FI57443B - Foerfarande foer nedsaettande av lipid- och nukleinsyrahalten i mikrobiella cellmassor - Google Patents
Foerfarande foer nedsaettande av lipid- och nukleinsyrahalten i mikrobiella cellmassor Download PDFInfo
- Publication number
- FI57443B FI57443B FI772272A FI772272A FI57443B FI 57443 B FI57443 B FI 57443B FI 772272 A FI772272 A FI 772272A FI 772272 A FI772272 A FI 772272A FI 57443 B FI57443 B FI 57443B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cell mass
- solvent
- water
- methanol
- ammonia
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/08—Reducing the nucleic acid content
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
M (11)KUULUTUSJULKAISU 5 744T Ma lJ '} UTLÄCGN INGSSKRIFT 0 1 * H ° C <4S> ^ (51) Kv.ik.3/Incci.3 c 12 N 1/08, A 23 J 3/00 SUOM I —FI N LAN D (21) PtMftttlhelwmu# — PttwttanaMcnlng 772272 (22) Hak«ml*ptlvi — An*ttkning*d«f 25 · 07· 77 (23) Alkupllvi—Glltlfh*t*U| 25.07.77 (41) Tulkit |utktMksl — Bllrlt offMtllg 28.01.78
Pstolttti. J. raki.terih.IHtU, Nlhtivlkslptnon J. kuullulla pvm._
Patent· och regirteiftyrelten Arrtksn utl«gd och utl.«krift«n public·»* 30.0l+. 80 (32)(33)(31) Pyydetty «tuolktu*—Begird priori** 27.07.76 Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken
Tyskland(DE) P 2633666.3 (71) Hoechst Aktiengesellschaft, Postfach 80 03 20, 6230 Frankfurt(Main) 80, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Merten Schlingmann, Kelkheim, Laslo Vertesy, Eppstein/Taunus, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (7^) Oy Kolster Ab (5^) Menetelmä mikro-organismien solumassan lipidi- ja nukleiinihappopitoisuuden alentamiseksi - Förfarande för nedsättande av lipid- och nukleinsyrahalten i mikrobiella cellmassor
Keksinnön kohteena on menetelmä mikro-organismien solumassan lipidi- ja nukleiinihappopitoisuuden alentamiseksi uuttamalla solumassaa liuottimilla ja ammoniakilla, erottamalla uute sekä pesemällä ja kuivaamalla solumassa. Jokainen solu sisältää hiilihydraatteja, proteiineja, lipidejä ja nukleiinihappoja. Nukleiinihappojen ja lipidien pitoisuus vaikuttaa vahingollisesti mikro-organismeista saadun solumassan käyttökelpoisuuteen ravintoaineena ja rehuna.
Nukleiinihappopitoisuus on haitallinen, koska se aiheuttaa sairauksia (kihti, virtsakivet). Lipidit rajoittavat varastoitavuutta eltaantumalla ja vaikuttavat haitallisesti makuun.
Tämän keksinnön tehtävänä on sentähden alentaa lipidi- ja nukleiinihappo-pitoisuutta mikrobisolumassassa. Tunnetuilla menetelmillä lipidit liuotetaan solun seinämästä ja solumembraanista orgaanisilla liuottimilla tai saippuoidaan vesipitoisilla alkaleilla.
57443
Eräässä tunnetussa menetelmässä lipidin erottamiseksi mikro-organismeista työskennellään metanolin ja kloroformin seoksilla. Menetelmä on kustannuksia vaativa ja voi johtaa myrkyllisiin tuotteisiin. Lipidiuutto alkoholi/vesi-seoksilla (DE-hakemusjulkaisut 2 h05 593 tai 2 137 038) sopii huonosti bakteereille ja on teknisesti kallis.
FI-kuulutusjulkaisusta 52 99^ tunnetaan menetelmä tiettyjen mikro-organismien uuttamiseksi alemmalla alkoholilla, joka voi sisältää aina 60 $:iin asti vettä. Lipidien ja nukleiinihappojen pitoisuus solumassassa ei kuitenkaan tällä menetelmällä alene riittävästi. FI-kuulutusjulkaisun 53 590 mukaan solumassaa käsitellään vesipitoisella alkalilla, jolloin proteiinit ja nukleiinihapot liukenevat. Menetelmän haittana on, että alkalikäsittely muuttaa proteiinien alkuperäistä rakennetta, jolloin niiden arvo ravintoaineena vähenee, US-patenttijulkaisussa 3 775 393 on kuvattu menetelmä nukleiinihappopitoisuuden alentamiseksi mikrobisoluissa käsittelemällä niitä korkeassa lämpötilassa ja korotetussa paineessa vesipitoisella ammoniakilla. Haittana tällä menetelmällä on soluproteiinien muuttuminen, jolloin syntyy mm, myrkyllisiä sivutuotteita.
Muissa tunnetuissa menetelmissä mikrobisolumassan nukleiinihappo- ja lipidi-pitoisuuden alentamiseksi käytetään alkalista liuotusta korotetuissa lämpötiloissa. Haittana on tällöin hydrolyysissä syntyneiden vapaiden rasvahappojen erottuminen yhdessä proteiinin kanssa.
Lisäksi osa proteiinien sisältämistä olennaisista aminohapoista, esim. lysiini, muuttuu elimistölle sopimattomaksi.
Nyt on keksitty menetelmä lipidi- ja nukleiinihappopitoisuuden pienentämiseksi mikrobisolumassassa. Keksinnön mukainen menetelmä on tunnettu siitä, että ensimmäisessä vaiheessa solumassa uutetaan uuttoseoksella, joka sisältää ammoniakkia tai ammoniumhydroksidia ja orgaanista liuotinta, jonka kaava on V(CVn-0E2 1 jossa R^ ja R^ tarkoittavat vetyatomia ja n on 1, 2 tai 3, mukaanluettuna iso-propanoli, tai jossa R^ on hydroksiryhmä ja R^ on vetyatomi tai metyyli- tai etyyliryhmä ja n on 2 tai 3, normaalipaineessa ja lämpötilassa välillä -20 C ja +60°C enintään 120 minuutin ajan, jolloin kokonaisvesipitoisuus uuton aikana on 0-30 paino-$ laskettuna käytetyn liuottimen määrästä ja jolloin liuottimen ollessa metanoli tai etanoli on solumassan, liuottimen ja ammoniakin välinen painosuhde 1:3:0,03-1:6:0,6, edullisesti 1:3:0,03-1:6:0,3, ja liuottimen ollessa propanoli, glykoli tai monoglykolieetteri 1:8:0,08-1:12:1,2, edullisesti 1:8:0,08-1:12:06, ja että toisessa vaiheessa solumassan jäännöstä uuttoseoksen 3 57443 erottamisen jälkeen pestään vedellä pH-arvossa 5-8,5, lämpötilassa 30-95°C ja normaalipaineessa 5-120 minuutin ajan, jolloin vesimäärän painosuhde solumassaan on 1:1-1:30, minkä jälkeen vesifaasi erotetaan, solumassa mahdollisesti uutetaan kaavan I mukaisella orgaanisella liuottimena, ja solumassa kuivataan.
Mikrobisolumassa saadaan edullisesti mikro-organismeista, joita tuotetaan esim. viljelemällä niitä alkoholissa tai n-parafiineissa vesipitoisen ravinto-väliaineen ja vapaata happea sisältävän kaasun läsnäollessa. Edullisia mikro-organismeja ovat bakteerit, hiivat ja sienet.
Esimerkkejä tällaisista mikro-organismeista ovat metanolia hyväkseen käyttävät Methylomonas-suvun bakteerit, esim, Methylomonas Clara ATCC 31226, tai hiivat kuten Candida lipolytica ATCC 20.383, joita saadaan viljelemällä n-para-fiineilla vesipitoisen ravintoaineen läsnäollessa,
Myös kuivattuja sienihuovastoja voidaan käyttää, Tätä solumateriaalia saadaan antibioottien, kuten penisilliinin valmistuksesta antibiootin uuttamisen jälkeen,
Kaavan I mukaisia edullisia liuottimia ovat metanoli ja etanoli, erityisesti metanoli. Mainittujen alkoholien lisäksi sopivat myös glykolit ja niiden mono-eetterit, joilla on kaava I, nimittäin glykoli ja monometyyliglykoli.
Ammoniakkia voidaan lisätä mainittuihin liuottimiin kaasumaisena (NH^) tai väkevöitynä vesiliuoksena (NH^OH). Valinta tapahtuu kuivan solumassan vesipitoisuuden mukaan sekä käytetyn liuottimen vesipitoisuuden mukaan. NH^OH sopii solu-massalle, jolla on vähäinen kosteuspitoisuus (0—15 #), NH^ sen sijaan paremmin solumassalle, jolla on suurempi vesipitoisuus (10-30 #).
Uuttamalla ammoniakilla ja liuottimena poistuva lipidimäärä riippuu koko-naisvesipitoisuudesta ja NH^-väkevyydestä, jotka lasketaan painoprosentteina käytetystä liuotinmäärästä.
Ammoniakkipitoisuus laskettuna liuotinmäärästä on 1-10 paino-# edullisesti 1-5 #. Solumassasta, liuottimesta ja mahdollisesti vesipitoisesta ammoniakista peräisin oleva vesimäärä on 0-30 paino-#, edullisesti 0-20 # ja erityisesti 0-10 paino-#, laskettuna käytetystä liuotinmäärästä.
Työskenneltäessä teknisessä mittakaavassa voidaan luopua käymisen jälkeisestä solujen kuivaamisesta alhaiseen 4 #:n tai pienempään vesipitoisuuteen. Riittää, että solumassa saatetaan sellaiseen vesipitoisuuteen, että tarvittavan liuotinmäärän lisäämisen jälkeen kokonaisvesipitoisuus on optimaalisella alueella, mahdollisesti liuottimeen lisätään kaasumaista NH^.
57443
Rasvojen liuottaminen mikrobisolumassasta suoritetaan suspendoimalla solumassa kaavan I mukaiseen orgaaniseen liuottimeen ja johtamalla suspensioon NH^a tai lisäämällä NH^0H:a. Tarkoituksenmukaisesti suspensio sekoitetaan perusteellisesti mekaanisesti, Käsittely-lämpötilat ovat välillä -20 ja +6o°C, jolloin edullinen alue on +5 - +50°C ja erityisesti +10 - +30°C. Käsittelyaika on 5-120 minuuttia, edullisesti 25_35 minuuttia.
Liuotin/ammoniakki-käsittelyn päätyttyä saatu solumassa (proteiini) erotetaan liuottimesta millä hyvänsä menetelmällä, kuten linkoamalla, suodattamalla tai sedimentoimalla.
Edullisesti käytetään suodatusta. Saatua solumassaa voidaan lipidien mahdollisimman täydelliseksi poistamiseksi vielä käsitellä jollakin mainituista orgaanisista liuottimista, Jäännös voidaan kuivata liuotinjäännösten ja ammoniakin poistamiseksi. Tarkoituksenmukaisesti tämä suoritetaan alennetussa paineessa, edullisesti paineessa 11-20 kPa ja korotetussa lämpötilassa, esim, L0~50°C:ssa. Tuote, josta rasva näin on poistettu, on hajuton.
Edellä esitetyllä menetelmällä kiinteästä solumassasta erotettu nestemäinen faasi sisältää ammoniakkia ja liuenneita lipidejä. Liuotin voidaan tyhjötislauk-sella erottaa rasvoista ja käyttää uudelleen. Sen jälkeen solumassa, josta rasva on poistettu ja jota mahdollisesti on kuivattu, sekoitetaan veteen. Edullisesti vesimäärän ja solumassan painosuhde on 1:1-1:30, erityisesti 1:5-1:15. Vesimäärän tulee olla vähintään sellainen, että suspension sekoittaminen on mahdollista.
pH-arvon tulee vesikäsittelyn aikana olla välillä 5-8,5, edullisesti 6-7,5, ja tarvittaessa pH säädetään tälle alueelle. Tämä on erityisesti silloin välttämätöntä, kun käytetään ensimmäisestä vaiheesta saatua kuivaamatonta tai epätäydellisestä kuivattua solumassaa, joka vielä sisältää ammoniakkia, mikä voi johtaa liian korkeaan pH-arvoon.
Tämä nukleiinihappojen, suolojen, polysakkaridien ja vesiliukoisten sekundaaristen aineenvaihduntatuotteiden uuttaminen vedellä suoritetaan yleensä lämpö-tilavälillä 30~95°C normaalipaineessa. Edullisia ovat lämpötilat väliltä U0-70°C, erityisen edullisesti väliltä 50-60°C. Uuttoaika voi uuttolämpötilasta ja vesimäärästä riippuen olla 5-120 minuuttia, hyviä tuloksia saavutetaan 25-1+5 min. uutolla. Kiinteiden ja nestemäisten aineosien erottamiseksi suspensio lingotaan edullisesti lämpötiloissa 10-30°C. Muita sopivia erotusmenetelmiä ovat sedimentointi ja suodattaminen .
Solumassan yksinkertaisemmaksi erottamiseksi lisätään edullisesti toisessa vaiheessa veteen 20 paino-/?:iin asti, edullisesti 5—15 paino-# alempaa alkoholia, kuten etanolia, metanolia, edullisesti metanolia.
Kiinteästä faasista poistetaan nestejäännökset tavallisilla menetelmillä, kuten jäädytys-, tyhjö- tai suihkukuivauksella. Tuote on miellyttävän hajuista, vaaleampaa kuin lähtöaine ja sitoo erityisen hyvin vettä. Lipidien ja nukleiini- 5 57443 happojen poistamisen ansiosta se sopii erityisesti ravintoaineiden ja rehujen valmistukseen.
Keksinnön mukaisella menetelmällä tuotteen lipidit saadaan poistettua 0,5-3,5 paino-$:n jäämäpitoisuuteen ja nukleiinihapot 0,5-^,5 paino-#;n jäämä-pitoisuuteen.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä vältetään tunnettujen menetelmien haitat, kuten liuotinkäsittely klooratuilla hiilivedyillä tai alkaliliuotus. Rasvan poisto ammoniakki/liuotin-seoksilla on erityisesti bakteerien ollessa kyseessä oleellisesti täydellisempää kuin käsiteltäessä solumassaa liuotin/vesi-seoksilla. Tällöin vältetään myös korkeiden lämpötila- ja pH-alueiden tuotteen laatua huonontava vaikutus. Energian kulutus on vähäisempi kuin tunnetuissa aikalisissä liuotusmene-telmissä. Proteiinirikastuksessa ei synny suuria määriä neutraloimissuoloja.
Kiinteästä solumassasta erotettu vesifaasi sisältää muiden vesiliukoisten aineosien ohella nukleiinihappoja, jotka voidaan ottaa talteen tunnetuin menetelmin, esim. seostamalla happamissa väliaineissa, ultrasuodatuksella, dialyysillä tai entsyymikäsittelyllä.
Keksintöä valaistaan seuraavin esimerkein.
Esimerkki 1
Methylomonas claraJa ATCC 31226 viljeltiin aerobisissa olosuhteissa ravinto-liuoksessa, joka sisälsi metanolia ainoana hiililähteenä, ammoniakkia ainoana typpilähteenä, fosfaattia, rauta-, magnesium-suoloja ja muita tavallisia hivenaineita. Tällä tavalla tuotettu bakteerisolumassa erotettiin liuoksesta ja sumutus-kuivattiin.
100 g tätä solumassaa sekoitettiin 300 g:n kanssa metanolia. Suspensioon johdettiin sekoittaen 10 g NH^-kaasua, joka liukeni siihen. Jäähdyttämällä suspension lämpötila pidettiin NH^:n johtamisen aikana 25-35°C:ssa. Metanolin, ammoniakin ja solumassan seosta sekoitettiin 30 minuuttia 20°C:ssa,
Kiinteän ja nestemäisen faasin erottamiseksi seos suodatettiin ja saatu kiinteä massa pestiin kerran 300 ml:11a metanolia. Uuden suodattamisen jälkeen molemmat suodokset yhdistettiin. Saatu ruskea liuos sisälsi käytetyn lähtöaineen lipidit. Metanoli ja ammoniakki poistettiin tyhjötislauksella (13 kPa, Lo°C). Jäännös, jossa oli 9,5 pai-no-% käytetystä solumassasta, oli tummanruskeata, pahanhajuista tahnaa, joka koostui vapaista rasvahäpoista, glyserideistä, fosforilipideistä ja sekundaarisista aineenvaihduntatuotteista.
Suodatuksessa saatu kiinteä uutettu solumassa kuivattiin tyhjössä (13 kPa) l+0°C:ssa 5 tuntia. Tällä tavalla saatiin 90 g solumassaa, josta rasva oli poistettu ja joka oli hajutonta ja väriltään vaaleampaa kuin lähtöaine.
Nukleiinihappopitoisuuden vähentämiseksi tämä solumassa suspendoitiin 900 ml:aan vettä. Sekoittamalla homogenoidun suspension pH-arvo oli 6,9.
Lämpötila korotettiin 55°C:een, suspensiota sekoitettiin vielä 20 minuuttia, se jäähdytettiin 30°C:een ja lingottiin. Saatu sedi- 57443 mentti sekoitettiin uudelleen 900 ml:n kanssa vettä, ja seosta sekoitettiin 10 minuuttia 20°C:ssa. Sen jälkeen seos lingottiin uudestaan ja sedimentti kuivattiin alennetussa paineessa.
Saanto oli 65 g. Nukleiinihappopitoisuus oli laskenut alkuperäisestä 11,2 %:sta 1,5 %:iin. Tuote oli kuivana hajutonta, vedellä kostutettuna sillä oli miellyttävä haju.
Tulokset tästä ja muista esimerkeistä on koottu jäljempänä oleviin taulukoihin Ia ja Ib.
Esimerkki 2 Lähtöaineena käytettiin samaa bakteerisolumassaa kuin esimerkissä 1. Se saatettiin samoihin menetelmävaiheisiin ja olosuhteisiin, kuitenkin käytettiin reagenssina kaasumaisen NH^in asemesta 30 ml väkevöityä NH1+0H (33 %:sta).
Esimerkki 3
Meneteltiin kuten esimerkissä 2, mutta väkevöityä NH^OH (33 %:sta) käytettiin 60 ml.
Esimerkki *+
Esimerkin 2 mukaisessa menettelytavassa käytettiin liuottimena metanolin asemesta etanolia.
Esimerkki 5
Meneteltiin muuten samalla tavalla kuin esimerkissä 3, mutta metanolin asemesta käytettiin glykolimonometyylieetteriä liuottimena.
Esimerkki 6
Meneteltiin kuten esimerkissä 2. Metanolin asemesta käytettiin isopropanolia liuottimena.
Esimerkki 7 Lähtöaineena käytettiin samaa solumassaa (Methylomonas Clara) kuin esimerkissä 1. 1 g suihkukuivattua tuotetta liuotettiin kuten esimerkissä 1 kuvattiin ja siitä poistettiin rasva (15 g NHg). Jäännöksen täydellistä kuivaamista ei suoritettu. Perusteellisesti imusuodattu suodatuskakku, jonka kuiva-ainepitoisuus oli 85 %, suspendoitiin 900 ml;aan vettä. pH-arvoksi saatiin 8,9:ään kosteaan biomassaan jääneen ammoniakin vaikutuksesta.
Suspension lämpötila nostettiin sekoittaen 65°C:een ja 5 minuutin kuluttua pH säädettiin lisäämällä HC1 7,2:een. Sen jälkeen suspensiota sekoitettiin vielä 15 minuuttia 65°C:ssa,ee jäähdytettiin 40°C:een ja lingottiin. Saatu sedimentti kuivattiin.
57443
Esimerkki 8
Hiilivetyjä ravinnoksi käyttävän hiivan Candida lipolytica ATCC 20.38 3-kantaa viljeltiin n-parafiineilla vesipitoisen ravinto-väliaineen ja happea sisältävän kaasun läsnäollessa. Hiivasolu-massa erotettiin ravintoliuoksesta ja kuivattiin.
100 g kuivaa hiiva s°iUInassaa suspendoitiin huoneenlämpö-tilassa normaalipaineessa 300 g:aan metanolia, ja tähän seokseen johdettiin 15 minuutin aikana 10 g NHg-kaasua. Tällöin pidettiin suspension lämpötila jäähdyttämällä 15°C:ssa. Kaasun johtamisen jälkeen sekoitettiin vielä 20 minuuttia 22°C:ssa ja sen jälkeen suodatettiin imusintterillä. Suodatuskakku sekoitettiin sintterillä kerran 300 ml:n kanssa metanolia ja imusuodatettiin sen jälkeen. Molemmat suodokset yhdistettiin. Liuos oli keltainen ja sisälsi käytetyn solumassan lipidit. Metanoli ja NHj poistettiin alennetussa paineessa.
Toisen suodatuksen jälkeen jäännöstä, joka koostui mikro-organismin hajoitetuista soluista, joista rasva oli poistettu, kuivattiin tyhjiökuivauskaapissa 40°C:ssa (1,9 kPa) 5 tuntia.
Näin saatu tuote oli hajutonta ja vaaleampaa väriltään kuin alun perin käytetty hiivasolumassa.
Nukleiinihappopitoisuuden vähentämiseksi alkuperäisestä 7,5 paino-%:sta laskettuna lähtöaineesta, suspendoitiin 100 g kuivattua hiivaa, josta rasva oli poistettu, liuokseen, jossa oli 1 litra tislattua vettä ja 1000 ml metanolia. Seoksen pHrksi saatiin sekoitettaessa 6,8, seosta kuumennettiin 15 min.50°C:ssa ja sitten seos lingottiin. Sedimentti sisälsi hiivaproteiinin, ja nestefaasi sisälsi liukoiseksi tehdyn nukleiinihapon. Sedimentti pestiin kerran huoneen lämpötilassa ja lyofilisoitiin.
Kuivatun aineen nukleiinihappopitoisuus oli alentunut alkuperäisestä 7,5 paino-%:sta 0,4 paino-%:iin.
Esimerkki 9
Esimerkin 8 mukaisessa menetelmässä käytettiin metanolin asemasta etanolia ja NHg-kaasun (10 g) asemasta 60 ml NH^OH (33-% :sta) .
Esimerkki 10
Penicillium chrysogenum ATCC 10.238 viljeltiin tavallisten menetelmien mukaisesti aerobisesti ravintoliuoksessa, joka sisälsi laktoosia, maissin liuotusnestettä, fosfaattia, karbonaattia ja magnesiumsulfaattia. Tuotetun penisilliinin erottamisen jälkeen 8 57443 saatu huovasto kuivattiin ja käytettiin lähtöaineena.
Menetelmä suoritettiin kuten esimerkissä 8 kuvattiin.
NHgin asemesta käytettiin NH^OH (33 %), Kuiva huovasto, josta rasva oli poistettu, pestiin 30°C:ssa vedellä,
Esimerkki 11 Lähtöaineena oli sama esimerkissä 10 kuvattu solumassa. Metanolin asemesta käytettiin etanolia. Vesiuuton aikana lämpötila nostettiin 85°C:een ja pidettiin 15 minuuttia siinä.
Seuraavissa taulukoissa Ia ja Ib esitetään esimerkkien 1-11 tulokset.
9 57443
Taulukko Ia Lipidien poistaminen
Esim. 100 g käytettyä solumassaa Liuotin 300 g NH3(g) tai
Mikro- Rasvaa Nukleii- NH^OH(33-%:sta,ml) organismi (paino-%) nihappo- ja (pai-no-%) 1 Methylo- 7 11,2 Metanoli NH- 10 monas 2 " 7 11,2 Metanoli ΝΗμ0Η 30 3 " 7 11,2 Metanoli NH^H 60 H " 7 11,2 Etanoli ΝΗ,^ΟΗ 30 5 " 7 11,2 Glykolimono- NH^OH 60 metyyli- eetteri 6 " 7 11,2 isopropanoli NH^OH 30 7 " 9,6 15,U Metanoli NH3 15 8 Candida 8,2 7,5 Metanoli NH, 10 lipoly- ä tieä 9 " 8,2 7,5 Etanoli ΝΗμ0Η 60 10 Penicil- 3,5 2,6 Metanoli NHu0H 30
lium H
(kuiva huovasto) 11 " 3,5 2,6 Etanoli NH^OH 30 10 57443
Taulukko Ib
Nukleiinihappojen poistaminen
Pesuvesi Saatu solumassa
Esim· Määrä Lämpö” Määrä Ras vaa Nukleiinihappo- (1) pH tila(°C) (g) (paino-%) ja (paino-%) 1 0,9 6 ,9 55 68 0,8 1,5 2 0 ,9 6 ,9 60 67 1,3 1,2 3 0,9 7,0 65 63 2 ,0 1,1 4 0 ,9 6 ,9 50 67 2,2 1,5 5 0,9 7,1 55 63 2,8 2,3 6 0,9 7,0 60 64 3,4 4,0 7 0,9 7,2 65 62 1,2 1,4 8 0,8 6,8 50 68 1,4 0,4 9 0,8 6,5 45 67 1,8 0,7 10 0 ,9 6,5 30 78 1,1 0 ,5 11 0,9 6,5 85 79 1,3 0,8
Claims (1)
- ” 57443 Patenttivaatimus: Menetelmä mikro-organismien solumassan lipidi- ja nukleiinihappopitoisuuden alentamiseksi uuttamalla solumassaa liuottimilla ja ammoniakilla, erottamalla uute sekä pesemällä ja kuivaamalla solumassa, tunnettu siitä, että ensimmäisessä vaiheessa solumassa uutetaan uuttoseoksella, joka sisältää ammoniakkia tai ammo-niumhydroksidia ja orgaanista liuotinta, jonka kaava on R-(CH-) -OR- I i 2 n 2 jossa R.j ja R2 tarkoittavat vetyatomia ja n on 1, 2 tai 3, mukaanluettuna isopro-panoli, tai jossa R^ on hydroksiryhmä ja R,, on vetyatomi tai metyyli- tai etyyli-ryhmä ja n on 2 tai 3, normaalipaineessa ja lämpötilassa välillä -20°C ja +60 C enintään 120 minuutin ajan, jolloin kokonaisvesipitoisuus uuton aikana on 0-30 paino-/? laskettuna käytetyn liuottimen määrästä ja jolloin liuottimen ollessa metanoli tai etanoli on solumassan, liuottimen ja ammoniakin välinen painosuhde 1:3:0,03-1:6:0,6, edullisesti 1:3:0,03-1:6:0,3* ja liuottimen ollessa propanoli, glykoli tai monoglykolieetteri 1:8:0,08-1:12:1,2, edullisesti 1:8:0,08-1:12:0,6, ja että toisessa vaiheessa solumassan jäännöstä uuttoseoksen erottamisen jälkeen pestään vedellä pH-arvossa 5-8,5, lämpötilassa 30-95°C ja normaalipaineessa 5-120 minuutin ajan, jolloin vesimäärän painosuhde soimassaan on 1:1-1:30, minkä jälkeen vesi-faasi erotetaan, soimassa mahdollisesti uutetaan kaavan I mukaisella orgaanisella liuottimena, ja soimassa kuivataan.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2633666 | 1976-07-27 | ||
| DE2633666A DE2633666C3 (de) | 1976-07-27 | 1976-07-27 | Verminderung des Lipid- und Nucleinsäure-Gehaltes in mikrobiellen Zellmassen |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI772272A FI772272A (fi) | 1978-01-28 |
| FI57443B true FI57443B (fi) | 1980-04-30 |
| FI57443C FI57443C (fi) | 1980-08-11 |
Family
ID=5984032
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI772272A FI57443C (fi) | 1976-07-27 | 1977-07-25 | Foerfarande foer nedsaettande av lipid- och nukleinsyrahalten i mikrobiella cellmassor |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5315489A (fi) |
| AT (1) | AT357502B (fi) |
| AU (1) | AU512670B2 (fi) |
| BE (1) | BE857229A (fi) |
| BG (1) | BG37997A3 (fi) |
| CA (1) | CA1101724A (fi) |
| CH (1) | CH635615A5 (fi) |
| CS (1) | CS207473B2 (fi) |
| DD (1) | DD131072A5 (fi) |
| DE (1) | DE2633666C3 (fi) |
| DK (1) | DK146511C (fi) |
| EG (1) | EG12626A (fi) |
| ES (1) | ES460877A1 (fi) |
| FI (1) | FI57443C (fi) |
| FR (1) | FR2359896A1 (fi) |
| GB (1) | GB1584194A (fi) |
| GR (1) | GR64056B (fi) |
| HU (1) | HU176802B (fi) |
| IL (1) | IL52594A (fi) |
| IT (1) | IT1082226B (fi) |
| NL (1) | NL7708171A (fi) |
| NO (1) | NO147034C (fi) |
| PL (1) | PL107949B1 (fi) |
| PT (1) | PT66849B (fi) |
| RO (1) | RO71982A (fi) |
| SE (1) | SE432609B (fi) |
| SU (1) | SU791257A3 (fi) |
| ZA (1) | ZA774517B (fi) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2748885A1 (de) * | 1977-11-02 | 1979-05-03 | Hoechst Ag | Verfahren zur verbesserung der eigenschaften von schroten oder mehlen aus oelsaaten |
| DE2907065A1 (de) | 1979-02-23 | 1980-09-04 | Hoechst Ag | Verfahren zum fetten von leder und pelzfellen |
| CA1120314A (en) * | 1979-08-22 | 1982-03-23 | John A. Ridgway | Treatment of proteinaceous materials with anhydrous ammonia gas |
| DE3143947A1 (de) * | 1981-11-05 | 1983-05-11 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | "funktionelle eiweisshydrolysate, verfahren zu ihrer herstellung und diese eiweisshydrolysate enthaltende nahrungsmittel" |
| DE3228500A1 (de) * | 1982-07-30 | 1984-02-02 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | Verfahren zur reinigung von aldehyde, acetale und/oder ungesaettigte verbindungen enthaltenden carbonsaeureestern |
| EP0805201B1 (en) * | 1995-05-29 | 2000-01-12 | Otkrytoe Akcionernoe Obschestvo"Nauchno-Issledovatelsky Institut Vychislitelnykh Komplexov im. M.A. Karceva", | Method of obtaining a biomass of microorganisms with a low nucleic acids content |
| RU2522888C2 (ru) * | 2012-10-04 | 2014-07-20 | Валентина Еремеевна Куцакова | Способ получения белковой кормовой добавки |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3615654A (en) * | 1968-05-17 | 1971-10-26 | Cpc International Inc | Method of treating microbial cells |
| IT954172B (it) * | 1970-07-24 | 1973-08-30 | Standard Oil Co | Procedimento per estrarre materiale proteico da organismi microbici unicellulari e prodotto ottenuto |
| SU419551A1 (ru) * | 1972-01-18 | 1974-03-15 | В. Ф. Фоменков Институт биологической физики СССР | Тепловой расходомер |
| GB1400691A (en) * | 1973-02-08 | 1975-07-23 | British Petroleum Co | Process for the production of proteinaceous material |
| GB1408845A (en) * | 1973-02-13 | 1975-10-08 | Ranks Hovis Mcdougall Ltd | Production of edible protein containing substances |
| JPS5411379B2 (fi) * | 1973-02-21 | 1979-05-15 |
-
1976
- 1976-07-27 DE DE2633666A patent/DE2633666C3/de not_active Expired
-
1977
- 1977-07-20 ES ES460877A patent/ES460877A1/es not_active Expired
- 1977-07-22 CH CH913977A patent/CH635615A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-07-22 BG BG036986A patent/BG37997A3/xx unknown
- 1977-07-22 NL NL7708171A patent/NL7708171A/xx not_active Application Discontinuation
- 1977-07-25 IT IT26084/77A patent/IT1082226B/it active
- 1977-07-25 DD DD7700200262A patent/DD131072A5/xx unknown
- 1977-07-25 SE SE7708539A patent/SE432609B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-07-25 GR GR54033A patent/GR64056B/el unknown
- 1977-07-25 FI FI772272A patent/FI57443C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-07-25 IL IL52594A patent/IL52594A/xx unknown
- 1977-07-25 EG EG439/77A patent/EG12626A/xx active
- 1977-07-25 RO RO7791163A patent/RO71982A/ro unknown
- 1977-07-26 HU HU77HO2006A patent/HU176802B/hu unknown
- 1977-07-26 NO NO772658A patent/NO147034C/no unknown
- 1977-07-26 DK DK337677A patent/DK146511C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-07-26 PL PL1977199855A patent/PL107949B1/pl unknown
- 1977-07-26 AT AT544077A patent/AT357502B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-07-26 SU SU772504953A patent/SU791257A3/ru active
- 1977-07-26 PT PT66849A patent/PT66849B/pt unknown
- 1977-07-26 AU AU27319/77A patent/AU512670B2/en not_active Expired
- 1977-07-26 CA CA283,487A patent/CA1101724A/en not_active Expired
- 1977-07-26 ZA ZA00774517A patent/ZA774517B/xx unknown
- 1977-07-27 CS CS764982A patent/CS207473B2/cs unknown
- 1977-07-27 JP JP8934977A patent/JPS5315489A/ja active Granted
- 1977-07-27 GB GB31537/77A patent/GB1584194A/en not_active Expired
- 1977-07-27 BE BE179698A patent/BE857229A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-07-27 FR FR7723082A patent/FR2359896A1/fr active Granted
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI57443C (fi) | Foerfarande foer nedsaettande av lipid- och nukleinsyrahalten i mikrobiella cellmassor | |
| US4206243A (en) | Process for reducing the contents of lipids and nucleic acid in microbial cell masses | |
| RU97112375A (ru) | Способ получения молочной кислоты (варианты) | |
| EP0079241A2 (en) | Process for producing glutathione | |
| CN110785087A (zh) | 对来自油籽的粗粉进行加工的方法及系统 | |
| FR2497230A1 (fr) | Procede de preparation d'esters monoalkyliques optiquement actifs d'acide b-(s)-aminoglutarique | |
| US5041374A (en) | Polyether antibiotic recovery and purification | |
| JPH0670782A (ja) | 廃棄物からの有用物質の生産方法 | |
| US3778349A (en) | Production of single cell protein material | |
| EP0443925B1 (fr) | Procédé d'obtention d'irone par voie microbiologique | |
| CN110643668A (zh) | 一种利用微生物发酵从虾壳中提取甲壳素的方法 | |
| DE2456139C3 (de) | Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums 20.798 R.P | |
| JPS6155955B2 (fi) | ||
| JPS5829078B2 (ja) | 補酵素ｑ↓１↓０の製造法 | |
| US2943983A (en) | Process of obtaining concentrates of vitamins of the b12 group from waste liquors and residual products of industrial fermentation processes | |
| EP0599658A2 (en) | Process for production of 6beta, 14alpha-dihydroxy-4-androstene-3, 17-dione | |
| US2976222A (en) | Process for the biosynthetic conversion of incomplete acid vitamin b12 factors to vitamin b12 | |
| JPS6317437B2 (fi) | ||
| JPS5816692A (ja) | 酵素によるｌ−トリプトフアンの製造方法 | |
| DE2506149A1 (de) | Verfahren zur herstellung von hefeproteinen aus sulfitablaugen und sulfitspritzschlempe | |
| JPS6321651B2 (fi) | ||
| JPS6062993A (ja) | Ｌ−セリンの製造法 | |
| JPH0339092A (ja) | 微生物が生産する物質の製造法 | |
| JPS5658495A (en) | Preparation of amino acid derivative | |
| JPS6251598B2 (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT |