JPS6140796A - ピルビン酸の製造法 - Google Patents
ピルビン酸の製造法Info
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- JPS6140796A JPS6140796A JP16238184A JP16238184A JPS6140796A JP S6140796 A JPS6140796 A JP S6140796A JP 16238184 A JP16238184 A JP 16238184A JP 16238184 A JP16238184 A JP 16238184A JP S6140796 A JPS6140796 A JP S6140796A
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- acid
- pyruvic acid
- fumaric acid
- pyruvic
- microorganism
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
１１ユ至３月３！
本発明は微生物を用いるピルビン酸の製造法に関する。
従来の技術
従来、発酵法によるピルビン酸の製造法として、各種の
微生物を、糖質を炭毒ＦＡ出する発酵培地に、培養して
培養液中にピルビン酸が蓄積する現象（発酵工業会認印
、 ２２７．１９５１年：日本農芸化学会誌逼、 ５６
８，１９５８年；日本農芸化学会誌訃、 ５２８゜１９
５２年；同誌互、 １２９．１９５３年；同誌遍、 ４
７９゜１９５４年；同誌迎、 ３００．１９５５年；同
誌輩、 ５４６゜１９５５年）及び同じ方法でピルビン
酸を蓄積せしめる方法（特公昭４０−１３７９３号公報
：特公昭３ｇ−６７，６０号公報；特公昭５７−７９６
号公報；特開昭５０−８２２８４号公報）が知られてい
る。
微生物を、糖質を炭毒ＦＡ出する発酵培地に、培養して
培養液中にピルビン酸が蓄積する現象（発酵工業会認印
、 ２２７．１９５１年：日本農芸化学会誌逼、 ５６
８，１９５８年；日本農芸化学会誌訃、 ５２８゜１９
５２年；同誌互、 １２９．１９５３年；同誌遍、 ４
７９゜１９５４年；同誌迎、 ３００．１９５５年；同
誌輩、 ５４６゜１９５５年）及び同じ方法でピルビン
酸を蓄積せしめる方法（特公昭４０−１３７９３号公報
：特公昭３ｇ−６７，６０号公報；特公昭５７−７９６
号公報；特開昭５０−８２２８４号公報）が知られてい
る。
ＩＩＩ’（５２−１１２号公報）、グルコン酸含有培地
で培養する方法（特公昭５１−３８７９２号公報）、酢
酸、プロピオン酸を主炭素源とする培地で培養する方法
（特公昭５１−３４４７５号公報）、ＤＬ−アラニンか
ら製造する方法（特公昭４０−１３７９３号公報）、乳
酸から製造する方法、オキザロ酢酸から生成する現象（
Ｄｉｎｃｈ悄、Ｊ、、丑、 ５９５．１９４１年）等が
知られている。
で培養する方法（特公昭５１−３８７９２号公報）、酢
酸、プロピオン酸を主炭素源とする培地で培養する方法
（特公昭５１−３４４７５号公報）、ＤＬ−アラニンか
ら製造する方法（特公昭４０−１３７９３号公報）、乳
酸から製造する方法、オキザロ酢酸から生成する現象（
Ｄｉｎｃｈ悄、Ｊ、、丑、 ５９５．１９４１年）等が
知られている。
発■が解決しようとする問題点
従来の方法においては、ピルビン酸の収量はまだ満足す
べきものではない。常に浸れたピルビン酸の製造法が求
められている。
べきものではない。常に浸れたピルビン酸の製造法が求
められている。
問題点を解決するための手段
本発明によると、フマール酸の存在下に、フマール酸を
ピルビン酸に変換する能力を有する微生物を用いること
により著量のピルビン酸を得ることができる。
ピルビン酸に変換する能力を有する微生物を用いること
により著量のピルビン酸を得ることができる。
本発明に用いられる微生物としてはフマール酸の存在下
に、フマール酸ピルビン酸に変換する能力を有するアル
カリゲネス属、アグロバクテリウム属、ブレビバクテリ
ウム属、バチルス属、シトロバクタ−属、エシェリヒア
属、エンテロバクタ−属、エルピニア属、ミクロコツカ
ス属、シュードモナス属、ルラチア属、サルモネラ属又
はタレブシェラ属に属する微生物であれば、野生株、変
異株、細胞融合法、遺伝子操作法その他の遺伝的手法で
誘導、される組換え株のいずれもが用いられる。具体的
にはアルカリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎ
ｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ） ＡＴＣＣ８７５０，アグロ
バクテリウム−ラジオバクター（＾ｇｒｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕ＋＋＋ ｒａｄｉｏ−ｂａｃｔｅｒ）八ＴＣＣ４７
１８，ブレビバクテリウム・ケトグルタミクム（口ｒｅ
ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋｅｔｏｇｌｕｔａｍｉｃｕ
＋ｎ）ＡＴＣＣ１５５８７，バチルス・メガテリウム（
Ｂａｃ、ｉ ｌ ＩｕｓｍｅｇａＬｅｒｉｕｍ）ＡＴＣ
Ｃ１０７７ｇ、 ントロバクター・フロインデ４ （
Ｃｉｔｒａｂａｃｔａｒ ｆｒｅｕｎｄｉ）八ＴＣＣ６
７５０，ｘ ン。
に、フマール酸ピルビン酸に変換する能力を有するアル
カリゲネス属、アグロバクテリウム属、ブレビバクテリ
ウム属、バチルス属、シトロバクタ−属、エシェリヒア
属、エンテロバクタ−属、エルピニア属、ミクロコツカ
ス属、シュードモナス属、ルラチア属、サルモネラ属又
はタレブシェラ属に属する微生物であれば、野生株、変
異株、細胞融合法、遺伝子操作法その他の遺伝的手法で
誘導、される組換え株のいずれもが用いられる。具体的
にはアルカリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎ
ｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ） ＡＴＣＣ８７５０，アグロ
バクテリウム−ラジオバクター（＾ｇｒｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕ＋＋＋ ｒａｄｉｏ−ｂａｃｔｅｒ）八ＴＣＣ４７
１８，ブレビバクテリウム・ケトグルタミクム（口ｒｅ
ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋｅｔｏｇｌｕｔａｍｉｃｕ
＋ｎ）ＡＴＣＣ１５５８７，バチルス・メガテリウム（
Ｂａｃ、ｉ ｌ ＩｕｓｍｅｇａＬｅｒｉｕｍ）ＡＴＣ
Ｃ１０７７ｇ、 ントロバクター・フロインデ４ （
Ｃｉｔｒａｂａｃｔａｒ ｆｒｅｕｎｄｉ）八ＴＣＣ６
７５０，ｘ ン。
リヒア畢コリ（Ｂｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）
ＡＴＣＣ１１３０３、エンテロバククー−クロアセ（８
ｎｔｅｒｏｂａｃＬｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）八ＴＣＣ１
３０４７，工ｙレビニア・ヘルビコラ（［ｉｒｗｉｎｉ
ａｈｅｒｂｉｃｏｌａ）ＡＴＣＣ２１４３４，ミクロコ
ツカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ １ｕｔｅ
ｕｓ）ＡＴＣＣ４６９８，シェードモ。
ＡＴＣＣ１１３０３、エンテロバククー−クロアセ（８
ｎｔｅｒｏｂａｃＬｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）八ＴＣＣ１
３０４７，工ｙレビニア・ヘルビコラ（［ｉｒｗｉｎｉ
ａｈｅｒｂｉｃｏｌａ）ＡＴＣＣ２１４３４，ミクロコ
ツカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ １ｕｔｅ
ｕｓ）ＡＴＣＣ４６９８，シェードモ。
ナス・ボレオポリス（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａＳｂｏｒｅ
ｏｐｏｌｉｓ）八ＴＣＣ１５４５２，セラチア・マルセ
セ７ ス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）
ＩＡＭ １２０！＋、 サルモネラ・チフィムリウム
（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）
ＡＴＣＣ１９５８５，クレブシェラ−ニューモニア（に
１ｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＩＡＭ
１１８３等があげられる。
ｏｐｏｌｉｓ）八ＴＣＣ１５４５２，セラチア・マルセ
セ７ ス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）
ＩＡＭ １２０！＋、 サルモネラ・チフィムリウム
（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）
ＡＴＣＣ１９５８５，クレブシェラ−ニューモニア（に
１ｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＩＡＭ
１１８３等があげられる。
これらの微生物を培養する培地としては、炭素源；窒素
源、無機物その他の栄養物を含むものであれば、天然培
地、合成培地のいずれでもよい。
源、無機物その他の栄養物を含むものであれば、天然培
地、合成培地のいずれでもよい。
炭素源としては、グルコース、フラクトース、ソルビト
ール、グリセロール、しよ糖、果汁等の各種炭水化物、
ギ酸、酢酸、フマール酸、乳酸、グルコン酸、コハク酸
等の有機酸類、エタノーノペメタノール等のアルコール
類等が使用される。 −窒素源としては、アンモニア
、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニ
ウム、ギ酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の各種
酸類のアンモニウム塩類、尿素、アミン類その他の含窒
素化合物、ペプトン、肉エキス、酵母エキス９、コーン
、・スチーブ・リカー、カゼイン加水分解物、大豆粕加
水分解物、各種発酵菌体およびその消化物などが用いら
れる。
ール、グリセロール、しよ糖、果汁等の各種炭水化物、
ギ酸、酢酸、フマール酸、乳酸、グルコン酸、コハク酸
等の有機酸類、エタノーノペメタノール等のアルコール
類等が使用される。 −窒素源としては、アンモニア
、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニ
ウム、ギ酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の各種
酸類のアンモニウム塩類、尿素、アミン類その他の含窒
素化合物、ペプトン、肉エキス、酵母エキス９、コーン
、・スチーブ・リカー、カゼイン加水分解物、大豆粕加
水分解物、各種発酵菌体およびその消化物などが用いら
れる。
無機物としては、リン酸第１カリウム、リン酸第２カリ
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第１鉄、硫酸マン −ガン、炭酸カルシ
ウム等が用いられる。
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第１鉄、硫酸マン −ガン、炭酸カルシ
ウム等が用いられる。
本発明に使用する微生物が生育のために特定の栄養素を
必要とする場合には、その栄ａ累を適量培地中に存在さ
せなければ・ならないが、これらの物質は窒素源として
例示した天然物に含まれて添加される場合には別に加え
る必要がない。フマール酸は前記培地に最初から加えら
れてもよいし、又微生物の培養途中で加えられてもよい
。フマール酸はアンモニウム塩、ナトリウム塩、カリウ
ム塩、カルシウム塩等の各種の塩として使用される。
必要とする場合には、その栄ａ累を適量培地中に存在さ
せなければ・ならないが、これらの物質は窒素源として
例示した天然物に含まれて添加される場合には別に加え
る必要がない。フマール酸は前記培地に最初から加えら
れてもよいし、又微生物の培養途中で加えられてもよい
。フマール酸はアンモニウム塩、ナトリウム塩、カリウ
ム塩、カルシウム塩等の各種の塩として使用される。
培養条件としては、２゛０〜６０℃、好ましくは３０〜
４０℃の温度で振盪・通気攪拌等の好気的条件下で、ｐ
Ｈ３〜ＩＯ１好ましくは６〜９の範囲で１〜４日間培養
する。かくして、培養液中にピルビン酸が生成する。
４０℃の温度で振盪・通気攪拌等の好気的条件下で、ｐ
Ｈ３〜ＩＯ１好ましくは６〜９の範囲で１〜４日間培養
する。かくして、培養液中にピルビン酸が生成する。
次に、前記微生物の菌体を得る場合の培地組成及び培養
条件としては、前記組成の培地及びｊＨ’５養条件が用
いられる。
条件としては、前記組成の培地及びｊＨ’５養条件が用
いられる。
かくして、得られる微生物菌体はそのまま反応に使用で
き−し、さらに該菌体を種々処理して得られる処理物を
反応に用いても良い。
き−し、さらに該菌体を種々処理して得られる処理物を
反応に用いても良い。
微生物菌体としては、菌体そのもの又は菌体を含む培養
液が用いられる。
液が用いられる。
菌体処理物としては、菌体の機械的摩砕処理物、超音波
処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理物、酵素処理物、乾
燥処理物、界面活性剤処理物、菌体の蛋白質分画、菌体
及び菌体処理物の固定化物等が用いられる。
処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理物、酵素処理物、乾
燥処理物、界面活性剤処理物、菌体の蛋白質分画、菌体
及び菌体処理物の固定化物等が用いられる。
反応は水溶液中、前記で得られる菌体もしくはその処理
物をフマール酸に作用させることによって行われる。こ
の場合反応液中に、２−ケトカルボン酸（ピルビン酸及
びオキザロ酢酸は除く）とアンモニウムイオンもしくは
尿素が共存すると、フマール酸からのピルビン酸の生成
が促進される場合がある。
物をフマール酸に作用させることによって行われる。こ
の場合反応液中に、２−ケトカルボン酸（ピルビン酸及
びオキザロ酢酸は除く）とアンモニウムイオンもしくは
尿素が共存すると、フマール酸からのピルビン酸の生成
が促進される場合がある。
又、反応液中に、２−ケトカルボン酸とアンモニウムイ
オン又は尿素が共存する場合には、各々の２−ケトカル
ボン酸に対応するアミノ酸がピルビン酸と同時に生成す
る場合が多い。
オン又は尿素が共存する場合には、各々の２−ケトカル
ボン酸に対応するアミノ酸がピルビン酸と同時に生成す
る場合が多い。
反応に使用するフマール酸は前記と同じものが用いられ
る。アンモニウムイオンは、フマール酸。
る。アンモニウムイオンは、フマール酸。
ギ酸、酢酸、硫酸、リン酸、塩酸等の塩として使世され
る。
る。
２−ケトカルボン酸としては、２−ケトイソ吉草酸、２
−ケトイソカプロン酸、フェニルピルビン酸、インドー
ルピルビン酸、イミダゾールピルビン酸、２−ケト−３
−ヒドロキシピルビン酸、２−ケトグルクル酸等が用い
られる。
−ケトイソカプロン酸、フェニルピルビン酸、インドー
ルピルビン酸、イミダゾールピルビン酸、２−ケト−３
−ヒドロキシピルビン酸、２−ケトグルクル酸等が用い
られる。
反応は１０〜７０℃で、ｐＨ４〜１１の範囲で、静置又
は攪拌して行う。かくして、水性液中にピルビン酸が生
成する。培養液又は水性液中からピルビン酸を回収する
方法としては常法、例えばイオン交換樹脂法、沈殿法、
溶媒抽出法等が用いられる。
は攪拌して行う。かくして、水性液中にピルビン酸が生
成する。培養液又は水性液中からピルビン酸を回収する
方法としては常法、例えばイオン交換樹脂法、沈殿法、
溶媒抽出法等が用いられる。
以下に実施例を示す。
実施例１、
グルコース０．５ｇ／ａ、酵母エキス０．３ｇ／ａ。
肉エキス１ｇ／ａ、ペプトン１ｇ／ｄＪ！５ＮａＣＪ！
０．３ｇ／ｄ１（ｐＨ７，０）の組成の培地１０ｍ１を
含む試験管に、第１表に示す微生物を１工−ゼ宛接種し
、２１Ｏｒｐｍの振盪条件下、２８℃の温度条件下で１
８時間振盪培養する。
０．３ｇ／ｄ１（ｐＨ７，０）の組成の培地１０ｍ１を
含む試験管に、第１表に示す微生物を１工−ゼ宛接種し
、２１Ｏｒｐｍの振盪条件下、２８℃の温度条件下で１
８時間振盪培養する。
培養終了液を試験管ごと遠心分離して集菌し、さらに１
０ｍ１ずつの０．８５％食塩水で２回遠沈洗滌後、各試
験管へ下記の組成の反応液１．５ｍｌずつを１６加して
、４０℃の温度条件下で２４時間静置して反応させたと
ころ、各々の微生物が第１表に示す濃度のピルビン酸を
生成した。
０ｍ１ずつの０．８５％食塩水で２回遠沈洗滌後、各試
験管へ下記の組成の反応液１．５ｍｌずつを１６加して
、４０℃の温度条件下で２４時間静置して反応させたと
ころ、各々の微生物が第１表に示す濃度のピルビン酸を
生成した。
フマール酸アンモニウム無添加の場合のピルビン酸の生
成量はいずれの微生物の場合も０．２ ｍｇ ／ｍ１以
下であった。
成量はいずれの微生物の場合も０．２ ｍｇ ／ｍ１以
下であった。
反応液の組成は次のとおり：アマール４酸アンモニウム
４００ｍＭ、）リスバッフｙ−Ｌ’ｌ）ＯｍＭ（ｐ Ｈ
８，０）。
４００ｍＭ、）リスバッフｙ−Ｌ’ｌ）ＯｍＭ（ｐ Ｈ
８，０）。
第１表
実施例２゜
使用菌として第２表に示す微生物を用い、反応液の組成
を下記のものに変えた他は実施例１と同様に実施した結
果第２表に示す濃度のピルビン酸が生成した。フェニル
ピルビン酸ナトリウム又はフマール酸アンモニウム無添
加の場合のピルビン酸の生成量はいずれの微生物の場合
も０．２■／ｍｌであった。反応液の組成は次のとおり
：フェニルビルビン酸ナトリウム２００ｍＭ、ピリドキ
サールリン１１１２２００．μＭ、フマール酸アンモニ
ウム４ＱＱｍＭ、）リスバッフｙ−２００ｍＭ （ｐＨ
８，４）。
を下記のものに変えた他は実施例１と同様に実施した結
果第２表に示す濃度のピルビン酸が生成した。フェニル
ピルビン酸ナトリウム又はフマール酸アンモニウム無添
加の場合のピルビン酸の生成量はいずれの微生物の場合
も０．２■／ｍｌであった。反応液の組成は次のとおり
：フェニルビルビン酸ナトリウム２００ｍＭ、ピリドキ
サールリン１１１２２００．μＭ、フマール酸アンモニ
ウム４ＱＱｍＭ、）リスバッフｙ−２００ｍＭ （ｐＨ
８，４）。
第２表
発明の効果
本発明方法により著量のピルビン酸を製造することがで
きる。
きる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 アルカリゲネス属、アグロバクテリウム属、ブレビバク
テリウム属、バチルス属、シトロバクター属、エシェリ
ヒア属、エンテロバクター属、エルピニア属、ミクロコ
ッカス属、シュードモナス属、セラチア属、サルモネラ
属、又はクレブシェラ属に属し、フマール酸をピルビン
酸に変換する能力を有する微生物を、 Ａ、フマール酸の存在下に培地に培養することにより、
又は Ｂ、培地に培養して得られる菌体又はその処理物をフマ
ール酸を含有する水性液中で反応させることにより、培
養液又は水性液中にピルビン酸を生成させ、これを採取
することを特徴とするピルビン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16238184A JPS6140796A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | ピルビン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16238184A JPS6140796A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | ピルビン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6140796A true JPS6140796A (ja) | 1986-02-27 |
Family
ID=15753493
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16238184A Pending JPS6140796A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | ピルビン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6140796A (ja) |
-
1984
- 1984-07-31 JP JP16238184A patent/JPS6140796A/ja active Pending
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