CZ309199B6 - Inhibitory purinnukleosidfosforylasy, jejich příprava a použití k léčení T-buněčné akutní lymfoblastické leukémie a lymfomů - Google Patents

Abstract

Vynález se týká nových sloučenin obecného vzorce I, jejich přípravy, jejich farmaceuticky akceptovatelných solí, které lze využít k terapii stavů způsobených rakovinným bujením T-lymfocytů.

Description

Inhibitory purinnukleosidfosforylasy, jejich příprava a použití k léčení T-buněčné akutní lymfoblastické leukémie a lymfomů

Oblast techniky

Vynález se týká nových látek pro použití v terapii T-buněčné akutní lymfoblastické leukemie a lymfomů, způsobu jejich přípravy a jejich využití in vitro a in vivo.

Dosavadní stav techniky

Léčba T-akutní lymfoblastické leukemie (dále T-ALL) neprošla v posledních letech tak intenzivním vývojem, jako léčby jiných maligních onemocnění. Z toho důvodu jsou potřebné nové a inovativní způsoby léčby a léčebné postupy, které zvýší prognózy pacientů trpících T-ALL. Především prognózy u dospělých pacientu s T-ALL jsou stále nízké a celkové přežití těchto pacientů (po 5 a více letech) se pohybuje pouze okolo 40 %.

Dosavadní léčebné postupy jsou založené zejména na podávání vysokých dávek klasických chemoterapeutik. Těmi jsou například tzv. hyper-CVAD (směs léků cyklofosfamid, vincristine, adriamycin, dexamethasone v kombinaci s vysokými dávkami methotrexátu a cytarabinu), kombinace léku pegaspargase s methotrexátem a kombinace výše uvedených terapií s lékem nelarabine [Litzow, M. R.; Ferrando, A. A. Bloud. 2015, 126, 833-841], Tyto léčebné postupy doprovází silné nežádoucí účinky (ztráta vlasů a ochlupení, otoky, záněty, život ohrožující infekce), které vysoce zatěžují pacienty a komplikují jejich léčbu.

Potenciál inhibitoru purinnukleosidfosforylasy (dále jen PNP) pro léčbu krevních maligních onemocnění je diskutován dlouhou dobu [Krenitsky, T. A., et al., J. Biol. Chem. 1968, 265 (6), 3066-3069], Dosavadní inhibitory PNP ovšem ve většině případů selhaly v preklinických či klinických studiích z důvodů špatných farmakodynamických nebo farmakokinetických vlastností.

Peldesine selhal v klinické studii fáze III, kdy nebyl účinnější než placebo, foto selhání je přičítáno nízké rozpustnosti a špatné permeabilitě látky buněčnými membránami [Duvic, M., et al., J. Am. Acad. Dermatol. 2001, 44 (6), 940-947],

Experimentální látka CI-972 selhala v klinických studiích z neuvedených důvodů [Gilbertsen, R. B., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991,178 (3), 1351-1358],

Další experimentální látky odvozené od Peldesinu, založené na 9-deazapurinech, vykazovaly podobnou aktivitu s velmi nízkou rozpustností ve vodě [Montgomery, J., et A.. Med. Chem. 1993, 36(1), 55-69.].

Experimentální látky obsahující přirozené purinové báze s benzylfosfonátovým řetězcem, vykazovaly nízkou aktivitu, ale dobrou rozpustnost ve vodě [Halazy, S., et al., Tetrahedron 1996, 52(1), 177-184.].

Experimentální látky podobné struktuře Peldesinu. obsahující heteroatom mezi nepřirozenou 9deazapurinovou baží a fenylovým substituentem vykazovaly vyšší aktivitu, ale jejich rozpustnost ve vodě byla extrémně nízká [Morris, P. E., et al., Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids. 2000,19 ^1-2), 379-404.].

Rada z těchto látek vykazuje nízkou rozpustnost ve vodě, a proto nejsou vhodné pro farmaceutické použití jako léčivé substance.

V roce 2017 získal PNP inhibitor forodesine hydrochlorid (Mundesine) od japonské národní

-1 CZ 309199 B6 agentury PMDA schválení pro léčbu T-lymfomů. Forodesine hydrochlorid se vyznačuje vysokou inhibiční aktivitou jak vůči PNP enzymu, tak buněčným liniím T-ALL [Kicska, G., et al., Proč. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2001, 98 (8), 4593 4598.]. Jako jeden z jeho nedostatků lze ale uvést nízkou biologickou dostupnost, která u primátů a lidí dosahuje méně než 10 % [Kilpatrick, J. M., et al., Int. Immunopharmacol. 2003, 3 (4), 541-548.].

Výše uvedené experimentální látky byly připravovány převážně málo efektivní lineární syntézou, která spočívá v postupném vystavění přirozené nebo modifikované purinové nukleobáze. Takový postup neumožňuje, nebo umožňuje pouze velmi obtížně, přípravu komplexnějších látek, obsahujících citlivé a reaktivní funkční skupiny, které by mohly vylepšit vlastnosti inhibitorů PNP.

Z výše uvedených citací je zřejmé, že v oblasti inhibitorů PNP a jejich terapeutického využití pro léčbu T-ALL se stále hledá látka, která by kombinovala vysokou účinnost in-vitro a in-vivo s dobrými farmakokinetickými vlastnostmi, především pak dobrou rozpustností v biologicky relevantních rozpouštědlech a vysokou biologickou dostupností v organismu při různých způsobech podávání. Stejně tak jsou hledány účinné syntetické postupy, které by takové látky umožňovaly připravit.

Podstata vynálezu

Předložený vynález popisuje nové inhibitory purin nukleosid fostorylasy obecného vzorce I včetně farmaceuticky přijatelných solí, jejich přípravu a použití v terapii T-buněčné akutní lymfoblastické leukemie (T-ALL) a lymfomů.

Díky inovativní syntéze byly zkombinovány strukturní prvky nových látek, což předchozí postupy neumožňovaly. Tyto nové látky oproti doposud publikovaným látkám vykazují lepší účinnost inhibice purin nukleosid fosforylasy i farmakokinetické vlastnosti. Farmakokinetickými vlastnostmi se rozumí takové fyzikálně-chemické vlastnosti látek, které umožňují distribuci látek v biologických systémech. Těmi jsou například, a ne výlučně, rozpustnost, stabilita, biologická dostupnost atd. Kombinace uvedených vlastností umožňuje i různé způsoby podání látek obecného vzorce I, například a ne výlučně, perorální, intravenózní, topické atd.

Předmětem vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I,

(I) kde:

-2 CZ 309199 B6

Xje funkční skupina NH, nebo atom síry;

Ar je aryl nebo heteroaryl;

Z je řetězec atomů zvolený ze skupiny, sestávající z -CH,-. -CH₂O-, -CH₂OCH₂- a -CHCH-, vázající se do polohy -2, nebo -3 arylu nebo heteroarylu Ar vůči substituentu X podle obecného vzorce I, nebo je tento řetězec nepřítomný;

G je funkční skupina zvolená ze skupiny, sestávající z -COA¹, -SChA¹, -P(O)(A¹)(A²). -OH, kde:

substituenty A¹ a A² jsou stejné nebo různé a zvoleny ze skupiny sestávající z -OH, -OR¹ a -NHR², přičemž R¹ je zvolen z lineárního či rozvětveného Ci-Ce alkylu, Ce-Ci₂ arylu nebo skupiny -CH₂OC(O)R², a

R² je lineární či rozvětvený G až Cio, výhodněji C₃ až C₅ alkyl, nebo skupina -CHR³COOR⁴, vykazující (R), (S), nebo (RS) stereochemii, kde

R³ je lineární nebo rozvětvený Ci ažCw alkyl, s výhodou C₂ až Cď, nejvýhodněji C₃ až C₅ alkylový řetězec, v němž může případně být kterákoliv skupina -CH₂- nahrazena atomem síry, kyslíku, dusíku, nebo Ce až C12 arylem nebo Ce až C₁₂ arylalkylem;

R⁴ je lineární nebo rozvětvený Ci až C10 a výhodněji C₃ až C₅ alkyl,

Rje atom vodíku, nebo substituent, vybraný ze skupiny, sestávající z -OH, -O(aryl), -O(arylalkyl), -CN a halogenu;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Tak, jak jsou zde popsány a pokud není uvedeno jinak, mají jednotlivé substituenty následující významy:

- alkyl je rovný nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec, obsahující počet uhlíků, uvedený v místě použití tohoto termínu;

- aryl je uhlovodíková skupina obsahující 6 až 12 uhlíkových atomů, obsahující alespoň jedno aromatické jádro, a může být nesubstituovaný, nebo substituovaný jedním či více substituenty, vybranými ze skupiny, zahrnující -OH, -O(aryl), -O(arylalkyl), -CN, halogen;

- heteroaryl je uhlovodíková skupina obsahující 4 až 12 uhlíkových atomů, obsahující alespoň jedno aromatické jádro a alespoň jeden heteroatom ze skupiny zahrnující kyslík, dusík a síru, a může být nesubstituovaný, nebo substituovaný jedním či více substituenty, vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -O(aryl), -O(arylalkyl), -CN, halogen;

- arylalkyl označuje alkylovou skupinou, která je substituována jednou nebo více arylovými skupinami, nesubstituovanými nebo substituovanými jedním nebo více ze substituentů, vybraných ze skupiny, zahrnující -OH, -O(aryl), -O(arylalkyl), -CN, halogen;

Farmaceuticky přijatelné soli zahrnují soli s alkalickými kovy, soli s anorganickými či organickými anionty, soli s anorganickými či organickými kationty a adiční soli s anorganickými či organickými kyselinami, či bázemi a další soli vhodné pro fýziologické podání. Jedná se o takové soli, které vykazují srovnatelnou biologickou účinnost a srovnatelné vlastnosti jako nárokovaná sloučenina obecného vzorce I, jsou v rámci rozumného lékařského úsudku vhodné pro použití v kontaktu s tkáněmi lidí a nižších živočichů bez nežádoucí toxicity, podráždění, alergické reakce a podobně a vykazují přijatelný poměr prospěchu a rizika. Osoba znalá oboru bude schopná určit, které solijsou

-3 CZ 309199 B6 farmaceuticky přijatelné; obzvláště se jedná o soli, mající jednu, či více žádoucích fyzikálních vlastností jako zvýšenou farmaceutickou stabilitu při různých teplotách a vlhkostech, požadovanou rozpustnost ve vodě, či oleji, anebo nej sou toxické. Seznam vhodných adičních solí lze nalézt, např. v publikaci Remington's Pharmaceutical Sciences, 20. vydání, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985), která je zde uvedena jako odkaz.

Ve výhodném provedení předkládaný vynález poskytuje sloučeniny podle obecného vzorce I, jimiž jsou (£)-7-((2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-on sodný, 7-((2-((fosfonáto)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo [3,2-ri]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((4-brom-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri|pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((5-brom-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo [3,2-<7]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((5-hydroxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((4-hydroxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7)pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((4-methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7)pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((4-isopropoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin4-on sodný, (£)-7-((4-(perfluorfenyl)methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2ri]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((4-(perfluorfenyl)oxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2ri]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((3-hydroxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((3-methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((3-isopropoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7)pyrimidin4-on sodný, (£)-7-((3-(perfluorfenyl)methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2ri]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((3-(perfluorfenyl)oxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2ri]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((5 -fluor-2-((fosfonáto)methoxy)fenyl)thio)-3,5 -dihydro-4H-pyrrolo [3,2-ri]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((3 -methoxy-2-((fosfonáto)methoxy)fenyl)thio)-3,5 -dihydro-4H-pyrrolo [3,2-ri]pyrimidin4-on sodný, (£)-7-((3-(2-(fosfonáto) vi nyl )th iofcn-2-yl )thio)-3.5 -dihydro-4//-py rrolo [3,2-ri]pyrimidin-4-on sodný, 7-((3-((fosfonáto)methoxy)thiofen-2-yl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-on sodný, 7-((2-((sulfo)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((2-(2-(sulfo)vinyl)fenyl)thio)-3,5 -dihydro-4H-pyrrolo [3,2-ri]pyrimidin-4-on sodný, 7-((2-(3-fosfondto-2-oxapropyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-d)pyrimidin-4-on sodný, 7-((2-(((((5)-l-(isopropoxykarbonyl)ethyl)amino)(fenoxy)fosforyl)methoxy)fenyl)thio)-3,5dihydro-4H-py rrolo [3,2-<7)pyrimidin-4-on, (£)-7-((2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)amino)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-on.

Předmětem předkládaného vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I a/nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli pro použití jako léčiva.

-4 CZ 309199 B6

Předmětem předkládaného vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I a/nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli pro použití k léčení onemocnění, způsobených rakovinným bujením T-lymfocytů.

Dále jsou předmětem vynálezu sloučeniny obecného vzorce I pro použití k léčení T-akutní lymfoblastické leukemie.

Předmětem vynálezu je rovněž farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce I jako aktivní složku a případně dále obsahuje alespoň jednu farmaceuticky přijatelnou pomocnou látku, jako je nosič, plnivo, emulgátor a/nebo ředidlo.

Předmětem vynálezu je také farmaceutický prostředek pro použití k léčení onemocnění, způsobených rakovinným bujením T-lymfocytů.

Předmětem vynálezu je zejména farmaceutický prostředek pro použití k léčení T-akutní lymfoblastické leukemie.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu prokázaly v testech in vitro významný a selektivní cytotoxický účinek proti leukemickým T-lymfocytům. Látky jsou také dobře rozpustné v biologicky relevantních rozpouštědlech a dobře prostupují biologickými membránami.

Tento vynález dále předkládá přípravu látek obecného vzorce II a III podle schématu 1, nebo 2, nebo 3,

-5 CZ 309199 B6

Schéma 3 kde:

Ar je aryl nebo heteroaryl v kombinaci s nezávisle zvolenými substituenty Z, G a R;

Z je řetězec atomu zvolený ze skupiny, sestávající z -CH2-, -CH2O-, -CH2OCH2- a -CHCH-, vázající se do polohy -2, nebo -3 arylu nebo heteroarylu Ar vůči substituentu S podle obecného vzorce II, nebo je tento řetězec nepřítomný, a to v kombinaci s nezávisle zvolenými substituenty Ar, G a R;

G je atom vodíku, nebo funkční skupina zvolená ze skupiny, sestávající z -COA¹, -SO2A¹, -PfOXA^A²), -OH, v kombinaci s nezávisle zvolenými substituenty Ar, Z a R, kde:

substituenty A¹ a A² jsou stejné nebo různé a nezávisle na sobě jsou každý zvolen ze skupiny sestávající z -OH, -OR¹ a -NHR², přičemž R¹ je zvolen z lineárního či rozvětveného Ci-Ce alkylu, C6-C12 arylu nebo skupiny -CH₂OC(O)R², a

R² je lineární či rozvětvený Ci až C10, výhodněji C3 až C5 alkyl, nebo skupina -CHR³COOR⁴, vykazující (R), (S), nebo (RS) stereochemii, kde

R³ je lineární nebo rozvětvený Ci až C10 alkyl, s výhodou C2 až Ce nejvýhodněji C3 až C5 alkylový řetězec, v němž může případně být kterákoliv skupina -CH2- nahrazena atomem síry, kyslíku, dusíku, nebo Ce až C12 arylem nebo Ce až C12 arylalkylem;

R⁴ je lineární nebo rozvětvený Ci až C10 a výhodněji C3 až C5 alkyl,

Rje atom vodíku, nebo substituent, vybraný ze skupiny, sestávající z -OH, -O(aryl), -O(arylalkyl), -C(O)- a halogenu, v kombinaci s nezávisle zvolenými substituenty Ar, Z, G;

P¹ je chránící skupina, zvolená ze skupiny, zahrnující methyl, ethyl, terc-butyl, benzyl, halogen benzyl, benzoyl, trityl, tosyl, acetyl, s výhodou pak benzyl;

P² je chránící skupina zvolena ze skupiny, zahrnující terc-butyl, benzyl, halogen benzyl, benzoyl, trityl, tosyl, acetyl, pivaloyl, benzyloxykarbonyl, benzyloxymethyl, p-methoxybenzylkarbonyl, tercbutyloxykarbonyl, 2-trimethylsilylethyloxymethyl, s výhodou pak 2-trimethylsilylethyloxymethyl.

Reakce probíhá za podmínek, které zahrnují:

protické nebo aprotické rozpouštědlo, zvolené za skupiny zahrnující methanol, ethanol, npropanol, 2-propanol, «-butanol, 2-butanol, toluen, aceton, dimethylformamid, dioxan, tetrahydrofuran, ethylacetát, butyl acetát, dimethylsulfoxid, diethylether, A-methylpyrolidon, chloroform, dichlormethan, 1,2-dichlorethan, benzen, kresol, s výhodou pak toluen nebo

-6 CZ 309199 B6 dimethylformamid;

teplotu v rozmezí 0 °C až 250 °C, s výhodou 120 °C;

anorganickou nebo organickou bázi, zvolenou ze skupiny, zahrnující uhličitan sodný, uhličitan draselný, uhličitan česný, hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný, fosforečnan sodný, fosforečnan draselný, hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid lithný, trimethylamin, triethylamin, diisopropylamin, diisopropylethylamin, dimethylaminopyridin, 2,6-lutidin, s výhodou pak triethylamin nebo uhličitan česný;

katalýzu anorganickou nebo organickou měďnou solí, zvolenou ze skupiny, zahrnující fluorid měďný, chlorid měďný, bromid měďný, jodid měďný, octan měďný, benzoát měďný, s výhodou jodid měďný;

případnou přítomnost vhodného ligandu zvoleného ze skupiny, zahrnující tetramethylethylendiamin, 1,10-fenantrolin, 4,7-dimethyl-l,10-fenantrolin, 5,6-dimethyl-l,10fenantrolin, 3,4,7,8-tetramethyl-l,10-fenantrolin, 2-isobutyrylcyklohexanon, 2-bipyridyl, s výhodou 1,10-fenantrolin nebo 2-isobutyrylcyklohexanon.

Tento vynález také předkládá přípravu látek obecného vzorce IV podle schématu 4

Schéma 4 kde:

Z je řetězec atomů zvolený ze skupiny, sestávající z -CH2-, -CH2O-, -CH2OCH2- a -CHCH-, vázající se do polohy -2, nebo -3 fenylu vůči substituentu NH podle obecného vzorce IV, neboje tento řetězec nepřítomný, a to v kombinaci s nezávisle zvolenými substituenty G a R;

G je atom vodíku, nebo funkční skupina zvolená ze skupiny, sestávající z -COA¹, -SO2A¹, -PfOXA^A²), -OH v kombinaci s nezávisle zvolenými substituenty Z a R, kde:

substituenty A¹ a A² jsou stejné nebo různé a nezávisle na sobě jsou každý zvolen ze skupiny sestávající z -OH, -OR¹ a -NHR², přičemž R¹ je zvolen z lineárního či rozvětveného Ci-Ce alkylu, Ce C12 arylu nebo skupiny

-CH₂OC(O)R², a

R² je lineární či rozvětvený Ci až C10, výhodněji C3 až C5 alkyl, nebo skupina -CHR³COOR⁴, vykazující (R), (S), nebo (RS) stereochemii, kde

R³ je lineární nebo rozvětvený Ci až C10 alkyl, s výhodou C2 až Cď, nej výhodněji C3 až C5 alkylový řetězec, v němž může případně být kterákoliv skupina -CH2- nahrazena atomem síry, kyslíku, dusíku, nebo Ce až C12 arylem nebo Ce až C12 arylalkylem;

-7 CZ 309199 B6

R⁴ je lineární nebo rozvětvený Ci až Cio a výhodněji C3 až C5 alkyl,

Rje atom vodíku, nebo substituent, vybraný ze skupiny, sestávající z -OH, -O(aryl), -O(arylalkyl), -C(O)-, -CN a halogenu, v kombinaci s nezávisle zvolenými substituenty Z, G;

P¹ je chránící skupina zvolena ze skupiny, zahrnující methyl, ethyl, terc-butyl, benzyl, halogen benzyl, benzoyl, trityl, tosyl a acetyl, s výhodou pak benzyl;

P³ je chránící skupina zvolená ze skupiny, zahrnující terc-butyl, benzyl, halogen benzyl, benzoyl, trityl, tosyl, acetyl, pivaloyl, benzyloxykarbonyl, benzyloxymethyl, p-methoxybenzylkarbonyl, terc-butyloxykarbonyl, 2-trimethylsilylethyloxymethyl, s výhodou pak terc-butylkarbonyl.

Výše popsaná reakce probíhá za podmínek, které zahrnují:

protické nebo aprotické rozpouštědlo, zvolené ze skupiny zahrnujícím methanol, ethanol, npropanol, 2-propanol, «-butanol, 2-butanol, toluen, aceton, dimethylformamid, dioxan, tetrahydrofuran, ethylacetát, butylacetát, dimethylsulfoxid, diethylether, Λ-mcthylpyrolidon. chloroform, dichlormethan, 1,2-dichlorethan, benzen, kresol, s výhodou pak toluen;

teplotu v rozmezí 0 °C až 250 °C, s výhodou pak 120 °C;

anorganickou nebo organickou bázi, zvolenou ze skupiny, zahrnující uhličitan sodný, uhličitan draselný, uhličitan česný, hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný, fosforečnan sodný, fosforečnan draselný, hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid lithný, trimethylamin, triethylamin, diisopropylamin, diisopropylethylamin, dimethylaminopyridin, 2,6-lutidin, s výhodou pak triethylamin nebo uhličitan česný, a nejvýhodněji uhličitan česný;

katalýzu formou palladia, zvolenou ze skupiny, zahrnující chlorid paladnatý, octan paladnatý, tris(dibenzylidenaceton)dipaladium, tzv. prekatalyzátory známými pod názvy [4-(di-tercbutylfosfm)-JVýV-dimethylanilin-2-(2'-aminbifenyl)]paladium(II), [(R)-(+)-2,2'-bis(difenylfosfin)l,r-binaftyl]paladium(II) chlorid, [(2-di-cyklohexylfosfm-3,6-dimethoxy-2',4',6'-triisopropyl1,1 '-bifenyl)-2-(2'-amin-1,1 '-bifenyl)]paladium(II), 12-(dicyklohcxylfosfm)-2'-(W-dimcthylamin)-1,1 '-bifenyl] (2'-amin-1,1 '-bifenyl -2 -yl)paladium(II), bi s(tri-terc-butylfosfi n jpaladi um(0),

[(2-dicyklohexylfosfm-2',6'-bis(VýV-dimethyllamin)-1,1 '-bifenyl)-2-(2'-amin-1,1 '-bifenyl)] paladium(II), (2-dicyklohexylfosfin-1,1 '-bifenyl) [2-(2'-amin-1,1 '-bifenyl)]paladium(II), 2dicyklohexylfosfi n-2-(VýV-di methylam i n jbifenyl (2'-am i η-1,1 '-bifenyl-2 -yl)paladium(II), [1,1'bis(difenylfosfm)ferocen]dichloropaladium(II), (2-(di-l-adamantylfosfin)morfblinobenzen)[2-(2'amin-1,1 '-bifenyl)]paladium(II), [(di-terc-butylneopentylfosfm)-2-(2-aminbifenyl)]-paladium(II), [(tricyklohexylfosfm)-2-(2'-aminbifenyl)]paladium(II), (2-dicyklohexylfosfin-2',6'-dÍ75opropoxy1,1 '-bifenyl) [2-(2'-amin-1,1 '-bifenyl)]paladium(II), (2-dicyklohexylfosfm-2',6'-dimethoxybifenyl) [2-(2'-amin-l,l'-bifenyl)]paladium(II), [(4,5-bis(difenylfosfm)-9,9-dimethylxanten)-2-(2'-amin1,1 '-bifenyl)]paladium(II), (2-dicyklohexylfosfin-2',4',6'-tri/.so propyl -1,1 '-bifenyl) [2-(2'-aminl,r-bifenyl)]paladium(II), (2-di-terc-butylfosfm-3,4,5,6,-tetramethyl-2',4',6'-tririopropyl-l,lbifenyl)(2'-amin-1,1'-bifenyl-2-yl)-paladium(II), [2-(di-l-adamantylfosfin)-2',4',6'-tririopropyl3,6-dimethoxybifenyl][2-(2'-amin-l,l'-bifenyl)]paladium(II), [(2-di-terc-butylfosfm-2',4',6'triisopropyl-1,1 '-bifenyl)-2-(2'-amin-1,1 '-bifenyl)]paladium(II), [(2-{bis[3,5-bis(trifluormethyl)fcnyl |fosfi n} -3,6-di mcthoxy-2'.4'.6'-tri/.sopropyl -1,1 '-bifenyl)-2-(2'-amin-1,1 '-bifenyl)] paladium(II), (2-(di-1 -adamantylfosfmjmorfolinobenzen) [2-(2'-amin-1,1 '-bifenyl)]paladium(II), 2-(di-/í'rc-butylfosfi n )-2'.4'.6'-tri i sopropyl-3,6-di methoxy-1,1 '-bifenyl)-2-(2'-amin-1,1 '-bifenyl)] paladium(II), [tri(o-tolyl)fosfin][2-(2'-amin-l,l'-bifenyl)]paladium(II), s výhodou (2dicyklohexylfostin-2',4',6'-triisopropyl-1,1 '-bifenyl) [2-(2'-amin-1,1 '-bifenyl)]paladium(II);

a dále případnou přítomnost vhodného ligandu zvoleného ze skupiny, zahrnující [4(dimethylam injfenyl ]bis(terc-butyl )fosfm, 2,2'-bis(difenylfosfm)-1,1 '-binafthalen, 2-(dicyklo-8 CZ 309199 B6 hcxylfosfín)-3.6-dimcthoxy-2'.4'.6'-tri/.sopropyl-l. l'-bifenyl, 2'-(di-terc-butylfosfm)-JVýVdimethylbifenyl-2-amin, tri-terc-butylfosfm, 2-dicyklohcxylfosfin-2'.6'-bis(W-dimcthylamin)bifenyl, 2-(dicyklohexylfosfin)bifenyl, 2-dicyklohcxylfosfín-2'-(W-dimcthylamin)bifcnyl. 1,1'ferocendiyl-bis(difenylfosfin), (di-terc-butylneopentylfosfin, tricyklohexylfosfin, 25 dicyklohexylfosfin-2',6'-diz5opropoxybifenyl, 2-dicyklohexylfosfin-2',6'-dimethoxybifenyl, diterc-butylmethylfosfm, di-terc-butylfenylfosfm, 4,5-bis(difenylfosfin)-9,9-dimethylxanten, 4,6bis(difenylfosfm)-1 OH-fenoxazin, 2-dicyklohexylfosfin-2',4',6'-triz5opropylbifenyl, 2-di-/c/vbutylfosfm-3,4,5,6,-tetramethyl-2',4',6'-triAopropyl-l,l-bifenyl, 2-(di-l-adamantylfosfm)-2',4',6'trizsopropyl-3,6-dimethoxybifenyl, 2-di-terc-butylfosfm-2',4',6'-triz5opropylbifenyl, 2-{bis[3,510 bis(trifluormethyl)fenyl]fosfin}-3,6-dimethoxy-2',4',6'-triz5opropyl-l,l'-bifenyl, 2-(di-terc-butylfosfin)-2',4',6'-triz\sOpropyl-3,6-dimethoxy-1,1 '-bifenyl, tris(o-tolyl)fosfm, tri-terc-butylfosfin, trifenylfosfin, s výhodou 2-dicyklohexylfosfin-2',4',6'-triz5opropylbifenyl.

Vynález bude dále ozřejměn příklady provedení, které ho však žádným způsobem nelimitují.

Příklady uskutečnění vynálezu

Seznam použitých zkratek:

	TLC	tenkovrstvá chromatografie
	HPLC	vysokotlaká kapalinová chromatografie
	C18	dodecyl
	HR-MS	hmotnostní spektrum ve vysokém rozlišení
25	MS	hmotnostní spektrum
	ESI	ionizace elektrosprejem
	Cl	chemická ionizace
	aq.	vodný roztok
	THF	tetrahydrofuran
30	DMF	VýV-dimethylformamid
	DMSO	dimethylsulfoxid
	Me	methyl
	Et	ethyl
	Pr	propyl
35	z-Pr	zso-propyl
	Ph	fenyl
	Bn	benzyl
	í-Bu	terc-butyl
	SEM	2-(trimethylsilyl)ethoxymethyl
40	Boc	terc-butoxykarbonyl
	Tf	triflyl
	Ts	tosyl
	TMSBr	bromtrimethylsilan
	dba	dibenzylidenaceton
45	Bn-F5	pentafluorbenzyl; perfluorbenzyl
	Ph-F5	petrafluorfenyl; perfluorfenyl
	IC50	polovina maximální inhibiční koncentrace
	APNP	lidský enzym purinnukleosidfosforylasy
	ND	neurčená hodnota
50	Ni-NTA	afinitní pryskyřice obsahující nikelnaté ionty
	RPMI	růstové médium pro buněčné kultury
	DMEM	Dulbeccova modifikace Eaglova média
	FBS	fetální hovězí sérum
55	PBMC	mononukleámí buňka periferní krve

Pokud není uvedeno jinak, tak rozpouštědla byla odpařována při 40 °C/2 kPa a připravené látky byly sušeny při 30 °C/2 kPa. Výchozí látky a reagenty byly zakoupeny od komerčních dodavatelů (Sigma-Aldrich, Fluorochem, Acros Organics, Carbosynth, TCI) a byly použity bez dalšího čištění, nebo byly připraveny podle publikovaných procedur.

Diethylether, tetrahydrofuran, dioxan a acetonitril byly sušeny aktivovanou neutrální aluminon (AI2O3, drysphere®). Dimethylformamid byl sušen aktivovanými molekulovými síty (3Á).

Reakce ve větších měřítcích byly prováděny v systému Atlas Pottasium® (Syrris Ltd, Royston, UK) s dvouplášťovým reaktorem o objemu 0,5; 1 nebo 2 1, spojeným s Julabo FP50-HL oběhovým termostatem.

Analytická TLC byla provedena na hliníkových destičkách s předem naneseným silikagelem s fluorescentním indikátorem (Merck 60 F254). Bleskové (flash) chromatografíe byly provedeny na systému Combiflash® RI200 s duálním absorpčním detektorem (Teledyne ISCO, Lincoln, USA). Bylo použito několik druhů kolon (sloupců): a) Teledyne ISCO kolony RediSepRf HP Silica GOLD ve velikostech 12 g, 40 g, 80 g a 120 g; b) Teledyne ISCO kolony RediSepRf HP C18 Aq GOLD ve velikostech 50 g, 100 g a 200 g; c) kolony Chromabond Flash DL 40, DL 80, DL 120 a DL 200, plněné silikagelem FLUKA 60; d) Interchim puriFlash C18 Aq ve velikostech F0040 and F0080. Použité eluenty byly: metanol (A), cyklohexan (B), ethylacetát modifikovaný 10 % (obj ./obj.) metanolu (C), chloroform (D), voda (E), cyklohexan modifikovaný 0,5 % triethylaminu (F).

Preparativní HPLC separace byla provedena na chromatografíckém systému Waters Delta 600 a kolonách (sloupcích) plněných C18 reversním silikagelem (Phenomenex Gemini 10 pm 21 x 250 mm, Phenomenex Gemini 5 pm 21 x 250 mm, Phenomenex Luna 10 pm 21 x 250 mm) s gradientem H2O/MeOH jako eluentem.

Analýzy UV absorbance, hmotnostní spektra a čistota látek byly měřeny na systému Waters UPLCMS, složeném z Waters UPLC Η-Class Core systému (kolona Waters Acquity UPLC BEH C18 1,7 mm, 2,1 x 100 mm) a Waters Acquity UPLC PDA detektoru s hmotnostním spektrometrem Waters SQD2. Byla použita universální LC metoda (eluent voda/acetonitril 0-100 %, délka měření 7 min.) a MS metoda (ESI+ anebo ESI-, napětí jehly 30 V, rozsah detektoru 100 až 1000 Da).

Hmotnostní spektra s vysokým rozlišením byla měřena na spektrometru LTQ Orbitrap XL (Thermo Fisher Scientific).

NMR spektra byla měřena na spektrometru Bruker Avance 400 nebo 500 a spektra byla vztažena ke zbytkovému signálu rozpouštědla, nebo specifické přísady. Některé signály uhlíkových atomu štěpenými fluorem nemusí být uvedeny z důvodu jejich nízké intenzity ve spektrech.

Pryskyřice Dowex® 50W (The Dow Chemical Company, Midland, USA) byla převedena do Na⁺cyklu pomocí 1 molT¹ ho vodného roztoku NaOH a následným promytím vodou do neutrálního pH.

Příklad 1

4-(Benzyloxy)-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin LI

- 10CZ 309199 B6

Dvouplášťový reaktor byl zapuštěn dusíkem, naplněn benzyl alkoholem (11) a systém byl nastaven na udržování teploty 20 °C. Kovový sodík (22,5 g; 977 mmol; 1,5 ekv.) byl přidán po částech a směs byla míchána 20 hodin pod malým proudem dusíku. Směs byla zahřívána na 80 °C po dobu 1 hodiny, pak byla opět ochlazena na 20 °C. Přidán byl 4-chlor-5H-pyrrolo[3,2-ů]pyrimidin (100 g; 651 mmol; 1 ekv.) a směs byla míchána při 80 °C, dokud nebyla dosažena plná konverze (cca 4 hodiny). Směs byla ochlazena na 5 °C, naředěna vodou (400 ml), pH bylo upraveno na pH 7 prostřednictvím 3 mol l¹ HC1 (aq.) (cca 100 až 130 ml) a směs byla ohřátá na 20 °C. Směs byla extrahována chloroformem (3x 400 ml) a organická fáze byla promyta solankou (500 ml). Směs byla zahuštěna a benzylalkohol byl odpařen při vysokém vakuu při cca 90 °C. Pevný podíl byl rozpuštěn v chloroformu, zfiltrován přes krátký sloupec silikagelu (600 g) a vymyt chloroformem, pak chloroformem s 5 % methanolu (obj./obj.). Rozpouštědla byla odpařena a pevný podíl byl rozpuštěn ve vroucí směsi ethylacetát/methanol (1:1; obj./obj.) a roztok byl ochlazen na 30 °C. Poté byl pomalu přidán pentan (stejný objem jako měl roztok) a směs byla ochlazena na -20 °C během 3 hodin a poté byla míchána při -20 °C přes noc. Krystaly byly zfiltrovány, promyty pentanem a sušeny s výtěžkem 141 g (97 %) 4-(benzyloxy)-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidinu jako bílých krystalů.

'HNMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 9,33 (s, 1H); 8,58 (s, 1H); 7,49-7,43 (m, 2H); 7,41 (m, 1H); 7,38 - 7,32 (m, 2H); 7,35 (s, 1H); 6,67 (dd, J= 3,2, 2,1 Hz, 1H); 5,59 (s, 2H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-ů) δ 155,46; 150,55; 150,11; 136,22; 128,76 - 128,28 (m), 115,14; 103,31; 67,94. MS (ESI) m/z = 226,1 [M + H]⁺ (vypočteno 226,1).

Příklad 2

4-(Benzyloxy)-7-jod-5-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin L2

Dvouplášťový reaktor (1 1) byl zapuštěn dusíkem, 4-(benzyloxy)-5H-pyrrolo[3,2-ů]pyrimidin (40 g; 178 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (500 ml) a po částech byl přidán Njodsukcinimid (44 g; 195 mmol; 1,1 ekv.). Směs byla míchána po dobu jedné hodiny, během které produkt vykrystalizoval. Krystaly byly zfiltrovány, promyty tetrahydrofůranem a sušeny s výtěžkem 56 g (90 %) bílých krystalu jodového derivátu, který byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace. Dvouplášťový reaktor (2 1) byl zapuštěn dusíkem, do reaktoru byl přidán 4-(benzyloxy)-7-jod-5H-pyrrolo[3,2-ů]pyrimidin (56 g, 159 mmol, 1 ekv.) a dimethylformamid (560 ml). Směs byla ochlazena na -5 °C a poté byl přidán hydrid sodný (8 g; 199 mmol; 1,25 ekv.) po částech pod malým proudem dusíku tak, aby teplota směsi nepřesáhla 5 °C. Směs byla míchána při 20 °C po dobu jedné hodiny. Pak byl přikapán 2(trimethylsilyl)ethoxymethyl chlorid (35,3 ml; 199 mmol; 1,25 ekv.) a směs byla dále míchána při 20 °C po dobu jedné hodiny. Reakce byla ukončena nasyceným vodným roztokem NH4CI zředěným na poloviční koncentraci (560 ml) a směs byla extrahována ethylacetátem (3x 300 ml), promyta solankou (Ix 500 ml) a sušena MgSO4. Sušidlo bylo zfiltrováno, rozpouštědla byla odpařena, pevný podíl byl rozpuštěn v chloroformu a zfiltrován přes krátký sloupec silikagelu (300 g), pak vymyt chloroformem a pak chloroformem s 1 % methanolu. Rozpouštědla byla odpařena a pevný podíl byl rozpuštěn ve vroucím acetonitrilu. Roztok byl pomalu ochlazován na 20 °C po dobu 3 hodin, během kterých produkt vykrystalizoval. Krystaly byly zfiltrovány, promyty acetonitrilem a sušeny s výtěžkem 66 g (86 %) uvedeného produktu ve formě bílých vločkových krystalů.

-11 CZ 309199 B6 ¹HNMR(401 MHz, Chloroform-d) δ 8,65 (s, 1H); 7,51 (s, 1H); 7,51 - 7,45 (m, 2H); 7,44 - 7,31 (m, 3H); 5,63 (s, 2H); 5,62 (s, 2H); 3,73 - 3,17 (m, 2H); 0,97 - 0,65 (m, 2H); -0,09 (s, 9H). ¹³C NMR(101 MHz, Chloroform-d) δ 155,90; 151,86; 151,05; 136,44; 136,11; 128,80; 128,52; 128,33; 115,87; 77,84; 68,55; 66,30; 59,18; 17,80; -1,34. MS (ESI) m/z = 482,2 [M + H]⁺ (vypočteno 482,1).

Příklad 3

4-(Benzyloxy)-7-brom-5-((terc-butoxykarbonyl))-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidm L3

Dvouplášťový reaktor (1 1) byl zapuštěn dusíkem, 4-(benzyloxy)-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin (40 g; 178 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (500 ml) a po částech byl přidán JV-bromsukcinimid (34,7 g; 195 mmol; 1,1 ekv.). Směs byla míchána po dobu 1 hodiny, během které produkt vykrystalizoval. Rozpouštědla byla odpařena a surový bromový derivát, byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace. Dvouplášťový reaktor (11) byl zapuštěn dusíkem, surový 4-(benzyloxy)-7-brom-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin byl rozpuštěn v suchém acetonitrilu (400 ml) a přidán byl 4-(dimethylamino)pyridin (2,2 g; 18 mmol; 0,1 ekv.), následovaný pomalým přidáváním roztoku di-terc-butyldikarbonátu (58,2 g; 267 mmol; 1,5 ekv.) v suchém acetonitrilu (100 ml) během 30 minut. Směs byla míchána při teplotě místnosti, dokud se nepřestal vyvíjet plyn (cca 2 hodiny). Rozpouštědla byla odpařena, pevný podíl byl rozpuštěn ve směsi cyklohexan/ethylacetát (3:1; obj./obj.) a /filtrován přes krátký sloupec neutrální aluminy (300 g). Rozpouštědla byla odpařena a pevný podíl byl lyofilizován z dioxanu s výtěžkem 58 g (81 %) uvedeného produktu jako bílého lyofilizátu.

‘HNMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 8,68 (s, 1H); 7,92 (s, 1H); 7,56 - 7,48 (m, 2H); 7,43 7,27 (m, 3H); 5,65 (s, 2H); 1,54 (s, 9H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 156,47; 152,90; 152,00; 147,23; 136,29; 131,34; 128,58; 128,22; 128,14; 114,26; 96,81; 85,90; 68,68; 27,87. MS (ESI) m/z = 404,1 [M + H]⁺ (vypočteno 404,1).

Příklad 4

4-(Benzyloxy)-5-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-7-(thio)-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin; 1,2bis(4-(benzvloxy)-5-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-7-yl)disulfan L4

Do mikrovlnné kyvety byla vložena látka L2 (4 g; 8,31 mmol; 1,0 ekv.), jodid měďný (158 mg; 0,83 mmol; 0,1 ekv.) a 1,10-fenantrolin (299 mg; 1,63 mmol; 0,2 ekv.). Kyveta byla zapuštěna argonem a poté byl přidán suchý toluen (15 ml) a roztok thiobenzoové kyseliny (1,18 ml; 9,97 mmol; 1,2 ekv.) s triethylaminem (1,73 ml; 12,5 mmol; 1,5 ekv.) v suchém toluenu (20 ml), čímž směs změnila barvu na tmavě červenou. Kyveta byla uzavřena a vložena do mikrovlnného reaktoru na 1 hodinu při 120 °C. Tmavě hnědá reakční směs byla následně rozpuštěna v chloroformu a promyta nasyceným roztokem NaHCO; zředěným na poloviční koncentraci (2x), 1 mol I¹ HC1

- 12CZ 309199 B6 (aq.) (2x), solankou a sušena MgSO4. Rozpouštědla byla odpařena a separace pomocí flash chromatografíe na silikagelu (eluenty: D do 5 % A) poskytla hnědý olej. Olej byl rozpuštěn v suchém methanolu a k roztoku byl přidán uhličitan draselný (2,30 g; 16,6 mmol; 2 ekv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti, dokud nebylo dosaženo plné konverze (cca. 1 h). Poté byla reakce ukončena vodou a směs byla míchána 1 hodinu při přístupu vzduchu. Směs byla rozpuštěna, extrahována chloroformem (3x), solankou (lx) a sušena MgSO4. Rozpouštědla byla odpařena a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (D do 5 % A) a následnou C18 flash chromatografíí v reversním módu (E do A) se ziskem 2,5 g (78 %) žlutého oleje uvedeného produktu, který byl lyofílizován z dioxanu pro poskytnutí pevné látky.

Ή NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8,53 (s, 2H); 7,60 (s, 2H); 7,54 - 7,48 (m, 4H); 7,44 - 7,29 (m, 8H); 5,64 (s, 4H); 5,61 (s, 4H); 3,60 - 3,28 (m, 4H); 0,92 - 0,71 (m, 4H); -0,10 (s, 18H). ¹³C NMR(101MHz, Chloroform-ó/) δ 156,12; 151,46; 151,10; 138,34; 136,20; 128,80; 128,51; 128,34; 116,17; 110,52; 77,98; 68,42; 66,41; 17,83;-1,32. MS (ESI) m/z = 773,5 [M + H]⁺ (vypočteno 773,3).

Obecná syntéza pro látky L5-L8 (Sl)

Do mikrovlnné kyvety byla dána látka L2 (200 mg; 0,4154 mmol; 1,0 ekv.), jodid měďný (8 mg; 0,0415 mmol; 0,1 ekv.) a 1,10-fenantrolin (15 mg; 0,0830 mmol; 0,2 ekv.). Kyvetabyla zapuštěna argonem a poté byl přidán suchý toluen (2 ml) a triethylamin (87 μΐ; 0,6231 mmol; 1,5 ekv.). Thiofenol (0,4985 mmol; 1,2 ekv.) byl přidán jako poslední látka a směs změnila barvu na tmavě červenou. Kyveta pak byla uzavřena a vložena do mikrovlnného reaktoru na 2 hodiny při 120 °C. Tmavě hnědá reakční směs byla rozpuštěna v chloroformu a promyta nasyceným roztokem NaHCOs zředěným na polovinu (2x), 1 mol l¹ HC1 (aq.) (2x), solankou a sušena byla MgSO4. Rozpouštědla byla odpařena a surový produkt byl separován pomocí flash chromatografíe na silikagelu (B do 15 % C).

Příklad 5

4-(Benzyloxy)-7-(fenylthio)-5-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin L5

Postup obecné syntézy Sl poskytl uvedenou látku ve výtěžku 82 mg (89 %).

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 8,68 (s, 1H); 7,68 (s, 1H); 7,55 - 7,47 (m, 2H); 7,44 - 7,33 (m, 3H); 7,24 - 7,14 (m, 4H); 7,12 - 7,03 (m, 1H); 5,67 (s, J = 1,0 Hz, 4H); 3,47 (t, J = 8,0 Hz, 2H); 0,84 (t, J = 8,3, 7,8 Hz, 2H); -0,09 (s, 9H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 156,56; 150,86; 150,75; 138,85; 137,65; 135,85; 128,99; 128,83; 128,64; 128,44; 127,45; 125,83; 116,31; 105,13; 78,07; 68,88; 66,52; 17,82; -1,35. MS (ESI) m/z = 464,3 [M + H]⁺ (vypočteno 464,2).

Příklad 6

4-(Benzyloxy)-7-((pyrimidin-2-yl)thio)-5-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-5Zf-pyrrolo[3,2ri]pyrimidin L6

- 13 CZ 309199 B6

Postup obecné syntézy S1 poskytl uvedenou látku ve výtěžku 64 mg (33 %).

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 8,66 (s, 1H); 8,41 (s, 2H); 7,72 (s, 1H); 7,51 (d, 7=7,0 Hz, 2H); 7,45 - 7,31 (m, 3H); 6,94 (s, 1H); 5,70 (s, 2H); 5,66 (s, 2H); 3,49 (t, J= 8,0 Hz, 2H); 0,85 (t, J = 8,1 Hz, 2H); -0,08 (s, 9H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-í/) δ 172,10; 157,65; 156,59; 150,80; 138,97; 135,85; 128,79; 128,61; 128,42; 117,27; 116,43; 102,09; 78,16; 68,85; 66,51; 17,79; -1,35. MS (ESI) m/z = 466,2 [M + H]⁺ (vypočteno 466,2).

Příklad 7

4-(Benzyloxy)-7-((2-hydroxymethyl)fenylthio)-5-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-5Hpyrrolo[3,2-ri]pyrimidin L7

Postup obecné syntézy S1 poskytl uvedenou látku ve výtěžku 130 mg (64 %).

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 8,51 (s, lH);7,70(s, 1H); 7,47 (t, 7=8,1 Hz, 2H); 7,42 (dd, J = 7,6, 1,5 Hz, 1H); 7,40 - 7,32 (m, 3H); 7,27 (dd, J = 7,8, 1,4 Hz, 1H); 7,17 (td, J = 7,4, 1,4 Hz, 1H); 7,08 (td, J = 7,5, 1,6 Hz, 1H); 5,63 (s, 2H); 5,60 (s, 2H); 5,03 (s, 2H); 3,45 (t, J = 8,1 Hz, 2H); 1,42 (s, 2H); 0,83 (t, J = 8,1 Hz, 2H); -0,08 (s, 9H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 156,18; 150,62; 150,50; 142,31; 137,38; 135,83; 134,76; 133,09; 130,01; 128,69; 128,57; 128,47; 128,27; 128,02; 116,16; 107,07; 77,82; 68,56; 66,31; 63,56; 17,72; - 1,40. MS (ESI) m/z = 494,3 [M + H]⁺ (vypočteno 494,2).

Příklad 8

4-(Benzyloxy)-7-((2-hydroxy)fenylthio)-5-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-5H-pyrrolo[3,27]pyrimidin L8

Postup obecné syntézy S1 poskytl uvedenou látku ve výtěžku 132 mg (66 %).

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 8,66 (s, 1H); 7,60 (s, 1H); 7,59 (dd, J = 7,8, 1,6 Hz, 1H);

- 14CZ 309199 B6

7,48 (dd, J= 7,9, 1,6 Hz, 2H); 7,44-7,31 (m, 3H); 7,21 (ddd, 7=8,2, 7,3, 1,7 Hz, 1H); 7,00 (dd, J = 8,1, 1,4 Hz, 1H); 6,79 (td, J= 7,5, 1,4 Hz, 1H); 5,63 (s, 2H), 5,58 (s, 2H); 3,43 (t, J = 8,0 Hz, 2H); 0,81 (t, J= 8,2 Hz, 2H); -0,10 (s, 9H). ¹³CNMR(101 MHz, Chloroform-r/) δ 158,52; 156,09; 150,89; 150,25; 136,69; 136,61; 135,81; 131,43; 128,73; 128,51; 128,26; 121,32; 120,64; 118,48; 115,83; 108,65; 77,74; 68,69; 66,36; 17,70; -1,41. MS (ESI) m/z - 480,2 [M + H]⁺ (vypočteno 480,2).

Obecná syntéza pro látky L9-L12 (S2)

Výchozí látka (L5-L8) byla rozpuštěna v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu. Pevný podíl byl rozpuštěn v malém množství dimethylformamidu a směs byla separována pomocí Cl8 flash chromatografie na reverzní fázi (E do A) v modu kapalného nástřiku. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z dioxanu.

Příklad 9

7-((Fcnyl)thio)-3.5-dihydro-4//-pyrrolo13,2-r/| py ri m idi n-4-on L9

Postup obecné syntézy S2 poskytl uvedenou látku ve výtěžku 44 mg (56 %).

Ή NMR (401 MHz, DMSO-í/₆) δ 7,84 (s, 1H); 7,72 (s, 1H); 7,21 (t, J= 7,7 Hz, 2H); 7,13 - 6,97 (m, 3H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-í/₆) δ 153,73; 145,66; 142,84; 138,98; 133,69; 128,84; 125,60; 124,91; 119,21; 102,05. MS (ESI) m/z = 244,2 [M + H]⁺ (vypočteno 244,3).

Příklad 10

7-((py ri m idi n-2-yl )th io)-3.5 -dihydro-4//-py rrolo| 3,2-r/| py ri m idi n-4-on L10

Postup obecné syntézy S2 poskytl uvedenou látku ve výtěžku 15 mg (44 %).

Ή NMR (401 MHz, DMSO-í/₆) δ 8,29 (d, J = 5,0 Hz, 2H); 7,74 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 7,02 (t, J =5,1 Hz, 1H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSCM,) δ 174,81; 167,00; 159,33; 151,75; 150,43; 143,61; 127,96; 118,94; 93,55. MS (ESI) m/z = 246,1 [M + H]⁺ (vypočteno 246,3).

Příklad 11

7-(((2-Hydroxymethyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4//-py rrolo[3,2-d]pyrimidin-4-on Lil

- 15 CZ 309199 B6

Postup obecné syntézy S2 poskytl uvedenou látku ve výtěžku 51 mg (72 %).

Ή NMR (401 MHz, DMSO-ď,) δ 7,84 (s, 1H); 7,70 (s, 1H); 7,42 (dd, J= 7,5, 1,5 Hz, 1H); 7,10 (td, J= 7,4, 1,4 Hz, 1H); 7,04 (td, J= 7,6, 1,6 Hz, 1H); 6,76 (dd, J = 7,8, 1,3 Hz, 1H); 4,67 (s, 2H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-ó/₆) δ 153,83; 145,65; 142,85; 138,75; 136,11; 133,66; 127,08; 126,34; 126,05; 124,71; 119,30; 101,85; 60,52. MS (ESI) m/z = 256,2 [Μ + H - H₂O]⁺(vypočteno 256,3).

Příklad 12

7-(((2-Hydroxy )fcnyl )th io)-3.5 -dihydro-4//-py rrolo 13,2-ó/| py ri m idi n-4-on L12

Postup obecné syntézy S2 poskytl uvedenou látku ve výtěžku 44 mg (62 %).

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7₆) δ 12,62 (s, 1H); 12,09 (s, lH);9,87(s, 1H); 7,83 (d, J= 2,1 Hz, 1H); 7,65 (d, 7=2,7 Hz, 1H); 6,89 (ddd, J= 8,0, 7,2, 1,7 Hz, 1H); 6,77 (dd, 7=7,9, 1,3 Hz, 1H); 6,58 (td, 7= 7,6, 1,3 Hz, 1H); 6,48 (dd, 7= 7,8, 1,6 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-7₆) δ 153,63; 153,04; 145,88; 142,62; 133,59; 126,15; 125,50; 125,29; 119,49; 119,16; 114,50; 101,79. MS (ESI) m/z = 260,2 [M + H]⁺ (vypočteno 260,3).

Příklad 13

Diethyl-(£)-(2-jodstyryl)fosfonát L13

V baňce byl rozpuštěn 2-jodbenzaldehyd (2 g; 8,62 mmol; 1 ekv.) v dichlormethanu (20 ml) a do roztoku byl přidán vodný roztok NaOH (20 ml; 5 mol l¹). Poté do směsi přidán tetraethylmethylendifosfonát (2,57 ml; 10,3 mmol, 1,2 ekv.) a ta byla silně míchána přes noc při teplotě místnosti. Směs byla extrahována dichlormethanem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSO4. zfiltrována a odpařena do sucha. Olejový podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 10 % A) se ziskem 3,1 g (98 %) diethyl-(£)-(2-jodstyryl)fosfonátu jako bezbarvého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,87 (dd, 7= 7,9, 1,2 Hz, 1H); 7,63 (dd, 7= 22,3, 17,3 Hz, 1H); 7,52 (dd, 7=7,9, 1,6 Hz, 1H); 7,35 (dddd, 7= 7,9, 7,3, 1,3, 0,6 Hz, 1H); 7,04 (td, 7= 7,7, 1,7 Hz, 1H); 6,15 (dd, 7= 18,1, 17,3 Hz, 1H); 4,24 - 4,09 (m, 4H); 1,37 (t, 7=7,1 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform 7) δ 151,33 (d, 7=7,5 Hz); 140,01; 138,38 (d, 7= 23,7 Hz); 131,28; 128,68; 127,30; 117,86 (d, 7= 190,6 Hz); 100,68; 62,26 (d, 7= 5,7 Hz); 16,56(d; 7= 6,4 Hz). MS (ESI)

- 16CZ 309199 B6 m/z = 367,0 [M + H]⁺ (vypočteno 367,0).

Příklad 14

Diisopropyl-((2-jodfenoxy)methyl)fosfonát L14

2-Jodfenol (2g; 9,09 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (20 ml) pod argonovou atmosférou. Roztok byl ochlazen na 0 °C, poté byl přidán hydrid sodný (382 mg 60 % olejové disperze; 9,54 mmol; 1,05 ekv.) a směs byla míchána 15 minut při 0 °C. Následně byl přidán TfOCH2P(O)(Oz-Pr)2 (3,58 g; 10,9 mmol; 1,2 ekv.) a směs byla míchána při 0 °C dalších 15 minut. Reakce byla ukončena přidáním nasyceného vodného roztoku NH4CI zředěného na poloviční koncentraci a extrahována ethylacetátem (3x). Organická fáze byla promyta solankou (3x), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Olejový podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 10 % A) se ziskem 2,97 g (100 %) bezbarvého oleje diisopropyl-((2jodfenoxy)methyl)fosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 7,76 (dd, 7=7,8, 1,6 Hz, 1H); 7,30 (ddd, J = 8,3, 7,4, 1,6 Hz, 1H); 6,89 (dd, 7=8,3, 1,3 Hz, 1H); 6,74 (td, J= 7,6, 1,3 Hz, 1H); 4,96 -4,82 (m, 2H); 4,27 (d, J = 10,1 Hz, 2H); l,42-l,35(m, 12H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 157,47 (d, J= 13,8 Hz); 139,84; 129,68; 123,69; 112,29; 86,11; 72,42 (d, J= 6,6 Hz); 63,58 (d, J= 170,5 Hz); 24,28. MS (ESI) m/z = 399,0 [M + H]⁺ (vypočteno 399,0).

Příklad 15 (5-Brom-2-jodfenyl)methanol L15

Látka byla připravena podle publikovaného postupu [Zhou,N.; Wang, L.; Thompson, D. W.; Zhao, Y. Org. Lett. 2008,10 (T4), 3001-3004.]

Methyl-5-brom-2-jodbenzoát (4 g; 11,7 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém dichlormethanu (24 ml) a roztok byl ochlazen na 0 °C. Přidán byl diisobutylaluminium hydrid (23,4 ml 1 mol l¹ roztoku v toluenu; 23,4 mmol; 2 ekv.) a směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přidáním 15% vodného roztoku kyseliny citrónové (obj./obj.), extrahována dichlormethanem (3x). promyta solankou (Ix), sušena MgSO4 a zfiltrována. Odpaření rozpouštědel poskytlo 3,52 g (96 %) nažloutlých krystalů (5-brom-2-jodfenyl]methanolu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,64 (d, J= 8,3 Hz, 1H); 7,62 (d, J= 2,4 Hz, 1H); 7,13 (dd, J= 8,4, 2,4 Hz, 1H); 4,62 (d, J= 0,7 Hz, 2H); 2,06 (s, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 144,70; 140,43; 132,31; 131,27; 123,13; 94,76; 68,82. MS (ESI) m/z = 335,9 [Μ + H - H₂O + CH3CN]⁺(vypočteno 335,9).

- 17CZ 309199 B6

Příklad 16

5-Brom-2-jodbenzaldehyd L16

Látka byla připravena podle publikovaného postupu [Zhou,N.; Wang, L.; Thompson, D. W.; Zhao, Y. Org. Lett. 2008,10 (14), 3001-3004.] (5-Brom-2-jodfenyl)methanol (3g; 9,58 mmol; 1 ekv.) a pyridiniumdichromát (7,2 g; 19,2 mmol; 2 ekv.) byly rozpuštěny v suchém dichlormethanu (40 ml) a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Poté byla směs zfiltrována přes křemelinu, promyta diethyletherem a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (B do 10 % C) se ziskem 2,3 g (77 %) bílých krystalů 5-brom-2-jodbenzaldehydu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 9,99 (s, 1H); 7,99 (d, J= 2,5 Hz, 1H); 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 7,41 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H). ¹³CNMR(101 MHz, Chloroform-d) δ 194,45; 141,95; 138,37; 136,47; 133,24; 123,63; 98,39. MS (CI) m/z = 310,9 [M + H]⁺ (vypočteno 310,9).

Příklad 17

Diethyl-(£)-(5 -brom-2-j odstyryl)fosfonát L17

Tetraethyl-methylendifosfonát (1,52 ml; 7,72 mmol; 1,2 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (40 ml) pod argonovou atmosférou a přidán byl terc-butoxid draselný (867 mg; 7,72 mmol; 1,2 ekv.). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a poté byl přidán roztok 5-brom-2-jodbenzaldehydu (2 g; 6,43 mmol; 1 ekv.) v suchém tetrahydrofuranu (15 ml). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a reakce byla ukončena přídavkem 1 mol I¹ HC1 (aq.), extrahována dichlormethanem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSOr, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (D do 5 % A) se ziskem 1,82 g (63 %) čirého olej e dicthy 1 -(/ )-(5 -brom-2-j odstyryljfosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 7,72 (dd. ./=8,5, 1,5 Hz, 1H); 7,63 (d,J = 2,0Hz, 1H); 7,55 (ddd,J=22,2, 17,2, 1,5 Hz, 1H); 7,17 (d, J= 8,4 Hz, 1H); 6,17 (td, J = 17,3, 1,5 Hz, lH);4,17(q, J= 7,1 Hz, 4H); 1,38 (t, J= 7,1,6H). ¹³CNMR(101 MHz, Chloroform-í/) δ 149,76 (d, J = 8,0 Hz); 141,09; 140,26 (d, J= 24,1 Hz); 133,98; 130,11; 122,92; 119,44 (d, J = 190,0 Hz); 98,21; 62,23 (d, J = 5,4 Hz); 16,48 (d, J = 6,5 Hz). MS (ESI) m/z = 444,9 [M + H]⁺ (vypočteno 444,9).

Příklad 18

4-Brom-1 -(brommethyl)-2-j odbenzen L18

- 18CZ 309199 B6

Látka byla připravena podle publikovaného postupu [Caruso. A.; Tovar, J. D. J. Org. Chem 2011, 76, 2227-2239.]

4-Brom-2-jod-l-methylbenzen (3,94; 13,3 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém 1,2dichlorethanu (19 ml) pod argonovou atmosférou a do směsi byly postupně přidány Nbromsukcinimid (2,63 g; 14,6 mmol; 1,1 ekv.) s dibenzoylperoxidem (164 mg; 0,6630 mmol; 0,05 ekv.). Směs byla míchána 4 hodiny při varu rozpouštědla a reakce byla poté ukončena přídavkem nasyceného vodného roztoku NH4CI zředěného na poloviční koncentraci a extrahována chloroformem (3x). Organická fáze byla promyta solankou (Ix), sušena MgSO4, zfíltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (B) se ziskem 4,35 g (89 %) bílých krystalů 4-brom-l-(brommethyl)-2-jodbenzenu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 8,00 (d, 7=2,1 Hz, 1H); 7,46 (dd, J= 8,3, 1,7 Hz, 1H); 7,33 (d, 7=8,3 Hz, 1H); 4,54 (s, 2H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 141,98; 139,32; 132,04; 131,28; 122,85; 100,38; 37,65. MS (ESI) m/z = 353,9 [Μ + H - HBr + H₂O + CH₃CN]⁺(vypočteno 353,9).

Příklad 19

4-Brom-2-jodbenzaldehyd L19

Látka byla připravena podle publikovaného postupu [Caruso, A.; Tovar, J. D. 7 Org. Chem 2011, 76, 2227-2239.]

A-Methylmorfolin-A-oxid (3,74 g; 31,9 mmol; 3 ekv.) byl rozpuštěn v suchém acetonitrilu (80 ml) pod argonovou atmosférou a přidána byla molekulová síta (26 g; 4 Á). Suspenze byla ochlazena na 0 °C, přidán 4-brom-l-(brommethyl)-2-jodbenzen (4 g; 10,6 mmol; 1 ekv.) a směs byla míchána 2 hodiny při 0 °C. Směs byla zfíltrována přes krátký sloupec silikagelu a promyta cyklohexanem s výtěžkem 3,3 g (100 %) bílých krystalů 4-brom-2-jodbenzaldehydu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 9,98 (d,. 7 = 0,8 Hz, 1H); 8,12 (d, 7= 1,8 Hz, 1H); 7,72 (d, 7= 8,3 Hz, 1H); 7,61 (ddd,7= 8,3, 1,8, 0,8 Hz, 1H). ¹³CNMR(101 MHz, Chloroform-7) δ 194,56; 142,67; 133,95; 132,17; 131,00; 130,04; 100,81. MS (Cl) m/z = 310,9 [M + H]⁺(vypočteno 310,9).

Příklad 20

Diethyl-(£)-4-brom-2-jodstyryl)fosfonát L20

- 19CZ 309199 B6

Tetraethyl-methylendifosfonát (2,28 ml; 11,6 mmol; 1,2 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (60 ml) pod argonovou atmosférou a poté byl přidán torc-butoxid draselný (1,3 g; 11,6 mmol; 1,2 ekv.). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a následně byl přidán roztok 4-brom-2-jodbenzaldehydu (2 g; 6,43 mmol; 1 ekv.) v suchém tetrahydrofuranu (20 ml). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a reakce byla ukončena přídavkem 1 mol · I¹ HC1 (aq.), extrahována dichlormethanem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (1) do 5 % A) se ziskem 2,41 g (56 %) čirého oleje diethyl-(£)-(4-brom-2-jodstyryl)fosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 8,04 (d, J= 1,9 Hz, 1H); 7,56 (dd, J = 22,3, 17,4 Hz, 1H); 7,51 - 7,47 (m, 1H); 7,38 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 6,16 (t,J= 17,4 Hz, 1H);4,21 -4,11 (m, 4H); 1,38 (t, J = 7,1 Hz, 6H). ¹³C NMR(101 MHz, Chloroform-d) δ 150,08 (d, J = 7,8 Hz); 141,99 (d, J = 1,4 Hz); 131,93; 128,10 (d,J= 1,6 Hz); 124,43; 118,61 (d,J= 190,7 Hz); 100,96 (d,J= 15,9 Hz); 62,37 (d, J = 5,7 Hz); 16,56 (dd, J = 9,3, 6,1 Hz). MS (ESI) m/z = 445,0 [M + H]⁺ (vypočteno 444,9).

Příklad 21

4-( 1,3 -Dimethylimidazolidin-2-yl)fenol L21

Baňka byla naplněna toluenem (600 ml) a přidán byl 4-hydroxybenzaldehyd (36 g; 205 mmol; 1 ekv.), následovaný AA-ó/imcthylcthylcndiamincm (38 ml; 354 mmol; 1,2 ekv.). Směs byla zahřívána 15 minut při varu a pak bylo 2/3 objemu oddestilováno. Směs byla ochlazena ledovou lázní a produkt vykrystalizoval. Krystaly byly zfíltrovány, promyty studeným toluenem a sušeny se ziskem 48,6 g (86 %) nahnědlých krystalů 4-(l,3-dimethylimidazolidin-2-yl)fenolu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-d₆) δ 9,36 (s, 1H); 7,20-7,11 (m, 2H); 6,75 - 6,67 (m, 2H); 3,24 - 3,15 (m, 2H); 3,09 (s, 1H); 2,47 - 2,38 (m, 2H); 2,01 (s, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSCM,) δ 157,42; 129,89; 129,85; 114,72; 91,41; 52,57; 39,10. MS (CI) m/z = 193,1 [M + H]⁺(vypočteno 193,1).

Příklad 22

4-Hydroxy-2-jodbenzaldehyd L22 %

u ^XN·'·'

-20CZ 309199 B6

4-(1,3-Dimethylimidazolidin-2-yl)fenol (10 g; 52 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém diethyletheru (350 ml) pod argonovou atmosférou, roztok byl ochlazen na -78 °C a roztok tercbutyllithia (92 ml 1,7 mol l¹ roztok v pentanu; 156 mmol, 3 ekv.) byl přidán tak, aby teplota směsi nepřesáhla -70 °C. Směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc a poté byla opět ochlazena na -78 °C. Roztok 1,2-dijodethanu (44 g, 156 mmol, 3 ekv.) v suchém tetrahydrofuranu (100 ml) byl přidán tak, aby teplota směsi nepřesáhla -60 °C a pak byla směs míchána 30 minut při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena 1 mol l¹ HC1 (aq.). extrahována diethyletherem (3x), promyta solankou (Ix). sušena MgSOr, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) se ziskem 9,4 g (73 %) čirého oleje diethyl-(£)-(4-brom-2j odstyryljfosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7₆) δ 10,86 (s, 1H); 9,74 (d, 7=0,8 Hz, 1H); 7,65 (d, 7= 8,6 Hz, 1H); 7,37 (d, 7= 2,3 Hz, 1H); 6,91 (dd,7=8,6, 2,3 Hz, 1H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-7,) δ 193,53; 163,52; 132,06 (d,7= 12,9 Hz); 126,82; 126,79; 116,04 (d, 7 = 28,8 Hz); 103,01. MS (ESI) m/z = 249,0 [M + H]⁺ (vypočteno 248,9).

Příklad 23

Diethyl-(£)-(4-hydroxy-2-jodstyryl)fosfonát L23

4-Hydroxy-2-jodbenzaldehyd (4g; 16,1 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém toluenu (80 ml) a postupně byla přidána diethylfosforyloctová kyselina (3,8 ml; 19,4 mmol; 1,2 ekv.), piperidin (524 μΐ; 5,13 mmol; 0,33 ekv.) a octová kyselina (221 μΐ; 3,86 mmol; 0,24 ekv.). Směs byla zahřívána při varu rozpouštědla v otevřené baňce přes noc a poté byla reakce ukončena nasyceným nasyceným vodným roztokem NaHCCE zředěným na poloviční koncentraci, extrahována chloroformem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSOr, zfiltrována a odpařena do sucha. Směs byla separována pomocí flash chromatogralie na C18 silikagelu (20 % E do A) v modu kapalného nástřiku se ziskem 5,3 g (87 %) nažloutlého oleje diethyl-(£)-(4-hydroxy-2-jodstyryl jfosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-í/) δ 9,48 (s, 1H); 7,62 (dd, 7= 23,0, 17,3 Hz, 1H); 7,50 (d, 7 = 2,4 Hz, 1H); 7,40 (d, 7 = 8,7 Hz, 1H); 6,92 (ddd, 7= 8,7, 2,5, 0,6 Hz, 1H); 5,96 (dd, 7= 19,0, 17,3 Hz, 1H); 4,16 (q, 7= 7,1 Hz, 4H); 1,37 (t, 7 = 7,1 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 160,04; 152,40 (d. 7 = 8,3 Hz); 128,63 (d, 7 = 24,2 Hz); 127,86 (d, 7= 1,3 Hz); 126,92 (d, 7 = 1,4 Hz); 116,68; 111,99 (d, 7 = 194,2 Hz); 102,44; 62,63 (d, 7= 5,7 Hz); 16,54 (d, 7 = 6,4 Hz). MS (ESI) m/z = 383,1 [M + H]⁺ (vypočteno 383,0).

Příklad 24

2-Jod-5-methoxybenzaldehyd L24

3-Methoxybenzaldehyd (20 g; 147 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v methanolu (600 ml) a poté byl přidán dusičnan stříbrný (24,8 g; 147 mmol; 1 ekv.), následovaný jodem (42,0 g; 162 mmol; 1,1 ekv.). Baňka byla zabalena do hliníkové folie a směs byla míchána při teplotě místnosti 1 hodinu.

-21 CZ 309199 B6

Směs byla zfiltrována přes křemelinu a přebytek jódu byl zfiltrován nasyceným vodným roztokem thiosíranu sodného. Rozpouštědla byla odpařena a pevný podíl byl rozpuštěn ve směsi chloroformu a vody. Směs byla extrahována chloroformem (2x), promyta solankou (Ix), sušena síranem hořečnatým a zfiltrována. Rozpouštědla byla odpařena a pevný podíl byl rozpuštěn v horkém ethylacetátu a produkt byl sražen přidáním cyklohexanu. Žluté krystaly byly zfiltrovány se ziskem 24g (62 %) 2-jod-5-methoxybenzaldehydu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-d₆) δ 9,89 (s, 1H); 7,89 (d. J = 8,7 Hz, 1H); 7,30 (d, J = 3,2 Hz, 1H); 7,05 (dd, J = 8,6, 3,2 Hz, 1H); 3,80 (s, 3H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ 195,16/159,73; 141,25; 135,54; 122,87; 114,36; 89,57; 55,58. MS (ESI) m/z = 263,0 [M + H]⁺(vypočteno 263,0).

Příklad 25

5-Hydroxy-2-jodbenzaldehyd L25

2-Jod-5-methoxybenzaldehyd (5 g; 19,1 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém dichlormethanu (200 ml) pod argonovou atmosférou. Roztok byl ochlazen na -78 °C a pomalu byl přikapán roztok bromidu boritého (95 ml 1 mol l¹ roztok v dichlormethanu; 95,5 mmol; 5 ekv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti, dokud nebylo dosaženo plné konverze (cca 3 hodiny). Poté byla směs ochlazena na -78 °C areakce byla ukončena přidáním nasyceného vodného roztoku NaHCCE. Směs byla extrahována dichlormethanem (3x), promyta solankou (Ix), sušena síranem horečnatým a zfiltrována. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) se ziskem 4,1 g (87 %) žlutých krystalů 5-hydroxy-2-jodbenzaldehydu.

Ή NMR (401 MHz, DMSCM,) δ 10,18 (s, 1H); 9,86 (s, 1H); 7,80 (d, J= 8,5 Hz, 1H); 7,21 (d, J =3,1 Hz, 1H); 6,89 (dd, J= 8,5, 3,1 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ 195,45; 158,09; 141,27; 135,54; 123,90; 116,41; 87,33. MS (ESI) m/z = 249,0 [M + H]⁺(vypočteno 248,9).

Příklad 26

Diethyl-(£)-(5-hydroxy-2-jodstyryl)fosfonát L26

5-Hydroxy-2-jodbenzaldehyd (4g; 16,1 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v absolutním ethanolu (80 ml) a postupně byla přidán uhličitan draselný (11,2 g; 80,6 mmol; 5 ekv.) a tetraethylmethylendifosfonát (12,0 ml; 48,4 mmol; 3 ekv.). Směs byla zahřívána při varu rozpouštědla v otevřené baňce, dokud nebylo dosaženo úplné konverze (cca 1 hodinu) a poté byla reakce ochlazena na 0 °C a ukončena přídavkem 1 mol I¹ HC1 (aq.), extrahována chloroformem (3x), promyta solankou (Ix). sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C). Tato separace poskytla produkt znečištěný přebytkem tetraethyl-methylendifosfonátu. Směs byla separována pomocí flash chromatografie na Cl8 silikagelu (E do A) v modu kapalného nástřiku v dimethylformamidu se ziskem 5,39 g (88 %) žlutých krystalů diethyl-(£)-(5-hydroxy-2-jodstyryl)fosfonátu.

-22CZ 309199 B6

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 9,23 (s, 1H); 7,64 (d, J =8,6 Hz. 1H); 7,54 (dd, J = 22,6, 17,3 Hz, 1H); 7,21 (d,7=2,9 Hz, 1H); 6,68 (dd,7=8,6, 2,9 Hz, 1H); 6,12 (dd,7= 19,6, 17,3 Hz, 1H); 4,29 - 4,06 (m, 4H); 1,37 (t, 7= 7,1, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 158,31; 152,31 (d, 7=6,9 Hz); 140,52; 138,11 (d, 7=23,5 Hz); 120,48; 115,74 (d,7= 192,6 Hz); 114,43; 87,79; 62,95 (d, 7= 5,9 Hz); 16,49 (d, 7= 6,5 Hz). ³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-7) δ 20,49. MS (ESI) m/z = 383,0 [M + H]⁺ (vypočteno 383,0).

Příklad 27

2-(2-Methoxyfenyl)-l,3-dimethylimidazolidin L27

Baňka byla naplněna toluenem (600 ml) a přidán byl 2-hydroxybenzaldehyd (36 g; 295 mmol; 1 ekv.) a následné /VýV-dimethylethylendiamin (31,3 ml; 325 mmol; 1,1 ekv.). Směs byla zahřívána 15 minut při varu a pak byla rozpouštědla odpařena. Pevný podíl byl rekrystalizován z hexanu se ziskem 36 g (67 %) čirých velkých krystalů 2-(2-methoxyfenyl)-l,3-dimethylimidazolidinu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,67 (dd, 7 = 7,6, 1,9 Hz, 1H); 7,26 (td, 7= 6,6, 1,9 Hz, 1H); 7,00 (td,7= 7,4, 1,3 Hz, 1H); 6,88 (dd,7= 8,2, 1,1 Hz, 1H); 4,06 (s, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,37 - 3,31 (m, 2H); 2,65 - 2,57 (m, 2H); 2,19 (s, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 159,04; 129,40; 129,00; 127,75; 121,26; 110,52; 82,90; 55,63; 53,67; 39,83. MS (CI) m/z - 207,1 [M + H]⁺ (vypočteno 207,1).

Příklad 28

2-Jod-6-methoxybenzaldehyd L28

2-(2-Methoxyfenyl)-l,3-dimethylimidazolidin (10 g; 48,5 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém diethyletheru (250 ml) pod argonovou atmosférou, roztok byl ochlazen na -78 °C a roztok tercbutyllithia (57 ml 1,7 mol l¹ roztoku v pentanu; 97 mmol, 2 ekv.) byl přidán tak, aby teplota směsi nepřesáhla -70 °C. Směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc a poté byla opět ochlazena na -78 °C. Roztok 1,2-dijodethanu (27,3 g, 97 mmol, 2 ekv.) v suchém tetrahydrofuranu (200 ml) byl přidán tak. aby teplota směsi nepřesáhla -60 °C a pak byla směs míchána 30 minut při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přidáním 1 mol l¹ HC1 (aq.), extrahována diethyletherem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 15 % C) se ziskem 5,8 g (46 %) čirého oleje 2-jod-6methoxybenzaldehydu.

'HNMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 10,24 (s. 1H), 7,59 (d,7= 7,8 Hz, 1H), 7,13 (dd,7=8,4, 7,8 Hz, 1H), 6,99 (dd,7= 8,3, 0,9 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H). ¹³CNMR(101 MHz, Chloroform-7/) δ 191,90; 161,98; 135,25; 133,92; 125,04; 1 12,08; 96,55; 56,16. MS (ESI) m/z = 263,0 [M + H]⁺ (vypočteno

-23 CZ 309199 B6

263,0).

Příklad 29

2-H ydroxy-6-jodbenzaldehyd L29

2-Jod-6-methoxybenzaldehyd (5 g; 19,1 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém dichlormethanu (200 ml) pod argonovou atmosférou. Do roztoku ochlazeného na -78 °C byl přidán roztok bromidu boritého (95 ml 1 mol l¹ roztok v dichlormethanu; 95,5 mmol; 5 ekv.) a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Poté byla směs ochlazena na -78 °C a reakce byla ukončena přidáním nasyceného vodného roztoku NaHCCh. Směs byla extrahována dichlormethanem (3x), promyta solankou (Ix), sušena síranem hořečnatým a zfiltrována. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) se ziskem 4,4 g (93 %) nahnědlých krystalů 5-hydroxy-2j odbenzaldehydu.

Ή NMR (401 MHz. DMSO-7,) δ 11,58 (s, 1H); 10,02 (s, 1H); 7,52 (dd,7=7,7, 1,0 Hz, 1H); 7,22 (dd, J = 8,4, 7,7 Hz, 1H); 7,07 - 6,89 (m, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-7,) δ 198,92; 162,10; 137,58; 131,87; 120,06; 118,14; 101,00. MS (CI) m/z = 248,9 (M + H]⁺(vypočteno 248,9).

Příklad 30

Diethyl-(£)-(2-hydroxy-6-jodstyryl)fosfonát L30

I

2-Hydroxy-6-jodbenzaldehyd (1,5 g; 6,05 mmol, lekv.) atetraethyl-methylendifosfonát (3 ml; 12,1 mmol; 2 ekv.) byly rozpuštěny v suchém dimethylformamidu (30 ml) pod argonovou atmosférou a roztok byl ochlazen na 0 °C. Hydrid sodný (484 mg 60 % olejové disperze; 12,1 mmol; 2 ekv.) byl přidán vjednom dílu a směs byla míchána přes noc při 40 °C. Reakce byla ukončena nasyceným vodným roztokem NH4CI zředěným na poloviční koncentraci, extrahována ethylacetátem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Olejový podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 40 % C) se ziskem 1,2 g (52 %) čirého oleje 2-hydroxy-6j odbenzaldehydu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7,) δ 10,70 (s, 1H); 7,43 (dd, J= 6,9, 1,9 Hz, 1H); 7,42 (dd, J= 24,2, 16,7 Hz, I H); 6,96 (dd, J = 8,3, 1,5 Hz, 1H); 6,91 (t, 7=8,2, 7,5 Hz, 1H); 6,69 (dd, 7= 21,7, 17,5 Hz, 1H); 4,02 (q, 7=7,1 Hz, 4H); 1,27 (t, 7=7,1 Hz, 6H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-7,) δ 158,54 - 156,63 (m); 148,12 (d, 7= 8,0 Hz); 131,89, 130,66, 123,24 (d, 7= 22,1 Hz); 120,16 (d, 7= 182,8 Hz); 116,74; 103,66; 61,31 (d, 7=5,6 Hz); 16,30 (d, 7= 5,9 Hz).³¹P NMR (162 MHz, DMSO-7,) δ 21,53. MS (ESI) m/z = 383,1 [M + H]⁺ (vypočteno 383,0).

Obecná syntéza pro látky L31-L42 (S3)

Výchozí fenol (500 mg; 1,31 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém dimethylformamidu pod

-24CZ 309199 B6 argonovou atmosférou a roztok byl ochlazen na 0 °C. Následně byl přidán hydrid sodný (79 mg 60% disperze v oleji; 1,96 mmol; 1,5 ekv.) a směs byla míchána 30 minut při teplotě místnosti. Pak bylo přidáno alkylační nebo arylační činidlo (2,62 mmol; 2 ekv.) a směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem nasyceného vodného roztoku NH4CI zředěného na poloviční koncentraci, extrahována ethylacetátem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Olejový podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 30 % C).

Příklad 31

Diethyl-(£)-(2-jod-4-methoxystyryl)fosfonát L31

MMX ,..¾ ..7

11^

Obecná syntéza S3 s jodmethanem (163 μΐ) poskytla 462 mg (86 %) uvedeného produktu jako čirého oleje.

Ή NMR(401 MHz, Chloroform-d) δ 7,53 (dd, J = 22,4, 17,3 Hz, 1H); 7,41 (d, 7=8,7 Hz, 1H); 7,33 (d, 7= 2,6 Hz, 1H); 6,85 (ddd, 7= 8,7, 2,6, 0,7 Hz, 1H); 5,98 (dd, 7= 18,0, 17,3 Hz, 1H); 4,09 (q, 7 = 7,0 Hz, 4H); 3,74 (s, 3H); 1,31 (t, 7 = 7,0, 6H), ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 160,86; 150,62 (d, 7 =8,1 Hz); 130,43 (d, 7 = 23,7 Hz); 127,54; 124,58; 114,98; 114,78 (d, 7 = 192,0 Hz); 101,57; 61,95 (d, 7= 5,6 Hz); 55,60; 16,43 (d, 7= 6,5 Hz). MS (ESI) m/z 397,0 [M + H]⁺ (vypočteno 397,0).

Příklad 32

Diethyl-(£)-(2-jod-4-isopropoxystyryl)fosfonát L32

Obecná syntéza S3 s 2-jodpropanem (261 μΐ) poskytla 465 mg (84% výtěžek) uvedeného produktu jako nažloutlého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,52 (dd, 7= 22,4, 17,2 Hz, 1H); 7,39 (d, 7 = 8,8 Hz, 1H); 7,31 (d, 7= 2,6 Hz, 1H); 6,80 (ddd, 7= 8,8, 2,7, 0,7 Hz, 1H); 5,96 (dd, 7 = 18,0, 17,3 Hz, 1H); 4,47 (p, 7=6,1 Hz, 1H); 4,08 (q,7= 7,1 Hz, 4H); 1,29 (t, 7=7,1 Hz, 6H); 1,25 (d,7= 6,1 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 159,35; 150,71 (d; 7= 8,0 Hz), 130,04 (d; 7= 24,2 Hz), 127,56; 126,36; 116,15; 114,49 (d; 7= 192,2 Hz), 101,67; 70,43; 61,93 (d; 7= 5,8 Hz), 21,83; 16,43 (d; 7=6,5 Hz). MS (ESI) m/z = 425,3 [M + H]⁺ (vypočteno 425,0).

Příklad 33

Diethyl-(£)-(2-jod-4-((perfluorfenyl)methoxy)styryl)fosfonát L33

-25 CZ 309199 B6

Obecná syntéza S3 s 2,3,4,5,6-pentafluorbenzylbromidem (395 pl) po chromatografíi (B do 40 % C) poskytla 700 mg (95% výtěžek) uvedeného produktu jako čirého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 7,59 (dd, J= 22,4, 17,3 Hz, 1H); 7,50 (d, J= 5,1 Hz, 1H); 7,49 (d, J = 1,0 Hz, 1H); 6,97 (ddd, J = 8,8, 2,6, 0,7 Hz, 1H); 6,07 (t, J = 17,5 Hz, 1H); 5,12 (s, 2H); 4,25 - 4,06 (m, 4H); 1,37 (t, J = 7,1 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 159,15; 150,44 (d, J= 8,0 Hz); 147,58 - 146,63 (m); 144,97 - 144,02 (m); 139,40 - 138,40 (m); 131,99(d, J =24,1 Hz); 127,91; 125,69; 116,01 (d, J= 191,7Hz); 115,61; 109,86-108,61 (m); 101,49; 62,19 (d, J = 5,4 Hz); 57,77; 16,59 (d, J = 6,5 Hz). ¹⁹F NMR (377 MHz, Chloroform-í/) δ -138,39 až 143,87 (m); -151,79; -161,10 (d, J= 7,2 Hz). MS (ESI) m/z = 563,2 [M + H]⁺ (vypočteno 563,0).

Příklad 34

Diethyl-(£)-(2-jod-4-((perfluorfenyl)oxy)styryl)fosfonát L34

Obecná syntéza S3 s hexafluorbenzenem (151 μΐ) při 70 °C a chromatografíi (B do 30 % C) poskytla 530 mg (74% výtěžek) uvedeného produktu jako čirého oleje. Ή NMR (401 MHz, Chloroform-í/) δ 7,59 (dd, J = 22,3, 17,3 Hz, 1H); 7,50 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,44 (d, J = 2,6 Hz, 1H); 7,00 - 6,93 (m, 1H); 6,10(t, J = 17,4 Hz, 1H); 4,16 (q, J = 7,1 Hz, 4H); 1,37 (t, 7=7,1 Hz, 6H). ¹³CNMR(101 MHz, Chloroform-7) δ 157,73; 150,02 (d, J= 7,9Hz); 134,36 (d, 7=23,7Hz); 128,18; 126,43; 117,52 (d,J= 191,4 Hz); 115,90; 100,99; 62,34 (d, 7= 5,7 Hz); 16,56. MS (ESI) m/z = 549,2 [M + H]⁺ (vypočteno 549,0).

Příklad 35

Diethyl-(£)-(2-j od-5 -methoxystyryljfosfonát L3 5

Obecná syntéza S3 s jodmethanem (163 μΐ) poskytla 326 mg (63% výtěžek) uvedeného produktu jako čirého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-í/) δ 7,63 (d, J= 8,7 Hz, 1H); 7,50 (dd, J= 22,2, 17,3 Hz, 1H); 6,98 (d, J= 3,0 Hz, 1H); 6,58 (dd, J = 8,7, 3,0 Hz, 1H); 6,08 (dd, 7=18,0, 17,3 Hz, 1H);4,O9 (q, J =7,1 Hz, 4H); 3,72 (s, 3H); 1,39 - 1,19 (m,6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 159,97; 150,94 (d, J= 7,4 Hz); 140,22; 138,82 (d, J= 23,5 Hz); 117,75 (d, J= 190,1 Hz); 117,69; 112,53 (d, J = 1,6 Hz); 89,12; 62,04 (d, J = 5,7 Hz); 55,41; 16,39 (d, J = 6,6 Hz). ³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-J/) δ 20; 12. MS (ESI) m/z = 397,1 [M + U]⁺ (vypočteno 397,0).

Příklad 36

Diethyl-(£)-(2-jod-5-isopropoxystyryl)fosfonát L36

-26CZ 309199 B6

Obecná syntéza S3 s 2-jodpropanem (261 pl) poskytla 402 mg (72% výtěžek) uvedeného produktu jako nažloutlého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,56 (d, 7=8,7 Hz, 1H); 7,45 (dd, 7= 22,2, 17,3 Hz, 1H); 6,93 (d, 7=3,0 Hz, 1H); 6,51 (dd,7= 8,7, 3,0 Hz, 1H); 6,01 (dd,7= 18,0, 17,3 Hz, 1H); 4,40 (hept, 7- 6,0 Hz, 1H); 4,03 (q, 7= 7,1 Hz, 4H); 1,24 (t, 7=7,1 6H); 1,18 (d, 7 = 6,0 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHZ, Chloroform-7) δ 158,12; 150,87 (d, 7 = 7,8 Hz); 140,09; 138,71 (d, 7 = 23,5 Hz); 119,05; 117,45 (d, 7= 190,1 Hz); 114,57 (d, 7= 1,4 Hz); 88,62; 70,02; 61,87 (d, 7= 5,8 Hz); 21,66; 16,26 (d, 7= 6,5 Hz). ³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-7) δ 20,13. MS (ESI) m/z = 425,2 [ M + H]⁺ (vypočteno 425,0).

Příklad 37

Diethyl -(£) -(2-j od-5 -((perfluorfenyl)methoxy) styryljfosfonát L3 7

Obecná syntéza S3 s 2,3,4,5,6-pentafluorbenzylbromidem (305 μΐ) po chromatografii (B do 40 % C) poskytla 675 mg (92% výtěžek) uvedeného produktu jako čirého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 7,63 (d, 7 = 8,7 Hz, 1H); 7,46 (dd, 7 = 22,2, 17,3 Hz, 1H); 7,06 (d, 7= 3,0 Hz, 1H); 6,64 (dd, 7= 8,7, 3,0 Hz, 1 H); 6,09 (t, 7 = 17,4 Hz, 1H); 5,04 (s, 2H); 4,07 (q, 7= 7,1 Hz,4H); 1,27 (t, 7= 7,1 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz; Chloroform-7) δ 158,27; 150,45 (d, 7=7,5 Hz); 146,77 (td, 7= 7,4; 3,8 Hz); 144,31 (tt, 7= 7,9; 4,2 Hz); 142,93 (tt, 7= 13,2; 5,1 Hz); 140,42; 139,10 (d, 7= 23,5 Hz); 118,25 (d,7= 189,0 Hz); 118,13; 113,35; 100,51 (td, 7 = 17,4; 4,0 Hz); 90,43; 62,02 (d, 7 = 5,5 Hz); 57,50; 16,23 (d, 7= 6,5 Hz).³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-7) δ 19,75. ¹⁹F NMR (377 MHz, Chloroform-d) δ -142,27 (d, 7 = 13,2 Hz); -152,41; -161,51 (d, 7= 7,2 Hz). MS (ESI) m/z = 563,0 [M + H]⁺ (vypočteno 563,0).

Příklad 38

Diethyl-(£)-(2-jod-5-((perfluorfenyl)oxy)styryl)fosfonát L38

Obecná syntéza S3 s hexafluorbenzenem (151 μΐ) při 70 °C poskytla 300 mg (42% výtěžek) uvedeného produktu jako čirého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,75 (d, 7= 8,7 Hz, IH); 7,50 (dd, 7 = 22,1, 17,3 Hz, 1H); 7,07 (d, 7= 3,0 Hz, 1H); 6,65 (dd, 7= 8,7, 3,0 Hz, 1H); 6,07 (dd, 7= 34,8, 17,4Hz, 1H); 4,12 (q, 7 = 7,0 Hz, 4H); 1,32 (t, 7= 7,0 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz; Chloroform-d) δ 157,56; 149,94 (d, 7= 7,7 Hz); 143,15 (dq, 7= 12,0; 4,0 Hz); 140,94; 139,04 (d, 7= 23,7 Hz); 137,02 (tt, 7= 13,5; 3,8 Hz); 137,03 (ddt, 7= 16,8; 9,3; 3,5 Hz); 128,91 (t, 7= 13,6 Hz); 119,29 (d, J = 190,2 Hz); 118,29; 114,17 (d, 7= 1,9 Hz); 93,06; 62,27 (d, 7= 5,6 Hz); 16,41 (d, 7= 6,4 Hz). ³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-7) δ 19,40. ¹⁹F NMR (377 MHz, Chloroform-7) δ-153,82 (d, 7= 17,3 Hz); -158,64; -161,25 (dd, .7 = 21,6, 17,0 Hz). MS (ESI) m/z = 549,1 [M + H]⁺ (vypočteno 549,0).

-27CZ 309199 B6

Příklad 39

Diethyl-(£)-(2-jod-6-methoxystyryl)fosfonát L39

C1

T

Obecná syntéza S3 s jodmethanem (163 μΐ) poskytla 483 mg (93% výtěžek) uvedeného produktu jako čirého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,49 (dd, J= 7,6, 1,3 Hz, 1H); 7,47 (dd, J= 25,0, 17,7 Hz, 1H); 6,92 (t, 7=8,2, 7,8 Hz, 1H); 6,86 (dd, 7=8,4, 1,3 Hz, 1H); 6,54 (dd, 7= 21,3, 17,6 Hz, 1H); 4,13 (q, 7=7,1 Hz, 4H); 3,80 (s, 3H); 1,34 (t, 7= 7,1 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroformd) δ 158,54 (d, 7= 2,1 Hz); 148,06 (d, 7= 7,5 Hz); 132,32; 131,19; 126,54(d, 7= 23,0 Hz); 121,16 (d,7= 184,3 Hz); 111,36; 102,64; 61,96 (d,7 = 5,3 Hz); 55,74; 16,50 (d,7 = 6,5 Hz). MS (ESI) m/z = 396,9 [M + H]⁺ (vypočteno 397,0).

Příklad 40

Diethyl-(£)-(2-jod-6-isopropoxystyryl)fosfonát L40

Obecná syntéza S3 s 2-jodpropanem (261 μΐ) poskytla 488 mg (88% výtěžek) uvedeného produktu jako nažloutlého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,46 (dd, 7= 6,3, 2,6 Hz, 1H); 7,45 (dd, 7= 24,9, 17,6 Hz, 1H); 6,92 -6,84 (m, 2H); 6,53 (dd,7=21,6, 17,6 Hz, 1H); 4,56 (hept, 7= 6,1 Hz, 1H) 4,21 -4,06 (m, 4H); 1,39 - 1,29 (m, 12H ). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 156,79 (d, 7= 2,1 Hz); 148,46 (d, 7=8,0 Hz); 132,03; 131,01; 127,50 (d, 7= 22,6 Hz); 121,08 (d, 7= 183,5 Hz); 113,75; 102,63; 71,33; 61,94 (d, 7=5,2 Hz); 22,05; 16,53 (d, 7=6,6 Hz). MS (ESI) m/z = 425,0 [M + H]⁺ (vypočteno 425,0).

Příklad 41

Diethyl-(£)-(2-jod-4-((perfluorfenyl)methoxy)styryl)fosfonát L41

I

Obecná syntéza S3 s 2,3,4,5,6-pentafluorbenzylbromidem (395 μΐ) po chromatografii (B do 40 % C) poskytla 668 mg (91% výtěžek) uvedeného produktu jako čirého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 7,65 - 7,53 (m, 1H); 7,37 (ddd, 7= 24,5, 17,6, 2,0 Hz, 1H); 7,03 (d, 7=8,4 Hz, 1H); 6,97 (td, 7= 8,0, 1,5 Hz, 1H); 6,29 (ddd, 7= 20,4, 17,6, 1,7 Hz, 1 H); 5,14 (d, 7= 1,6 Hz, 2H); 4,21 - 3,95 (m, 4H); 1,29 (t, 7=7,1 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform

d) δ 156,23; 147,38 (d. J = 7,7 Hz); 147,25 - 146,51 (m); 145,30 - 144,00 (m); 136,77 - 135,83 (m); 133,59; 131,12; 128,10 (d, J = 24,2 Hz); 122,08 (d, J = 183,1Hz); 112,82; 110,47 - 108,60 (m); 102,16; 61,95 (d, J = 5,2 Hz); 58,18; 16,38 (d, J = 6,5 Hz). MS (ESI) m/z 563,1 [M + H]⁺ (vypočteno 563,0).

Příklad 42

Diethyl-(£)-(2-jod-4-((perfluorfenyl)oxy)styryl)fosfonát L42

Obecná syntéza S3 s hexafluorbenzenem (151 pl) při 70 °C poskytla 356 mg (50% výtěžek) uvedeného produktu jako čirého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,62 (dd, J= 7,9, 1,0 Hz, 1H); 7,44 (dd, J = 24,1, 17,7 Hz, 1H); 6,87 (t, 7=8,1 Hz, 1H); 6,61 (d, 7=7,9 Hz, 1H); 6,40 (dd,7= 19,6, 17,7 Hz, 1H); 4,11 (q, 7 =7,1 Hz, 4H); 1,30 (t, 7 = 7,0 Hz, 6H). 13C NMR (101 MHz; Chloroform-í/) δ 154,61; 146,20 (d, J = 7,4 Hz); 135,43; 130,98; 128,21 (d, J = 23,5 Hz); 123,28 (d, J = 184,7 Hz); 113,99; 101,47 (d, J = 1,9 Hz); 62,15 (d, J = 5,3 Hz); 16,33 (d, J = 6,3 Hz). ³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-í/) δ 19,80. ¹⁹F NMR (377 MHz, Chloroform-d) δ -154,00 (d, 7 = 17,2 Hz); -158,67; -161,32 (d, 7= 4,5 Hz). MS (ESI) m/z = 549,2 |M + H]⁺ (vypočteno 549,0).

Příklad 43

Diisopropyl-((4-fluor-2-jodfenoxy)methyl)fosfonát L43 * X^s·'* ?χ^'* ^{ř s s}

4-Fluor-2-jodfenol (1 g; 4,20 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofiiranu (20 ml) pod argonovou atmosférou. Roztok byl ochlazen na 0 °C, byl přidán hydrid sodný (210 mg 60 % olejové disperze; 5,25 mmol; 1,25 ekv.) a směs byla míchána 15 minut při 0 °C. Poté byl přidán TfOCH2P(O)(O/-Pr)2 (1,72 g; 5,25 mmol; 1,25 ekv.) a směs byla míchána při 0 °C dalších 15 minut. Reakce byla ukončena přidáním zředěného vodného roztoku NH4CI a extrahována ethylacetátem (3x). Organická fáze byla promyta solankou (3x), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Olejový podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) s výtěžkem 1,39 g (79 %) bezbarvého oleje diisopropyl-((4-fluor-2-jodfenoxy)methyl)-fosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 7,49 (dd, 7= 7,5, 3,0 Hz, 1H); 7,02 (ddd, 7= 9,0, 7,7, 3,0 Hz, 1H); 6,86 (dd, 7= 9,1,4,5 Hz, 1H); 5,02 - 4,72 (m, 2H); 4,24 (d, 7=9,9 Hz, 2H); 1,42 - 1,31 (m, 12H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-í/) δ 157,48 (d, 7= 245,0 Hz); 154.31 (dd, 7 13,2, 2,3 Hz); 126,47 (d, 7= 25,0 Hz); 115,87 (d, 7= 22,9 Hz); 112,95 (d, 7= 8,2 Hz); 85,73 (d, 7= 8,6 Hz); 72,26 (d,7= 6,6 Hz); 64,58 (d,7= 170,1 Hz); 26,53 - 22,24 (m). ¹⁹FNMR(377 MHz, Chloroformd) δ -120,75 (d, 7= 4,3 Hz), ³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-d) δ 18,12. MS (ESI) m/z = 417,0 [M + H]⁺ (vypočteno 417,0).

-29CZ 309199 B6

Příklad 44

Diisopropyl-((2-jod-6-methoxyfenoxy)methyl)fosfonát L44

2-Jod-6-methoxyfenol (1 g; 4,0 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (20 ml) pod argonovou atmosférou. Roztok byl ochlazen na 0 °C, poté byl přidán hydrid sodný (200 mg, 60% olejová disperze; 5,0 mmol; 1,25 ekv.) a směs byla míchána 15 minut při 0 °C. Poté byl přidán TfOCH2P(O)(Oz-Pr)2 (1,64 g; 5,0 mmol; 1,25 ekv.) a směs byla míchána při 0 °C dalších 15 minut. Reakce byla ukončena přídavkem zředěného vodného roztoku NH4CI a extrahována ethylacetátem (3x). Organická fáze byla promyta solankou (3x), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Olejový podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) s výtěžkem 1,7 g (99 %) bezbarvého oleje diisopropyl-((2-jod-6-methoxyfenoxy)methyl)fosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,33 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 1H); 6,87 (dd, 7=8,2, 1,6 Hz, 1H); 6,80 (t, 7=8,0 Hz, 1H); 5,00 - 4,82 (m, 2H); 4,31 (d, 7=9,7 Hz, 2H); 3,83 (s, 3H); 1,41 (d, 7= 6,2 Hz, 12H). ¹³CNMR(101 MHz, Chloroform-7) δ 152,56: 147,76 (d,7= 14,8 Hz); 130,87; 126,59; 112,90; 91,80; 72,17 (d, 7= 6,6 Hz); 66,10 (d, 7= 166,6 Hz); 55,97; 26,07- 22,47 (m). ³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-7) δ 19,60. MS (ESI) m/z = 429,2 [M + H]⁺ (vypočteno 429,0).

Příklad 45

Diisopropyl-(((3-jodpyridin-4-yl)oxy)methyl)fosfonát L45

4-Hydroxy-2-jodopyridin (442 mg; 2,00 mmol; 1 ekv.) a terc-butoxid draselný (247 mg; 2,2 mmol;

1,1 ekv.) byly rozpuštěny v suchem dimethylformamidu (5 ml) pod argonovou atmosférou. Poté byl přidán TfOCH2P(O)(Oz-Pr)2 (881 mg; 2,4 mmol; 1,20 ekv.) a směs byla míchána při 70 °C přes noc. Reakce byla ukončena přídavkem zředěného vodného roztoku NH4CI a extrahována ethylacetátem (3x). Organická fáze byla promyta solankou (3x), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) s výtěžkem 642 mg (80 %) bezbarvého oleje diisopropyl-(((3-jodpyridin-4-yl)oxy)methyl)fosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7₆) δ 8,22 (d, 7= 2,3 Hz, 1H); 7,63 (dd, 7=7,5, 2,2 Hz, 1H); 6,18 (d, 7 = 7,5 Hz, 1H); 4,68-4,56 (m, 2H); 4,52 (d, 7 = 11,6 Hz, 2H); 1,26 - 1,20 (m, 12H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-Je) δ 173,01; 146,53; 141,38; 113,09; 92,32; 71,45 (d, 7= 6,7 Hz); 50,17 (d, 7 = 151,7 Hz); 23,67 (m). ³¹P NMR (162 MHz, DMSO-7,) δ 19,42. MS (ESI) m/z = 400,2 [M + H]⁺ (vypočteno 400,0).

Příklad 46

Diethyl-(£)-(2-(5-jodfiiran-2-yl)vinyl)fosfonát L46

-30CZ 309199 B6

Tetraethyl-methylendifosfonát (597 μΐ; 2,4 mmol; 1,2 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (4 ml) pod argonovou atmosférou a poté byl přidán terc-butoxid draselný (269 mg; 2,4 mmol; 1,2 ekv.). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a následně byl přidán roztok 5-jodfuran-2-karbaldehydu (444 mg; 2,0 mmol; 1 ekv.) v suchém tetrahydrofuranu (1 ml). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a reakce byla ukončena přídavkem 1 mol l¹ HCL (aq.), extrahována dichlormethanem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSOr, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 40 % C) se ziskem 624 mg (88% výtěžek) čirého oleje diethyl-(£)-(2-(5-jodfuran-2-yl)vinyl)fosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7,) δ 7,12 (dd, J= 22,4, 17,4 Hz, 1H); 6,84 (d, J= 3,4 Hz, 1H); 6,82 (d, 7=3,5 Hz, 1H); 6,08 (t, 7 = 17,5 Hz, 1H); 3,99 (q, 7= 7,0 Hz,4H); 1,24 (t, 7= 7,0 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-7.) δ 155,60 (d, 7= 26,3 Hz); 133,28 (d, 7 = 7,6 Hz); 122,77; 117,03; 111,88 (d, 7 = 190,5 Hz); 96,77; 61,36 (d, 7= 5,4 Hz); 16,22 (d, 7 = 6,0 Hz).³¹P NMR (162 MHz, DMSO-7,) δ 20,99. MS (ESI) m/z = 357,1 [M + H]⁺ (vypočteno 357,0).

Příklad 47

Diethyl-(£)-(2-(2-jodthiofen-3-yl)vinyl)fosfonát L47

Tetraethyl-methylendifosfonát (597 μΐ; 2,4 mmol; 1,2 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (4 ml) pod argonovou atmosférou, pak byl přidán terc-butoxid draselný (269 mg; 2,4 mmol; 1,2 ekv.). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a následně byl přidán roztok 2-jodthiofen-3-karbaldehydu (478 mg; 2,0 mmol; 1 ekv.) v suchém tetrahydrofuranu (1 ml). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a reakce byla ukončena přídavkem 1 mol · I¹ HC1 (aq.), extrahována dichlormethanem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSOr, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 40 % C) se ziskem 596 mg (80 %) čirého oleje diethyl-(£)-(2-(2-jodthiofen-3-yl)vinyl)fosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7,) δ 7,82 (dd, 7= 5,6, 0,8 Hz, 1H); 7,45 (d, 7 = 5,6 Hz, 1H); 7,15 (dd,7=22,4, 17,1 Hz, 1H);6,51 (dd,7= 18,1, 17,3 Hz, 1H); 4,02 (q,7 = 7,1 Hz, 4H); 1,26 (t,7 = 7,0 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ 141,41 (d, 7=7,3 Hz); 140,87 (d, 7=24,7 Hz); 132,75; 125,90; 116,75 (d,7= 185,7 Hz); 86,01; 61,35 (d, 7= 5,4 Hz); 16,25 (d, 7= 6,0 Hz). ³¹P NMR (162 MHz, DMSO-7.) δ 21,59. MS (ESI) m/z = 373,1 [M + H]⁺ (vypočteno 372,9).

Příklad 48

Diisopropyl-((thiofen-3-yl)oxy)methyl)fosfonát L48 (Thiofen-3-yl)boronová kyselina (10 g; 78,2 mmol; 1 ekv.) byla rozpuštěna v diethyletheru

-31 CZ 309199 B6 (190 ml). Roztok byl míchán při teplotě místnosti a k roztoku byl přikapán vodný roztok peroxidu vodíku (54 ml, 10% roztok). Směs byla zahřívána 1 hodinu při 40 °C a poté byla ochlazena na teplotu místnosti. Směs byla extrahována diethyletherem (3x), promyta vodným roztokem Mohrovy soli (3x, 10% roztok), promyta solankou (Ix), sušena síranem hořečnatým a zfiltrována. Rozpouštědla byla odpařena při 40 °C a 90 kPa a zbytek byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (78 ml) pod argonovou atmosférou. Roztok byl ochlazen na 0 °C, byl přidán hydrid sodný (3,9 g 60 % olejové disperze; 97,7 mmol; 1,25 ekv.) a směs byla míchána 30 minut při 0 °C. Poté byl přidán TfOCH2P(O)(Oz-Pr)2 (32 g; 97,7 mmol; 1,25 ekv.) a směs byla míchána při 0 °C další 1 hodinu. Reakce byla ukončena přidáním vodného roztoku NH4CI a extrahována ethylacetátem (3x). Organická fáze byla promyta solankou (3x), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Olejový podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) s výtěžkem 10,5 g (48%) černého oleje diisopropyl(((thiofen-3-yl)oxy)methyl)fosfonátu.

¹HNMR(401 MHz, Chloroform-d) δ 7,16 (dd, J= 5,3, 3,1 Hz, 1H); 6,78 (dd, J = 5,3, 1,6Hz, 1H); 6,35 (dd, 7=3,2, 1,6 Hz, 1H); 4,95 - 4,66 (m, 2H); 4,22 (d, 7= 9,9 Hz, 2H); 1,40 - 1,28 (m, 12H). ¹³CNMR(101 MHz, Chloroform-d) δ 157,77 (d,7= 15,5 Hz); 125,21; 119,39; 98,69; 71,93 (d, 7 = 6,7 Hz); 64,89 (d, 7= 171,2 Hz); 24,12 (m). ³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-d) δ 19,40. MS (ESI) m/z = 279,1 [M + H]⁺ (vypočteno 279,1).

Příklad 49

Diisopropyl-(((2-jodthiofen-3-yl)oxy)methyl)fosfonát L49

Diisopropyl-(((thiofen-3-yl)oxy)methyl)fosfonát (557 mg; 2,0 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v absolutním ethanolu (10 ml) a ke směsi byl přidán /V-jodsukcinimid (450 mg; 2,0 mol; 1 ekv.). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti. Poté byla naředěna vodou, extrahována ethylacetátem (3x), promyta solankou (Ix), sušena síranem hořečnatým a zfiltrována. Směs byla odpařena do sucha, pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 40 % C) se ziskem 770 mg (95 %) čirého oleje diethyl-(((2-jodthiofen-3-yl)oxy)methyl)fosfonátu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7,) δ 7,73 (d, 7 = 5,8 Hz, 1H); 6,99 (d, 7= 5,8 Hz, 1H); 4,77 - 4,61 (m, 2H); 4,42 (d, 7=9,1 Hz, 2H); 1,30 - 1,26 (m, 12H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-7,) δ 159,16 (d, 7= 13,0 Hz); 131,12; 117,99; 99,79; 71,28 (d, 7= 6,5 Hz); 65,77 (d, 7= 165,0 Hz); 24,34 (m).³¹P NMR (162 MHz, DMSO-7,) δ 19,29. MS (ESI) m/z = 405,1 [M + H]⁺ (vypočteno 405,0).

Příklad 50 (£)-7-((2-(2-(Fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pynOlo[3,2-d]pyrimidin-4-on sodný L50

-32CZ 309199 B6

Látka L4 (500 mg; 1,29 mmol; 1 ekv.), jodid měďný (25 mg; 0,1290 mmol; 0,1 ekv.) a uhličitan česný (505 mg; 1,55 mmol; 1,2 ekv.) byly dány do mikrovlnné kyvety a kyveta byla naplněna argonem. Do kyvety byly poté postupně přidány suchý toluen (5 ml), diethyl-(£)-(2jodstyryl)fosfonát LI7 (559 mg, 1,33 mmol; 1,1 ekv.) a 2-isobutyrylcyklohexanon (43 pl; 0,2580 mmol; 0,2 ekv.) a směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 2 hodiny při 120 °C. Směs byla rozpuštěna v chloroformu, promyta z nasyceným nasyceným vodným roztokem NaHCCL ředěným na polovinu (2x), 1 mol I¹ HC1 (aq.), solankou (3x), sušena MgSOr, zfiltrována a odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (B do 15 % C) se ziskem 800 mg (99 %) produktu jako čirého oleje. Produkt byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace.

Meziprodukt (680 mg) byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu. Směs byla odpařena do sucha, zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (D do 15 % A) se ziskem 250 mg (48 %) diisopropylfosfonátu jako bílé pevné látky. Baňka byla naplněna diethylfosfonátem (100 mg), uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu triethylammoného (2 mol l¹) a směs byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (C18, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfíltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody se ziskem 86 mg (89 %) bílého lyofílizátu produktu.

Ή NMR (400 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,04 (d, 7=3,0 Hz, 1H); 7,81 (d, 7 = 2,9 Hz, 1H); 7,79 7,66 (m, 1H); 7,62 (dd, 7 = 7,7, 2,7 Hz, 1H); 7,14 (dtd, 7 = 38,7, 7,5, 2,7 Hz, 2H); 6,89 (dd, 7 = 7,9, 2,9 Hz, 1H); 6,51 (td, 7= 16,8, 3,0 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 156,17; 147,22; 144,45; 138,59 (d, 7= 6,1 Hz); 138,22; 136,89; 135,91 (d, 7= 21,3 Hz); 130,63; 128,22 (d,7= 112,1Hz); 128,02 (d,7= 10,9 Hz); 126,22; 119,69; 104,05,3¹PNMR(162 MHz, Deuterium Oxid) δ 13101. MS (ESI) m/z = 350,2 [M + H]⁺ (vypočteno 350,3) pro volnou kyselinu.

Příklad 51

7-((2-((Fosfonáto)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo [3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L51

-33 CZ 309199 B6

Látka L4 (500 mg; 1,29 mmol; 1 ekv.), jodid měďný (25 mg; 0,1290 mmol; 0,1 ekv.) a uhličitan česný (505 mg; 1,55 mmol; 1,2 ekv.) byly dány do mikrovlnné kyvety a kyveta byla naplněna argonem. Do kyvety byly poté postupně přidány suchý toluen (5 ml), diisopropyl-((2jodfenoxy)methyl)fosfonátL18 (565 mg, 1,33 mmol; 1,1 ekv.) a 2-isobutyrylcyklohexanon (43 pl; 0,2580 mmol; 0,2 ekv.) a směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 2 hodiny při 120 °C. Směs byla rozpuštěna v chloroformu, promyta nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ zředěným na poloviční koncentraci (2x), 1 mol I¹ HC1 (aq.), solankou (3x), sušena MgSO4, zfíltrována a odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (B do 15 % C) se ziskem 700 mg (81 %) produktu jako čirého oleje. Produkt byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace.

Meziprodukt (680 mg) byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Směs byla odpařena do sucha, zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (D do 15 % A) se ziskem 320 mg (71 %) diisopropyl-fosfonátu jako bílé pevné látky. Baňka byla naplněna diethyl-fosfonátem (100 mg), uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu triethylammoného (2 mol l¹) a směs byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (C18, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfiltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody se ziskem 72 mg (79 %) bílého lyofílizátu produktu.

ΉNMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,03 (s. 1H); 7,82 (s, 1H); 7,17 (ddd, J = 8,7, 7,2, 1,6Hz, 1H); 7,11 (dd, J= 8,4, 1,3 Hz, 1H); 6,76 (td, J= 7,5, 1,3 Hz, 1H); 6,65 (dd, J= 7,8, 1,6 Hz, 1H); 4,23 (d,7=9,8 Hz, 2H). ¹³CNMR(101 MHz, Deuterium Oxid) δ 156,66 (d.7 = 13,2 Hz); 156,53; 147,59; 144,48; 137,34; 128,30; 128,04; 127,66; 123,21; 119,81; 113,62; 102,97; 66,53 (d, 7 = 156,8 Hz). ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 16,07. MS (ESI) m/z = 354,1 [M + H]⁺ (vypočteno 354,3) pro volnou kyselinu.

Obecná syntéza pro látky L52-74 (S4)

Látka L4 (100 mg; 0,2580 mmol; 1 ekv.) a jodid měďný (5 mg; 0,0258 mmol; 0,1 ekv.) byly dány do mikrovlnné kyvety a kyveta byla naplněna argonem. Do kyvety byly poté postupné přidány suchý dimethylformamid (2 ml), odpovídající aryljodid (0,3096 mmol; 1,2 ekv.), triethylamin (54 μΐ; 0,3870 mmol; 1,5 ekv.) a 2-isobutyrylcyklohexanon (9 μΐ; 0,0516 mmol; 0,2 ekv.) a směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 2-3 hodiny při 120 °C. Směs byla rozpuštěna v chloroformu, promyta nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ zředěným na poloviční koncentraci (2x), 1 mol l¹ HC1 (aq.), solankou (3x), sušena MgSO4, zfíltrována a odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (B do 30 % C). Meziprodukt kroku 1 byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace.

Meziprodukt byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu. Směs byla odpařena do sucha a baňka byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu

-34CZ 309199 B6 triethylammoného (2 mol· T¹), malém množství methanolu a směs byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody (rozpustnost lze vylepšit přidáním malého množství vodného amoniaku) a produkt byl čištěn pomocí HPLC (Cl8, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfiltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody.

Příklad 52 (£)-7-((4-Brom-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-J]pyrimidin-4-on sodný L52

O

Obecná metoda S4 z 300 mg látky L4 a diethyl-(£)-(5-brom-2-jodstyryl)fosfonátu L7 (414 mg) poskytla 216 mg (40 %) meziproduktu kroku 1 a 71 mg (40 %) bílého lyofilizátu látky L52.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,14 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 8,03 (d, J = 1,5 Hz, 1H); 7,81 (d, J= 2,2 Hz, 1H); 7,67 (d, J= 13,6 Hz, 1H); 7,51 (dd, 7=18,5, 17,2 Hz, 1H); 7,23 (ddd, 7= 12,3, 8,5, 2,2 Hz, 1H); 7,10 (dd, 7= 39,2, 14,2 Hz, 1H); 6,70 (dd, 7 = 31,4, 8,5 Hz, 1H); 6,55 (dd, 7 = 17,2, 13,4 Hz, 1H); 6,21 (dd, 7= 14,2, 10,8 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 165,68; 152,68; 149,36 (d, 7 = 6,1 Hz); 139,42; 139,36; 139,17; 138,82; 138,26 (d, 7= 19,6 Hz); 137,96 (d, 7= 7,7 Hz); 132,11; 131,69; 129,34; 127,85; 124,47; 124,40; 119,70; 118,64; 98,08; 97,84.³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 12,23. MS (ESI) m/z = 428,1 [M + H]⁺ (vypočteno 427,9) pro volnou kyselinu.

Příklad 53 (£)-7-((5-Brom-2-(2-(fosfonáto) vi nyl jfcnyl )th io)-3.5 -dihydro-4//-py rrolo 13,2-7| py ri m idi n-4-on sodný L53

Obecná metoda S4 z 300 mg látky L4 a diethyl-(£)-(4-brom-2-jodstyryl)fosfonátu L20 (414 mg) poskytla 184 mg (34 %) meziproduktu kroku 1 a 60 mg (49 %) bílého lyofilizátu látky L53.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,05 (s, 1H); 7,70 (s, 1H); 7,54 (d, 7=8,1 Hz, 1H); 7,50 (dd, 7 = 18,0 Hz, 1H); 7,33 (dd, 7= 8,5, 2,0 Hz, 1H); 6,89 (d, 7=2,0 Hz, 1H); 6,55 (dd, 7= 17,2, 13,7 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 165,78; 152,87; 149,40; 142,40; 139,37; 135,28 (d, 7= 20,1 Hz); 133,99 (d, 7= 6,1 Hz); 132,38 (d, 7= 167,3 Hz); 129,48; 129,16; 124,57; 123,18; 97,51. ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 12,59. MS (ESI) m/z = 428,1 [M + H]⁺ (vypočteno 427,9) pro volnou kyselinu.

-35CZ 309199 B6

Příklad 54 (£)-7-((5-Hydroxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo [3,2-<7]pyrimidin-4on sodný L54

Obecná metoda S4 z 200 mg látky L4 a diethyl-(£)-(4-hydroxy-2-jodstyryl)fosfonátu L23 (198 mg) poskytla 100 mg (30 %) meziproduktu kroku 1 a 15 mg (23 %) bílého lyofilizátu látky L54.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,10 (s, 1H); 7,76 (s, 1H); 7,56 (dd, J= 19,0, 17,3 Hz, 1H); 7,44 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 6,45 (ddd, J= 8,6, 2,6, 0,6 Hz, 1H); 6,25 (dd, J= 17,2, 14,3 Hz, 1H); 6,24 (d, 7=2,6 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 166,50; 163,91; 152,70; 148,30; 139,05; 135,09 (d, J= 4,3 Hz); 128,81; 125,70 (d, J= 171,5 Hz); 124,18 (d, J= 20,2 Hz); 120,97; 117,99; 117,66; 102,13,3^ NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 16,37. MS (ESI) m/z = 366,1 [M + H]⁺ (vypočteno 366,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 55 (£)-7-((5-Methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4on sodný L55 'v í ..... ,ν

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-jod-4-methoxystyryl)fosfonátem L31 (123 mg) poskytla 104 mg (62 %) meziproduktu kroku 1 a 27 mg (59 %) bílého lyofilizátu látky L55.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-d₆) δ 7,84 (s, 1H); 7,54 (s, 1H); 7,42 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,30 (dd, J = 18,9, 17,2 Hz, 1H); 6,63 (dd, J= 8,7, 2,7 Hz, 1H); 6,22 (dd, J = 17,2, 13,6 Hz, 1H); 6,16 (d, J =2,6 Hz, 1H); 3,48 (s, 3H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ 162,68; 159,96; 151,23; 147,81; 140,56; 134,39; 133,27; 130,06 (d, J= 167,9 Hz); 128,61; 121,22; 113,34; 111,21; 111,12; 100,56; 55,98,3³P NMR (162 MHz. Deuterium Oxid) δ 13,38. MS (ESI) m/z = 380,2 [M + H]⁺ (vypočteno 380,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 56 (£)-7-((5-Isopropoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin4-on sodný L56

-36CZ 309199 B6

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(4-isopropoxy-2-jodstyryl)fosfonátem L32 (131 mg) poskytla 170 mg (50 %) meziproduktu kroku 1 a 32 mg (28 %) bílého lyofilizátu látky L56.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-J_ň) δ 7,89 (s, 1H); 7,54 (s, 1H); 7,40 (d, J= 8,5 Hz, 1H); 7,28 (dd, J = 18,7, 17,3 Hz, 1H); 6,56 (dd, J= 8,6, 2,6 Hz, 1H); 6,23 (dd,J= 17,2, 13,9 Hz, 1H); 6,12 (d, J= 2,6 Hz, 1H); 4,27 - 3,97 (m, 1H); 0,93 (d, J = 6,0 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-í/₆) δ 164,88; 158,53; 153,77; 148,76; 140,82; 135,30; 134,17 (d, J= 5,8 Hz); 130,09 (d, J= 155,5 Hz); 129,63 (d, J = 20,2 Hz); 129,19; 121,65; 114,97; 114,38; 100,94; 72,40; 22,56. ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 13,38. MS (ESI) m/z = 408,3 [M + H]⁺ (vypočteno 408,1) pro volnou kyselinu.

Příklad 57 (£)-7-((5-(Perfluorfenyl)methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2ri]pyrimidin-4-on sodný L57

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-jod-4-((perfluorfenyl)methoxy)styryl)fosfonátem L33 (174 mg) poskytla 153 mg (72 %) meziproduktu kroku 1 a 9 mg (8 %) bílého lyofilizátu látky L57.

Ή NMR (500 MHz, Deuterium Oxid) δ 7,98 (s. lil); 7,71 (s. 1H); 7,69 - 7,59 (m, 1H); 7,53 (d, J= 8,6 Hz, 1H); 6,79 - 6,71 (m, 1H); 6,38 (t, J = 16,7 Hz, 1H); 6,23 (s, 1H); 4,97 (s, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, Deuterium Oxid) δ 158,96; 155,94; 147,08; 146,99; 145,18; 144,04; 140,31; 139,19; 137,58 (d, J = 6,4 Hz); 136,63; 129,25 (d, J= 21,8 Hz); 129,11; 124,60 (d, J= 177,4 Hz); 119,64; 114,30; 113,50; 110,77 (t, J= 16,1 Hz); 103,08; 59,01,3³P NMR (162 MHz,

Deuterium Oxid) δ 13,41. MS (ESI) m/z = 546,1 [M + H]⁺ (vypočteno 546,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 58 (£)-7-((5-(Perfluorfenyl)oxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2ri]pyrimidin-4-on sodný L58

-37CZ 309199 B6

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-jod-4-((perfluorfenyl)oxy)styryl)fosfonátem L34 (170 mg poskytla 126 mg (78 %) meziproduktu kroku 1 a 9 mg (12 %) bílého lyofilizátu látky L58.

Ή NMR (500 MHz, Deuterium Oxid) δ 7,95 (d, J= 0,7 Hz, 1H); 7,66 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,59 7,52 (m, 1H); 7,42 (dd, J= 17,9 Hz, 17,9 Hz, 1H); 6,94 (dd, J = 8,6, 2,8 Hz, 1H); 6,57 - 6,41 (m, 1H); 6,09 - 6,05 (m, 1H). ¹³CNMR(126 MHz, Deuterium Oxid) δ 165,44; 158,15; 152,47 149,17; 142,74; 138,11; 133,53 (d, J= 5,6 Hz); 131,44 (d, 7 = 20,1 Hz); 131,22 (d, 7= 168,0 Hz); 129,48; 124,10; 113,67; 112,05; 97,73. ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 13,62 MS (ESI) m/z = 532,0 [M + H] (vypočteno 532,1) pro volnou kyselinu.

Příklad 59 (£)-7-((4-Hydroxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4on sodný L59

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(5-hydroxy-2-jodstyryl)fosfonátem L26 (99 mg) poskytla 120 mg (73 %) meziproduktu kroku 1 a 44 mg (53 %) lyofilizátu látky L59.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,06 (s, 1H); 7,83 (s, 1H); 7,71 (t,7= 18,1 Hz, 1H); 7,10 (d, 7 = 2,7 Hz, 1H); 7,08 (d, 7= 8,7 Hz, 1H); 6,65 (dd, 7= 8,6, 2,7 Hz, 1H); 6,47 (dd, 7= 17,3, 14,1 Hz, 1H). ¹³CNMR(101 MHz, Deuterium Oxid) δ 156,75; 156,69; 147,08; 144,66; 139,97 (d, 7=20,3 Hz); 136,55; 136,21; 133,44; 131,15 (d, 7= 169,1 Hz); 127,81; 119,43; 117,82; 114,33; 106,50,3³Ρ NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 12,90. MS (ESI) m/z = 366,0 [M + H]⁺ (vypočteno 366,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 60 (£)-7-((4-Methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4on sodný L60

Q 0 H i wow

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-jod-5-methoxystyryl)fosfonátem L35 (123 mg) poskytla 160 mg (95 %) meziproduktu kroku 1 a 51 mg (49 %) bílého lyofilizátu látky L60.

³H NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,05 (s, 1H); 7,83 (s, 1H); 7,69 (t,7= 18,1 Hz, 1H); 7,20 (d, 7 = 2,9 Hz, 1H); 7,01 (d, 7= 8,7 Hz, 1H); 6,67 (dd, 7= 8,8, 2,8 Hz, 1H); 6,54 (dd, 7= 17,3, 13,9 Hz, 1H); 3,80 (s, 3H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 159,32; 156,86; 147,20; 144,87; 139,47 (d,7= 19,9Hz); 136,70; 135,78 (d,7= 5,9 Hz); 132,38; 131,84(d,7= 168,8 Hz); 129,16; 119,55; 116,30; 112,80; 105,80; 56,89.³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 12,74. MS

-38CZ 309199 B6 (ESI) m/z = 380,1 [M + H]⁺ (vypočteno 380,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 61 (£)-7-((4-Isopropoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin4-on sodný L61

Obecnámetoda S4 s diethyl-(£)-(5-isopropoxy-2-jodstyryl)fosfonátem L36 (131 mg) poskytla 150 mg (85 %) meziproduktu kroku 1 a 38 mg (38 %) bílého lyofilizátu látky L61.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,04 (s, 1H); 7,81 (s, 1H); 7,80 (dd, J= 20,2, 17,3 Hz, 1H); 7,15 (d, 7=2,8 Hz, 1H); 7,06 (d, 7= 8,7 Hz, 1H); 6,64 (dd, 7= 8,8, 2,8 Hz, 1H); 6,48 (dd, 7 = 17,3, 15,4 Hz, 1H); 4,56 (p, 7= 6,1 Hz, 1H); 1,27 (d, 7=6,2 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 157,50; 156,34; 147,06; 144,42; 139,01 (d, 7= 21,0 Hz); 138,17 (d, 7= 6,4 Hz); 136,61; 133,03; 129,56; 128,57 (d,7= 173,6 Hz); 119,43; 118,67; 115,33; 106,07; 72,99; 22,62. ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 13,70. MS (ESI) m/z = 408,2 [M + H]⁺(vypočteno 408,1) pro volnou kyselinu.

Příklad 62 (£)-7-((4-(Perfluorfenyl)methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,27]pyrimidin-4-on sodný L62

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-jod-5-((perfluorfenyl)methoxy)styryl)fosfonátem L37 (174 mg) poskytla 147 mg (69 %) meziproduktu kroku 1 a 56 mg (54 %) bílého lyofilizátu látky L62.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,05 (s, 1H); 7,83 (s. 1H); 7,74 - 7,60 (m, 1H); 7,30 (d, 7 = 2,8 Hz, 1H); 6,98 (d, 7= 8,7 Hz, 1H); 6,69 (dd,7=8,8, 2,8 Hz, 1H); 6,55 (dd,7= 17,3, 13,7 Hz, 1H);5,23 (s, 2H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 157,67; 157,18: 147,32; 145,30; 139,47 (d,7= 19,8 Hz); 136,76; 135,29 (d, 7= 5,7 Hz); 132,40 (d,7= 167,4 Hz); 131,97; 130,71; 119,68; 117,38; 114,08; 105,26; 59,58. ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 12,51. ¹⁹F NMR (377 MHz, Deuterium Oxid) δ -143,07 (dd, 7=23,0, 8,3 Hz); -153,03 (t, 7 = 20,9 Hz); -162,07 (td, 7= 21,8, 7,9 Hz). MS (ESI) m/z = 546,2 [M + H]⁺ (vypočteno 546,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 63 (£)-7-((4-(Perfluorfenyl)oxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,27]pyrimidin-4-on sodný L63

-39CZ 309199 B6

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-jod-5-((perfluorfenyl)oxy)styryl)fosfonátem L38 (174 mg) poskytla 169 mg (81 %) meziproduktu kroku 1 a 70 mg (58 %) bílého lyofilizátu látky L63.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,04 (s, 1H); 7,83 (s, 1H); 7,61 (dd, 7= 17,9Hz, 1H); 7,26 (d, 7=2,8 Hz, 1H); 6,89 (d, 7=8,8 Hz, 1H); 6,63 (dd, 7= 8,8, 2,9 Hz, 1H); 6,48 (dd, 7 = 17,3 13,6 Hz, 1H). ¹³CNMR(101 MHz, Deuterium Oxid) δ 157,01; 147,34; 145,17; 139,43 (d, 7=20,2 Hz); 136,97; 134,73 (d, 7= 6,2 Hz); 133,14 (d, 7= 167,1 Hz); 132,97; 131,24; 119,78; 116,67; 114,54; 104,52. ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 12,22. ¹⁹F NMR (377 MHz. Deuterium Oxid) δ -155,26 (d, 7= 18,8 Hz); -159,99 (t, 7 = 22,1 Hz); -162,36 (td, 7 = 23,1, 22,0, 5,1 Hz). MS (ESI) m/z = 532,2 [M + H|⁺ (vypočteno 532,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 64 (£)-7-((3-Hydroxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo [3,2-ď]pyrimidin-4on sodný L64

Obecná metoda S4 (1 h, 100 °C) s diethyl-(£)-(2-hydroxy-6-jodstyryl)fosfonátem L30 (99 mg) poskytla 100 mg (60 %) meziproduktu kroku 1 a 10 mg (16 %) bílého lyofilizátu látky L64.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,07 (s, 1H); 7,84 (s, 1H); 7,25 (dd, J = 20,1, 17,9Hz, 1H); 6,96 (t, J =8,1 Hz, 1H); 6,73 (dd, J= 8,1, 1,1 Hz, 1H); 6,58 (dd, J = 17,9, 15,7 Hz, 1H); 6,36(dd, J = 8,0, 1,1 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 156,90; 155,60; 147,56; 145,09; 140,08; 137,08; 136,14 (d, J= 165,9 Hz); 132,47 (d, 7=5,2 Hz); 130,04; 124,52 (d,7= 19,6 Hz); 119,87; 119,31; 114,67; 104,19. ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 12,72. MS (ESI) m/z = 366,1 [M + H]⁺ (vypočteno 366,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 65 (£)-7-((3-Methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ď]pyrimidin-4on sodný L65

-40CZ 309199 B6

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-jod-6-methoxystyryl)fosfonátem L39 (123 mg) poskytla 118 mg (70 %) meziproduktu kroku 1 a 39 mg (51 %) bílého lyofilizátu látky L65.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxide) δ 8,07 (s, 1H); 7,87 (s, 1H); 7,51 (dd, 7=22,4, 17,8 Hz, 1H); 7,13 (t, 7 = 8,2 Hz, 1H); 6,92 (d, 7= 8,3 Hz, 1H); 6,71 (t, 7 = 17,9 Hz, 1H); 6,51 (d, 7 = 8,0 Hz, 1H); 3,90 (s, 3H). ^I3C NMR (101 MHz, Deuterium Oxide) δ 159,29; 156,21; 147,44; 144,51; 140,42; 137,02; 134,98 (d, 7 =5,9 Hz); 131,39 (d, 7= 173,0 Hz); 130,61; 124,35 (d,7= 20,9 Hz); 120,41; 119,79; 110,27; 104,33; 57,15,3³P NMR (162 MHz, Deuterium Oxide) δ 13,13. MS (ESI) m/z = 380,1 [M + H]⁺ (vypočteno 380,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 66 (£)-7-((3-Isopropoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin4-on sodný L66

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(6-isopropoxy-2-jodstyryl)fosfonátem L40 (131 mg) poskytla 160 mg (91 %) meziproduktu kroku 1 a 34 mg (32 %) bílého lyofilizátu látky L66.

Ή NMR (500 MHz, Deuterium Oxide) δ 8,04 (s, 1H); 7,79 (s, 1H); 7,48 (dd, 7= 22,6, 17,8 Hz, 1H); 7,05 (t, 7=8,2 Hz, 1H); 6,91 (d, 7=8,2 Hz, 1H); 6,70 (dd, 7= 18,1 Hz, 1H); 6,49 (d, 7 = 8,1 Hz, 1H); 4,68 - 4,58 (m, 1H); 1,35 (d, 7=6,1 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, Deuterium Oxide) δ 157,30; 156,62; 147,37; 144,61; 140,39; 137,05; 136,18 (d, 7= 6,3 Hz); 130,71 (d,7= 173,7 Hz); 130,49; 129,71; 126,52 (d,7= 19,2 Hz); 121,04; 119,85; 115,00; 104,21; 74,90; 22,67. ³¹PNMR (162 MHz. Deuterium Oxide) δ 13,16. MS (ESI) m/z = 408,2 [M + H]⁺ (vypočteno 408,1) pro volnou kyselinu.

Příklad 67 (£)-7-((3-(Perfluorfenyl)methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,27]pyrimidin-4-on sodný L67

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-jod-6-((perfluorfenyl)methoxy)styryl)fosfonátem L41 (174 mg) poskytla 125 mg (59 %) meziproduktu kroku 1 a 54 mg (60 %) bílého lyofilizátu látky L67.

Ή NMR (500 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,45 (s, 1H); 8,19 (s, 1H); 7,90 (dd, 7= 22,4, 17,8 Hz,

-41 CZ 309199 B6

1H); 7,48 (t, J= 8,1 Hz, 1H); 7,34 (d, 7=8,1 Hz, 1H); 7,03 (t, J= 17,8 Hz, 1H); 6,99 (d, J= 7,9 Hz, 2H);5,69(s, 2H). ¹³CNMR(126 MHz, Deuterium Oxid) δ 157,65; 156,44; 148,05; 147,53; 146,06; 144,48; 141,04; 139,94(t,7= 16,9 Hz); 136,74; 135,20 (d,7= 6,2 Hz); 131,58 (d,7= 172,3 Hz); 130,14; 126,41 (d,7= 23,9 Hz); 122,24; 120,00; 112,92; 111,56 (t,7= 18,1 Hz); 105,02; 60,24,3^ NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 14,84. MS (ESI) m/z = 546,2 [M + H]⁺ (vypočteno 546,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 68 (E)-7-((3 -(Perfluorfenyl)oxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5 -dihydro-4H-pyrrolo [3,27]pyrimidin-4-on sodný L68

Obecná metoda S4 s diethyl-(E)-(2-jod-6-((perfluorfenyl)methoxy)styryl)fosfonátem L42 (174 mg) poskytla 125 mg (59 %) meziproduktu kroku 1 a 54 mg (60 %) bílého lyofilizátu látky L68.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,07 (s, 1H); 7,83 (s, 1H); 7,37 (dd, 7= 20,0, 17,8 Hz, 1H); 6,93 (t, 7=8,2 Hz, 1H); 6,75 (dd, 7= 17,8, 14,8 Hz, 1H); 6,59 (d, 7= 8,2 Hz, 1H); 6,55 (d, 7 =8,0 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 157,28; 156,29; 147,62; 145,55; 141,44; 137,79 (d,7= 165,0 Hz); 137,15; 130,50; 129,77; 126,13 (d,7= 19,3 Hz); 122,81; 120,04; 1 12,13; 103,44.³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) 8 12,29. ¹⁹F NMR (377 MHz, Deuterium Oxid) δ 155,40 (d, 7 = 21,0 Hz); -160,34 (t, 7= 22,2 Hz); -162,54 (t, 7= 21,5 Hz). MS (ESI) m/z = 532,2 [M + H]⁺ (vypočteno 532,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 69 (E)-7-((5-Fluor-2-((fosfonáto)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L69

Obecná metoda S4 s diisopropyl-((4-fluor-2-jodfenoxy)methyl)fbsfbnátem L43 (129 mg) poskytla 105 mg (63 %) meziproduktu kroku 1 a 21 mg (32 %) bílého lyofilizátu látky L69.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,07 (s, 1H); 7,86 (s, 1H); 7,10 (dd, 7= 9,1, 4,5 Hz, 1H); 6,89 (td, 7= 8,7, 3,0 Hz, 1H); 6,31 (dd, 7= 9,1, 3,0 Hz, 1H); 4,16 (d, 7= 9,6 Hz, 2H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 158,59 (d, 7= 239,1 Hz); 156,30; 152,89(d, 7= 13,0 Hz); 147,44; 144,63; 137,23; 130,18 (d, 7 = 7,8 Hz); 119,96; 114,57 (d, 7 = 8,5 Hz); 113,87 (d, 7 =26,4 Hz); 113,62 (d, 7= 23,3 Hz); 102,18; 67,67 (d,7= 154,7 Hz). ¹⁹F NMR (377 MHz, Deuterium Oxid) δ

-42CZ 309199 B6

-122,28 (d, J= 5,4 Hz). ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 15,10. MS (ESI) m/z = 372,2 [M + H]⁺ (vypočteno 372,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 70 (E) -7-((3 -Methoxy-2-((fosfonáto)methoxy)fenyl)thio) -3,5 -di hydro-4H-py rrol o [3,2-d\ pyriinidin-

4-on sodný L70

Obecná metoda S4 s diisopropyl-((2-jod-6-methoxyfenoxy)methyl)fosfonátem L44 (133 mg) poskytla 114 mg (64 %) meziproduktu kroku 1 a 32 mg (46 %) bílého lyofilizátu látky L70.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 7,99 (s, 1H); 7,63 (s, 1H); 6,92 (t, J = 8,0 Hz, 1H); 6,87 (dd, 7=8,3, 1,7 Hz, 1H); 6,25 (dd, 7=7,8, 1,7 Hz, 1H); 4,11 (d, 7=9,5 Hz, 2H); 3,92 (s, 3H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 166,33; 153,30; 152,04; 150,15; 145,13 (d; 7= 13,6 Hz); 141,85; 136,73; 126,36; 126,14; 119,40; 110,71; 95,72; 72,23 (d,7= 145,9 Hz); 57,38. ³¹PNMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 14,84. MS (ESI) m/z = 383,2 [M + H]⁺(vypočteno 383,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 71

7-((4-((Fosfonáto)methoxy)pyridin-3 -yl)thio)-3,5 -dihydro-4H-pyrrolo [3,2-d\ pyrim idi n-4-on sodný L71

Obecná metoda S4 s diisopropyl-(((3-jodpyridin-4-yl)oxy)methyl)fosfonátem L45 (124 mg) poskytla 57 mg (33 %) meziproduktu kroku 1 a 11 mg (32 %) bílého lyofilizátu látky L71.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,13 - 8,05 (m, 1H); 7,94 - 7,86 (m, 1H); 7,85-7,77 (m, 1H); 7,35 (t, 7 =2,0 Hz, 1H); 6,51 (dd,7=7,2, 0,9 Hz, 1H); 3,83 (d,7= 11,5 Hz, 2H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 176,03; 156,08; 147,00; 145,16; 142,70; 139,98; 136,66; 129,11; 120,01; 115,33; 101,66; 58,02 (d, 7 = 128,5 Hz).³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 11,50. MS (ESI) m/z = 355,2 [M + H]⁺ (vypočteno 354,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 72 (£)-7-((5-(2-(Fosfonáto)vinyl)furan-2-yl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L72

-43 CZ 309199 B6

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-(5-jodfuran-2-yl)vinyl)fosfonátem L46 (110 mg) poskytla 104 mg (65 %) meziproduktu kroku 1 a 23 mg (43 %) bílého lyofilizátu látky L72.

Ή NMR (401 MHz. Deuterium Oxid) δ 8,15 (d, J = 1,3 Hz, 1H); 7,91 (d, J= 1,4 Hz, 1H); 6,75 (ddd, J= 17,7, 15,3, 1,3 Hz, 2H); 6,73 (d, J= 1,6 Hz, 1H); 6,51 (d, 7=3,3 Hz, 1H); 6,33 (ddd,7 = 17,6, 13,9, 1,5 Hz, 1H). ¹³CNMR(101 MHz, Deuterium Oxid) δ 156,61 (d; 7=23,1 Hz); 156,61; 146,41; 146,33; 144,95; 135,41; 127,49 (d; 7 7= 178,2 Hz); 126,67; 119,23; 118,98; 112,94; 105,47.³¹PNMR(162 MHz. Deuterium Oxid) δ 12,43. MS (ESI) m/z = 340,2 [M + H]⁺ (vypočteno 340,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 73 (£)-7-((3-(2-(Fosfonáto)vinyl)thiofen-2-yl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L73

Obecná metoda S4 s diethyl-(£)-(2-(2-jodthiofen-3-yl)vinyl)fosfonátem L47 (115 mg) poskytla 118 mg (72 %) meziproduktu kroku 1 a 25 mg (33 %) bílého lyofilizátu látky L73.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,15 (d, 7 = 1,3 Hz, 1H); 7,91 (d, 7= 1,4 Hz, 1H); 6,75 (ddd, 7= 17,7, 15,3, 1,3 Hz, 2H); 6,73 (d,7= 1,6 Hz, 1H); 6,51 (d,7=3,3 Hz, 1H); 6,33 (ddd, 7 = 17,6, 13,9, 1,5 Hz, 1H). ¹³CNMR(101 MHz, Deuterium Oxid) δ 156,61 (d,7= 23,1 Hz); 156,61; 146,41; 146,33; 144,95; 135,41; 127,49 (d;7= 178,2 Hz); 126,67; 119,23; 118,98; 112,94; 105,47. ³¹PNMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 12,43. MS (ESI) m/z = 356,2 [M + H]⁺ (vypočteno 356,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 74

7-((3-((Fosfonáto)methoxy)thiofen-2-yl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L74

-44CZ 309199 B6

Obecná metoda S4 s diethyl-(((2-jodthiofen-3-yl)oxy)methyl)fosfonátem L49 (125 mg) poskytla 133 mg (75 %) meziproduktu kroku 1 a 28 mg (35 %) bílého lyofilizátu látky L74.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxide) δ 8,14 (s, 1H); 8,04 (d, J= 0,7 Hz, 1H); 7,40 (dd, J= 5,8, 0,7 Hz, 1H); 7,06 (d, J = 5,8 Hz, 1H); 4,13 (d, J= 9,5 Hz, 2H). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxide) δ 160,87 (d, J = 13,1 Hz); 144,58; 136,19; 128,90; 119,01; 118,65; 110,74; 108,71; 70,84 (d, J= 151,8 Hz).³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxide) δ 14,30. MS (ESI) m/z = 360,1 [M + H]⁺ (vypočteno 360,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 75

Ethyl-(£)-2-(2-jodfenyl)ethen-l-sulfonát L75

Ethyl(diethoxyfosforyl)methansulfonát (673 mg; 2,6 mmol; 1,2 ekv.), připravený podle literatury [Otrubová, K.; Cravatt, B. F.; Boger, D. L. J. Med. Chem. 2014, 57(3), 1079-1089], byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (20 ml) pod argonovou atmosférou a k roztoku byl přidán terc-butoxid draselný (290 mg; 2,6 mmol; 1,2 ekv.). Směs byla míchána jednu hodinu při teplotě místnosti a poté byl ke směsi přikapán roztok 2-jodbenzaldehydu (500 mg; 2,2 mmol; 1 ekv.) v suchém tetrahydrofuranu (10 ml). Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a reakce byla ukončena přídavkem nasyceného vodného roztoku NH4CI zředěného na poloviční koncentraci, extrahována dichlormethanem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena při 20 kPa. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (pentan do 50 % dichlormethanu) a rozpouštědla byla odpařena při 20 kPa se ziskem 648 mg (89 %) čirého oleje ethyl-(£)-2-(2-jodfenyl)ethen-lsulfonátu.

‘HNMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,93 (dd, J= 8,0, 1,2 Hz, 1H); 7,84 (d, J= 15,4Hz, 1H); 7,52 (dd, 7=7,8, 1,6 Hz, 1H); 7,41 (dddd, 7= 7,9, 7,4, 1,2, 0,6 Hz, 1H); 7,13 (ddd, 7= 7,9, 7,3, 1,7 Hz, 1H); 6,64 (d, 7 = 15,4 Hz, 1H); 4,28 (q, 7 = 7,1 Hz, 2H); 1,43 (t, 7 = 7,1 Hz, 3H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 147,83; 140,36; 135,88; 132,33; 128,96; 127,91; 124,47; 101,07; 67,41; 15,09. MS (ESI) m/z = 339,0 (M + H]⁺ (vypočteno 339,0).

Příklad 76

Ethyl-(£)-3-(2-jodfenyl)akrylát L76

Triethylfosfonoacetát (1 g; 5,2 mmol; 1,2 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (20 ml) pod argonovou atmosférou a k roztoku byl přidán terc-butoxid draselný (580 mg; 5,2 mmol; 1,2 ekv.). Směs byla míchána jednu hodinu při teplotě místnosti a roztok 2-jodbenzaldehydu (1 g; 4,3 mmol; 1 ekv.) v suchém tetrahydrofuranu (10 ml) byl přikapán ke směsi. Směs byla míchána 1 hodinu při teplotě místnosti a reakce byla ukončena přídavkem nasyceného vodného roztoku NH4CI zředěného na poloviční koncentraci, extrahována dichlormethanem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena při 20 kPa. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu

-45 CZ 309199 B6 (pentan do 50 % dichlormethanu) a rozpouštědla byla odpařena při 20 kPa se ziskem 1,26 g (97 %) čirého oleje ethyl-(E)-3-(2-jodfenyl)akrylátu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-7) δ 7,90 (d, J = 15,8 Hz, 1H); 7,90 (dd, J = 8,0, 1,2 Hz, 1H); 7,56 (dd. 7=7,8, 1,7 Hz, 1H); 7,36 (dddd, J = 7,9, 7,4, 1,3,0,6 Hz, 1H); 7,05 (ddd, 7=7,9, 7,3, 1,7 Hz, 1H); 6,31 (d, J= 15,8 Hz, 1H); 4,29 (q, J = 7,1 Hz, 2H); 1,35 (t, 7=7,1 Hz, 3H). ¹³CNMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 166,30; 147,68; 140,02; 137,89; 131,18; 128,56; 127,37; 121,30; 101,15; 60,73; 14,33. MS (ESI) m/z = 303,0 [M + H]⁺ (vypočteno 303,0).

Příklad 77

7-((2-((Sulfo)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L77

Látka L12 (100 mg; 0,2085 mmol; 1 ekv.) byla rozpuštěna v suchém dimethylformamidu (2 ml) v mikrovlnné kyvetě pod argonovou atmosférou. Hydrid sodný (8 mg 60% disperze v oleji; 0,2085 mmol; 1 ekv.) byl přidán při 0 °C a směs byla míchána při teplotě místnosti 30 minut. Jodmethansulfonát sodný (102 mg; 0,4170 mmol; 2 ekv.), připravený podle literatury [Gao, F. et al., Bioorganic Med. Chem. Lett. 2008, 18 (20), 5518-5522], byl přidán ke směsi a reakce byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 15 minut při 150 °C. Směs byla naředěna vodou, zneutralizována 1 mol I¹ HC1 (aq.) a odpařena do sucha.

Pevný podíl byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) při teplotě místnosti a směs byla míchána 15 minut. Poté byla směs odpařena do sucha, kodestilována vodou (2x) a přidán byl studený roztok amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Směs byla odpařena do sucha, zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (C18, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfiltrovány přes krátký sloupec Dowexu® v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody se ziskem 16 mg (21 %) bílého lyofilizátu produktu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7,) δ 7,83 (s, 1H); 7,70 (s, 1H); 7,21 (dd, 7 = 8,3, 1,2 Hz, 1H); 7,046,91 (m, 1H); 6,71 (td, 7=7,6, 1,2 Hz, 1H); 6,47 (dd,7= 7,8, 1,6 Hz, 1H); 4,61 (s, 3H). ¹³CNMR (101 MHz, DMSO-Ts) δ 154,13; 153,66; 146,05; 142,65; 133,88; 127,90; 125,29; 125,18; 121,42; 119,22; 113,55; 101,28; 79,90. MS (ESI) m/z = 354,2 [M + H]⁺ (vypočteno 354,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 78 (E)-7-((2-(2-(Sulfo)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L78

-46CZ 309199 B6

Látka L4 (100 mg; 0,2580 mmol; 1 ekv.) a jodid měďný (5 mg; 0,0258 mmol; 0,1 ekv.) byly vloženy do mikrovlnné kyvety a ta byla naplněna argonem. Do kyvety byly poté postupně přidány suchý toluen (5 ml), ethyl-(E)-2-(2-jodfenyl)ethen-l-sulfonát L75 (105 mg, 0,3096 mmol; 1,2 ekv.), triethylamin (54 pl; 0,3870 mmol; 1,5 ekv.) a 2-isobutyrylcyklohexanon (9 pl; 0,0516 mmol; 0,2 ekv.) a směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 2 hodiny při 120 °C. Směs byla rozpuštěna v chloroformu, promyta nasyceným vodným roztokem NaHCCL zředěným na poloviční koncentraci (2x), 1 mol I¹ HC1 (aq.). solankou (3x), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl použit v dalším kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 598,2 [M + H]⁺.

Pevný podíl byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 2 hodiny při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Směs byla odpařena do sucha a zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (C18, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfiltrovány přes krátký sloupec Dowexu® v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody se ziskem 26 mg (27 %) bílého lyofilizátu produktu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-ífó) δ 12,68 (s, 1H); 12,09(s, 1H); 7,84 (s, 1H); 7,74 (s, 1H); 7,52 (dd, J= 5,7, 3,5 Hz, 1H); 7,47 (d, J= 15,5 Hz, 1H); 7,08 (t, 7=3,3 Hz, 1H); 7,06 (t, 7 = 3,3 Hz, 1H); 6,82 (d, 7 = 15,4 Hz, 1H); 6,77 (dd, 7 = 5,9, 3,4 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-7,) δ 153,61; 145,74; 142,88; 138,00; 136,36; 133,82; 132,25; 128,59; 126,60; 126,53; 126,24; 125,23; 119,22; 101,77. MS (ESI) m/z = 350,2 [M + H]⁺ (vypočteno 350,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 79

7-((2-((Karboxy)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L79

Baňka byla naplněna látkou L12 (100 mg; 0,2085 mmol; 1 ekv.) a uhličitanem česným (340 mg; 1,0 mmol; 1,5 ekv.) a zapuštěna argonem. Do baňky byl přidán suchý dimethylformamid (2 ml) a ethyl-bromacetát (204 mg; 0,8340mmol; 4 ekv.) a směs byla míchána 2 hodiny při 90 °C. Reakce byla ukončena přídavkem nasyceného vodného roztoku NH4CI zředěného na poloviční koncentraci a extrahována ethylacetátem (3x). Organická fáze byla promyta solankou (3x), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl použit v dalším kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 566,5 [M + H]⁺).

Pevný podíl byl rozpuštěn ve směsi dioxanu a vody (1:1, obj./obj.) a bylo přidáno několik kapek

-47CZ 309199 B6 mol l¹ roztoku NaOH (aq.). Směs byla míchána při teplotě místnosti 1 hodinu a poté byla směs zneutralizována 1 mol l¹ MCI (aq.) a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Pevný podíl byl použit v dalším kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 376,3 [M + H]⁺) Pevný podíl byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) při teplotě místnosti a směs byla míchána 15 minut. Poté byla směs odpařena do sucha, kodestilována vodou (2x) a studený roztok amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu) byl přidán. Směs byla odpařena do sucha a zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (C18, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfiltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody se ziskem 24 mg (34 %) bílého lyofilizátu produktu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-d₆) δ 7,87 (s, 1H), 7,72 (s, 1H); 7,00 (ddd, J= 8,5, 7,3, 1,7 Hz, 1H); 6,71 (dd, J= 8,4, 1,2 Hz, 1H); 6,68 (td, J= 7,4, 0,8 Hz, 1H); 6,48 (dd, J= 7,9, 1,6 Hz, 1H); 4,37 (s, 2H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-d₆) δ 173,21; 154,47; 154,41; 146,69; 143,17; 135,19; 126,59; 126,53; 126,24; 121,43; 118,79; 111,93; 101,98; 78,71; 67,47. MS (ESI) m/z = 318,3 [M + H]⁺ (vypočteno 318,1) pro volnou kyselinu.

Příklad 80 (E)-7-((2-(2-(Karboxy)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-on sodný L80

Látka L4 (100 mg; 0,2580 mmol; 1 ekv.) a jodid měďný (5 mg; 0,0258 mmol; 0,1 ekv.) byly vloženy do mikrovlnné kyvety a ta byla naplněna argonem. Do kyvety byly poté postupně přidány suchý toluen (5 ml), ethyl-(E)-3-(2-jodfenyl)akrylát L76 (94 mg, 0,3096 mmol; 1,2 ekv.), triethylamin (54 pl; 0,3870 mmol; 1,5 ekv.) a 2-isobutyrylcyklohexanon (9 pl; 0,0516 mmol; 0,2 ekv.) a směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 2 hodiny při 120 °C. Směs byla rozpuštěna v chloroformu, promyta nasyceným vodným roztokem NaHCCE zředěným na poloviční koncentraci (2x), 1 mol I¹ HC1 (aq.), solankou (3x), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl použit v dalším kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 562,2 [M + H]⁺).

Pevný podíl byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 2 hodiny při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena, kodestilována vodou (2x). Studený roztok amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu) byl přidán a směs byla odpařena do sucha.

Pevný podíl byl rozpuštěn ve směsi dioxanu a vody (1:1, obj ./obj.) a bylo přidáno několik kapek 1 mol l¹ roztoku NaOH (aq.). Směs byla míchána při teplotě místnosti 2 hodiny a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Pevný podíl byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (C18, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfiltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody se ziskem 3 mg (3,5 %) bílého lyofilizátu produktu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-d₆) δ 7,84 (s, 1H); 7,69 (s, 1H); 7,65 (d, J= 15,6 Hz, 1H); 7,52-7,43 (m, 1H); 7,13-6,91 (m, 2H); 6,79 - 6,60 (m, 1H); 6,34 (d, J= 15,6 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz,

-48CZ 309199 B6

DMSO-ó/β) δ 170,88; 154,63; 146,27; 143,68; 138,38; 134,32; 133,98; 132,93; 131,72; 128,82; 126,60; 125,55; 119,60; 101,87. MS (ESI) m/z = 314,2 [M + H]⁺ (vypočteno 314,1) pro volnou kyselinu.

Příklad 81

4-(Benzyloxy)-7-((3-bromfenyl)thio)-5-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-5H-pyrrolo[3,2úQpyrimidin L81

Obecná syntéza Sis 3-bromthiofenolem (103 μΐ; 1,0 mmol; 1,5 ekv.) poskytla uvedený produkt s výtěžkem 449 mg (100 %) jako čirý olej.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 8,63 (s, 1H); 7,66 (s, 1H); 7,56 - 7,48 (m, 2H); 7,43 - 7,33 (m, 3H); 7,22 (dd, J= 1,8 Hz, 1H); 7,16 (ddd, J= Ί,Ί, 1,9, 1,1 Hz, 1H1); 7,05 (ddd, J = 7,9, 1,8, 1,2 Hz, 1H); 6,99 (t, J= 7,8 Hz, 1H); 5,66 (s, 2H); 5,64 (s, 2H); 3,48 (t, J= 7,9 Hz, 2H); 0,84 (t, J = 1 Hz, 2H); -0,09 (s, 9H). ¹³CNMR(101 MHz, Chloroform-í/) δ 156,22; 151,63; 151,36; 140,55; 138,64; 135,93; 130,08; 128,93; 128,69; 128,44; 128,40; 128,29; 125,09; 122,87; 1 16,34; 103,58; 77,95; 68,47; 66,36; 17,68; -1,40. MS (ESI) m/z = 542,2 [M + H]⁺(vypočteno 542,1).

Příklad 82

7-((3 -(Fosfonáto)fenyl)thio)-3,5 -dihydro-4H-pyrrolo [3,2-d]pyrimidin-4-on sodný L82

Do baňky byl navážen Pd2(dba)3 (84 mg; 0,0922 mmol; 0,1 ekv.) a 4,5-bis(difenylfosfino)-9,9dimethylxanten (dále jako Xantphos; 107 mg; 0,1843 mmol; 0,2 ekv.,) a baňka byla zapuštěna argonem. Látky byly rozpuštěny přidáním suchého dioxanu (5 ml) a suchého triethylaminu (192 μΐ; 1,4 mmol; 1,5 ekv.). Směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti a poté byl přidán roztok látky L81 (500 mg; 0,9215 mmol; 1 ekv.) a diethylfosfitu (130 μΐ; 1,0 mmol; 1,1 ekv.) v suchém dioxanu (2 ml). Reakce byla míchána 24 hodin při 90 °C, poté byla ochlazena na 0 °C a ukončena 1 mol l¹ HC1 (aq.). Směs byla extrahována ethylacetátem (3x), promyta solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (B do 20 % C) se ziskem 514 mg (93 %) čirého oleje meziproduktu, který byl použit v následném kroku bez další charakterizace (MS (LSI) m/z = 600,2 [M + H]⁺).

Olej byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu. Směs byla odpařena do sucha a baňka byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) atrimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol

-49CZ 309199 B6 výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha. Pevný podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 10 % A) se ziskem 334 mg (97 %) diethylfosfonátu, který byl použit v následném kroku bez další charakterizace (MS (ESI) m/z = 600,2 [M + H]⁺)

Zbytek byl rozpuštěn ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu triethylammoného (2 mol l¹) a směs byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody (rozpustnost lze vylepšit přidáním malého množství vodného amoniaku) a produkt byl čištěn pomocí HPLC (Cl8, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfíltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofílizován z vody se ziskem 199 mg (70 %) produktu jako bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,07 (s, 1H, 2); 7,73 (s, 1H, 8); 7,73 - 7,67 (m, 1H, 16); 7,53 - 7,38 (m, 1H, 14); 7,21 (td, J = 7,6, 3,0 Hz, 1H, 13); 7,00 - 6,85 (m, 1H, 12). ¹³C NMR (101 MHz, Deuterium Oxid) δ 165,12; 153,38; 148,76; 143,49 (d, J = 165,0 Hz); 139,12 (d, J = 14,0 Hz); 136,15; 129,85 (d, J= 13,0 Hz); 129,46 (d, 7=9,7 Hz); 128,91 (d, 7=8,7 Hz); 127,34 (d, 7= 2,4 Hz); 122,22; 101,04.³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 12,86. MS (ESI) m/z = 324,2 [M + H]⁺ (vypočteno 324,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 83

2-Jodbenzyl bromid L83

2-Jodbenzylalkohol (3 g; 12,8 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchem tetrahydrofuranu (30 ml) a baňka byla zapuštěna argonem. K roztoku byl přidán bromid fosforitý (1,8 ml; 19,2 mmol; 1,5 ekv.) a směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Reakce byla ukončena přidáním silikagelu a rozpouštědla byla odpařena. Separace pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) poskytla 3,7 g (97 %) 2-jodbenzylbromidu jako bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-í/) δ 7,86 (dd, 7= 7,9, 1,2 Hz, 1H); 7,48 (dd, 7=7,7, 1,7 Hz, 1H); 7,34 (td, 7 = 7,5, 1,3 Hz, 1H); 6,98 (td, 7=7,8, 1,7 Hz, 1H); 4,60 (s, 2H). ¹³CNMR (101 MHz, Chloroform-í/) δ 140,33; 140,22; 130,63; 130,22; 129,02; 100,19; 38,91. MS (ESI) m/z = 275,9 [M + H - HBr + ACN + H₂O]⁺ (vypočteno 276,0).

Příklad 84

Diisopropyl-(2-jodbenzyl)fosfonát L84

2-Jodbenzyl bromid (3g; 10,1 mmol; 1 ekv.) byl navážen do mikrovlnné kyvety a kyveta byla zapuštěna argonem. Poté byl postupně přidán suchý toluen (20 ml) a triisopropylfosfít (3 ml; 11,1 mmol; 1,1 ekv.) a směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 1 hodinu při 160 °C. Směs byla odpařena a olejový podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 40 % C) se ziskem 3,4 g (88 %)

-50CZ 309199 B6 diisopropyl-(2-jodbenzyl)fosfonátu jako čirého oleje.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-d) δ 7,83 (dd, J = 7,9, 1,2 Hz, 1H); 7,50 (ddd, J = 7,7, 2,8, 1,7 Hz, 1H); 7,29 (dt,7 = 7,6, 1,1 Hz, 1H); 6,91 (dt,7=7,9, 2,0 Hz, 1H); 4,82 -4,33 (m, 2H); 3,36 (d, J = 22,0 Hz, 2H); 1,29 (d, J = 6,2 Hz, 6H); 1,18 (d, J = 6,2 Hz, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 139,75 (d, J= 2,9 Hz); 135,95 (d, J= 8,2 Hz); 130,79 (d, J= 5,1 Hz); 128,57 (d, J = 3,6 Hz); 128,37 (d, J = 3,1 Hz); 101,87 (d, J = 9,6 Hz); 70,97 (d, J = 6,7 Hz); 39,47 (d, J = 140,0 Hz); 24,83 - 23,34 (m). ³¹P NMR (162 MHz, Chloroform-d) δ 26,23. MS (ESI) m/z = 383,0 [M + H]⁺ (vypočteno 383,0).

Příklad 85

7-((2-((Fosfonáto)methyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L85

Látka L4 (500 mg; 1,29 mmol; 1 ekv.), jodid měďný (25 mg; 0,1290 mmol; 0,1 ekv.), 1,10fenantrolin (46 mg; 0,2580 mmol; 0,2 ekv.) a uhličitan česný (505 mg; 1,55 mmol; 1,2 ekv.) byly dány do mikrovlnné kyvety a ta byla zapuštěna argonem. Do kyvety byl poté postupně přidán suchý toluen (5 ml) a diisopropyl-(2-jodbenzyl)fosfonát L84 (596 mg, 1,6 mmol; 1,2 ekv.) a směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 2 hodiny při 120 °C. Směs byla rozpuštěna v chloroformu, promyta nasyceným vodným roztokem NaHCCE zředěným na poloviční koncentraci (2x). 1 mol l¹ HC1 (aq.), solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) se ziskem 754 mg (91 %) produktu jako čirého oleje. Produkt byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 642,2 [M + H]⁺)· Meziprodukt (680 mg) byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Směs byla odpařena do sucha, zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 10 % A) se ziskem 208 mg (42 %) diisopropylfosfonátu jako bílé pevné látky, která byla použita v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 422,3 [M + H]⁺). Baňka byla naplněna diethylfosfonátem (100 mg), uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) atrimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu triethylammoného (2 mol l¹) a směs byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (C18, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfiltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody se ziskem 70 mg (78 %) bílého lyofilizátu produktu.

Ή NMR (400 MHz, Deuterium Oxid) δ 8,01 (d, 7=2,2 Hz, 1H); 7,76 (d, 7 = 2,4 Hz, 1H); 7,37 (d, 7= 7,7 Hz, 1H); 7,08 (t, 7= 7,6 Hz, 1H); 6,87 (t, 7= 7,7 Hz, 1H); 6,72 (d, 7= 7,9 Hz, 1H); 3,36 (dd,7 = 20,8,2,2Hz, 2H). ¹³CNMR(101 MHz, Deuterium Oxid) δ 156,27; 147,02; 144,37; 138,35 (d, 7=7,2 Hz); 136,79; 134,47 (d, 7 = 8,3 Hz); 132,15 (d, 7 = 5,1 Hz); 128,38; 127,89; 126,96; 119,57; 104,97; 35,03 (d, 7= 128,6 Hz). MS (ESI) m/z = 337,2 [M + H]⁺ (vypočteno 337,0) pro volnou kyselinu.

-51 CZ 309199 B6

Příklad 86

7-((2-(3-Fosfonáto-2-oxapropyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L86

Látka LI 1 (100 mg; 0,2026 mmol; 1 ekv.) byla rozpuštěna v suchém tetrahydrofuranu (20 ml) pod argonovou atmosférou. Roztok byl ochlazen na 0 °C, byl přidán hydrid sodný (12 mg 60% olejové disperze; 0,3039 mmol; 1,5 ekv.) a směs byla míchána 15 minut při 0 °C. Poté byl přidán TfOCH2P(O)(Oz-Pr)2 (133 mg; 0,4052 mmol; 2 ekv.) a směs byla míchána při 0 °C dalších 15 minut. Reakce byla ukončena přídavkem nasyceného vodného roztoku NH4CI zředěného na poloviční koncentraci a extrahována ethylacetátem (3x). Organická fáze byla promyta solankou Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Olejový podíl byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 20 % C) s výtěžkem 82 mg (60 %) produktu, který byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 672,2 |M + H]⁺)· Meziprodukt byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Odpaření směsi poskytlo surový diisopropylfosfonát, který byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 482,2 [M + H]⁺). Baňka byla naplněna diethylfosfonátem (100 mg), uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu triethylammoného (2 mol l¹) a směs byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (Cl8, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfiltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody se ziskem 6 mg (12 %) bílého lyofilizátu produktu.

'HNMR (500 MHz, Methanol-7₄) δ 8,00 (s, 1H); 7,76 (s, 1H); 7,46 (dd, 7=7,6, 1,5 Hz, 1H); 7,16 (td, 7 = 7,5, 1,2 Hz, 1H); 7,07 (td, 7 = 7,7, 1,5 Hz, 1H); 6,78 (dd, 7 = 8,0, 1,0 Hz, 1H);4,85 (s, 2H); 3,66 (d, 7= 8,6 Hz, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, Methanol-7₄) δ 156,19; 147,02; 144,04; 138,53; 136,54; 135,72; 130,54; 129,56; 127,54; 126,53; 119,48; 103,99; 73,42 (d, 7= 11,1 Hz); 68,90 (d, 7 = 152,7 Hz). ³¹P NMR (162 MHz, Deuterium Oxid) δ 16,23. MS (ESI) m/z = 368,1 [M + H]⁺ (vypočteno 368,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 87

7-((2-(Karboxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on sodný L87

-52CZ 309199 B6

2-Merkaptobenzoová kyselina (77 mg; 0,4985 mmol; 1,2 ekv.) byla rozpuštěna v suchém dimethylformamidu (2 ml) v mikrovlnné kyvetě pod argonovou atmosférou. Směs byla ochlazena na 0 °C, poté byl přidán hydrid sodný (40 mg 60% olejové disperze; 0,9970 mmol; 2,4 ekv.) a směs byla míchána 30 minut při pokojové teplotě. Poté byla ke směsi přidána látka L2 (200 mg; 0,4154 mmol; 1 ekv.), jodid měďný (8 mg; 0,0420 mmol; 0,1 ekv.) a 1,10-fenantrolin (15 mg; 0,0840 mmol; 0,2 ekv.) a kyveta byla zapuštěna argonem. Směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 1 hodinu při 120 °C. Směs byla rozpuštěna v 1 mol l¹ HC1 (aq.), extrahována ethylacetátem (3x), solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na C18 silikagel v methanolu a směs byla separována pomocí C18 flash chromatografie (E do A) se ziskem 37 mg (18 %) meziproduktu, který byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 508,3 [M + H]⁺). Meziprodukt byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (Cl8, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfiltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofilizován z vody se ziskem 8 mg (36 %) bílého lyofilizátu.

1HNMR (500 MHz, DMSCM,) δ 7,71 - 7,56 (m, 2H); 7,10 (s, 1H); 6,82 (tt, J= 7,1, 5,1 Hz, 2H); 6,66 (d, J= 7,2 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-d₆) δ 170,53; 162,93; 147,19; 141,76; 138,09; 128,79; 126,67; 125,05; 124,13; 121,48; 99,89. MS (ESI) m/z = 288,2 [M+ H]⁺(vypočteno 288,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 88

2-Jodbenzensulfonát sodný monohydrát L88

Tato látka byla připravena podle publikovaného postupu [Tanaka. Y. et al., J. Fluor. Chem. 2012, 137, 98-103.]

Roztok dusitanu sodného (4,2 g; 60,6 mmol; 1,05 ekv.) a vody (40 ml) byl pomalu přikapán k míchané směsi 2-aminobenzensulfonové kyseliny (10 g; 57,8 mmol; 1 ekv.), ledu (40 g) a koncentrované kyseliny chlorovodíkové (20 ml) při 0 °C. Směs byla míchána 1 hodinu při 0 °C a poté byla míchána přes noc při 50 °C. Směs byla zfiltrována, odpařena a rekrystalizována z vody. Krystaly byly zfiltrovány, promyty studeným ethanolem (Ix), studeným diethyletherem (Ix) apoté byly sušeny se ziskem 9,8 g (52 %) monohydrátu 2-jodbenzensulfonátu sodného.

Příklad 89

7-((2-(Sulfo)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-on sodný L89

-53 CZ 309199 B6

Látka L4 (200 mg; 0,5160 mmol; 1 ekv.), 2-jodbenzensulfonát sodný monohydrát L88 (334 mg; 1,0 mmol; 2 ekv.), jodid měďný (5 mg; 0,0516 mmol; 0,1 ekv.) a 1,10-fenantrolin (9 mg; 0,1532 mmol; 0,2 ekv.) byly vloženy do mikrovlnné kyvety a ta byla zapuštěna argonem. Do kyvety byl poté postupně přidán suchý dimethylformamid (2 ml) a triethylamin (72 pl, 1,0 mmol; 2 ekv.) a směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 1 hodinu při 120 °C. Směs byla naředěna vodou a pH bylo upraveno na hodnotu 1 pomoci 1 mol I¹ HC1 (aq.). Poté bylo pH upraveno na hodnotu 7 přidáním triethylaminu a směs byla extrahována ethylacetátem, promyta solankou (Ix), sušena MgSOr, zfiltrována a odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na C18 silikagel v methanolu a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na C18 silikagelu (E do A) se ziskem 220 mg (66 %) meziproduktu, který byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 544,3 [M + H]⁺). Meziprodukt (110 mg; 0,2023 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu. Směs byla odpařena do sucha, zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomoci HPLC (Cl8, gradient z vody do methanolu). Frakce obsahující produkt byly zfíltrovány přes krátký sloupec Dowexu® 50 v sodném cyklu a rozpouštědla byla odpařena do sucha. Vyčištěný produkt byl lyofílizován z vody se ziskem 54 mg (84 %) bílého lyofilizátu produktu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7,) δ 12,31 (s, 2H); 7,81 (s, 1H); 7,71 (dd, 7=7,4, 1,9 Hz, 1H); 7,60 (s, 1H); 7,08 - 6,86 (m, 2H); 6,56 (dd, 7= 7,7, 1,6 Hz, 1H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-7,) δ 154,03; 146,19; 143,43; 142,69; 137,77; 133,74; 128,49; 127,34; 125,07; 122,91; 119,40; 103,28. MS (ESI) m/z = 324,1 [M + H]⁺ (vypočteno 324,0) pro volnou kyselinu.

Příklad 90

Brommethylsulfonát sodný L90

Tato látka byla připravena podle publikovaného postupu [Gao, F. et al., Bioorganic Med. Chem. Lett. 2008,18 (20), 5518-5522.]

Dibrommethan (24,5 ml; 350 mmol; 1 ekv.). hydrogensiřičitan sodný (44 g; 350 mmol; 1 ekv.) a tetrabutylammoniumhydrogensulfát (2 g; 6 mmol; 0,02 ekv.) byly rozpuštěny ve směsi ethanolu a vody (200 ml; 1:2, obj./obj.). Směs byla intenzivně míchána přes noc při varu směsi a poté byla odpařena do sucha. Pevný podíl byl částečně rozpuštěn ve směsi ethanolu a vody (240 ml; 5:1, obj./obj.) a směs byla míchána 30 minut při 45 °C. Poté byla směs zfiltrována a ochlazována na 20 °C po dobu 7 dní, během kterých se utvořily fíltrovatelné bílé krystaly, který byly zfíltrovány s výtěžkem 48 g (70 %) brommethylsulfonátu sodného.

-54CZ 309199 B6

Příklad 91

Brommethylsulfonylchlorid L91

Tato látka byla připravena podle publikovaného postupu [Gao. F.et al., Bioorganic Med. Chem. Lett. 2008,18 (20), 5518-5522.]

Brommethylsulfonát sodný (30g; 152 mmol; 1 ekv.) v pevném stavu byl intenzivně míchán v baňce a poté byl po částech přidán chlorid fosforečný (32 g; 152 mmol; 1 ekv.). Směs byla intenzivně míchána bez rozpouštědla 30 minut při 130 °C a poté 30 minut při 70 °C. Sypká směs se během 5 minut změnila na červenou pastu. Směs byla ochlazena na teplotu místnosti, následně k ní byla přidána voda s ledem a směs byla míchána dalších 30 minut. Směs byla extrahována dichlormethanem (3x), organická fáze byla promyta nasyceným vodným roztokem NaHCCE zředěným na poloviční koncentraci, vodou (Ix), solankou (Ix), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Bylo získáno 15 g (51 %) žlutého oleje brommethylsulfonylchloridu. Surový produkt byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace.

Příklad 92

Brommethylsulfonamid L92

Brommethylsulfonylchlorid (20 g; 103 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém diethyletheru (200 ml) pod argonovou atmosférou. Roztok byl ochlazen na 0 °C a plynný amoniak byl pomalu bublán do roztoku po dobu 15 minut. Směs byla dále míchána po dobu 30 minut a poté byl zfiltrován vysrážený chlorid amonný a brommethylsulfonát amonný. Rozpouštědla byla odpařena se ziskem 12 g (67 %) bílých krystalu čistého brommethylsulfonamidu.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-ri₆) δ 7,32 (s, 2H); 4,67 (s, 2H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-ri₆) δ 44,63. MS (ESI) m/z =153,2 [Μ + H - HBr + H₂O + CH₃CN]⁺ (vypočteno 153,0).

Příklad 93 l-Brom-/V,/V-bis((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)methylsulfonamid L93

Brommethylsulfonamid (2 g; 11,5 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (20 ml) pod argonovou atmosférou. Roztok byl ochlazen na 0 °C, byl přidán hydrid sodný (460 mg 60% olejové disperze; 11,5 mmol; 1 ekv.) a směs byla míchána 15 minut při 0 °C. Poté byl přidán 2(trimethylsilyl)ethoxymethylchlorid (2 ml; 11,5 mmol; 1 ekv.) a směs byla míchána při 0 °C dalších 15 minut. Přidání hydridu sodného a 2-(trimethylsilyl)ethoxymethylchloridu bylo opakováno ještě jednou. Reakce byla ukončena přídavkem nasyceného vodného roztoku NH4CI zředěného na poloviční koncentraci a extrahována ethylacetátem (3x). Organická fáze byla promyta solankou

-55CZ 309199 B6 (3x) a sušena MgSO4. Směs byla zředěna chloroformem na poloviční koncentraci a celá směs byla zfíltrována přes krátký sloupec neutrální aluminy, která byla vymyta směsí chloroform/ethylacetát (2:1; obj./obj.). Rozpouštědla byla odpařena se ziskem 4,6 g (92 %) bezbarvého oleje l-brom-ΛΆ'bis((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)methylsulfonamidu.

Ή NMR (401 MHz, Chloroform-ď,) δ 4,82 (s, 4H); 4,52 (s, 2H); 3,64 - 3,51 (m, 4H); 0,98 - 0,88 (m, 4H); 0,02 (s, 18H). ¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-7) δ 77,65; 66,13; 44,28; 18,03; -1,26. MS (ESI) m/z = 456,1 [M + Na]⁺ (vypočteno 456,1).

Příklad 94

7-((2-((Sulfamoyl)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4-on L94

Baňka byla naplněna látkou L12 (200 mg; 0,4170 mmol; 1 ekv.), látkou L93 (724 mg; 1,7 mmol; 4 ekv.) a uhličitanem draselným (130 mg; 1,7 mmol; 4 ekv.). Poté byla zapuštěna argonem, byl přidán suchý dimethylformamid (10 ml) a směs byla zahřívána při 110 °C přes noc. Reakce byla ukončena při cca 50 % konverzi přídavkem nasyceného vodného roztoku NH4CI zředěného na poloviční koncentraci a extrahována ethylacetátem (3x). Organická fáze byla promyta solankou (Ix). sušena MgSO4, zfíltrována a odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na C18 silikagel v methanolu a směs byla separována pomocí C18 flash chromatografíe (E do A) se ziskem 120 mg (35 %) alkylovaného meziproduktu, který byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace (MS (ESI) m/z = 833,5 [M + H]⁺)· Meziprodukt (100 mg: 0,1200 mol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Zbytek byl rozpuštěn v malém množství dimethylformamidu a vzorek byl separován pomocí Cl8 flash chromatografíe (E do A: kapalný nástřik). Produkt byl lyofilizován z dioxanu se ziskem 11 mg (22 %) bílého prášku.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-ίΛ,) δ 12,67 (s, 1H); 12,18 (s, 1H); 7,83 (s, 1H); 7,72 (s, 1H); 7,45 7,24 (m, 2H); 7,22 (dd, J = 8,2, 1,2 Hz, 1H); 7,05 (td, J= 7,8, 1,6 Hz, 1H); 6,83 (td, J = 7,7, 1,2 Hz, 1H); 6,53 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 1H); 5,17 (s, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-ď,) δ 153,70; 153,02; 145,97; 142,85; 134,04; 128,72; 125,94; 125,49; 122,98; 119,38; 114,27; 100,74; 81,65. MS (ESI) m/z = 353,1 [M + H]⁺ (vypočteno 353,0).

Příklad 95 (£)-7-((2-(2-(Bis(((5)-l-(ethoxykarbonyl)-2-(fenyl)ethyl)amino)fosforyl)vinyl)fenyl)thio)-3,5dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4-on L95

-56CZ 309199 B6

Látka L4 (500 mg; 1,29 mmol; 1 ekv.), jodid měďný (25 mg; 0,1290 mmol; 0,1 ekv.) a uhličitan česný (505 mg; 1,55 mmol; 1,2 ekv.) byly vloženy do mikrovlnné kyvety a ta byla zapuštěna argonem. Do kyvety byly poté postupně přidány suchý toluen (5 ml), diethyl-(E)-(2jodstyryljfosfonát L13 (559 mg, 1,33 mmol; 1,1 ekv.) a 2-isobutyrylcyklohexanon (43 pl; 0,2580 mmol; 0,2 ekv.) a směs byla zahřívána v mikrovlnném reaktoru 2 hodiny při 120 °C. Směs byla rozpuštěna v chloroformu, promyta nasyceným vodným roztokem NaHCCL zředěným na poloviční koncentraci (2x), 1 mol I¹ HC1 (aq.), solankou (3x), sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 15 % C) se ziskem 800 mg (99 %) produktu jako čirého oleje. Produkt byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace. Meziprodukt (680 mg) byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu. Směs byla odpařena do sucha, zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 15 % A) se ziskem 250 mg (48 %) diisopropylfosfonátu jako bílé pevné látky. Baňka byla naplněna diethylfosfonátem (100 mg; 0,2467 mmol; 1 ekv.), uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha pod argonovou atmosférou. Do baňky byl přidán hydrochlorid L-fenylalaninethylesteru (227 mg; 0,9868 mmol; 4 ekv.). baňka byla uzavřena šeptem, zapuštěna argonem a poté byly přidány suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozí látky) a triethylamin (206 pl; 1,48 mmol; 6 ekv.). Směs byla zahřívána 15 minut při 70 °C a poté byl přidán roztok trifenylfosfínu (388 mg; 1,48 mmol; 6 ekv.) a 2,2'-dipyridyldisulfídu (326 mg; 1,48 mmol; 6 ekv.) v suchém pyridinu (10 ml/1 mmol výchozí látky). Směs byla zahřívána přes noc při 70 °C a poté byla rozpouštědla odpařena a pevný podíl byl odpařen z toluenu (Ix). Směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatogratie na silikagelu (D do 20 % A), následována separací na HPLC (Cl8, gradient voda/methanol). Produkt byl lyofílizován z dioxanu s výtěžkem 100 mg (58 %) bílého prášku. Ή NMR (401 MHz, DMSO-7,) δ 12,73 (d, J = 3,1 Hz, 1H); 12,12 (d, J= 3,5 Hz, 1H); 7,85 (d, J= 3,2 Hz, 1H); 7,74 (d, J= 3,0 Hz, 1H); 7,63 (dd, J= 21,0, 17,1 Hz, 1H); 7,38 - 7,31 (m, 1H); 7,29 - 7,04 (m, 12H); 6,87 - 6,72 (m, 1H); 6,02 (dd, J= 19,0, 17,1 Hz, 1H); 4,70 (t, J= 11,1 Hz, 1H); 4,39 (t, J= 10,8 Hz, 1H); 4,09 - 3,93 (m, 4H); 3,95 - 3,77 (m, 2H); 3,05 - 2,76 (m, 4H); 1,16 - 0,95 (m, 6H). ¹³CNMR(101 MHz; DMSO-7,) δ 176,02 - 171,21 (m); 153,60; 145,68; 142,90; 139,78 (d, J= 6,1 Hz); 138,51; 137,10 (d, J= 9,2 Hz); 133,83; 132,67 (d, 7=20,9 Hz); 129,57; 129,38(d, 7=3,6 Hz); 128,11; 126,70; 126,48 (d, 7= 2,0 Hz); 126,39; 125,14; 123,11 (d, 7= 153,3 Hz); 119,28; 101,48; 60,34 (d, 7= 6,1 Hz); 54,46 (d, 7= 7,0 Hz); 39,94; 13,88 (d, 7 = 4,0 Hz). MS (ESI) m/z = 700,4 [M + H]⁺ (vypočteno 700,2).

Příklad 96

7-((2-(((Diisopropoxy)fosforyl)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ď]pyrimidin-4on L96

-57CZ 309199 B6

Do baňky byla dána látka L4 (20,0 g; 41,5 mmol; 1,0 ekv.), jodid měďný (7789 mg; 4,15 mmol; 0,1 ekv.) a 1,10-fenantrolin (1,50 g; 8,31 mmol; 0,2 ekv.). Baňka byla uzavřena šeptem, zapuštěna argonem a poté byl přidán suchý toluen (200 ml), triethylamin (8,67 ml; 62,3 mmol; 1,5 ekv.) a 2merkaptofenol (5,16 ml, 49,9 mmol; 1,2 ekv.) a směs byla zahřívána 2 hodiny při 120 °C. Tmavě hnědá reakční směs byla rozpuštěna v chloroformu a promyta nasyceným roztokem NaHCCL zředěným na poloviční koncentraci (2x), 1 mol l¹ MCI (aq.) (2x), solankou a sušena byla MgSCU Rozpouštědla byla odpařena a surová směs byla odpařena z toluenu (2x) a poté byla rozpuštěna v suchém dimethylformamidu pod argonovou atmosférou. Směs byla zahřáta na 60 °C a přidány byly TsOCH2P(O)(Oz-Pr)2 (21,8 g; 62,3 mmol; 1,5 ekv.) a terc-butoxid draselný (7,00 g; 62,3 mmol; 1,5 ekv.). Směs byla zahřívána 1 hodinu při 60 °C a následně byla přidána další dávka TsOCH2P(O)(Oz-Pr)2 (21,8 g; 62,3 mmol; 1,5 ekv.) a terc-butoxidu draselného (7,00 g; 62,3 mmol; 1,5 ekv.). Tento přídavek byl opakován ještě Ix. Reakce byla ochlazena na 0 °C a byla ukončena přídavkem 1 mol l¹ MCI (aq.), extrahována chloroformem (3x), promyta vodou (2x). solankou (2x), sušena MgSOr, zfiltrována a odpařena do sucha. Směs byla odpařena z toluenu (2x) a poté rozpuštěna v trifluoroctové kyselině (200 ml) a směs byla míchána po dobu 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována toluenem (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (100 ml). Směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 10 % A) s výtěžkem 12,3 g (68 %) bílých krystalů produktu.

ΉNMR (401 MHz, DMSO-7,) δ 12,67 (d, 7=3,2 Hz, 1H); 12,09 (d, 7 =3,5 Hz, 1H); 7,82 (d,7= 3,6 Hz, 1H); 7,69 (d, 7=3,2 Hz, 1H); 7,09 (dd, 7 = 8,2, 1,3 Hz, 1H); 7,03 (ddd, 7= 8,2, 7,2, 1,6 Hz, 1H); 6,76 (td, 7= 7,5, 1,3 Hz, 1H); 6,48 (dd, 7= 7,8, 1,6 Hz, 1H); 4,86 - 4,72 (m, 2H); 4,43 (d, 7= 9,9 Hz, 2H); 1,40 - 1,27 (m, 12H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-7,) δ 153,77 (d,7= 14,1 Hz); 153,64; 145,97; 142,70; 133,90; 127,86; 125,46; 125,35; 121,79; 119,32; 111,73; 100,80; 70,94 (d, 7=6,4 Hz); 62,49 (d, 7= 167,0 Hz); 24,73 - 21,20 (m). ³¹P NMR (162 MHz, DMSO-7,) δ 19,70. MS (ESI) m/z = 438,2 (M + H]⁺ (vypočteno 438,1).

Příklad 97

7-((2-((Bis(((5)-l-(ethoxykarbonyl)-2-(fenyl)ethyl)amino)fosforyl)methoxy)fenyl)thio)-3,5dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on L97

Baňka byla naplněna látkou L96 (100 mg; 0,2286 mmol; 1 ekv.), uzavřena šeptem a zapuštěna

-58CZ 309199 B6 argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha pod argonovou atmosférou. Do baňky byl přidán hydrochlorid L-fenylalaninethylesteru (210 mg; 0,9144 mmol; 4 ekv.), baňka byla uzavřena šeptem, zapuštěna argonem a poté byly přidány suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozí látky) a triethylamin (191 pl; 1,37 mmol; 6 ekv.). Směs byla zahřívána 15 minut při 70 °C a poté byl přidán roztok trifenylfosfmu (359 mg; 1,37 mmol; 6 ekv.) a 2,2'-dipyridyldisulfidu (302 mg; 1,37 mmol; 6 ekv.) v suchém pyridinu (10 ml/1 mmol výchozí látky). Směs byla zahřívána přes noc při 70 °C a poté byla rozpouštědla odpařena a pevný podíl byl odpařen z toluenu (Ix). Směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 20 % A), následována separací na HPLC (Cl8, gradient voda/methanol). Produkt byl lyofilizován z dioxanu s výtěžkem 112 mg (70 %) bílého prášku.

³H NMR (401 MHz, DMSO-í/₆) δ 13,14 - 12,53 (m, 1H); 12,43 - 11,87 (m, 1H); 7,83 (s, 1H); 7,65 (s, 1H); 7,44 - 7,11 (m, 9H); 7,04 (ddd, J= 8,6, 7,4, 1,6 Hz, 1H); 6,84 - 6,69 (m, 2H); 6,51 (dd, J = 7,8, 1,6 Hz, 1H); 4,80 - 4,58 (m, 1H); 4,45 (dd, J = 12,2, 10,6 Hz, 1H); 4,28 - 4,05 (m, 1H); 4,05 - 3,92 (m, 4H); 3,80 (d, J= 9,0 Hz, 2H); 3,04 - 2,80 (m, 4H); 1,26 - 0,72 (m, 6H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-rie) δ 174,82 - 171,21 (m); 154,16 (d, J= 12,5 Hz); 153,64; 145,99; 142,67; 137,03 (d, J= 10,2 Hz); 133,74; 129,53; 128,12; 127,91; 126,46 (d, J = 3,7 Hz); 125,59; 125,34; 121,53; 119,30; 111,65; 101,17; 66,35; 65,22 (d, J = 137,0 Hz); 60,46; 54,04 (d, J= 8,0 Hz); 13,87 (d, J = 7,2 Hz). MS (ESI) m/z= 704,5 [M + H]⁺ (vypočteno 704,2).

Příklad 98

7-((2-(((((S)-l-(Isopropoxykarbonyl)-2-(fenyl)ethyl)amino)(fenoxy)fosforyl)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4//-pyrrolo[3,2-r/| py rim idi n-4-on L98

Baňka byla naplněna látkou L96 (300 mg; 0,6858 mmol; 1 ekv.), uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha pod argonovou atmosférou. Do baňky byl přidán L-alanin isopropylester hydrochlorid (335 mg; 1,37 mmol; 2 ekv.), baňka byla uzavřena šeptem, zapuštěna argonem a poté byly přidány suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozí látky) a triethylamin (572 pl; 4,11 mmol; 6 ekv.). Směs byla zahřívána 15 minut při 70 °C a poté byl přidán roztok trifenylfosfmu (1,08 g; 4,11 mmol; 6 ekv.) a 2,2'-dipyridyldisulfidu (905 mg; 4,11 mmol; 6 ekv.) v suchém pyridinu (10 ml/1 mmol výchozí látky). Směs byla zahřívána přes noc při 70 °C a poté byla rozpouštědla odpařena a pevný podíl byl odpařen z toluenu (Ix). Směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 20 % A), následována separací na HPLC (Cl8, gradient voda/methanol). Produkt byl lyofilizován z dioxanu s výtěžkem 130 mg (31 %) bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, DMSCM,) δ 12,67 (t, J = 4,2 Hz, 1H); 12,09 (s, 1H); 7,82 (t, J= 3,9 Hz, 1H); 7,67 (dd, J= 11,7, 3,2 Hz, 1H); 7,37 - 7,11 (m, 9H); 7,05 (dtd, J= 8,3, 6,8, 1,6 Hz, 1H); 6,91 (ddd,

-59CZ 309199 B6

7=20,1, 8,3, 1,2 Hz, 1H); 6,77 (td, 7=7,6, 1,2 Hz, 1H); 6,51 (dt,7=7,8, 1,7 Hz, 1H); 4,87-4,65 (m, 1H);4,25 (dd, 7= 9,0,2,2 Hz, 1H); 4,36 - 4,12 (m, 1H); 3,04 - 2,80 (m, 2H); 1,12-0,94 (m,6H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-7,) δ 171,91; 153,86 (d, 7= 13,0 Hz); 153,68 - 153,59 (m); 150,04 (d, 7= 9,7 Hz); 145,98 (d, 7= 3,0 Hz); 142,71; 136,95 (d, 7 = 28,9 Hz); 133,82; 129,95 - 128,98 (m); 128,18 (d,7= 14,5 Hz); 127,97 (d,7 = 8,3 Hz); 126,56 (d, 7= 11,4 Hz); 125,60 (d,7= 14,1 Hz); 125,39 (d, 7= 6,2 Hz); 124,55; 121,85; 120,73 (dd, 7= 4,4; 2,6 Hz); 119,32 (d, 7=3,3 Hz); 111,75; 100,94; 68,10 (d, 7 = 5,2 Hz); 64,03 (d, 7= 158,1 Hz); 55,25 (d, 7= 6,0 Hz); 39,52; 22,72 - 18,90 (m). ³¹P NMR (162 MHz, DMSO-7₆) δ 22,94 (d, 7= 9,8 Hz). MS (ESI) m/z = 619,3 [M + H]⁺ (vypočteno 619,2).

Příklad 99

7-((2-((Bis(((S)-l-(isopropoxykarbonyl)-2-(fenyl)ethyl)amino)fosforyl)methoxy)fenyl)thio)-3,5dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidm-4-on L99

Tato látka byla připravena jako vedlejší produkt příkladu L98 se ziskem 224 mg (45 %) bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7₆) δ 7,82 (s, 1H); 7,64 (s, 1H); 7,30 - 7,10 (m, 10H); 7,04 (ddd, 7 = 8,3, 7,4, 1,6 Hz, 1H); 6,80 (dd, 7= 8,3, 1,2 Hz, 1H); 6,75 (td, 7= 7,6, 1,1 Hz, 1H); 6,51 (dd, 7 = 7,8, 1,6 Hz, 1H); 4,88 -4,73 (m, 2H); 4,66 (dd,7= 11,8, 10,5 Hz, 1H); 4,42 (dd,7= 12,1, 10,5 Hz, 1H); 4,22 - 4,10 (m, 1H); 4,10 - 3,99 (m, 1H); 3,82 (d, 7= 8,9 Hz, 2H); 3,04 - 2,81 (m, 4H); 1,19 0,98 (m, 12H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-76) δ 172,10; 154,18(d,7= 12,7 Hz); 153,65; 146,01; 142,68; 137,00 (d, 7= 6,7 Hz); 133,73; 129,58; 128,12; 127,96; 126,47 (d, 7= 4,8 Hz); 125,63; 125,37; 121,58; 119,30; 111,70; 101,17; 68,02; 65,52 (d, 7= 169,5 Hz); 54,09 (d, 7= 14,7 Hz); 21,87-20,83 (m). ³¹P NMR (162 MHz, DMSO-76) δ 21,33. MS (ESI) m/z = 732,5 |M + H]⁺ (vypočteno 732,3).

Příklad 100

7-((2-(( Fosfonátojmcthoxy )fcnyl )th io)-3.5 -dihydro-4//-py rrolo 13,2-ó/| py ri m idi n-4-on mono(tetrabutylamonný) LI00

-60CZ 309199 B6

Baňka byla naplněna látkou L96 (12,0 g; 27,4 mmol; 1 ekv.), uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha a odpařena z toluenu (2x). Zbytek byl rozpuštěn ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu triethylamonného (2 mol l¹) a do roztoku byl přidán tetrabutylamoniumhydroxid (2 ml 1,5 mol l¹ vodného roztoku/1 mmol výchozího materiálu). Roztok byl zfiltrován přes P2 a P4 skleněné filtry a poté byl odpařen do sucha. Zbylý olej byl adsorbován na Cl8 silikagel a směs byla separována pomocí C18 flash chromatografíe (E do 50 % A) se ziskem 14,5 g (89 %) bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-í/₆) δ 7,86 (s, 1H); 7,68 (s, 1H); 7,07 (dd, J = 8,3, 1,2 Hz, 1H); 6,91 (td, J= 8,2, 7,8, 1,7 Hz, 1H); 6,59 (td, J= 7,5, 1,2 Hz, 1H); 6,47 (dd, J = 7,7, 1,7 Hz, 1H); 3,92 (d, J= 9,2 Hz, 2H); 3,43 - 2,86 (m. 8H); 1,73 - 1,41 (m, 8H); 1,28 (h, J = 7,4 Hz, 8H); 0,90 (t, J = 7,3 Hz, 12H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-í/6) δ 155,84 (d, J = 9,4 Hz); 154,81; 146,22; 143,25; 134,38; 127,71; 125,51; 125,17; 120,05; 119,42; 111,78; 100,63; 67,56 (d, J = 151,6 Hz); 57,51; 23,08; 19,20; 13,50. ³¹P NMR (162 MHz, DMSO-í/6) δ 10,93. MS (volná kyselina) (ESI) m/z = 354,0 [M + H]⁺ (vypočteno 354,0).

Příklad 101

7-((2-(((((S)-l-(Isopropoxykarbonyl)ethyl)amino)(fenoxy)fbsfbryl)methoxy)fenyl)thio)-3,5dihydro-4H-pyrrolo [3,2-ri]pyrimidin-4-on L101

Baňka byla naplněna látkou L100 (5,00 g; 8,40 mmol; 1 ekv.), L-alaninem isopropylesteremhydrochloridem (2,50 g; 14,9 mmol; 1,77 ekv.) a fenolem (3,49 g; 37,1 mmol;

4,42 ekv.), poté byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Následně byl přidán suchý pyridin (40 ml/1 mmol výchozí látky) a triethylamin (12,4 ml; 89,0 mmol; 10,6 ekv.) a směs byla míchána 15 minut při 60 °C. Poté byl přidán roztok trifenylfosfínu (11,5 g; 44,0 mmol; 5,24 ekv.) a 2,2'dipyridyldisulfídu (13,6 g; 61,7 mmol; 7,34 ekv.) v suchém pyridinu (20 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla zahřívána přes noc při 60 °C a poté byla rozpouštědla odpařena a pevný podíl byl odpařen z toluenu (Ix). Směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (D do 10 % A) (2x). Produkt byl lyofilizován z dioxanu s výtěžkem 3,52 g (77 %) bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-í/₆) δ 12,66 (s, 1H); 12,09 (s, 1H); 7,83 (d, J= 1,6 Hz, 1H); 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1H); 7,38 (ddd, J= 9,1, 7,2, 2,0 Hz, 2H); 7,34 - 7,22 (m, 2H); 7,18 (dt, J= 7,7, 3,7 Hz, 1H); 7,09 (dd, J= 7,6, 2,4 Hz, 1H); 7,04 (td, J = 6,9, 1,1 Hz, 1H); 6,82 - 6,71 (m, 1H); 6,52 (d, J = 7,8 Hz, 1H); 5,88 (dt, J = 12,4, 10,2 Hz, 1H); 5,01 - 4,68 (m, 1H); 4,68 - 4,32 (m, 2H); 4,32 3,93 (m, 1H); 3,56 (s, 1H); 1,37 - 1,19 (m, 3H); 1,16 - 1,04 (m, 6H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSOd₆) δ 172,95 (dd, J= 18,3; 3,8 Hz); 153,98 (dd, J = 13,3; 2,2 Hz); 153,67; 150,13 (t; J=9,6 Hz); 146,00; 142,74; 133,88 (d, J= 4,9 Hz); 129,68; 128,00 (d, J= 9,4 Hz); 125,64 (d, J= 6,1 Hz); 125,47; 124,65 (d, J = 4,5 Hz); 121,88 (d, J = 7,7 Hz); 120,83 (t; J = 4,6 Hz); 119,35; 111,92 (d,

-61 CZ 309199 B6

J = 17,0 Hz); 100,96 (d, J= 7,4 Hz); 68,01; 65,62 - 61,49 (m); 51,64 - 45,41 (m); 21,73 - 21,04 (m); 20,56 - 19,98 (m). ³¹P NMR (162 MHz, DMSCM,) δ 23,09; 22,75. MS (ESI) m/z = 543,1 [M + H]⁺ (vypočteno 543,1).

Příklad 102

7-((2-((Bis(((5)-l-(isopropoxykarbonyl)ethyl)amino)fosforyl)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidm-4-on LI02

O / A

G /''XOOG-x

Tato látka byla připravena jako vedlejší produkt postupu z příkladu 101 s L-alaninem isopropylesteremhydrochloridem (230 mg; 1,37 mmol; 2 ekv.) jako aminokyselinou. Lyofilizací z dioxanu bylo získáno 279 mg (75 %) bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-d₄) δ 12,67 (s, 1H); 12,09 (s, 1H); 7,82 (d, J= 2,8 Hz, 1H); 7,66 (d, J =2,2 Hz, 1H); 7,11 - 6,98 (m, 2H); 6,75 (ddd, J= Ί$, 5,7, 2,8 Hz, 1H); 6,55 - 6,44 (m, 1H); 4,93 4,83 (m, 2H); 4,77 (dd, J = 12,1, 10,1 Hz, 1H); 4,67(dd, J= 11,6, 10,1 Hz, 1H); 4,30 - 4,16 (m, 2H); 4,11 - 3,99 (m, 1H); 3,99 - 3,86 (m, 1H); 1,37 - 1,28 (m, 6H); 1,21 - 1,14 (m, 12H). ¹³CNMR (101 MHz, DMSO-de) δ 173,47 (d, J = 5,1 Hz); 154,36 (d, J= 12,4 Hz); 153,65; 145,97; 142,67; 133,77; 127,99; 125,66; 125,46; 121,59; 119,29; 111,86; 101,18; 67,85; 65,71 (d, J= 135,0 Hz); 48,40 (d, J= 10,3 Hz); 21,43; 21,06 - 20,56 (m).³¹PNMR(162 MHz, DMSO-d₆) δ 21,41. MS (ESI) m/z = 580,2 [M + H]⁺ (vypočteno 580,2).

Příklad 103

7-((5 -Fluor-2-((fosfonáto)methoxy)fenyl)thio)-3,5 -dihydro-4//-py rrolo [3,2-ri]pyrimidin-4-on triethylamonný LI03

Meziprodukt kroku 1 z příkladu 69 (444 mg; 0,6570 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Směs byla odpařena do sucha a baňka byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol

-62CZ 309199 B6 výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu triethylammoného (2 mol l¹) a směs byla odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na C18 silikagel a směs byla separována pomocí C18 flash chromatografie (E do 50 % A) se ziskem 293 mg (78 %) bílého prášku, který byl použit v dalších krocích bez další charakterizace.

MS (volná kyselina) (ESI) m/z = 372,2 [M + H]⁺ (vypočteno 372,0).

Příklad 104

7-((5-Fluor-2-(((((S)-l-(isopropoxykarbonyl)ethyl)amino)(fenoxy)fosforyl)methoxy)fenyl)thio)3.5-dihydro-4//-pyrrolo13,2-ó/|pyrimidin-4-on L104

Baňka byla naplněna látkou L103 (150 mg; 0,2615 mmol; 1 ekv.), L-alaninem isopropylesteremhydrochloridem (78 mg; 0,4629 mmol; 1,77 ekv.) a fenolem (109 mg; 1,16 mmol; 4,42 ekv.). poté byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Následně byl přidán suchý pyridin (40 ml/1 mmol výchozí látky) a triethylamin (386 pl; 2,78 mmol; 10,6 ekv.) a směs byla míchána 15 minut při 60 °C. Poté byl přidán roztok trifenylfosfinu (359 mg; 1,37 mmol; 5,24 ekv.) a 2,2'dipyridyldisulfidu (422 mg; 1,92 mmol; 7,34 ekv.) v suchém pyridinu (20 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla zahřívána přes noc při 60 °C a poté byla rozpouštědla odpařena a pevný podíl byl odpařen z toluenu (Ix). Směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 10 % A), následně pak separací na HPLC (Cellulose SC, heptan/ethanol (80:20) jako eluent). Produkt byl lyofilizován z dioxanu s výtěžkem 69 mg (47 %) bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-ď,) δ 12,76 (S, 1H); 12,15 (s, 1H); 7,85 (d, J= 1,5 Hz, 1H); 7,74 (d, J = 6,7 Hz, 1H); 7,38 (ddd, J= 9,1, 7,3, 2,0 Hz, 2H); 7,33 - 7,22 (m, 2H); 7,18 (tdd, J = 7,4, 2,2, 1,0 Hz, 1H); 7,13 (ddd, J = 9,0, 4,6, 3,5 Hz, 1 H); 6,87 (td, J= 8,5, 3,1 Hz, 1H); 6,21 (ddd, J = 9,2, 3,1, 1,2 Hz, 1H); 5,88 (dt, J= 12,4, 10,0 Hz, 1H); 4,92 - 4,70 (m, 1H); 4,61 - 4,35 (m. 2H); 4,23 3,99 (m, 1H); 1,31 - 1,19 (m, 3H); 1,17 - 1,03 (m, 6H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-ď,) δ 172,91 (dd,J= 17,7; 4,1 Hz); 157,20 (dd,J = 238,2; 5,2 Hz); 153,64; 150,45 - 149,80 (m); 145,76; 143,01; 134,00 (d, J = 3,5 Hz); 130,74 (dd, J= 11,5; 7,6 Hz); 129,70; 124,66 (d, J= 4,6 Hz); 120,80 (dd, J = 6,4; 4,5 Hz); 119,50; 113,36 (dd, J = 24,3; 8,2 Hz); 111,92 (d. J= 30,3 Hz); 111,28 (d, J = 23,7 Hz); 99,99 (d, J= 4,6 Hz); 69,04 - 67,10 (m); 66,05 - 63,61 (m); 49,30 (d, J= 7,0 Hz); 21,49 - 21,26 (m); 20,93 - 19,73 (m). ¹⁹F NMR (377 MHz, DMSO-ri₆) δ -121,52. ³¹P NMR (162 MHz, DMSO-rie) δ 22,92; 22,50. MS (ESI) m/z = 561,4 [M + H]⁺ (vypočteno 561,1).

Příklad 105

7-((5-Fluor-2-((bis(((5)-l-(isopropoxykarbonyl)ethyl)amino)fosforyl)methoxy)fenyl)thio)-3,5dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-on L105

-63 CZ 309199 B6

Tato látka byla připravena jako vedlejší produkt postupu z příkladu 104. Lyofilizací z dioxanu bylo získáno 21 mg (13 %) bílého prášku.

‘HNMR (401 MHz, DMSO-7₆) δ 12,75 (s, 1H); 12,14 (s, 1H); 7,85 (s, 1H); 7,70 (s, 1H); 7,06 (dd, J= 9,0, 4,6 Hz, 1H); 6,86 (ddd, J= 8,9, 8,2, 3,1 Hz, 1H); 6,19 (dd, J= 9,2, 3,1 Hz, 1H); 4,88 (hept, J= 6,3 Hz, 2H); 4,79(dd, J= 12,1, 10,2 Hz, 1H); 4,67 (dd, J= 11,6, 10,1 Hz, 1H); 4,34-4,15 (m ,2H); 4,09 - 3,86 (m, 2H); 1,38 - 1,24 (m, 6H); 1,24 - 1,08 (m, 12H). ¹³C NMR (101 MHz. DMSOd6) δ 173,45 (d, 7=5,3 Hz); 157,04 (d, 7 = 237,8 Hz); 153,63; 150,67 (d, 7= 12,0 Hz); 145,76; 142,96; 133,89; 130,69 (d, 7 =7,9 Hz); 119,47; 113,26 (d, 7 = 8,6 Hz); 111,89 (d, 7=27,1 Hz); 111,24 (d, 7= 23,1 Hz); 100,21; 67,87; 66,34 (d, 7= 135,2 Hz); 48,99 - 47,61 (m); 21,44; 21,24 20,51 (m). ¹⁹F NMR (377 MHz, DMSO-76) δ -121,96. ³¹P NMR (162 MHz. DMSO-7₆) δ 21,27. MS (ESI) m/z = 598,4 [M + H]⁺ (vypočteno 598,1).

Příklad 106

7-((3-Methoxy-2-((fbsfbnáto)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo [3,2-7]pyrimidin-4-on triethyl amonný LI06

Meziprodukt kroku 1 z příkladu 70 (455 mg; 0,6615 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Směs byla odpařena do sucha a baňka byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a poté byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu triethylammoného (2 molT¹) a směs byla odpařena do sucha. Zbytek byl adsorbován na C18 silikagel a směs byla separována pomocí C18 flash chromatografíe (E do 50 % A) se ziskem 300 mg (78 %) bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7₆) δ 7,83 (s, 1H); 7,68 (s, 1H); 6,78 (t,7= 8,0 Hz, 1H); 6,72 (dd,7 = 8,3, 1,6 Hz, 1H); 6,09 (dd, 7= 7,8, 1,6 Hz, 1H); 3,99 (d, 7= 9,9 Hz, 2H); 3,75 (s, 3H); 3,01 (q, 7= 7,3 Hz, 12H); 1,17 (t,7= 7,3 Hz, 18H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-7₆) δ 153,79; 152,27; 145,85;

-64CZ 309199 B6

144,12 (d; J= 14,0 Hz); 142,73; 134,00; 133,81; 124,03; 119,21; 117,73; 109,65; 101,61; 69,43 (d; J= 155,6 Hz); 55,93; 45,35; 8,70,3¹PNMR(162MHz, DMSO-7.) δ 13,28. MS (volnákyselina) (ESI) m/z = 383,0 [M + H]⁺ (vypočteno 383,0).

Příklad 107

7-((3-Methoxy-2-(((((S)-l-(isopropoxykarbonyl)ethyl)amino)(fenoxy)fbsfbryl)methoxy)fenyl)thio)-3,5 -dihydro-4H-pyrrolo [3,2-<7]pyrimidin-4-on L107

Baňka byla naplněna látkou L106 (150 mg; 0,2561 mmol; 1 ekv.), L-alaninem isopropylesteremhydrochloridem (76mg; 0,4533 mmol; 1,77 ekv.) afenolem (106mg; 1,13 mmol: 4,42 ekv.), poté byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Následně byl přidán suchý pyridin (40 ml/1 mmol výchozí látky) a triethylamin (378 pl; 2,72 mmol; 10,6 ekv.) a směs byla míchána 15 minut při 60 °C. Poté byl přidán roztok trifenylfosfinu (352 mg; 1,34 mmol; 5,24 ekv.) a 2,2'dipyridyldisulfidu (414 mg; 1,88 mmol; 7,34 ekv.) v suchém pyridinu (20 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla zahřívána přes noc při 60 °C a poté byla rozpouštědla odpařena a pevný podíl byl odpařen z toluenu (Ix). Směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 10 % A), následována separací na HPLC (Cellulose SC, heptan/ethanol (80:20) jako eluent). Produkt byl lyofilizován z dioxanu s výtěžkem 31 mg (21 %) bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-7,) δ 12,67 (s, 1H); 12,09 (s, 1H); 7,81 (d, 7=2,3 Hz, 1H); 7,70 (s, 1H); 7,41 - 7,33 (m, 2H); 7,32 - 7,22 (m, 2H); 7,21 - 7,11 (m, 1H); 6,86 (td, 7=8,1, 1,8 Hz, 1H); 6,79 (ddd, 7= 8,4, 1,6, 0,6 Hz, 1H); 6,22 - 6,04 (m, 1H); 5,88 - 5,68 (m, 1H); 4.93 - 4,74 (m, 1H); 4,60 - 4,27 (m, 2H); 4,13 - 3,90(m, 1H); 3,78 (d, 7= 2,8 Hz, 3H); 1,28 - 1,20 (m,3H); 1,16 - 1,08 (m, 6H). ¹³CNMR(101 MHz, DMSO-7.) δ 172,96 (dd,7= 16,5; 3,9 Hz); 153,63; 151,83 (d, 7=5,1 Hz); 150,39 (d, 7= 8,9 Hz); 145,89 (d, 7= 2,5 Hz); 142,88; 142,75; 133,95; 133,41 (d, 7=9,1 Hz); 129,57; 124,74 (d, 7= 7,7 Hz); 124,44; 120,79 (d, 7= 4,6 Hz); 119,27; 117,77 (d, 7= 10,0 Hz); 109,57; 101,13 (d, 7= 9,9 Hz); 67,95 (d, 7= 6,6 Hz); 68,23 - 66,19 (m); 55,94; 49,22 (d, 7 = 11,6 Hz); 21,63 - 21,05 (m); 20,51 - 19,49 (m). ³¹P NMR (162 MHz, DMSO-7,) δ 23,11. MS (ESI) m/z = 573,5 [M + H]⁺ (vypočteno 573,2).

Příklad 108

7-((3-Methoxy-2-((bis(((S)-l-(isopropoxykarbonyl)ethyl)amino)fbsfbryl)methoxy)fenyl)thio)-

3.5-dihydro-4//-pyrrolo13,2-ó/|pyrimidin-4-on L108

-65 CZ 309199 B6

O

Tato látka byla připravena jako vedlejší produkt postupu z příkladu 107. Lyofilizací z dioxanu bylo získáno 42 mg (27 %) bílého prášku.

Ή NMR (401 MHz, DMSO-76) δ 12,75 (s, 1H); 12,14 (s, 1H); 7,85 (s, lH);7,70(s, 1H); 7,06 (dd, J= 9,0, 4,6 Hz, 1H); 6,86 (ddd, J= 8,9, 8,2, 3,1 Hz, 1H); 6,19 (dd, J= 9,2, 3,1 Hz, 1H); 4,88 (hept, J= 6,3 Hz, 2H); 4,79 (dd, J = 12,1, 10,2 Hz, 1H); 4,67 (dd, J= 11,6, 10,1 Hz, 1H); 4,34 - 4,15 (m, 2H); 4,09 - 3,86 (m, 2H); 1,38 - 1,24 (m, 6H); 1,24 - l,08(m, 12H). ¹³C NMR (101 MHz, DMSOd₆) δ 173,45 (d, 7=5,3 Hz); 157,04 (d, 7 = 237,8 Hz); 153,63; 150,67 (d, 7= 12,0 Hz); 145,76; 142,96; 133,89; 130,69 (d, 7= 7,9 Hz); 119,47; 113,26 (d, 7=8,6 Hz); 111,89 (d, 7= 27,1 Hz); 111,24 (d, 7= 23,1 Hz); 100,21; 67,87; 66,34 (d, 7= 135,2 Hz); 48,99 - 47,61 (m); 21,44; 21,24 20,51 (m). ³¹P NMR (162 MHz, DMSO-7,) δ 21,31. MS (ESI) m/z = 610,5 [M + H]⁺ (vypočteno 610,2).

Příklad 109

7erc-butyl-4-(benzyloxy)-7-((2-(((terc-butyl(dimethyl)silyl)oxy)methyl)fenyl)amino)-5Hpyrrolo[3,2-7]pyrimidin-5-karboxylát L109

Do baňky byly vloženy 2-(((terc-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)anilin (1,22 g; 5,14 mmol; 1 ekv.), látka L3 (1,04; 5,14 mmol; 1 ekv.). uhličitan česný (2,5 g; 7,72 mmol; 1,5 ekv.), chlor(2dicyklohexylfosfmo-2',4',6'-triisopropyl-1,1 '-bifenyl) [2-(2'-amino-1,1 '-bifenyl)]palladium(II) (200 mg; 0,25 mmol; 0,05 ekv.) a (2-dicyklohexylfostino-2',4',6'-triisopropyl-l,r-bifenyl)[2-(2'-amino1, l'-bifenyl)] (130 mg; 0,27 mmol; 0,05 ekv.), baňka byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Do baňky byl přidán suchý toluen (10 ml) a směs byla zahřívána 16 hodin při 110 °C. Poté byla směs zfiltrována přes křemelinu a promyta ethylacetátem (3x). Rozpouštědla byla odpařena, směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 40 % C) se ziskem 1,14 g (67 %) bílého prášku.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-7,) δ 8,55 (s, 1H); 7,71 (s, 1H); 7,66 (s, 1H); 7,52 (m, 2H); 7,38 (m, 2H); 7,32 (m, 1H); 7,27 - 7,23 (m, 2H); 7,20 (m, 1H); 6,84 (td, 7 = 7,3, 1,3, 1H); 5,63 (s, 2H); 4,79 (s, 2H); 1,46 (s, 9H); 0,90 (s, 9H); 0,10 (s, 6H). ¹³CNMR(100 MHz, DMSO-7,) δ 155,79; 151,26; 148,66; 148,23; 142,05; 136,62; 128,86; 128,51; 128,41; 128,09; 128,02; 127,48; 123,65; I 19,58; 114,74; 114,67; 112,38; 84,54; 67,92; 63,98; 27,49; 25,93; 18,10; -5,11. MS (ESI) m/z = 561,4 [M

-66CZ 309199 B6 + H]⁺ (vypočteno 561,3).

Příklad 110

7erc-butyl-4-(benzyloxy)-7-((2-(hydroxymethyl)fenyl)amino)-5H-pyrrolo[3,2-ď]pyrimidin-5karboxylát LI 10

Roztok tetrabutylammonium fluoridu trihydrátu (1,9 ml; 1,9 mmol; 1 ekv.; 1 mol T¹ roztok v THF) v suchém tetrahydrofuranu (50 ml) byl pufrován kyselinou octovou (101 pl; 1,96 mmol; 1,03 ekv.). Do roztoku byla přidána látka L109 (1,1 g; 1,96 mmol; 1,03 ekv.) a směs byla míchána 16 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědla byla odpařena, směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (B do 80 % C) se ziskem 467 mg (53 %) bílého prášku.

Ή NMR (400 MHz, CDCh) δ 8,56 (s, 1H); 7,72 (s, 1H); 7,57 (bs, 1H); 7,53 (m, 2H); 7,38 (m, 2H); 7,33 (m, 1H); 7,28 - 7,26 (m, 2H); 7,13 (bd, J= 7,4, 1H); 6,82 (m, 1H); 5,67 (s, 2H); 4,81 (s, 1H); 1,53 (s, 9H). ¹³C NMR (400 MHz, CDCh) δ 156,23; 151,13; 148,52; 148,5; 142,77; 136,32, 129,35; 129,20; 128,43; 128,04; 128,02; 127,02; 123,45; 119,57; 115,02; 114,54; 113,03; 84,63; 68,39; 64,40; 27,85. MS (ESI) m/z = 447,0 [M + H]⁺ (vypočteno 447,2).

Příklad 111

7erc-butyl-4-(benzyloxy)-7-((2-formylfenyl)amino)-5H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-5-karboxylát Lili

Látka LI 10 (400 mg; 0,90 mmol; 1 ekv.) byla rozpuštěna v dichlormethanu (20 ml) a do baňky byl přidán MnO₂ (780 mg; 8,9 mmol; 9,9 ekv.). Výsledná suspenze byla míchána 6 hodin při 35 °C. Směs byla zfíltrována přes křemelinu, promyta dichlormethanem (3x) a rozpouštědla byla odpařena. Směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a poté byla separována pomocí flash chromatografíe na silikagelu (B do 30 % C) se ziskem 142 mg (36 %) směsi dvou rotamerů jako bílého prášku.

³H NMR (400 MHz, CDCh) δ 10,43 (bs, 1H); 9,97 (s, 1H); 8,67 (s, 1H); 7,89 (s, 1H); 7,62 (dd, J = Ί,Ί, 1,6, 1H); 7,53 (m, 2H); 7,47 (m, IH); 7,38 (m,2H); 7,33 (m, 1H); 7,13 (d, J = 8,5, 1H); 6,91 (m, 1H); 5,67 (s, 2H); 1,54 (s, 9H). ¹³C NMR (400MHz, CDCh) δ 194,28; 156,21; 156,20; 152,07; 152,04; 149,67; 149,62; 148,35; 146,65; 136,65; 136,36; 135,76; 128,44; 128,11; 128,06; 121,04;

-67CZ 309199 B6

121,02; 119,92; 119,90; 119,84; 117,68; 113,51; 113,14; 85,08; 85,07; 68,34; 68,32; 27,82. MS (ESI) m/z = 445,1 [M + H]⁺ (vypočteno 445,2).

Příklad 112 (E)-7-((2-(2-(Diethoxyfosforyl)vinyl)fenyl)amino)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on

L112

Tetraethylmethylendifosfonát (152 pl; 0,6080 mmol; 1,2 ekv.) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (8 ml) pod argonovou atmosférou a poté byl přidán terc-butoxid draselný (68 mg; 0,6080 mmol; 1,2 ekv.). Směs byla míchána 10 minut při teplotě místnosti a poté byl přidán roztok látky Lili (180 mg; 0,4050 mmol; 1 ekv.) v suchém tetrahydrofuranu (7 ml). Směs byla míchána 30 minut při teplotě místnosti a reakce byla ukončena přídavkem nasyceného vodného roztoku NH4CI, extrahována ethylacetátem (3x), promyta solankou (Ix). sušena MgSO4, zfiltrována a odpařena do sucha. Směs byla rozpuštěna v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Směs byla odpařena do sucha, zbytek byl adsorbován na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (D do 20 % A) se ziskem 91 mg (58 %) bílého prášku.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-ď,) δ 11,98 (bs, 1H); 11,92 (bs, 1H); 7,79 (dd, J = 22,8, 17,2, 1H); 7,73 (s, 1H); 7,56 (dd, J = 7,8, 1,5, 1H); 7,48 (bs, 1H); 7,22 (d, J = 3,1, 1H); 7,07 (ddd, J = 8,4, 7,0, 1,5, 1H); 6,68 (m, 1H); 6,56 (dd, J= 8,4, 1,0, 1H); 6,34 (dd, J= 18,9, 17,2, 1H); 4,04 (m, 4H); 1,25 (t, 6H, J = 7,0). ¹³CNMR(100 MHz, DMSO-76) δ 153,88; 146,52; 143,86 (d, J = 7,8); 141,13; 139,20; 131,06; 127,11; 122,36; 120,85 (d, 7 = 22,8); 119,45; 117,96; 117,23; 1 15,24; 112,90 (d, 7= 188,0); 61,26 (d, 7 = 5,3); 16,50 (d, 7= 6,0). ³¹P NMR (400 MHz, DMSO-76) δ 22,68. MS (ESI) m/z = 389,1 [M + H]⁺ (vypočteno 389,1).

Příklad 113 (E)-7-((2-(2-(Fosfonáto)vinyl)fenyl)amino)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-7]pyrimidin-4-on LI 13

Baňka byla naplněna látkou LI 12 (55 mg; 0,1400 mmol; 1 ekv.). uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Poté byl přidán suchý pyridin (10 ml/1 mmol výchozího materiálu) a trimethylsilylbromid (1 ml/1 mmol výchozího materiálu). Směs byla míchána přes noc při teplotě

-68CZ 309199 B6 místnosti a poté byla odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v malém množství vody a produkt byl čištěn pomocí HPLC (Cl8, gradient z vody do methanolu) a lyofilizován z vody se ziskem 10 mg (21 %) bílého lyofilizátu produktu.

Ή NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,88 (s, 1H); 7,51 - 7,41 (m, 2H); 7,43 (s, 1H); 7,08 (m, 1H); 6,89 (m, 1H); 6,60 (dd, J= 8,2, 1,2, 1H); 6,42 (t, J = 16,8, 1H). ¹³C NMR (100 MHz, D2O) δ 156,04; 145,37; 142,18; 140,51; 136,93 (d, J = 5,9); 130,44; 127,92; 125,76; 125,54 (d, J= 175,0); 124,47 (d, J= 20,7); 120,09; 119,35; 116,99; 114,72. ³¹P NMR (400 MHz, D2O) δ 15,12. HRMS (ESI ) m/z = 331,0601 [Μ - H| (vypočteno 331,0602).

Příklad 114

7-(Fenyl)amino)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4-on LI 14

Do baňky byly vloženy anilin (70 mg; 0,8 mmol; 3,2 ekv.), látka L3 (100 mg; 0,25 mmol; 1 ekv.). uhličitan česný (170 mg; 0,3 mmol; 1,2 ekv.), chlor(2-dicyklohexylfosfmo-2',4',6'-triisopropyl1,1'-bifenyl)[2-(2'-amino-l,l'-bifenyl)]palladium(II) (30 mg; 0,04 mmol; 0,16 ekv.) a (2dicyklohexylfosfmo-2',4',6'-triisopropyl-l,l'-bifenyl)[2-(2'-amino-l,l'-bifenyl)] (20 mg; 0,04 mmol; 0,16 ekv.). baňka byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Do baňky byl přidán suchý toluen (3 ml) a směs byla zahřívána 16 hodin při 110 °C. Poté byla směs zfiltrována přes křemelinu a promyta ethylacetátem (3x). Rozpouštědla byla odpařena, směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 100 % C) se ziskem 54 mg (52 %) bílého prášku. Meziprodukt byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu). Směs byla odpařena do sucha a byl zbytek separován pomocí flash chromatografie na silikagelu (ve směsi dichlormethan/methanol 3:1 (obj./obj.) s 10 % dimethylformamidu) se ziskem 5 mg (37 %) bílého prášku.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-í/₆) δ 11,90 (bs, 2H); 7,74 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 7,30 (s, 1H); 7,06 (m, 2H); 6,76 (m, 2H); 6,58 (m, 1H). ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-í/₆) δ 153,90; 147,62; 140,87; 138,78; 128,93; 120,49; 119,75; 116,90; 116,85; 113,30. HRMS (ESI+) m/z = 227,0928 [M + H]⁺(vypočteno 227,0927).

Příklad 115

7-((4-Kyanofenyl)amino)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-on LI 15

Do baňky byly vloženy 4-aminobenzonitril (90 mg; 0,8 mmol; 1,6 ekv.), látka L3 (200 mg;

-69CZ 309199 B6

0,5 mmol; 1 ekv.). uhličitan česný (430 mg; 1,3 mmol; 2,6 ekv.), chlor(2-dicyklohexylfosfmo2',4',6'-triisopropyl-l,l'-bifenyl)[2-(2'-amino-l,l'-bifenyl)]palladium(II) (58 mg; 0,07 mmol; 0,14 ekv.) a (2-dicyklohexylfosfino-2',4',6'-triisopropyl-l, 1 '-bifenyl)[2-(2'-amino-1,1 '-bifenyl)] (37 mg; 0,08 mmol; 0,16 ekv.), baňka byla uzavřena šeptem a zapuštěna argonem. Do baňky byl přidán suchý toluen (3 ml) a směs byla zahřívána 16 hodin při 110 °C. Poté byla směs zfiltrována přes křemelinu a promyta ethylacetátem (3x). Rozpouštědla byla odpařena, směs byla adsorbována na silikagel ve směsi cyklohexan/aceton a směs byla separována pomocí flash chromatografie na silikagelu (B do 100 % C) se ziskem 128 mg (58 %) bílého prášku. Meziprodukt byl rozpuštěn v koncentrované trifluoroctové kyselině (2 ml/100 mg výchozího materiálu) a směs byla míchána 15 minut při teplotě místnosti. Trifluoroctová kyselina byla odpařena a kodestilována vodou (2x) a studeným roztokem amoniaku v ethanolu (2 ml/100 mg výchozího materiálu. Směs byla odpařena do sucha a byl zbytek separován pomocí flash chromatografie na silikagelu (ve směsi dichlormethan/methanol 3:1 (obj ./obj.) s 10 % dimethylformamidu) se ziskem 10 mg (47 %) bílého prášku.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12,12 (db, J= 3,2, 1H); 11,95 (db, J = 3,5, 1H); 8,35 (bs, 1H); 7,77 (d, J= 3,5, 1H); 7,45 (m, 2H); 7,40 (dd, J = 3,2, 0,6, 1H); 6,77 (m, 2H). ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-de) δ 153,83; 151,72; 141,50; 139,19; 133,48; 122,32; 120,64; 117,22; 117,20; 113,19; 97,07. HRMS (ESI ) m/z = 250,0732 [Μ - H]’ (vypočteno 250,0734).

Stanovení biologických účinku

Inhibice aktivity PNP in vitro

Pro hodnocení inhibiční aktivity látek byl použit lidský rekombinantní PNP protein (APNP) exprimovaný v E. coli, přečištěný afmitní chromatografň (Ni-NTA, Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA) a skladovaný ve 20 mmol l¹ fosfátovém pufru s 0,3 mol I¹ NaCl, pH 7,4, v alikvotech při -80°C. Všechny syntetizované látky byly nejprve podrobeny orientačnímu screeningu při koncentraci 10 pmoll¹, v případě, že inhibice byla větší než 50 %, byly stanoveny hodnoty IC50 (polovina maximální inhibiční koncentrace). Reakční směs pro stanovení aktivity PNP obsahovala: 1 mmoll¹ Pí, 200 pmol l¹ [2,8-³H] inosin (ARC Inc., Saint Louis, USA), variabilní koncentraci testované látky, 1 mmol l¹ DTT, 0,2 pg/ml BSA a 1,75 pg PNP proteinu. Reakce byla inkubována 10 min při 37 °C a poté byla ukončena nanesením 2 pl alikvotu reakční směsi na PEI-celulózovou destičku (kat. č. 105579, Merck Darmstadt, Německo). Destička byla vyvíjena v soustavě «-butanol-octová kyselina-voda v poměru 10:1:3 (obj ./obj ./obj.) a po vysušení byla analyzována pomocí radio-TLC čtečky RITA Star (Elysia-Raytest GmbH, Strauberhardt, Germany).

Hodnocení cytotoxicity

Pro hodnocení selektivity proti nádorového účinku byla použita buněčná linie odvozená od Tlymfoblastů (CCRF-CEM) a jedna leukemická linie promyelocytámího typu (HL-60) (vše ATCC, Manassas, VA, USA). Buňky byly kultivovány v RPMI-1640 nebo DMEM médiu obsahujícím 10% FBS a 1% GlutaMax (vše Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA) při 37 °C, v atmosféře 5% CO2. Experimenty byly prováděny na buňkách mezi pasáží 10 až 50. V den experimentu byly buňky vysazeny do průhledných 384-jamkových destiček (Brand GmbH, Wertheim, Germany) v koncentraci 2000 až 10 000 buněk na jamku a byly ponechány v inkubátoru přes noc. Druhý den byl přidán deoxyguanosin (10 pmol l¹, Sigma) a variabilní koncentrace látek. Látky byly inkubovány s buňkami v CO2 inkubátoru při 37 °C po dobu 72 h, poté následovala inkubace v délce 1 až 4 hod. s tetrazoliovou solí (XTT, Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) za účelem vizualizace viabilních buněk. Hodnoty absorbance (A450) ovlivněných buněk byly vztaženy k hodnotě neovlivněných, kontrolních buněk, které představovaly 100% životnost. Hodnoty IC50 charakterizující míru cytotoxicity látek byly vypočítány nelineární regresí s pomocí softwaru Prism v. 5,04 (GraphPad Software, San Diego, USA).

-70CZ 309199 B6

Tabulka 1: Hodnocení in-vitro účinnosti PNP inhibitorů

Struktura	Lísísíís	1C50 (MW)	KAÓ i II ^íh (pmoH ’! š	ICSÚ {CCIUCEMi [pmH5]
0 Λ h	íú	> U;		u>
% N V /¼	Llň	- rit	.-:· i ϋ
0 S H HN 'r\ PB	Lil	» sí>	» 10	> u?
'Z'	LL3	:	> ty	v-
ř>		Wi	> sÚ	<o>
.Αλ w \ ' 5	Lfri		> iÓ	íM:š4
				..........

-71 CZ 309199 B6

L54

L55 j o.; <4

L53

LSO

0,076 ri ri?

ririri (riri

A) ri)

M) ri

Ri

Rri 3 ririri.

;......

J ri>

-72CZ 309199 B6

0 g 0 . .. Λ r o ΑΤΑ fWOj$W'	IM	í .7 ?0	> A	10
«Λα Τ-Λ Λ to-/ Α/'·ιυ /W .Oto	ÍM	í;M22	> Γ0	OJ A
0 y 0 κ:χ;··' Αχ...· j; V %Λ/	Líto .................	a/go	> 10	OJ®
1 ř: λ rÝ A 'A <>Ά \ ftostotoOto'	Líi 1	OJ 80	:> Í0	0,033 0,044
Λ κ íto; A \ ftoato}to>A	L62	Qd JO	> í 0

-73 CZ 309199 B6

ί·Μ f WOXO-fi·7 ČM	LM	Ů,'W	• :0
ií H X' %·Λ< .. xp Í'W WjíQX	L65	P.058	> iO	iX.fiX
XM... K ·. / ZS«/ t ο;Ρί	L.6«í	íX:b«9	> w	ojB:
4 fi μ·? _ ζν,^Ί	t.X?	M49	> f ix	OfifiS
ΐ·'1ΪΝ <ϊ ' \ V1 Γ toXyíXX ' ÓíX X '	LÓS	Xo	> :í!	8,fiK
n Μ H W” v\ k K/ X Λ z $ C * Z-0Z (XsťXiíX		ί>χτ>	> fix	NP

-74CZ 309199 B6

1 ΰ C NO ™ 0 —	L?»	0, ΐ 22	•?· W : ^1)
	L7Í	;.;. ííj	··' > > Λ < ·· · k Ú·
< A d vr^HL Ί 51 Λ ..^WQ >VJ ' .........	trs	Α,Λ^Ι	··“ J Ý? : x .jVííš··
{' H	L73	o.ow	> ií) OJ 24
ϊ H ’yk·.·.·'·'	L74	&O7	>:-rĎ UG96
Q :: w >»A.Jří t a'f ^•«x 7	177	02X7	-> K) L5?0

-75 CZ 309199 B6

	L7S	0.0S4	:‘ iD	0 oW
	L79	i .885	:·· K)	·- i Ó
X.·* .·’* ''· v;	L88	0,93	X· J-0	LO
^X \ A	02	\	Ý' \ $	2.50
Xv	1.85	<í '$>’·)?	>	(MH5
Ϊ »/ ’	L86	V ·,'-'’ ? >	> ri)	0.05 i
xď 'nb <X;ď	07	ϊ Á&G	íU	·

-76CZ 309199 B6

it N; '1 >í«οχ	14^	O,? š ?	> to	' '.; ,' Λ
''
ΗϊΧϊ'^^-'^ν
k, :.<
Ν' Λ	£ $<|	,·	·.. í <	X·' 'Ní ·
		' > ·- v --·-·
v Ά
.•--••Ν’
n
h a
w/V*!
// Ά
>>^’··	L85	> 1 0	' ·. s ·%-ϊ	ΰ<4^ i
<.·. 5x
X^k·' Js ..'*
... Λ A·
v ' . ,-, ív J\
! !'.,· - ........
»x <; HN·* TrN.
X,>, ,.-X.. v,«
N^ \
	1.77	- ·	•:' Ňv?
Xní-Wx·.·^ V
Ρ-r- H8 Q
^/'toOOEt
Ja
ix. -ř .v·’
! *A' ý.
		jv J { ·	•:‘ í v?	EJ-7
•*x·
Rv'xs-<

-77CZ 309199 B6

-78CZ 309199 B6

*ND - neurčeno

Průmyslová využitelnost

Vynález je využitelný pro farmaceutický průmysl a v medicíně, k přípravě a výrobě léčiv, 10 léčebných prostředků a léčebných výrobku k použití při závažných onemocněních, způsobených leukemickým nádorovým bujením.

Claims (24)

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 3,5-Dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-ony obecného vzorce I,

-80 CZ 309199 B6

(I)

2. kde:

3. X je funkční skupina NH, nebo atom síry;

4. Ar je aryl nebo heteroaryl;

5. Z je řetězec atomů zvolený ze skupiny, sestávající z -CH2-, -CH2O-, -CH2OCH2- a -CHCH-, vázající se do polohy -2, nebo -3 arylu nebo heteroarylu Ar vůči substituentu X podle obecného vzorce I, neboje tento řetězec nepřítomný;

6. G je funkční skupina zvolená ze skupiny, sestávající z -COA¹, -SO2A¹, -P(O)(A')(A²). -OH, kde:

7-((2-(3-fosfonáto-2-oxapropyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7)pyrimidin-4-on sodný, 7-((2-(((((S)-l-(isopropoxykarbonyl)ethyl)amino)(fenoxy)fosforyl)methoxy)fenyl)thio)-3,5

-82 CZ 309199 B6 dihydro-4H-py rrolo [3,2-d)pyrimidin-4-on, (£)-7-((2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)amino)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-on.

7-((2-((fosfonáto)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo |3.2-ó/|pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((4-brom-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((5-brom-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo [3,2-<7]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((5-hydroxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((4-hydroxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7)pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((4-methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7)pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((4-isopropoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin4-on sodný, (£)-7-((4-(perfluorfenyl)methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2<7]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((4-(perfluorfenyl)oxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2<7]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((3-hydroxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((3-methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4on sodný, (£)-7-((3-isopropoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7)pyrimidin4-on sodný, (£)-7-((3-(perfluorfenyl)methoxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2<7]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((3-(perfluorfenyl)oxy-2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2<7]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((5-fluor-2-((fosfonáto)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo [3,2-<7|pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((3-mcthoxy-2-((fosfonáto)mcthoxy jfcnyl )th io)-3.5 -dihydro-4//-py rrolo 13,2-ó/| py ri m idi n-4on sodný, (£)-7-((3-(2-(fosfonáto)vinyl)thiofen-2-yl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4-on sodný, 7-((3-((fosfonáto)methoxy)thiofen-2-yl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4-on sodný, 7-((2-((sulfo)methoxy)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pyrimidin-4-on sodný, (£)-7-((2-(2-(sulfo)vinyl)fenyl)thio)-3,5 -dihydro-4//-py rrolo [3,2-<7]pyrimidin-4-on sodný,

£)-7-((2-(2-(fosfonáto)vinyl)fenyl)thio)-3,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-<7]pynmidin-4-on sodný,

7. substituenty A¹ a A² jsou stejné nebo různé a zvoleny ze skupiny sestávající z -OH, - OR¹ a NHR²,

8. přičemž R¹ je zvolen z lineárního či rozvětveného Ci-Ce alkylu, C6-C12 arylu nebo skupiny -CH₂OC(O)R², a

9. R² je lineární či rozvětvený Ci až C10, výhodněji C3 až C5 alkyl, nebo skupina -CHR³COOR⁴, vykazující (R), (S), nebo (RS) stereochemii, kde

10. R³ je lineární nebo rozvětvený Ci až C10 alkyl, s výhodou C2 až Cď, nejvýhodněji C3 až C5 alkylový řetězec, v němž může případně být kterákoliv skupina -CH2- nahrazena atomem síry, kyslíku, dusíku, nebo Ce až C12 arylem nebo Ce až C12 arylalkylem;

11. R⁴ je lineární nebo rozvětvený Ci až C10 a výhodněji C3 až C5 alkyl,

12. R je atom vodíku, nebo substituent, vybraný ze skupiny, sestávající z -OH, -O(aryl), O(arylalkyl), -CN a halogenu;

13. přičemž aryl je uhlovodíková skupina obsahující 6 až 12 uhlíkových atomů, obsahující alespoň jedno aromatické jádro, a může být nesubstituovaný, nebo substituovaný jedním či více substituenty, vybranými ze skupiny, zahrnující -OH, -O(aryl), -O(arylalkyl), -CN, halogen;

14. heteroaryl je uhlovodíková skupina obsahující 4 až 12 uhlíkových atomů, obsahující alespoň j edno aromatické j ádro a alespoň j eden heteroatom ze skupiny atomů kyslík, dusík, síra, a může být

-81 CZ 309199 B6 nesubstituovaný, nebo substituovaný jedním či více substituenty, vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -O(aryl), -O(arylalkyl), -CN, halogen;

15. arylalkyl označuje alkylovou skupinou, která je substituována jednou nebo více arylovými skupinami, nesubstituovanými nebo substituovanými jedním nebo více ze substituentů, vybraných ze skupiny, zahrnující -OH, -O(aryl), -O(arylalkyl), -CN, halogen;

16. a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

17. 3,5-Dihydro-4H-pyrrolo[3.2-ó/|pyrimidin-4-ony obecného vzorce I podle nároku 1, kterými jsou

18. 3,5-Dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-ony obecného vzorce I podle nároku 1 nebo sloučeniny podle nároku 2, pro použití jako léčiva.

19. 3,5-Dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-ony obecného vzorce I podle nároku 1 nebo sloučeniny podle nároku 2, pro použití k léčení onemocnění, způsobených rakovinným bujením Tlymfocytů.

20. 3,5-Dihydro-4H-pyrrolo[3,2-ri]pyrimidin-4-ony obecného vzorce I podle nároku 1 nebo sloučeniny podle nároku 2, pro použití k léčení T-akutní lymfoblastické leukemie.

21. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce I podle nároku 1 nebo sloučeniny podle nároku 2 jako aktivní složku a případně dále obsahuje alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič, plnivo, emulgátor a/nebo ředidlo.

22. Farmaceutický prostředek podle nároku 8, pro použití k léčení onemocnění, způsobených rakovinným bujením T-lymfocytů.

23. Farmaceutický prostředek podle nároku 8, pro použití k léčení T-akutní lymfoblastické leukemie.

24.