JPS6062993A - Ｌ−セリンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＬ−セリンの製造法に関する。

Ｌ−セリンは医薬品、食品または化学品原ｔ１として有
用な物質である。

従来、アルカリゲネス・ファエカリスに属する細菌から
抽出した酵素標品が、β−ヒドロキシアスパラギン酸か
ｃ）ｖｋ量のＬ−セリンを生成することが知られている
（Ｊ、ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ　＋Ｖｏｌ　２４４．　Ｐ２Ｓ５−３５８（１９６９
）　）。

常に、新らたなＬ−セリンの製造法がめられている。

本発明者は、β−ヒドロキシアスパラギン酸から効率良
＜　Ｌ−セリンを製造する方法について種々ｉ斐討した
結果、β−ヒドロキシアスパラギン酸をＬ−セリンに変
換する能力を有する微生物の培養物、菌体もしくは菌体
処理物をβ−ヒドロキシアスパラギン酸に作用せしめる
ことにより効率よく、Ｌ−セリンが製造されることを見
い出した。

以下に本発明を１細に説す１する。

本発明に用いられる微生物としてしは、アクロモバクタ
−属、アエロモナス属、バチルス属、ブレビバクテリウ
ム属、チトロバクター属、コリネバクテリウム属、エル
ビニア属、シュードモナス属、ビブリメ属またはキサン
トモナス属に属し、β−ヒドロキシアスパラギン酸をＬ
−セリンに変換する能力を有するｗＲ４ユ物であればい
ずれでも使用される。その具体例としては、 アクロモバクタ−・サイクロクラスタスＡＴＣＣ２１９
２１、アエロモナス・ブンクタータＡＴＣＣ１ｔｘ６３
．バチルス・ズブチリスＩＦＯ３０２２゜ブレビバクテ
リウム・イマリオフイリウムＡＴＣＣ１４０６Ｂ、ブレ
ビバクテリウム・ステロリクムＡＴＣＣ２１３８１，チ
トロパクター・フロインディＡＴＣＣ６７５０，：１リ
ネバクテリウム・グルタミクムＦＥＲＭ−Ｐ３２９５．
　エルビニア・ヘルビコラＡＴＣＣ２１４３４，シュー
ドモナス・シェードアルカリゲネス八ＴＣＣ１７４４０
゜シュードモナス・クロロラフイスＡＴＣＣ９４４６、
ビブリオ・チロシナチフスＡＴＣＣ１９３７８、キサン
トモナス・マルバセアルムＩＦ０３３８３等があげられ
る。

β−ヒドロキシアスパラギン酸に、これらの微生物また
はその処理物を作用・υしめる方法としては、これらの
微生物をβ−ヒドロキシパラギン酸を含有する発酵培地
で培養してもよいし、またこれらの微生物の菌体または
菌体処理物を水溶液中でβ−ヒドロキシアスパラギン酸
と接触・ｌしめてもよい。

上記のうち、発酵液中でＬ−セリンを４．成υしめる方
法としては、β−ヒドロキシアスパラギン酸を培養頭初
から培地に添加してもよいし、培養途中でこれを一括ま
たは分割添加してもよい。

これらの微生物の培養のために用いる培地としては、通
常の炭素源、窒素源、無機イオン類を含有する培地が用
いられる。さらに、必要により培地にビタミン、アミノ
酸（アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸等）、核
酸関連物質、およびこれらを含有する物質が添加される
。使用菌が栄養要求性を示す場合には、要求物質が適量
添加される。

炭素源としてはグルニ１−ス、シブ−クロース、フラク
トース、マンノース、糖蜜、澱粉、澱粉加水分解物、酢
酸、プリピオン酸、ギ酸、メタノール、エタノール等、
使用菌の資化しうるものならば単独あるいは混合して使
用できる。

窒素源としては、アンモニアガス、アンモニア水、尿素
、各種アンモニア塩、各種硝酸塩、アミノ酸ＩＪ（アラ
ニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、プ
ロリン、メチメニン、グリシン、リジン等）が用いられ
る。

無機イオンとしては、マグネシウム、カリウム、鉄、マ
ンガン、亜鉛、ニッケル、コバルト等ノ塩類、燐酸、硫
酸、硝酸の塩類が使用できる。

培養は好気的条件下で１ｊわれる。培養温度は２０〜４
０℃に、培養液のｐＨは４〜ｌＯに闘整して培養される
。培養５〜７０時間でβ−ヒドロキシアスパラギン酸が
Ｌ−セリンに変換される。

又、微生物菌体またはその処理物を酵素源として水溶液
中でβ−ヒドロキシアスパラギン酸に接触せしめる方法
の場合には、β−ヒドロキシアスパラギン酸と菌体また
は菌体処理物を含む反応液を１０〜７０℃の温度範囲に
調節しつつ、静置または攪拌して反応させる。この際、
菌体としては菌体を含む培養液そのままを用いてもよい
。菌体処理物としては、菌体の機械的摩砕処理物、超音
波処理物、凍結乾燥処理物、アセトンその他の溶媒処理
菌体、酵素処理菌体、凍結乾燥菌体、界面活性剤処理菌
体、菌体の蛋白分画、菌体及び菌体抽出物の固定化物等
が用いられる。

β−ヒドロキシアメパラギン酸を［、−セリンに変換す
る活性の高い菌体を得るために、培地にβ−ヒドロキシ
アスパラギン酸、アスパラギン酸、フマール酸、リンゴ
酸等が添加されることが多い。

培地の基本組成・培養方法は上述のような通常の方法が
採用される。

β−ヒドロキシアスパラギン酸をＬ−セリンに変換せし
める反応の反応液には、必要に応して抗酸化剤、界面活
性剤、補酵素類、溶媒類、ｒミノ類が添加される場合が
ある。

また、原料であるβ−ビド１：Ｉキシアスパラギン酸と
しては、Ｌ−エリスロ（ｅ　ｒ　ｙ　Ｌ量１「０）体、
Ｌ−スレオ（ｔ　ｈ　ｒ　ｅ　ｏ）体、Ｉ〕−エリ１１
１体、Ｄ−スレオ体の４種類の立体異性体が七えられる
が、使用菌によって単独あるいは混合して使用できる。

培養あるいは反応５〜１００時間後、反応液中に多量の
Ｌ−セリンが生成する。このようにして得られたし一セ
リンを培養液あるいは反応液から採取する方法としては
、イオン交換樹脂を用いる方法等公知の手法が使用され
る。

実施例１゜ フマール酸アンモニウム０．２５ｇ／ａ、フマール酸ナ
トリウム０．５ｇ／ｄｌ、ペプトン１．８ｇ／ＶＬコー
ン・スチープ・リカー１ｇ／ｄ１、Ｋ　Ｈ□Ｐｏ４０．
０５ｇ／ｄ１、Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏａ・７　Ｈ□ＯＯｙ０１
ｇ／ｄｌ、　Ｌ−アスパラギン酸０．１　ｇ／ｄｉ　（
ｐＨ７，０）の組成からなる培地４０ｍ１を含む３００
ｍ１容三角フラスコに、ブイヨン寒天培地で生育したＢ
チルレス・プミルスＡＴＣＣ１４８８４の菌体を１白金
Ｍ［ｉ接触し、３０℃で、２１０　ｒ　ｐ　Ｔｌｌの振
盪条件下で振盪培養を２４時間行った。

得られた菌体を遠心分離して、さらに０．９％ＮａＣ＃
溶液で２回速法洗滌した後、これに５０ｍＭのトリス（
ヒトｌキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン
酸緩街液（ｐＨ６，３）と１％のＤＬ−スレオーヒドロ
キシアスノマラギン酸を含む反応液１０ｍ１を添加して
、上記と同様に２０時間振盪した。

反応液中には平均１．６Ｗ＠／ｌ１１１のＬ−セリンが
生成した。

反応終了液、反応液１１を集めて遠心分舖によって菌体
を除去し、上澄液をダウエックス５０（Ｈ”　）　型１
１脂ニｊｌ［ＬＪ、：。水ａｌ＆、１．５Ｍ　７　ンモ
ニウ水によりＬ−セリンを熔出さゼ、溶出液を減圧濃縮
した。濃縮液に冷アルコールを加えて■、−七リンを沈
澱させた結果、Ｌ−セリンの粗結晶０、６２　ｇを得た
。

実施例２゜ 使用菌として、第１表に示ず棟々の微生物を用い、菌の
生育を、培地４ｍｌを含む試験管を用い、反応液ｍを１
ｍｌとした他は実施１タリ１と同様に１１った結果、第
１表に示ずＬ−セリンが生成された。

なお、Ｌ−セリンの確認はｎ−ブタノール：酢ｒ１１：
水−５：１２Ｖ／Ｖ、ｎ−ブタノール：アセトン：ジエ
チルアミン：水−１８０：５０：２０：２０ν／Ｖ、エ
タノール：アンモニ′ｒ：Ｈｚ　Ｏ＝　１８　：　１　
：　Ｉ　Ｖ／Ｖ）溶媒系ヲ１１１　イル１４９層クロマ
トグラフィーおよびアミノ酸自動分１１ｉ機で、Ｌ−セ
リンの定量はコリネバクテリ１ジノ・・□グルタミクム
のセリン要求性変異株を用いるパイ］アッセイ法で実施
した。

第１表

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 アクロモバクタ−属、アエロモナス属、バチルス属、ブ
   レビバクテリウム属、チトロバクター属。 コリネバクテリウム属、エルビニア属、シュー１！モナ
   ス属、ビブリオ属またはキサントモナス属に属し、β−
   ヒドロキシアスパラギン酸をＬ−セリンに変換する能力
   を有する微生物の培養物、菌体もしくは菌体処理物をβ
   −ヒドロキシアスパラギン酸に作用せしめてＬ−セリン
   を生成さゼ、これを採取することを特徴とするし一セリ
   ンの製造法。