JPS6128398A - L−バリンの製造法 - Google Patents
L−バリンの製造法Info
- Publication number
- JPS6128398A JPS6128398A JP15088584A JP15088584A JPS6128398A JP S6128398 A JPS6128398 A JP S6128398A JP 15088584 A JP15088584 A JP 15088584A JP 15088584 A JP15088584 A JP 15088584A JP S6128398 A JPS6128398 A JP S6128398A
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- JP
- Japan
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- valine
- acid
- urea
- ammonium
- fumaric acid
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- Pending
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は微生物を用いるL−バリンの製造法に関する。
従来の技術
従来、2−ケトイソ吉草酸を基質としてL−バリンを製
造する方法としては、2−ケトイソ吉草酸、ギ酸および
アンモラムイオンを基質とする酵素的製造法が知られて
いる。
造する方法としては、2−ケトイソ吉草酸、ギ酸および
アンモラムイオンを基質とする酵素的製造法が知られて
いる。
発明が解決しようとする問題点
従来の方法においては、L−バリンの収量はまだ満足す
べきものではない。常に優れたし一バリンの製造法が求
められている。
べきものではない。常に優れたし一バリンの製造法が求
められている。
問題点を解決するための手段
本発明によると、フマール酸及びアンモニウムイオン又
は尿素の存在下、2−ケトイソ吉草酸をL−バリンに変
換する能力を有する微生物を用いることにより著量のL
−バリンを得ることができる。
は尿素の存在下、2−ケトイソ吉草酸をL−バリンに変
換する能力を有する微生物を用いることにより著量のL
−バリンを得ることができる。
本発明に用いられる微生物としては、フマール酸及びア
ンモニウムイオン又は尿素の存在下に、2−ケトイソ吉
草酸をL−バリンに変換できる能力を有するエシェヒア
属、シトロバクター属、アエロモナス属、アグロバクテ
リウム属、アルカリゲネス属、アルスロバクター属、ブ
レビバクテリウム属、バチルス属、コリネバクテリウム
属、エルビニア属、エンテロバクタ−属、フラボバクテ
リウム属、クルイベラ属、ミクロコツカス属、バラコツ
カス属、シニードモナス属、サルモネラ属又はセラチア
属に属する微生物であれば、野性株。
ンモニウムイオン又は尿素の存在下に、2−ケトイソ吉
草酸をL−バリンに変換できる能力を有するエシェヒア
属、シトロバクター属、アエロモナス属、アグロバクテ
リウム属、アルカリゲネス属、アルスロバクター属、ブ
レビバクテリウム属、バチルス属、コリネバクテリウム
属、エルビニア属、エンテロバクタ−属、フラボバクテ
リウム属、クルイベラ属、ミクロコツカス属、バラコツ
カス属、シニードモナス属、サルモネラ属又はセラチア
属に属する微生物であれば、野性株。
変異株、細胞融合法あるいは遺伝子操作法その他の遺伝
子的手法で誘導される組換え株のいずれもがあげられる
。
子的手法で誘導される組換え株のいずれもがあげられる
。
具体的には、エシェリヒアφコ’J (Escheri
chiacoli ) ATCC9637,シトロバク
タ−・フロインディー(Citrobacter fr
eundii ) ATCC6750,アエロモナス・
ハイドロフィラ(Aeromonas hydroph
ila)^TCC13137,アグロバタテリウム・ツ
メファシェンス(Agrobacterium tum
efaciens ) ATCC4452,アルカリゲ
ネス・ファエカリス(Alcaligenesfaec
alis) ATCC8750,アルスロバクタ−・グ
ロビホルミス(八rthrabacter globi
formis) AT[[:8010゜ブレビバクテリ
ウム・アンモニアゲネス(Brevi−bacteri
um a+r++r+oniagenes)八TCC6
B71. バチルス噂メガテリウム(Bacillu
s megaterium ) ATCC10778゜
コリネバクテリウム・グルタミクム(Coryne−b
acterium glutamicum ) ATC
C13032,−1−ルビニア・ヘルビコラ([irw
inia herbicola)ATCC21434
゜エンテロバクタ−・クロアカx (Bnteroba
ctercloacae ) AT[:C13047、
フラボバクテリウム・エステo7oマチウム(Flav
obacterium ester’oaro−ma
ticum ) ATCC8091,クルイベラ・クリ
オクレセセンス(Kluyvera cryocres
ens) ATCC14237,ミクロコツカス・ルテ
ウス(Micrococcus ’Iuteus )A
TCC4698,バラコツカス・デニトリフィカンス(
Paracoccus denitrificans
) ATCC49367、シュードモナス・アルギノサ
(Pseudomonas aeruginosa)A
TCC10145、サルモネラ・チフィムリウム(Sa
lmonella typhimurium) ATC
C19585、セラチア−’マル** 7ス(Serr
atia marcescens ) ATCC138
80等が上げられる。
chiacoli ) ATCC9637,シトロバク
タ−・フロインディー(Citrobacter fr
eundii ) ATCC6750,アエロモナス・
ハイドロフィラ(Aeromonas hydroph
ila)^TCC13137,アグロバタテリウム・ツ
メファシェンス(Agrobacterium tum
efaciens ) ATCC4452,アルカリゲ
ネス・ファエカリス(Alcaligenesfaec
alis) ATCC8750,アルスロバクタ−・グ
ロビホルミス(八rthrabacter globi
formis) AT[[:8010゜ブレビバクテリ
ウム・アンモニアゲネス(Brevi−bacteri
um a+r++r+oniagenes)八TCC6
B71. バチルス噂メガテリウム(Bacillu
s megaterium ) ATCC10778゜
コリネバクテリウム・グルタミクム(Coryne−b
acterium glutamicum ) ATC
C13032,−1−ルビニア・ヘルビコラ([irw
inia herbicola)ATCC21434
゜エンテロバクタ−・クロアカx (Bnteroba
ctercloacae ) AT[:C13047、
フラボバクテリウム・エステo7oマチウム(Flav
obacterium ester’oaro−ma
ticum ) ATCC8091,クルイベラ・クリ
オクレセセンス(Kluyvera cryocres
ens) ATCC14237,ミクロコツカス・ルテ
ウス(Micrococcus ’Iuteus )A
TCC4698,バラコツカス・デニトリフィカンス(
Paracoccus denitrificans
) ATCC49367、シュードモナス・アルギノサ
(Pseudomonas aeruginosa)A
TCC10145、サルモネラ・チフィムリウム(Sa
lmonella typhimurium) ATC
C19585、セラチア−’マル** 7ス(Serr
atia marcescens ) ATCC138
80等が上げられる。
これらの微生物が、フマール酸とアンモニウムイオン又
は尿素の存在下で2−ケトイソ吉草酸を効率よくL−バ
リンに変換することの理由の詳細は明らかではないが、
これらの微生物が、フマール酸とアンモニウムイオン又
は尿素からアミノ基共与体を生成する能力および生成し
たアミノ基供与体と2−ケトイソ吉草酸とからL−バリ
ンを生成する能力にすぐれていること、さらに基質を細
胞内へ取込む能力や生成したし一バリンを細胞外へ排出
する能力にすぐれていること、さらにL−バリンを代謝
分解する性質が弱いこと等が理由とじて考えられる。
は尿素の存在下で2−ケトイソ吉草酸を効率よくL−バ
リンに変換することの理由の詳細は明らかではないが、
これらの微生物が、フマール酸とアンモニウムイオン又
は尿素からアミノ基共与体を生成する能力および生成し
たアミノ基供与体と2−ケトイソ吉草酸とからL−バリ
ンを生成する能力にすぐれていること、さらに基質を細
胞内へ取込む能力や生成したし一バリンを細胞外へ排出
する能力にすぐれていること、さらにL−バリンを代謝
分解する性質が弱いこと等が理由とじて考えられる。
これらの微生物を培養する培地としては、炭素源、窒素
源、無機物その他の栄養物を含むものであれば天然培地
9人工培地のいずれでもよい。
源、無機物その他の栄養物を含むものであれば天然培地
9人工培地のいずれでもよい。
炭素源としては、グルコース、フラクトース。
ソルビトール、グリセロール、しょ糖、でんぷん。
でんぷん加水分解物、糖蜜、果汁などの炭水化物。
ギ酸、酢酸、フマール酸、乳酸、グルコン酸、コハク酸
等の有機酸、エタノール、メタノール等のアルコール類
等が使用される。
等の有機酸、エタノール、メタノール等のアルコール類
等が使用される。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム、
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩類、尿素、アミ
ン類、その他の含窒素化合物、ペプトン、肉エキス、i
l母エキス、コーン・スチープ・リカー、カゼイン加水
分解物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消
化物などが用いられる。
アンモニウム、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム、
リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩類、尿素、アミ
ン類、その他の含窒素化合物、ペプトン、肉エキス、i
l母エキス、コーン・スチープ・リカー、カゼイン加水
分解物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消
化物などが用いられる。
無機物としては、リン酸第1カリウム、−リン酸第2カ
リウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化
ナトリウム、硫酸第1鉄、硫酸マンガン、炭酸カルシウ
ムなどが使用される。
リウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化
ナトリウム、硫酸第1鉄、硫酸マンガン、炭酸カルシウ
ムなどが使用される。
勿論本発明に使用する微生物が生育のた2めに特定の栄
養素を必要とする場合には、その栄養素を適量培地中に
存在させなければならないが、これらの物質は窒素源と
して例示した天然物に含まれて添加される場合には別途
加える必要はない。
養素を必要とする場合には、その栄養素を適量培地中に
存在させなければならないが、これらの物質は窒素源と
して例示した天然物に含まれて添加される場合には別途
加える必要はない。
2−ケトイソ吉草酸、フマール酸及びアンモニウムイオ
ン又は尿素は前記培地に最初から加えられてもよいし、
又微生物の培養途中でくわえられてもよい。
ン又は尿素は前記培地に最初から加えられてもよいし、
又微生物の培養途中でくわえられてもよい。
2−ケトイソ吉草酸及びフマール酸はアンモニウム塩、
ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等の各種の塩
として使用される。
ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等の各種の塩
として使用される。
アンモニウムイオンは、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム1酢酸
アンモニウム、ギ酸アンモニウム。
モニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム1酢酸
アンモニウム、ギ酸アンモニウム。
フマール酸アンモニウム、リンゴ酸アンモニウム等の塩
類として、あるいはアンモニア水あるいはアンモニアガ
スとして供給される。
類として、あるいはアンモニア水あるいはアンモニアガ
スとして供給される。
培養条件としては20〜60℃、好ましくは30〜40
℃の温度で振盪・通気攪拌等の好気的条件下で、pH3
〜10.好ましくは6〜9の範囲で1〜3日間培養する
。かくして、培養液中にL−バリンが生成する。
℃の温度で振盪・通気攪拌等の好気的条件下で、pH3
〜10.好ましくは6〜9の範囲で1〜3日間培養する
。かくして、培養液中にL−バリンが生成する。
次i、前記微生物の菌体を得る場合の培地組成及び培養
条件としては、前記組成の培地及び培養条件が用いられ
る。
条件としては、前記組成の培地及び培養条件が用いられ
る。
かくして、1等られる微生物菌体はそのまま反応に使用
できるし、さらに該菌体を種々処理して得られる処理物
を反応に用いても良い。
できるし、さらに該菌体を種々処理して得られる処理物
を反応に用いても良い。
微生物菌体としては、菌体そのもの又は菌体を含む培養
液が用いられる。
液が用いられる。
菌体処理物としては、菌体の機械的摩砕処理物。
超音波処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理物、酵素処理
物、乾燥処理物、界面活性剤処理物、菌体の蛋白質分画
、菌体及び菌体処理物の固定化物等が用いられる。
物、乾燥処理物、界面活性剤処理物、菌体の蛋白質分画
、菌体及び菌体処理物の固定化物等が用いられる。
反応は水性液中、前記で得られる菌体もしくはその処理
物を■2−ケトイソ吉草酸 ■フマール酸及び■アンモ
ニウムイオン又は尿素に作用することによって行われる
。
物を■2−ケトイソ吉草酸 ■フマール酸及び■アンモ
ニウムイオン又は尿素に作用することによって行われる
。
反応に使用する2−ケトイソ吉草酸、フマール酸及びア
ンモニウムイオンとしては前記と同じものが用いられる
。
ンモニウムイオンとしては前記と同じものが用いられる
。
作用条件としては、温度10〜70℃、好ましくは20
〜50℃、pH5〜10、好ましくは6〜9で行なう。
〜50℃、pH5〜10、好ましくは6〜9で行なう。
かくして、水性液中にL−バリンが生成する。
培養液又は水性液中からし一バリンを回収する方法とし
ては、常法、例えば、イオン交換樹脂法。
ては、常法、例えば、イオン交換樹脂法。
沈澱法、溶媒抽出法等が用いられる。
以下に実施例を示す。
実施例1
グルコース0.5 g /祿、酵母エキス0.3.g/
a。
a。
肉エキスIg/a、ペプトンIg/7.’NaCJ20
.3g/a(pH7,0)の組成の培地1σmlを含む
試験管に第1表に示す微生物を1エーゼ−宛接種し、2
1Orpmの振盪条件下′、28℃の温度条件下で18
時間振盪培養する。
.3g/a(pH7,0)の組成の培地1σmlを含む
試験管に第1表に示す微生物を1エーゼ−宛接種し、2
1Orpmの振盪条件下′、28℃の温度条件下で18
時間振盪培養する。
培養終了液を試験管ごと遠心分離して集菌し、さらにl
Qmlづつの0.85%食塩溶液で2回遠沈洗浄後、
各試験管へ下記の組成の反応液L’5mlづつを添加し
、40℃の温度条件下で24時間静置して反応させたと
ころ、各々の微生物が第1表に示す濃度のL−バリンを
生成した。
Qmlづつの0.85%食塩溶液で2回遠沈洗浄後、
各試験管へ下記の組成の反応液L’5mlづつを添加し
、40℃の温度条件下で24時間静置して反応させたと
ころ、各々の微生物が第1表に示す濃度のL−バリンを
生成した。
反応液の組成は次のとおり=2−ケトイソ吉草酸・ナト
リウム20 QmM、ピリドキサールリン酸200μM
、)リスバッファー100mM(pH8,0)、7?−
ル酸アンモニウム400mM反応液から2−ケトイソ吉
、草酸・ナトリウム。
リウム20 QmM、ピリドキサールリン酸200μM
、)リスバッファー100mM(pH8,0)、7?−
ル酸アンモニウム400mM反応液から2−ケトイソ吉
、草酸・ナトリウム。
フマール酸アンモニウムあるいはアンモニウムイオンの
いずれか1つを除いた時のし一バリンの蓄積はO,l
mg 7m1以下であだ。
いずれか1つを除いた時のし一バリンの蓄積はO,l
mg 7m1以下であだ。
実施例2
使用菌として、ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
ATCC6871を用い、反応液の組成を下記のとおり
に変えた他は実施例1と同様に実施した結果反応液中に
2.4 mg /mlのL−バリンが生成した。反応液
から2−ケトイソ吉草酸、フマール酸、あるいは尿素の
いずれかを除いた時のし−バリンの生成量は0.1 m
g/ml以下であった。
ATCC6871を用い、反応液の組成を下記のとおり
に変えた他は実施例1と同様に実施した結果反応液中に
2.4 mg /mlのL−バリンが生成した。反応液
から2−ケトイソ吉草酸、フマール酸、あるいは尿素の
いずれかを除いた時のし−バリンの生成量は0.1 m
g/ml以下であった。
反応液の組成=2−ケトイソ吉草酸ナトリウム200m
M、ピリドキサールリン酸200μM、フマール酸ナト
リウム400mM、尿素400mM。
M、ピリドキサールリン酸200μM、フマール酸ナト
リウム400mM、尿素400mM。
トリスバッフy 200mM(pH8,4)発明の効
果 本発明方法により著量のL−バリンを製造することがで
きる。
果 本発明方法により著量のL−バリンを製造することがで
きる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 エシェリヒア属、シトロバクター属、アエロモナス属、
アグロバクテリウム属、アルカリゲネス属、アルスロバ
クター属、ブレビバクテリウム属、バチルス属、コリネ
バクテリウム属、エルビニア属、エンテロバクター属、
フラボバクテリウム属、クルイベラ属、ミクロコッカス
属、パラコッカス属、シュードモナス属、サルモネラ属
又はセラチア属に属し、(1)フマール酸及び(2)ア
ンモニウムイオン又は尿素の存在下、2−ケトイソ吉草
酸をL−バリンに変換する能力を有する微生物を、A、
(イ)2−ケトイソ吉草酸(ロ)フマール酸及び(ハ)
アンモニウムイオン又は尿素の存在下に培地に培養する
ことにより、又は B、培地に培養して得られる菌体又はその処理物及び前
記(イ)、(ロ)及び(ハ)を含有する水性液中で反応
させ、培養液又は水性液中にL−バリンを生成させ、こ
れを採取することを特徴とするL−バリンの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15088584A JPS6128398A (ja) | 1984-07-20 | 1984-07-20 | L−バリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15088584A JPS6128398A (ja) | 1984-07-20 | 1984-07-20 | L−バリンの製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6128398A true JPS6128398A (ja) | 1986-02-08 |
Family
ID=15506506
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP15088584A Pending JPS6128398A (ja) | 1984-07-20 | 1984-07-20 | L−バリンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6128398A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103642766A (zh) * | 2013-07-02 | 2014-03-19 | 廊坊梅花生物技术开发有限公司 | 蛋白、dna分子、含有该dna的转化宿主及该转化宿主用于生产l-缬氨酸的方法 |
US10487185B2 (en) | 2017-02-21 | 2019-11-26 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Accelerating method of self-healing for scratches |
-
1984
- 1984-07-20 JP JP15088584A patent/JPS6128398A/ja active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103642766A (zh) * | 2013-07-02 | 2014-03-19 | 廊坊梅花生物技术开发有限公司 | 蛋白、dna分子、含有该dna的转化宿主及该转化宿主用于生产l-缬氨酸的方法 |
CN103642766B (zh) * | 2013-07-02 | 2016-12-28 | 廊坊梅花生物技术开发有限公司 | 蛋白、dna分子、含有该dna的转化宿主及该转化宿主用于生产l‑缬氨酸的方法 |
US10487185B2 (en) | 2017-02-21 | 2019-11-26 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Accelerating method of self-healing for scratches |
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