DE2633666A1 - Verfahren zur verminderung des lipid- und nucleinsaeure-gehaltes in mikrobiellen zellmassen - Google Patents

Verfahren zur verminderung des lipid- und nucleinsaeure-gehaltes in mikrobiellen zellmassen

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Description

Aktenzeichen: HOE 76/F 171
Datum: 26. Juli 1976 Dr.KM/Rp
Verfahren zur Verminderung des Lipid- und Nucleinsäuregehaltes in mikrobiellen. Zellmassen
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Verminderung der Lipid- und Nucleinsäuremenge, die in Zellen von Mikroorganismen enthalten ist. Jede Zelle enthält Kohlehydrate, Proteine, Lipide und Nucleinsäuren. Die Verwendbarkeit von mikrobiellen Zellmassen als Nahrungsmittel und Futtermittel wird durch einen Gehalt an Nucleinsäuren und Lipiden negativ beeinflußt.
Ein Nucleinsäuregehalt ist bedenklich, da er zu pathologischen Zuständen (Gicht, Harnsteine) führt.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, den Lipid- und
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Nucleinsäuregehalt in mikrobiellen Zellmassen zu senken. Nach bekannten Verfahren werden die Lipide entweder aus Zellwand und Membran durch organische Lösungsmittel herausgelöst oder durch Behandlung mit wäßrigen Alkalien verseift.
Ein bekanntes Verfahren zum Herauslösen der Lipide cius Mikx"o— Organismen arbeitet mit Gemischen aus Methanol und Chloroform. Das Verfahren ist aufwendig und kann zu toxischen Produkten führen. Lipidextraktionen mit Alkohol-Wasser-Gemischen (nach DT-OS 2 405 593 oder DT-OS 21 37 038) eignen sich schlecht für Bakterien und sind in der "technischen Ausführung ebenfalls aufwendig.
Weitere bekannte Verfahren, mikrobielle Zellmassen nucleinsäure- und lipidarm zu machen, verwenden den alkalischen Aufschluß bei erhöhten Temperaturen. Nachteilig ist hierbei die Freisetzung der bei der Hydrolyse entstandenen freien Fettsäuren, die sich zusammen mit dem Protein abscheiden.
Außerdem geht ein Teil der im Protein enthaltenen essentiellen Aminosäuren, z.B. Lysin, in einen vom Organismus nicht verwertbaren Zustand über.
Es wurde nun ein Verfahren zur Verminderung des Lipid- und Nucleinsäuregehaltes in mikrobiellen Zellmassen gefunden, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man die Zellmassen mit einer Extraktionsmischung aus Ammoniak oder Ammoniumhydroxyd und einem organischen Lösungsmittel der allgemeinen Formel I
R1-(CH2Jn-OR2 (I)
worin entweder R/ und R„ Wasserstoff bedeuten und η für eins, zwei oder drei steht, oder worin R1 die Hydroxygruppe und R„ Wasserstoff, Methyl oder Äthyl bedeuten und η für zwei oder drei steht, behandelt und nach Abtrennen der Extraktionsmischung den Rückstand der Zellmasse mit Wasser wäscht.
/3
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Als mikrobielle Zellmassen werden vorzugsweise Mikroorganismen, die z.B. durch Züchtung auf Alkohol oder η-Paraffinen in Gegenwart eines wäßrigen Nährmediums und eines freien Sauerstoff enthaltenden Gases erzeugt sind, verwendet. Bevorzugt als Mikroorganismen werden Bakterien, Hefen und Pilze.
Beispiele für solche Mikroorganismen sind Methanol verwertende Bakterien der Gattung Methylomonas, z.B. Methylomonas clarus ATCC 31226 ,Hefen wie Candida lipolytica ATCC 20.383, die durch Züchtung auf η-Paraffinen in Gegenwart eines wäßrigen Nähr-mediums erhalten werden können.
Pilztrockenmycelien können ebenfalls verwendet werden. Dieses Zellmaterial kann aus der Antibiotika-Gewinnung beispielsweise aus Penicillinfermentationen entnommen werden, nachdem das Antibiotikum extrahiert wurde.
Als Lösungsmittel der Formel I kommen Alkohole wie Methanol, Äthanol, n-Propanol und iso-Propanol in Betracht. Bevorzugt sind Methanol und Äthanol, insbesondere Methanol. Außer den genannten Alkoholen eignen sich Glykole und ihre Monoäther der Formel I, namentlich Glykol und Monomethylglykol.
Ammoniak kann den genannten Lösungsmitteln gasförmig (NH3) oder als konzentrierte wäßrige Lösung (NH.OH) zugesetzt werden. Die Wahl erfolgt nach Wassergehalt des Zelltrockenmaterials sowie nach Menge und Wassergehalt des eingesetzten Lösungsmittels. NHiOH eignet sich bei Zellmassen mit geringem Feuchtigkeitsgehalt (0 - 15 %), NH, dagegen besser bei Zellmassen mit höherem Wassergehalt (10 - 30 %).
Die Entfernung der Lipide hängt vom Gesamtwassergehalt, der in Gew.-% auf die verwendete Lösungsmittelmenge bezogen wird, und von der NH3-Konzentration in Gew.-%, bezogen auf das eingesetzte Lösungsmittel, ab.
Besonders gute Versuchsergebnisse ließen sich bei einem Zellen-
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masse/Lösungsmittel-Gewichtsverhältnis von 1 : 3 bis 1 : 6 bei Methanol und Äthanol, und 1 : 8 bis 1:12 bei Propanol, Glykol und den Monoglykoläthern erzielen. Die Ammoniakkonzentration, bezogen auf die Lösungsmittelmenge, betrug 1-10 Gew. %, vorzugsweise 1 - 5 %. Die Summe der Wassermengen, die herrühren aus Zellmasse, Lösungsmittel und gegebenenfalls aus wäßrigem Ammoniak, betrugen 0-30 Gew. %, bevorzugt 0 - 20 %, insbesondere 0-10 Gew. %, bezogen auf die eingesetzte Lösungsmittelmenge.
Beim Arbeiten im technischen Maßstab kann auf eine Trocknung der Zellen nach der Fermentation bis auf einen geringen Restwassergehalt von 4 % oder niedriger verzichtet werden. Es genügt, die Zellmasse auf ein solches Zelltrockengewicht zu bringen, daß nach Zusatz der benötigten Lösungsmittelmenge der Gesamtwassergehalt im optimalen Bereich liegt; gegebenenfalls wird man dem Lösungsmittel gasformiges NH3 zusetzen.
Das Lösen der Fette aus den mikrobiellen Zellmassen wird so durchgeführt, daß das Zellmaterial im Lösungsmittel suspendiert und NHo eingeleitet oder NH4OH zugegeben wird. Zweckmäßig ist das Durchmischen der Suspension durch Rühren. Die Behandlungstemperaturen liegen im allgemeinen im Bereich von -20° bis +6O0C, wobei ein Bereich von +5° bis +500C und insbesondere von +10° bis +300C bevorzugt ist. Die Behandlungsdauer beträgt 5 bis 120 Minuten und liegt vorzugsweise bei 25 - 35 Minuten. Die Behandlung wird im allgemeinen bei Normaldruck durchgeführt.
Nach Beendigung der Lösungsmittel-/Ammoniak-Behandlung wird das erhaltene Protein nach beliebigen Verfahren wie Zentrifugieren, Filtration und Sedimentation vom Lösungsmittel getrennt.
Bevorzugt wird die Filtration. Das erhaltene feste Zellmaterial kann zur möglichst vollständigen Entfernung der Lipide mit einem der genannten organischen Lösungsmittel nochmals behandelt werden. Der Rückstand kann zur Entfernung von Lösungsmittelresten und Ammoniak getrocknet werden. Zweckmäßig wird dies unter vermindertem Druck, vorzugsweise 80 - 150 Torr, und erhöhter Tem-
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- 15 -
peratur, vorzugsweise 40° - 500C, durchgeführt. Das so entfettete und getrocknete Produkt ist geruchlos.
Die nach dem vorstehend genannten Verfahren vom festen Zellmaterial abgetrennte flüssige Phase enthält Ammoniak und gelöste Lipide. Da?? eingesetzte Lösungsmittel kann durch Vakuumdestillation von den Fetten abgetrennt und wieder eingesetzt werden.
Anschließend werden die entfetteten und gegebenenfalls getrockneten Zellmassen in Wasser aifgenommen. Bevorzugt sind Wassermengen, die zur Zellmasse im Gew.-Verhältnis 1 : 1 bis 1 :30, insbesondere 1 : 5 bis 1 : 15, stehen. Die Wassermenge wird mindestens so bemessen, daß ein Rühren der Suspension möglich ist.
Der pH-Wert während der Wasserbehandlung soll im Bereich von 5 - 8,5, bevorzugt 6 - 7,5, liegen und wird gegebenenfalls auf diesen Bereich eingestellt. Dies ist insbesondere dann notwendig, wenn nicht oder nicht vollständig getrocknete Zellmassen aus der ersten Stufe verwendet werden, die dann auch noch Restmengen an Ammoniak enthalten, was zu einem zu hohen pH-Wert führen kann.
Zur besseren Flockulierung der Zellmasse wird vorteilhaft dem Wasser der zweiten Stufe bis zu 20 Gew.-%, vorzugsweise 5-15 Gew.-%, eines niederen Alkohols wie Äthanol, Methanol, vorzugsweise Methanol, zugesetzt.
Diese Extraktion der Nucleinsäuren, Salze, Polysaccharide und wasserlöslichen Sekundärmetabolite mit Wasser wird im allgemeinen in einem Temperaturbereich von 30° - 95°C bei Normaldruck durchgeführt. Bevorzugt sind Temperaturen von 40° - 700C, besonders bevorzugt 50° - 600C. Die Extraktionsdauer kann je nach Extraktionstemperatur und Wasssrmenge 5-120 Minuten betragen, gute Ergebnisse erzielt man mit 25 - 45 minütiger Extraktionszeit. Zur Trennung fester und flüssiger Bestandteile wird die Suspension, vorzugsweise bei Temperaturen von 10° - 300C, zentrifugiert. Andere geeignete Trennverfahren sind Sedimentation und Filtration.
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Die feste Phase wird nach gängigen Verfahren wie Gefrier-, Vakuumoder Sprühtrocknung von Flüssigkeitsresten befreit. Das Produkt besitzt angenehme Geruchseigenschaften, eine hellere Farbe als das Ausgangsmaterial und ein besonders gutes Wasserbindevermögen. Durch die Entfernung der Lipide und Nucleinsäuren eignet es sich besonders zur Herstellung von Nahrungs- und Futtermitteln.
So sind bei dem Produkt gemäß der Erfindung die Lipide bis auf einen Restgehalt von 0,5 bis 3,5 Gew.%, die Nucleinsäuren bis auf einen Restgehalt von 0,5 - 4,5 Gew.%, entfernt.
Das Verfahren gemäß der Erfindung vermeidet die Nachteile der bekannten Verfahren wie Lösungsmittelbehandlung oder alkalischer Aufschluß. Chlorierte Kohlenwasserstoffe werden nicht benötigt. Die Entfettung mit Ammoniak/Alkohol-Gemischen ist, insbesondere bei Bakterien, wesentlich vollständiger als bei Behandlung der Zellmasse mit Alkohol/Wasser-Gemischen. Temperatur- und pH-Bereiche, die den Funktionswert des Produktes herabsetzen, werden vermieden. Der Energieaufwand ist geringer als bei den alkalischen Aufschlußverfahren. Die Proteinanreicherung gelingt ohne das Anfallen großer Mengen von Neutralisationssalzen.
Die vom festen Zellmaterial abgetrennte wäßrige Phase enthält neben anderen wasserlöslichen Bestandteilen die Nucleinsäuren, die nach bekannten Verfahren, z.B. durch Ausfällen in sauren Medien, Ultrafiltration, Dialyse oder Enzymangriff, gewonnen werden können .
Die Erfindung wird durch folgende Beispiele erläutert.
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Beispiel 1 :
Methylomonas clarus ATCC 31226 wurde in einer Nährlösung enthaltend Methanol als einzige Kohlenstoffquelle, Ammoniak als einzige Stickstoffquelle, Phosphat, Eisen-, Magnesium-Salze und andere übliche Spurenelemente unter aeroben Bedingungen gezüchtet. Die dabei erzeugte Baktexierizeilittasye von dta. Lösung abgeLrennL und der Sprühtrocknung unterworfen.
100 g dieser Zellmasse wurden mit 300 g Methanol versetzt. Unter Rühren der Suspension wurden 10g NH_-Gas eingeleitet und gelöst. Durch Kühlen wurde die Temperatur während des Einleitens auf 25° - 35°C gehalten. Das Gemisch aus Methanol, Ammoniak und Zellmasse wurde 30 Minuten bei 200C gerührt.
Zur Trennung der festen und flüssigen Phase wurde filtriert und der feste Rückstand einmal mit 300 ml Methanol gewaschen. Nach erneuter Filtration wurden beide Filtrate vereinigt. Diese braune Lösung enthielt die Lipide der eingesetzten Ausgangssubstanz. Methanol und Ammoniak wurden durch Vakuumdestillation (100 Torr, 400C) entfernt. Der Rückstand, der 9,5 Gew.-% des eingesetzten Zellenmaterials betrug , war eine dunkelbraune, übelriechende Paste, die aus freien Fettsäuren, Glyceriden, Phospholipiden und Sekundärmetaboliten bestand.
der Der bei der Filtration erhaltene feste Rückstand extrahierten Zellmasse wurde im Vakuum (100 Torr) bei 400C 5 Stunden getrocknet. Es konnten so 90 g entfettete Zellmasse erhalten werden, die geruchlos war und eine hellere Farbe als das Ausgangsmaterial besaß.
Zur Verminderung des Nucleinsäuregehaltes wurde diese Zellmasse in 900 ml Wasser suspendiert. Der pH-Wert der durch Rühren homogenisierten Suspension betrug 6,9.
Nach Erhöhung der Temperatur auf 550C wurde noch 20 Minuten weitergerührt, auf 300C abgekühlt und durch Zentrifugieren in feste und flüssige Phase getrennt. Das erhaltene Sediment wurde erneut
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mit 900 ml Wasser vermischt und 10 Minuten bei 200C gerührt. Danach wurde erneut zentrifugiert und das Sediment unter vermindertem Druck getrocknet.
Die Ausbeute betrug 65 g. Der Nucleinsäuregehalt war von ursprünglich 11,2 % auf 1,5 % gesunken. Das Produkt war in trockenem Zustand geruchlos, mit Wasser befeuchtet besaß es einen sympathischen Geruch.
Das Ergebnis dieses und der weiteren Beispiele sind in den nachfolgenden Tabellen I a und I b zusammengefaßt.
Beispiel 2:
Als Ausgangsmaterial diente die gleiche Bakterienzellmasse wie in Beispiel 1 verwendet. Sie wurde den gleichen Verfahrensschritten und Bedingungen unterworfen, doch wurden statt gasförmigen NH3 30 ml konzentriertes NH.OH (33 %ig) als Reagenz verwendet.
Beispiel 3;
Es wurde wie in Beispiel 2 verfahren, jedoch wurden 60 ml konz. NH4OH (33 %ig) eingesetzt.
Beispiel 4;
Bei einer Verfahrensweise wie in Beispiel 2 wurde statt Methanol Äthanol als Lösungsmittel verwendet.
Beispiel 5:
Bei sonst gleicher Verfahrensweise wie in Beispiel 3 wurde statt Methanol Glykolmonomethyläther als Lösungsmittel verwendet.
Beispiel 6:
Es wurde verfahren wie in Beispiel 2. Statt Methanol wurde i-Propanol als Lösungsmittel eingesetzt.
/9
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- if -
Beispiel 7:
Als Äusgangsmaterial wurde eine Zellmasse aus Methylomonas clarus wie in Beispiel 1 beschrieben verwendet. 100 g des sprühgetrockneten Produkts wurden wie in Beispiel 1 beschrieben aufgeschlossen und entfettet (15 g NHo). Jedoch wurde auf die vollständige Trocknung des Rückstandes verzichtet. Der gründlich abgesaugte Filterkuchen mit einem Feststoffgehalt von 85 % wurde in 900 ml Wasser suspendiert. Der pH-Wert stellte sich auf 8,9 ein, bedingt durch den in der feuchten Biomasse verbliebenen Ammoniak.
Die Temperaturen der Suspension wurde unter Rühren auf €50C erhöht und nach 5 Minuten der pH-Wert durch Zugabe von HCl auf 7,2 eingestellt. Danach wurde noch 15 Minuten bei 65°C weitergerührt, dann auf 400C ab^gekühlt und zentrifugiert. Das erhaltene Sediment wurde getrocknet.
Beispiel 8:
Ein Kohlenwasserstoffe verwertender Stamm der Hefe Candida lipolytica ATCC 20.383 wurde auf η-Paraffinen in Gegenwart eines wäßrigen Nährmediums und eines Sauerstoff enthaltenden Gases kultiviert. Die Hefezellmasse wurde von der Nährlösung abgetrennt und getrocknet.
100 g der trockenen Hefezellmasse wurden bei Raumtemperatur unter Normaldruck in 300 g Methanol suspendiert und dieser Mischung im Verlauf von 15 Minuten 10 g NH-,-Gas zugeführt. Dabei wurde die Temperatur der Suspension durch Kühlung auf 150C gehalten. Nach Einleiten des Gases wurde noch 20 Minuten bei 22°C weitergerührt und anschließend über eine Saugfritte filtriert. Der Filterkuchen wurde einmal mit 300 ml Methanol auf der Fritte durchmischt und anschließend abgesaugt. Die beiden Filtrate wurden vereinigt. Die Lösung war gelb und enthielt die Lipide des eingesetzten Zellmaterials. Methanol und NH-, wurden bei vermindertem Druck (14 Torr) entfernt.
Der nach der zweiten Filtration verbliebene Rückstand, der aus den zerstörten und entfetteten Zellen des Mikroorganismus be-
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stand, wurde im Vakuumtrockenschrank bei 40°C (100 Torr) 5 Stunden getrocknet. Das so erhaltene Produkt hatte eine hellere Farbe als die anfangs verwendete Hefezellmasse und war geruchlos.
Zur Verminderung des Nucleinsäuregehaltes von ursprünglich 7,5 Gew.-%, bezogen auf das Ausgangsmaterial, wurden 100 g der entfetteten und getrockneten Hefe in einer Lösung aus 1 Liter
und 100/ ml Methanol
destilliertem WasserVsuspendxert. Unter Rühren wurde die Mischung bei dem sich einstellenden pH-Wert von 6,8 für 15 Minuten auf 500C gebracht und durch Zentrifugieren in ein Sediment, das das Hefeprotein enthielt, und in eine flüssige Phase, die löslich gemachte Nucleinsäure enthielt, getrennt. Das Sediment wurde nach einer nochmaligen Wäsche bei Raumtemperatur der Gefriertrocknung unterworfen.
Der Nucleinsäuregehalt des getrockneten Materials war von ursprünglich 7,5 Gew.-% aufO,4Gew.-% gesunken.
Beispiel 9;
Bei einem Verfahren wie in Beispiel 8 wurde statt Methanol Äthanol und statt 10 g NH3-gasförmig 60 ml NH.OH (33 %ig) eingesetzt.
Beispiel 10:
Penicillium chrysogenum ATCC 10.238 wurde in einer Nährlösung enthaltend Lactose, Cornsteep flüssig, Phosphat, Carbonat und Magnesiumsulfat nach üblichen Methoden aerob gezüchtet. Nach Abtrennung des produzierten Penicillins verblieb das Mycel, das getrocknet als Ausgangsmaterial diente.
Das Verfahren wurde wie in Beispiel 8 beschrieben durchgeführt. Statt NH3 wurde NH.OH 33 %ig eingesetzt. Das entfettete Trockenmycel wurde bei 300C mit Wasser gewaschen.
nachträglich ./11
geändert j
■ —7ΤΤΊ9 885/015S
Beispiel 11;
Als Ausgangsmaterial diente die gleiche Zellmasse wie in Beispiel 10 beschrieben. Statt Methanol wurde Äthanol verwendet. Die Temperatur während der Wasserextraktion wurde auf 850C erhöht und 15 Minuten dabei gehalten.
In der folgenden Tabelle III sind die Ergebnisse der Beispiele 1-11 aufgeführt.
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'Kb
Tabelle I a Entfernung der Lipide
Bei
spiel		 100 g eingesetzte Fett
Gew.-\ 		Zellmasse Lösungsmittel
300 g		 NH, (g)
NH": OH
(33 %±rr 		bzw.
, ml)
1 Art 7 Methanol NH3 10
2 Methyl-
omonas		 7 Methanol NH4OH 30
3 Il 7 Methanol NH4OH 60
4 Il 7 Äthanol NH4OH 30
5 Il 7 Glykolmono-
methyläther		 NH4OH 60
6 Il 7 i-Propanol NH4OH 30
7 M 9,6 Methanol NH3 15
8 Il 8,2 Methanol NH3 10
9 Candida
lipolytica		 8,2 Äthanol NH4OH 60
10 Il 3,5 Methanol NH4OH 30
11 Trocken-
mycel		 3,5 Äthanol NH4OH 30
Il
Nuclein-
säure
Gew.-%
11,2
11,2
11,2
11,2
11,2
11,2
15,4
7,5
7,5
2,6
2,6
709885/0156
/13
-yi-
Tabelle I b Entfernung der Nucleinsäuren
Bei
spiel		 Waschwasser pH Temp.
(°C)		 Erhaltene Zellmasse Fette
Gew.-%		 Nucleinsäure
Gew.-%
1 Menge
(D 		6,9 55 Menge
(g)		 0,8 1,5
2 0,9 6,9 60 68 1,3 1,2
3 0,9 7,0 65 67 2,0 1,1
4 0,9 6,9 50 63 2,2 1,5
5 0,9 7,1 55 67 2,8 2,3
6 0,9 7,0 60 63 3,4 4,0
7 0,9 7,2 65 64 1,2 1,4
8 0,9 6,8 50 62 1,4 0,4
9 0,8 6,5 45 68 1,8 0,7
10 0,8 6,5 30 67 1,1 0,5
11 0,9 6,5 85 78 1,3 0,8
0,9 79
709885/0155

Claims (3)

PATENTANSPRÜCHE:
1. Verfahren zur Verminderung des Lipid- und Nucleinsäuregehaltes in mikrobiellen Zellmassen, dadurch gekennzeichnet, daß man die Zellmassen mit einer Extraktionsmischung aus Ammoniak oder Ammoniumhydroxyd und einem organischen Lö-sungsmittel der allgemeinen Formel I
R1-(CH2Jn -OR2 (I)
worin entweder R und R„ Wasserstoff bedeuten und η für eins, zwei oder drei steht, oder worin R.. die Hydroxygruppe und R„ Wasserstoff, Methyl oder Äthyl bedeuten und η für zwei oder drei steht, behandelt, und nach Abtrennen der Extraktionsmischung den Rückstand der Zellmasse mit Wasser wäscht.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Gesamt-Wassergehalt während des Aufschlusses 0 bis 30 Gew.-%, vorzugsweise 0 bis 20 Gew.-%, insbesondere 0 bis 10 Gew.-%, bezogen auf die eingesetzte Lösungsmittelmenge, beträgt.
3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß der NH3~Gehalt während des Aufschlusses 1 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise 2 bis 8 Gew.-%, insbesondere 3 bis 5 Gew.-%, bezogen auf die eingesetzte Lösungsmittelmenge, beträgt.
709885/01BB
ORIGINAL INSPECTEP
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DE2633666A DE2633666C3 (de) 1976-07-27 1976-07-27 Verminderung des Lipid- und Nucleinsäure-Gehaltes in mikrobiellen Zellmassen
ES460877A ES460877A1 (es) 1976-07-27 1977-07-20 Procedimiento para disminuir el contenido de lipidos y aci- dos nucleicos en masas celulares microbianas.
NL7708171A NL7708171A (nl) 1976-07-27 1977-07-22 Werkwijze voor het verminderen van het lipide- en nucleinezuurgehalte van microbencelmateriaal.
BG036986A BG37997A3 (en) 1976-07-27 1977-07-22 Method for reduction of hat and nucleinic acids content in microbe cellular masses
CH913977A CH635615A5 (en) 1976-07-27 1977-07-22 Process for decreasing the lipid and nucleic acid content in microbial cell masses
IL52594A IL52594A (en) 1976-07-27 1977-07-25 Process for reducing the contents of lipids and nucleic acids in microbial cell masses
SE7708539A SE432609B (sv) 1976-07-27 1977-07-25 Forfarande for att minska lipid- och nukleinsyrahalten i mikrobiella cellmassor
FI772272A FI57443C (fi) 1976-07-27 1977-07-25 Foerfarande foer nedsaettande av lipid- och nukleinsyrahalten i mikrobiella cellmassor
RO7791163A RO71982A (ro) 1976-07-27 1977-07-25 Procedeu de micsorare a continutului de substante lipidice si de acizi nucleici al unor mase celulare microbiene
EG439/77A EG12626A (en) 1976-07-27 1977-07-25 Process for reducing the contents of lipids and nucleric acid in microbial cell masses
DD7700200262A DD131072A5 (de) 1976-07-27 1977-07-25 Verfahren zur verminderung des lipid-und nucleinsaeure-gehaltes in mikrobiellen zellmassen
IT26084/77A IT1082226B (it) 1976-07-27 1977-07-25 Processo per diminuire il contenuto di lipidi ed acidi nucleici in masse cellulari microbiche
GR54033A GR64056B (en) 1976-07-27 1977-07-25 Method for the reduction of the capauty of lipidic and nucleinic acids to microbian cell masses
PT66849A PT66849B (de) 1976-07-27 1977-07-26 Verfahren zur verminderung des lipidund nucleinsaure-gehaltes in mikrobiellen zellmassen
ZA00774517A ZA774517B (en) 1976-07-27 1977-07-26 Process for reducing the contents of lipids and nucleic acid in microbial cell masses
AT544077A AT357502B (de) 1976-07-27 1977-07-26 Verfahren zur verminderung des lipid- und nucleinsaeure-gehaltes in mikrobiellen zell- massen
HU77HO2006A HU176802B (en) 1976-07-27 1977-07-26 Process for decreasing the lipide and nucleic acid content of cell masses of microorganisms
CA283,487A CA1101724A (en) 1976-07-27 1977-07-26 Process for reducing the contents of lipids and nucleic acid in microbial cell masses
AU27319/77A AU512670B2 (en) 1976-07-27 1977-07-26 Reducing the content of lipids and nucleic acid in microbial cell mass
SU772504953A SU791257A3 (ru) 1976-07-27 1977-07-26 Способ получени пищевого белкового продукта из биомассы микроорганизмов
NO772658A NO147034C (no) 1976-07-27 1977-07-26 Fremgangsmaate til nedsettelse av lipid- og nukleinsyreinnhold i mikrobielle cellemasser
PL1977199855A PL107949B1 (pl) 1976-07-27 1977-07-26 Sposob oczyszczania mikrobiologicznych mas komorkomethod of purifying microbiological cell masses from lipides and nucleic acid wych od lipidow i kwasu nukleinowego
DK337677A DK146511C (da) 1976-07-27 1977-07-26 Fremgangsmaade til formindskelse af lipid- og nucleinsyreindholdet i mikrobiel cellemasse
JP8934977A JPS5315489A (en) 1976-07-27 1977-07-27 Reduction of lipid and nucleic acid contents contained in microorganism mycelium lump
BE179698A BE857229A (fr) 1976-07-27 1977-07-27 Procedes de reduction des taux d'acides lipidiques et nucleiques de masses cellulaires
CS764982A CS207473B2 (en) 1976-07-27 1977-07-27 Method of decreasing the contents of lipids and nucleus acids in the microbial cell substance
GB31537/77A GB1584194A (en) 1976-07-27 1977-07-27 Process for reducing the content of lipids in cell masses
FR7723082A FR2359896A1 (fr) 1976-07-27 1977-07-27 Procedes de reduction des taux d'acides lipidiques et nucleiques de masses cellulaires
US06/010,256 US4206243A (en) 1976-07-27 1979-02-07 Process for reducing the contents of lipids and nucleic acid in microbial cell masses

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SU (1) SU791257A3 (de)
ZA (1) ZA774517B (de)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2748885A1 (de) * 1977-11-02 1979-05-03 Hoechst Ag Verfahren zur verbesserung der eigenschaften von schroten oder mehlen aus oelsaaten
DE2907065A1 (de) 1979-02-23 1980-09-04 Hoechst Ag Verfahren zum fetten von leder und pelzfellen
CA1120314A (en) * 1979-08-22 1982-03-23 John A. Ridgway Treatment of proteinaceous materials with anhydrous ammonia gas
DE3143947A1 (de) * 1981-11-05 1983-05-11 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt "funktionelle eiweisshydrolysate, verfahren zu ihrer herstellung und diese eiweisshydrolysate enthaltende nahrungsmittel"
DE3228500A1 (de) * 1982-07-30 1984-02-02 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Verfahren zur reinigung von aldehyde, acetale und/oder ungesaettigte verbindungen enthaltenden carbonsaeureestern
EP0805201B1 (de) * 1995-05-29 2000-01-12 Otkrytoe Akcionernoe Obschestvo"Nauchno-Issledovatelsky Institut Vychislitelnykh Komplexov im. M.A. Karceva", Verfahren zum erhalt von biomasse aus mikroorganismen mit geringem nukleinsäuregehalt
RU2522888C2 (ru) * 2012-10-04 2014-07-20 Валентина Еремеевна Куцакова Способ получения белковой кормовой добавки

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2137038A1 (de) * 1970-07-24 1972-01-27 Standard Oil Co , Chicago, 111 (V St A) Einzelliges Protein
DE2405593A1 (de) * 1973-02-08 1974-08-15 British Petroleum Co Verfahren zur verminderung der nucleinsaeuremenge in proteinmaterial

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3615654A (en) * 1968-05-17 1971-10-26 Cpc International Inc Method of treating microbial cells
SU419551A1 (ru) * 1972-01-18 1974-03-15 В. Ф. Фоменков Институт биологической физики СССР Тепловой расходомер
GB1408845A (en) * 1973-02-13 1975-10-08 Ranks Hovis Mcdougall Ltd Production of edible protein containing substances
JPS5411379B2 (de) * 1973-02-21 1979-05-15

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2137038A1 (de) * 1970-07-24 1972-01-27 Standard Oil Co , Chicago, 111 (V St A) Einzelliges Protein
DE2405593A1 (de) * 1973-02-08 1974-08-15 British Petroleum Co Verfahren zur verminderung der nucleinsaeuremenge in proteinmaterial

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PMZ, 1975, S. 171-176 *
PMZ, 1976, S. 381-383 *

Also Published As

Publication number Publication date
SU791257A3 (ru) 1980-12-23
CS207473B2 (en) 1981-07-31
AT357502B (de) 1980-07-10
AU512670B2 (en) 1980-10-23
JPS5315489A (en) 1978-02-13
DE2633666B2 (de) 1978-09-21
PT66849A (de) 1977-08-01
DD131072A5 (de) 1978-05-31
BE857229A (fr) 1978-01-27
ES460877A1 (es) 1978-04-16
SE7708539L (sv) 1978-01-28
EG12626A (en) 1979-09-30
ZA774517B (en) 1978-06-28
SE432609B (sv) 1984-04-09
JPS5530354B2 (de) 1980-08-09
PL199855A1 (pl) 1978-03-13
NL7708171A (nl) 1978-01-31
FI57443C (fi) 1980-08-11
AU2731977A (en) 1979-02-01
NO772658L (no) 1978-01-30
IL52594A0 (en) 1977-10-31
CH635615A5 (en) 1983-04-15
NO147034C (no) 1983-01-19
DE2633666C3 (de) 1983-02-24
FR2359896A1 (fr) 1978-02-24
ATA544077A (de) 1979-12-15
IT1082226B (it) 1985-05-21
DK146511C (da) 1984-04-02
DK146511B (da) 1983-10-24
FI57443B (fi) 1980-04-30
IL52594A (en) 1980-10-26
PL107949B1 (pl) 1980-03-31
FR2359896B1 (de) 1982-04-30
BG37997A3 (en) 1985-09-16
PT66849B (de) 1979-03-13
HU176802B (en) 1981-05-28
GB1584194A (en) 1981-02-11
FI772272A (de) 1978-01-28
RO71982A (ro) 1982-09-09
GR64056B (en) 1980-01-21
DK337677A (da) 1978-01-28
NO147034B (no) 1982-10-11
CA1101724A (en) 1981-05-26

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