FI78701C

FI78701C - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara mitocanderivat.

Info

Publication number: FI78701C
Application number: FI841380A
Authority: FI
Inventors: Terrence William Doyle; Yulin Chiang; Dolatrai Mohanlal Vyas
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1983-04-11
Filing date: 1984-04-06
Publication date: 1989-09-11
Also published as: CH661273A5; FI78701B; GB2140799A; NL8401104A; AU2595184A; DE3413489C2; IT1176003B; KR890001488B1; AU577523B2; US4803212A; GB8409242D0; DK170071B1; MX9202850A; SE461735B; GR79579B; FR2543953B1; IE57348B1; DK183984A; FI841380A0; ES531338A0

Description

78701

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten mitosaa-nijohdannaisten valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää uusien mitosaanijohdan- 5 naisten valmistamiseksi, joiden kaava on

O

HO « 7 \ il CHo0CNH9 R-SS-iCH.) ,-N il 2 2 ^[M] "ϋ»Η3 (I) 10 CH3/| ^ 7 jossa R on butyyli, oktyyli, aminoetyyli, asetyyliamino-etyyli, hydroksietyyli, bentsyyli, fenyyli, joka voi olla 15 mono- tai disubstituoitu alemmalla alkoksilla tai nitrolla; tai pyridyyli, joka voi olla substituoitu nitrolla, ja R on vety tai asetyyli.

Chemical Abstracts'in systemaattinen nimi mitomy-siini C:lle on 2 0 ZJaR- (laet, 80,8acf, 8bot £7-6-amino-8-Π aminokarbonyy 1 i )<ak- si)metyyl£7-l,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8a-metoksi-5-metyyli-atsirino£2',3',3 ,J7pyrrolo/T, 2-ä7indoli-4,7-dioni. Tämän mukaisesti atsirinopyrroloindolirengas numeroidaan seuraavasti: • ^

Triviaalinimistösysteemissä, joka on saanut laajan käytön mitomysiinikirjallisuudessa, yllä olevaa rengassys-teemiä, johon kuuluu useita mitomysiinille tunnusomaisia 35 substituentteja, kutsutaan mitosaaniksi.

2 78701 0 10 0

9 CH OCNH

Mitosaani

Atsirinon typpiatomi on merkitty N^a ja rengasami- 7 non typpiatomi N . Kun kaavan I mukaiset yhdisteet halu-10 taan identifioida kantanimensä "mitosaani" avulla tai kun niiden stereokemiallinen konfiguraatio halutaan identifioida rakennekaavan avulla, kyseisten yhdisteiden ja mitomy-siini C:n stereokemiallista konfiguraatiota pidetään samana.

Mitomysiini C on antibiootti, jota valmistetaan 15 fermentoimalla ja jota tällä hetkellä käytetään Food and Drug Administration'in luvalla mahalaukun tai haiman etäpesäkkeiden adenokarsinooman hoidossa yhdistelmänä muiden tehokkaiksi todettujen kemoterapeuttisten lääkeaineiden kanssa sekä palliatiivisessa hoidossa muiden keinojen epä- T> 20 onnistuttua (Mutamycin , Bristol Laboratories, Syracuse,

New York 13201, Physicians' Desk Reference 35th Edition, 1981, s. 717 ja 718). Mitomysiini C:tä ja sen valmistusta fermentoimalla on kuvattu US-patentissa 3 660 578.

Mitomysiinien A, B ja C sekä porfiromysiinin raken-25 teet ovat ensimmäisinä esittäneet J.S. Webb et ai., Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J.Amer.Chem. Soc. 84, 3185-3187 (1962). Tässä mitomysiini A:n ja mitomysiini C:n rakennetutkimuksissa eräänä kemiallisena transformaationa oli edellisen eli 7-9oc-dimetoksimitosaanin muut-30 taminen reaktiossa ammoniakin kanssa jälkimmäiseksi eli 7-amino-9c6-metoksimitosaaniksi. Mitomysiini A:n 7-metoksiryh-män korvaaminen on osoittautunut varsin mielenkiintoiseksi reaktioksi valmistettaessa mitomysiini C:n kasvaimia inhiboivia johdannaisia. Kaikissa seuraavassa luetelluissa artikke-35 leissa ja patenteissa käsitellään mitomysiini A:n muuttamista 7-subsituoiduksi aminomysiini C-johdannaiseksi, joka omaa kas- 3 78701 vaimia inhiboivan aktiivisuuden. Tämän tutkimuksen kohteena on ollut johdannaisten valmistus, jotka ovat aktiivisempia ja erityisesti myrkyttömämpiä kuin mitomysiini C: Matsui et ai. "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 5 (1968) .

Kinoshita et ai. J. Med. Chem. 14, 103-109 (1971).

Iyenger et ai. J. Med. Chem. 24, 976-981 (1981).

Iyenger, Sami, Renters ja Bradner, Abstracts of Papers 183rd Annual Meeting of the American Chemical Society, 10 March 1982, n:o MEDI 72. Iyenger et ai. J. Med. Chem.

1983, 26, 16-20.

Iyenger et al. Abstracts of Papers, 185th Annual Meeting of the American Chemical Society, March 1983, n:o MEDI 82.

15 Seuraavat patentit käsittelevät 7-substituoitujen aminomitosaanijohdannaisten valmistamista antamalla mitomysiini A:n, mitomysiini B:n tai niiden Nla-substitu-oidun johdannaisen reagoida primaarisen tai sekundaarisen amiinin kanssa: 20 Cosulich et ai. US-patentti n:o 3,332,944, paten toitu 25.7. 1967.

Matsui et ai. US-patentti n:o 3,420,846, patentoitu 7.1. 1969.

Matsui et ai. US-patentti n:o 3,450,705, paten-25 toitu 17.6. 1969.

Matsui et ai. US-patentti n:o 3,514,452, patentoitu 26.5. 1970.

Nakano et ai. US-patentti n:o 4,231,936, patentoitu 4.11. 1980.

30 Remers, US-patentti n:o 4,268,676, patentoi tu 19.5. 1981.

Remers, belgialainen patentti n:o 893,162, 12.5. 1982.

Mitomysiini C:n johdannaisia, joiden 7-asemassa 35 on substituoitu aminosubstituentti, on myös valmistettu 4 78701 ohjatun biosynteesin avulla, so. lisäämällä fermentointi-liemiin sarja primaarisia amiineja ja suorittamalla tavanomainen mitomysiinifermentointi (C.A. Claridge et ai. Abst. of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiology 1982, 5 Abs. 028).

Fermentoinnissa muodostuu pääasiassa mitomysiini C:tä, joka on kaupallisesti saatavissa oleva muoto. Nykyisessä teknologiassa mitomysiini C:n muuttamiseksi mitomysiini A:ksi, joka käytetään yllä kuvattujen patenttien ja 10 julkaisujen puolisynteettisten, substituoitujen aminoana-logien valmistamiseksi, hydrolysoidaan mitomysiini C vastaavaksi 7-hydroksimitosaaniksi, joka on erittäin pysymä-tön yhdiste, ja sitten tämä yhdiste metyloidaan diatsome-taanilla, jonka käsittely on erittäin vaarallista. Eräs 15 pyrkimys välttää diatsometaani metylointiaineena on käyttää 7-asyylioksimitosaaneja (Kyowa Hakko Kogyo KK, japanilainen patentti n:o J5 6073-085, Farmadoc n:o 56227 D/31) mitomysiini C:n analogien synteesissä.

Nyt on havaittu, että kaavan I mukaisilla mitosaani-20 johdannaisilla on erinomainen kasvaintenvastainen vaikutus.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa siten, että 1-4 mooliosuutta amiinia, jonka kaava on R7-ss-(ch2)2nh2 (III) 25 7 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan kosketukseen 1 mooliosuuden kanssa mitosaanijohdannaista, jonka kaava on 30 y ^ ^, - CH2OCKH2 Ύ PtocH3 “3 35 c 78701 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ja Y on metoksi tai dimetyyliaminometyleeniamino, inertissä orgaanisessa liuottimessa lämpötilassa n. -15 - +50°C.

Kaavan I mukainen lähtöaine, jossa Y on dimetyyli-5 aminometyleeniamino, on kuvattu US-patenttijulkaisussa 4 487 769.

Kaavan V mukaisen mitosaanijohdannaisen ja kaavan III mukaisen aminodisulfidin reaktio tapahtuu vedettömässä, nestemäisessä orgaanisessa reaktioväliaineessa lämpö-10 tila-alueella -15 - +50°C. Suositeltava lämpötila-alue on 0-20°C. Voidaan käyttää mitä tahansa vedetöntä, nestemäistä orgaanista reaktioväliainetta edellyttäen, että se on reaktio-olosuhteissa pysyvä eikä osallistu häiritsevästi reaktioon. Kaavan V mukaisen mitosaanireaktantin moolia 15 kohti käytetään 1-4 moolia aminodisulfidia. Edullisesti käytetään kummankin reaktantin ekvimolaarisia määriä. Reaktioaika on useita tunteja, edullisesti n. 8-50 tuntia. Tuote eristetään kromatografoimalla, jolloin saattaa olla eduksi haihduttaa nestemäinen orgaaninen reaktioväliaine 20 ja kromatografoida jäännös.

Kaavan II mukaiset aminodisulfidit ovat tunnettuja yhdisteitä, jotka voidaan valmistaa eri menetelmien avul- 7 la. Ne voidaan valmistaa esim. antamalla tiolin R SH reagoida Bunten suolan kanssa, jonka kaava on 25 nh2(ch2)2SS03Na (VII) tai sulfenyylitiokarbonaatin kanssa, jonka kaava on

O

nh2(ch2)2sscoch3 (VIII) 30 (ks. Klayman et ai., Journal of Organic Chemistry 29, 3737-3738 (1964).

Havaittiin, että Bunten suolan ja tiolin reaktiossa suositeltava reaktioliuotin on metanoli. Havaittiin, että tätä liuotinta käytettäessä suositeltava reaktioläm-35 pötila-alue on 0 - -10°C. Korkeammat lämpötilat olivat 6 78701 tarpeen muilla liuottimilla. Tämän menetelmän päähaittana on symmetristen disulfidien muodostuminen sivutuotteena, mikä oletettavasti johtuu halutun sekadisulfidin dispro-portionoitumisesta.

5 Lähtöaineina käytettävät kaavan III mukaiset disul- fidit valmistetaan edullisesti antamalla sopivan tiolin reagoida kaavan VIII mukaisen sulfenyylitiokarbonaatin kanssa. Tämä on menetelmä, jonka ovat kuvanneet S.J. Brois et ai. Journal of the American Chemical Society 92, 7269-10 7270 (1970). Tämä valmistusmenetelmä toteutaan tyypilli sesti siten, että tioli lisätään kaavan VIII mukaisen ami-noalkyylisulfenyylitiokarbonaatin metanoliliuokseen ja annetaan reaktion tapahtua lämpötila-alueella 0-25°C. Käytetystä tiolista riippuen reaktio tapahtuu lähes välittö-15 mästi tai kestää useita tunteja. Reaktion edistymistä voidaan seurata määrittämällä reaktioastiassa oleva reagoimaton tioli. Jos reaktio tapahtuu hitaasti voidaan reaktio-kiihdyttimenä lisätä katalyyttinen määrä trietyyliamiinia.

Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat, kuten edellä on 20 todettu, käyttökelpoisia kasvainten vastaisina aineina.

Yhdisteiden ominaisuuksia on tutkittu seuraavissa laboratoriokokeissa .

Vaikutus P-388 hiirileukemiaan

Taulukosta I ilmenevät tulokset laboratoriokokeista 25 CDF.-naarashiirillä, joihin oli intraperitoneaalisesti ·*- g siirretty P-388 hiirileukemian 10 askites-solua käsittävä kasvainokulaatti ja joita oli käsitelty vaihtelevilla annoksilla joko kaavaa I tai II olevaa testiyhdistettä tai mitomysiini C:tä. Yhdisteet annettiin intraperitone-30 aaliruiskeena. Jokaista annostusta kohti käytettiin kuusi hiirtä käsittäviä ryhmiä ja hiiriä käsiteltiin inoku-lointipäivänä yhdellä annoksella yhdistettä. Jokaiseen koesarjaan sisällytettiin kontrolliryhmä, joka muodostui kymmenestä keittosuolalla käsitellystä hiirestä. Positii-35 visena kontrollina oli mukana mitomysiini C:llä käsitel-: tyjä ryhmiä. Käytettiin 30 vuorokauden protokollaa, jossa 78701 7 määritettiin jokaisen hiiriryhmän keskimääräinen eloonjää-misaika vuorokausina ja noteerattiin eloonjääneiden lukumäärä 30 vuorokauden jakson päätyttyä. Hiiret punnittiin ennen käsittelyä ja uudelleen kuudentena vuorokautena. Pai-5 nonmuutosta pidettiin lääkeaineen myrkyllisyyden mittana. Käytettiin hiiriä, jotka kaikki painoivat 20 g, ja paino-hukkaa n. kahteen grammaan saakka ei pidetty liiallisena. Tulokset on ilmoitettu arvona % T/C, joka tarkoittaa käsitellyn ryhmän keskimääräisen eloonjäämisajän ja keitto-10 suolalla käsitellyn kontrolliryhmän keskimääräisen eloonjäämisa jän suhdetta kerrottuna sadalla. Keittosuolalla käsitellyt kontrollieläimet kuolivat tavallisesti yhdeksän vuorokauden sisällä. Seuraavassa taulukossa "maksimiteho" on ilmaistu arvona % T/C ja esitetty sitä vastaan annos.

15 Sulkeissa olevat arvot tarkoittavat arvoja, jotka saatiin käyttämällä samassa kokeessa mitomysiini C:tä positiivisena kontrollina. Tällä tavoin saadaan mitta käsiteltävänä olevien aineiden suhteelliselle teholle mitomysiini C:hen verrattuna. % T/C:na ilmaistuna minimitehoksi arvioitiin 20 125. Seuraavassa taulukossa tarkoitetaan minimitehoannok- sella annosta, jolla saavutetaan % T/C-arvo n. 125. "Keskimääräinen painonmuutos" sarakkeessa rinnakkain esiintyvät kaksi arvoa tarkoittavat keskimääräistä painomuutosta per hiiri vastaavasti maksimitehoannoksella ja minimitehoan-25 noksella.

Taulukko I

P-388 hiirileukemian inhibitio

Maksimiteho Minimiteho- Keskim. pai- 11 2 30 Yhdiste n:o % T/C Annos annos nonmuutos 1 (BL-6787) >333(294) 3,2(3,2) 0,2 -1,2, -0,3 3 (BL-6796) >375(250) 6,4(3,2) <0,2 -2,5, -0,9 4 (BL-6832) 172(194) 6,4(3,2) 0,8 -2,8, -0,9 35 5 (BL-6790) >333(294) 12,8(3,2) <0,2 -2,4, 0 6 (BL-6789) 183(294) 12,8(3,2) 0,4 -0,6, +0,8 8 78701

Taulukko I (jatkoa)

Maksimiteho , Minimi teho- Keskim. paji.-

Yhdiste n:o % T/C Annos1 annos1 nonmuutos 7 (BL-6788) 200(294) 12,8(3,2) 0,2 -0,6,-0,2 5 8 (BL-6795) 188(250) 6,4(3,2) 0,8 -0,8,+0,1 9 (BMY-25036) 219(319) 3,2(3,2) <0,2 -1,3,-0,6 11 (BMY-25066) 194(194) 3,2(1,6) <0,2 -1,8,-0,7 10 12 (BMY-25067) 331(194) 12,8(1,6) <0,2 -3,3,-1,1 ^mg/kg kehonpainoa grammaa per hiiri, vuorokaudet 1-6, maksimi- ja minimi-tehoannoksilla 15

Taulukko Ia 3 P-388 hiirileukemian inhibitio 20 Yhdiste n:o Maksimi Tehoannos1 Minimiteho- Keskim.

% T/C annos1 painon^ _muutos1 13 (BMY-25828) 220(270) 6,4(4,8) <0,4 1,1,+3,2 25 14 (BMY-25829) 170(270) 3,2(4,8) <0,2 +2,6,+2,7 15 (BMY-27827) 200(270) 12,8(4,8) <0,4 -3,2,+1,0 16 (BMY-25830) 170(270) 3,2(4,8) <0,2 +1,3,+0,5 30 ^ mg/kg kehonpainoa grammaa per hiiri, vuorokaudet 1-7, maksimi- ja minimi-tehoannoksella 3 . .

CDF. -koirashuri 35 9 78701

Taulukossa II on esitetty tulokset kasvainten inhibitio-kokeista, joissa käytettiin hiiressä kasvatettua B16 melanoomaa. Käytetyt BDF^-hiiret inokuloitiin subkutaanis-ti kasvainsiirteellä. Käytettiin 60 vuorokauden proto-5 kollaa. Jokaista testattua annostusmäärää kohti käytet tiin kymmenen hiiren muodostamia ryhmiä ja määritettiin jokaisen ryhmän keskimääräinen eloonjäämisaika. Kontrol-lieläimet inokuloitiin samalla tavoin kuin testieläimet ja käsiteltiin ruiskevälitvsaineella ilman lääkeainetta.

10 Kontrollieläinten keskimääräinen eloonjäämisaika oli 24,5 vuorokautta. Tämän eloonjäämisajan ja kontrollien eloonjäämisajän suhdetta (% T/C) käytettiin tehokkuuden mittana. Määritettiin jokaiselle testivhdisteelle maksimi-tehoannos ja minimitehoannos. Minimitehoannos määriteltiin 15 annokseksi, jonka % T/C-arvo oli 125. Jokaisella annos- tasolla testieläimiä käsiteltiin testiyhdisteellä vuorokausina 1, 5 ja 9 ruiskuttamalla laskimoon.

Taulukko II

B16 melanooman inhibitio 20 Yhdiste n;o Maksimiteho . Minimiteho- painon- % T/C Annos1 annos1_ Keskim. muutos1 1 (BL-6787) 122 3,0 3,0 -2,7, -2,7 6 (BL-6789) 163 3,0 <3,0 -1,8, -1,8 6 (BL-6789) 161 6,0 <3,0 -1,4, -1,3 25 1 mg/kg kehonpainoa grammaa per hiiri, vuorokaudet 1-15, maksimi- ja minimi- annoksilla ^ käsittely vuorokausina 5, 9 ja 13 30 Määritettiin myös yhdisteen n:o 3 (BL-6796) teho B16 melanoomaan, jota oli kasvatettu BDF^-hiiressä. Tässä kokeessa eläimet inokuloitiin intraperitoneaalisti kasvaimella ja myös käsittely testiyhdisteellä tapahtui intraperitoneaaliruiskeella. Käsittely tapahtui kuten 35 yllä vuorokausina 1„ 5 ja 9 ja määritettiin eloonjäämis- ajat. Tälläkin kertaa minimitehoannoksena pidettiin annos- ίο 78701 ta, jonka % T/C-arvo oli 125. Kun yhdistettä n:o 3 annettiin 1 mg/kg, kuusi eläintä kymmenestä oli elossa koko 60 vuorokautisen testausjakson jälkeen (% T/C = 235) ja 5. vuorokautena niiden keskimääräinen painonmuutos 5 oli + 0,1 g. Annoksella 0,5 mg/kg keskimääräinen eloon- jäämisaika oli 42,0 (% T/C = 165). Tämä osoitti minimi-tehoannoksen olevan pienempi kuin 0,5 mg/kg. Samassa testissä mitomysiini C:n % T/C-arvo oli 165 annoksella 3 mg/kg. Tämä oli tässä kokeessa mitomysiini C:n maksi-10 mitehoannos. Siten on ilmeistä, että yhdiste n:o 3 tehoaa mo ninkertaisesti paremmin hiiren B16 melanoomaan kuin mitomysiini C.

Määritettiin laskimoon annettujen yhdisteiden 1 (BL-6787) ja 3 (BL-6796) vaikutus valkoisten verisolu-15 jen kokonaismääriin ja erotuksiin. Molemmat yhdisteet todettiin myelosuppressiivisiksi, mutta ilmeisesti vähemmässä määrin kuin mitomysiini C. Tulokset ilmenevät taulukosta III. Yhdisteen 1 ja mitomysiini C:n arvot saatiin samassa kokeessa, mikä mahdollistaa suoran ver-20 tailun. Yhdisteen 1 myelosuppressiivinen vaikutus oli hieman pienempi. Erillisessä kokeessa yhdisteelle 3 saadut arvot osoittavat, että myelosuppressio oli nytkin pienempi, mutta tätä yhdistettä ei voitu suoraan verrata kahteen muuhun yhdisteeseen.

n 78701 ® r* ι*- σ\ JO o o o £ +l + l +l + l • oo r* r—i o

I i—I i—I

00 o »j·

Cr in o in in ih in r- h in tj> r-ι m

·*·»·. fe » ·» ·» tp* W

co- · ooo ooo ooo ooo 6 g +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 gj. vomi" r» ie in Tr m r* m in o P, te 1«, te te te te O CO OIO O on θ'» :s :nJ f

5 S

e '51 H >, C g h r- m vo «no io <h io » h « g) co (u - r- •n p ooo ooo ooo ooo h in +1+1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +| +| +| tn o m OM ooh o m ® o p* on '

H H T2 H » - H » *- H *. ·> H

H)-l M H ® H OI HP* H®

H <U

>

O

M G M <U d 4J H 01

3 O -UCH -U G H H C H -P C H

E) M

H

(0 > Λ .

CT TT OM ® VO

M - - - Q \ io on oo io J» ^

^ E

Γ* VO

CO ® Cv ON

r* r** r** r*

VO VO VO VO

S i i i woe ω co o g e' w w w w *§ h h on on 12 78701 if> m • ·-» K ° ° > +1 +1 γ~! σι Γ'Ρ ο

I—I

(N (Ν g rs ο γμ r* o r» • %. #“·

U * OOO OOO

8* > +1+1 +i +i +i +i 'G rr (Ί rH 1ft orso *3 K. te.

:jB o cn ^ o ^

“je »0 S

A * 3 “ s M -r-| >1 N N n r> H \o M 7j $ ooo ooo u 5*h *rj +1+1+1 +1+1+1 :ns 3¾ :S ooo o r~ «Γ to |g tg ο,ποΝΟΝοω g £ o 1 s s Λ c > Φ <P C r-t Jj c Ή ·η 3

rH

Ä o > “ H u

„ <D :<0 :<tJ

. > -Γ-l -(-1 & — α> <1>

u) _£ *>· C Ή -P

Q C - *- Q) -H 4J

g . η -P Ή >1 S » ω 4-1 >1

•“S? -HOW

5 OHO

M -P Ή rH 3 e

u w > z S

g -I-I " 11 " : :3 .g *> c *

Sill

V t I

13 78701

Kaavan I mukaiset yhdisteet on ensisijaisesti tarkoitettu käytettäviksi ruiskeina suunnilleen samalla tavoin ja samassa tarkoituksessa kuin mitomysiini C. Määrätyn kasvaimen herkkyydestä riippuen voidaan käyttää hie-5 maan suurempia tai pienempiä annoksia. Farmaseuttiset kuivakoostumukset sisältävät laimentimia, puskureita, stabilointiaineita, liuotusaineita ja farmasiassa käytettäviä apuaineita. Tarpeen mukaan nämä koostumukset saate-tetaan nestemäisen ruiskeväliaineen avulla käyttökuntoon 10 välittömästi ennen käyttöä. Sopivia ruiskenesteitä ovat vesi, isotoninen keittosuolaliuos jne.

Seuraavissa esimerkeissä kaikki lämpötilat on ilmoitettu celsiusasteina. Protonimagneettiset resonans-sispektrit (^H-NMR) ajettiin Varian XL 100 tai Jeol FC-900 15 (90 MHz) spektrometrillä pyridiinissä d^, jollei muuta il moiteta. Infrapunaspektrit (IR) ajettiin Bechman malli 4240 spektrofotometrillä ja IR-arvot on ilmoitettu ^^g” arvoina cm”^. Ohutkerroskromatografia (TLC) suoritettiin E. Merckin 0,25 mm:n esipäällystetyillä silikageelilevyil-20 lä (60F-254) käyttäen ultraviolettivaloa ja/tai jodihöy-ryä visualisoimisaineena. Pylväskromatografiässä (flash chromatography, J. Org. Chem. 14, 2923, 1978) käytettiin silikaa Woelm (32-63 yam). Liuottimet haihdutettiin vakuu-missa alle 50°C.

25 Esimerkki 1 7-/J- (bentsyyliditio)etyyliamino7-9a-metoksi-mitosaani (yhdiste 1) mitomysiini A:n kautta Liuokseen, jossa oli 200 mg (0,28 mmol) S-bentsyy-liditioetyyliamiinia ja 300 mg trietyyliamiinia 2 mltssa 30 metanolia, lisättiin 0-4°C:ssa 99 mg (28,3 mmol) mitomysiini A:ta 10 ml:ssa metanolia. Muodostunutta liuosta sekoitettiin 2,5 tuntia 20°C:ssa. Reaktion edistymistä seurattiin TLC:llä käyttäen liotinsysteeminä metanoli-kloroformia tilavuussuhteessa 10:90. Reaktioseos konsent-35 roitiin vakuumissa kuivaksi kiintojäännökseksi, josta 14 78701 pylväskromatografioitaessa (35 g silikageeliä) eluoi-den 800 ml :11a metanoli-dikloorimetaania tilavuussuhteessa 7:93 saatiin otsikkoyhdiste (87 mg, 59 %) puhtaana, amorfisena kiintoaineena.

5 1H-NMR (90 MHz, pyridiini d5, <£) ·* 2,08 (s, 3H) , 2,74 (m, 3H), 3,16 (d, 1H, J = 6 Hz), 3,24 (s, 3H), 3,40- 4,20 (m, 6H), 4,04 (s, 2H), 4,56 (d, 1H, J = 14 Hz), 5,08 (t, 1H, J = 12 Hz), 5,40 (dd, 1H, J = 6, 12 Hz), 7,44 (bs, 5H).

10 IR (KBr) , \>maksr cm-1: 3440, 3350, 3290, 3060, 3020, 1720, 1635, 1560, 1325, 1060.

Analyysi C24H28N4°5S2

Laskettu: C 55,80 H 5,46 N 10,84 S 12,41 Saatu: C 55,08 H 5,31 N 10,52 S 12,10.

15 Esimerkki 2 N-^2-(2-aminoetyyliditio)etyvli^asetamidi (yhdiste 2) a. Bunte-suolamenetelmä

Liuosta, jossa oli 695 mg (4,59 mmol) 2-aminoetaa-20 nitiorikkihappoa ja 318 mg (7,95 mmol) natriumhydroksi- dia 7 ml:ssa metanolia, sekoitettiin 10 minuuttia huoneen lämpötilassa ja jäähdytettiin sitten 0°C :seen. Tähän liuokseen lisättiin 357 mg (3,43 mmol) N-asetyyli-kysteamiinia ja liuosta sekoitettiin vielä 10 minuuttia. 25 Muodostunut samea liuos laimennettiin n. 60 ml:ksi meta-nolilla ja sitten tämä liuos hajotettiin lisäämällä varovasti 624 mg (7,95 mmol) asetyylikloridia, kirkas liuos haihdutettiin vahamaiseksi kiintoaineeksi, joka käytettiin sellaisenaan konversiossa yhdisteeksi 3.

30 b. Sulfenyylitiokarbonaattimenetelmä : Käytettiin menetelmää S. J. Brois et ai. (ks.

. yllä). Metyyli-2-aminoetyylisulfenyylitiokarbonaatti- * hydrokloridin metanoliliuosta käsiteltiin asetyvlikys- teamiinilla 0°C:ssa. Reaktio, ilman trietyyliamiinikiih-35 dytintä, tapahtui käytännöllisesti katsoen välittömästi.

73701 15

Esimerkki 3 1-(2-(2-asetyyliaminoetyyliditio)etyyliamino7-9a-* * metoksimitosaani (yhdiste 3)

Liuokseen, jossa oli 100 mg (0,29 mmol) mitomy-5 siini A:ta ja 200 mg (198 mmol) trietyyliamiinia 4 ml:ssa metanolia, lisättiin n. 0°C:ssa liuos, jossa oli n. 400 mg yhdistettä 2 2 mlsssa metanolia. Muodostunut sakka poistettiin suodattamalla ja kirkasta suodosta seisotettiin neljä tuntia huoneen lämpötilassa. Liuos haihdutettiin 10 kuivaksi jäännökseksi ja pylväskromatografoitiin 10 g:11a silikageeliä käyttäen gradienttieluointitekniikkaa (4 %:sta 8 %:iin metanolia metyleenikloridissa). Haluttu tuote oli nopeammin liikkuvassa vyöhykkeessä oleva komponentti, joka eristettiin amorfisena kiintoaineena, paino 45 mg 15 (31,5 %). Saatiin analyyttinen näyte hiertämällä kiinto ainetta heksaanissa, joka sisälsi 5 % metyleenikloridia, ja kuivaamalla kiintoaine.

1H-NMR (100 MHz, pyridiini d$, S) '· 2,06 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H), 2,76 (bs, 1H), 2,80-3,20 (m, 5H), 3,24 (s, 3H), 20 3,60 (dd, 1H, J = 12 ja 2 Hz), 3,70-4,10 (m, 5H), 4,54 (d, 1H, J = 12 Hz), 5,04 (t, 1H, J = 10 Hz), 5,38 (dd, 1H, J = 4 ja 10 Hz).

IR (KBr), Vmaks' cm-1: 3420, 3350, 3290, 1720, 1635, 1656, 1330, 1060.

25 Analyysi C2iH29N5^6S2

Laskettu: C 49,26 H 5,67 N 13,68 S 12,51 Saatu: C 49,33 H 6,04 N 13,20 S 11,48.

Esimerkki 4 1-(2-(oktvyliditio)etyyliaminq/-9a-metoksimito-30 saani (yhdiste 4) 7-substituoidun amidino-9a- metoksimitosaanin kautta

Liuokseen, jossa oli 60 mg (0,15 mmol) 7-(dime-tyyliaminometyleeni)amino-9a-metoksimitosaania ja 0,2 ml trietyyliamiinia 1 ml:ssa metanolia, lisättiin 139 mg 35 (0,54 mmol) 2-(oktvyliditio)etyyliamiinihydrokloridia.

Liuosta seisotettiin 48 tuntia 0-4°C:ssa. Tämän jälkeen 16 73701 ohutkerroskromatografia, jossa käytettiin metanoli-mety-leenikloridia tilavuussuhteesa 10:90, osoitti, että vihreä lähtöyhdiste oli kulunut ja näkyvissä oli sininen päävyöhyke (Rf = 0,6). Liuos konsentroitiin vakuumissa 5 kiintojäännökseksi, joka pylväskromatografoitiin 12 g:11a silikageeliä eluoiden metyleenikloridi-metanolilla tilavuussuhteessa 20:1. Otsikkoyhdiste saatiin amorfisena kiintoaineena (27 mg, 34 %), jonka ^H-NMR spektri (100 MHz) ilmenee taulukosta IV.

10 Esimerkit 5-16

Esimerkeissä 1, 3 tai 4 kuvatulla tavalla saadaan taulukossa IV esitetyt yhdisteet.

Taulukossa V on esitetty esimerkkien 4-16 mukaisten yhdisteiden analyyttiset arvot ja spektriarvot.

15

Taulukko IV

(kaava I; R=H, jollei muuta ilmoiteta)

Esimerkki R^ Amiinireaktantti (yhdiste)n:o_ 5 H2N(CH2)2- 2-aminoetyylidisulfidi 20 6 fenyyli 2-aminoetyylifenyylidisul- fidi 7 n-butyyli 2-aminoetyyli-n-butyylidi- sulfidi 8 (R on -COCH_) N-^T- (2-aminoetyyliditio)- CH^CONHC^C^- etyyl_£7asetamidi 25 9 HOCH2CH2- 2-(2-aminoetyyliditio)- etanoli a 2-(2-aminoetyyliditio)- pyridiini CH30-\_/ 2-aminoetyyli-4-metoksife- 30 '—' nyylidisulfidi 12 N02~\ y— 2-aminoetyyli-4-nitrofenyy-

Nf lidisulfidi 3 yTZX 2-aminoetyyli-2-nitrofenyy- n lidisulfidi** 35 \ no2 73701 17

Taulukko IV (jatkoa) 7

Esimerkki R Amiinireaktantti (yhdiste) 5 Hio_________ 14 N02 \\ Π— 2-aminoetyyli-2,4-dinitro- fenyylidisulfidi** /—rN°2 10 15 (f y- 2-aminoetyyli-3-nitro-2- n pyridyylidisulfidi 16 pjQ / 2-aminoetyyli-5-nitro-2- 2 \\ 1/ pyridyylidisulfidi 15 ** Valmistettu antamalla 2-nitrofenyylisulfenyylikloridin tai 2,4-dinitrofenyylisulfenyylikloridin reagoida kys-teamiinihydrokloridin kanssa tetrahydrofuraanissa 20 0°C:ssa yleismenettelyn Y. Nagao et ai., Tetrahedron

Letters No. 50, s. 5021-5024 (1978) mukaan.

is 78701

® m CD ** IN fN

t Ή SO ^ fft ift

IN rs (N fN IN

^ fH ^ tft Frt * * » % « « w w w w w w ** ·* ·« »* ** ·« O QD ift sO \0 © ^ I1 CD 9) Γ* Γ* I O o ft N O © yj H H H H H ^

^22 Z 2 Z Z

rH* ^ <3 ή so r* m cm r> Q ~i co fh γί «r r* φ r* so so m in *r

ft U ·· ·« ·« K M

r! ^ © Ift CM SO fH

jfS n O ft CD © *r in so m v m <n m m mm a u υ J u u t* Tft μ cj F« fa! © © o o o © © © ^ ^ fN fft SO 0S IN «ft <Nr*fft Ovin fN f* fft X ^ *H *ft cn *ft n h ·ft a £ ft » * fc % % k » k ooo ©mo ooo

E sft CN sO od m so sn ift «O

* U ^ os m cm so o n 9i tn ft* fftfMpft fft F4 fH ft n h u >© ·· * · * * * k · » ms © © m © ooo o © m o Λ w «o m n so © fh m ^ so r> so Q et o> so © m· r* m ^ o\ so © HH Μ π IN ft ft Ift fN m fN fH f4 rH O * — 3 * Ό H o * jrt * ^ w * * 22 © s H Fft % N ^ * ft* -*> © O » % F* © z * m *— ns»^fh n«o« * '—' © ^ m . n s n c* · ···««_ *

ft* VO Z W NP % * fN S tJ

S ft n * * Ο * * 52 ie ft *q ©· Z Z * fh %«55*,Fft S« *-* F* CM * fH »ft ,-. S ^ ft ft fh fft * © *-* 22* fh © Z * g ^ *%Z**fftZft* fN * ft"l «fcJ —» * * -» ® -* *H Ό Ό FftN * · *O N It F ft m «Δ Z 'ft Ό * S *O fft Ό * so Z Z f>4 *-· *ft g © s* —· fft « * Λ fft f) Fft © ±J fH IN * SO ^ * V0 ^ *c fN * Λ · so © -- r*FFino^* r* * ι n • « *—' n · in so * z · fh o · ·) ri s * fN*-*sO Ift · © 'T fN Ift fft * fh fN — Γ* ^ m f** r* * ^ · «TftF vo · f4 *ό I * fh · ,—«. * I m * * * * I n ·> «cMfti F*. . (N N FF © S ft* £ ft* O ~ Z F. · * Z fN ZS»*fH Z'-’Sr^fNFN sn*z r·) * r* fn . ff ft o in · h ft> f^fh e£ 'Π %ft* n n * mn ·

£ H * -F, N * * S*0 * * * * V * ft* S · N

Z*H ESSS»*ft**0 β ft U * Ä Ό «S^*OZ

’-Nftft^FHr wjw^^w wrtFH^CN

S Tj © oo^H m γν fh

Fft Ή ® * » * in s * f o cd v z * fts o**m Η · B S *i · fN z · · * · CN *o . E = · *

Ssj O'FfN'Fftftfttrt fN IN ft ft 'ft 1ft (NwfH^SO

s

•H

ij ^ * δ ,g ^ m -no 19 73701 ©S QD V f» IN O m ΙΛ S© t© * rs · · .

rt «h cn rt rs pH o -H pH pH r4 * H * « * ^ W (o W (0 10 (0 H »* in r* »h «e

[A \e te n* at O

^ «* IN «S -I *H

«H 0% pH ^ ^ ^ S Z X z z z z s to r·· sr f» n pm h rs e so rt m cd fÖ vo so m m mm M ^ H *· ·* ·· so 0D O w> Ό rt in r» os os m p·*

IN IN Os 00 CD CD

mm n* v ^ ▼

Jo υ υ υ u

Hb. · ·

Hb. Hb.

Q b b b b b b b b J2 o ^ o ooo o o m 4J c\ h in ©s m in cd rt m

frt Ä pm p·· rs in so rt in so O

.pij jg rs pH pH Π H H Π pH pH

^ b b b b b b b b b * 000 000 o o m

H- m <N SO MS N SO pH IN

r rs ©s m n n* m n p rt

^ g rs |N M rs «H ft H H

Q o u Ä S. ^ %»% * * * * * * s? * o o m o o o m o 000 3 w m rs so pm rt rt so rs pm m Ή * N- OS SO o ^ CD so o v ©s m

pH m ft H H H rt PM «H pH ft N H

S

»«b*Q % PM * PM N

* —. £ *o m X v b ph m z —N Z —’ — pH <b pH r* HP · *0 · ΓΜ Z rt pm so · n b rs w «r «-< rs on w *r * * v v * b · « O *0 r S b O b b * en n m »<non«»«h **» s© p*» z «-Jm « s rt o m Zi n * -h rs to IN |N PN ^ *-b rs SO Ζ*β * pH ««-.N b · b ' * O *C * Jj 0~ » * n H Z % —b n Z ^ ph »-* w p-b £ *» *

IN jp> Sv n S «H«0 -h £S*rvS

b—' b V -H w ^ « b-r b s© —’ rS © © IN

b <0 <”"> rt n ppp«toS«V SO o · h ~ ©> z » pH •»Ζ'Όοήιπό r-> ·. » m —· z * -H b Z p £ pH ·— . · n V -

t «O f* PM ΓΜ -H PM —' Γ" V b * f·. PM —' ·> SO

-P b O » Γ> p-b V * r* Q * b *Q * * r« * o ^ · · «PP M b b PM p-b N b J> c/> g · —- z *o n ^ · *o n p- et s o —* · n z s UOl '"p z ^ *-H z — n — z m v «n z n z v *h

g, © rs ^4 o in n o * v · *h * rs v pH

I *n cd · · m pH * v p-b ^ n % pH * _C · * n *0 * r. . N b b * Pb b*g £ *H r» £ *O v · nrnSEbZb « z * z X *H »HPbb^ to w n V w p-b PH Pbt w m ΓΜ rt bp Z *O o rn P-b o « m · ph o n nm o •H te P» N φ Pb b o * —. OS Z b Z H b b b ^ Z U * * Z » Z Z β Z · · O O E Z T3 · phSn, o γμ cd rj rt pH pm—'rtiNrSfH^pH pm —’ pH —» m

•H JD «I A

; r» β ^ 20 73701 ΙΊ Ό * ΙΊ χ4 0\

Β*· <Ν Ο χ. fx. KD

IN 44 (N (Ν -4 χ4 -* -* -4 44 -4 —ι W W W (Λ to (/1 '* ·· Μ> »· Μ ·« Η » Μ Η θ\ φ m o m \β ρ** ρ« <η ο ο ίΝ ΙΝ ^ * ~4 ^ »4 η 2 2 Ζ 2 2 2

Tn O n on o m k/ ο ·τ nm \c \n tn *· ιλ m r~j ·* « *. ·» » « <8 n n no in m g ^ m nm *r n frt n ve <r n o oh p » mm m v ^ o o Jo uo H o HU. HU.

S* * * * * % % o o o emo o m o emo © m >© o n m p * n ho © m \© © m \o © (tj « n»N^4 m n *4 mmm

-m S

* U U U U U k u % λ o o m ©o m ooo *> m n n \o n m \o n ^ ^ , nnn mmm m r* n f^'g mmm m n ^4 mmm O υ - * * . * , * „ * ^ o o m o o m oom mmm ^ «r m e ^ m rH e *r oh m «* oh m oh in 3 m n n n n n n m n n : « 2 2 *9 = * S = ^ n "0 n — nm e ^ <r % n s O * * ijd n o * * aj s © * *. q • *9 *9 n n · *O 6 ^ n · Ό *D ^ n *o »— · · n *u ^ n m^'— ·-· n m e »-"no wism * O m «ooh·· « o m —** ho · · · *-» m · m «o ho · « 2 · ^ * so s · n 2·^«-» nm m m n n «* #h n n ^ * · —«. n n · % .—* n n —»» « * — n ^

®J ·-* 2 ^ W —· 2 S 2 0) «-» 2 n CO

«Q 2 m · ,fi 2 m ^ * «r jQ2n •-»n «so —»n n *o *. n * «.

^ «Sm n % T3.—1 Λ —. r* · e ~· · ρ>»β»~'Π r- . e n —

<« * *> w ^ ' « w Ϊ # 5 · t) w SE

Jj in — n. (N x- CD -4 ι-l T" IN x- VO » (N N· n - ^ σ. x> x n ie · M τ σι u h 5 m -in · '— ^ -in · x m Fy x in > χ» χ

Cj Oi — · m (N n x..m<o > xx . n » » -H

a sm OS S m —· - ,χ sr> o vc -P

'.U , o ».(N ΓΊ x IN xx n x JJ

1 "p »xxtn^H * -X m n a x xx m · Li

e H χ — n * — n · = < · — n sS

I '□ «SS*» ») S S » IN — ») E S » 44 g z "H ~n»xxvc w n Ν' 44 —« n xr x» C.

Ό "» N· x4 4Γ -4 44 N * ^ E*H o S* o· * xx x m o STJC3 xhH · e * » s E x S S > · 6 * xr Ό < gx IN «— IN 44 44 IN x- ΓΧΙ n r4 rx n x. N H x> ^ t) S3 S3 S3

•H ° -1 IN

rH n ^ 21 78701 5 fN m ΙΛ -rt O O n AD fN m m pn m rs » jp ^ s <*> 2 Ä <#> 2 2 <#> ♦% I, ·» ·« I ^ ·* ·« I λ

(rt Γ* vO iH G P" m r-1 C OC.fHC

•H ** in q m O Q φ ^ ^ Q g) m ·* * * Jj ^ Jj » » * $

S .r-r^-S _* ^ 10 -S - - 1/1 -S

S .. .. O S ”«OB , . OB

C H"k f"» *4 ii> PN PN

s ί -i “i 3 ?} ^^55 ?* eoTjt. » -e· Tj t. m m +j »

5 ' ’ Ιβ N * * Ϊ N ’ * Ϊ (N

(rt » * -ΠΗ * » ·Π r-l * * -Γ11—I

3 «-> υ i_i o uo^tj <» u ^ U

I «.eli1· ; c Ss~ s c S s"

M

« ' — tnmo p m o o O m «* -* cd m m ® -* ^· cd rn m * I PN VO ^ PN f»· m mmm 0 C P\ ^ ^ ff> h H P» Λ rt — S.

(Π ** ^ ^ * % k h * * *1 O ^ O O O O o O «Λ o o o S a m m -* m Φνιο mmm *71 ** m m m O m on m m O' m •H m -n -b — m m mm-* rä Ό ‘ ft ft «

\0 *r vo m vo o m ® >0 O m <o >*r on m m ** »* vo o ^ © vo o P» rt « m CO rt «rt Pt A #k Pk «—< § P-* * » ^ » —«. ft * N rt ' · * N ^ % k SS S P) M s Ό N rt

»rt CO * m S S M

% N M P» k k k k rt P< S* - rt *» · · r rt s rt * rt ^ » β SS O « CD »rt S -* * S S * rt , * m -* m 'rt rtB S rtP rt IN rt 1Λ # · % rt · k k k M rt 00 * k Pk Wt s rt VI k ^ (k n % k k « <Λ tt S · — S jQ iff © · · *!-·*—> S -

j5*rtr*NP -* ^ Λ w m m Ä^SSS^S

rt m “ m rt o «rt rt rt rt rt r· IN k ft g k (k BP O * f» M ft _ m « rt* ··* © ^ « IN · k Pft P· - · ft © - · m © rt w -w IN I « S N · © v ^ © ©

VO IN rt g o rt m rt s IN rt rt rt> kP

ft m b* m » ft. ·— ft γν m o •k * -ft. co -rt · · --«·—>« m ft vo S m mm LO ^ s · · m r^ S ^ s © · ί » »-* . . · —j S m ph -ft s in ft- o Sm mm© —B Prt - ft fTJ O ^ —k ft.

£ £ £ N M ·* m Ä W © ^ *f S ftrt »4 ^rt S -ft •m rft Pft "* “* · ft m v «· * co ^ S ** "* *"* " H p* -B © ΓΝ rtt -N Γ4 O' -ft -N prt ft · pft m ft rrt · · · w * · · μ * · n « « · *j e •3 m m m ^ © m m m m s *» m — m O w ·

Li λ rt ΐη Bp « rt rt V

Π ft ft ft·· ft ft ft pN ft ft pn pft fi >i —k ft s m -m -k -m * s — pm , r « ·> · «

p. S SS-n S S S *·* -n S S m m s n m S

m pn — ft ft m pn p-« -n rtB tn — S — ft ft ft*ON N S ft ft ft ft Ό ft ft —ft mJ ft P· —ft ft x 2 2 2 2 = = 2 2 2*2 * « S © © · ^ © 2 O m O o © m ·* m ^ © “* vo m © ^ pft m ^ m _ O o vo o · · © o -ft vo »rt m m o *· © m * ^ — s •••«mo© ····· ·!««-*«· rtB pn m m ^ m m M» m m m bp· m ® pn <«> m *r -« α> σν ω ϋ 0) Λ co σ» o 2 rs (N m <•"1 22 78701 ^ m 2 = <#> .. .. I —.

" “ o OS

C ω σ> m ^ ** 2 (Ö 1 ; * H”

•S fl M

g « « 'i?ö i * ^ firf*

iH

♦H

C

•H

♦H

*d

*«H

M

* ·* K.

O O tn g:

5 © «n ws CL

^ W ^ ^ * I

Q 5 © © fn *H

ä S S S 2 Ό <0 ij •n ±j —r X) . >1 > X!

n G

8 (0 S' +ι.

3 ω 3 = - S ϊ » H = n m · s (0 (0 -> » = · es

En — w » _ · -> » » m in ** «. — *

Λ * S N S

—· Ό * »v E «* <u

!S vo S * o « -P

v ^ - ® m * · r*-P

LO - · I Ot *7^ _* rrj ή — · <ft «< >1*0

υ m «r » (O

•rl in « « -Γ ·α ”w <0w S £* = »- = rH .

-H S S R o *: 2 "

1¾ rl m I « ^ . -H E^‘H

M * * O ^ ~ = P ‘H -H JH

>i ~ — cr> «n 4j i-ι o ' -P

S ^ w ri Ξ = * S +» H C S

I · S S a " . Tv* £ "

- n. m ~ vi E — y Pi Ij CU S

g a +> 2 z

a <u M

N P O N

>U N 03 (D 3 a k -h -ps a e

O rH H O

O O (0 'P

rH σ> > H m w J3 · · · · ·

•H »H fd -O O Ό <D

3

Claims

23 73701

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten mito-saanijohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on 5 7 \ o o R -SS-(CH2) 2-N^ .CHjOCNH, XX- CH3 Π I I " 'N-R

10. I-L'* (I) η jossa R on butyyli, oktyyli, aminoetyyli, asetyyliamino-etyyli, hydroksietyyli, bentsyyli, fenyyli, joka voi olla mono- tai disubstituoitu alemmalla alkoksilla tai nitrolla; tai pyridyyli, joka voi olla substituoitu nitrolla, ja R on vety tai asetyyli, tunnettu siitä, että 1-4 moo-liosuutta amiinia, jonka kaava on r7-ss-(ch2)2nh2 (III) 20 7 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan kosketukseen 1 mooliosuuden kanssa mitosaanijohdannaista, jonka kaava on

0 O

25 Y-X ,-CH2OCNH2 ji ϋ Xh3 30 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ja Y on metoksi tai dimetyyliaminometyleeniamino, inertissä orgaanisessa liuottimessa lämpötilassa n. -15 - +50°C.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n -35 n e t t u siitä, että valmistetaan 7-£2-(4-nitrofenyylidi- tio)etyyliamind7-9a-metoksimitosaani.