SE461735B - Nya mitomycin-analoger samt foerfarande foer framstaellning daerav - Google Patents

Description

\í 15 20 25 30 35 461 735 Vi har valt att i föreliggande beskrivning använda detta system och att beteckna azirinpkväveatomen som N1a och ringaminokväveatomen som N7. Beträffande den stereokemiska konfigurationen hos produkterna enligt föreliggande upp- finning är avsikten den att vid identifiering därav me- delst grundbeteckningen fimitosan" eller medelst en struk- turformel-den stereokemiska konfigurationen därav är den- samma som hos mitomycin C... 1 Mitomycin C är ett antibioticum, som framställes genom fermentering och för närvarande saluföres med tillstånd av Food and Drug Administration för terapi av disseminerat adenokarcinom i magen eller pankreas i provade kombina- tioner med andra godkända kemoterapeutiska medel och som palliativ behandling när andra modaliteter har misslyc- kats (Mutamycin Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13201, Physicians' Desk Reference 35th Edition, 1981, sid. 717 och 718). Mitomycin C och framställningen därav genom fermentering föremål för amerikanska patentet 3 660 578 av den 2 maj 1972.

Strukturerna av mitomycin A,B och C och av porfiromycin publicerades först av J. S. Webb et al. vid Lederle La- boratories Division American Cyanamid Company, J. Amer.

Chem. Soc. §¿, 3185-3187 (1962). En av de kemiska om- vandlingar som användes vid denna strukturundersökning för att relatera mitomycin A och mitomycin C till varan- dra innebar omvandling av den förra, 7-9-dimetoximitosan, genom omsättning med ammoniak till den sistnämnda, 7- amino-Qurmitosan. Förträngningen av 7-metoxigruppen i mi- tomycin A har visat sig vara en reaktion av avsevärt.in- tresse vid framställningen av aktiva antitumörderivat av mitomycin C. Följande artiklar och patentskrifter hän- för sig till omvandlingen av mitomycin A till ett 7-sub- stituerat aminomitomycin C-derivat med antitumöraktivi- tet. Ändamålet med denna forskning har varit att framstäl- 10 15 20 25 30 35 la derivat, som är aktivare och i synnerhet mindre toxiska än mitomycin C: Matsui et al. “The Journal of Antibiotics", XXI, 189- 198 (1968).

Kinoshita et al. J. Med. Chem. li, 103-109 (1971).

W Iyengar et al. J. Med, Chem._g5,_975-981 (1981)._ Iyengar, Sami, Remers och Bradner, Abstracts of Pa- pers 183rd Annual Meeting of the American Chemical Society, mars 1982, No. MEDI 72.

Iyengar, et al. J. Med Chem. 1283, 26, 16-20.

Iyengar, et al. Abstracts-of Papers, 185th Annual Meeting of the American Chemical Society, mars 1983, No. MEDI 82.

Följande patentskrifter avser framställningen av 7-sub- stituerade aminomitosanderivat genom omsättning.av mito- mycin A, mitomycin B eller ett N1a-substituerat derivat därav med en primär eller sekundär amin: Amerikanska patentskriften 3 332 944 av den 25 juli 1967; amerikanska patentskriften 3 420 846 av den 7 januari 1969; amerikanska patentskriften 3 450 705 av den 17 juni 1969; 3 514 452 av den 26 maj 1970; 4 231 936 av den 4 november 1980; 4 268 676 av den 19 maj 1981; 893 163 av den 12 maj 1982. amerikanska patentskriften amerikanska patentskriften amerikanksa patentskriften belgiska patentskriften Derivat av mitomycin C med en substituerad aminosubsti- tuent i 7-ställningen har även framställts genom riktad biosyntes, det vill säëa genom att komplettera jäsnings- mediumet med en serie primära aminer och utföra konven- tionell mitomycinfermentering (C. A. Claridge et al. Abst. of the Annual Metting of Amer. Soc. fior Microbiology 1982.

Abs. 028). ' 10 15 .461 735 Mitomycin C är den mitomycinhuvudprodukt som bildas vid fermentering och är den kommersiellt tillgängliga formen. Nuvarande teknologi för omvandling av mitomycin C till mitomycin A för användning vid framställning av halvsyntetiska substituerade aminoanaloger av mitomycin C enligt ovan angivna patentskrifter och publikationer innefattar hydrolys av mitomycinzC till motsvarande 7- hydroximitosan, en synnerligen instabil förening, och därefter metylering av denna_med diazometan som är en mycket vådlig substans att handhava. Ett försök att undvika användningen av diazometan för metylering inne- fattar användningen av 7-acyloximitosaner (Kyowa Hakko Kogyo KK Jananese Patent No. JS 6073-085, Farmdoc No. 56227 D/31) för syntes av analoger av mitomycin C.

Föreliggande uppfinning avser en grupp analoga: av mito- mycin C med en organisk ditiosubstituent på aminokväve- atomen i 7-ställningen. Dessa föreningar kan represente~ ras genom formlerna I och II H o 7 \ o " R Alkl-ss-Alkz- /cflfnmï I ocsas l 'LN-R och .o .

II 461 735 vari Alk är en rak- eller grenkedjig alkylengrupp med 1-6 kolatomer; Alkz är en rak- eller grenkedjig alkylengrupp med 2-6 kolatomer; R är väte eller lägre alkanoyl; är fenyl, alkanoylamino, amino eller hydroxi; och R är alkyl med 1-12 kolatomer, fenyl, nitro- substi- tuerad eller lägre alkoxisubstituerad fenyl, pyridyl eller nitro- substituerad pyridyl.

Substanserna enligt föreliggande uppfinning är inhibi- torer av försökstumörer hos djur. De framställes genom omsättning av en aminodisulfid med formeln III eller IV 7 8 R Alk1~SS-Alk2NH2 III R -SS-Alk2NH2 IV med ett mitosanderivat med formeln V vari R, R7, R8, Alk1 och Alkz har ovan angivna betydelser och Y är en lägre alkoxigrupp med 1-6 kolatomer eller en amidinogrupp med formeln VI 461 755 *f - ~a3n4N-c=N- VI vari 5 R är väte (föredrages), lägre alkyl, fenyl, lägre alkyl- fenyl, lägre alkoxifenyl, halofenyl, aminofenyl eller nitrofenyl och R3 och R4 oberoende av varandra är lägre alkyl eller tillsammans med den kväveatom till vilken de är bundna är pyrrolidin, 2- eller 3-(lägre alkyl)- pyrrolidin-, piperidin, 2-, 3- eller 4-(lägre alkyl)- piperidin, 2,6-di(lägre alkyl) piperidin, piperazin, 4- substiturerad piperazin (vari 4-substituenten är alkyl eller karbalkoxi vardera med 1-8 kolatomer, fenyl, metyl- fenyl, metoxifenyl, halofenyl, nitrofenyl eller bensyl), azepin, 2-, 3-, 4- eller 5-(lägre alkyl)-azepin, morfolin, tiomorfolin, tiomorfolin-1-oxid eller tiomorfolin-1,1- dioxid, varvid var och en av ovannämnda lägre alkyl-, lägre alkanoyl- och lägre alkoxigrupper innenáller 1-6 kolatomer.

Sistnämnda är amidinoderivat av mitomycin C.

Omsättningen mellan mitosanderivatet med formeln V och aminodi- sulfiden med formeln III eller formeln IV äger rum i ett vatten- fritt, flytande organiskt reaktionsmedium vid en temperatur inom intervallet från cirka -15°C till +50°C. En temperatur inom intervallet från 0°C till 20°C föredrages. Vilket som helst vattenfritt, flytande organiskt reaktionsmedium kan an- vändas under förutsättning att det är stabilt_under reaktions- betingelserna och icke deltar i reaktionen på ett skadligt sätt. 1-4 molära portioner av aminodisulfiden med formlerna III eller IV användes tillsammans med mitosanreaktanten med formeln V: Företradesvis användes ekvimolära mängder av de två reaktanterna.

En reaktionsperiod av flera timmar och företrädesvis av från cirka 8 till 50 timmar utnyttjas; Produkten utvinnes kromato- grafiskt, vilket lämpligen kan innefatta avdrivning av det vätskeformiga organiska reaktionsmediumet och kromatografi av återstoden. n fb 10 15 20 25 30 35 461 735 Aminodisulfider med formeln III och formeln IV är kända föreningar och kan framställas medelst olika metoder.

Så exempelvis kan de framställas genom omsättning av den lämpliga tiolen R7Alk1sa eller Rasa med ett enats-salt med formeln NH2Al1<2sso3Na _ v11 eller med ett sulfenyltiokarbonat med formeln 0 U NH2Alk2SSCOCH3 VIII Klayman et al. Journal of Organic Chemistry 32, 3737- 3738 (1964) har framställt följande föreningar medelst Bunte-saltmetoden. 2-aminoetyl-n-butyldisulfid 2-aminoetyl2-n-hexyldisulfid 2-aminoetyl-n-oktyldisulfid 2-aminoetyl-n-decyldisulfid z-aminoetyl -fenylaisulfia 2-aminoetylfbensyldisulfid_ Metanol har visat sig vara det föredragna reaktionslösnings- medlet för omsättning av Bunte-saltet med tiolen. Reaktions- temperaturer av från 0° till -10°C har visat sig vara före- dragna under användning av detta lösningsmedel. Högre tem- peraturer är nödvändiga med andra lösningsmedel. Den hu- vudsakliga nackdelen med denna metod är bildningen av sym- metriska disulfider som biprodukt, förmodligen som en följd av disproportionering av den önskade blanddisulfiden.

Blanddisulfidutgångsmaterialen med formeln III och formeln IV framställes företrädesvis genom omsättning av den lämp- liga tiolen med ett sulfenyltiokarbonat med formeln VIII.

Detta är den metod som anges av S. J. Brois et al. Journal of the American Chemical Society 92, 7269-7270 (1970). 461 10 15 20 (_. 25 c. 30 735 Typiskt innebär denna framställningsmetod att man till- sätter tiolen till en metanollösning av aminoalkylsul- fenyltiokarbonatet med formeln VIII och låter reaktio- nen fortlöpa vid en temperatur_inom intervallet från 0° till 25°C. Reaktionstiderna varierar från 1 huvudsak omedelbar omsättning till flera timmar beroende på den speciella tiol ifråga som användes, Reaktionsförloppet kan följas genom uppmätning av närvaron av oreagerad tiol i reaktionskärlet. Om reaktionen går trögt kan en kata- lytisk mängd trietylamin tillsättes som reaktionsaccele- rator.

Nedan följer en uppräkning av representativa tioler med formlerna R7Alk1SH eller R8SH, vilka kan omvandlas via omsättning med Bunte-saltet VII eller sulfenyltiokarbo- natet VIII för erhållande av mellanprodukterna med form- lerna III och IV, vilka i sin tur omvandlas till produk- terna enligt föreliggande uppfinning såsom beskrivits ovan.

När det gäller de aminohaltiga tiolerna i uppräkningen nedan är det i allmänhet önskvärt att först omvandla den till en en sxyaaaa fann, företrädesvis :in /ä-(trimetyisilyi) etoxikarbonylaminoderivatet, innan de omvandlas till mellanprodukterna med formlerna III eller IV och omsätt- ning med mitosanmellanprodukten med formeln V.fl5-(tri- metylsilyl)etoxikarbonylaminogruppen kan därefter avspjäl- kas genom behandling med tetraetylammoniumfluorid i ace- ~tonitril.(L.A. Carpino et al., J.C.S. Chem. Comm., 358 (1978)) för erhållande av den önskade fria aminoföreningen med formeln I eller II.

L 10 461 .HSC33 _ ascgzcns' HSQÉ2CH2CH3 Hsca (m3), 'æss-cn-cía ca '0 2' 3 QS O o Hscæ-:zczucnfií- , a . asf- c- as s- * 735 (_ 10 15 461 vssí 10 gszcxgnoal . n'- 2-4' -Hs(cH2,aN32 _ ßszcagarrfzal n-2-4 a-2-4, : F: as -cs-cszuz-:z F! KS-?°Cï2Nï2 nl-a, . ccs, Rv 3:e 11 C53 HS-Cáz-Gí-C-lzüä “za ' I fiå-fišzCäCizCäzNäz I “a w ESQ-OCSB 461 735 10 15 20 25 30 35 461 735 12 Aktivitet mot P-388 leukumi hos möss Tabell I innehåller resultaten av laboratorieförsök med CDF1-möss av honkön, hos vilka man intraperitonealt har inplanterat ett tumörinokulat bestående av 106 askites- celler av P-388 leukumi hos möss behandlade med olika doser av endera av en testförening med formeln I eller II eller med mitomycin C. Föreningarna administrerades genom intraperitoneal injektion. Grupper pm 6 möss an- vändes för varje doseringsmängd och de behandlades med en enkeldos av föreningen på inhympningsdagen. En grupp om 10 koksaltbehandlade kontrollmöss ingick i varje för- söksserie. De grupper som var behandlade med mitomycin C ingick som positiv kontroll. Ett 30 dagars schema ut- nyttjades, varvid medelöverlevnadstiden i dagar bestäm- des för varje grupp av möss och antalet överlevande vid slutet av 30-dagars perioden observerades. Mössen vägdes före behandling och ånyo på dag 6. Viktändringen togs som ett mått på läkemedelstoxicitet. Möss med en vikt om 20 g vardera utnyttjades och en viktförlust av upp till cirka 2 g ansågs icke överdriven. Resultaten är uttryckta som 'procent B/K, som är förhållandet mellan medelöverlevnads- tiden för den behandlade gruppen och medelöverlevnadsti- den för den koksaltbehandlade kontrollgruppen gånger 100.

De koksaltbehandlade kontrolldjuren dog vanligen inom 9 dagar. "Maximal effekt" i följande tabell uttryckes som % B/K och den dos som ger denna effekt anges. värdena inom parentes är de värden som erhölls med mitomycin C som positiv kontroll vid samma försök. Således kan man fastställa ett mått på den relativa aktiviteten av före- liggande substanser_i förhållande till-mitomycin_C. En miniumumeffekt uttryckt som procent B/K ansågs vara 125.

Den minsta effektiva dosen, som anges i tabellen nedan, är den dos som ger ett värde procent B/K av cirka 125.

De tvâ värden som ges i varje särskilt fall i spalten med beteckningen "genomsnittlig viktändring“ är den ge- nomsnittliga viktändringen per mus vid den maximala effek- 461 735 13 tiva dosen respektive vid den minsta effektiva dosen.

Tabell I Inhibition av P-388 leukumi hos möss Förening nr. Maximal effekt Minsta Genomsnittlig % B/K dos effektiva viktändrin§4 .. --dos., 1 (BL-wav >333(2s4) 3.2(;.2) 0.2 -1.2.-_o.“3 3 (BL~6796) 7375(250) 6.4(3.2) <0.2 -2.5,-0.9 4 (BL-een) 172u94) 6.402,1) 0.8 -2.s,-o.9 5 (BL-6790) >333(294) l2.8(3.2) (0.2 -2.4, 0": _ Ä . l 6 (BL-6789) lB3(294) l2.8(3.2) 0.4 ~ -0.6,+0.81 \ 1 7 (BL-6788) Å200(294) l2.8(3.2) 0.2 _ -0.6,-0.2 s (sL-sves) 1ss e,.4(a.2> 0.8 -o.s,+øI1 ' \ 9 (BMY-25036) 2l9(3l9) 3.2(3.2) <0.2 -1.3,-0.6š 11 (BMY-25066) l94(l94) 3.2(l.6) <0.2 -l.8wçO.7 12 (ßMy-25057) 33l(194)_ ' 12.8(1.6) <0.2 - -B-Bwl-l 1mg/kg kroppsvikt zgram per mus dagarna 1-6 vid maximala och minsta effektiva doserna 10 15 20 25 30 35 461 735 14 Tabell II innehåller resultaten av antitumörförsök un- der användning av B16 melanom, som har fått växa hos möss. BDF1-möss användes och tumörinplantatet inympades subkutant. Ett 60-dagars schema användes. Grupper om 10 möss användes för varje provad doseringsmängd och den genomsnittliga överlevnadstiden för varje grupp bestäm- - des. Kontrolldjur, som inympades på samma sätt som för- söksdjuren och behandlades med injektionsvehíkeln och icke något läkemedel, uppvisade en genomsnittlig över- levnadstid av 24,5 dagar. överlevnadstiden i förhållande till den hos kontrollgruppen (%:B/K).användes som ett mått på effektiviteten och den maximala effektiva dosen och den minsta effektiva dosen för varje testförening bestämdes. Den minsta effektiva dosen var den dos som gav ett värde % B/K av 125. För varje doseringsnivå be- handlades försöksdjuren med testföreningen intravenöst på dagarna 1,5 och 9. ~ Tabell II Inhibition av B16-melanom Maximal effekt Genomsnittl'g Förening nr. % B/K dos Effektiv dos1 viktändring l (BL-6787) 122 3.0 3.0 -2.7,~2.7 6 (BL-6789) 163 3.0 43.0 -1.8.-1.8 He (BL-s7s9)3 161 6.0 43.0 -1.4.-I-3 1 mg/kg kroppsvikt gram per mus.dagarna 1-15, vid maximala och minsta effektiva doserna behandling på dagarna 5,9 och 13 Förening nr. 3 (BL-6796) utvärderades även med avseende på dess effektivitet mot B16-melanom, som hade'fått växa hos BDF1-möss. Vid detta försök inympades tumören intra- peritonealt och behandlingen med testföreningen skedde 10 15 20 '25 461 755 15 även genom intraperitoneal injektion. Behandlingen ut- fördes på dagarna 1,5 och 9, såsom.ovan, och den genom- snittliga överlevnadstiden bestämdes. Även här har den minsta effektiva dosen den dos som gav ett värde pro- cent B/K av 125. Vid en dos av 1 mg per kilo av före- ningen nr. 3 överlevde 6 djur av 10 hela den 60 dagar långa försöksperioden (%.B/K = 235) och uppvisade en genomsnittlig viktänaring av +o,1 "g på dag 5. vid en dos av 0,5 mg/kg var den genomsnittliga överlevnadstiden 42,0 (% B/K 165), vilket visade att den minsta effekti- va dosen är mindre än 0,5 mg/kg. Vid samma försök upp- visade -mitomycin C ett värde % B/K 165 vid en dos av 3 mg/kg. Detta var den maximala effiädjva dosen av mito- mycin C vid detta försök. Det är således uppenbart att föreningen nr. 3 är flera gånger mera potent mot B16- melanom hos möss än mitomycin C.

Effekterna av föreningarna 1 (BL-6787) och 3 (BL-6796) vid administrering intravenöst på antalet totala och differentierade vita blodkroppar (WBC) bestämdes. Båda föreningarna visade.sig vara myelosuppressiva men uppen- harligen i mindre utsträckning är mitomycin C. Resulta- ten återges i tabell III nedan. Data för förening 1 och mitomycin C erhölls vid samma försök och medger således en direkt jämförelse. Förening 1 var något mindre myelo- suppressiv. Data för förening 3 från ett separat försök antyder ännu.mindre myelosuppression men en direkt jäm- förelse med de övriga två föreningarna var icke möjlig.

Tabell III Räkning av vita blodkroppar ¿¥61 73E5 Da (xfo31 Celler pef ml.

Förbehandlin D08 Förening . iv) k (m Dr 8 + 0.8 +I+|+l 0.2 i 0.04 3.7 + 0.5 F! O in OlñN t* 6-4 5 1 (BL-s7a7)~ v-l w 3.2j 16 m A m' Q o q +|+|+l ßWN 'o w Ûßlw 6 5 6 +l+|+| ÖÖIUI- f-l o u Fi G1 1 (BL-6787) FH!!! CIOO +x+|+| ¶U1ß Om 8.8 10 3 (an-6796) ï-ll Trim b _ o A O O O +|+l+l in ln O CV v f4~m o <3 o +l+|+I O f* 51 H . . r-l (D 6.6 3 (BL-6796) 1s 461 755 17 Hwu%U0uE>fi umflflmfiuuflmc ummmøuxmoflâ muH> umfimucm mfimuov >.o H Q q @.° H q.@ H ~°.° H ~.° H.= H ß.° = >.@ H =.q _ ß.° H °.m » ~.° H m.~ m.° H °.w fl ~o»= H H.= ~.° H °.H . = Nwo H m ~.o H Q.°~ u . Ü. må mmfiwumåwnuww _m°Px. .Ha Hmm Hwfifimu. ummmouflwofin muH> >m mcflcxwm HHH Hflwnma _.w»~ow. u u -vcâ-l II N.n v.o ^>H ..mx\.ms. .mofl U cwuæëouwë U :HuæEo»HE Hfi .WGfløHU-.nßß od 10 15 20 25 30 35 461 735 18 _Till följd avrmflrantitumöraktivitet som har konstate- rats vid försökstumörer på djur och frånvaron av otill- börlig myelosuppressiv aktivitet jämfört med mitomycin C avser uppfinningen även användningen av substanserna enligt föreliggande uppfinning för inhibition av tumö- rer hos däggdjur. För detta ändamål administreras de systematiskt till ett däggdjur med en tumör i en väsent- ligen ogiftig effektiv antitumördds. W Föreningarna enligt föreliggande uppfinning är primärt avsedda att användas genom injektion på samma sätt och för samma ändamål som mitomycin C. Något större eller mindre doser kan användas beroende på den speciella tu- mörkänsligheten. De kan lätt tillhandahållas som torra farmaceutiska kompositioner innehållande utspädnings- medel, buffertämnen, stabilisatorer, lösningsbefrämjande medel och beståndsdelar, som bidrar till den farmaceuti- ska förfiningen. Dessa kompositioner konstitueras där- efter med ett injicierbart vätskeformigt medium strax före användning. Lämpliga ínjicierbara vätskor innefattar vatten, isotonisk koksaltlösning, etc.

Beskrivning av specifika utföringsformer Samtliga temperaturer i utföringsexemplen nedan avser Co. Protonmagnetresonansspektra (1H NHR) registrerades på en Varian XL 100 eller på en Jeol FX-90Q (90 MHz) spektrometer i pyridin-ds, så vida ej annat anges. Infra- röd (IR)-spektra erhölls med en spektrofotometer Beckman Model 4240 och IR-värdena anges son'”max i cm-1. Tunn- skiktkromatografi (TLC) utfördes på 0,25 mm E~.Merck i förväg överdragna silikagelplattor (SOF-254) under använd- ning av ultraviolett ljus och/eller jodânga som visuali- seringsmedel. Flash-kromatografi (J. Qrg. ghgm. 14, 2923, 1978) utfördes under användning av Woelm kiseldioxid (32- 63 um). Lösningsmedlen avdrevs under reducerat tryck och vid en temperatur under 5000. 10 15 20 25 30 35 461 735 19 Exemgel 1 7-[2-(bensylditio)etylaminq]-9a-metoximitosan (förening 1) via mitomycin A Till en lösning av 200 mg (0,28 mmol) S-bensylditioetyl- amin i 2 ml metanol innehâl1ande_ßO0 mg trietylamin sat- tes 99 mg 120,3 mmol) mitoššmcin A "i 10-1111 metanol vid OO-4°C. Den erhållna lösningen omrördes 2,5 timmar vid ZOOC. Reaktionsförloppet övervakades medelst TLC under användning av ett lösningsmedelssystem bestående av me- tanol-kloroform i volymförhâllandet 10:90. Reaktions- blandningen koncentrerades under reducerat tryck till en torr fast återstod; som vid Flash-kromatografi (35 g silikagel) under användning av 800 ml metanol-diklorme- tan i volymförhållandet 7:93 som elueringsmedel gav 87 mg (59%) av den i rubrzken angivna föreningen som ett rent amorft fast material. 111 mm (90 MHz, pyriain-CISJSM 2,o8(s, 311), 2314011, 311), 3,16(d, 1H, J=6HZ), 3,24(s, 3H), 3,40-4,20(m, GH), 4,04 (s, 211). 4.56(d, m, J=14Hz), 5,08(t, m, J=1znz), 5,40 (da, 111, J=6, 12Hz). 7,44(bs, SH). muaxrpvmax, cm'1= 3440, 3350, 3290, 3060, 3020, 1120, 1635, 1560, 1325, 1060.

Analys beräknat för C H N O S - 2420452' g C, 55,80; H, 5,46; N, 10,84; S, 12,41 funnet: C, 55,08; H, 5,31; N, 10,52; S, 12,10 Exemgel 2 N-[É-(2-aminoetylditio)etylYacetamid.(förening 2) a. Buntesààtmetoden En lösning av 695 mg (4,S9 mmol) 2-aminoetantiosvavelsyra i 7 ml metanol innehållande 318 mg (7,95 mmol) natrium- 10 15 20 25 30 35 461 735 20 hydroxid omrördes 10 minuter vid rumstemperatur och kyiaes därefter till o°. 357 mg (3,43 mmol) N-acety1- cysteamin sattes till denna lösning och lösningen om- rördes ytterligare 10 minuter. Den erhållna grumliga lös- ningen späddes till cirka 60 ml med metanol och denna lösning surgjordes därefter genom omsorgsfull tillsats av 1624 mg (7,95 mmol) acetylklorid. Den klara lösningen indunstades till ett vaxartat fast material, som direkt användes för omvandling till förening 3. b. sulfenyltiokarbonatmetoden Metoden enligt S.J. Brois et al. (loc. cit.) användes.

Metyl-2-aminoetylsulfenyltiokarbonathydroklorid i metanol- lösning behandlades med acetylcysteamin vid 0°C. Reaktio- nen, utan trietylaminaccelerator, var praktiskt taget' ögonblicklig. s Exemgel 3 7-[É-(2-acetylaminoetylditio)etylaminq7-9a-metoximitosan (förening 3) Till en lösning av 100 mg (0,29 mmol) mitomycin A i 4 ml metanol innehållande 200 mg (198 mmoll trietylamin sat- tes vid cirka 0° en lösning av cirka 400 mg av förenin- gen 2 i 2 ml metanol. Den fällning som erhölls avlägsna- des genom filtrering och det klara filtratet fick stå 4 timmar vid rumstemperatur. Lösningen indunstades till en torr återstod och Flash-kromatograferades på 10 g silikagel under användning av gradientelueringsteknik (4-B %) metanol i metylenklonid). Den önskade produkten var den komponent som ingick i den blåa zon som rörde sig snabbast och denna isolerades som ett amorft fast ma- terial med vikten 45 mg (31,5%). Ett analytiskt prov er- hölls genom triturering av det fasta materialet med 5% metylenklorid i hexan och torkning av det fasta materialet. 10 15 20 '25 30 35 21 461 735 15 mm (100 MHz. pyriain-asßn z,06(s, an), 2,10(s, 3H), 2,76(bs, 1H), 2,80-3,20(m, SH), 3,24(s, 3H), 3,60(dd, 1H, J=12 och 2Hz), 3,70-4,10(m, SH), 4,54(d, 1H, J=12Hz), 5,04(t, 1H, J=10Hz), S,38(åä, J=4 Och 10Hz).

Inuuarhvmax, cm'1= 3420, 3350, 3290, 1720, 1635, 1656, 1330,, 1060 __ Analys för C21H29N506S2: beräknat: C, 49,26: H, 5,67§ N, 13,68: S, 12,51 funnet: C, 49,33; H, 6,04; N, 13,20; S, 11,48 Exemgel 4 7-[2-(oktylditio)etylaminqj-9a-metoximitosan (förening 4) via 7-substituerad amidino-9a-metoximitosan Till en lösning av 60 mg (0,15 mmol) 7-(dimetylaminomety- len)amino-9a-metoximitosan i 1 ml metanol innehållande 0,2 ml trietylamin sattes 139 mg (0,54 mmol) 2-(oktyldi- tio)etylaminhydroklorid. Lösningen fick stå 48 timmar vid 0~4°C. Tunnskiktskromatografi under användning av metanol- metylenklorid i volymförhållandet 10:90 avslöjade därefter att den grönfärgade utgångsföreningen hade förbrukats och att en blå huvudzon (Rf=0,6) framträdde. Lösningen kon: centrerades under reducerat tryck till en fast återstod, som Flash-kromatograferades på 12 g silikagel under an- vändning av metylenklorid-metanol i volymförhållandet 20:1 som elueringslösningsmedel. Den i rubriken angivna föreningen erhölls som ett amorft fast material (27 mg, 1H NMR-spektrum (100 MHz) återges i tabell IV. ø I ~ 34%), vars Exemgel 5-22 Användning av olika ditioaminer « De i tabell IV angivna aminerna kan omsättas såsom be- skrives i något av exemplen 1,3 eller 4 för framställ- ning av produkter med formlerna I och II, vilka är iden- 461 735 _22 tifierade i tabellen.

Analys- och spektraldata för vissa av föregående sub- stanser och vissa i tabell IV identifierade substanser återges 1 tabell V. a! 461 735 flfluaflmflvfiænwwfiuuflnuwlflflrwocflëmlw waMHflmflflaäflwwHXO&wElvla%u0OCflEd|N nfiwfluwm.ofl»Hu~»»woaflam|~.:N Hoømpm.ofl»«nH>»@o=«fø|~vLflfiåemßwommflfiæuw .Ofiufluflæumocflëmuv nflwaz wfiufiømfiuH>»=n|=|H>»wocHe~|~ wwmaflwfluahcwmaæumøufiämlm . wflwfiamfiøfiæuuocflsmfw ._ HCNUXNÜNCHEÉ _ ß HH :om H mcumfifiuou Um... uwuxøfloum wummflfiuwuuw >H .Zwnma «~.~.=u.| Ûwo: S ., 3 ..~..«=u.| Ûonzu 2 S z ~ ~ \ .. _ Ö... / _ .Z 2 ..~ 3.8 .. -~=u~=uo= w ß ._ . |~..u~=u__zou«=u .flöouu i. 5 -~.~=u.- . ~ _ . 123.2- 732.-.. Z . ß .h .få 1 . aæcmu S . w ...u .uznz ... ..~ .~=u_ za: n . n.

Nxfim |w«F~w~Hw ua | v34 m afimfiuom Hwmëwxm 24 461 755 «ou»fi=flm|v.~ Hwfiflw ufluoHxH>=@wH:mH>:wwoH»fi=| wfiwaflwfiø zfimflfluhmaNnouuflnxmnfiæuwocflfimlw wflwaflmflw |Häfl«uäm|~|OuuflG|m|H%u00GHEm|~ f ufiufløwflø |H>=@«o~»fiaflø|«.~«H>»wo=fls~|~ ««øfi«Hsm«wH>=m«o»ufin|~|H>»wo=fle~:~ ÜÉfl¥¥flÜHCHEÉ ._æßmP. wmowxfmom .www .om .oz muwuuwn couuwcmuuwß ..fim um ommmz .M >m mw>fiuxwwA Eom wøumë mccmäfifim :mv umflficw U o øw> cmunuouwæsfluumu A øfluofixøuøæccflimwumæu uwñ øfiuoaxflæcøwaæmfiæsmw N >fl UCHGUUWWEO EOCQU Üdflflßwfiflhhšü mmmcw umczm fiw E0 m um HH :oo H øcuwflëuou fi ma -S367 -~_~=u.- |-~=u.« ..~ _96...

Sad . 2 Ößï S f :I |Af@@V _. m.

..N°= ~o ~ . ~oz Ü : 2 mm uwflaw xfidßm afimfihüm HG Hmmëmxm .b _ . _. . . »«u _ H1, _ _ _ _ 41 _ _ __ . .«=- .w nu _ _ =@°« .=~ .uø.°-.w ..~=- .=~ Jv.~n.- _ flw _ .°~n~ .°@m_ .nflwfl ..=~ .:.~..~»~».n ...=<« .=« .~m.««.w _oß.°«.z .n~.~.= .~<.flm.u .m .o-~ .=n«« .øwøfi _ .w.~w.n ..=n .u..~.n ..=n _1- ~fl.-.w _w~.=~.= _«~.«.1 .@°.flm_u .a .°«~n .amma .Q-n...==.~ ._=~ ..n.@~.~ ..=n ...«=.« _ nw _ .M f _ .~=~ .ød .=~ .vv_n~.n ._ "W _ _ _ ._~=°~ .=« .u.@«.~ ..~=«~_.:«_.o_ _ _ 0-.~_..=n .z.°-..«°~.n ..~=- _ _ _ _ .@°~ .=n- .N .=~ .@u.@n.~ ..=« .mv-.n ß .-.-.w .@@.-.= _~n.fi.= .-.-.u .ß .=«m~ .mfiøfi .ødfifi “_=fi .-.=~.fi ._=n .a.=n.~|=-.~ _ @..-.w .w-.fl«.= .-.u.w .n~.fi~.o .n .=fl«~ .=-n .==-n ..~=m .=~ .=_-.~ ..=n ...==.« -n _ .~=°« .v .=« .vvf°..m _ ...==~ .=~ .»_@=.n ..»=~m .=« _ _ _ .v.~n.~ ._=n .e.=~..|°-.n L@~=- _ _ .H .=~ .uu.°wJn ..=n _..-.n S: ._22 :å .E26 lä... .=~ ...S _ . _ _33 _32 ån: 3.... ...i íåïå låt. :ä u~.-.u .Q-.°~.= _@..@.= _.=.wm.u..m .°-~ .=~n~ .=mmw .».«».~ ._=n _-.-.w...=~ .e. . _ =m.~fl.u .=-.=«.= .~«.~.= “.».n«.u .a _ .=.~fl .gflnfl .Q-n =».~ ..==~ ..;.-.~ ._=~ .:.-.= <- »mfifiwqmufinwamåm 5 ._w3.w..=flä~>m. wcflcwunm _ _ _ . A- »«=>..~e:=~ mumuømzz 1- ~ _. > Wmmndü 26 v >w.nn.w _oo.u«.z .~ø.n.= _nfi.-1.0 .L nu.n~.u _un«u~.z _>w.M.: ~wn-w.U .h -w.-.n .-.-.: .-.w.= .m-....u..~ .fi.~«.w .«u.-.1 _-u.m.= .°«.fl..u .n @fl.=~.m .Q-r..= .~..w.= _.~.~».u.~ «~.n~.u _.@.-.= .w~.-.= _@~.~fi.u.a 1 mæfißcmumucmëwflm nnfia .annu .annu ~cnwu .onßn .Oman .namn .cwnn .ønwn Qmeq .uflnfl .=»n. .mnuq _ .=nw~..=.~« ~°fi.~ .=«~fi .ømnfi ~°~.n . øuafl .=~n~ .nwmfi .nn@~ .n.- .°~«« .omafl .°@~n .=mnfl .Q-n Masu :nia ~u=:.=u A.MuN0u_ > Hawflma _a=«n .o .zu .OO-ov.n ..~=- .=4 .«.~9.n ._-:vu .=~ .v_ ~m.- ._=- .:.°=.. ..~=-« .« ß=. .uv. =u.n ..=n .-.<~.fl ..=n .e. -.n ..=~ ..=.»>.« ..=fl....~..~ . -u.~ .-.~ ..~==« _- .=. .uu.~u.u ..~=- .=~ .e. v».v .~u=a~ .=« .u.nn.w ..u:o~ . .~ .=~ .1=.-=.- ._=. .:.=..n ..«=M..=~ .ø.>..n ..~=~« .~ .=« .u1.=».« ._=~ .uø..~.n ..=fi ...°~.n¶..=- .p.°°.« ..=n ... n~.~ ._=fi .«.n~.« ..=fl ...n=.~ ww .~=~. .u .=~ .nø.«n.n ._~=-..=~ .v.°m.. ..=n .:.-.H ..~=-.,~ .=« .w¶.°u.~ w.=fl _..-.~ ._=« .v_~..n ...=.

~=N .U~u0.N .=H ~!~NFnN ._=n ...-.~ ..=~ .:.°..-=..= .n .- .ßí æ|c*æ*a>a_ _wum@lmEZ mp mcflnmumw.

.I om ma 461 735 4 - _ . m@.-.M _.».«ø_=w.nw.-.= _n~.«~.u .m 27 n..-.w _~@.°~.= .~fi.fi.= -°.-.m .~m.°~.= .=n.w.= wu.~n.w _øn.«fl.z -v.v.= nn.-.w _flu.nn~: ~ao.m.= wæamcmumucmämdä \f .=fi.~fi.u..@ _-.-m.u .a .ßnnw-.u .ß .-.~fi.u .a ewefl _o-nu .nmmfl .mw@~ .øwßd .Q-@« .°onn..w.nn..=«-m owo~..mnnfi .mama .mnmfl .o~ß«..ewa~ 1 . ~oonn .cønn .nova .awofi _fi~n~ .»wmfl. .øflwfi ~°~»~¶.°~.~ . .°=~« wanna .on-n _ nerv _ :sia .u=a_:u _=~ .uou~u=v m<. vø.. u.~=«~ .w .=. .¶v. °~.m ..~=- .=~ .»..=.m ..~=- .=~ .v.~w.~ ..=n .æ.@«.fl ..~=~_ .~ .=~ .uu.ø@.n ._=« _-.-.n ..=n .:. . .=.«...=« ..n.-.~ ..=n _..-°.« . .=- .uuuu-av =<_ -nu» ..~=~. .Q .=~ .øv..n.n ._~=- .=~ .».-°.m ..~=- .=~ .v.~w.. ..=n .s.~ß.n ._=n W-.-u.fi ._«=- .~ .=~ .=u.~n.~ ..=n,...-.fi ._=n¶.e. .°.n ..=~ ..@.~w.~ ._=« .-..@.~ -.. .@w.~ .@~.~ ..«=~*..u .=~ .wv_wn.m ..~=~d .=~ .».~°.n ..»=-« .=~ .u.~w.~ ..=n .:.~..n ..~=- .~ .=« .øu.=w.n ._=n _-..«.n ..=fi .ev .ø.n ..=fl ..@.-.~ ..=« .-.-=.~ _ Aw.w@|=«øflH>m. muwmwmzz mp nu uu ben mcficmumm ma od. __.. _... .___ .E26 . __~= _._ _=_ _u_°«.~ _.=_ ___m-._ ___: _.- . __.. __; .___ ...E36 ___.. ___: J.. ü» .___ 3.2 ______2._.. ...__ 3.2.... ___.. _...2 .___ ____._._..~ _22 _82. .omz __... _.__ __.. _._ .___ .vânaá ...__ ___.__.._.n ._22 .Sam :_62 ...__ 12 .___ .Eäå __.__~ .Såå ___." ..._ .San .S3 .Så Sá _____ _3__._..__ ...z ...šå Mêw ...Zmå . am... _ . ~ ..._ EE...- .NÜNÜ šm... .öm »flwmüuå . ._93 __. ...AJ __. _25 n.. ___ 2.! __. :___- .___ .åxå .u .___ ___: _53; ___.. QS __.. _; .___ .šåä an: . :___ ___ ____ _______..._ ___.. ___ ___. _.- .22 39: _22 .___ .vsâå ...__ ___.___.__ ___: ____S._ . _22 _32 :Så ._____ .ne-...à ...___ Ãäå ___: .stå . .där _83 .Så _ ___: _2__._.~.~ ...__ _!___.._.~ .En .såå I. .fluwø wš... nå »mämnfiox _.. :___ __. __._¿.____ ___;- .w __ 2.2 ___ .SA ___ _34- .u ___. _,_ .8 .._ . _ 2 _ _ ___. _; .___ .Éäfin ___: :_26 ___.. -_.~_ .___ ._23 __... _.__ :__ _.. .___ ____.:__.__._ ...___ ___._:_._ ...__ 12 ..._ .Såå ...__ 52.» _._._._@.__._._._ ...__ .såå 02: .mmm- .mfiuwmfl wëïo now »mummfifiuox ...___ __:__.._ _32 Q nO-nn _: Snow _: Énåv SU ___ Än: åw: åvmn 461 755 8.2 ___ ___-b. ___ _24: .u .___ _32 _33 nä: __: .neâå ...__ _.___._.._ ...___ 3.36 u m, mæfinzmuøacmßmam .7-.8 mcflcmunm .Ü . nn-Änfl I!! n-uflßw n: UnfflÜ-lmzz _ å. muuou- > .flfiwßßä _.. 1 735 29 E:u»xwmw|mzz ams own .m uwnnømnm .uMmHuwwowuu% .0 cawauhm S00 Uauwæncwmuæwxwßuw Uwñ m mflflcwumm >m mnwuwflhum Eøcwm wafiwumëmhm .O .wfiuwm »:«.o ~ww umumwfluußx .@.«...= .-.- .= “«..w- .u mm nv.v~ .z «m«.w ~= «a«.wv -U "h s=u»xwmw|m=z um: om .n Enuuxwmmumzz um: oof .m ~ .mmma ~ncn« .anw- Onnn .emma .coon .Oman .uvmn ~mw~m ..= - .=. .u.~m.« ...= 9. ..= < .=. .øv. ~m.@ ..~= °.q~ .=. .q.~«.~ ._.= a-~ .~= “men .°«~. .=_ _v.@n.n ..=~ .~.-.n ._=n .|.-.n ._=~ .«=.@~.~ ._=- .n=..o.~ ..:~ .u..oh« ~.- .=. .v1.@~.n ...=.°-. .=_ ~..°°.n H ...= -_ .=. .@.@... .@=~ _-.°«.M ._~= ._ ? ww . ._ . ..-|_ - _ mmaawammmucwswflm -2s.+åz.=. .w.wu~5vt»e 52.: mcflcmumm ~.m#H0ww > HHUQNH ... p _ . 461 755 Förening nr 13 14 _15 16 (BMX-25828) (BHY-25829) (BMY-25827) 30 TILLÄGG TILL TABELL I Inhibition av P-388 leukumi hos möss Maximalt Effekt. Minsta Genomsnitt- lig vik - % T/C dos affektiva dos änaring zzu(27n) e;4(4.a) <0-4- -Ä-l- +3-2 1vo(z1o>_ s,z(4.s) <0.2 ' +2-6, +2-7 zuoxzvog 12.s<fl.s) <0-4 -3-2- +1-° 11o(21o> 3.2(4.s) <0-2 +l-3' *U-5 (BMX-25830) 1 mg/kg kroppsvikt 2 gram per mus, dagarna 1-7, vid maximala och minsta effektiva dos 3 CDF1-möss av hankön

Claims (9)

461 735 31 EBIEHIKEAY

1. Föreningar med formeln I eller formeln II II vari Alkl lr en rek- eller grenkedjig elkylengrupp med 1-6 koletomer; ' Alk år en rek eller grenkedjig elkylengrupp med 2-6 koletomer; R är väte eller lägre alkenoyl; R är fenyl, elkanoylemino, emino eller hydroxí och R är alkfl med 1-12 koletomer, fenyl, nitro-substi- tuerad eller lägre hlkoxisubstituerad fenyl, pyrid- yl eller nítro-substituered pyridyl. ' 461 755 32

2. Föreningar enligt krav 1 med formeln I, k 8 n n e - t e c k n a d e därav, att Alkz är etylen och att R är väte.

3. Föreningar enligt krav 2, k 8 n n e t e c k n a d e därav, att Alkl är etylen.

4. Föreningen 7-¿2-(2-aminoetylditio)etylamin§7-9a-met- oximitosan och föreningen 7-L2-(2facetylaminoety1ditie)- etylaming]-9a-metoximitosan enligt krav 1.

5. Föreningar enligt krav 1 med formeln II, k ä n n e - t e c k n a d e därav, att Alkz är etylen och R är väte. I

6. Föreningar enligt krav S, k 8 n n e t e c k n a d e därav, att R är alkyl.

7. Föreningen 7-[Z-(oktylditio)etylaminqj-9a-metoxímito- san, föreningen 7-11-(n-butylditio)etylamin§7-9a-metoxi- mitoean och föreningen 7-[§-(beneylditio)etylamín§7-9a- -meteximitosan enligt krav l.

8. Föreningarna 7-12-(fenylditio)etylaming]-9a-metoxi- mitosan, 7-¿2-(2-hydroxietylditio)etylaming7-9a-metoxi- mitosan, 7-¿2-(2-pyridylditie)etylaning]-9a-metggimitoean 7-¿2-(4-metoxifenylditio)etylaming7-9a-metoximitøean, 7-[2-(4-nitrofenyldítio)etylamin§7-9a-metoximitosan, 7-¿ï-(2-nitrofenylditio)etylamínQ7-9a-metoxímitosan, 7-[2-(2,4-dinitrofenylditio)etylamin§7-9a-metoximitosan, 7-12-(3-nitro-2-pyridylditio)etylamin§]-9a-metoximitoean och 7-(7-(5-nitro-2-pyridylditio)etylamin§]-9a-metoxi- mítosan enligt krav 1.

9. Förferande för framställning av föreningar enligt krav 1, k ä n n e t e c k n e t därav, ett man bringer 1-4 (N 01 461 7 33 molära ekvlvalenter av en amín med formeln III eller IV 2 2 R7-Alkl-ss-Alkzuxz ns-ss-Alk NH III Iv att reagera med en molär ekvívalent av en mitoean med formeln V 7 8 vari R, R , R , Alk och Alk har samma betydelser som i krav l och Y är lägre alkoxí med 1-6 kolatomer eller en grupp med formeln VI 5 R I 3 4 n a u-c-n- v: 5 vari R är väte, lägre alkyl, fenyl, lägre alkylfenyl, lägre alkoxifenyl, halofenyl, aminofenyl eller nitro- fenyl, Ra och R4 oberoende av varandra är lägre alkyl eller tíllsamans med den kväveatom till vilken de är bundna är pyrrolídin, 2- eller 3-(lägre alkyl)-pyrrolídin, piper- ídin, 2-, 3- eller 4-(lägre alkyl)-píperídin, 2,6-di- 461 735 34 (lägre alkyl)-piperidín, píperazin, 4-substituerad piper- r azin (varvid 4-substituenten är alkyl eller karbalkoxi vardera med 1-8 kolatomer, fenyl, metylfenyl, metoxífen- yl, halofenyl, nitrofenyl eller beneyl), azepin, 2-, 3-, -4- eller 5-(lägre alkyl)azepín} morfolin, tiomorfolín, tiomorfolin-1-oxíd eller tíomorfolin-1,1-díoxid, f) varvid var och en av nämnda läšre alkyl-, lägre alkan- oyl- och lägre alkoxigrupper innehåller 1-6 kolatomer, 1 en reaktíonsinert organisk vätska vid en temperatur av från ca -1s” :in +so°c under rinracxlígr lang rm för att en avsevärd mängd av produkten med formeln I eller formeln II skall bildas.