DE2633666B2 - Verminderung des Lipid- und Nucleinsäure-Gehaltes in mikrobiellen Zellmassen - Google Patents

Verminderung des Lipid- und Nucleinsäure-Gehaltes in mikrobiellen Zellmassen

Info

Publication number
DE2633666B2
DE2633666B2 DE2633666A DE2633666A DE2633666B2 DE 2633666 B2 DE2633666 B2 DE 2633666B2 DE 2633666 A DE2633666 A DE 2633666A DE 2633666 A DE2633666 A DE 2633666A DE 2633666 B2 DE2633666 B2 DE 2633666B2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
cell mass
methanol
nucleic acid
water
lipid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE2633666A
Other languages
English (en)
Other versions
DE2633666A1 (de
DE2633666C3 (de
Inventor
Merten Dr. 6233 Kelkheim Schlingmann
Laslo Dr. 6239 Vockenhausen Vertesy
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hoechst AG
Original Assignee
Hoechst AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst AG filed Critical Hoechst AG
Priority to DE2633666A priority Critical patent/DE2633666C3/de
Priority to ES460877A priority patent/ES460877A1/es
Priority to CH913977A priority patent/CH635615A5/de
Priority to NL7708171A priority patent/NL7708171A/xx
Priority to BG036986A priority patent/BG37997A3/xx
Priority to GR54033A priority patent/GR64056B/el
Priority to IL52594A priority patent/IL52594A/xx
Priority to SE7708539A priority patent/SE432609B/xx
Priority to FI772272A priority patent/FI57443C/fi
Priority to RO7791163A priority patent/RO71982A/ro
Priority to EG439/77A priority patent/EG12626A/xx
Priority to DD7700200262A priority patent/DD131072A5/de
Priority to IT26084/77A priority patent/IT1082226B/it
Priority to ZA00774517A priority patent/ZA774517B/xx
Priority to DK337677A priority patent/DK146511C/da
Priority to PT66849A priority patent/PT66849B/de
Priority to AT544077A priority patent/AT357502B/de
Priority to HU77HO2006A priority patent/HU176802B/hu
Priority to CA283,487A priority patent/CA1101724A/en
Priority to AU27319/77A priority patent/AU512670B2/en
Priority to SU772504953A priority patent/SU791257A3/ru
Priority to NO772658A priority patent/NO147034C/no
Priority to PL1977199855A priority patent/PL107949B1/pl
Priority to JP8934977A priority patent/JPS5315489A/ja
Priority to BE179698A priority patent/BE857229A/xx
Priority to CS764982A priority patent/CS207473B2/cs
Priority to GB31537/77A priority patent/GB1584194A/en
Priority to FR7723082A priority patent/FR2359896A1/fr
Publication of DE2633666A1 publication Critical patent/DE2633666A1/de
Publication of DE2633666B2 publication Critical patent/DE2633666B2/de
Priority to US06/010,256 priority patent/US4206243A/en
Application granted granted Critical
Publication of DE2633666C3 publication Critical patent/DE2633666C3/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/08—Reducing the nucleic acid content

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Ri-(CH2),,-OR2
R1- (CH2),,- OR2
worin entweder R, und R2 Wasserstoff bedeuten und η für eins, zwei oder drei steht, oder worin Ri die Hydroxygruppe und R2 Wasserstoff, Methyl oder Äthyl bedeuten und π für zwei oder drei steht, einschließlich iso-Propanol, bei Normaldruck und im Bereich von -200C bis +60° C 5 bis 120 Minuten lang behandelt, wobei der Gesamt-Wassergehalt während des Aufschlusses 0 bis 30 Gewichtsprozent, bezogen auf die eingesetzte Lösungsmittelmenge, beträgt, und nach Abtrennen der Extraktionsmischung den Rückstand der Zellmasse mit Wasser wäscht
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der NH3-Gehalt während des Aufschlusses 1 bis 10 Gew.-%, bezogen auf die eingesetzte Lösungsmittelmenge, beträgt.
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Verminderung der Lipid- und Nucleinsäuremenge, die in Zellen von Mikroorganismen enthalten ist Jede Zelle enthält Kohlehydrate, Proteine, Lipide und Nucleinsäuren. Die Verwendbarkeit von mikrobiellen Zellmassen als Nahrungsmittel und Futtermittel wird durch einen Gehalt an Nucleinsäuren und Lipiden negativ beeinflußt.
Ein Nucleinsäuregehalt ist bedenklich, da er zu pathologischen Zuständen (Gicht, Harnstein) führt.
Aufgabe der Erfindung ist es daher, den Lipid- und Nucleinsäuregehalt in mikrobiellen Zellmassen zu senken. Nach bekannten Verfahren werden die Lipide entweder aus Zellwand und Membran durch organische Lösungsmittel herausgelöst oder durch Behandlung mit wäßrigen Alkalien verseift.
Ein bekanntes Verfahren zum Herauslösen der Lipide aus Mikroorganismen arbeitet mit Gemischen aus Methanol und Chloroform. Das Verfahren ist aufwendig und kann zu toxischen Produkten führen. Lipidextraktionen mit Alkohol-Wasser-Gemischen (nach DT-OS 24 05 94 oder DT-OS 21 37 038) eignen sich schlecht für Bakterien und sind in der technischen Ausführung ebenfalls aufwendig.
Weitere bekannte Verfahren, mikrobielle Zellmassen nucleinsäure- und lipidarm zu machen, verwenden den alkalischen Aufschluß bei erhöhten Temperaturen. Nachteilig ist hierbei die Freisetzung der bei der Hydrolyse entstandenen freien Fettsäuren, die sich zusammen mit dem Protein abscheiden.
Außerdem geht ein Teil der im Protein enthaltenen essentiellen Aminosäuren, z. B. Lysin, in einem vom Organismus nicht verwertbaren Zustand über.
Es wurde nun ein Verfahren zur Verminderung des Lipid- und Nucleinsäuregehaltes in mikrobiellen ZeIlworin entweder Ri und R2 Wasserstoff bedeuten und η für eins, zwei oder drei steht, oder worin Rj die
ίο Hydroxygruppe und Rj Wasserstoff, Methyl oder Äthyl bedeuten und π für zwei oder drei steht, einschließlich iso-Propanol, bei Normaldruck und im Bereich von -20° C bis +600C 5 bis 120 Minuten lang behandelt, wobei der Gesamt-Wassergehalt während des Auf-Schlusses 0 bis 30 Gewichtsprozent, bezogen auf die
eingesetzte Lösungsmittelmenge, beträgt, und nach Abtrennen der Extraktionsmischung den Rückstand der Zellmasse mit Wasser wäscht.
Als mikrobielle Zellmassen werden am besten Mikroorganismen, die durch Züchtung auf Alkohol oder η-Paraffinen in Gegenwart eines wäßrigen Nährmediums und eines freien Sauerstoff enthaltenden Gases erzeugt sind, verwendet.
Beispiele für solche Mikroorganismen sind Methanol verwertende Bakterien der Gattung Methylomonas, z. B. Methylomonas clara ATCC 31 226, Hefen wie Candida lipolytica ATCC 20 383, die durch Züchtung auf η-Paraffinen in Gegenwart eines wäßrigen Nährmediums erhalten werden können.
jo Pilztrockenmycelien können ebenfalls verwendet werden. Dieses Zellmaterial kann aus der Antibiotika-Gewinnung, beispielsweise aus Penicillinfermentationen, entnommen werden, nachdem das Antibiotikum extrahiert wurde.
Als Lösungsmittel der Formel I kommen Alkohole
wie Methanol, Äthanol, n-Propanol und iso-Propanol in Betracht. Am besten sind Methanol und Äthanol, insbesondere Methanol.
Außer den genannten Alkoholen eignen sich Glykole
to und ihre Monoäther der Formel I, namentlich Glykol und Monomethylglykol.
Ammoniak kann den genannten Lösungsmitteln gasförmig (NH3) oder als konzentrierte wäßrige Lösung (NH4OH) zugesetzt werden. Die Wahl erfolgt nach Wassergehalt des Zelltrockenmaterials sowie nach Menge und Wassergehalt des eingesetzten Lösungsmittels. NH4OH eignet sich bei Zellmassen mit geringem Feuchtigkeitsgehalt (0-15%), NH3 dagegen besser bei Zellmassen mit höherem Wassergehalt (10 -30%).
w Die Entfernung der Lipide hängt vom Gesamtwassergehalt, der in Gew.-% auf die verwendete Lösungsmittelmenge bezogen wird, und von der NH3-Konzentration in Gew.-%, bezogen auf das eingesetzte Lösungsmittel, ab.
Besonders gute Versuchsergebnisse lassen sich bei einem Zellenmasse/Lösungsmittel-Gewichtsverhältnis von 1 :3 bis 1 :6 bei Methanol und Äthanol, und 1 :8 bis 1 :12 bei Propanol, Glykol und den Monoglykoläthern erzielen. Die Ammoniakkonzentration, bezogen auf die
bo Lösungsmittelmenge, beträgt 1 -10 Gew.-%, am besten 1 —5%. Die Summe der Wassermengen, die herrühren aus Zellmasse, Lösungsmittel und gegebenenfalls aus wäßrigem Ammoniak, betragen 0 — 30 Gew.-%, besser 0 — 20%, insbesondere 0—10 Gew.-%, bezogen auf die
t>5 eingesetzte Lösungsmittelmenge.
Beim Arbeiten im technischen Maßstab kann auf eine Trocknung der Zellen nach der Fermentation bis auf einen geringen Restwassergehalt von 4% oder niedri-
ger verzichtet werden. Es genügt, die Zellmasse auf ein solches Zelltrockengewicht zu bringen, daß nach Zusatz der benötigten Lösungsmiuelmenge der Gesamtwassergehalt im optimalen Bereich liegt; gegebenenfalls wird man dem Lösungsmittel gasförmiges NH3 zusetzen.
Das Lösen der Fette aus den mikrobiellen Zellmassen wird so durchgeführt, daß das Zellmaterial im Lösungsmittel suspendiert und NH3 eingeleitet oder NH4OH zugegeben wird. Zweckmäßig ist das Durchmisehen der Suspension durch Rühren. Die Behandlungstemperaturen liegen im Bereich von —20° bis ^6O0C, wobei ein Bereich von +5° bis +5O0C und insbesondere von +10° bis +30° C sehr gut ist. Die Behandlungsdauer beträgt 5 bis 120 Minuten und liegt am besten bei 25—35 Minuten. Die Behandlung wird bei Normaldruck durchgeführt
Nach Beendigung der Lösungsmittel/Ammoniak-Behandlung wird das erhaltene Protein nach beliebigen Verfahren wie Zentrifugieren, Filtration und Sedimentation vom Lösungsmittel getrennt
Am besten ist die Filtration. Das erhaltene feste Zellmaterial kann zur möglichst vollständigen Entfernung der Lipide mit einem der genannten organischen Lösungsmittel nochmals behandelt werden. Der Rückstand kann zur Entfernung von Lösungsmittelresten und Ammoniak getrocknet werden. Zweckmäßig wird dies unter vermindertem Druck, vorzugsweise 80—150 Torr, und erhöhter Temperatur, am besten 40°-50° C, durchgeführt. Das so entfettete und getrocknete Produkt ist geruchlos.
Die nach dem vorstehend genannten Verfahren vom festen Zellmaterial abgetrennte flüssige Phase enthält Ammoniak und gelöste Lipide. Das eingesetzte Lösungsmittel kann durch Vakuumdestillation von den Fetten abgetrennt und wieder eingesetzt werden.
Anschließend werden die entfetteten und gegebenenfalls getrockneten Zellmassen in Wasser aufgenommen. Günstig sind Wassermengen, die zur Zellmasse im Gew.-Verhältnis 1:1 bis 1 :30, insbesondere 1:5 bis 1:15, stehen. Die Wassermenge wird mindestens so bemessen, daß ein Rühren der Suspension möglich ist.
Der pH-Wert während der Wasserbehandlung soll im Bereich von 5 — 8,5, am besten 6 — 7,5, liegen und wird gegebenenfalls auf diesen Bereich eingestellt. Dies ist insbesondere dann notwendig, wenn nicht oder nicht vollständig getrocknete Zellmassen aus der ersten Stufe verwendet werden, die dann auch noch Restmengen an Ammoniak enthalten, was zu einem zu hohen pH-Wert führen kann.
Zur besseren Flockulierung der Zellmasse wird dem Wasser der zweiten Stufe bis zu 20 Gew.-%, am besten 5 — 15 Gew.-%, eines niederen Alkohols wie Äthanol, Methanol, am besten Methanol, zugesetzt.
Diese Extraktion der Nucleinsäuren, Salze, Polysaccharide und wasserlöslichen Sekundärmetabolite mit Wasser wird im allgemeinen in einem Temperaturbereich von 30°-95° C bei Normaldruck durchgeführt. Gut sind Temperaturen von 40° —70° C, besonders gut 50° -60° C. Die Extraktionsdauer kann je nach Extraktionstemperatur und Wassermenge 5 — 120 Minuten betragen, gute Ergebnisse erzielt man mit 25-45 minütiger Extraktionszeit. Zur Trennung fester und flüssiger Bestandteile wird die Suspension, am besten bei Temperaturen von 10° - 30° C, zentrifugiert. Andere geeignete Trennverfahren sind Sedimentation und Filtration.
Die feste Phase wird nach gängigen Verfahren wie Gefrier-, Vakuum- oder Sprühtrocknung von Flüssigkeitsresten befreit. Das Produkt besitzt angenehme Geruchseigenschaften, eine hellere Farbe als das Ausgangsmaterial und ein besonders gutes Wasserbin-■> devermögen. Durch die Entfernung der Lipide und Nucleinsäuren eignet es sich besonders zur Herstellung von Nahrungs- und Futtermitteln.
So sind bei dem Produkt gemäß der Erfindung die Lipide bis auf einen Restgehalt von 0,5 bis 3,5 Gew.-%,
κι die Nucleinsäuren bis auf einen Restgehalt von 0,5—4,5 Gew.-%, entfernt.
Das Verfahren gemäß der Erfindung vermeidet die Nachteile der bekannten Verfahren wie Lösungsmittelbehandlung oder alkalischer Aufschluß. Chlorierte Kohlenwasserstoffe werden nicht benötigt. Die Entfettung mit Ammoniak/Alkohol-Gemischen ist, insbesondere bei Bakterien, wesentlich vollständiger als bei Behandlung der Zellmasse mit Alkohol/Wasser-Gemischen. Temperatur- und pH-Bereiche, die den Funktionswert des Produktes herabsetzen, werden vermieden. Der Energieaufwand ist geringer als bei den alkalischen Aufschlußverfahren. Die Proteinanreicherung gelingt ohne das Anfallen großer Mengen von Neutralisationssalzen.
Die vom festen Zellmaterial abgetrennte wäßrige Phase enthält neben anderen wasserlöslichen Bestandteilen die Nucleinsäuren, die nach bekannten Verfahren, z. B. durch Ausfällen in sauren Medien, Ultrafiltration, Dialyse oder Enzymangriff, gewonnen werden können.
μ Die Erfindung wird durch folgende Beispiele erläutert.
Beispiel 1
Methylomonas clara ATCC 31 226 wurde in einer
Jr> Nährlösung, enthaltend Methanol als einzige Kohlenstoffquelle, Ammoniak als einzige Stickstoffquelle, Phosphat, Eisen-, Magnesium-Salze und andere übliche Spurenelemente unter aeroben Bedingungen gezüchtet. Die dabei erzeugte Bakterienzellmasse wurde von der Lösung abgetrennt und der Sprühtrocknung unterworfen.
100 g dieser Zellmasse wurden mit 300 g Methanol versetzt Unter Rühren der Suspension wurden 10 g NH3-GaS eingeleitet und gelöst. Durch Kühlen wurde
4r> die Temperatur während des Einleitens auf 25° -35° C gehalten. Das Gemisch aus Methanol, Ammoniak und Zellmasse wurde 30 Minuten bei 20°C gerührt.
Zur Trennung der festen und flüssigen Phase wurde filtriert und der feste Rückstand einmal mit 300 ml
r'(> Methanol gewaschen. Nach erneuter Filtration wurden beide Filtrate vereinigt. Diese braune Lösung enthielt die Lipide der eingesetzten Ausgangssubstanz. Methanol und Ammoniak wurden durch Vakuumdestillation (100 Torr, 40°C) entfernt. Der Rückstand, der 9,5
Ti Gew.-% des eingesetzten Zellenmaterials betrug, war eine dunkelbraune, übelriechende Paste, die aus freien Fettsäuren, Glyceriden, Phospholipiden und Sekundärmetaboliten bestand.
Der bei der Filtration erhaltene feste Rückstand der
ω) extrahierten Zellmasse wurde im Vakuum (100 Torr) bei 400C 5 Stunden getrocknet. Es konnten so 90 g entfettete Zellmasse erhalten werden, die geruchlos war und eine hellere Farbe als das Ausgangsmaterial besaß.
Zur Verminderung des Nucleinsäuregehaltes wurde
h5 diese Zellmasse in 900 ml Wasser suspendiert Der pH-Wert der durch Rühren homogenisierten Suspension betrug 6,9.
Nach Erhöhung der Temperatur auf 55° C wurde noch
20 Minuten weitergerührt, auf 30°C abgekühlt und durch Zentrifugieren in feste und flüssige Phase getrennt. Das erhaltene Sediment wurde erneut mit 900 ml Wasser vermischt und 10 Minuten bei 20° C gerührt. Danach wurde erneut zentrifugiert und das Sediment unter vermindertem Druck getrocknet.
Die Ausbeute betrug 65 g. Der Nucleinsäuregehalt war von ursprünglich 11,2% auf 1,5% gesunken. Das Produkt war in trockenem Zustand geruchlos, mit Wasser befeuchtet besaß es einen sympathischen ι ο Geruch.
Das Ergebnis dieses und der weiteren Beispiele sind in den nachfolgenden Tabellen Ia und Ib zusammengefaßt.
Beispiel 2 '5
Als Ausgangsmaterial diente die gleiche Bakterienzellmasse wie in Beispiel 1 verwendet. Sie wurde den gleichen Verfahrensschritten und Bedingungen unterworfen, doch wurden statt gasförmigem NH3 30 ml konzentriertes NH4OH (33%ig) als Reagenz verwendet.
Beispiel 3
Es wurde wie in Beispiel 2 verfahren, jedoch wurden 60 ml konz. NH4OH (33%ig) eingesetzt.
Beispiel 4
Bei einer Verfahrensweise wie in Beispiel 2 wurde statt Methanol Äthanol als Lösungsmittel verwendet.
Beispiel 5
Bei sonst gleicher Verfahrensweise wie in Beispiel 3 wurde statt Methanol Glykolmonomethyläther als Lösungsmittel verwendet.
Hefezellmasse wurde von der Nährlösung abgetrennt und getrocknet.
100 g der trockenen Hefezellmasse wurden bei Raumtemperatur unter Normaldruck in 300 g Methanol suspendiert und dieser Mischung im Verlauf von 15 Minuten 10 g NH3-Gas zugeführt. Dabei wurde die Temperatur der Suspension durch Kühlung auf 15° C gehalten. Nach Einleiten des Gases wurde noch 20 Minuten bei 22° C weitergerüiirt und anschließend über eine Saugfritte filtriert Der Filterkuchen wurde einmal mit 300 ml Methanol auf der Fritte durchmischt und anschließend abgesaugt. Die beiden Filtrate wurden vereinigt. Die Lösung war gelb und enthielt die Lipide des eingesetzten Zellmaterials. Methanol und NH3 wurden bei vermindertem Druck (14 Torr) entfernt.
Der nach der zweiten Filtration verbliebene Rückstand, der aus den zerstörten und entfetteten Zellen des Mikroorganismus bestand, wurde im Vakuumtrockenschrank bei 40° C (100 Torr) 5 Stunden getrocknet. Das so erhaltene Produkt hatte eine hellere Farbe als die anfangs verwendete Hefezelimasse und war geruchlos.
Zur Verminderung des Nucleinsäuregehaltes von ursprünglich 7,5 Gew.-%, bezogen auf das Ausgangsmaterial, wurden 100 g der entfetteten und getrockneten Hefe in einer Lösung aus 1 Liter destilliertem Wasser und 1000 ml Methanol suspendiert. Unter Rühren wurde die Mischung bei dem sich einstellenden pH-Wert von 6,8 für 15 Minuten auf 50° C gebracht und durch Zentrifugieren in ein Sediment, das das Hefeprotein enthielt, und in eine flüssige Phase, die löslich gemachte Nucleinsäure enthielt, getrennt Das Sediment wurde nach einer nochmaligen Wäsche bei Raumtemperatur der Gefriertrocknung unterworfen.
Der Nucleinsäuregehalt des getrockneten Materials war von ursprünglich 7,5 Gew.-% auf 0,4 Gew.-% gesunken.
Beispiel 6
Es wurde verfahren wie in Beispiel 2. Statt Methanol wurde i-Propanol als Lösungsmittel eingesetzt.
Beispiel 7
Als Ausgangsmaterial wurde eine Zellmasse aus Methylomonas clara wie in Beispiel 1 beschrieben verwendet. 100 g des sprühgetrockneten Produkts wurden wie in Beispiel 1 beschrieben aufgeschlossen und entfettet (15 g NH3). Jedoch wurde auf die vollständige Trocknung des Rückstandes verzichtet. Der gründlich abgesaugte Filterkuchen mit einem Feststoffgehalt von 85% wurde in 900 ml Wasser suspendiert. Der pH-Wert stellte sich auf 8,9 ein, bedingt durch den in der feuchten Biomasse verbliebenen Ammoniak.
Die Temperaturen der Suspension wurde unter Rühren auf 650C erhöht und nach 5 Minuten der pH-Wert durch Zugabe von HCl auf 7,2 eingestellt. Danach wurde noch 15 Minuten bei 65° C weitergerührt, dann auf 40° C abgekühlt und zentrifugiert Das erhaltene Sediment wurde getrocknet.
Beispiel 8
Candida lipolytica ATCC 20 383 wurde auf n-Paraffinen in Gegenwart eines wäßrigen Nährmediums und eines Sauerstoff enthaltenden Gases kultiviert. Die
40
Beispiel 9
Bei einem Verfahren wie in Beispiel 8 wurde statt Methanol Äthanol und statt 10 g NH3-gasförmig 60 ml NH4OH (33%ig) eingesetzt.
45 Beispiel 10
Penicillium chrysogenum ATCC 10 238 wurde in einer Nährlösung, enthaltend Lactose, Maisquellwasser, Phosphat, Carbonat und Magnesiumsulfat nach üblichen Methoden aerob gezüchtet. Nach Abtrennung des produzierten Penicillins verblieb das Mycel, das getrocknet als Ausgangsmaterial diente.
Das Verfahren wurde wie in Beispiel 8 beschrieben durchgeführt Statt NH3 wurde NH4OH 33%ig eingesetzt. Das entfettete Trockenmycel wurde bei 30° C mit Wasser gewaschen.
Beispiel 11
Als Ausgangsmaterial diente die gleiche Zellmasse
wie in Beispiel 10 beschrieben. Statt Methanol wurde Äthanol verwendet. Die Temperatur während der Wasserextraktion wurde auf 85° C erhöht und 15 Minuten dabei gehalten.
In der folgenden Tabelle III sind die Ergebnisse der Beispiele 1-11 aufgeführt.
Tabelle la lOOg eingesetzte Zcllmassc I eil Nucleinsäurc Lösungsmittel NHi (g) bzw.
linlfernung der Lipide Art (Gew.-%) ((jcw.-Vo) 300 g NH4OlI
Bd- 7 11,2 (33%ig, ml)
spiel Mcthylomonas 7 11,2 Methanol NH., IO
Methylomonas 7 11,2 Methanol NH4OH 30
1 Methylomonas 7 11,2 Methanol NH4OH 60
2 Mcthylomonas 7 11,2 Äthanol NH4OH 30
3 Methylomonas Glykolmono- NH4OH 60
4 7 11,2 methyläthcr
5 Mcthylomonas 9,6 15,4 i-Propanol NH4OH 30
Mcthylomonas 8,2 7,5 Methanol NH3 15
6 Candida lipolytica 8,2 7,5 Methanol NH3 10
7 Candida lipolytica 3,5 2,6 Äthanol NH4OH 60
S Trockcnmyce! 3,5 2,6 Methanol NH4OH 30
9 Trockcnmyccl Äthanol NH4OH 30
10
11
Tabelle Ib
Hntlcrnung der Nucleinsäuren
Beispiel Waschwasscr PlI Temp. Erhaltene Zellmasse Nuclcinsäure
Menge (0C) Menge Fette (üew.-%)
(I) 6,9 55 (P) (Gcw.-%) 1,5
1 0,9 6,9 60 68 0,8 1,2
2 0,9 7,0 65 67 1,3 U
3 0,9 6,9 50 63 2,0 1,5
4 0,9 7,1 55 67 2,2 2,3
5 0,9 7,0 60 63 2,8 4,0
6 0,9 7,2 65 64 3,4 1,4
7 0,9 6,8 50 62 1,2 0,4
8 0,8 6,5 45 68 1,4 0,7
9 0,8 6,5 30 67 1,8 0,5
K) 0,9 6,5 85 78 U 0,8
11 0.9 79 1,3

Claims (1)

Patentansprüche:
1. Verfahren zur Verminderung des Lipid- und Nucleinsäuregehaltes In mikrobiellen Zellmassen, dadurch gekennzeichnet, daß man die Zellmassen mit einer Extraktionsmischung aus Ammoniak oder Ammoniumhydroxyd und einem organischen Lösungsmittel der allgemeinen Formell
massen gefunden, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man die Zellmassen mit einer Extraktionsmischung aus Ammoniak oder Ammoniumhydroxyd und einem organischen Lösungsmittel der allgemeinen Formel 1
DE2633666A 1976-07-27 1976-07-27 Verminderung des Lipid- und Nucleinsäure-Gehaltes in mikrobiellen Zellmassen Expired DE2633666C3 (de)

Priority Applications (29)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2633666A DE2633666C3 (de) 1976-07-27 1976-07-27 Verminderung des Lipid- und Nucleinsäure-Gehaltes in mikrobiellen Zellmassen
ES460877A ES460877A1 (es) 1976-07-27 1977-07-20 Procedimiento para disminuir el contenido de lipidos y aci- dos nucleicos en masas celulares microbianas.
NL7708171A NL7708171A (nl) 1976-07-27 1977-07-22 Werkwijze voor het verminderen van het lipide- en nucleinezuurgehalte van microbencelmateriaal.
BG036986A BG37997A3 (en) 1976-07-27 1977-07-22 Method for reduction of hat and nucleinic acids content in microbe cellular masses
CH913977A CH635615A5 (en) 1976-07-27 1977-07-22 Process for decreasing the lipid and nucleic acid content in microbial cell masses
IL52594A IL52594A (en) 1976-07-27 1977-07-25 Process for reducing the contents of lipids and nucleic acids in microbial cell masses
SE7708539A SE432609B (sv) 1976-07-27 1977-07-25 Forfarande for att minska lipid- och nukleinsyrahalten i mikrobiella cellmassor
FI772272A FI57443C (fi) 1976-07-27 1977-07-25 Foerfarande foer nedsaettande av lipid- och nukleinsyrahalten i mikrobiella cellmassor
RO7791163A RO71982A (ro) 1976-07-27 1977-07-25 Procedeu de micsorare a continutului de substante lipidice si de acizi nucleici al unor mase celulare microbiene
EG439/77A EG12626A (en) 1976-07-27 1977-07-25 Process for reducing the contents of lipids and nucleric acid in microbial cell masses
DD7700200262A DD131072A5 (de) 1976-07-27 1977-07-25 Verfahren zur verminderung des lipid-und nucleinsaeure-gehaltes in mikrobiellen zellmassen
IT26084/77A IT1082226B (it) 1976-07-27 1977-07-25 Processo per diminuire il contenuto di lipidi ed acidi nucleici in masse cellulari microbiche
GR54033A GR64056B (en) 1976-07-27 1977-07-25 Method for the reduction of the capauty of lipidic and nucleinic acids to microbian cell masses
PT66849A PT66849B (de) 1976-07-27 1977-07-26 Verfahren zur verminderung des lipidund nucleinsaure-gehaltes in mikrobiellen zellmassen
ZA00774517A ZA774517B (en) 1976-07-27 1977-07-26 Process for reducing the contents of lipids and nucleic acid in microbial cell masses
AT544077A AT357502B (de) 1976-07-27 1977-07-26 Verfahren zur verminderung des lipid- und nucleinsaeure-gehaltes in mikrobiellen zell- massen
HU77HO2006A HU176802B (en) 1976-07-27 1977-07-26 Process for decreasing the lipide and nucleic acid content of cell masses of microorganisms
CA283,487A CA1101724A (en) 1976-07-27 1977-07-26 Process for reducing the contents of lipids and nucleic acid in microbial cell masses
AU27319/77A AU512670B2 (en) 1976-07-27 1977-07-26 Reducing the content of lipids and nucleic acid in microbial cell mass
SU772504953A SU791257A3 (ru) 1976-07-27 1977-07-26 Способ получени пищевого белкового продукта из биомассы микроорганизмов
NO772658A NO147034C (no) 1976-07-27 1977-07-26 Fremgangsmaate til nedsettelse av lipid- og nukleinsyreinnhold i mikrobielle cellemasser
PL1977199855A PL107949B1 (pl) 1976-07-27 1977-07-26 Sposob oczyszczania mikrobiologicznych mas komorkomethod of purifying microbiological cell masses from lipides and nucleic acid wych od lipidow i kwasu nukleinowego
DK337677A DK146511C (da) 1976-07-27 1977-07-26 Fremgangsmaade til formindskelse af lipid- og nucleinsyreindholdet i mikrobiel cellemasse
JP8934977A JPS5315489A (en) 1976-07-27 1977-07-27 Reduction of lipid and nucleic acid contents contained in microorganism mycelium lump
BE179698A BE857229A (fr) 1976-07-27 1977-07-27 Procedes de reduction des taux d'acides lipidiques et nucleiques de masses cellulaires
CS764982A CS207473B2 (en) 1976-07-27 1977-07-27 Method of decreasing the contents of lipids and nucleus acids in the microbial cell substance
GB31537/77A GB1584194A (en) 1976-07-27 1977-07-27 Process for reducing the content of lipids in cell masses
FR7723082A FR2359896A1 (fr) 1976-07-27 1977-07-27 Procedes de reduction des taux d'acides lipidiques et nucleiques de masses cellulaires
US06/010,256 US4206243A (en) 1976-07-27 1979-02-07 Process for reducing the contents of lipids and nucleic acid in microbial cell masses

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2633666A DE2633666C3 (de) 1976-07-27 1976-07-27 Verminderung des Lipid- und Nucleinsäure-Gehaltes in mikrobiellen Zellmassen

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DE2633666A1 DE2633666A1 (de) 1978-02-02
DE2633666B2 true DE2633666B2 (de) 1978-09-21
DE2633666C3 DE2633666C3 (de) 1983-02-24

Family

ID=5984032

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2633666A Expired DE2633666C3 (de) 1976-07-27 1976-07-27 Verminderung des Lipid- und Nucleinsäure-Gehaltes in mikrobiellen Zellmassen

Country Status (28)

Country Link
JP (1) JPS5315489A (de)
AT (1) AT357502B (de)
AU (1) AU512670B2 (de)
BE (1) BE857229A (de)
BG (1) BG37997A3 (de)
CA (1) CA1101724A (de)
CH (1) CH635615A5 (de)
CS (1) CS207473B2 (de)
DD (1) DD131072A5 (de)
DE (1) DE2633666C3 (de)
DK (1) DK146511C (de)
EG (1) EG12626A (de)
ES (1) ES460877A1 (de)
FI (1) FI57443C (de)
FR (1) FR2359896A1 (de)
GB (1) GB1584194A (de)
GR (1) GR64056B (de)
HU (1) HU176802B (de)
IL (1) IL52594A (de)
IT (1) IT1082226B (de)
NL (1) NL7708171A (de)
NO (1) NO147034C (de)
PL (1) PL107949B1 (de)
PT (1) PT66849B (de)
RO (1) RO71982A (de)
SE (1) SE432609B (de)
SU (1) SU791257A3 (de)
ZA (1) ZA774517B (de)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2748885A1 (de) * 1977-11-02 1979-05-03 Hoechst Ag Verfahren zur verbesserung der eigenschaften von schroten oder mehlen aus oelsaaten
DE2907065A1 (de) 1979-02-23 1980-09-04 Hoechst Ag Verfahren zum fetten von leder und pelzfellen
CA1120314A (en) * 1979-08-22 1982-03-23 John A. Ridgway Treatment of proteinaceous materials with anhydrous ammonia gas
DE3143947A1 (de) * 1981-11-05 1983-05-11 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt "funktionelle eiweisshydrolysate, verfahren zu ihrer herstellung und diese eiweisshydrolysate enthaltende nahrungsmittel"
DE3228500A1 (de) * 1982-07-30 1984-02-02 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Verfahren zur reinigung von aldehyde, acetale und/oder ungesaettigte verbindungen enthaltenden carbonsaeureestern
EP0805201B1 (de) * 1995-05-29 2000-01-12 Otkrytoe Akcionernoe Obschestvo"Nauchno-Issledovatelsky Institut Vychislitelnykh Komplexov im. M.A. Karceva", Verfahren zum erhalt von biomasse aus mikroorganismen mit geringem nukleinsäuregehalt
RU2522888C2 (ru) * 2012-10-04 2014-07-20 Валентина Еремеевна Куцакова Способ получения белковой кормовой добавки

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3615654A (en) * 1968-05-17 1971-10-26 Cpc International Inc Method of treating microbial cells
IT954172B (it) * 1970-07-24 1973-08-30 Standard Oil Co Procedimento per estrarre materiale proteico da organismi microbici unicellulari e prodotto ottenuto
SU419551A1 (ru) * 1972-01-18 1974-03-15 В. Ф. Фоменков Институт биологической физики СССР Тепловой расходомер
GB1400691A (en) * 1973-02-08 1975-07-23 British Petroleum Co Process for the production of proteinaceous material
GB1408845A (en) * 1973-02-13 1975-10-08 Ranks Hovis Mcdougall Ltd Production of edible protein containing substances
JPS5411379B2 (de) * 1973-02-21 1979-05-15

Also Published As

Publication number Publication date
SU791257A3 (ru) 1980-12-23
CS207473B2 (en) 1981-07-31
AT357502B (de) 1980-07-10
AU512670B2 (en) 1980-10-23
DE2633666A1 (de) 1978-02-02
JPS5315489A (en) 1978-02-13
PT66849A (de) 1977-08-01
DD131072A5 (de) 1978-05-31
BE857229A (fr) 1978-01-27
ES460877A1 (es) 1978-04-16
SE7708539L (sv) 1978-01-28
EG12626A (en) 1979-09-30
ZA774517B (en) 1978-06-28
SE432609B (sv) 1984-04-09
JPS5530354B2 (de) 1980-08-09
PL199855A1 (pl) 1978-03-13
NL7708171A (nl) 1978-01-31
FI57443C (fi) 1980-08-11
AU2731977A (en) 1979-02-01
NO772658L (no) 1978-01-30
IL52594A0 (en) 1977-10-31
CH635615A5 (en) 1983-04-15
NO147034C (no) 1983-01-19
DE2633666C3 (de) 1983-02-24
FR2359896A1 (fr) 1978-02-24
ATA544077A (de) 1979-12-15
IT1082226B (it) 1985-05-21
DK146511C (da) 1984-04-02
DK146511B (da) 1983-10-24
FI57443B (fi) 1980-04-30
IL52594A (en) 1980-10-26
PL107949B1 (pl) 1980-03-31
FR2359896B1 (de) 1982-04-30
BG37997A3 (en) 1985-09-16
PT66849B (de) 1979-03-13
HU176802B (en) 1981-05-28
GB1584194A (en) 1981-02-11
FI772272A (de) 1978-01-28
RO71982A (ro) 1982-09-09
GR64056B (en) 1980-01-21
DK337677A (da) 1978-01-28
NO147034B (no) 1982-10-11
CA1101724A (en) 1981-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2943684A1 (de) Verfahren zur enzymwiederverwertung
DE3049773C2 (de) Verfahren zur Herstellung von Pektin aus Pflanzengeweben
DE2633666B2 (de) Verminderung des Lipid- und Nucleinsäure-Gehaltes in mikrobiellen Zellmassen
US4206243A (en) Process for reducing the contents of lipids and nucleic acid in microbial cell masses
DE2402217C3 (de) Verfahren zur Herstellung von Proteinmaterial
DE60105016T3 (de) Verfahren zur reinigung eines salzes der clavulansäure
DE69112236T2 (de) Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von Ironen.
DE2456139C3 (de) Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums 20.798 R.P
DE2445581B2 (de) Verfahren zur herstellung von d-gluconsaeure-delta-lactam
DE2034593C3 (de) Verfahren zur Herstellung von Zitronensäure
DE2600589C2 (de) Verfahren zur Herstellung von L(+)-Weinsäure durch mikrobiologische Hydrolyse von Calcium-cis-epoxysuccinat
DE2303495A1 (de) Verfahren zur herstellung von ergosterin und seinen estern
DE2748885A1 (de) Verfahren zur verbesserung der eigenschaften von schroten oder mehlen aus oelsaaten
DE2524574C3 (de) 5-(p-Hydroxybenzyl)-picolinsäure, Verfahren zu ihrer Herstellung und Isolierung sowie ihre Verwendung
DE1418394C3 (de) Verfahren zur Herstellung von Fluorverbindungen der Pregnanreihe
EP0017956B1 (de) Verfahren zur Entfernung von lipoiden und wasserlöslichen Verbindungen aus Rohproteinen tierischen Ursprungs
DE1240522B (de) Verfahren zur Herstellung von 11alpha-Hydroxyprogesteron
DE730908C (de) Verfahren zur Darstellung von ungesaettigten Ketonen der Cyclopentanopolyhydrophenanthrenreihe auf biochemischem Wege
DE959188C (de) Verfahren zur Herstellung von 17-Ketotestanen und 17-Ketoandrostanen
AT200259B (de) Verfahren zur Herstellung eines neuen Antibiotikums
KR810001964B1 (ko) 미생물 세포괴의 지질 및 핵산 감소방법
AT231610B (de) Verfahren zur Herstellung von 6-Aminopenicillansäure
AT200258B (de) Verfahren zur Herstellung neuer Antibiotika
DE1642234A1 (de) Verfahren zur Herstellung eines Antibiotikums
DE1028744B (de) Gleichzeitige Gewinnung von Tetracyclin und P. A. 121

Legal Events

Date Code Title Description
OAP Request for examination filed
OD Request for examination
AG Has addition no.

Ref country code: DE

Ref document number: 2748885

Format of ref document f/p: P

C3 Grant after two publication steps (3rd publication)
8339 Ceased/non-payment of the annual fee