DK170071B1 - Mitomycinderivater samt fremgangsmåde til femstilling deraf - Google Patents

Description

DK 170071 Bl i

Den foreliggende opfindelse angår mitomycinanal oger indeholdende en di sulfidgruppe (klasse 260, underklasse 326,24) samt en fremgangsmåde til fremstilling deraf. Disse forbindelser er roytomycin C derivater, hvori 7-aminogruppen bærer en organisk substituent, hvori der er inkor-5 poreret en di sulfidgruppe. Disse forbindelser er inhibitorer af eksperimentelle dyretumorer.

Nomenklatur - Det systematiske Chemical Abstracts navn for mitomycin C er: [laR-(laa,8j3,8aa,8ba)]-6-amino-8-[((ami nocarbonyl)oxy)methyl]-10 l,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methyl-arizino[2',3',3,4,]pyrrolo-[l,2-a]indol-4,7-dion, i overensstemmelse hvormed azirinopyrroloindolringsystemet er nummeret som følger 7 15 6/\_—η

Ua 5 v >nl_Pihh 2 la 20

Chemical Abstracts

Et trivi al nomenklatursystem, der har fundet bred anvendelse i mitomyci nlitteraturen, identificerer det ovennævnte ringsystem, herunder med 25 flere af de karakteristi ske-substituenter for mitomycinerne som mitosan.

O 1° il JL . /¾0°¾

jQGC

ch/ TT i i ^

o 41 UN~H

3 2

Mi tosan 35

Det er valgt i den foreliggende beskrivelse at anvende dette system og at referere til azirinonitrogenatomet som N^a og til ringaminonitro-genatomet som N7. Med hensyn til de omhandlede produkters stereokemiske 2 DK 170071 B1 konfiguration er det, når man identificerer dem med stamnavnet "mitosan" eller med strukturel formel, hensigten at identificere den stereokemiske konfiguration heraf som den samme som mitomycin C.

Mitomycin C er et antibiotikum, der fremstilles ved fermentering, 5 og i dag er til salg med "Food and Drug Administration's" godkendelse til terapi af dissemineret adenocarcinom i maven eller i bugspytkirtlen i afprøvede kombinationer med andre godkendte kemoterapeutiske midler og * som palliativ behandling, når andre modaliteter har svigtet ("Mutamycin®", Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13201, 10 Physicians' Desk Reference 35th Edition, 1981, pp. 717 og 718). Mytomy-cin C og produktionen heraf ved fermentering er genstand for US-patent-skrift nr. 3.660.578, udstedt den 2. maj 1972, og som kræver prioritet fra tidligere ansøgninger, herunder en ansøgning indleveret i Japan den 6. april 1957.

15 Strukturerne af mitomycin A, B, C og af porfiromycin blev først offentliggjort af J.S. Webb et al. fra Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J.Amer.Chem.Soc. 84, 3185-3187 (1962). Én af de kemiske omdannelser, der anvendtes i denne strukturundersøgelse for at relatere mitomycin A og mitomycin C, var omdannelsen af førstnævnte, 20 7-9a-dimethoxymitosan, ved reaktion med ammoniak til sidstnævnte, 7-amino-9a-methoxymitosan. Udskiftning af mitomycin A's 7-methoxygruppe har vist sig at være en reaktion af betydelig interesse for fremstillingen af antitumoraktive derivater af mitomycin C. De følgende artikler og patentskrifter omhandler alle omdannelsen af mitomycin A til et 7-sub-25 stitueret aminomitomycin C_derivat med antitumoraktivitet. Formålet med undersøgelsen var at fremstille derivater, der var mere aktive, og som især var mindre toksiske, end mitomycin C:

Matsui et al., "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968).

Kinoshita et al., J.Med.Chem. 14, 103-109 (1971).

30 Iyengar et al., J.Med.Chem. 24, 975-981 (1981).

Iyengar, Sami, Remers og Bradner, Abstracts of Papers, 183rd Annual Meeting of the American Chemical Society, March 1982, No. MEDI 72.

Iyengar et al., J.Med.Chem. 1983, 26, 16-20.

Iyengar et al., Abstracts of Papers, 185th Annual Meeting of the 35 American Chemical Society, March 1983, No. MEDI 82.

De følgende patentskrifter omhandler fremstillingen af 7-substituerede aminomitosanderivater ved reaktion af mitomycin A, mitomycin B eller et Nla-substitueret derivat heraf med en primær eller en sekundær DK 170071 B1 3 ami η: US-patentskrift nr. 3.332.994, udstedt den 25. juli 1967.

US-patentskrift nr. 3.420.846, udstedt den 7. januar 1969.

US-patentskrift nr. 3.450.705, udstedt den 17. juni 1969.

5 US-patentskrift nr. 3.514.452, udstedt den 26. maj 1970.

US-patentskrift nr. 4.231.936, udstedt den 4. november 1980.

US-patentskrift nr. 4.268.676, udstedt den 19. maj 1981.

BE-patentskrift nr. 893.162, udstedt den 12, maj 1982.

Mitomycin C derivater med en substitueret aminosubstituent i 10 7-stillingen er også blevet fremstillet ved direkte biosyntese, dvs. ved at supplere fermentationssubstrater med en serie primære aminer, og ved at udføre den konventionelle mitomycinfermentation (C.A. Claridge et al., Abst. of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiology 1982,

Abs. 028).

15 Mitomycin C er hovedproduktet produceret ved fermentation og er den kommercielt tilgængelige form. Gængs teknologi til omdannelse af mitomycin C til mitomycin A til anvendelse i produktionen af de semisyntetiske, substituerede aminoanaloge af mitomycin C, der er omtalt i de ovennævnte patentskrifter og publikationer, omfatter hydrolyse af mito- 20 mycin C til den tilsvarende 7-hydroxymitosan, en meget ustabil forbindelse, og dernæst methylering af denne forbindelse med diazomethan, der er meget farlig at håndtere. Ét forsøg på at undgå brugen af diazomethan til methylering omfatter anvendelsen af 7-acyloxymitosaner (Japansk patentskrift nr. J5 6073-085, Farmdoc No. 56227 D/31) til mitomycin C ana- 25 logsyntése.

Den foreliggende opfindelse angår en gruppe mitomycin C analoger med en dithio-organisk substituent på aminonitrogenatomet i 7-stillingen. Disse forbindelser kan beskrives ved de almene formler (I) og (II)

30 O

R7Alk1-SS-Alk2 . - -¾¾.

og DK 170071 B1 4

Ho Μ 8 \ I flSLCO^

_ R*-SS-Alk?-N^ X'V

\\ I

—t /v/vnr% . Ti " N-R · (II) {} -L·' 10 hvori

Alkj er en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med 1 til 6 carbon-atomer,

Alk,, er en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med 2 til 6 carbon-atomer, 15 R er hydrogen eller lavere alkanoyl, er hydroxy, amino, alkanoylamino eller phenyl,

Rg er alkyl med 1 til 12 carbonatomer, phenyl, nitrosubstitueret eller lavere alkoxysubstitueret phenyl, pyridyl eller nitrosubstitueret pyri-dyl.

20 Forbindelserne ifølge opfindelsen er inhibitorer af eksperimentelle tumorer i dyr. De fremstilles ved omsætning af et aminodisulfid med de almene formler (III) eller (IV) R7A1kj-SS-A1k2NH2 (III) 25 eller R8-SS-Alk2NH2 (IV) 30 med et mitosanderivat med den almene formel (V)

O

II

O QLjOCML.

35 Ϊ|Γ-]>3 [ |'W· (v) o I_l' 5 DK 170071 B1 hvori Y er en gruppe, der let kan erstattes ved reaktion med en primær amin til dannelse af et N^-substitueret mitomycin C derivat. Sådanne mi-tosanderivater omfatter mitomycin A og dens homologer med formlen (V), hvori Y er en lavere alkoxygruppe med 1 til 6 carbonatomer. Et andet er 5 derivatet med den almene formel (V), hvori Y er amidinogruppen med formlen (VI) r5 R2R4N-t=N- (VI) 10 hvori R® er hydrogen (foretrukket), lavere alkyl, phenyl, lavere alkylphenyl, lavere alkoxyphenyl, halogenphenyl, aminophenyl eller nitrophenyl, og R·3 og R^ uafhængigt af hinanden er lavere alkyl, eller sammen med det 15 nitrogenatom, hvortil de er bundet, udgør pyrrolidin, 2- eller 3-lavere al kyl pyrrol idin, piperidin, 2-, 3- eller 4-lavere alkylpiperidin, 2,6-di(lavere alkyl)piperidin, piperazin, 4-substitueret piperazin (hvori 4-substituenten er al kyl eller carbalkoxy, der begge har 1 til 8 carbonatomer, phenyl, methylphenyl, methoxyphenyl, halogenphenyl, nitrophenyl 20 eller benzyl), azepin, 2-, 3-, 4- eller 5-(lavere alkyljazepin, morpho-lin, thiomorpholin, thiomorpholin-l-oxid eller thiomorpholin-l,l-dioxid, hvori hver af de ovennævnte lavere al kyl-, lavere alkanoyl- og lavere alkoxygrupper indeholder 1 til 6 carbonatomer.

Sidstnævnte er amidinoderi vater af mitomycin C og er beskrevet i en 25 verserende ansøgning nr. 385.149, indleveret den 4. juni 1982.

Reaktionen mellem mitosanderivatet med den almene formel (V) og aminodisulfidet med formel (III) eller (IV) finder sted i et vandfrit, flydende organisk reaktionsmedium ved en temperatur i området mellem ca.

-15 og +50°C. En temperatur i området fra 0 til 20eC foretrækkes. Et-30 hvert vandfrit, flydende organisk reaktionsmedium kan anvendes så længe det er stabilt under reaktionsbetingelserne og ikke tager del i reaktionen på en skadelig måde. Fra 1 til 4 moldele af aminodisulfidet med formel (III) eller (IV) anvendes med mitosanreaktanten med formlen (V). Fortrinsvis anvendes ækvimolære mængder af de to reaktanter. Der anven-35 des en reaktionstid på adskillige timer og fortrinsvis på fra ca. 8 til ca. 50 timer. Produktet udvindes kromatografisk, hvilket passende kan omfatte inddampning af det flydende organiske reaktionsmedium og kromatografi af remanensen.

DK 170071 B1 6

Aminodi sulfider med formlerne (III) og (IV) er kendte forbindelser, som kan fremstilles ved hjælp af forskellige fremgangsmåder. De kan for eksempel fremstilles ved reaktion af den passende thiol R7AlkjSH eller R®SH med et "Bunte" salt med formlen 5 NH2Alk2SS03Na (VII) 4 eller med et sulfenylthiocarbonat med formlen

10 O

NH2Alk2$S(!oCH3 (VIII)

Klayman et al., Journal of Organic Chemistry 29, 3737-3738 (1964) har fremstillet følgende ved hjælp af "Bunte"-salt-fremgangsmåden 15 2-aminoethyl-n-butyl-disulfid 2-ami noethyl-n-hexyl-di sulfid 2-aminoethyl-n-octyl-di sulfid 2-ami noethyl-n-decyl-di sulfi d 2-ami noethyl-phenyl-di sulfi d 20 2-aminoethyl-benzyl-disulfid

Methanol viste sig at være det foretrukne reaktionsopløsningsmiddel til reaktionen mellem "Bunte" saltet og thiolen. Reaktionstemperaturer på 0 til -10*C viste sig at være foretrukne under anvendelse af dette opløsningsmiddel. Det var nødvendigt med højere temperaturer ved anven-25 delse af andre opløsningsmidler. Den væsentligste ulempe ved denne fremgangsmåde er dannelsen af symmetriske disulfider som et biprodukt, antagelig som et resultat af disproportionering af det ønskede blandede di-sulfid.

De blandede disulfidudgangsmaterialer med formlerne (III) og (IV) 30 fremstilles fortrinsvis via reaktion af den passende thiol med et sulfenylthiocarbonat med formlen (VIII). Dette er en metode ifølge S.J.

Brois et al., Journal of the American Chemical Society 92, 7269-7270 (1970). Typisk omfatter denne præparative fremgangsmåde tilsætning af thiolen til en methanol opløsning af amino-alkylsulfenylthiocarbonatet 35 med formlen (VIII), hvorefter reaktionen forløber ved en temperatur i området mellem 0 og 25*C. Reaktionstiden varierer fra at være praktisk taget momentan til at tage adskillige timer afhængig af den særlige thiol, der anvendes. Reaktionens forløb kan følges ved at måle tilstede- DK 170071 B1 7 værelsen af uomsat thiol i reaktionsbeholderen. Hvis reaktionen er træg, kan en katalytisk mængde af triethylamin tilsættes som reaktionsaccelerator.

Det følgende er en liste over repræsentative thioler med formlerne 7 8 5 R AlkjSH eller R SH, der kan omdannes via reaktion med "Bunte" saltet (VII) eller sulfenylthiocarbonatet (VIII) til dannelse af mellemprodukter med formlerne (III) og (IV), som igen omdannes til produkterne ifølge den foreliggende opfindelse, som beskrevet. Med hensyn til de amino-holdige thioler ifølge nedenstående liste, er det almindeligvis ønske-10 ligt først at omdanne disse til en beskyttet form, fortrinsvis j8-(tri-methylsilyl)ethoxycarbonylaminoderivatet, før omdannelse til mellemprodukterne med formlerne (III) eller (IV) og reaktion med mitosanmellemproduktet med formlen (V). j3-(trimethylsilyl)ethoxycarbonylaminogruppen kan herefter fraspaltes ved behandling med tetraethyl ammoniumfluorid i 15 acetonitril (L.A. Carpino et al., J.C.S.Chem.Comm., 358 (1978)) til dannelse af den ønskede frie aminoforbindelse med formlerne (I) eller (Π).

DK 170071 B1 8 HSCH3 ESCH2CH3" HSCH2CH2CH3 HSCH(CK3)2 HS(CH2)3CK3 HS-CK-CH,CH, I 2 2 CH3 HSCH2CH(CK3)2-• f 3 . · HE— C— CS, ES<]

P

ES/ es<3

•esO

HE-O

hs-ch2 es-ch2-ch®ch2 ES-CH2-CH=C(CH3)2

ES-CH2-C«CH

HS-C2i2-<>C-CH3 DK 170071 B1 9

O

ES(CH0) OR1 n *= 2-4, R1 * E, CCE,, CE, 2 Ti i -5 9 ' .-i· HS(CH2)nCXR is-1-3, X«0, NH, NR-; R, R^-H, CH^ BS(CH.JJ*H, n*=2-4

2 li 2 O

HS (CHOKER1 n*=2-4, R~CH3, CH2CH3, CHjCHjQ^, ScE3 KS (CHO 142¾½2 n«2-4, rVr^CH, , CH-CB, C8? a 323 t ·* RS-Ca-CH2NH2

Ps hs-c-ce2n:-:2 ch3 KS-CH2“CH-NH2 “3 HS-CH--C-NE, 2 I 2 ch3 H£-CE2CH2SCH3 HS-CH2CH2NHC(CH3)3 KS-CH2-C-CH2KnR1 S1 “H , CB3, CCS3 ^3 DK 170071 B1 10 ES-CH2CH2-HH-^^ ____-CT2 n*=3-5 HS-CE,CH,-N 1 '-(CH2)n CE 2 NR1 R2 KS-CK-CH2NR1r2 Λη, CK3 i R2 * H, CH3 KS-CHj-CH-CHjNER1 RleK, CH3 NKR1 HS - CK2 - gH - CS 2NH 2 ch2nh2 ks-ck2-ch-ch2nh2 KS-CK,-CK-NH,

2 1 2 C02K

ES-CK2-<pi-CH2-NH2 co2h

ES-CH,-CH-CH,-CO,H

2,.2 2 nk2 CH,CO-H , 2 2 ES-CH-CH,CB 2 2 t .

I<ft2 ES(CH5)r<^· # r2*h, cb.,’ r1*?:, c-:.

^ NHR1 ** DK 170071 B1 11 o

X

ES-CK«C3-NHCCS3 HS-CH^CH^-K-Gr'

W

nh2 KS-CK2 —<^ HS-CH2-CH-C3i2NH2 ΛΝΗ2 æ3

CE3 NH

CK, 1 · π ^ 3 ES-CK,-C — C- NH5 HS-CH^ C83 n:-:2

*2 KS-CH-CE-J-NH

ES-Q Åch3 2 nh2 /x BS-CH,-CH“CH-CH,KH- . 2 22 P»j HS-CH2-C-CH2Nr:2 KS-CH-V/\^E2 cs2 “3 _ «3 ES-CH-CHCH-CE-NH-HS-CH2-CH-ra2OH 2j 222 OH CH3 5-thio-D-glucose ch3 hs-ck2ch2kh HS-CE--CH-CH-NH. ^ K · H hs-CH-CH-.-KH·-^ y ES-CH2-C-CH2OH 2 2 nh2 f3 es-ck2-ch-ch2oh DK 170071 B1 12 CH3 HS-CH2-CK2-0-C-CH3 ch3 hs-£> 3>a BS-Ooa3 r-Λ 2 HS^j) iiS2 ks^3 nhch3 HS -o- NHCCH3 ES “^^"C02H KH2 ”

N—N

HS -<e>- “3 DK 170071 B1 13

$ X=N,0 Y^E

HS Λ x*s Y~E' c1, OCH2CE3

‘sJQ

»•D

~0 HS -^jj *«Hi CH3

R

,,-Q

.='0· •Ηί-ζ5-®2 x‘ra's DK 170071 B1 14 fV’ HS^

HS

n(ck3)2 KS-CH2-(£^ KS - CH 2 - CH-CE-0> es-ce2— CK2NH2 o 'HS-CH2CHr<^^- NHCC«3

HS"iæ2>n^Q

.s-W2)t-(} n«l,2 DK 170071 B1 15 \tsJ r - OCH2CH3 BS-(CH2>n-^

H

'ES"(CT2}n -Q

HS~ (^Vn-O X- 0, S, NH

KS-(CB2)^-i^ X « 0, S, NH

HS-(C32)0-^-NE2 X * °' Sf NE

/^X X « 0, S, HH

«-‘“j’a-V -

HS.(CH2)/>KH2 X * 0, S, NH

2 HS'æ2-^) HS-C3^-(^ K1 - H, CH3 R1 DK 170071 B1 16 ““rC™1 r1-h, ch3 HS~°i2~CH2~K^ y5* x - O, NS, NCHj —aO 1 *2 R1 - H, CH,

S J

ES-Ci2-(^ R1 - E, CH3 HS-CE2—^^KR1 R“«e, CH3 £S r1 κ η, a3

HS^) - Rl“S' CK

Ri »O r1-K , CJ3 25-(02,)-/^1^2^ n , , 2 nn«l-3, m-1-3 DK 170071 B1 17 F.S-CH2H^^2^1 r2“K' α3' r1,cH'' ^3' ^2 hs-ch^^^R1 R1·*, ck3 KS-CH^ R1 *H/ CIi3 ch3 HS^— S '^'KH2 SS ^

BS^|^ 2 ES

CH,

3 ^-s^OH

es N (CH3) 2 /v^CK-^v ES Έ2 DK 170071 B1 18

Aktivitet overfor P-388 museleukemi

Tabel I indeholder resultaterne af laboratorietests med CDF, hun- •I g mus, der blev implanteret intraperitonalt med et tumorinokulum med 10 asciteceller P-388 museleukemi og behandlet med forskellige doser af en-5 ten en testforbindelse med formlerne (I) eller (II) eller med mitomycin C. Forbindelserne administreredes ved intraperitonal injektion. For hver dosismsngde anvendtes grupper på seks mus, og de behandledes med en enkelt dosis af forbindelsen på inkokulationsdagen, inkluderedes i hver forsøgsrække en gruppe på 10 saltvandsbehandlede kontrolmus. De mitomy-10 cin C behandlede grupper inkluderedes som en positiv kontrol. Et 30 dages skema anvendtes, idet den gennemsnitlige overlevelsestid i dage bestemtes for hver gruppe mus, og idet antallet af overlevende efter 30 dage noteredes. Husene vejedes før behandling og igen på dag 6. Ændringen i vægt anvendtes som mål for midlets toksicitet. Mus, der hver veje-15 de 20 g, anvendtes, og et vægttab på op til ca. 2 g blev ikke betragtet som urimeligt. Resultaterne bestemtes udtrykt i % T/C, hvilket betegner forholdet mellem de behandlede gruppers gennemsnitlige overlevelsestid og de saltvandsbehandlede gruppers gennemsnitlige overlevelsestid gange 100. De saltvandsbehandlede kontroldyr døde almindeligvis inden for ni 20 dage. Den "maksimale virkning" i den følgende tabel er udtrykt som % T/C, og den dosis, der giver denne virkning, er opgivet. De i parentes angivne værdier er de værdier, der er opnået med mitomycin C som den positive kontrol i det samme eksperiment. Således kan et mål for de omhandlede forbindelsers relative aktivitet i forhold til mitomycin C 25 skønnes. En minimal virkning udtrykt i % T/C ansås for at være 125. Den minimale effektive dosis, der er rapporteret i den følgende tabel, er den dosis, der giver en % T/C på ca. 125. De to værdier, der i hvert tilfælde er angivet i kolonnen "gennemsnitlig vægtændring" betegner den gennemsnitlige vægtændring pr. mus ved henholdsvis den maksimale effek-30 tive dosis og den minimale effektive dosis.

DK 170071 B1 19 Λ,

Tabel I

Inhiberinq af P-388 museleukemi 5 Gennem-

Maksimal virkning Minimal snitlig ................. effektiv vægt-

Forbindelse nr. % T/C Dosis dosis ændring 10 1 (BL6787) >333 (294) 3,2 (3,2) 0,2 -1,2, -0,3 3 (BL6796) >375 (250) 6,4 (3,2) <0,2 -2,5, -0,9 4 (BL6832) 172 (194) 6,4 (3,2) 0,8 -2,8, -0,9 5 (BL6790) >333 (294) 12,8 (3,2) <0,2 -2,4, 0 6 (BL6789) 183 (294) 12,8 (3,2) 0,4 -0,6, +0,8 15 7 (BL6788) 200 (294) 12,8 (3,2) 0,2 -0,6, -0,2 8 (BL6795) 188 (250) 6,4 (3,2) 0,8 -0,8, +0,1 9 (BMY25036) 219 (319) 3,2 (3,2) <0,2 -1,3, -0,6 11 (BMY25066) 194 (194) 3,2 (1,6) <0,2 -1,8, -0,7 12 (BMY25067) 331 (194) 12,8 (1,6) <0,2 -3,3, -1,1 20 ........................................-...........................

*mg/kg legemsvægt 2 g pr. mus, dag 1 til 6, ved maksimale og minimale effektive doser 25 Tabel II indeholder resultater af antitumortests under anvendelse af B16 mel anomvækst i mus. BDFj mus anvendtes, og de inokuleredes subkutant med tumorimplanteret væv. En 60 dages protokol anvendtes. For hver afprøvet dosismængde anvendtes der grupper på ti mus, og hver gruppes gennemsnitlige overlevelsestid bestemtes. Kontroldyr, der inokuleredes 30 på samme måde som testdyrene og behandledes med injektionsvehiklet, men ikke med noget lægemiddel, udviste en gennemsnitlig overlevelsestid på 24,5 dage. Overlevelsestiden i forhold til kontrol dyrenes (% T/C) anvendtes som et mål for effektiviteten, og hver testforbindelses maksimale effektive dosis og minimale effektive dosis bestemtes. Den minimale 35 effektive dosis defineredes som den dosis, der udviste en % T/C værdi på 125. For hvert dosisniveau behandledes testdyrene på dag 1, 5 og 9 med testforbindelsen ad intravenøs vej.

DK 170071 B1 20

Tabel II

Inhiberinq af B16 melanom 5 Gennem-

Maksimal virkning Minimal snitlig .....-........... effektiv vægt- 112 Forbindelse nr. % T/C Dosis dosis ændring 10 1 (BL6787) 122 3,0 3,0 -2,7, -2,7 6 (BL6789) 163 3,0 <3,0 -1,8, -1,8 6 (BL6789)3 161 6,0 <3,0 -1,4, -1,3 15 ^g/kg legemsvægt 2g pr. mus, dag 1 til 15, ved maksimale og minimale effektive doser 3 behandling på dag 5, 9 og 13

Forbindelse nr. 3 (BL-6796) vurderedes ligeledes for dens effekti- 20 vitet overfor B16 melanomvækst i BDFj mus. I dette eksperiment inokule-redes dyrene med tumoren ad intraperitonal vej, og behandling med testforbindelsen skete også ved intraperitonal injektion. Behandlingen fandt sted på dag 1, 5 og 9 som før, og gennemsnitsoverlevelsestiden bestem tes. Igen ansås den minimale effektive dose for at være den dosis, der 25 giver en % T/C på 125. Ved en dosis på 1 mg/kg af forbindelse nr. 3 overlevede 6 af 10 dyr hele den 60 dage lange testperiode (% T/C 235) og udviste på dag 5 en gennemsnitlig vægtændring på +0,1 g. Ved en dosis på 0,5 mg/kg var den gennemsnitlige overlevelsetid 42,0 (% T/C 165), hvilket indikerer, at den minimale effektive dosis er mindre end 0,5 mg/kg.

30 I den samme test udviste mitomycin C en % T/C på 165 ved en dosis på 3 mg/kg. Dette var den maksimale effektive dosis for mitomycin C i dette eksperiment. Det er således klart, at forbindelse nr. 3 er adskillige gange stærkere overfor B16 melanom i mus end mitomycin C. *

Virkningerne af forbindelserne 1 (BL-6787) og 3 (BL-6796), der var 35 administreret intravenøst, på de samlede og differentielle hvide blodlegemetal (WBC) i mus bestemtes. Begge forbindelser viste sig at være myelosuppressive, men tydeligvis mindre end mitomycin C. Resultaterne er angivet i tabel III. Data for forbindelse 1 og mitomycin C opnåedes i DK 170071 Bl 21 samme eksperiment, hvilket således tillader en direkte sammenligning. Forbindelse 1 var noget mindre myelosuppressiv. Data for forbindelse 3, fra et særskilt eksperiment, antyder stadig mindre myelosuppression, men en direkte sammenligning med de to andre forbindelser er ikke tilgænge-5 lig.

DK 170071 B1 22 coii γ>·ιι r^ii en i i loii m i i fv. o o o o o o σ +l +l +l +l +l +l ™ CO h- r- o r- 05. .

UJ r- t— .

M· CM CM

inocn int-m t'-r-m m- r- oo cm o cm t"- o r- ooo ooo ooo ooo ooo o o' o ' ® ^+1+1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1

v ® 'iCMN O'· CO CM <3· LO Γ-- LO LO O 00 r- lO O CM O

* »s «»» *» «*. *» v «*.·».·» ^ O O CO O CO O 00 O ^ OCM 'tO't w

E

u c s_ ir

α Ό C0 CO CD CM 00 COt-CO M-T-CO CM CM CO r^T-CO

L· S OOO ooo ooo ooo ooo ooo $= -§j +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +i +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 -Q O LO CM O O r- o LO 00 O N CO OOO O f" -M"

Vi *- t” ·* *** t“· *· ** T” *“ *- v »s S S S V S V

® o r- 00 t— 05 r“ O' r— 00 Or® 05 O CO

J U_ r" Έ +j Φ H £ Η ω ΰ οι Η 0 Η 1 (U J°

Λ MD

(d * | ^ C _ +->C — +J C — +j C — +J C — +j C_ 1.

<D

£ 0) CS> Φ Ό .0 Ώ

Cj Φ ·- Έ v > σι -c <o ^ '{r Ϊ ^ CM OO CO -i CM _ ir c *- *» - ·- *. r rat.

□ w| CD 00 00 CD CO 00 +-im C ω +-> > g P P o £ u υ «2^ — °0 oo C5 05 o) r- rr r» ,E .E £ 5} £ -D CO CD CD cd o υ Sc> 5 m ffl m m | § 11 " " ^ ^ v w v_> w ·η +j +jC_ LL C r- r- 00 00 S Έ. * DK 170071 B1 23 I betragtning af den antitumoraktivet, der er observeret overfor eksperimentelle dyretumorer, og manglen på unødig myelosuppressiv aktivitet sammenlignet med mitomycin C, omfatter opfindelsen anvendelse af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse til i nhi bering af pat-5 tedyrstumorer. Til dette formål administreres de systematisk til et pattedyr, der har en tumor, i en i det væsentligste ikke-toksisk antitumor effektiv dosis.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse er primært beregnet til anvendelse til injektion på næsten samme måde og til nogle af de 10 samme formål som mitomycin C. Noget større eller mindre doser kan anven des afhængig af den særlige tumors følsomhed. De kan let distribueres som tørre farmaceutiske præparater indeholdende diluenter, buffere, stabilisatorer, opløsel ighedsfremmende midler, og bestanddele, der bidrager til den farmaceutiske elegance. Disse præparater konstitueres herefter 15 ekstemporalt med et injicerbart flydende medium umiddelbart før anvendelse. Egnede injicerbare væsker omfatter vand, isotonisk saltvand, etc.

Alle temperaturer i de følgende eksempler er udtrykt i eC. Proton-magnetiske resonansspektre (*H NMR) optoges på et "Varian XL 100" eller på et "Jeol FX-90Q" (90 MHz) spektrometer i pyridin dg med mindre andet 20 er angivet. Infrarøde (IR) spektre opnåedes på et "Bechman Model 4240" spektrofotometer, og IR-tall ene er »/max i cm"*. Tyndtlagskromatografi (TLC) udførtes på 0,25 mm "E. Merck" foruddækkede silicagelplader (60F-254) under anvendelse af ultraviolet lys og/eller ioddampe som fremkaldelsesmiddel. Flashkromatografi (J.Org.Chem. 14, 2923, 1978) ud-25 førtes under anvendelse af "Silica Woelm" (32 til 63 øm). Opløsningsmidler inddampedes under reduceret tryk og under 50*C.

Eksempel 1 7-r2-(benzy1dithio)ethylaminol-9a-methoxymitosan (forbindelse 1)

30 Via mitomycin A

Til en opløsning af 200 mg (0,28 mM) S-benzyldithioethylamin i 2 ml methanol indeholdende 300 mg triethylamin sattes 99 mg (28,3 mM) mitomycin A i methanol (10 ml) ved 0 til 4*C. Den resulterende opløsning omrørtes ved 20eC i 2½ time. Reaktionens forløb kontrolleredes ved TLC 35 under anvendelse af et 10:90 vol/vol methanol/chloroformopløsningsmid-delsystem. Reaktionsblandingen koncentreredes under reduceret tryk til en tør fast remanens, som ved flashkromatografi (35 g silicagel) under anvendelse af 7:93 vol/vol methanol/dichlormethan (800 ml) som eluent DK 170071 B1 24 gav titel produktet (87 mg, 59%) som et rent amorft faststof.

h NMR (90 MHz, pyridin dg, δ): 2,08 (s, 3H), 2,74 (m, 3H), 3,16 (d, IH, J-6Hz), 3,24 (s, 3H), 3,40-4,20 (m, 6H), 4,04 (s, 2H), 4,56 (d, IH, J=14Hz), 5,08 (t, IH, J=12Hz), 5,40 (dd, IH, J=6, 12Hz), 7,44 (bs, 5 5H).

IR (KBr), i/max, cm"1: 3440, 3350, 3290, 3060, 3020, 1720, 1635, 1560, 1325, 1060.

Analyse for C24H28N4°5S2:

Beregnet: C, 55,80; H, 5,46; N, 10,84; S, 12,41.

10 Fundet: C, 55,08; H, 5,31; N, 10,52; S, 12,10.

Eksempel 2 N-r2-(2-aminoethyldithio)ethy11acetamid (forbindelse 2) 15 a. "Bunte"-saltmetode

En opløsning af 695 mg 2-aminoethanthiosvovl syre (4,59 mM) i 7 ml methanol indeholdende 318 mg (7,95 mM) natriumhydroxyd omrørtes i 10 minutter ved stuetemperatur og afkøledes dernæst til 0eC. N-acetyl -cysteamin, 357 mg (3,43 mM), sattes til denne opløsning, og opløsningen 20 omrørtes i yderligere 10 minutter. Den resulterende uklare opløsning fortyndedes til ca. 60 ml med methanol, og denne opløsning gjordes dernæst sur ved forsigtig tilsætning af acetylchlorid (624 mg, 7,95 mM).

Den klare opløsning inddampedes til et voksagtigt faststof, som anvendtes direkte til omdannelse til forbindelse 3.

25 b. Sulfenylthiocarbonatmetode

Metoden ifølge S.J. Brois et al. (loc. cit.) anvendtes. Methyl-2-aminoethylsulfenylthiocarbonathydrochlorid i methanol opløsning behandledes med acetylcysteamin ved 0*C. Omsætningen, der blev foretaget uden 30 triethyl aminaccelerator, var praktisk taget øjeblikkelig.

Eksempel 3 7-Γ2-(2-acetylami noethyldi th i o)ethyl ami nol-9a-methoxymi tosan (forbindelse 3) 35 Til en opløsning af 100 mg (0,29 mM) mitomycin A i 4 ml methanol indeholdende 200 mg (198 mM) triethylamin sattes ved ca. 0eC en opløsning af ca. 400 mg af 2 i 2 ml methanol. Det fremkomne bundfald fjernedes ved filtrering, og det klare filtrat henstod ved stuetemperatur i 4 DK 170071 B1 25 timer. Opløsningen inddampedes til en tør remanens og fl ashkromatografe-redes på si li cage! (10 g) under anvendelse af gradient elueringsteknik-ken (4% til 8% methanol i methylenchlorid). Det ønskede produkt var den hurtigere løbende komponent i den blå zone, der isoleredes som et amorft 5 faststof, med en vægt på 45 mg (31,5¾). En analyseprøve opnåedes ved at triturere faststoffet med 5% methylenchlorid i hexan og tørre faststoffet.

*H NMR (100 MHz, pyridin d3, S): 2,06 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,76 (bs, IH), 2,80-3,20 (m, 5H), 3,24 (s, 3H), 3,60 (dd, IH, J=12 og 10 2Hz), 3,70-4,10 (m, 5H), 4,54 (d, IH, J=12Hz), 5,04 (t, IH, J=10Hz), 5,38 (dd, IH, J=4 og 10Hz).

IR (KBr), umax, cm-1: 3420, 3350, 3290, 1720, 1635, 1656, 1330, 1060.

Analyse for C2jH2gNNg0g$2: 15 Beregnet: C, 49,26; H, 5,67; N, 13,68; S, 12,51.

Fundet: C, 49,33; H, 6,04; N, 13,20; S, 11,48.

Eksempel 4 7-Γ2-(octyl dithio)ethylaminol-9a-methoxymitosan (forbindelse 4) 20 Via 7-substitueret amidino-9a-methoxymitosan

Til en opløsning af 60 mg (0,15 mM) 7-(dimethylaminomethylen)amino-9a-methoxymitosan i methanol (1 ml) indeholdende triethylamin (0,2 ml) sattes 139 mg (0,54 mM) 2-(octyldithio)ethylaminhydrochlorid. Opløsningen henstod ved 0 til 4°C i 48 timer. Tyndtlagskromatografi under an-25 vendelse af 10:90 vol/vol methanol/methylenchlorid viste dernæst, at den grønne udgangsforbindelse var blevet forbrugt, og en større blå zone (RF * 0,6) var synlig. Opløsningen koncentreredes under reduceret tryk til en fast remanens, som flashkromatograferedes på silicagel (12 g) under anvendelse af 20:1 vol/vol methylenchlorid/methanol som elueringsmiddel.

30 Titel forbi ndel sen opnåedes som et amorft faststof (27 mg, 34%), hvis *H NMR sprektrum (100 MHz) er angivet i tabel IV.

Eksempel 5 til 22

Anvendelse af forskellige dithioaminer 35 De i tabel IV angivne aminer kan bringes til at reagere som beskrevet i hvert af eksemplerne 1, 3 eller 4 til dannelse af forbindelserne med formlerne (I) og (II), som identificeres i tabellen.

Analytiske og spektrale data for nogle af de foregående forbi ndel- DK 170071 B1 26 ser samt for nogle af de i tabel IV identificerede forbindelser er angivet i tabel V.

«

T

DK 170071 B1 27

Cl Ό 0» W Ό ε w o 0 *M Ό x> W W ·

0) 5 <M

υ w ή

«3 in S

W 10 o r-l 0) «0 w

O) Ό >ι Η G W

•D —t £ o w W Ό —I >u -u CO >1 lu w -C « M · C - W ' W 3 — -C U . 0J - >i D tt 0 XI tu Λ c tt W W Cl · O· Cj 0) — 0) W -O £ *» . — >1 · £ · — ig ig ; UJ O'O X d<

w w W W W W O O

W W >,*0 £ £ . £ . ^ ΠΊ wN-WWXIXlA·^ n 3 C ' 3 '>i ' W w g ·£ ° »α)££·σΌεε

_ J, U £ I *1 W W t I

^ > <0 ft G ® Si >i * ^ — c O £ £ ’ Φ w W W C x)Xl W Η H >,>,>, w 01 0) >i >i (U .* js £ £ E O O £ £ C ro xixi*7«j c c · £ · *> s_ (DOiojoii w w S g m £_ O O O IN ε E o : o _ i: c c’cw w-« c· c E*~ -Η *H -Η I It W w £ εεε« in in ε ε >5- C ΙΟ«« — — —' ffl «

_ O <1111 II I I

•W (N IN · IN ‘Z - <N (N-n- IN

ni S

5 ε I . I I I II I I

<< ^ psj (N (N <N <N CV C'i Oi Φ ""in "In "in ""tn ""in '“in ^ in

»V, «η SSSS S JU

^ Η. ΰ ΰ ΰ ϋ ο ο ο < Τ . . . 7 7 7 7 ο ί α φ ί_ Φ Ο) Τ φ 5 « - t- <Ν I > w ί ίΝ , Λ Λ — υ >. £ § Ην /Γ\ Sr ks/ < — G 3 U S ( ? Ο Τ t- Z 0) A n U \— / m in

IV IN £ I SO S O

“ s ft e u s υ z «

E WHS WWW

i_ hhhh^ww h w

£ V

(0

4-> *H

1 £ Ό O · mvor'co uio w in

£_ i— WWW

O. C

DK 170071 B1 28 © ΙΌ « © « —( -u « fl T3 n C , c •W-H <-!©—< ^ _ 6 6 3 ® « g ® C iq « «* xj **5 2 Η n ·< > n · « ~ £ C -< I Ό £ >« ® £ £ > χ> »o “ *r Ό 2 xijjxiac« ε £ ·£ £ 2 2 2 c © > > £ £ Έ 2 2 2 Λ © S «2S.a f £ ί ό o a e >- g £ 2 2 2 2 2 2 -I I 2 5 ί ί ί «55- I 5 ?· 3 XIXIJJ I ^ *H " £ J, *£ «« ® «"*>> £ a a r +J§ C c —< · ^ xi x> u , ..41 g -° C *h —( 6 >t a o® -* w > g rae ε ε«λ o o£ S g* ~ ° 4-> © «5 © N -U C C« „ £ £ £ ^1 I ICO-H·*® S'nS'c

0J<N Μ «Ν « O ' 6 E 5 ? 2 I

"Jwwwjc © © £ g o£ 7 a' > 1 o -; 1 1* £ 2 H 2

,£— — — .u © — wjj f *7* ?T

5 z z z c <n tn tne ^ w N w <

1,1,11 I t t I

S ~ ~ J? ~ J? M W M W

3 3 3* S1 S* S* £s ' ^ H H H δ δ δ u

< 1 ' ' iii T T T T

t \ «Ν W i-l «1 «1

** ^ >1 S Z

(N (S i. νβ VO

M = S XJ CJ . O

o- i o . u z _Γ· 01 *m —’ — a == . S* ^S5S® CJ O rs I 7-

L. *s4 Z Z C I SS I S 55 Ό W

<D = O O ' ."« «« * £, -Τ' £ — O O CJ fsi 2 O C O <·< r: >> a r ^ i ΰ L" ^ a O « O 2 i 1 00 s s~z »„* > f Λ f -z *> o t r o o o I ! > *3. 2 n rs u n η 'T · A n/ O' f- ve S O 1 s 2 — / \ * ££ CJ CJ Z «r CJ CJ O * w (U _, c m hm www2

£ Η H W Η Μ M M.WMW

O

LL

4-> a Ό O · n in vO f» æ ^ ^ ni

S_ l_ *-< »H <H *Ί ^ " M.fN«N

CL C

DK 170071 B1 29

Al Η *0 >l Ή O X ·“ :

H 4J H

O V 3 M O I » 10 C Ή

I Ό -H *D

—> -η ε h E 10 h -* Γ1 £ N >i C.

*1 EC O

<u Al O l-i ^ ja λ a 0 ** w o

Μ - IB - C

X O U ' i

*1 H >1 *D

-I £ · X . -I

•g Al ' O - C

•-t -η £ « >, Ό JJ 3 £ -(C! D> N «

Al >1 I - · SS

g £ IN . <*> . U O

j_l O Al -U I S

(- c e C) H H 102 js -g ,§ g £ £ ?8o 5 ? 3 1 S S ί ="f~z fO (S O o*h o us

<D U cw c <N U

£_ J U I «Η *·< ti fS

r* oi >i n es ε u s

.— — c. — ββ) β 2 U

C II I I *H I rVH

^ ,-1 IN IN IN »O <N SU

1 II II

IN IN IN IN IN

<vl ~PJ IN IN JN

r£ D ΰ D Du < T T T . T T - rs <N ™ .

oo ·* }

cz ™ « , H

.0 ϋ ^ = S— w fv) #· «2

CD ( I S (N O

aj i^\ = u z-z I I i = ·* I—1 M °=H = ?

< W sT ζ=ϋ H

r- '-' IN IN H

ai u s u

IL

<D

C Η H

£ H HH HH

O

U-

+J

□ "η . n *w m i« r-

£ J_ IN IN IN IN IN

O. C

DK 170071 B1 30 ω Ό S? <u ~s.

E X= xs ro T *σ o 5 Ξ ® u c > ro c = Φ ro * M— S_ 5 ® -i ro £ £ 2 > σ

S 2 2 S C

- js u u JZ Φ >> - O* 5h >t CL "Ό s : 2 - f· . f· g Ό S · i 7 7 é »

0 c o o c E

U -X w u ._ -J Ό JJ " T3 φ c 'j- c c Λ _ co 1 · i i ro t~i £ " n " +JCMEC2 -1 · "i t* ro . £ C* ij >1 * Si« Si >i > <u "v X « X « X X ._ © -μ rf· jjO JJC —> 0ί ΓΤ) ~</)rvt

TO o -O . - <UO · Ο» Ό - Ό p 4) W

Φ O -w O *« O n O *« ^ t— o s_e<u c«-. c«-. c<« ro _ )r. ιΛ C“ «**·—( -*-< «—( ·*< ^' υΦ| .-es es es es s_ T *- r-

Cmw row row .«o« φ „ © (M

5l“< 1-1 I— i~* .2 > <~> < <N Ό <N Ό CM*0 <N Ό +J - o in S ϋ - .

ro c U α

dj o Φ <*- O

*3 __ O

I I I 1 "5 « ro 10 (N OJ «Ν IMG— S' o;— — — — ·- >- > ·

V (N IN _IN <N E c O

<t u Φ u ° "S SI m Z

“ ~ ~ ” ε g· S Ϊ i I % i! ϋ l_ +J ^ CO® - _ !\l r ✓"n rz c CO _ cu *r

* r. , C ™ b I

J6 ^ Φ § lil ? i" S £ ° f : s s « i « E **- ω c o

Om t-ι M M Si. S £ Π) U- « « « ^ £ ro g5 C Φ *7 E +j ^

^ · — (D W

S S- > 3 α u. o > T3 p * es cn o m i- E m rs η nif* 0- C * DK 170071 B1 31

O ΙΠ CD «Τ N (N

CT» ^ vO ftp ri m • , · · « ·

r< <s N N fS IS

1 rS rH »“i ·—(

MM MM MM

O 05 un W O

^ ts r** r-

O O ri <s O O

ι-ί *H «Η ^ iH r-l

2 2 2 2 Z Z

ug p. n cs n il h o <-l n *r r* (ft · · · >, r· iø »o m m s· C *" “ ~ ” m ·* ·· ·* *· ·* “

tlH ^ σ\ η (n vp H

q n· o H cd o 4J · · · ♦ * · m in vo in ^ •q mm v in tn

C J u CJ U U U

L * * * * * 0 £H ^ tb P &< .

^ v * * * * * * * *

Λ O O O O O O O O

_J Π3 cn<s<N n to ft w n njP rN n e\ in cm r- r-j Γ1 Η H CH H ro ph ph <v - - - * * ·* ‘ -

,_ Λ1 o O O O ΙΛ O OOO

1— 'P* m<Nvo ænvo in m vo *" ro o> tn cNteo n o\ ui ·

fH η <N H pihh n N H

^ « « « «i « ft ft « ft o o m o ooo o o in o 1 wo η ιο © Η η *r to n vo (Y £ ^ o vo o r* ro *r o> to ©

*(J P0 fM Η Η Γ1ΗΗ Π N Η H

% O - -* r* * ό no-4 • —. — * * s o s

Η* N *r* —ft —ft CD O * * pH

.U © S * in —« NS ft t H η·ο* ·. -p © **r m * n S Γ1 CH · ^ Pft % -ft. id · S ^-* * <n S Ό S γ* h * * © % * 5U —ft (£ π Ό O · S- S * H « n s « h C« w

pH <N * Η H —* S w H —ft pH CJ ·* O

—ft S* HOS* £ * ft.ftft-;**HS*-* <N * Γ) HJ —* * * ** · α —ft pH *σ *0 pH N * * «Ό —» N ua —ft tN m

ji s Ό * S Ό Η Ό * vo s «fiSH

wr)*^r^£*0 w ** g ei — n·* Π Λ H O —' J-> H <N ft NO *^ · tO «f —ft

/—J γη * Λ · ιο © *—' p*p*mo^r* r**iN

«o · o n « CH VD * * S · H O · β N S

H w VD n · © ^ <N m ro . * Η ΓΗ ^ f* ^

0} ^ Γ- Γ- * ^ · *P —ft 10 · H

+-> * H · p** * I ΙΛ * * * * I N * * <N n <0 Jr —*» · CN N —» O S —ft g —ft o S — —ft · * "O ^ SM S S co * H s w s r* rs H S Π ft s

ro ft.fft.ro·—. Γ0 O <N · Η H —ft H

fyC * —ft. Η N * Η Π ft ft N

ZZ * —ft N * * S *0 * · * % Ό * —. S * N

Ό 6SSKcd*<n*o b n * ϊ ό tn S *r *0 S

2*T* «— Π Γ- ΓΗ —’ —. H .*-* w ί w ^ ^ ft— n H ^ M

r“ r- ^NOCDo^rNr)^* rs h >« ©ftftftfsts*^ e ø t s % n o * * in X Q · £ S JJ · <N S « · · · M »o · · £ S · * ^ ©ft— ΓΗ-ρ’ΓΟρΗ—<in N (S η η w tfl CN w h vo i c 5 o ii w O <u *lr *in Λβ

U. XI

DK 170071 B1 32 et © ^* ri r* <N CD 1Λ tO © © * n · · · · O «Η C4 ri o

Η O ^ Η H

» rH ·* *> te te

03 *. W W i W W

OT

i-( -* ΙΛ <N «-t © *

© Ct te (N Ot O

é 03 « * t* «

•Η ΓΝ CN *H -K

^ Ot H ^ ^ % % % « * »

Z Z Z Z Z Z

«* ·% ·» *te ♦· ^

<D VD Γ- ^ fte Γ*» <N

0) <n co © o tn cd s, * · · · · · zZ © © m in in m *** J? J? ~ J? Jt #te kte K ·* *te ·» n © © © m *© rj M ts ot ot m r* W · * · · *

-Jl: <N <N Ot CD © CD

u mm 'r v

□ OU U O O U

S- · ·

Oh* U* · · · · H fa H fa - - * * * x om© o o o o o m m d h w ot in <n © rn m c n h n n n <n io o ^ o fH <h nrKH n ^ ^ *- o o o ©o© ©om

tn n « m *-( © ΐβ η (N

i- m ct in mr-m n h n rj<N«-( rj ^ »h r> «η «Η ^ k % « % % « % % k vr ©om© oomo ©o© i v in ri © n η n « n <n in fV P t at tf o co vo o *rctm

t-H u r> (N ^ n ps *h h m<NH

* ^te*0 te <N * <N ^

» -te £ »u m S ^ te *U in S

#-k. zz r* ^ · *o · r* s n <n vo « cn te« n © m" rv ' te ^ »r t » — · · o Ό S * o * * » wnin » in Ό n * » . vo —. 2 — z » s m o m ^ N *Η Π <0 in in in » «— n sø . z Ό * <-i · <» n ·.·»· o *a » * «. xi <-» .»nus » o s Ό ^ m —> 6 —' m

IN xl Z "· «> Z <-< Ό Λ S — » S

— * ^ ·-( — sr * — * SØ — ΙΊ © O IN

• SØ Ο ·* « SØ S · «Ρ SØ O · «< _ © z * «-t*.ZO©<-t»rtsø r~ »· · ui z · »s » z · E •-i w · · · w ** » Ό f« N IS H IN*" f* T » » Γ> IN — · SØ m - O * P> XI «Γ o — ri - ό» *—» •.©•e·*'-«·· «.is^-m·.

m »« 6 - — SON -~·Ό«—.σιΖβ — <NSS

4ϊ "Π “ ϊ n h “ s 2 η — ϊ in » n z m z <r t-i U β η h © in n es » *r . · n «rx< f- es · · ιλ <-l » n «r p« » »-i - tt - · · n *o · ·. ^» . n » » ·*Λ *Ό

^tsHE »0 "r * to Z n 2 E *S » nS^SO

*— .2 i >— » — sø «-»rt 'r *— »— <h ^ >— mrsi-i*— 2i.©<N«^0« SPI * <-l O N N IN © ν.ΌΓ'Ν'β*·»* O » λ ©2»S*H»**«r ' -r n · · s · s s -18=..0100 ·Ε=*σ· ^ o is o m π h in — πινπ^>— i-ι in — ι-ι — »n

C

o ω w X2 (Λ ·*,

ί- ~ X) «I X

O <1) r*» cd ©

li- TJ

DK 170071 B1 33 r) tø n *4 ci r* es o vo » « » < * * fy *H fs| CS « #-4 Μ Η ·Η «Η H ^ % » % » ^ % 03 03 03 10 03 .03 *« *% ^ ^ ** r-< æ N H Cl 03 oi æ in u> Γ' 1 · * · · ·

n -i O O fM (N

H <-i ·Η Η «“t .H

z z z z z z ·« *« ·· ·* H ^ o <n o <n o m di λ ^ o m iø m tn , . . . « .

>. tn v in ιί) «r ^ ra s s s s: s: = c 03 ** *· «* ·* ·» #* 4— r% r- rs» o m m

O ^ r> «-< n (N

+-»·.* · « * 4 cn ej ve n o o *Π m ·**· in t n in -r «— ^ ^ — O U ϋ u u o L . . · · · (J) H b HU- fc< lu X« « ^ ^ ' * o o o omo omo 2 β η o o m ic o *n tø c tNOO rn o o n to © > m *h «-ί η ^ H «-i m H «-< v k « h « « —v, o o m o o m o o o < in (N <v ' to N n tø <n ^r rr n r* <*> n r- n m r- n .

LU m H «"4 o ^ H Π *-4 *H

^ ... . . . ...

^7 oom o o'm o o in 1 _ n m m t » «1 « v m ££ C «r σι m ·» i> in » oi m

_ O η η» ^ m η «-i <n m <H

^ k « ^ ^ *“ rt H <0 Η H *4

eo ·»* ^ N CO

o - «>· to <N . O ‘ * A* K © - * © • »C *0 n r* * Ό S ^ μ · *o *o »O w * · fnO^'^r·-^ m *ø *— · w fy ι/Γ 05 *** <N O w ΓΝ m ·. O m ^ o o · * %om A vs » » « a tn · tn o iø * ^ S « ^ to SS * n s · —.

η n n m ·» *> f-tn n ^ «.s« * % s o «, % A fy p* % % μ, K #·» * * ««· fS · « ^ S ^ m^SS S « —* ~ æ „fi S n * .0 S n * *r jas n w *. o *w’ m ^ *0 n ·. % % S H <N % *0* *· s —* —kJ f*k fc £ 4_( « * β - JJ f*· k. £ ^ N ^ cn . « ^ r- · tt t: o w * « ^ ss

^ fy w (S «. N ^ β Η Π Al Γ4 ^ O » (V

oj o «u » r<io · u 4j « (s ♦ w ^ *. m · · tn e * <n · ^ *

Π3 _if · rn <y h ^«n*0 5 -—· · m ·τ * *J

ή T3 sn oss s n w ^ cr s η o o qj

w r> » · «s m % m «-» n ·· * JJ

-s c « ^ in ^ » #* m N o *m*w or.- . N *^N»S«S .-~N S« mss»» b s s » n w »as - <-t s

“·— - n * « « *— *n ·ν ^ w m » — CT

i- ^ >HN ·—I > 'T n* »-IN* >. o. ts* O· ‘ *.«P1 O SUtf χπ · g » « s · E » S S · •Ε-νΌϊί q <N —' iS ^ ^ <S <N n ^ P- (S — <N ^ —' — c P 03 Si Λ *°

i- — o ^ fS

O <U 3 -< -<

U- XJ

34 DK 170071 Bl

IN U"i CN

O O 04 c0 in m ri ol ro n 5

«h «-< tfp *-h «-h cfp ^ <*P

* * i * * S ί * S..

roi'ioo ?2o S£° i? ·» ·» sh «ήίό^ "ί » y > o o o — % * LU *» li_J * tyj Π3 X X ^ =x xx ·» ·» 4-^ <0 « f* 0) rt«>ø r* r* Φ c 7— ro m ij «luijj % ° « «* 4 » g, ^

<Λ Ir « ζ? μ ^ ^ C4 ^ σι <N

T-t *rH rH ·Η rH *H »—l ; t? ri ^ ooHu

CUCJ^c^ u ^ M w w M <N

3 0 tU 0 tU 0 JU

ØH. &, C. ^ H Cm ^ W HCuC-w

X

(0 k ·> s % ·» * «·«**· £m m o o in o o o m co ro m σ\ «-* co <n m

> rs o v 04 0“ Γ0 <N f-» cO

Γ0 rH rH rO rH rH <O *·* rH

s % « « ^ » ·**·* o o o o o o να o o o t- m n h \o io m m m m ff\ ro r- m o m cn m *n c\ m

UJ Γ0 rH rH rH fO 04 rH CO 04 rH

V* **·_%%%% %·►·► ·»*,*.

vw/ \ o o o m o uo tn o o tn o o i vo^»va-m ip © ro \p \d vo ro vo *V C ^ cn tn ro **· *-h vD O o \p o

•"V- “ ro 04 rH rH ΓΠ rO rH ΓΟ Γ0 rH rH

o* ** * * H «>—* * *M r·* · —* N ^ XX s fO N X »U « —

iHCO * rH X w X M

«* 04 04 —,·»%* * rH 04 S

* · « X ·«. X ^ CO

XX OH*CO rH X rH W β X « rH · . ΓΗ rH (T) w rH X «—» rH 04 rH U*1 ·

«► * rH «► ·* *· *» 04 rH CO

* * — ΙΛ X —* W ** Ό O» PO *» * ^

Cfl « X · rH X Λ tfl »O · ♦ tO *► H —* X *

w Γ4 v rH *—* XJ ·—' 04 Λ X X X rH X

">—* fO *» in w> O rH WrHrHrH

r*. 04 ·» ·. o ·» o» Hf O * O* rH *· f*. « hJ * Ό hJ *04 » % Μ f*· «► · *· *0 *» • ro *Ό k γη · *r s n · Ό nr* jj Ό Ό 04 wXO*H ΓΟ rH x 04 *—1 2 3 www

«fc P* Hf« O- * * rH o. 04 ro O

*.— ©—<·· —,«*—* flO ·. vO X rH Γ0 40 —» X · · W O* X —i X TD · r-% * rH · · ·

X rH fO rH ·-< X 04 ^ O XfO U1 Γ* CO

rH rH ^ Γ0 O rH rH ^ % % r^ «* % m % »O ^ *» yj «—s *» X X tO * hJ · * * —* »o —. —» —* E Λ ^ N rH 04 «Q W Ό ♦ N 6 S w N K X *“»

—vi ^r X X ww^ X «—'fOfOXXrHW

o» p· ^ * m h* ·» co o x ^ «-4 rH O 04 HJ e rH04Ctr-rH rH «* · fs. <η *.

· * · · ·—' » · * · #4 · · ΰ) HT « « Q

w S « m N h· O N <N ro Π0 X 04 ^ 04 O w · tlir rH rH ro HP^rHrHU^Hf

Π3 -Γ « ^ ·. · · «k · *. 04 ·« *,04—» CD

7-lvJ —- X m Γ* X —* r» · X * * ♦ *

w X * X X rH X X X rH rH X X CO 04 X M X

f- ΓΗ 04 rH %% fOCHrHrH fH fO rH X rH

Q^.X ^ ^ Λ ^ ·» ** ^ » h ^ ^ ·> —> hH *. 04 —» *· 2^VJ W Jj Ό ·υ X X rH· (0hJ*ON*O e to X *σ *o · n Ό ZV «—WWW wwwjgww ' ro ^ X ^ •-O ioOoxro^ ro *r o tom co r^m ro

>*00^0 · · Ό O rH vo rH to tn O * O tfl ^ rH

XZy « * · «not) *···· · · Η · · X « « H (NmrO^rHrH^ Γ4 ff| Γ0 ♦ 40 CO 04 — PO rH CO Ol rH s^i 2 c 3 ω t ii dl <u Λ o O) CO ΟΊ o IL TI n <n n DK 170071 B1 35 en *-< v σ\ • · ^ m

^ ** dP

* * I

ro ..

CJ CT> rt o tf) cn ro v · « .

^ «*> » y — o ro ·» % m c = = ro .. ·.. +» t CD O' 4)

0 ·"· 1-1 M

4-* · · di 1 S * I h" c tr * n u s. om (3 ·· ·· a; u w H £n. w-

C

's_ > α S g> O O ΙΛ > CO <N ΙΛ *τ-ι οι f* »Λ .21 ^ fO «Η *-H J_ ^ Ό i- W*J O U"> U*> S.

/γΐ m cd m

en σι m o _C

^ m n £

^ ' ^ % *. «> (TJ

* ^. m o o o <D

(V F VO \0 tn *r ^ u- n «0* O \£> m C.

— u ro tn «η Xs C) O) Ό 0) Ό

<D

*. ·* rs —. c Λ » ΙΛ M c χ «4 m « x _ f-< - x ♦ eo in S «β» ^

·* r* *r *· <D

ja ^ x *4 x w ' *d ·» *^ x ^ *x

\0 x W

r* so *h * o * Ό ♦ id ·0 * r f* · * *3 O *~ m φ w r-f <N ·—

·» - w χβ m .U

«-Η «* CD m - · *_ 2 #·% Φ « ·*· Cl r\ ♦-i X · m r-i fT.

m ^ ^ ·* % % Λ CJ «* *· —» »O N ΤΞ_ι_» /^J jDW^*e4'-'X Π3 +T? ϋ — s = <n α) 40 » cn m crv o rn Ό ^3 > ♦ ♦ * » p* c £ ^ f mtf rimers - 5 C T 3 5 rø —- w * *4 3 ^ i- Il -3 TJ ^ - - o ~ = S- 3 0) ^ S-

Il * * - 5 Ξ i s tr " i i τ £ £ i £ ά ~ » S. “ , 8· > «Γ <N = Q · - (Λ V v

X/-s O ^ O » Ό /y^ 0) (Y

rH v es m »-< m x ^ u_ ^ ♦—· 2E

z ! s s 2

N — O N

X N '+3 O X

Σ I é h 5 O ro 11 o i o o > . to c r- σι ii- h· co 7j ro S ” Λ ...

°-o H roxiuxjro ° ro 3 DK 170071 B1 36

Tabel 1 Addendum

Inhiberinq af P-388 museleukemi 5 Gennem-

Maksimal virkning Minimal snitlig ......-.......... effektiv vægt- * 1 1 ?

Forbindelse nr. % T/C Dosis dosis ændring 10 28 (BMY25828) 220 (270) 6,4 (4,8) < 0,4 -1,1, +3,2 29 (BMY25829) 170 (270) 3,2 (4,8) < 0,2 +2,6, +2,7 30 (BMY25827) 200 (270) 12,8 (4,8) < 0,4 -3,2, +1,0 31 (BMY25830) 170 (270) 3,2 (4,8) < 0,2 +1,3, +0,5 15 *mg/kg legemsvægt 2 g pr. mus, dag 1 til 7, ved maksimale og minimale effektive doser 3 CDFg mus af hankøn

Claims (15)

1. 5 DK 170071 B1 37
2. 1. Mitomycinderivater, KENDETEGNET ved, at de er udvalgt fra gruppen med de almene formler (I) eller (II) B O O R7A1>:i -SS-AIk^y . I 1 1 /oca, °Yri> og 15 Η’ O ? R-SS-Mk2-l^Xr/xx____z ✓ ^
3. 20 I (II) ^ J) o -^ hvori
4. 25 Alkj er en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med 1 til 6 carbon-atomer, Al kg er en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med 2 til 6 carbon-atomer, R er hydrogen eller lavere alkanoyl,
5. 30 R7 er hydroxy, amino, alkanoylaiiiino eller phenyl, Rg er alkyl med 1 til 12 carbonatomer, phenyl, ni trosubstitueret eller lavere alkoxysubstitueret phenyl, pyridyl eller ni trosubstitueret pyri-dyl.
6. 2. Forbindelse ifølge krav 1 med formel (I), KENDETEGNET ved, at Al kg er ethyl en, og R er hydrogen.
7. 3. Forbindelse ifølge krav 2, KENDETEGNET ved, at Alkj er ethyl en. DK 170071 B1 38
8. 4. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den er 7-[2-(2-aminoethyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan eller 7-[2-(2-acetylami noethyldi th i o)ethyl ami no]-9a-methoxymi tosan.
9. 5. Forbindelse ifølge krav 1 med formel (II), KENDETEGNET ved, at Al kg er ethyl en, og R er hydrogen. _ Λ
10. 6. Forbindelse ifølge krav 5, KENDETEGNET ved, at R8 er alkyl.
11. 7. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den er 7-[2-(octyl dithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan, 7-[2-(n-butyldi thi o)ethylami no]-9a-methoxymi tosan el1 er 7-[2-(benzyl dithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan.
12. 8. Forbindelser ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at de er 7-[2-(phenyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan, 7-[2-(2-hydroxyethyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan, 7-[2-(2-pyri dyldi thio)ethylamino]-9a-methoxymitosan, 7-[2-(4-methoxyphenyldi thi o)ethyl ami no]-9a-methoxymi tosan, 20 7-[2-(4-nitrophenyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan, 7-[2-(2-nitrophenyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan, 7-[2-(2,4-dinitrophenyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan, 7-[2-(3-nitro-2-pyridyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan og 7-[2-(5-nitro-2-pyridyldithio)ethylamino]-9a-methoxymitosan. 25
13. 9. Forbindelse ifølge krav 8, KENDETEGNET ved, at den er 7-[2-(4-n i trophenyld i thi o)ethyl ami no]-9a-methoxymi tosan.
14. 10. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 30 1, KENDETEGNET ved, at man omsætter fra 1 til 4 moldele af en amin med de almene formler (III) og (IV) R7A1kj-SS-AlkgNHg (III) * R8-SS-A1kgNHg (IV) 35 eller 39 DK 170071 B1 med 1 mol del af en mi tosan med den almene formel (V) o 5 3L X .^H2OCNg2 (V) 0 I_U-N-R 7 8 10 hvori R, R , R , Alkj og Alk2 er som defineret i krav 1, og Y er lavere alkoxy med 1 til 6 carbonatomer eller en gruppe med den almene formel (VI) R5
15. 15 R3R4N-C=N- (VI) hvori 5 R er hydrogen, lavere al kyl, phenyl, lavere al kyl phenyl, lavere alkoxy- phenyl, halogenphenyl, aminophenyl eller nitrophenyl, 3 4 20. og R uafhængigt af hinanden er lavere alkyl, eller sammen med det nitrogenatom, hvortil de er bundet, udgør pyrrolidin, 2- eller 3-lavere al kyl pyrrol idin, piperidin, 2-, 3- eller 4-lavere alkylpiperidin, 2,6-di(lavere al kylJpiperidin, piperazin, 4-substitueret piperazin (hvori ovennævnte 4-substituent er al kyl eller carbalkoxy, der begge har 1 til 25 8 carbonatomer, phenyl, methyl phenyl, methoxyphenyl, halogenphenyl, nitrophenyl eller benzyl), azepin, 2-, 3-, 4- eller 5-lavere alkylazepin, morpholin, thiomorpholin, thiomorpholin-l-oxid eller thiomorpholin-1, 1-dioxid, hvori hver af de ovennævnte lavere al kyl-, lavere alkanoyl- og lavere 30 alkoxygrupper indeholder 1 til 6 carbonatomer, under reaktionsbetingelser i en reaktionsinert organisk væske ved en temperatur på fra ca. -15 til +50eC i et tidsrum af tilstrækkelig varighed til at resultere i dannelse af en væsentlig mængde af produktet med den almene formel (I) eller (II). 35