen wirksamen Dosis bzw. bei der minimalen wirksamen Dosis.

■31

Tabelle I

Inhibierung	von P-388 Mäuseleukämie	Dosis'	Minimale	Durchschn.
Verbindung Maximale Wirkung _Λ		wirksame	Gewichtsän
Nr. % T/C	3,2(3,2)	Dosisi	derung^
	6,4(3,2)	0,2	-1,2, -0,3
1(BL-6787)>333(294)	6,4(3,2)	<0,2	-2,5, -0,9
3(BL-6796)>375(250)	12,8(3,2)	0,8	-2,8, -0,9
4(BL-6832) 172(194)	12,8(3,2)	< 0,2	-2,4, 0
5(BL-6790)>333(294)	12,8(3,2)	0,4	-0,6, +0,8
6(BL-6789) 183(294)	6,4(3,2)	0,2	-0,6, -0,2
7(BL-6788) 200(294)	3,2(3,2)	0,8	-0,8, +0,1
8(BL-6795) 188(250)		< 0,2	-1,3, -0,6
9(BMY- 25036) 219(319)	3,2(1,6)
11(BMY-	12,8(1,6)	< 0,2	-1,8, -0,7
25066) 194(194)	< 0,2	-3,3, -1,1
12(BMY- 25067) 331(194)

mg/kg Körpergewicht 20

g/Maus, Tage 1-6, bei maximaler und minimaler wirksamer Dosis

«■ -33

Tabelle I Addendum

——————————— ,

Inhibierung von P-388 Mäuseleukämie^

Verbindung
5 Nr.

Maximum % T/C

Wirksame
Dosis¹

Minimale
wirksame
Dosisi

Durchschn. Gewichtsänderung^

28 (BMY-25828) 220(270) 6,4(4,8)

29 (BMY-25829) 170(270) 3,2(4,8)

30 (BMY-25827) 200(270) 12,8(4,8)

31 (BMY-25830) 170(270) 3,2(4,8)

C 0,4

< 0,2

< 0,4
<0,2

-1,1, +3,2

+2,6, +2,7

-3,2, +1,0

+1,3, +0,5

Jt

mg/kg Körpergewicht

g/Maus, Tage 1-7, bei maximaler und minimaler wirksamer Dosis
³ männliche

In Tabelle II sind die Ergebnisse von Antitumor-Tests zusammengefaßt, die unter Verwendung von in Mäusen gewachsenen Bi6-Melanom erhalten wurden. Es wurden BDF₁-Mäuse eingesetzt und subkutan mit dem Tumorimplantat inokuliert. Ein 60 Tage-Protokoll wurde angefertigt. Gruppen von zehn Mäusen wurden für jede getestete Dosierungsmenge verwendet. Die mittlere Überlebensdauer wurde für jede Gruppe bestimmt. Kontrolltiere wurden wie die Testtiere inokuliert und mit dem Injektionsträger behandelt. Die mittlere Überlebensdauer bei Tieren, denen kein Arzneimittel verabreicht worden war, betrug 24,5 Tage. Das Verhältnis der Überlebenszeit zu der der Kontrolltiere (% T/C) wurde als Maß für die Wirksamkeit angesehen. Es wurden die maximale wirksame Dosis und die minimale wirksame Dosis für jede Testverbindung bestimmt. Als minimale wirksame Dosis wurde eine solche Dosis definiert, die zu einem % T/C-Wert von 125 führt. Die Testtiere wurden für jede Dosierung an den Tagen 1, 5 und 9 intra-

35 venös mit der Testverbindung behandelt.

M- I O H O J

Tabelle II Inhibierung von B16-Melanom

Verbindung Maximale Wirkung Minimale Durchschn.Ge-Nr. %T/C Dosis¹ wirksame wichtsände-

Dosis'' rung

i(BL-6787)	122	3	,0	3	,0	-2	,7,	-2	,7
6(BL-6789)	163	3	,0	<3	,0	-1	,8,	-1	,8
6(BL-6789)³	161	6	,0	<3	,0	-1		-1	,3

mg/kg Körpergewicht

g/Maus, Tage 1-15» bei maximaler und minimaler wirksamer Dosis
³ Behandlung an den Tagen 5, 9 und 13.

Die Verbindung Nr. 3 (BL-6796) wurde auf ihre Wirksamkeit gegenüber B16-Melanom bewertet, das in BDF^-Mäusen gewachsen war. Bei diesem Experiment wurden die Tiere mit dem Tumor intraperitoneal inokuliert. Die Behand-

20 lung mit der Testverbindung erfolgte ebenfalls durch

intraperitoneale Injektion. Wie zuvor, wurde an den Tagen 1, 5 und 9 behandelt und es wurde die mittlere Überlebensdauer bestimmt. Als minimale wirksame Dosis wurde wiederum eine Dosis betrachtet, die zu % T/C 125

25 führt. Bei einer Dosis von 1 mg/kg der Testverbindung Nr. 3 überlebten 6 von 10 Tieren die gesamte 60tägige Testdauer (% T/C 235). Die Tiere hatten am Tag 5 eine durchschnittliche Gewichtsveränderung von +0,1 g. Bei einer Dosis von 0,5 mg/kg betrug die mittlere Überle-

30 bensdauer 42,0 (% T/C 165). Dies zeigt an, daß die minimale wirksame Dosis geringer ist als 0,5 mg/kg. In demselben Test zeigte Mitomycin C % T/C von 165 bei einer Dosis von 3 mg/kg. Dies war die maximale wirksame Dosis von Mitomycin C in diesem Experiment. Es ist somit evi-

35 dent, daß die Verbindung Nr. 3 gegenüber B16-Melanom

bei Mäusen um ein Vielfaches wirksamer ist als Mitomycin C. 5

Die Auswirkungen der intravenös verabreichten Verbindungen 1 (BL-6787) und 3 (BL-6796) auf die Gesamtzahl der weißen Blutzellen und deren Veränderung [total and differential white blood cell (WBC) counts] bei Mäusen wurden bestimmt. Es wurde gefunden, daß beide Verbindungen myelosuppressiv wirken, jedoch offensichtlich weniger als Mitomycin C. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengefaßt. Die Daten für die Verbindung 1 und für Mitomycin C wurden in dem gleichen Experiment erhalten, so daß ein direkter Vergleich ermöglicht wird. Die Verbindung 1 ist geringfügig weniger myelosuppressiv. Die Daten für die Verbindung 3 stammen aus einem anderen Experiment. Diese Daten legen nahe, daß die Verbindung 3 weniger myelosuppressiv ist; ein direkter Vergleich mit den beiden anderen Verbindungen stand jedoch nicht zur Verfügung.

ω cn	CO O	fco cn	Zahl	t⁺ η 1	der	to O	I-· t-· cn o	Tage 4	1	8	Ca£ 7
				t η 1		Tabelle III		4 + 0,5 0,2 + 0,04 3,7 + 0,5	7	+ 0,8
			t η 1	VOI	weißen Blutzellen	7 + 0,5 0,6^+ 0,1 6,2 + 0,5	11	+ 0,7
Verbindung	Dosis	t η 1	10 β',ί	Zellen pro ecm (χ 10"O	4 + 0,7 0,5 + 0,1 3,7 + 0,5	10	+ 0,7
Nr. (ι	ΐης/kff. iv)	t η 1	10 1,0 9,1	* Behandlung	5 + 0,4 0,5"+ 0,1 4,0 + 0,3	7	+ 0,9
1(BL-6787)	6,4	t η 1	10 1,5 7,8	+ 0,7 > + 0,3 ί + 0,6	3 + 0,2 0,1 + 0,02 2,5 + 0,2	9	± 0,5
1(BL-6787)	3,2	Blutzellen	10 1,7 8,3	+ 0,6 + 0,2 + 0,8	4,0 + 0,7 0,2 + 0,02 4,0 + 0,7		+ 0,5
3(BL-6796)	8,8		10,0 1,0 9,0	+ 0,6 + 0,1 Ξ 0,6
3(BL-6796)	6,6		9,0 0,7 8,4	+ 0,4 + 0,1 Ξ 0,6
Mitomycin C	6,4		+ 0,2 + 0,2 Ξ 0,3
Mitomycin C	3,2	+ 0,7 + 0,1 + 0,6
⁺ t β Gesamtzahl der weißen η = Neutrophile 1 = Lymphozyten	•

Aufgrund der Antitumor-Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen, die bei Untersuchungen an Tiertumoren festgestellt wurde, und da die erfindungsgemäßen Verbindungen weniger myelosuppressiv sind als Mitomycin C, können die erfindungsgemäßen Verbindungen eingesetzt werden, Tumore bei Mensch und Tier zu inhibieren. Die Verbindungen werden dazu systemisch in einer im wesentliehen nichttoxischen, wirksamen Antitumor-Dosis an ein Säugetier verabreicht.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden vorwiegend auf die gleiche Weise und zu dem gleichen Zweck wie Mito-

15 mycin C für Injektionszwecke verwandt. Geringfügig

größere oder kleinere Dosen können in Abhängigkeit von der speziellen Tumorsensitivitat verwendet werden. Sie können leicht als pharmazeutische Trockenmittel verteilt werden, welche Verdünnungsmittel, Puffer, stabilisierende Mittel, solubilisierende Mittel und Mittel zur Erleichterung der pharmazeutischen Verwendung enthalten. Diese Mittel werden dann kurz vor der Verwendung mit einem injizierbaren, flüssigen Medium konstituiert. Geeignete, injizierbare Flüssigkeiten sind beispielsweise

25 Y7asser, isotonische Kochsalzlösung und dergl.

Alle in den nachfolgenden Beispielen angegebenen Temperaturen sind in ⁰C ausgedrückt. Die magnetischen Resonanzspektren für Protonen ( H-NMR) wurden auf einem Varian XL-100- oder auf einem Jeol FX-90Q (90 MHz)-Spektrometer in Pyridin-dc aufgenommen, falls nicht anders angegeben. Die Infrarot(IR)-Spektren wurden mit einem Bechman-Model 4240-Spektrophotometer aufgenommen. Die IR-Absorptionen (0 _mav) sind in den nachfolgenden Aufstellungen in cm~1 angegeben. Die dünnschichtchromatographi-

sehen(TLC)-Untersuchungen wurden mit Hilfe von 0,25 nun vorbeschichteten Silikagelplatten von E.Merck (60F-254) durchgeführt. UV-Licht und/oder Joddämpfe wurden als sichtbarmachende Mittel eingesetzt. Flash-Chromatographie (j.Org.Chem. 14, 2923, 1978) wurde unter Verwendung von Silica Woelm (32 bis 63/um) durchgeführt. Die Lösungsmittel wurden bei vermindertem Druck und unterhalb 50°C verdampft.

B eispiel 1

7-[2-(Benzyldithio)-ethylamino]-9a-methoxymitosan (Verbindung 1) über Mitomycin A

Zu einer Lösung von 200 mg (0,28 mM) S-Benzyldithioethylamin in 2 ml Methanol, das 300 mg Triethylamin enthält, gibt man bei 0 bis 4⁰C 99 mg (28,3 mM) Mitomycin A in 10 ml Methanol, rührt die erhaltene Lösung 2,5 h bei 20⁰C, überwacht das Fortschreiten der Umsetzung dünnschichtchromatographisch unter Verwendung eines Methanol-Chloroform-Lösungsmittelsystems (10:90 V/V), konzentriert die Reaktionsmischung bei vermindertem Druck zu einem trockenen, festen Rückstand, den man flashchromatographiert (35 g Silikagel) unter Verwendung von Methanol-Dichlormethan (800 ml; 7:93 V/V) als EIuierungsmittel und erhält die Titelverbindung (87 mg, 59%) als reinen, amorphen Feststoff.

¹H-NMR (90 MHz, Pyridin-d₅, S)χ 2,08 (s, 3H), 2,74 (m, 3H), 3,16 (d, 1H, J=6 Hz), 3,24 (ε, 3H), 3,40-4,20 (m, 6H), 4,04 (s, 2H), 4,56 (d, 1H, J=14 Hz), 5,08 (t, 1H, J=12 Hz), 5,40 (dd, 1H, J=6, 12Hz), 7,44 (bs, 5H).

IR (KBr) 0> _Y, cm"¹: 3440, 3350, 3290, 3060, 3020,

1720, 1635, 1560, 1325, 1060 5 Analyse: für ^C24^H28^N4°5^S2 berechnet: C 55,80% H 5,46% N 10,84% S 12,41% gefunden : 55,08 5,31 10,52 12,1

Beispiel 2

N-r2-(2-Aminoethyldithio)-ethyl!-acetamid (Verbindung 2) (a) Bunte-Salzmethode

Eine Lösung von 695 mg (4,59 mM) 2-Aminoethanthioschwefelsäure in 7 ml Methanol, das 318 mg (7,95 mM) Natriumhydroxid enthält, rührt man 10 min bei Raumtemperatur, kühlt dann auf 0° ab, gibt 357 mg (3,43 mMol) N-Acetylcysteamin zu dieser Lösung und rührt die Lösung weitere 10 min. Die erhaltene, trübe Lösung verdünnt man mit
etwa 60 ml Methanol und säuert diese Lösung durch vorsichtige Zugabe von 624 mg (7,95 mMol) Acetylchlorid an. Die klare Lösung engt man zu einem wachsartigen Feststoff ein, den man direkt zur Umwandlung in die Verbindung 3 verwendet.

25 (b) Sulfenyl-thiocarbonat-Methode

Man verwendet das Verfahren von S.J.Brois et al. (loc. cit.). Methyl-2-aminoethylsulfenyl-thiocarbonathydrochlorid in Methanollösung behandelt man bei 0°C mit
Acetylcysteamin. Die Umsetzung läuft ohne Triethylamin-Beschleuniger praktisch spontan ab.

Beispiel 3

7-[2-(2-Acetylaminoethyldithio)-ethylamino]-9a-methoxy-3b mitosan (Verbindung 3)

Zu einer Lösung von 100 mg (0,29 mM) Mitomycin A in 4 ml Methanol, das 200 mg (193 mM) Triethylamin enthält, gibt man bei etwa 0° eine Lösung von etwa 400 mg der Verbindung 2 in 2 ml Methanol, filtriert das gebildete Präzipitat ab und läßt das klare Filtrat 4 h bei Raumtemperatur stehen. Die Lösung engt man zu einem trockenen Rückstand ein und flash-chromatographiert auf Silika-

10 gel (10 g) unter Verwendung der Gradienten-Elutions-

technik (4 bis 8% Methanol in Methylenchlorid). Das gewünschte Produkt ist die blaue Zone, die sich schneller bewegt. Dieses Produkt isoliert man als amorphen Feststoff, der 45 mg wiegt (31,550. Eine analytische Probe erhält man durch Verreiben des Feststoffs mit 5% Methylenchlorid in Hexan und Trocknen des Feststoffs.

¹H-NMR (100 MHz, Pyridin-d₅,δ ): 2,06 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,76 (bs, 1H), 2,80-3,20 (m, 5H), 3,24 (s, 3H), 3,60 (dd, 1H, J=12 und 2Hz), 3,70-4,10 (m, 5H), 4,54 (d, 1H, J=12Hz)_f 5,04 (t, 1H, J=IOHz), 5,38 (dd, 1H, J=4 und 10Hz). IR (KBr)Q _max, cm"¹: 3420, 3350, 3290, 1720, 1635, 1656,

1330, 1060 25 Analyse: für ^C21^H29^N5°6^S2 berechnet: C 49,26% H 5,67% N 13,68% S 12,51 % gefunden : 49,33 6,04 13,20 11,48

Beispiel 4

7-[2-(Octyldithio)-ethylamino]-9a-methoxymitosan (Verbindung 4) über in 7-Stellung substituiertes Amidino-9a-methoxymitosan

Zu einer Lösung von 60 mg (0,15 mM) 7-(Dimethylaminomethylen)-amino-9a-methoxymitosan in 1 ml Methanol, das

0,2 ml Triethylamin enthält, gibt man 139 mg (0,54 mM) 2-(0ctyldithio)-ethylamin-hydrochlorid, läßt die Lösung 48 h bei 0 bis 4°C stehen und führt eine Dünnschichtchroinatographie unter Verwendung von Methanol-Methylenchlorid (10:90 V/V) durch. Es zeigt sich, daß die grüngefärbte Ausgangsverbindung verbraucht ist. Eine blaue Hauptzone (Rf = 0,6) ist sichtbar. Die Lösung konzentriert man bei vermindertem Druck zu einem festen Rückstand, den man über 12 g Silikagel unter Verwendung von Methylenchlorid-Methanol (20:1 V/V) als Eluierungsmittel flash-chromatographiert. Man erhält die Titelverbindung als amorphen Feststoff (27 mg, 34%), dessen ¹H-NMR-Spektrum (100 MHz) in Tabelle IV gezeigt ist.

Beispiele 5 bis 22 Umsetzung: verschiedener Dithioamine

Die in Tabelle IV aufgeführten Amine setzt man wie in den Beispielen 1,3 oder 4 um und erhält die in der Tabelle aufgeführten Verbindungen der allgemeinen Formel I und II.

Die analytischen und Spektraldaten einiger der zuvor genannten Substanzen und einiger der in Tabelle IV aufgeführten Substanzen sind in Tabelle V wiedergegeben.

9 10

Tabelle IV Weitere Verbindungen der allgemeinen Formeln I und II

*

Verb.Nr. Formel οα_βΓ -p° _

II Phenyl

II n-Butyl

COCH ) CH CONHCH CH

II

HOCH₂CH -

Aminreaktant
j- 2-Aminoethy Idisu 1 fid

-(CHj)₂- 2-Aminoethy lpheny ldisu 1 fid - (CH2)2~ 2-Aminoethyl-n-butyldisulfid -(CH-)-- N- [2-(2-aminoethy ldithio)eth y !!acetamid

-(CH ) - 2-(2-Aminoethyldithio)ethanol

-(CH ) - 2-(2-AminoethyIdithio)pyridin

11

II (CH-) -- 2-Aminoethy 1-4-methoxyphenyldisulf id

12

II NO, -(CH.) ,- 2-Aminoethyl-4 -nitrophenyldisulf id

R'Mk,-

*

Verb. Nr, Formel oder R Aminreaktant

13 14 15

16 17 18

I C₆H₅COMH(CH₂)j-

CH₃O

(CHj) j-

II

^H02"\/ ^C0NHlCH2^}2

II 4-Chlor-2-naphthyl

H CH₃OjCCHCH₂-

NHCOCHCH₂C₆H₅ NH_n (CHj)j-■ (CMj)₂-

N-t 2-(2-aminoethy ld ithio)ethyl]benzamid

N-[2-(2-arainoethyldithio)ethyl]anisamid

N-[2-(2-aminoethyldithio)ethyl]-4-nit robenzamid

2-Aminoethyl-4-chlor-2-naphthyldisulfid

S-(2-arainoethylthio)cystein-methylester

•(CH ) - S-(2-aminoethylthio)phenylalanylcystein-

ine thylester

fc

19

20 21 22

I CII₃OjC(CHj)₆-

CH₂-

II 2-Pyrimidyl

ö-Mercaptoheptylsäure-methylester ⁶" (Cyclopropyl)methyldithio]hexylamin

-(CHj) j- 2-Aminoethyl-2-phenoxyethyldisulfid

2-(2-Aminoethyldithio)pyrimidin

•

Verb.Nr. Formel oder R -

23

24 25

26 27

II

-(CH₂)2-

NH

NO Cl(CH₂J₂NCONH

Alkj

Aminreaktant

1-[2-(2-Aminoethyldithio)ethyl 2-pyrrolidon

2-[ 2-(Aminoothyldithio)] benzimidazol

2-Aminoethyl-2-ethoxycarbonylaminoethyl· disulfid

2-Aminoethyl-3-guanidinopropyldisulfid

NO

Verb;Nr; Formel « R⁷AIk - ^oder

Alk.

Aminreaktant

28

II

2-Aminoethyl-2-nitrophenyldisulfid

30

II

O-

-(CM₂J₂-

2-Aminoethyl-2,4-dinitropheny1-disulfid**

2-Aπιinoethyl-3-nitro-2-pyridyl■ disulfid

31

II

NO,

2-Aminoethyl-5-nitro-2-pyridyldisulfid

Falls nichts anderes angegeben, steht R in den allgemeinen Formeln I und II für H

Hergestellt durch Umsetzung von 2-Nitrophenylsulfenylchlorid oder 2,4-Dinitrophenylsu1feny1-chlorid mit Cysteaminhydrochlorid in Tetrahydrofuran bei 0*C nach dem allgemeinen Verfahren von Y. Nagao et al., Tetrahedron Letters No. 50, Seiten 5021-5024 (1978).

Tabelle V Verbindung

H NMR-Daten

Pyridin ^5'

IR(KDr), "max

cm

-1

Elementaranalyse „

1635, 1560, 1320, 1060

0.87(m, 311), 1.23(ba, 10H), 1.70 3440, 3350, 3290, (m, 2H), 2.17(b, 3H), 2.76(t, 2950, 2920, 1720, 2H, 7Hz), 2.76(bs, IH), 3.00 (t, 2H, 7Hz), 3.14(d, IH, 4Hz), 3.24(e, 3H), 3.60(dd, lH, 3, 12Hz), 3.80-4.20(m, 3H), 4.54(d, IH, 12Hz), 5.06 (t. 111, lOHz) , 5.4O(dd, IH, 4, lOHz)

2.08(s, 3H), 2.72(d, IH, 4Hz), 2.80-3.30(m, 5H), 3.20(s, 311), 3.44(t, 2H), 3.56(dd, IH, 2, 12Hz), 3.70-4.10(m, 3H), 4.48 (d, IH, 12Hz), 4.96(t, 111, lOHz) , 5.33(dd, IH, 10, 4Hz)

2.04(s, 3H), 2.76(bB, IH), 3.00. (m, 3H), 3.26(3, 3H), 3.62(d, IH, 14Hz), 3.72-4.12(m, 3H), 4.52(d, 111, 14Hz), 5.40 (dd, IH, 6, 12Hz)

3400, 3280, 2930, 1710, 1635, 1560, 1330, 1060

.3440, 3350, 3290, 2960, 2930, 1720, 1635, 1560, 1330, 1060

T. C,55.74; H,7.11» N,10.40; S, 11.90 f. .C,56.091 H,6.B6; N,10.48; S,12.15

T. C,45.13; H,6.17; N,13.85; S,12.68 F. C,44.82; H,5.33; N,12.96; S,12.44

■fc*

T. C,53.06f H,5.42» N,10.76? S,12.32 F. C,53.41; H,4.73» N,10.70; S,12.52

α ■Ρα ία a

Tabelle V (Fortsetzung)

Verbindung

H ΝΜΠ Data ( Pyridin U₅, B)

max

cm

Elemehtaranalyse

0.60-1.80(m, 7H), 2.12(s, 3H), 2.72(m, 3H, 2.96(t, 2H, BHz), 3.12(d, IH), 3.24(9, 3H), 3.60(dd, IH, 2, 14Hz), 3.82(m, 3H), 4.50(d, IH, 14Hz), 5.36(dd, IH, 6, 12Hz)

2.0S(s, 3H), 2.13(3, 3H), 2.15 (s, 3H), 3.00(m, 4H), 3.20(s, 3H), 3.48(dd, IH), 3.60(dd, IH, 2, 14Hz) , 3.77(d, IH, 5Hz), 3.90(m, 4H), 4.06 (<ld, IH, 4, lOHz) , 4.59(t, IH, lOHz), 4.74 (d, Hf, 14Hz), 5.61(dd, IH, 4, lOHz) , 7.28, 7.64

2.12(3, 3H), 2.76(bs, IH), 3.12 (m, SH), 3.24(3, 3H), 3.60 (dd, IH, 2, 14Hz), 4.00(bi, 6H), 4.52 (d, IH, 14Hz), 5.04(t, IH, 12Hz), S.40(dd, IH, 6, 12Hz)

3440, 3350, 3290,

2950, 2920, 1715,

1635, 1560, 1320, 1060

3420, 3350, 3290,

2830, 1710, 1650,

1635, 1560, 1320, 1060

3430, 3360, 3280, 2920, 1710, 1630, 1550, 1325, 1055

T.C,52.26t H,6.26; N,11.61» S,13.29 F.C,52.78» H,6.87» N,9.89» S,10.38

T. C,49.90» H,5.64» N,12.65» S,11.58 F. C,48.95» H,5.37» N,12.22; S,12.54

T. C,48.50'> H,5.57» H, 11.91» S,13.63 F. C,48.73» H,5.82» N,11.06» S,13.67

CO 4>OO CD

Tabelle V (Fortsetzung)

¹II NHn Data
■Verbindung (Pyridin S!_s · β)

IR(KDr). ^ max

cm

Elementaranalyse

2.04(3, 3H), 2.74(bs, IH), 3.08 3430, 3350, 32Θ0,

(m, 3H), 3.24(e, 3H), 3.60(dd, IH, 2930, 1720, 1630, 2, 14Hx), 3.92(m, 3H), 4.52(d, IH, 1555, 1325, 1060, 14Hz), 5.02U, IH, 12Hz), 5.36(dd, IH, 6, 12Hz), 7.16, 7.56, B.72

T. C,52.47; H,5.00; N,13.91; S,12.73 F. C,46:37; H,4.42; H,11.BB; S,11.26

1Γ

12

2.04(s, 3H), 2.72(bs, IH), 3.04 3440, 3360, 3300, (m, 3H), 3.22(3, 3H), 3.58(dd> IH, 2940, 1720, 1635, 2, 14Hz), 3.68(8, 3H), 3.92(m, 1555, 1335, 1060 3H), 4.52(d, IH, 14Hz), 5.04(t, IH, 12Hz), 5.3B(dd, IH, 6, 12Hz), 7.34 (AB quartet, 4H)

2.04(3, 3H), 2.74(bs, IH), 3.0B 3460, 3360, 3300, (m, 3H), 3.24(3, 3H), 3.60(dd, IH, 2940, 1720, 1635, 2, 14Hz), 3.96(m, 3H), 4.52(d, IH, 1555, 1340, 1060 14Hz), 5.04(t, IH, 12Hz), 5.40 (dd, IH, 6, 12Hz), 8.04 (AB quartet, 4H)

T. C,54.12; H,5.30; N,Ιό.52; S,12.04 F. C,53.30; H,5.32; N,10.61; S,12.13

T. C,50.45; H,4.60; N,12.79; S,11.71 F. C,49.25; H,4.55; N,12.78; S,11.69

Tabelle V (Fortsetzung) Verbindung H NHR (Pyridin d , 6)

	IR	(KBr), Vmax
		(CtT¹)
3460,	3350	, 3285,
2940,	1720	, 1635,
1560,	1510	, H50,
1335,	1060

Eleraentaranalyse

28'

2.00(s, 3H), 2.17(m, IH), 2.77(bs, IH) 3.03(t, 2H), 3.17(bs, IH), 3.23(s, 3H), 3.60(d, IH, 12.8 Hz), 3.87(dt, 2H), 4.00(dd, IH, 4.2 Hz, 11.1 Hz), 4.51(d, IH, 12.8 Hz), 5.10(t, IH)₁ 5.4O(dd, IH, 4.2 Hz, 10.3 Hz), 7.32(m, 2H), 7.71(t, IH), 8.28 (dd, IH)

T: C, 48.33; H, 4.47; K, 12.04 F: C, 48.37; H, 4.56; N, 12.02 (korrigiert für 0.4H % C^Cl^

29'

30*

2.03(S, 3H), 2.15(bs, IH), 2.75(bs, IH), 3.14(t, 2H), 3.24(s, 3H), 3.24(bs, IH), 3.6O(d, IH), 3.94(dt, 2H), 4.00(dd, IH, 4.1 Hz, 11.2 Hz), 4.5O(d, IH, 12.7 Hz), 5.36(dd, IH, 4.1 Hz, 10.3 Hz), 7.32(n, IH),

8.53(m, IH)

2.08(s, 3H), 2.18(m, IH), 2.77(bs, IH), 3.17 (*, 3H), 3.24(s, 3H), 3.61(d, IH, 12.4 Hz), 3.87(dt, 2H), 4.03(dd, IH, 4.1 Hz, 11.1 Hz), 4.55(d, IH, 12.7 He), 5.12(t, IH), 5.42(dd, IH, 4.2 Hz, 10.3 Hz), 7.33 (dd, 111, 4.8 Hz, 8.4 Hz), 7.85U, IH), 8.50(d, IH, 8.2 Hz), 9.13(d, IH, 4.8 Hz)

3460, 3360, 3290,

3105, 2940, 1715,

1635, 1555, 1340, 1060

3460, 3350, 3280,

3065, 2930, 1720,

1630, 1550, 1335, 1060

T: C, 44.51; H, 3.97; N, 13.25 F: C, 44.56; H, 3.93; K, 12.85 (korrigiert für 0.5M % Ct^Cl^

T: C, 45.72; H, 4.26; N, 14.22 F: C, 45.72; H, 4.39; N, 14.31 (korrigiert für 0.5M % CH C^)

Tabelle V (Fortsetzung)

Verbindung

H NMR (Pyridin d , δ)

IR (KBr), vmax (cm"¹)

Elementaranalyse

2.04(s, 3H), 2.04 (bs, IH), 2.76 (bs, IH), 3.12(m, 3H), 3.22(s, 3H), 3.56(d, IH, 14 Hz), 3.9O(n, 3H), 4.48(d, IH, 14 Hz), 5.00(t, IH, 12.0 Hz), 5.36(dd, IH, 4.3 Hz, 12.0 Hz), 7.92(d, IH, 10.0 Hz), Θ.52 (dd, IH, 4 Hz, 10 Hz), 9.52(d, IH, 4 Hz)

3465, 3345, 3280,

3060, 2930, 1720

1630, 1585, 1555,

1340, 1055

T: C, 46.18; H, 4.29; N, 14.43 F: C, 46.19; H, 4.32; H, 13.91 (kot-rigiert für o.4H \ CII Cl )

a. 100 MHz NMR Spectrum

b. 90 MHz NMR Spectrum

_c Hergestellt durch Acylierung der Verbindung 5 mit Acetanhydrid und Pyridine

d. T= Theorie, F = gefunden

e. 360 MHz NMR Spectrum

Claims

Patentansprüche

worin
AIk₂ eine gerade oder verzweigte Alkylenkette mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, die gewünschtenfalls durch einen Substituenten R substituiert ist, wobei die an den Rest Alk_? gebundenen Schwefel- und Stickstoffatome und jeder gegebenenfalls vorhandene Substituent R , falls er über ein Sauerstoff-, Schwefeloder Stickstoffatom an Alk„ gebunden ist, an verschiedene Kohlenstoffatome des Restes AIk₂ gebunden sind,

R ein Wasserstoffatom, eine Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl- oder Benzoylgruppe bedeutet, wobei die Benzoylgruppe gegebenenfalls durch eine Niedrigalkyl-, Niedrigalkoxy-, Halogen-, Amino- oder Nitrogruppe substituiert ist,

R^ eine Hydroxyl-, Halogen- oder Amino gruppe; eine Alkylamino- oder Dialkylaminogruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen; eine Alkanoylaminogruppe; eine Benzoylamino- oder durch A substituierte Benzoylaminogruppe; eine Naphthoylamino- oder durch A substituierte Naphthoylaminogruppe; eine Cycloalkyl- oder durch A substituierte Cycloalkylgruppe mit jeweils 3 bis 8 Ring-

35 gliedern;

eine Cycloalkenyl- oder durch A substituierte Cycloalkenylgruppe mit jeweils 5 bis 8 Ringgliedern; βίο ne Phenyl- oder durch A substituierte Phenylgruppe; eine Naphthyl- oder durch A substituierte Naphthylgruppe;

eine heterocyclische Gruppe, die unter heteroaromatischen und hetero-alicyclischen Gruppen ausgewählt ist, welche 1 bis 2 Ringe, 3 bis 8 Ringglieder in jedem Ring und 1 bis 4 Heteroatome, ausgewählt unter Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel enthalten;

eine Alkoxy- oder Alkylthiogruppe mit jeweils bis 6 Kohlenstoffatomen; eine Carboxygruppe; eine Alkoxycarbonylgruppe mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen; eine Phenoxycarbonyl- oder durch A substituierte Phenoxycarbonylgruppe; eine Phenoxy- oder durch A substituierte Phenoxygruppe; eine Naphthoxy- oder durch A substituierte Naphthoxygruppe; eine Alkoxycarbonylamino gruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen; eine Guanidinogruppe; eine Ureido (-NHCONH₂)-Gruppe; eine N-Alkylureylen (-NHCONH-alkyl)-Gruppe mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen; eine N-Haloalkylureylengruppe mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen; eine N -Haloalkyl-N -nitrosoureylengruppe mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen; und eine Dialkylaminocarbonylgruppe mit 3 bis 13 Kohlenstoffatomen bedeutet, wobei der Substituent A ausgewählt ist unter 1 bis 2 Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl-, Niedrigalkoxy-, Halogen-, Amino-, Hydroxy- oder Nitrogruppen, und

R^ eine organische Gruppe darstellt.
2. Verbindungen der allgemeinen Formel I oder II:

Il

^ CH₂OCNH₂ OCH₃
.Γ- N-R

H R⁸-SS-Alk₂ ^N

II

worin

AIk₁ eine gerade oder verzweigte Alkylenkette mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, falls R über, ein Kohlenstoffatom an Alk., gebunden ist, oder 2 bis 6 Kohlen-

stoffatomen bedeutet, falls R' über ein Schwefel-, Sauerstoff- oder Stickstoffatom an AIk₁ gebunden ist, wobei

7
im letzteren Fall R' und -SS- mit unterschiedlichen

Kohlenstoffatomen verbunden sind,

eine gerade oder verzweigte Alkylenkette

mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, die gewünschtenfalls durch einen Substituenten R substituiert ist, wobei die an den Rest Alk_ gebundenen Schwefel- und Stickstoffatome und jeder gegebenenfalls vorhandene Substituent R , falls er über ein Sauerstoff-, Schwefeloder Stickstoffatom an AIk₂ gebunden ist, an verschiedene Kohlenstoffatome des Restes AIk₂ gebunden sind,

AIk₁ und AIk₂ eine Doppelbindung enthalten können,

R ein Wasserstoffatorn, eine Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl- oder Benzoylgruppe bedeutet, wobei die Benzoylgruppe gegebenenfalls durch eine Niedrigalkyl-, Niedrigalkoxy-, Halogen-, Amino- oder Nitrogruppe substituiert ist,

7
R^f eine Hydroxyl-, Halogen- oder Aminogruppe;

eine Alkylamino- oder Dialkylaminogruppe mit 1 bis 12

Kohlenstoffatomen; eine Alkanoylaminogruppe; eine Benzoylamino- oder durch A substituierte Benzoylaminogruppe; eine Naphthoylamino- oder durch A substituierte Naphthoylaminogruppe; eine Cycloalkyl- oder durch A substituierte Cycloalkylgruppe mit jeweils 3 bis 8 Ring-

15 gliedern;

eine Cycloalkenyl- oder durch A substituierte Cycloalkenylgruppe mit jeweils 5 bis 8 Ringgliedern; eine Phenyl- oder durch A substituierte Phenylgruppe; eine Naphthyl- oder durch A substituierte Naphthylgruppe; eine heterocyclische Gruppe, die unter heteroaromatischen und heteroalicyclischen Gruppen ausgewählt ist, welche 1 bis 2 Ringe, 3 bis 8 Ringglieder in jedem Ring und 1 bis 4 Heteroatome, ausgewählt unter Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel, enthalten; eine Alkoxy- oder Alkylthiogruppe mit jeweils 1 bis 6 Kohlenstoffatomen; eine Carboxygruppe; eine Alkoxycarbonylgruppe mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen; eine Phenoxycarbonyl- oder durch A substituierte Phenoxycarbonylgruppe; eine Phenoxy- oder durch A substituierte Phenoxygruppe; eine Naphthoxy- oder durch A substituierte Naphthoxygruppe; eine Alkoxycarbonylaminogruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen; eine Guanidinogruppe; eine Ureido (-NHCONH₂)-Gruppe; eine N-Alkylureylen (-NHCONH-alkyl)-Gruppe mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen; eine N⁵-

35 Haloalkylureylengruppe mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen;

eine N -Haloalkyl-N -nitrosoureylengruppe mit 3 "bis 7 Kohlenstoffatomen; und eine Dialkylarainocarbonylgruppe mit 3 "bis 13 Kohlenstoffatomen bedeutet, wobei der Substituent A ausgewählt ist unter 1 bis 2 Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl-, Niedrigalkoxy-, Halogen-, Amino-, Hydroxy- oder Nitrogruppen, und

R eine Alky!gruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen; eine Alkenyl- oder Alkinylgruppe mit jeweils 3 bis 12 Kohlenstoffatomen; eine Cycloalkyl- oder durch A substituierte Cycloalkylgruppe mit 3 bis 8 Ringgliedern; eine Cycloalkenylgruppe mit 5 bis 8 Ringgliedern; eine Phenyl- oder durch A substituierte Phenylgruppe; eine Naphthyl- oder durch A substituierte Naphthylgruppe; oder eine heterocyclische Gruppe, ausgewählt unter heteroaromatischen und heteroalicyclischen Gruppen mit 1 bis 2 Ringen, 3 bis 8 Ringgliedern in jedem Ring und 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt unter Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel, bedeutet, wobei der Substituent A ausgewählt ist unter 1 bis 2 Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl-, Niedrigalkoxy-, Halogen-, Amino-, Hydroxy-

oder Nitrogruppen; oder R zusammen mit dem benachbarten Schwefelatom eine S-Cysteinylgruppe darstellt, wobei diese S-Cysteinylgruppe verestert sein kann, in ein Salz überführt sein kann oder in eine Peptidbindung eingebunden sein kann.
3. Verbindungen nach Anspruch 2 der allgemeinen

Formel I, worin AIk₂ für Ethylen steht und R ein Wasserstoff atom bedeutet.
4. Verbindungen nach Anspruch 3, worin AIk^ für Ethylen steht.
5. Verbindungen nach Anspruch 2 der allgemeinen Formel II, wobei AIk₂ für Ethylen steht und R ein Wasserstoffatom bedeutet.
6. Verbindungen nach Anspruch 5, worin R_g eine Alkylgruppe bedeutet.

7· Verbindungen nach Anspruch 2, nämlich:

7-[2-(2-Aminoethyldithio)-ethylamino]-9a-methoxymitosan;

7-[2-(2-Acetylaminoethyldithio)-ethylamino]-9amethoxymitosanj 15 7-[2-(Octyldithio)-ethylamino J-9a-methoxymitosan;

7-[2-(n-Butyldithio)-ethylamino]-9a-methoxymitosan;

7-[2-(Benzyldithio)-ethylamino]-9a-methoxymi tosanj

7-[2-(Phenyldithio)-ethylamino]-9a-methoxymitosan;

7-[2-(2-Hydroxyethyldithio)-ethylamino]-9a-methoxymitosan;

7-[2-(2-Pyridyldithio )-ethylamino J-9a-methoxymitosan;

7-[2-(4-Methoxyphenyldithio)-ethylamino J-9a-methoxymitosan;

7-[2-(4-Nitrophenyldithio)-ethylamino]-9a-methoxymitosan;

30 7- [2- (2-Nitrophenyldithio) -ethylamino ]-9a-methoxymitosan;

7-[2-(2,4-Dinitrophenyldithio)-ethylamino]-9a-

methoxymitosan;

7-[2-(3-Nitro-2-pyridyldithio)-ethylamino]-9amethoxymitosan; und
7-[2-(5-Nitro-2-pyridyldithio)-ethylamino]-9amethoxymitosan.
5
8. Verwendung mindestens einer der Verbindungen
nach einem der Ansprüche 1 bis 7 als Antitumoragens.
9. Pharmazeutisches Mittel, enthaltend mindestens eine der Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7, gegebenenfalls zusammen mit üblichen Trägern und/oder
Verdünnungsmitteln.
10. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen des Anspruchs 2, dadurch gekennzeichnet, daß man 1 bis 4 Mol-Äquivalente eines Amins der Formel III oder IV

R'-AIk₁-SS-AIk₂NH₂ III

R⁸-SS-Alk₂NH₂ IV

mit 1 Mol-Äquivalent einer Mitosanverbindung der allgemeinen Formel V

CH₂OCNH₂

worin R, R , R , AIk₁ und AIk₂ die in Anspruch 2 angegebenen Bedeutungen besitzen und Y eine Niedrigalkoxygruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder eine Gruppe
der allgemeinen Formel VI

8 1

R₃R₄N-C=N-

VI 5

bedeutet, worin

R^ ein Wasserstoffatorn, eine Niedrigalkyl-, Phenyl-, Niedrigalky!phenyl-, Niedrigalkoxyphenyl-, Halophenyl-, Aminophenyl- oder Nitrophenylgruppe bedeutet;

■χ Λ

R und R unabhängig voneinander eine Niedrigalkylgruppe bedeuten oder zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, Pyrrolidin; 2- oder 3-Niedrigalky!pyrrolidin; Piperidin; 2-, 3- oder 4-Niedrigalkylpiperidin; 2,6-Diniedrlgalky!piperidin; Piperazin; in 4-Stellung substituiertes Piperazin (wobei der Substituent in 4-Stellung eine Alkyl- oder Carbalkoxygruppe mit jeweils 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, eine Phenyl-, Methylphenyl-, Methoxyphenyl-, Halophenyl-, Nitrophenyl- oder Benzylgruppe bedeutet); Azepin; 2-* 3-_f 4- oder 5-Niedrigalkylazepin; Morpholin; Thiomorpholin; Thiomorpholin-1 -oxid oder Thiomorpholin-1,1 -dioxid darstellen,
wobei jede der zuvor genannten Niedrigalkyl-, Niedrig-

25 alkanoyl- und Niedrigalkoxygruppen 1 bis 6 Kohlenstoff atome enthält, in einer reaktionsinerten, organischen Flüssigkeit bei einer Temperatur von etwa -15 bis +50⁰C so lange in Kontakt bringt, bis sich eine ausreichende Menge der

30 Verbindungen der allgemeinen Formel I oder II gebildet hat.