DE3249285T1 - Bispezifische Antikörperdeterminanten - Google Patents

Bispezifische Antikörperdeterminanten

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DE3249285T1 DE19823249285 DE3249285T DE3249285T1 DE 3249285 T1 DE3249285 T1 DE 3249285T1 DE 19823249285 DE19823249285 DE 19823249285 DE 3249285 T DE3249285 T DE 3249285T DE 3249285 T1 DE3249285 T1 DE 3249285T1
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Description

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Claims (20)

PATENTANSPRÜCHE
1. Homogene Probe identischer, bispezifischer Antikörperdeterminanten, dadurch gekennzeichnet, daß
jede Determinante zwei durch Disulfidbindungen verbundene L-H-Halbmoleküle, von denen jedes für eine
andere Antigendeterminante spezifisch ist, und mindestens den F(ab') 2~Tei3- eines monoklonalen IgG-Antikörpers umfaßt.
2. Homogene Probe nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß mindestens eine der Antigendeterminanten
aus einem Protein besteht.
3. Homogene Probe nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Protein aus einem Enzym besteht.
4. Homogene Probe nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Antigendeterminante aus einer Antigenstelle auf einer festen Matrix besteht, wobei die
bispezifische Antikörperdeterminante auf der festen Matrix immobilisierbar ist, indem sie an der Antigenstelle an die Matrix gebunden wird.
5. Homogene Probe nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß die andere Antigendeterminante aus einer
Antigenstelle auf einem Enzym besteht.
6. Homogene Probe nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß sie als multilamellares Gebilde vorliegt,
wobei
1. die Antigenstelle auf der Matrix aus einer Stelle an einem an der Matrix befindlichen Haptenmolekül
besteht;
5
2. die bispezifische Antikörperdeterminante an das
Haptenmolekül gebunden ist;
3. die andere Antigendeterminante eine erste Antigenstelle auf einem ersten Proteinmolekül umfaßt, wobei die bispezifische Antikörperdeterminante an dieses Proteinmolekül gebunden ist und
4. an dieses erste Proteinmolekül an einer zweiten Antigenstelle auf diesem Proteinmolekül eine zweite bispezifische Antikörperdeterminante, die
1^ sich von der an das Haptenmolekül gebundenen
Determinante unterscheidet, gebunden ist, wobei die zweite Determinante zwei durch Disulfidbindungen verbundene L-H-Halbmoleküle umfaßt, jedes L-H-Halbmolekül für eine andere Antigendeterminante spezifisch ist, eine dieser Antigendeterminanten aus einer zweiten Antigenstelle auf dem ersten Proteinmolekül besteht und jedes Halbmolekül mindestens den F(ab1)2~Teil eines monoklonalen
IgG-Antikörpers enthält.
25
7. Gebilde nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die andere Antigendeterminante, für die die zweite bispezifische Antikörperdeterminante spezifisch ist, aus einer Antigenstelle auf einem zweiten Proteinmolekül besteht.
8. Gebilde nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß d*s erste und das zweite Protein jeweils aus einem Enzym besteht.
9. Gebilde nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß es sich zur Bestimmung einer Substanz eignet und die Enzyme an einer Reihe von Reaktionen teilnehmen, die aus der betreffenden Substanz heraus zu einem ein Maß für die betreffende Substanz bildenden meßbaren Effekt führen.
10. Homogene Probe nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein Halbmolekül jeder der bispezifischen Antikörperdeterminanten für eine Antigenstelle auf ß-Galactosidase und das andere Halbmolekül für eine Antigenstelle auf Glucoseoxidase spezifisch ist.
11. Homogene Probe nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein Halbmolekül der bispezifischen Antikörperdeterminante für eine Antigenstelle auf GluSoseoxidase und das andere Halbmolekül für eine Antigenstelle auf Collagen vom Typ I spezifisch ist.
12. Homogene Probe nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein Halbmolekül jeder der bispezifischen Antikörperdeterminanten für eine Antigenstelle auf Peroxidase und das andere Halbmolekül für eine Antigenstelle auf Glucoseoxidase spezifisch ist.
13. Homogene Probe nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein Halbmolekül der bispezifischen Antikörperdeterminante für eine Antigenstelle auf Peroxidase und das andere Halbmolekül für eine Antigenstelle auf Avidin spezifisch ist.
14. Verfahren zur Herstellung einer homogenen Probe identischer bispezifischer Antikörperdeterminanten, dadurch gekennzeichnet, daß man
1. Proben zweier verschiedener monoklonaler TgG-Antikörperdeterminanten, von denen jede zwei identische/ durch Disulfidbindungen verbundene L-H-Halbmoleküle mit mindestens dem F(ab')2~Teil
.5 des monoklonalen IgG-Antikörpers umfaßt, bereitstellt;
2. die Antikörperdeterminanten in jeder Probe Bedingungen aussetzt, die ausreichen, mindestens eine der die L-H-Halbmoleküle verbindenden Disulfidbindungen aufzubrechen, wobei mindestens einige der Determinanten in jeder der Proben in zwei Halbmoleküle aufgespalten werden;
3. die Proben unter Bedingungen miteinander ver-
,c einigt, die eine chemische Kombination mindestens einiger Halbmoleküle jeder Determinante mit mindestens einigen Halbmolekülen der anderen Determinante unter Bildung der identischen bispezifischen Antikörperdeterminanten gestatten und
4. die identischen bispezifischen Antikörperdeterminanten aus dem Gemisch abtrennt.
15. Elektrodenanordnung zur Bestimmung einer unbekannten Substanzmenge in einer Probe, wobei auf die betreffende Substanz mindestens ein Enzym einwirkt und dabei ein meßbares Ion bzw. eine meßbare Verbindung, das bzw. die ein Maß für die unbekannte Substanz darstellt, freisetzt, gekennzeichnet durch eine Einrichtung zur Bestimmung oder Erfassung des meßbaren Ions bzw. der meßbaren Verbindung und eine dieser Einrichtung zugeordnete Membran mit einer Reihe von Molekülen jedes auf die zu bestimmende Substanz einwirkenden Enzyms und - an die Moleküle jedes der Enzyme gebunden - einer Reihe identischer, bispezifischer Antikörperdeterminanten, von denen
jede zwei durch Disulfidbindungen verbundene L-H-Halbmoleküle umfaßt, wobei jedes der Halbmoleküle sich vom anderen Halbmolekül unterscheidet und
mindestens den F(ab')2~Teil eines monoklonalen IgG-Antikörpers enthält, eines der L-H-Halbmoleküle für eine Antigenstelle auf dem Enzymmolekül, an das es gebunden ist, spezifisch ist, das andere Halbmolekül für eine Antigendeterminante auf der Membran
spezifisch ist und die bispezifische Antikörperdeterminante daran gebunden ist.
16. Elektrodenanordnung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß auf die zu bestimmende Substanz ein Enzym einwirkt und ein L-H-Halbmolekül der
bispezifischen Antikörperdeterminante für eine der Membran zugeordnete Antigenstelle spezifisch ist.
17. Elektrodenanordnung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß auf die zu bestimmende Substanz mehrere Enzyme einwirken und die Moleküle mindestens eines der Enzyme an ein Halbmolekül jeder der zwei verschiedenen bispezifischen Antikörperdeterminanten an zwei unterschiedlichen Antigenstellen auf den Enzymmolekülen gebunden sind.
18. Elektrodenanordnung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß auf die zu bestimmende Substanz mehrere Enzyme einwirken und die Moleküle mindestens zweier Enzyme an zwei entsprechend unterschiedliehe bispezifische Antikörperdeterminanten, die unabhängig voneinander auf der Membran immobilisiert sind, gebunden sind.
-:
19. Elektrodenanordnung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß die zu bestimmende Substanz aus Lactose, die Enzyme aus ß-Galactosidase und Glucose-
^•28-
1 oxidase und die meßbare Verbindung aus Sauerstoff bestehen.
20. Elektrodenanordnung nach Anspruch 19, dadurch ge-5 kennzeichnet, daß die Moleküle der Glucoseoxidase an zwei verschiedene bispezifische Antikörperdeterminanten an zwei unterschiedlichen Antigenstellen auf den Glukoseoxxdasemolekülen gebunden sind. 10
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