NL8401104A

NL8401104A - Aminodisulfiden.

Info

Publication number: NL8401104A
Application number: NL8401104A
Authority: NL
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1983-04-11
Filing date: 1984-04-06
Publication date: 1984-11-01
Also published as: FR2543953B1; KR890001488B1; DK183984D0; AT387019B; ATA122384A; GB2140799B; US4803212A; GB2140799A; GR79579B; ES8602798A1; FR2543953A1; DK170071B1; IE840878L; GB8409242D0; DE3413489C2; SE8401999L; FI841380A0; LU85295A1; AU577523B2; CH661273A5

Description

I '* > VO 6199

Titel: Sminodisulfiden.

De onderhavige uitvinding betreft mitomycine analoga die' een disulfidegroep bevatten (klasse 260 subklasse 326.24) . Deze verbindingen zijn mitomycine C derivaten waarin de 7-aminogroep een organische substituent draagt, welke een disulfidegroep bevat. Deze verbindingen zijn 5 inhibitoren van experimentele diertumoren.

Nomenclatuur - De systematische Chemical Abstracts naam voor mitomycine C is: t laR- (laa, 8 S, 8aa, Shot) ] -6 -amino -8 - [ ((aminocarbonyl) -oxy) methyl] - 1,la,2,3a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methyl-arizino 10 [2',31,3,4lpyrrolo(l,2-a] indool-4,7-dion volgens welke naam het azirinopyrroloindol ringsysteem genummerd is zoals aangegeven in formule 1 van het formuleblad.

Een triviaal nomenclatuursysteem, dat in de mitomycine literatuur op grote schaal wordt gebruikt, identificeert het bovenstaande ringsys-.

15 teem met inbegrip van verscheidene van de karakteristieke substituenten van de mitomycines als mitosaan. De structuur van mitosaan is met formule 2' op het formuleblad aangegeven.

In de onderhavige aanvrage is gekozen voor het gebruik van dit laatste systeem, waarbij het azirino stikstofatoom wordt aangegeven als 20 N^a en het ring aminostikstof atoom wordt aangegeven als . Wat de stareochemische configuratie van de produkten volgens de uitvinding betreft, is de bedoeling dat wanneer ze met de stamnaam "mitosaan" of met de structuurformule worden geïdentificeerd, de stereochemische configuratie daarvan als gelijk aan mitomycine is.

25 Mitomycine C is een antibioticum dat door fermentatie wordt ver kregen en momenteel onder goedkeuering van de Food and Drug Administration in de handel is. voor de therapie van uitgezaaide adenocarcinoma van de maag of pancreas in erkende combinaties met andere goedgekeurde chemo-therapeutische middelen en als palliatieve behandeling wanneer andere

Cs) 30 modaliteiten hebben gefaald Mutamycine v Bristol Laboratories, Syracuse,

New Fork 13201, Physicians' Desk Reference 35th Edition, 1981, biz,717 en 718. Mitomycine C en zijn bereiding door fermentatie vormt het onderwerp van het Amerikaanse octrooischrift 3.660.578, dat op 2 mei 1972 is verleend en voorrang inroept van eerdere aanvragen, met 35 inbegrip van een aanvrage die in Japan op 6 april 1957 werd ingediend.

84 0 1 1 0 4 . ï· ·» -2-

De structuren van mytomycine A, 3, C en van porfiromycine werden voor het eerst gepubliceerd door J.S. Web et al, of Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J.'Amer. Chem. Soc. 84, 3185-3187 (1962). Een van de chemische transformaties die in de structuuronderzoek 5 werd gebruikt om de relatie tussen mitomycine A en mitomycine C te vinden, was de omzetting van eerstgenoemde, 7-9a-dimethoxymitosaan, door reactie met ammoniak in laatstgenoemde stof, het 7-amino-9a-methoxymitosaan. Vervangingvan de 7-methoxygroep van mitomycine A bleek een reactie, van groot belang te zijn in de bereiding van anti-10 tumor werkzame derivaten van mitomycine C. De volgende- artikelen en octrooien hebben elk betrekking op de omzetting van mitomycine A in een 7-gesubstitueerd aminomitomycine C derivaat met antitumorwerkzaamheid. Het doel van dit onderzoek was om derivaten te bereiden die actiever zouden zijn, en in het bijzonder minder toxisch zouden zijn dan mito-15 mycine C:

Matsui et al, "The Journal of Antibiotics"", XXI, 189-198 (1968) .

Kinoshita et al, J. Med. Chem- 14, 103-109 (1971) .

Iyengar et al. J. Med. Chem. _24, 975-981 (1981) .

Iyengar, Sami, Remers en Bradner, Abstracts of Papers 20 183rd Annual Meeting of the American Chemical Society,

March 1982, No. MEDI 72.

Iyengar, et al. J. Med. Chem. 1983, 26, 16-20.

Iyengar, et al. Abstracts cg Papers, 185th

Annual Meeting of the American Chemical Society, 25 March 1983, No. MEDI 82.

De volgende octrooien hebben betrekking op de bereiding van 7-gesubstitueerde aminomitosaan derivaten door de reactie van mitomycine A, mitomycine B, of een N^-gesubstitueerd derivaat daarvan met een primair of secundair amine: 30 Cosulich et al- Amerikaans octrooi 3,332,944 van. 25 juli 1967

Matsui et al. " " 3,420,846 van 7 januari 1969

Matsui et al. " "- 3,450.705 van 17 juni 1969.

Matsui et al. " " 3,514,452 van 26 mei 1970

Nakano et al. " " 4,231,936 van 4 november 1980

V

35 Remers, " " 4,268,676 van 19 mei 1981.

Remers, Belg. octrooi 893.162 van 12 mei 1982.

8401104 -3- k Λ

Mitomycine C derivaten met een gesubstitueerde aminosubstituent op de 7-positie zijn ook bereid door een directe biosynthese, d.w.z. door fermeiiatievloeistoffen aan te vullen met een reeks van primaire amines, en de conventionele mitomycinefermentatie uit te voeren S (C. A. Claridge et al- Abst. of the Annual Metting of Amer. Soc. for Microbiology 1982- Abs. 028).

Mitomycine C is het belangrijkste mitomycins dat door fermentatie wordt bereid en is de in de handel verkrijgbare vorm. De hedendaagse technologie voor de omzetting van mitomycine C in mitomycine A

10 voor gebruik in de bereiding van de semisynthetische gesubstitueerde aminoanaloga van mitomycine C, waarnaar in de bovenstaand vermelde octrooien en publikaties wordt verwezen, omvat hydrolyse van mitomycine C tot het overeenkomstige 7-hydroxymitosaan, een zeer onstabiele verbinding en vervolgens methylering van deze stof met diazomethaan 15 dat een zeer gevaarlijk te hanteren materiaal is. Een poging om het gebruik van diazomsiiaan voor de methylering te vermijden omvat het gebruik van 7-acyloxymitosanen (Kyowa Hakko Kogyo KK Japans octrooi J5 6073-085, Farmdoc No. 56227 D/31) voor de synthese van mitomycine C analoga.

20 De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een groep van mitomycine C analoga met een dithio organische substituent aan het amino stikstofatoom op de 7-positie. Deze verbindingen kunnen worden 9 weergegeven met formule 3 van het formuleblad, waarin R een organische groep is, namelijk de structuurcomponent van een organisch·, thiol met g 25 de formule R SH, en Alk2 en R de onderstaand gegeven betekenissen hebben. Deze verbindingen worden op alternatieve wijze beschreven door de formule 4 en 5 van het formuleblad waarin

Alk. een rechte of vertakte alkyleengroep met 1-6 koolstof- 7 via atomen is, wanneer R daarmee een koolstofatoom daarvan 30 is verbonden, en 2-6 koolstofatomen wanneer R^ daarmee is- verbonden via een zwavel-? zuurstof-of stikstofatoom daarvan, en en -SS- in dat geval aan verschillende koolstof atomen zijn gebonden;

Alk- een rechte of vertakte alkyleengroep met 2-6 koolstofatomen ^ 7 35 is, welke desgewenst een R -substituent draagt waarin de daarmee verbonden zwavel- en stikstofatomen en eventuele 7 optionele R substituent, welke daarmea via zuurstof, 8401104 i' ‘ί -4- zwavel of stikstof is gebonden, aan verschillende koolstof-atomen van Alk^ zijn gebonden,

Alk^ en Alk2 een dubbele binding kunnen bevatten, R staat voor waterstof, lage alkyl, lage alkanoyl, benzoyl, 5 of gesubstitueerd benzoyl waarin de substituent lage alkyl, lage alkoxy, halogeen, amino, of nitro is, 7 R gekozen is uit de groep bestaande uit hydroxy, halogeen, amino, alkylamino of dialkylamino met 1-12 koolstof atomen, alkanoylamino, benzoylamino of A-gesubstitueerd benzoyl— \ 10 amino·, naftoylamino of A-gesubstitueerd naftoylamino, cyclo- alkyl of A-gesubstitueerd cycloalkyl met elk 3-8 leden in de ring, cycloalkenyl of A-gesubstitueerd cycloalkenyl met elk 5-8 leden, in de ring, fenyL of A-gesubstitueerd fenyl, naftyl of A-gesubstitueerd naftyl, een heterocycli— 15 sche groep gekozen uit de groep bestaande uit hetero- aromatische en heteroalicvclische groepen met 1-2 ringen, met 3-8 leden in de ring per ring, een 1-4 heteroatomen gekozen uit zuurstof, stikstof, en zwavel, alkoxy of alkylthio met elk 1-6 koolstof atomen, carboxy, alkoxycarbonyl met 20 1-7 koolstofatomen, fenoxycarbonyl of A-gesubstitueerd fenoxycarbonyl, fenoxy of A-gesubstitueerd fenoxy, naftoxy of A-gesubstitueerd naftoxy, alkoxycarbonylamino met 2-6 koolstofatomen, guanidino, ureido (-NHCONH^), N-alkylureyleen (-NHCONHalkyl) met 2-7 koolstofatomen, 25 N^-halogeenalkylureyleen met 3-7 koolstofatomen, N^-halogeen- alkyl-N^-nitrosoureyleen met 3-7 koolstofatomen, en dialkylaminocarbonyl met 3-13 koolstofatomen, waarin de A-substituent gekozeriis uit de groep bestaande uit een of twee lage alkyl, lage alkanoyl·, lage alkoxy, 30 halogeen, amino, hydroxy of nitrogroepen en

Q

R gekozen, is uit de groep bestaande uit alkyl met 1-12 koolstof atomen, alkenyl·· of alkinyl met. elk 3-12 koolstofatomen cycloalkyl met 3-8 leden in de ring, A-gesubstitueerd cycloalkyl met 3-8 leden in de ring, cycloalkenyl met 5-8 35 leden in de ring, fenyl, A-gesubstitueerd fenyl, naftyl, A-gesubstitueerd naftyl, een heterocyclische groep gekozen - uit de groep bestaande uit heteroaromatische en hetero- alicyclische groepen met 1-2 ringen, met 3-8 leden in de 840 1 1 0 4 ΐ * -5- ring per ring, en 1-4 heteroatomen gekozen uit zuurstof, stikstof en zwavel, waarin de A-substituent. gekozen is uit de groep bestaande uit een of twee lage alkyl, lage alkanoyl, lage alkoxy, halogeen, amino, hydroxy of nitro-

Q

5 groepen, en R en het naast gelegen zwavelatoom tezamen S-cysteinyl vormen waarin S-cysteinylgroep veresterd, verzout, of verbonden met een peptidebinding kan zijn*

De verbindingen volgens de uitvinding zijn inhibitors van experimentele tumoren in dieren. Ze worden bereid 10 door een aminodisulfide met formule 6 of 7 te laten reage ren met een mitosaan derivaat met formule 8, waarin Y een groep is die gemakkelijk door reactie meteen primair amine kan worden verdrongen onder vorming van een 7 N -gesubstitueerd' mitomycine C derivaat. Dergelijke 15 mitosaanderivaten omvatten mitomycine A en de homologen daarvan met formule 8, waarin Y een lage alkoxygroep is met 1-6 koolstofatomen. Een ander derivaat is dat met formule 8, waarin Y de amidinogroep met formule 9 is, 5 waarin R staat voor waterstof (voorkeur), lage alkyL, 20 fenyl, lage alkylfenyl, lage alkoxyfenyl, halogeenfenyl, aminofenyl, of nitrofenyl, en 3 4 R en R onafhankelijk van elkaar staan voor lage alkyl, of tezamen met het stikstofatoom waaraan ze gebonden zijn pyrrolidine, 2- of 3-lage alkylpyrrolidine, piperidine, 2-, 3-, of 4-lage 25 alkylpiperidine, 2,6-dilage alkylpiperidine, piperazine, 4-gesubstitueerde piperazine (waarin de 4-substituent alkyl, of carbalkoxy met elk 1-8 koolstofatomen.fenyl, methylfenyl, methoxyfenyl, halogeenfenyl, nitrofenyl, of benzyl is), aze-pine 2-, 3-, 4-, of 5-lage alkylazepine, morfoline, 30 thiomorfoline, thiomorfoline-l-oxyde, of thiomorfoline- 1,1-dioxyde vormen, waarin elk van de 'eerder genoemde lage alkyl, lage alkanoyl en lage alkoxygroepen 1-6 koolstof atomen bevat.

De laatstgenoemde derivaten zijn amidiaoderivaten. van mitomycine C 35 en worden beschrerevn in de samenhangende Amerikaanse octrooiaanvrage 385,149 die op 4 juni 1982 is ingediend.

8401104 * > -β-

De reactie tussen het mitosaanderivaat van formule 8 en het aminodisulfidè met formule 6 of formule 7 vindt plaats in een watervrij vloeibaar organisch reactiemedium bij een temperatuur in het bereik van ongeveer -1.5 tot +50°C. Een temperatuur in het bereik van 5 0-2Q°C heeft de voorkeur.. Elk watervrij vloeibaar organisch reactiemedium kan worden gebruikt zo lang het stabiel onder de reactieomstandigheden en niet op een schadelijke wijze aan de reactie deelneemt. Er worden 1-4 mol hoeveelheden- van het aminodisulfidè met de formules 6 of 7 gebruikt met de· mitos^aanreactant met formule 8. Bij voorkeur worden, equimo-10 laire hoeveelheden van de twee reactanten gebruikt. Een reactieperiode van verscheidene uren en bij voorkeur ongeveer 8 tot 50 uur wordt toegepast.. Het produkt wordt, chroma togr af is ch gewonnen, waarbij; het geschikt is om een verdamping van het vloeibare organische reactiemedium en chromatografie van het residu uit te voeren.

15 Aminodisulfidei met de formules 6 en 7 zijn bekende verbin dingen en kunnen langs verscheidene wegen worden bereid. Zij kunnen bijvoorbeeld worden bereid door reactie van het geschikte thiol 7 3 R Alk^SH of R SE met een Bunte zout met formule 10, of met een sulfenylthiocarbonaat met formule 11.

20 Klayman et al. Journal of Organic Chemistry 2£, 3737-3738 (1964) hebben de volgende verbindingen bereid met behulp van de Buntezout methode. 2-aminoethyl n-butyl disulfide 2-aminoethyl n-hexyl disulfide 2-aminoethyl n-octyl disulfide 25 2-aminoethyl n-decyl disulfide 2-aminoethyl fenyl disulfide 2-aminoethyl benzyldisulfide

Methanol bleek voor de reactie van het Buntezout met thiol het geprefereerde reactieoplosmiddel te zijn. Reactietemperaturen van 0 tot -10°C 30 bleken bij gebruik van dit oplosmiddel, de voorkeur te verdienen.. Hogere temperaturen waren bij gebruik van andere oplosmiddelen noodzakelijk.

Het belangrijkste nadeel van deze methode is de vorming van symmetrische disulfiden als bijprodukt, waarschijnlijk als gevolg^van een disproportionering van het gewenste gemengde listri fide. . .

35 : . ..De gemengde disulfide uitgangsmaterialen met de formules 6 en 7 worden bij voorkeur bereid via reactie van het geschikte thiol met een sulfenylthiocarbonaat met formule 11. Dit is de methode van S.J. Brois et al.

8401104 -7-

Jt «

Joumal of the American Chemical Society 92, 7269-7270 (1970) .

Deze bereidingsprocedura omvat typerend toevoeging van. het thiol aan een methanoloplossing van het amino-alkylsulfenylthiocarbonaat met formule 11 en het laten verlopen van de reactie bij een temperatuur in 5 het bereik van 0 tot 25°C. De reactietijden variëren van vrijwel ogenblikkelijk tot verscheidene uren, afhankelijk van het in het bijzonder toegepaste thiol. Het voortschrijden van de reactie kan worden gevolgd door de· aanwezigheid van niet gereageerd hebbend thiol in het reactievat te meten. Wanneer de reactie traag verloopt, kan een katalytische 10 hoeveelheid triethylamine als reactieversneller worden toegevoegd.

Op het formuleblad wordt een opsomming gegeven van represen- 7 8 tatieve thiolen met de formules R Alk^SH of R SH, die via een reactie met het Buntezout met formule 10 of sulfenylthiocarbonaat met formule 11 kunnen worden omgezet onder vorming van de tussenprodukten met de for-15 mules 6 en 7, die op hun beurt op de beschreven wijze worden omgezet in produkten volgens de onderhavige uitvinding. In het geval van de amino-bevattende thiolen in de gegeven opsomming is het in het algemeen gewenst dat deze eerst in een beschermde vorm worden omgezet, bij voorkeur het 3-(trimethylsilyl)ethoxycarbonylaminoderivaat, voordat 20 ze worden omgezet in de tussenprodukten met formules 6 of 7 en reactie met het mitosaan tussenprodukt met formule 8. De 0-(trimethylsilyl)ethoxy— carbonylaminogroep kan vervolgens door behandeling met tetraethylammonium— fluoride in acetonitrile worden af gesplitst (L.A. Carpino et al., J.C.S. Chem. Comm., 358 (1978) waarbij de gewenste vrije aminover-25 binding met de formule 4 of 5 wordt, verkregen. De op het formuleblad gegeven lijst van diolen zijn de verbindingen met de formules 12 t/m 136. Activiteit tegen P-388 Murine leukemie

Tabel A bevat resultaten van laboratoriumproeven bij CDF^-vrouwtj es muizen, waarin intraperi^toneaal een tumorenting van 10^ ascites cellen 30 van P-388 murine leukemie was·., gelnplantserd en die behandeld waren met verscheidene doses van een testverbinding- met de formules 4 of S of met mitomycine C. De verbindingen werden door intraperitoneale injectie toegediend. Groepen van zes muizen werden gebruikt voor elke doserings-hoeveelheid en ze werden behandeld met één enkele doses van de verbinding 35 op de. inenting dag. Een groep van tien met zoutoplossing behandelde con-trolemuizen werd in elke reeks experimenten opgenomen. De met mitomycine C behandelde groepen werden als een positieve controle opgenomen.

8401104 .11· i 1 TWT> —Η Π /"“Ti V'l In '^7^***· ——<***.**' -» VT *l'l'TW‘Pin > -8-

Er werd een 30 daags schema gebruikt waarbij de gemiddelde overlevings-tijd in dagen voor elke groep muizen werd bepaald en het. aantal overlevenden op het eind van de 30 dagen periode werd genoteerd. De muizen werden voor de behandeling en opnieuw op de 6e dag gewogen.

5 De gewichtsverandering werd als een maat voor de toxiciteit van het geneesmiddel- genomen. Er werden muizen gebruikt met een gewicht van 20 g per stuk. en een. gewichtsverlies tot ongeveer 2 g werd niet uitzonderlijk geachte De resultaten werden bepaald in termen van % T/C, d.w.z. de verhouding van de gemiddelde overlevingstijd van de behandelde groep 10 tot de gemiddelde overlevingstijd van met zoutoplossing behandelde controlegroep maal 100. De met zoutoplossing behandelde controledieren stierven gewoonlijk binnen 9 dagen. Het maximum effect in de volgende tabel is uitgedrukt als % T/C en de dosis die het effect geeft wordt vermeld. De waarden tussen haakjes zijn de waarden die verkregen werden 15 met mitomycine. C als positieve controle in hetzelfde experiment. Aldus kan een maat van de relatieve activiteit van de onderhavige verbindingen ten opzichte van mitomycine C worden geschat. Een minimum effect in termen van % T/C werd gesteld op 125. De in de volgende tabel vermelde minimmn: effectieve dosis is de dosis die een % T/C van ongeveer 125 20 geeft. De in elk gevaL gegeven twee waarden in de kolom "gemiddelde ge-wichtsverandering" zijn respectievelijk de gemiddelde gewichtsveran-dering per muis bij- de maximum effectieve dosis en die bij da minimum effectieve dosis.

84 0 1 1 0 4 * * -9- TABEL &

Inhibitie van P-388 murine leukemia maximum effect minimum effect gemiddelde verbinding nr % T/C doses dosis1 gewichtsver- _ ___andering ^ 5 I (BL-6787 ) >333(294) 3,2(3,2) 0,2 -1,2,-0,3 3 (BL-6796) >375(250) 6,4(3,2) 4.0,2 -2,5;-0.9 4 (BL-6832) 172(194) 6,4(3,2) 0,8T -2,8,-0,9 5 (BL-6790) >333(294) 12,3(3,2) 4.0,2 -2,4; 0 6 (BL-6789) 183(294) 12,8(3,2) 0,4 -0,6,-+0,8 10 7 (BL-6788) 200(294) 12,8(3,2) 0,2 -0,6?0,2 8 (BL-6795) 188(250) 6,4(3,2) 0,8 -0,8,-+0,1 9 (BM.y-25036) 219(319) 3,2(3,2) 4.0,2 -1,3,-0,6 1KBMÏ-25066) 194(194) 3,2(1,6) 40,2 -1,8,--0,7 12 (BMY-25067) 331(194) 12,8(1,6) <10,2 -3,3;-l,l 15 1 mg/kg lichaamsgewicht 2 gram per muis, dagen 1-6, bij maximum en minimum effectieve doses.

Tabel B omvat resultaten van antitumortests waarbij het in mui-' . zen gegroeide B16 melanoma werd gebruikt. 3DF^ muizen werden gebruikt en 20 subcutaan met het tumor implantaat ingeplant. Er werd een 60-daags schema gebruikt. Groepen van tien muizen werden voor elke geteste doseringshoeveelheid gebruikt en de gemiddelde overlevingstijd werd voor elke groep vastgesteld. Op dezelfde wijze als de testdieren ingeente controledieren, die met de injectievloeistof en zonder geneesmiddelen 25 werden behandeld, vertoonden hun gemiddelde overlevingstijd van 24,5 dagen- De overlevingstijd ter vergelijking met die van de controles (% T/C) werd gebruikt als maat voor de effectiviteit, en de maximale effectieve dosis en minimale effectieve dosis voor elke tsstverbinding werden vastgesteld. De minimale effectieve dosis werd gedefinieerd 30 als de dosis die een % T/C waarde van 125 vertoonde. Voor elk doserings-niveau werden de testdieren behandeld met de testverbinding. op de dagen _ 1,5 en 9 langs de intraveneuze route.

8401104 * % i

-10-TABEL B

Inhibitie van B16 melanoma

Verbinding nr. % T/C maximum effec- minimum effec- gemiddelde ge- tieve dosis 1 tieve dosis^ wichtsverande- _____ring ^_ 5 1 (BL-6787) 122 3,0 3,0 -2,7,--2,7 6 (BL-6789) 163 3,0 <£3,0 . -1,8,-1,8 6 (BL-6789)3 161 6,0 ^3,0 -1,4,--1,3 mg/kg lichaamsgewicht 2) gram per muis, dagen 1-15, bij maximum en minimum 10 effectieve doses behandeling op dagen 5, 9 en 13

Voor verbinding no. 3 (BL-6796) werd ook een evaluatie van zijneffectiviteit tegen het in BDF^ muizen gegroeide B16 melanoma gemaakt.

In dit experiment werden de dieren met de. tumor langs de intraperi— toneale route ingeënt en vond de behandeling met de test eveneens . 2.5 via een intraperitoneale injectie plaats. Behandeling geschiedde op de dagen 1, 5 en 9 als eerder en de gemiddelde overlevingstijden werden bepaald. De minimale effectieve dosis werd opnieuw gesteld op een dosis die een % T/C van 125 gaf. Bij een dosis van 1 mg per kg van de verbinding no. 3 overleefden zes van de tien dieren de gehele 60-dagen 20 testperiode (%.· T/C = 235) en vertoonden een gemiddelde gewichts- verandering van. +-0,1 g op dag 5... Bij een dosis van 0,5 mg/kg was de gemiddelde overlevingstijd 42,0 (% T/C = 165), hetwelk aangeeft dat de mihimale effectieve dosis minder dan 0,5 mg/kg bedroeg. In dezelrde test vertoonde mitomycine C een^T/C van 165 bij een dosis van 3 mg/kg.

25 Dit was de maximale effectieve dosis van mitomycine C in dit experiment. Het is derhalve duidelijk dat verbinding no. 3 verscheidene malen sterker werkt tegen B16 melanoma in muizen dan mitomycine C.

8401104 -11- * * 9

De effecten van intraveneus toegediende Verbindingen 1 (BL-6787) en 3(BL-6796) op de totale differentiële witte bloedcel (WBC) tellingen van muizen werden bepaald. Beide verbindingen bleken myelosuppressief ts zijn, maar kennelijk in geringere mate dan mitomycine C. De resul-5 taten zijn weergegeven in tabel C. De gegevens voor Verbinding no. 1 en mytomycine C werden in hetzelfde experiment verkregen, waardoor aldus een directe vergelijking mogelijk werd. Verbinding· no. 1 was · iets minder . . ' myelosuppressief* De gegevens van Verbinding no. 3 uit een afzonderlijk experiment geven aanwijzingen voor nog minder 10 myeolosuppressie, maar een directe vergelijking met de andere twee verbindingen was niet beschikbaar.

8401104 -12- u> - UI Η* K <

CD

·—* 2.

to λ ^ ^ tr Μ 03 03 03 Η- I Ρ F F 3 σι ι ι ι a ->j σ ο σι-1* ο -J **J -J 3

σ ΙΌ. 00 CO UQ

*-* σ -J "J _ *— —* ^ 3 Η • ** a σ co w σ ιό) ο „ ~ ·*- * οι σ οο μ >e* η* κ < 03

S

Η* π· (+

CD

CT 1-3

κ 3 η~ η* 3- η* H3rr η 3 nr t* S

X Ο 03

CD Μ Q» t1 O

CD O

CO 1-* . H

·. ~ K Η- H* O K 00 H- - - O * ·» K ·»*·Ι—1 fl“ co σ- h o o co σ o < co

1+· l+- l+* 1+ O

Η- Η- I+- Η- Η- 1+ H- H- 0 I

o o o o n h* , © O - OOO OOO Ö* 3 σ ι—^ ·* *» σ ^ -r ^ cd o σ η* co ro σ o w 3* ο cd a cd 3 3 Η

Ρα K

CD CD

K 3 I- _ 3 *3

iQ CD

n 3 H· *“

O WO ΦΤ- O WO H

·» -.- (_n .»- * ^ * - O

o ui -jui#>.coo-j^iNJ.e·- w Λ w i+ i+· i+ i+ i+ i+ i+ i+ i+ η- i+ i+ 5

O

000 OOO OOO OOO

W K >6. Ul H >1 WHO! UlOW

O K -J OT

1 ι Η- I I 1+- ,1+- o,

o o O OP

*. ^ > kQ

kO *vl C3 «si 8401104 ï * * -13- I-» !3 rilt II II _ I- 3 Cf t* £ ><: (O O rf £

3 S rt O O

mi rt ai 3 3 o m ai ^ ^ O O π-* Ω Ω >< Hi H· H-

Cf W* fl) 5 5 n> ia ai cd co

3 ^ 3 >H O

to rr O O

3 a> !- « F· n- n- _ o ω σ' 0* M * Ι Ο

(D

Qt Ω (D _ V-* K 3 (+· H- 5T (+ Ι Ο 3

M

09' o νσ «HO

n «* "« ^ ^

A. -4 O O O O

Η- Η- Η- Η- 1+ 1+-

O O O O O O

«*.*·* ^

σι H· -4. U Μ M

>c*. O Λ- tO O

, ·. ·> u O CO O UI F- Η- l+- [+· H- l-F _

O

O O O O O -> ^ w

•O O -4 to. O

co co VO Ό Η* 1+

O O

«*

UT UI

8401104 * * -14-

Gezien de in experimentele dierentumoren waargenomen antitumor werkzaamheid en het ontbreken van een overmatige myelosuppressieve activiteit vergeleken met mitomycine C, omvat de uitvinding het gebruik van de verbindingen volgens de onderhavige uitvinding voor inhibitie 5 van tumoren bij zoogdieren. Voor dit doel werden ze systematisch toegediend aan een zoogdier dat een tumor draagt in een wezenlijk niet-toxische antitumor effectieve, dosis.

De verbindingen volgens, de onderhavige uitvinding zijn primair bedoeld voor gebruik door injectie op hoofdzakelijk dezelfde wijze 10 en voor enkele van dezelfde doeleinden als mitomycine C. Iets grotere of kleinere doses kunnen afhankelijk van de bijzondere tumorgevoeligheid worden gebruikt. Ze worden gemakkelijk gedistribueerd als droge· farmaceutische preparaten die verdunningsmiddelen, buffers, stabilisatoren, oplosbaarmakende middelen en ingrediënten die bijdragen: aan de elegantie 15 van het geneesmiddel, bevatten. Deze samenstellingen worden.vervolgens vlak voor het gebruik op geïmproviseerde, wijze met een injecteerbaar vloeibaar medium in een geschikte toedieningsvorm gebracht. Geschikte injecteer-bare vloeistoffen omvatten water, isotonische zoutoplossing, enz.

In de volgende experimentele procedures worden alle temperaturen 20 uitgedrukt in graden. Celsius. Proton, magnetische resonanties spectra (½ NMR) werden opgenomen op een Varian XL 100 of. op een Jeol FX-90Q (90 MHz) spectrometer in pyridine dg. tenzij anders is. aangegeven.

Infraro spectra (IR) werden verkregen met een Bechman Model 4240 spec-trofotometer en de IR- cijfers zijn nu Vmax in cm ^. Dunnelaag chroma-25 tografie (TLC) werd uitgevoerd op 0,25 mm E. Merck voorbeklede silica-gelplaten (60P-254) met gebruik van ultraviolet licht en/of jodium-dampen als middel om het resultaat zichtbaar te maken. Flash chromato-grafie (J. Org. Chem. 14, 2923, 1978) werd uitgevoerd onder toepassing van Silica Woe lm (32-63 ^um). Oplosmiddelen werden onder verminderde druk 30 en beneden 50°C verdampt.

Procedure 1

7-C2-(benzyldithio)ethylamino3-9a-methoxymitosaan (Verbinding 1) via mitomycine A

35 Aan een oplossing van 200 mg (0,28 mM) S-benzyldithioethylamine in 2 ml methanol, die 300 mg van. triethylamine bevatte, werden 99 mg 8401104 i -15-

J C

(28,3 mM) mitomycine A in 10 ml ethanol toegevoegd bij 0-4°C.

De verkregen oplossing werd gedurende 2,5 uur bij 20°C geroerd.

De voortgaande reactie werd met TLC gevolgd onder gebruikmaking van 10:90 v/v methanol-chloroform oplosmiddelsysteem. Het reactiemengsel 5 werd geconcentreerd onder verminderde druk tot een droog vast residu, dat bij flash chromatografie (35 g silica gel), gebruikmakend van 7:93 v/v methanol-dichloromethaan (800 ml) als eluents, de titelverbin-ding leverde in een hoeveelheid van 87 mg (59%) als een zuivere amorfe vaste stof.

10 HMR (90 MHz, pyridine &$ιδ ) 2,08 (s, 3H), 2,74 (m, 3H), 3,16 (d, IE, J=6Hz), 3,24 (s, 3H), 3,40-4,20 (m, 6H), 4,04 (s, 2H), 4,56 (d, 1H, J=14Hz), 5,08 (t, 1H, J=12Hz), 5.40 (dd, 1H, J=6, 12Hz), 7,44 (bs, 5H).

IR(BKr), Vmax, cm"1: 3440, 3350, 3290, 3060, 3020, 1720, 15 1635, 1560,1325,1060.

Anal, berekend voor C24H28N4°5S2: C'55'80; H' 5'46? N' 1°>84? S 12,41 gevonden:. C,55,08? H, 5,31? N, 10,52? S, 12,10

Procedure 2 N-C2-(2-aminoethyldithio)ethyl]aceetamide (Verbinding 2) 20 a* Bunte zont methode

Een oplossing van 695 mg 2-aminoethaan*—thiozwavelzuur (4,59 mM) in 7 ml methanol die 318 mg (7,95 mM) natriumhydroxyde bevatte, werd gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur geroerd en-vervolgens tot ; Ö°C gekoeld. Aan deze oplossing werd 357 mg (3,43 mM) N-acetylcys- eens 22 teamine toegevoegd en de oplossing werd gedurende nog gedurende 10 minuten geroerd. De verkregen troebele oplossing werd met methanol tot ongeveer 60 ml verdund en deze oplossing werd vervolgens onder zorgvuldige toevoeging van 624 mg (7,95 mM) acetylchloride aangezuurd De heldere oplossing werd verdampt tot een wasachtige vaste stof, 2Q die direct voor omzetting Verbinding 3 werd gebruikt.

b. Sulfenylthiocarbonaatmethode

De methode van S.J. Brois et al. (loc.cit.) werd gebruikt.

Men behandelde methyl-2-aminoethylsulfenylthiocarbonaathydrochloride 84 0 1 1 0 4 -16- in methanoloplossing bij 0°C met acetylcysteamine. De reactie vond zonder triethylamineversneller praktisch ogenblikkelijk plaats.

Procedure 3 7-[2-(2-acetylaminoethyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan 5 (Verbinding 3)

Aan een oplossing van 100 mg (0,29 mM) mitomycine A in 4 ml methanol, die 200 mg (198 mM) triethylamine bevatte, werd bij ongeveer 0°C een oplossing toegevoegd van ongeveer 400 mg van verbinding 2 in 10 2 ml methanol. Het neerslag dat verscheen werd door filtratie verwijderd en het heldere filtraat liet men gedurende 4 uur bij kamertemperatuur staan. De oplossing werd tot een droog residu verdampt en aan flash-chromatografie onderworpen op silicagel (10 g) waarbij de gradient elutietechniek (4% tot 8% methanol in methyleenchloride) werd gebruikt.

15 Het gewenste produkt was de sneller bewegende blauwe zone component die als een amorfe vaste stof met een gewicht van 45 mg (31,5%) werd geïsoleerd. Een analytisch monster werd verkregen door de vaste stof fijn te wrijven met 5% methyleenchloride in hexaan en de vaste stof te drogen.

2ö i H NMR (100 MHz, pyridine _d^, β ): 2,06 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 2,76 (bs, 1H), 2,80-3,20 (m, 5H), 3,24 (s, 3H), 3,60 (dd, 1H, J=12 en 2Hz), 3,70-4,10(m, 5H), 4,54 (d, 1H, J=12Hz),5,04 (t, 1H, J=10Hz), 5,38 (dd, 1H, J=4 en 10Hz).

IR(KBr), Vmax, cm"1: 3420, 3350, 3290, 1720, 1635, 1656, 25 1330, 1060

Anal, berekend voor C2iS29N5®6®2! C, 49,26; H, 5,67; N, 13,68, S, 12,51 Gevonden: C; 49,33; H, 6,04; N, 13,20; S, 11,48

Procedure 4 7-[2-(octyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan 30 (Verbinding 4 ) via 7-gesubstitueerd amidino-9a-methoxymitosaan

Aan een oplossing van 60 mg (0,15 mM) 7-dimethylaminomethyleen)-amino-9a-methoxymitosaan in 1 ml methanol die 0,2 ml triethylamine bevatte, werden 139 mg (0,54 mM) 2-(octyldithio)ethylamine hydrochloride toege-22 voegd. De oplossing liet men gedurende 48 uur bij 0-4°C staan. Dunne- 8401104 't -17- laagchromatografie met 10:90 v/v methanol-methyleenchloride liet vervolgens zien, dat de groen gekleurde uitgangsverbinding was verbruikt, en er was een blauwe hoofdzone (RF=0,6) zichtbaar. De oplossing werd onder verminderde druk geconcentreerd tot een vast residu, dat aan flash 5 chromatografie werd onderworpen op silicagel (12 g) met 20:1 v/v_-:methy- leenchloride-methanol als eluerend oplosmiddel. De titelverbinding werd verkregen als een amorfe vaste stof (27 mg,34%) waarvan H NMR spectrum (100 MHz) in tabel D werd gegeven.

Procedures 5-22 10 Toepassing van verscheidene dithioamines

De in tabel D genoemde amines kan men laten reageren zoals beschreven in een van de procedures 1, 3 of 4 onder vorming van de produkten met de formule 4 en 5, die in de tabel zijn aangegeven.

Analytische en spectraal gegevens toot enige van de boven gegeven 15 stoffen en enkele in tabel D genoemde verbindingen worden in tabel E gegeven.

f f 8401104 -18- φ - Τ3 •Η

S

3 φ V Ό φ Ή φ Φ ΐΗ Ό Ο Η —Ι 3 3 4Η ,—ι cn <-( Φ Η Φ —ι 3

Ό >1 Η COM

Ί-i £1 Ο Ή Ή tw -Ρ C <0 Η Ό Ι-Ι Φ 3 ·Η >, 3 — Λ Μ 3 Η Μ Ο -4J >ι Φ >ι

•ri -ri φ Ο, 4-1 C

φ Φ Ό ,3 *-> ·— >ί Φ

+J Ό Ό -POOX'W

C ·Η Ή Η Ή -Η —ΙΟΟ (Ö W 4-1 >, Ό Λ £ £ Η 4J Η Η -Ρ Η -Ρ -Ρ -Ρ -Ρ ϋ 3 3 3 >1 Ή Ή φ -Η

3 ω W Λ .3 <Ό Ό S C

φ -Η *Η 1 «Ρ ι—1 ιΗ ! I

Μ Ό Ό 3 Φ >1 >ι -¾1 -Q* φ 0 J2 »3 C ι—I Η r-l 3 4-J *ΡιΗΗ •Η >,>,>· Η φ Φ >. ί* Ε Λ Λ Λ Β 0 0 J3 Λ

S +j4JjJni c c-u-P

φ φ φ 1 Ή “Ρ Φ Φ Ο Ο Ο cn Ε Ε 0 0 330 — ιΰ 333 •Η -ri ·Η I I I Ή Ή ε ε ε cn cn cnee 333·—1 w —"3 3

1111 I III

CN CN CN S CN CNCNCN

tn g ι » ι ! « » ' «

CN CN CN CN CN CNCNCN

«t# <** ^"n <* ***

CNCN CNCN CN CNCNCN

m CN 33 33 33 S3 S3 ® S S

Φ M UUOO U CJCJU

> , I W «w» -^-0 W- W W 'W W

3 < I I -I I I III

ο ε ρ £ h a ε β 3 < φ «Ρ Η 3 Ό 2 ' a φ X *— U φ >ι

Mr-ι CN Η CN 4-1 3

OrfJ 133 >,331 Η 3h Φ Ό Γ- 4-1 CD u H +j U CN >ι X 4-1 M B$ 0 03 *" >, 3 K 33 Ό00

Φ WWW SU -rlXJM

> cnStocnp-P-P

33443υΕ0>ιΦ·Η my a ε c aa o iii U 23 cn rr 'i * ® m

3 K

ε <3< crv in np u ^ in in in

Ρ P

0 U

fe, I

cn

•P

03

P

C Ο H <N

, m IQ Γ" CO Cft r-IHH

Ü 0 P -Ph 8401104 a) ----------------------

------*C

•Μ S -19- - © c _ N o CM Ό

m Qj ^ <D -P *- iH Φ •O <0 O <0 © © 2 O χ 2

-Η x Μ X © C C U >< X

e es jj iu t-ί ·Η M #C *W

§ § 3 x x © £ © >,H4J χ CM -CO C 3 ί*ι x CO &i O © 3 — .* I 0! ,C CO V-C 1—* •'•i io o ©

Λ ©To©© x * x ®· ' ® x Ό fm^ f—f |M) £ J—i W GJ D C *Ö 2 X X X X >t ® Λ 3 £ ~a B 'i ,C ,β X ® <8 «—i O Ό Λ "Γ* £<

4J 4J 4J <H C X >t X £ X C O

—I X. 3 © X -+l X k“t W λ © Λ Gl o -o o i x >i ©^jj:>iq^ m o

x x x cm tn C E <0 x & -1 S B

— jg .C i >1 <U X © •f·' X! Λ U χ S x x o o *<-< η >ί >i ο χ o >i *o

3 χ χ u X. 3 2 K X X X X X

>Ö O 5 O 0 0 3 . X 0. X <3 Λ o C

,Η X X X X X N © C X X X X J8 s. ^b^XXX c g © χ x X 3 42 XXUXX © ^- U-ι Ό X Ό © O'

5 X 4J I X X (8 H I X X X ! I

c CCXXXMOIOHXCX H X

.$.5x>,©®©2W>, ©X® >t >>

g ggjCOOXOGtXO SO X X

5 B©xcccnxoxc«c x x | | 1 © X X © ft X © X IX © ® CM CiCNOeS eOOECMg o o

C fl3 tö Ü >t C β Φ £ C

1 I t -W I I >1 Μ ü x I 1 f X X

CM CMCMECMCM2©'-£CMCMCN g E

Yl, lll©llllll i I

2 22CMCQmE\Oü3£NCM,-lCM CM CM

(fill Itlfltll

I 1 CM CM CM CM CM CM VO CM CM CM CM CM CM

CM /s >«. λ λ λ -—- <* —' —* ;

CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM

^M E Ξ E S3 B 2 B K 33 2 S3 X X

2 U U U U U H 2 2 2 2 2 2 2

VTTTTT TTiiTi I I

x X

>1 1 X X cm CM X X Π3 S3 frt 1 © o Cl

^M C ^ S CM

S [ o χ χ χ x cm 2 cm

o CM ©· βΓ11 5? S? i? ^ y M

wr-coicnr-t n &* 5 2 ^ H δ 2 2 tn n s-ι ci CJoxx 3 zLirJOX© "SmOE©© i ® O O x Ü & >, X XX rn ?

U . . x * 3 om 0 tt M 3 3 Ο XI

ingsxSE Ο X 0 >1 S E in 2?*U

2 WMüMV) cnOCDiMi-l X 3 VO 0 0 I 0 0 X >i © I 0 ,0 r«N ίΊ U iH iH vr w m UO<WCM <H<M u x ^a· ^ m in in ^ m w in x ro Tj«invor^x o<Oxcm rn mp in vo

l] S- X X X X X CM CM CM- CM CM CM CM

8TÖTTÖ1 -wy.ww^i * -wi’,-">11 ^ J',li -'''^ rr*f -.!?·' · J !.i'7-^-r- -; »'y- T "7T?T .-x-^ ^ ...- -- ·' - ~~ - ~·- ----1-- -20- ικ - * φ φ X Φ Ό Ό S3 Ό ·Η -W 4-ι 44 44 Η r4 4-> φ r-4 3 3 Φ 13 3 «1 01 Ë W 01 ‘«4 ·ι4 44 -Η Ό 13 Φ · ρ4 13 Ό 3 ι-4 ι-4 ·»4 01 Η >ι >\ >4 ι4 >ι Ό Ό Ο * O 3 ·<4 Η Η >4

Φ Μ Μ <C

ι—I 44 >ι 3"ι 0 3 >ι Ο & ft , <0 C >4 I I γ4 > Φ 44 CS CS >1 44 -Η I I C Φ 0 3 0 0 Φ 'Ο (4 ·Η )4 Μ 44 Ο 4-1 Ό 4-1 44 Η 33 •Η 1 -Η -Η 3-44 es es 3 sr 3 3 01 φ 33 D3 1 - 1 Γ ι-Ι ε ο— υ es es m ιη >ι ι S3 C Φ M2 ι—I »—I Η ι—I Φ 3

W Ο >4 >ι >ι >* ti S

I Ο Ο χΐ Λ XI Λ Ο I

(Μ 2 mm s 44 44 44 44 ί4φ BCS φφφφ 4401 Ο S3 0000 ·ΗΗ CSU 3 3 3 3 3 <β · Β CS *<4 ·ι4 ι4 ·<4 ι4 ^—· U E SEES ? Φ g 2U ΦΦΦΦ I Ό P- CS -4 lilt S' 01 BU CS CS CS es «01i-4 (N C v Φ

44 σι 0 H CS

0 o Φ > m i , c 13 i CS I I I I φ τ4 u h es es es es l> 40 oi es ^φ ooo B es es es es θ' H tn O B 53 E CC ΦΛ-Π —· UUUU O' 0 -4 ·

1 ·-» w- w — 3 Λ N

till Φ 1-4 H

Λ >i 3 Λ 3 Λ 0) 01 U -

•Η 44 3 O

Η 44 in οι 3 0 »4 01 >4 · Φ —I Ό 0 ia >ι >ι a 3 Β 45 es Φ φ Φ οι ,-, 44 4 4 es ·η 0 4J Φ Β Ή >4 Φ 44 ο ' ιΗ Ν 44 44 44 β ι4 Φ

Β 0 φ C C J

2 Φ 44 I Ή

Ο · Η 44 CS C

OU 't^onsf Β „Φ 0 2— Ζ 3 U *9 ίΡ β 13 Μ

CS φ +) Η Η 0) Φ -rl-O

44-4 -Η > Μ Φ es ο 3 Φ Φ 0 Λ Β S4-HHH 1Π φ Η Φ U 441333 4ί 4 — -WISS 344044 •Η ,3 1Γ )4 Μ φ ο ρ φ η ι ·. ο Ο Φ 44 44 es es -44 44 SP Φ 13 )4 >ί *· 01 ΧΟ · φ )4 Η ι-4 0 Φ Λ

3 Ο C

ε 3 4 4 sp tnminio )4 ε οι - 0 Ό 3 44 -Η φ ο φ 44 φ 3 >4 01 01 Φ φ >1 Φ > Λ Ο Ζ CÜ η- co οι ο -1

es es es rn en X IK

IK

8401104 _ f * '-=•21— /

jvj sw H1 W

0 Ul ® < <s w ^ ε

Pu H* -3 ü3 'V -

¢(- . W . W U Λ * U U 'W U* W -*» -iat —» -W — O

w - * 35 3 * * . & w · * · -* "S -w * S3*

Ui * -» © w * 5*90 w—SW-»-·*» S *“ WW — W * — O O e N — W < —

Ni — WW — — W — —» t — —' W » — W -W W —. Ί „ s e. w s e & s « t? u e o. w « esssa — fi % © a &a * · ' M» S ' ' W a & — — * * ·· WW * N W —* » w 5! W — U W · WOW — ( WW·*· W 3 ^ — ·. W S w w w S — S w » e s S w S β 'ï * .— sso—*3—* s o — n w · — ro w . o* — w · —. * w w u<ro WW— W w * · W U* W — S · W — W '5 g fci Μ I © ktf * © · ♦ W · W ® * 2 ft \ ^ % * o v «*- «a 3 «w *». tfl · «» 0t « Μ ** ^ *» © *** * 'mi * · w —. *.»3— — © - 3—·*”·“-· w— >— S 0t >- £k W S» » -· & — — ·>

V* W — β Η — S. · -* I* w Si £. -w — -B

.« — — «· «w fw w » w — Sw·* ·* S' ' — 3 *-5 β »* — S *~ .© ~ "Uf *»» — W*— S —* -W -W - HU -w 1 - » “ w ·· .25 O *- —· ' S S -* —

O. -W O» ·«— S — O ·« "* -W —» S

&- S w— -» — — S -* ***''' * —» —, » W W S -ft . -W -— © —' » w Qt W- -W ·— — S H 'W W » «5 β -ff" h. . . ©«—«> »—**-“·*"

“OH" Sr ·* W

·· w —- -w w- ' *» —· -w w -w -w -w — ï§ o e* <e — -ww— o o* *0 — — g.

es wei — w w o * . W W — “ 2

emoe βββ ew»oe JJH

_ * -* ·* t WWW w-ww -^* « -Λ·*- _ Τ' -fa ut ·»β w- β e» w W« ·** -u ei w ui -e> -w ·« *** if -ï' S .— β -β ·β « -wt o -e * ’O .’- - ·» -* -·-** ·**“3 3» WWW W -K) “W -W -W *'

WWW- U» Λ0 -W' W -W

w -w- <0 ei w ü Ü "i? β β -O -0 0 0-0-0 -· ^ ·· •n ii *9 -S ”1 *i * · * ** * · * on η η η n o « ^ *

VA W» — — ut UI

ww ww* e* ut * * * * * * — β β e* o .

we» w — w -ί M

** ··-- ' :(D - -*—- "w u « <e* -w 3 . » * * * ' Π" -W — WW- S ® ww ww. e* ** fa.

— — “ ~ M

SS s s s s a W W ww β β 3 OS WW O O p

w w β o i β M

o e> » u* β e «

, . ~ - — — <D

OW W B » « » W W W W W μ, * u, L -w 2 ir w .% WW — e 1,1 e \ 84 O 1 1 O 4 _____ h ---- -22- OU1'® λο e «w

a ï» 'C

-ft 0

ui kw ta·*»»» uwu' — k> w w es kw O

* ^5S* © ^ o · « £Q* — s · -— * ^ « » « »» s .S <e -— « β » — O» N -W ffl

O KJ M HOK*» W> «θ'— -KW O

«. w -M UI ·« — K* . -WK -U —» 'Ol —. * —« I

•S. -S » 2 Λ ·» 'S « .3 -S -W '3S -8 -* «*k- 5. 3 -ft* -« --«** -« -« —· -N » « · -O* -» ·* -» - -» -«4.. «ft- — «ft -» -ft ..UI -» · .9 -ft» -ft Lw ·· -»*· » «K » -O Ut KJ -O +* -U .® -ft- u ΐ u S KJ -ft* wn S ju -S' S u K .w ï -· , ‘S S « · «—· ’-β- -S. ·*Λ — ju- .£· · — -N -i- ,S. . ·«· ,3 ** *«"* -Kt -*· ** κ «**· — » ^ C. .O — — *» ·» .

-a»-u uu .Kk U'·» » ',Wk -H*~ uu <K* -t— -ft* -Kt· «4 «►·—· »4·· CK ΛΛ-' ft Ό" C- — « ft * S *C — ft- ♦ O Cl -ft j s Ά ' KW ft — <k * IV* © © W Λ «· λ ·· «K A W W ·«

S -w m Stf- W 2 ff W

h —* a — « u* ·η* & a w —· » a h ut « < — rr « »· » uO»»»» η — · ft « S, O ' β' u — » kj kj fcw

Ol ft ft * N — VJ1 O U O « WK a — u a1 a — a a » — «» · α s ** * - -u«* H fi.Kw» wtwa * %. % 9 ^ S £» o * * * * -w. gw * * ** iv w © w w w- » w · « © · © k» w 2

Kt . fik . K sl ft » ft — a — c ui c » «u. .a ui t-s— * N -KJ- «Ki · Cu * » ♦

' j*m vM· «W P» I» 41 -W *— -KJ· -W

W W w p* W W P- *U W

w- w w m w w m %d w

Μ » A -*«— VI ΌΙ 'Ki VI M

•vr o « e o e *o ό ό *♦· ·* *fc -**«**

w -W W -.1^ W

O '9v M W Λ K» W· -W KL

4 4»- W uK .VI UI

W -V» -Λ6 +6 Kl KJ

w ui 9 o σ» «· «t «ft «ft ^ « « «ft ft «

ui ut gi ui ci W

, · «· · « « * o ui w ot- a κι

w w w w .«JA

ar a a -a a a *«· « «*. «« ^ -« * ««· -#» -^0. ·κ» -W' -W - W >Ki * -^*-· • ** # t ·

0t* -Wv Ki 4Λ -Kft at 0¾¾ * v* vr ·» a

w ©. M

O

\ 8401104 -23- I— >** ^ UT o t ** *+ f* ~ o ; 5Γ Γ Γ i — — »« NI W ft *- VU !U — N» ?· Sé * ' 3 * » = S * 3 · - £ ' = · b a ï ·» o vu » — » ·* ' — ' ® - N ft· * *» ' — . i “ * s »» - s s «Γ — ***· J5 s a «-.ss» a — k — - > s- · H w * r*'—·*· *· * ur -»» » 5 m w--«»· »· ut » » —. . « (u. <— M. » U IU · Vk

(ft « O, u, — ^ ft Ud. S* SO W M

i-> . - — u. * — e s« v*· · ~· η- »o- u. · ·— «. - » Μ·— Sl· VB» « · ft*— ' <ft- · M- ft· — — n-* et·»*. ft- <*>&*» — ia» -—· a»- — »*, '^» uu «o ·—· «» »*> λ- **► --=¾ — ·. « 9 «* SE' .— *=·» . -* —· «► - - w X * it»—-ft»*··’»*' ·· >£* sfc "· ·**» ... t*. -«. &·►— v* -»-«* « ·~· y. 2 5Γ Jte- ^ d* W* 3 5Γ ^ fcrf^Sr ® yr = — α S S 5 » « *-S~» « Κμ —* ♦ - N* *·* "* *· JJ ** * * o » ^ &· Ct f* Vei JJJ* ^ · S A Ξ «».«%—* eiw»ww - - ‘ 2 ui o «. « < *ύ -a * ui β * UI u- a. ewc * ^*» MO» *” ^ fi·» U*» ♦ * ·* — £«&.» — fttw-fit-ftf.·

β-ft — O- S' ff ft — Ot· Uk βν — » O

«ï N- ft· *·► —- O

»j» j·» -» 2; e» 5 S; ft*" . .· ft ft — Mi w Aft »*» U*. »· *>*- V* » I I U». V*» — W«S.*ft 5 — *ft VAOft-ft VA» Vu» <ft- u* o. 9 u* » O; va- o» e.

—· — — »*-— sa vu· - Urftrf. U» <->-«* Uk Tt — k*.es- vf *»»- Λ · ** if S'

0 0 9 VA O O VA O O

«ftft ft ft ft ft. «ft — — Uk »ft ft*·" Uk —*» VJ. ' β A W- ® S* ? * ï"

Oft (—, o· Cv- w- O O Ia O-·

o ur 9 9- VA O· O O O

ft. ft. ft. -ft ft ft ft f -i» ^ TI?' ” fft fft ft β· ft' ft· ft ft. . « ' »

— VA· VA VA — VA

ie O V*- —· O ** M !* W f “ ·Α vu va o w 2f 2!1 «* “ * · » '

— — VA VA A» VA

• r · · * * va e« v* u* Ά o

VA o. M O A* O

* * 2 ^ * * ft ft ft. ft ft. ft — NB- *» f» <·** -**· «*. hf 0-0» I— V*.

. > » » · * dj. et ur. m.- Ό.

—S V— »— >k- O ^k VA~ BIT O* SB ST- ft «. — . » »· B«. —. Uk- ft» >ft» kft

B— ftk s>- ISd- i— NI

SV Ij >— O. W ftl j ^ ft» UI — O Vu V 8401104 ™ i f ' '___ -24-

Ln ΜΗ Η Ο . -SJi Ο U) Μ Μ Ο Ο β ζΓ Φ (5 «Ο·· -β u» -λ»- —~ -*φ· -er· -. vr- --^ -u*· -4*. -w».· ·—- -—- -*» 4»*· -ut- t + —£ ·» * -** *· .r. ··*·»-►. &.. © to*- ♦ · · · a» toto — vr ‘ Xf- «- O" W toto to— «* -to— © & *♦©£©©

si S’ * ϊ ίϊ is IT IT ΞΓ ~ & f- » ·—©©£.&—'ie ^ xw w >· ^ ·» -S» W N & > » ^ 4k .¾ -· · *“**' *"* * «* * t. u> »** »* «» w ui <** **· kj uj S n © w Ui © S »* p* S S 55 p· © S · © *T **«»©* ** ^ ~ w- **· w W 25 * ^ β fcj « « Μ * *» <» ·♦ · * « U* ^ _ U» ** »- • «* © »u . kj *STU*wto uj © ^ w u w « f» · * xfe. te · » w · * « — -¾¾ · ♦ * * .. w si ♦ * » ·** w s© w *» 3 *u © *» » —j OCD » u* ^ ut ·* · *J w p *p © © ui ui ->h 5 «*··«“*<© *25 —ï ·«© ©·

-«**-:* n «*.-; 3 w -«► & fe 5Γ w^-nnCTB

?©»««»&£« -*.<—·%* ·β· s as · «e * -*» «·* ·—* U* ^ ^ »· 4— 4» X> 4*. Μ» -β»· O Ut * *«< -*» *©. -w. Λ* U^ ©. ·©- 'C- *!± ~ 2T u- <fcu j© • ♦ « u* « **·> · A © -«* -¾ ^ 4Λ * · 55 fc* ;y^ <40 ·». rOV -«* <U* -*> ««-* ^to * * «·* -<£5 *·* ^ Q ^ yy *« to»*· ^ «* ^ -^4 ^- to^ *44» «» «4>to '© -*** U» «* O S —’ Ui a a, ^ a- * « ss. *· -w —* —* * a ut * ^ a -»· -^i -^ · *u * *^· a -r*“ · *^j -4» M4U -%» *ö -du- -u » a· ·· ^ w ^ -¾. u». Q JJS ^ *» ^ iui ^ xT 2 ?Γ V * * a *te c* s ·»* · «s ® *& ·«. u u a -· a © -*»* . *u ^ — *» ^ ^ w y-.

^ ® KJ ‘«IM' -4) *»* W Ui -% u ·5Ϊ. a .55. -*"► ♦ β ·*** •wNa'SnuK τζ SS· *4 a. rt ·- * ·*· * <« -^> -«»" ->«0 ·«►· *· ♦ -*w u* u u -++ ++ Ut U -+* Ui Ui S^v O' u» o -ei »*** -u. u wt- «e u

O O -Ui O O ut ur O Ul O Ό O

4» ·«. -4¾ -** W UI ·* u» W J· >·# u*

us v£ w UtC’-W OUt*UW

V» w »Ui us --U O* O' ·* w u*

OOO utOO C O O O

» % -¾ % ^ % ^ ^ ta> u w y»Ui w U>uw Ul W kJ atekO^Ni W- U Q .U P-VC UI U c wt © o © Ui © O ui ut ^¾¾ ^¾.¾ ^¾¾ _ *? mr toj ·—' -4r "ï OiQ -T- Ή O O. a« ··. ( C3 — to 1 * (p " " ' ro » ^ n υι f} Λ. ,^. 0 - Λ 20nn s o p p o P P n -. -Τ’ H hj d> 11

<*e)-|to.*. t-S —to toto H'iS

Η- ν’ u> H- * * · Qifl f f Q ^9 ^ ^jutu» Sf&vjto

— ® 2 |μ (Seva. M(D»JUI

Mgc't' φ - ~ n»i “ * OH H__ 1-0)-- ^ o, = S a - r KL< ~ r .

^'•^ .atoto < UI W

0 O’ · n ’ ·

Ovjiu 0«« w ï * w © © y.wtoi ~ ^ — _ 1 » %« π -^t «· *· *^· **\ r -x OO .ar -a s s 3 » - a -« * * ’ ®^to — — Ή-, — — to* to* -to* A — Π U U W '“f4 - % . to!-' W- - tO © tol O © >a —. to). ___ CT WI tol toto \ 84 0 1 1 0 4 · - -25- H» ' <Λ ' o u O C* O v* ö sj >€ i- 5 r 5 © ® s: s 3·» (T H» :SI S3

Mfc I* ^ . ** e* 0 Ci

2 II § .¾ S' . S gt - W

5 ® *« 1 | è r s : ^ „ O S KJ J» B »·—.«—«·— « i« o. Ba — w r· —' a « rr χ v 'C -o

Snags -K - S i“ S = 0 k w a « ·* va -— - {--ώ^-Γ^ΓΓ J7 2"” X “

>T J ï J ^ - W.3UK KJ

2-§<2.!3· 5 «· u* ü 2- ö* S r ϊ Γ 5 f ’ r (D 3 N a. — ».«.(*- 3' — - -

< ~ — UK

®- >— u>- » ~ «i» 2l 33 UK Cl· — a.

0 «► er ~ — H> KJ. — — Uk 3 —r O' — *► - **· ο, =k · =► S ‘ *r * ·» c » χ of *» “ — a σι 3 »» — *.» 2. — 'i vfl 5Γ- H Z. » Z ! 01 ^ *k * £ ' S SE ·* Cu ? * S ‘Jf m i* ut- — — 1 ?r — «· ö>

N

H* UJ. ! 3. : N- 3 C '

H

'B u u 3 ui σι o <·- i— w ev cv

Λ ' O 3 O W

Cl - - ' ' .

« — *J. W

Ute © V \£ W

>T V» CS w ^ jr' ui ui- o ui (v ^ ^ • ro ·*»*».

m UI -J KJ

— ut kj es •3. £* ° ,° ! « H*

Cl

K

3 (0 o va ••'t "*

!ÏJ

ώ> O

s o η n

H

Ω λ ? Γ S ffl * * to φ va = : /*“% - h ï - s- · · Q -ai; ;'.

% 2’ ***- *ί fi π va \ 84 0 1 1 0 4 - , ’ 1 J : va '

* C

3 4 * -26- TABEL A aanvulling

Inhibitie van P-388 murine leukemie verbinding Maximum effectieve minimum gemiddelde nr % T/C dosis 1 effectieve gewichtsveran- _ _ _ dosis 1 dering 2_ 5 28(BMY-25828) 220(270) 6,4(4,8) ^0,4 -1,1; +3,2 29 (BMY-25829) 170(270) 3,2(4,8) <0,2 +2,6; +2,7 30 (BMY-25827) 200(270) 12,8(4,8) <0,4 -3,2,-+1,0 31 (BMY-25830) 170(270) 3,2(4,8) <0,2 -1,3; +0,5 1 mg/kg lichaamsgewicht 10 2 g per muis, dagen 1-7, bij maximum en minimum effectieve dosis 3 CDFj mannetjesmuizen i « I .

t > 84 0'ΤΎ^* —

Claims

1. Verbinding met formule 3 van het formuleblad, waarin: Alk- een rechte of vertakte alkyleengroep met 2-6 koolstof- 7 stofatomen is, die desgewenst een R substituent draagt waarbij de daarmee verbonden zwavel- of stikstofatomen en 5 eventuele optionele R^ substituent, die daarmee via zuurstof, ·. - zwavel of'stikstof is verbonden,aan verschillende koolstof atomen van Alk2 zijn gebonden, R staat voor waterstof, lage alkyl, lage alkanoyl, benzoyl, of gesubstitueerde benzoyl waarin de substituent lage alkyl, 10 lage alkoxy, halogeen, amino of nitro is, gekozen is uit de groep, bestaande uit hydroxy, halogeen, amino, alkylamino of dialkylamino met 1-12 atomen, alkanoyl-amino, benzoylamino, of A-gesubstitueerd benzoylamino, naftoylamino of A-gesubstitueerd naftoylamino, cycloalkyl 15 of A-gesubstitueerd cycloalkyl met elk 3-8 leden in de ring, cycloalkenyl of A-gesubstitueerd cycloalkenyl met elk 5-8 leden in de ring, fenyl of A-gesubstitueerd fenyl, naftyl of A-gesubstitueerd naftyl, een heterocyclische groep gekozen uit de groep bestaande uit heteroaromatische 20 en heteroalicyclische groepen met 1-2 ringen, met 3-8 leden in de ring per ring, en 1-4 heteroatomen gekozen uit zuurstof, stikstof en zwavel, alkoxy of alkylthio met elk 1-6 koolstof-atomen, carboxy, alkoxycarbonyl met 1-7 koolstofatomen, fenoxy-carbonyl of A-gesubstitueerd fenoxycarbonyl, fenoxy of 25 A-gesubstitueerd fenoxy, naftoxy of A-gesubstitueerd naftoxy, alkoxycarbonylamino met 2-6 koolstofatomen, guanidino, ureido (-NHCONB^), N-alkylurey1een (-NHCONHalkyl) met 2-7 koolstof atomen, N^-halogeenalkylureyleen met 3-7 koolstofatomen, N^-halogeenalkyl-N^-nitrosoureyleen met 3-7 koolstofatomen, 30 en dialkylaminocarbonyl met 3-13 koolstofatomen, waarin de A substituent gekozen is uit de groep bestaande uit een of twee lage alkyl, lage alkanoyl, lage alkoxy, halogeen, amino, hydroxy, of nitrogroepen, en 9 R een organische groep is. 8401104 -28-

2. Verbinding, gekozen uit de groep verbindingen met de formules 4 en 5, waarin Alk. een .rechte of vertakte alkyleengroep met 1-6 koolstof- 1 7 atomen is wanneer R daarmee via -een koolstofatoom daar- 7 5 van is verbonden, en 2-6 koolstofatomen wanneer R daar mee via een Zwavel-,, zuurstof-of stikstofatoom daarvan 7 is verbonden, en R een -SS- in dat geval met verschillende koolstofatomen zijn verbonden, Alk2 een rechte of vertakte alkyleengroep met 2-6 koolstofato- 7 10 men is, die desgewenst een R substituent draagt waarbij de daarmee verbonden zwavel- en stikstofatoom en eventuele 7 optionele R substituent, die daarmee door zuurstof, zwavel of stikstof is verbonden, aan verschillende koolstofatomen van Alk2 zijn gebonden,

15 Alk^ en Alk2 een dubbele binding kunnen bevatten, R staat voor waterstof, lage alkyl, lage alkanoyl, benzoyl, of gesubstitueerde benzoyl, waarin de substituent lage alkyl, lage alkoxy, halogeen, amino of nitro is, 7 R gekozen is uit de groep bestaande uit hydroxy, halogeen, 20 amino, alkylamino of dialkylamino met 1-12 atomen, alkanoylamino, benzoylamino of A-gesubstitueerd benzoyl-amino, naftoylamino of A-gesubstitueerd naftoylamino, cycloalkyl of A-gesubstitueerd cycloalkyl met elk 3-8 leden in de ring, cycloalkenyl of A-gesubstitueerd cyclo-.25 alkenyl met elk 5-8 leden in de ring, fenyl of A-gesubsti tueerd fenyl, naftyl of A-gesubstitueerd naftyl, een heterocyclische groep gekozen uit de groep bestaande uit heteroaromatische en heteroalicyclische groepen met 1-2 ringen met 3-8 leden in de ring per ring, en 1-4 hetero-30 atomen gekozen uit zuurstof, stikstof en zwavel, alkoxy of alkylthio. met elk 1-6 koolstofatomen, carboxy, alkoxy-carbonyl met 1-7 koolstofatomen, fenoxycarbonyl of A-gesubstitueerd fenoxycarbonyl,fenoxy of A-gesubstitueerd fenoxy, naftpxy of A-gesubstitueerd naftoxy, alkoxy-35' carbonylamino met 2-6 koolstofatomen, guanidino, ureido (-NHCONH2>, N-alkylureyleen (-NHCONHalkyl) met 2-7 koolstof- 8401104 ~ 29 ~ * atomen, N^-halogeenalkylureyleen met 3-7 koolstof atomen., -halogeenalkyl-N^-nitro'sourey 1 een met 3-7 koolstof-atomen, en dialkylaminocarbonyl met 3-13 koolstofatomen, waarbij de A-substitueat gekozen is uit de groep bestaan-5 de uit een of twee lage alkyl, lage alkanoyl, lage alkoxy, halogeen, amino, hydroxy, of nitrogroepen, en R** gekozen is uit de groep bestaande uit alkyl met 1-12 koolstof atomen, alkenyl of alkynyl met elk 3-12 koolstof-atomen, cycloalkyl met 3-8 leden in de ring, A-ge-10 substitueerd cycloalkyl met 3-8 leden in de ring, cycloalkenyl met 5-8 leden in de ring, fenyl, A-gesubstitueerd fenyl, naftyl, A-gesubstitueerd naftyl, een heterocyclische groep gekozen uit de groep -bestaande uit heteroaromatische en 15 heteroalicyclische groepen met 1-2 ringen en 3-8 leden in de ring per ring, en 1-4 heteroatomen gekozen uit zuurstof, stikstof en zwavel, waarbij de A-substituent gekozen is uit de groep bestaande uit een of twee lage alkyl, lage alkanoyl, lage alkoxy, halogeen, g 20 amino, hydroxy of nitrogroepen, en R en het nabu rige zwavelatoom samen S-cysteinyl vormen, waarbij de S-cysteinylgroep veresterd, verzout of samengevoegd met een peptidebinding kan zijn.

3. Verbinding volgens conclusie 2 met formule 4, waarin Alk^ ethyleen 25 is en R waterstof is.

4. Verbinding volgens conclusie 3 waarin Alk^ ethyleen is.

5. Verbinding volgens conclusie 2, bekend met de chemische naam 7[2-(2-aminoethyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan.

6. Verbinding volgens conclusie 2 met de chemische naam 30 7-[2-(2-acetylaminoethyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan.

7. Verbinding volgens conclusie 2 met formule 5, waarin Alk- ethyleen is en R waterstof is. * 8

8. Verbinding volgens conclusie 7 waarin R alkyl is.

9. Verbinding volgens conclusie 2 met de chemische naam 35 7-[2-(octyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan.

10. Verbinding volgens conclusie 2 met de chemische naam 8401104 -30- 7-[2-(n-butyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan.

11. Verbinding volgens conclusie 2, namelijk 7- [2- (benzyldithio) ethylamino] -9a-methoxymitosaan.

12. Werkwijze voor het belemmeren van de groei van een tumor bij 5 zoogdieren, omvattende een systemische toediening aan een zoogdier dat een tumor draagt van een hoofdzakelijk niet-toxiscbe antitumor werkzame dosis van een verbinding volgens conclusie 2.

13. Werkwijze voor het bereiden van een verbinding volgens conclusie 2, waarbij men 1-4 mol van een amine met een van de formules 6 of 7 in con- 7 8 10 tact brengt met 1 mol van een mitosaan met formule 8 waarin. R,R , R , Alk1 en Alk£ zijn zoals gedefinieerd in conclusie 2 en Y een lage alkoxy met 1-6 koolstofatomen of een groep met formule 9 is, waarin R^ waterstof, lage alkyl, fenyl, lage alkylfenyl, lage alkoxy- fenyl, halogeenfenyl, aminofenyl of nitrofenyl voorstelt, vc 3 4 j·5 R en R onafhankelijk van elkaar lage alkyl voorstellen, of samen met het stikstofatoom wanneer ze verbonden zijn pyrrolidine, 2- of 3-lage alkylpyrrolidine, piperidine, 2-, 3-, of 4-lage alkylpiperidine, 2,6-dilage alkylpiperidine piperazine, 4-gesubstitueerde piperazine (waarbij de 4-20 substituent alkyl, of carbalkoxy met 1-8 koolstofatomen, fenyl, methylfenyl, methoxyfenyl, halogeenfenyl, nitrofenyl of benzyl is), azepine, 2-.,3-, 4- of 5-lage alkyl-azepine, morfoline, thiomorfoline, thiomorfoline-l-oxyde, of thiomorfoline-l,l-dioxyde vormen, waarbij elk van de boven-25 genoemde lage alkyl, lage alkanoyl en lage alkoxygroepen 1-6 koolstofatomen bevatten, - onder reactieomstandigheden in een .reactie inerte organische vloeistof bij een temperatuur van ongeveer -15 tot -50°C gedurende een voldoende lange periode om te leiden tot de vorming van een behoorlijke 30 hoeveelheid van het produkt met formule 4 of formule 5.

14. Verbinding-volgens: conclusie 2 met de chemische naam 7-C2-fenyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan.

15. Verbinding volgens conclusie 2 met de chemische naam 7-[2-(2-hydroxyethyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan.

16. Verbinding volgens conclusie 2 met de chemische naam .................................................... 8401104 9 - 31- 7~ [2- (2 -pyridyld.ith.io) ethylamino ]-9a-metiioxyini to saan.

17. Verbinding volgens conclusie 2 met' de chemische naam 7-[2- (4-methoxyf eny Idi thio) ethylamino] -9a-methoxymitosaan.

18. Verbinding volgens conclusie 2 met de chemische naam 5 7-[2-(4-nitrofenyldithio)ethylamino 3 —9a-methoxymitosaan.

19. Verbinding volgens conclusie 2 met de chemische naam 7-[2-(2-nitrofenyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan.

20. Verbinding volgens conclusie 2 met de chemische naam 7-[2-(2,4-dinitrofenyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan.

21. Verbinding volgens conclusie 2, met de chemische naam 7—[2—(3-nitro-2-pyridyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan.

22. Verbinding volgens conclusie 2 met de chemische naam 7-[2-(5-nitro-2-pyridyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosaan 8401104 7 ’ 2 s/^n—4 ff “ » ' f Visa 4 Ί^,Β -____- 3 ‘ο 4 _>»-Η Chemical Abstracts ^ 2 Mitosane Η Ο 3 9 R 9. tl PLCCNH, ° R -SS-Alk^-Nv * * -/^¾^ ''“'“Λ '7 7 \ - tl PLCQSL * 4 2 R'Alkj-SS-Alk^-Nv z z CCH^ “^Yi_i-.« „ * «a W-ff' 5 ¥ ΙΓΠ/0^ R8-SS-Alk2¥s¥\^__,-^CCÏffl2 '__,'Ν·*1 nr]? ΤΏ'^ · 1 «> -ON- 10 11 0 ,, ij 12 13 NH2Alk2SS03Na NH2Alk2SSCOCH3 HS CH 3 HSCH2CH3 « Η50ι2Ι-Η2^Η3 HSCK (CK3) 2 KS(CH2)3CH3 8401104 17 18 13 α ·20 :-:s-ch-ch,ch, ι‘3 , 2 2 hSCH2CH(CH3)2 SS-C-(3, ®3 ' è-:3 \J 21 22 23 & 25 . P hs-o - HsO 2s Ό Ό HS 26 27 78 ?S-C-i2-CH=CH2 ES-CH2-CH*C (CH3) 2 HS-ca2-OCH 29 30 HS CH3 HS (CH2)nOR1 n » 2-4, R1 - H, CCH^, CH3 31 0 * . ι · ES (CH2) nCXR n*l-3 , X=C, NH , NE1; R, R *H, CH^ 32 HS(CH-)WNH- n*2-4

2 Ti 2 o HS(CH25^ΝΗΪΓ n«2-4# R~033, CH2CH3, C^CHjCH^' JcH3 2k HS(CH2) nNR1R2 n=2-4, R1/*2»^, CH2CH3 35 36 37 Cl 3 CH, c-, I 3 i 3 Y**3 HS-Oi-Oi2KH2 hs-C-CH2NH2 HS-CS2-CE-NH2 C-: un3 38 c.. 39 hQ w* 3 Βς.« -r-vr- HS-CH,CH-NKC(CH,} , HS Ch2-C-b.a2 HS-CH2Ci2SC-:3 2 2 3 3 C":3 84 0 1 1 Ö4 E^isSoi-'.lyci-" C"T.pr.ny 4) CH- O I- 3 Λ 1 m HS-CH^C-CH-NHR1 7Γ ·B, CH3 , CCH3 Oi3 " 42 ns-ca 2ca2-m^y 43 hs-ch2ch2-n ^ 1 2 n 3 5 44 qjjNR1»2 ES-CH-GïjHR1*2 λ^Η, CH3 ; R2 » Ξ, CH3 ^ 1 1 HS-CH2-CH-CH2NHR R^H, ch3 46 HS-CH2-gH-CH2NH2 47 CH2NH2 hs-ch2-ch-ch2nh2 . 48 HS-CH,-CH-NH-2 1 2 CO-H 49 · HS-CH2-^n-CH2-NH2 rn CO-H 50 2 SS-CH,-CH-CH,-CO,H 2 , . 2 2 NH2 51

31 CH,CO,H I 2 2 HS-CH,CH,CH 2 2, NH, 52 s2 ES(CH,)-<f· , n«l-3,R2«H, CH- , ΊΓ~Ά, CH- * NHR1 J -5 ♦ 8401104 * 53 ? hs-ch«ch-nhcch3 65 ^ ^ ks-ch-ch,-n-ch, „ w 55 νή2 57 hs-ch2-<1 HS-«2-a-ca2Ha2 ΛΚΗ2 68

56. CH3 NH CH, I. h I 3 HS-CH2-C — C- NH2 HS-CT2-<q ra3 57 hh2 69 hsk^Vnh ψ rn^y 2 HS-CH.-ai-C-tfH- bö y\ 2 l 2 H£“\y 0CH3 &2 70 59 2 /V HS-CH--ai=CH-aJ,NH, “-CH2\/ra2 2 7, 60 γη · HS-CH--C-CH,NH, A3 b, HS-CH—/ ^2 V 2 72 61 ™3 ch3 · HS-CH * CT CH , CH 7NH , HS-CH.-CH-CH-OH 2, 2 2 2 .2)2 I 62 0H “3 ö<! 73 5-thio-D-giucosa .— 63 cs3 HS-.CH2ca2JiB -(_) KS-CH-.-Ca-CH7NH- Ik ,—v Ah hs-ch^-nhAJ 64 75 n · SS-CH--C-CH,OH 2 2 2,2 nh2

75 CH3

65 HS-CS2-C22-0-C-CH3 ch3 77 CK3 HS-CH2-CB-Ca2OH 840 1 1 04 “-O 78 88 Η3-<^Η(σ.3)2 SS'^G) A ^ 80 80 hs'V'^ r-N «2, HS~(_V 90' «, “-Ö «<> V, 4*- HS“( I 82 2 «-Q 92 j. 83 *““3 HS^l hs-^-hhIch, Γ '

84 QT " /-¾ he 2 H5 85 ,s V , Ό» C33 hS ^ 86 95 N—N HS CH^ KS ——ΝΚ2 λ-NjJ, S 87 HS X*N,0 Y=H *=S Y*H, Cl, OCH2CH3 4» 8401104 v v 96 ί Ί . 105 HS “'‘“j’-AJ Q7 106 /v, “-‘“iJnV’j8 , fj ,0 Y * M0CH^3 Hs HS-tCS,) 8-¾ N(CH-), 2 n ^ 3 10 H hs-ct2-(^3 10 as_(ca,) -^3^ y_ „ . gg 2 n x* o, s, ΧΞ HS-CHj-CH-CH-^} „ 0

188 HS-(C32)j-^ X - O, S, SE 2S-a2^3> >1! M CH-NH- HS-(CH-) -O-HB, X - 0/ S, NS 101. n r · 2 - 5 112 . 'hs-ch2cbNHCCSj Μ-{α2),-ξί X “ S' “ 102 113 /—x SS-(CH2)n-^) s, HH. 103 BS-ICHj)^""^ 11(1 2 101) ’ hs-ch2 .= -(=2^^ M'2 115 KS-caR1 - H, ch3 _R- Κ*.-ί —/"-ν’ C-C.'T-Pt’.T'y" 4—1 i^. ;· .w ·*'j *·' 8401104 115 . HS-CB2-^^NK1 r1* h, CH 3 i?S-CH2-Ca2-N^ \ζ x * 0/ NH, NCH3 118 HS - CH -“"V / 1 2. r1 - H / CH3 , n Λ 119 =-=fQ «' *· “> 120 bs-cs2 -^(^HR1 R“*H, CH3 121 HS R1 * H, CH3 122 KS^> b1-b' ch3 r1 123 HS-h^^IR1 R^H/ CH3 121» HS--(CH-) -/^P*1». n*i-3, a» I-3 i n \ j )25 HS-Cn2H^^2^1 r2«h, ch3, rx«e, ch3, nh2 126 iiS-ai2Y^N'R R *H / CH3 Cn^ 84 0 1 1 0 4 Dr^rryr-rs Ccrr.^ny

3·- V 127 137 *H / ca3 CH30^rC0NH(CH2)2- eT 138 M02~\~~^~C0NH (CH2) 2- 128 139 ^ ^2 ch3o2cchch2-

129 QJ nh2ochch2c6h5 130 1=2 3 c«3o2cchch2- NHCOCHCH,C-H _ HS^v^-sw^-S^NH2 2 5 5 131 161 11=3,2 r-f _/ (CH2} 2' o- 3 162 Ö> - 133 f3 143 HS__»o 134 135 " M ==. HS ^ »°^>

136 W 8401104