DE2405593A1

DE2405593A1 - Verfahren zur verminderung der nucleinsaeuremenge in proteinmaterial

Info

Publication number: DE2405593A1
Application number: DE19742405593
Authority: DE
Inventors: Alain Jean Paul Edouard Revoy
Original assignee: BP PLC
Current assignee: BP PLC
Priority date: 1973-02-08
Filing date: 1974-02-06
Publication date: 1974-08-15
Also published as: NL7401632A; IT1056079B; GB1400691A; BE810786A; FR2216928B1; FR2216928A1; ES423262A1

Description

? A ^T = .-J T /λ ,-I Y/ X LTS 2 A· U O O J ο

DR.-3MG. VON KRSiSLiR DR.-INC. 5CHÜN WALD DR.-ING. TH. MEYER DR. FUE5 Dl PL.-CHEM. ALEK VON KREISLER DIPL-CHEM. CAROLA KELLER DR.-ING. KLÖPSCH D1PL.-ING. SELTiMG

KÖLN 1, DEICHMANNHAUS

Köln, den 5· Februar Kl/Ax

The British Petroleum Company Limited,

Britannic House, Moor Lane, London, EC2Y 9BU (England'.

Verfahren zur Verminderung der Nucleinsäuremenge in Proteinmaterial '

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Verminderung der Menge von Nucleinsäuren, die in dem in den Zellen von Mikroorganismen abgeleiteten oder darin enthaltenem Proteinmaterial vorhanden sind.

Die meisten Proteinmaterialien enthalten .Nucleinsäuren. Die in einem Proteinmaterial enthaltene Menge der Nucleinsäuren ist besonders wichtig, wenn es als Nahrungsmittel, das für den menschlichen Verzehr vorgesehen ist, C. ) .verwendet oder diesem Nahrungsmittel zugesetzt .werden soll. Der menschliche Körper baut die aufgenommenen Nucleinsäuren zu Harnsäure ab. Leider ist der Mensch nicht fähig, Harnsäure abzubauen, weil es"ihm an dem Enzym Urikase mangelt. Ferner kann der Mensch nur begrenzte Harnsäuremengen ausscheiden. Wenn somit die Aufnahme von Nucleinsäuren nicht begrenzt wird, erhöht sich die Harnsäurekonzentration im Blut, bis-sie Werte erreicht, die Krankheiten, z.B. Gicht, verursachen. Eine maximale Aufnahme von Nucleinsäuren.von etwa 2 g/ Tag wird von der Mehrzahl der Ernährungswissenschaftler noch als unbedenklich angesehen.

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Protoinrnaterialien sind hinsichtlich der in ihnen enthaltenen Nucleinsäuremenge sehr unterschiedlich. Mikroorganismen sind eine verhältnismäßig neue Quelle dieses "Materials. Die einzelligen Mikroorganismen, z.B. die Hefen, haben einen verhältnismäßig hohen Nucleinsäuregehalt "beispielsweise in der Größenordnung von 8 "bis 18 Gew.-^, bezogen auf .das Trockengewicht des Materials. Leber ist ein weiteres proteinhaltiges Material mit hohem Gehalt an Nucleinsäuren von beispielsweise etwa 50 bis 100 mg pro 100 g frisches Gewebe. Es wurde über Verfahren zur Verminderung der Menge der Nucleinsäuren in Mikroorganismen, insbesondere in Hefen,'berichtet. Bei einem dieser Verfahren werden ganze Zellen des Mikroorganismus in einer wässrigen alkalischen Lösung bei erhöhter Temperatur beispielsveise durch Behandlung der Zellen mit Natriumhydroxyd oder Ammoniumhydroxyd suspendiert. Hierzu werden p_u-Werle im Bereich von

7,5 bis 12 und Temperaturen in den Bereichen von 30

bis 45°C und 90° bis 125°C angegeben. Ziel dieser Verfahren ist es, eine maximale Verhinderung der Menge der Nucleinsäuren bei minimalem Proteinverlust zu erreichen.

Es wurde nun gefunden, daß die entfernte Menge der Nucleinsäuren erhöht werden kann, indem das Material vor der Behandlung mit wässrigem Alkali mit einem organischen Lösungsmittel behandelt wird, wodurch es möglich ist, mildere alkalische Bedingungen anzuwenden, um eine gegebene Senkung des Nucleinsäuregehalts zu erreichen.. Ferner wurde gefunden, daß durch die Vorbehandlung mit einem organischen Lösungsmittel ein geruchloses Produkt erhalten wird. Der letztgenannte Punkt ist besonders vichtig, wenn es sich bei dem Proteinmaterial· um einen Mikroorganismus, z.B. eine Hefe, handelt, der durch Züchtung des Mikroorganismus auf einem Kohlenwasserstoff, z.B. einem Gasöl, als Kohlenstoffquelle in Gegenwart eines wässrigen Nährmediums und eines freien Sauer-

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3ΐο£ί enthaltenden Ga383 erzeugt worden ist. Die Alkalibehandlung dieses Materials ohne eine Lösungsrnittelvorbehandlung führt zu einem scharf und atschend riechenden Produkt.

Gegenstand der Erfindung ist demgemäß die "Verminderung der in Proteinmaterialien vorhandenen Menge an Nucleinsäuren nach einem Verfahren, das dadurch gekennzeichnet ist, daß aan das Material-mit einem organischen Lösungsmittel behandelt und anschließend das mit dem Lösungsmittel behandelte Material der Einwirkung eines wässrigen Alkalis unter Bedingungen, unter denen die Nucleinsäuren löslich gemacht werden, aussetzt. J

Als Proteinaaterial werden vorzugsweise Mikroorganismen, 2.3. durch Züchtung auf eines Kohlenwasserstoffsubstrat in Gegenwart eines wässrigen Nährmediums und eine3 freien Sauerstoff enthaltenden Gases erzeugte Mikroorganismen eingesetzt. Bevorzugt als Mikroorganismen werden die Hefen, z.3. Hefen der Gattung Candida, die Kohlenwasserstoffe verwerten, z.B. die Kohlenwasserstoffe verwertenden Stämme von Candida tropicalis oder Candida lipolytica.

Verfahren zur Züchtung von Hefen, die Kohlenwasserstoffe verwerten, werden in den britischen Patentschriften

1 049 065, 1 04-9 066, 1 04-9 067 und 1 059 891 beschrieben. )

Pur die Züchtung der Kohlenwasserstoffe verwertenden Hefen eignen sich Substrate, die im wesentlichen ganz aus Normalparaffinen oder teilweise aus liormalparaffinen, bestehen, z.B. Gasölfraktionen von Rohöl.

Der Einfluß, den das Lösungsmittel auf das Proteinmaterial hat, besteht darin, daß es die Proteinkomponente weniger anfällig für einen Abbau zu löslichen Verbindungen durch die anschließende Behandlung mit dem Alkali macht. Durch die Lösungsmittelbehandlung wird die physikalische Struktur des Proteins verändert. Das reine Ergebnis ist eine

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Verminderung der Proteinmenge, die "bei der Alkalibehandlung verlorengeht.

Als organische Lösungsmittel eignen sich Alkohole, Ketone, Kohlenwasserstoffe und organische halogenierte Verbindungen. Zweckmäßig als Lösungsmittel sind Alkohole, insbesondere C.-C.-Alkohole. Besonders gut geeignet sind die leicht erhältlichen C~-Alkohole Propanol und Isopropanol. Bei Verwendung eines Alkohols als Lösungsmittel wird er normalerweise in Mischung mit Wasser beispielsweise bei einem Verhältnis von Wasser zu Lösungsmittel im Bereich von 1:4- bis 1:10 verwendet. Besonders vorteilhaft sind azeotrope Gemische von Isopropanol und Wasser.

Die Behandlung mit dem Lösungsmittel kann durchgeführt werden, indem das Froteinmaterial mit dem Lösungsmittel gemischt oder gewaschen wird. Zweckmäßig und einfach ist eine Methode, bei der das Proteinmaterial mit dem Lösungsmittel gemischt und das Gemisch gerührt wird. Bevorzugt werden bekannte Gegenstrom-Lösungsmittelextraktionsverfahren. Die Behandlungstemperaturen liegen vorzugsweise im Bereich von 30 bis 100 C, wobei ein Bereich von 30 bis 70 C besonders bevorzugt wird.

Das zu behandelnde Proteinmaterial sollte wenigstens

20 Gew.-^ Wasser, vorzugsweise 100 bis 200 Gew.-^- Wasser,

bezogen auf das Trockengewicht des Materials, enthalten.

Dies ist das Gewicht des Materials nach dem Trocknen bei einer Temperatur von 120 C.

Das Lösungsmittel wird gewöhnlich vor der Behandlung mit dem Alkali vom Material entfernt. Vorzugsweise sollten wenigstens 20 Gew.-^ Wasser, bezogen auf das Trockengewicht des Materials, während der Entfernung des Lösungsmittels im Material belassen werden. Das Lösungsmittel kenn entfernt werden, indem das Material der Einwirkung von erhöhter Temperatur und/oder vermindertem Druck ausgesetzt wird. He angewendeten Temperaturen sollten verhält-

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ni3sä3ig raild sein und unter dar Teaperatur liegen, bei der da3 Protein denaturiert wird. Temperaturen von etwa 110⁰G können angewendet werden. Außer der Entfernung das Lösungsmittels hat diese Behandlung eine wirksame Trocknung des Materials zur Folge.

Die Alkalibehandlung kann nach bekannten Verfahren durchgeführt werden. In der Praxis wird das Proteine* erial vor dar Alkalibehandlung gewöhnlich getrocknet. Ein wichtiges Merkmal der Erfindung ist die Konzentration des vorhandenen Alkalis is Verhältnis zum Gewicht des Proteins. Diese Aikalikonzentration zur Erzielung eines gewünschten Verhinderung der Menge der Nucleinsäuren in einer gegebenen Manga Proteinsaterial kann empirisch durch einfache Versuche für jedes Material und jede Kombination von Bedingungen bestimmt werden. Wenn beispielsweise das Proteimmaterial eine Hefe mit einem nucleinsäuregehalt von etwa 8 Gew.-^ (auf Trcckengewichtsbasis) ist und der gewünschte Gehalt an Nucleinsäuren etwa 2,0 Gsw,—^ beträgt, würde eine geeignete Alkalikonzentration im Bereich von 0,01 bis 0,1 N für etwa 100 g Hefe (Trockengewicht) pro Liter liegen. . j

Der p_H-Wert der für die Alkalibehandlung verwendeten Alkalilösung beträgt vorzugsweise 8,5 bis 9,5. \

Als Alkali wird normalerweise ein Hydroxyd eines Alkalimetalls, z.B. Natrium- oder Kaliumhydroxyd, oder Ammoniak oder Ammoniumhydroxyd verwendet.

Die Alkalibehandlung wird vorzugsweise bei einer Temperatur im Bereich von 50 bis 90 C, insbesondere von 60 bis 80⁰C durchgeführt. Die Behandlungsdauer kann 5 bis 60 Minuten betragen und beträgt normalerweise etwa 30 Minuten.

Die Behandlung kann bei Normaldruck durchgeführt werden. Das Gemisch sollte vorzugsweise genügend stark bewegt werden, um es homogen zu halten.

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Nach Beendigung der Alkalibehandlung kann das Protein mit vermindertem Gehalt an Nucleinsäuren nach beliebigen Verfahren zur Abtrennung von Feststoffen von Flüssigkeiten als festes Material isoliert werden. Als Beispiele geeigneter Verfahren sind die Zentrifugierung, Filtration und Sedimentation zu nennen.

Nach Beendigung der Alkalibehandlung und einer gegebenenfalls vorgenommenen Neutralisation mit einer Säure wird das Protein vorzugsweise mit Wasser gewaschen, um die restlichen Alkalisalze und die löslich gemachten Nucleinsäuren zu entfernen. Das Waschen mit Wasser kann durchgeführt werden, indes das Protein in Wasser suspendiert und die Suspension gerührt wird, wobei vorzugsweise eine Wassermenge verwendet wird, die im wesentlichen des Gewicht des Proteins entspricht. Nach dem Waschen kann das Protein von der Suspension beispielsweise durch Zentrifugieren, Filtrieren oder Sedimentation abgetrennt werden.

Die nach den vorstehend genannten Verfahren vom festen Protein abgetrennte wässrige Phase enthält löslich gemachte Nucleinsäuren, die, falls gewünscht, nach bekannten Methoden, z.B. durch Ausfällung in sauren Medien, umgekehrte Osmose, Ultrafiltration, Dialyse oder Enzymangriff, gewonnen werden kennen.

Die Erfindung vird durch die folgenden Beispiele weiter erläutert.

BeisBiel 1

Ein Kohlenwasserstoffe verwertender Stamm der Hefe Candida trcpicalis wurde auf einem als Kohlenstoffquelle dienenden Gasöl, das etwa 15 Gew.-^ geradkettige Paraffine enthielt, in Gegenwart eines wässrigen Nährceciums und eines freien Sauerstoff enthaltenden Gases kultiviert. Die hierbei erzeugte Eefe wurde vom Kulturrneidum abgetrennt und sprühgetrocknet. Die sprühgetrocknete Hefe wurde mit einem Gemisch vcr. Isopropanol und Wasser im

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Volumenverh'il:ni3 von SS ; 1 2 in einem Gegenstrociextraktcr behandelt. Lie Verweilzeit der Hefe betrug 30 Minuten. Das Yoluaenverhältnis der Durcbflußmenge der Hefe zur DurchfluSmenge de3 Lösungsmittels betrug 1:10 und die Behandlungsteaperatur 70⁰G. :

Die mit den Lösungsmittel behandelte Hefe -wurde dann 3 Stunden bei 110 G getrocknet. Dann wurde 1 kg der getrockneten Icsungsaittelbehandeltan Hefe mit 10 1 0,05 N Xaliuahydroxyd genischt. Das Gemisch wurde in eines Behälter 30 Minuten "bei 8O⁰G mit einea 2ioritz-Rührer bei 1500 UpM gerührt. Die in dieser Weise gebildete Suspension ■wurde zentrifugiert, wobei ein Sediment, das Hefeprotein enthielt, von einer wässrigen Fraktion, die löslich gemacht'e Nucleinsäuren enthielt, abgetrennt wurde. Das Sediment, das 30 bis 4-0 Gew,-?o Trockensubstanz enthielt, wurde erneut in Wasser in einem'Verhältnis von 1' Gew.-Teil pro 1 YoI.-Teil Wasser suspendiert. Die Suspension wurde 10 Minuten bei einer Rührergeschwindigkeit von 1500 UpM gerührt und dann erneut zentrifugiert. Das Sediment wurde auf einem Mitchell-Walzentrockner, das sich mit 4 UpM drehte, bei 120⁰C getrocknet.

Während der Behandlung betrug der Gesamtverlust an Proteinmaterial 10$. Der Gehalt an Nucleinsäuren in der Hefe in den verschiedenen Stufen des Verfahrens ist in Tabelle 1 genannt.

Tabelle 1 !

Gehalt an Nucleinsäuren in Gew.-fo, bezogen auf das Trockengewicht der Hefe

Unbehandelte sprühgetrocknete Hefe etwa 8 Lösungsmittelbehandelte Hefe etwa 9

Trockenhefe nach der Alkalibehandlung 3 ■

Trockenhefe nach dem Waschen mit Wasser 2 ·

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Die löslich gemachten Nucleinsäuren, die in der vom festen Protein ,abgetrennten wässrigen Fraktion enthalten sind, können nach einem der nachstehend beschriebenen Verfahren gewonnen werden.

Die wässrige Fraktion, die die löslich gemachten Kucleinsäuren enthielt, wurde in vier Teile geteilt.

1) Der p~-Wert eines !Teils wurde durch Zusatz von Schwefelsäure auf 3j5 eingestellt. Nach der Ansäuerung und Absitzenlassen für 3 Stunden wurde der Rückstand zentrifugiert und mit Wasser bei Raumtemperatur gewaschen. Der gewaschene Rückstand enthielt die entfernten Nucleinsäuren und Proteine. Er hatte die folgende Zusammensetzung in Gew.-^ auf Trockenbasis: 50$ Nucleinsäuren, 35$ Proteine, 15p Polysaccharide.

2) Ein zweiter Teil wurde zur Entfernung der Salze und zur Verminderung der Konzentration des organischen Materials kontinuierlich gegen Wasser bei Raumtemperatur dialysiert. Die wässrige Phase enthielt vor der Dialyse 35 Gew.-$ Protein, 50 Gev?.-$ Nucleinsäuren und 15 Gew.-$ Polysaccharide und nach der Dialyse 35 C-ev.-ji Proteine, 35 Gew.-$ Nucleinsäuren und 30 Gew.-£ Polysaccharide. Die nicht dialysierte Fraktion enthielt die Nucleinsäuren, die in der oben beschriebenen Weise ausgefällt wurden.

3) Ein dritter Teil wurde der ungekehrten Osmose bei Raumtemperatur unterworfen. In diesem Fall wurde das Wasser entfernt und die gewonnene flüssige lösung zur Gewinnung der Nucleinsäuren in der oben beschriebenen Weise ausgefällt.

4) Ein vierter Teil wurde bei Raumtemperatur in der Ultrazentrifuge behandelt. lie gewonnene flüssige Lösung enthielt Nucleinsäuren, eine gewisse Prcteinmenge und hochmolekulare Polysaccharide.

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Beispiel 2

Eine Probe der Hefe Candida tropiealis wurde durch die in Beispiel 1 beschriebene Züchtung und Lösung ami·;telcehandlung erhalten. Die ungetrocknete, lösungsc&itteibehandelte Hefe enthielt 50 Gew.-^i eines azeotropen Gemisches von Isoprcpanol und V/asser, bezogen auf das Trokkengewieht der Hefe. Diese ungetrocknete Probe wurde dann mit Alkali auf die in Beispiel 1 beschriebene V/eise behandelt. Der Gehalt an Nucleinsäuren in der Hefe in den verschiedenen Stufen des Verfahrens ist in Tabelle 2 genannt. Während der gesamten Behandlung trat ein Proteinverlust von 2C;a ein.

Tabelle 2

Gehalt an -iucleinsäuren in Gew.—;ό, tezogen auf das Trokkengewicht der Hefe, ^

Ucbehandelte nasse Hefe . 8

LösungscniTtelbehandelte Hefe 9

Trockenhefe nach Alkalibehandlung 4

Trockenhefe nach dem Waschen mit Wasser 2

BeisOiel 3

Ein Kohlenwasserstoffe verwertender Stamm der Hefe Candida lipolytica wurde auf den Normalparaffinen von Gasöl in Gegenwart eines wässrigen Nährmediums und eines freien Sauerstoff enthaltenden Gases kultiviert. Die Hefe wurde vom Kulturmedium abgetrennt und getrocknet und dann 30 Minuten bei 8O⁰C mit dem 6-fachen Volumen eines azeo- · tropen Gemisches von Isopropanol und Wasser behandelt und gekühlt, worauf das Lösungsmittel dekantiert wurde. Die Hefefeststoffe wurden erneut mit dem gleichen Volumen des azeotropen Gemisches suspendiert, absitzen gelassen und dekantiert. Diese Behandlung wurde wiederholt und das Produkt zur Entfernung des Lösungsmittels filtriert. Dia Feststoffe wurden über Nacht "bei 60⁰C unter vermindertem Druck getrocknet.

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ÖRKäiNAL INSPECTED

In 20 1 Wasser wurden 4 kg der getrockneten Hefe suspendiert. Die Suspension wurde mit Natriumhydroxyd auf p„ 9 eingestellt und durch direktes Einblasen von Wasserdampf 30 Minuten auf 60 C erhitzt, wodurch das Volumen auf 28 1 zunahm. Die Aufschlämmung wurde zentrifugiert. Der durch Zentrifugieren abgetrennten Creme wurde das gleiche Wasservolumen zugesetzt. Die Aufschlämmung wurde auf p„ 7 eingestellt und zentrifugiert. Die Peststoffe wurden einmal bis dreimal mit Wasser gewaschen und bei 90°C pasteurisiert.

Der Nucleinsäuregehalt der Hefe wurde durch diese Behandlung von 9,2 auf 2,4 Gew.-Jo, bezogen jeweils auf das Trockengewicht der Hefe, gesenkt.

Beispiel t

Der in Beispiel 3 beschriebene-Versuch-wurde unter Verwendung einer anderen Hefeprobe wiederholt. Der Nucleinsäuregehalt wurde von 9,0 auf 2,0 Gew.-fs gesenkt. Es wurde gefunden, daß die zur Einstellung von 20 1 Aufschlämmung einer Konzentration von 200 g Hefe pro Liter auf p„ 9 erforderliche Natriunhydroxydmenge 1 Liter 2,7 K Alkali betrug.

Vergleichsversuch

Der in Beispiel 4 beschriebene Versuch wurde ohne die Extraktion mit des azeotropen Gemisch von Isopropanol und Wasser wiederholt. Das Frocukt hatte einen Nucleinsäuregehalt von .3,4 Gew.-^

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*+ U .j U Ο J / U 3 u ν

Claims

2 L O ? 5 3 3

Patentansprüche

Verfahren zur Verminderung der Menge der in Proteinmaterialien vorhandenen Nucleinsäuren, dadurch gekennzeichnet, daß man das Material mit einem organischen Lösungsmittel behandelt und anschließend das lösungsmittelcehandelte Material dar Einwirkung eines wässrigen Alkalis unter Bedingungen, unter denen die Nucleinsäuren löslich werden, aussetzt.
2) Verfahren nach Anspruch 1₃ dadurch gekennzeichnet, daß man als Proteinmaterialien Mikroorganismen behandelt. ;
3) Verfahren nach Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als Proteinmaterialien Mikroorganismen behandelt, die durch Kultivieren des Mikroorganismus auf einem Kohlenwasserstoff in Gegenwart eines wässrigen iiährmediums und eines freien Sauerstoff enthaltenden Gases gezüchtet worden sind.
4) Verfahren nach Ansprüchen 1 bi3 3. dadurch gekennzeichnet, daß zur Züchtung der Mikroorganismen ganz oder teilweise au3 Hormalparaffinen bestehende Kohlenwasserstoffe verwendet worden sind.
5) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man als Mikroorganismen Hefen behandelt.
6) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß man Hefen der Gattung Candida behandelt.
7) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Kohlenwasserstoffe verwertenden Stamm der Hefe Candida lipolytica oder Candida tropicalis behandelt,

QOPY

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8) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß man als organische Lösunesmittel Alkohole, Ketone, Kohlenwasserstoffe oder halogenierte organische Verbindungen verwendet.
9) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß man als Alkohole C.-C.-Alkohole verwendet.
10) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis S₁. dadurch gekennzeichnet, daS man den'Alkohol in Mischung mit Wasser verwendet.
11) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß can den Alkohol in Mischung mit Wasser in einem G-ewichtsverhältnis von Wasser zu Alkohol von 1:4 bis 1:10 verwendet.
12) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, ca2 Ean als organisches Lösungsmittel ein azeotropes Gemisch von Isoprcpar.ol ;:-; Wasser verwendet.
13) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß car: das Prcteinmsteriai mit dem organischen Lösungsmittel durch Mischer: des Prcteir.materials mit dem organischen lösungsmittel und Rühren bei einer Temperatur vcn 3C bis 7C"C behandelt.
14) Verfahrer, nach Ansprüchen 1 bis 13, dadurch gekennzeichnet, oa£ man das Proteinmaterial■mit einem Wassergehalt vcn wenigstens 20 G-ew.-p, vorzugsweise mit einem Wassergehalt von 100 bis 200 Gew.-^, bezogen auf das Trockengewicht des Materials, einsetzt.
15) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, ca5 man das Proteinmaterial vor der Behandlung mit dem Alkali trocknet.

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16) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 151 dadurch gekennzeichnet, daß man das mit dem Lösungsmittel behandelte Material der Einwirkung einer wässrigen Alkalilösung einer Konzentration von 0,01 bis 0,1 N pro 100 g
Trockengewicht der Hefe aussetzt.
17) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 16, dadurch gekennzeichnet, daß man eine wässrige Alkalilösung mit
einem p~-wert von 8,5 bis 9₅5 verwendet.
18) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 17» dadurch gekennzeichnet, daß man als Alkali Ealiunihydroxyd, Natriumhydroxyd, Ammoniak oder Ammoniumhydroxyd verwendet.
19) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß man das mit dem Lösungsmittel behandelte Material der Einwirkung des wässrigen Alkalis bei einer 'Temperatur von 50 bis 90 C, vorzugsweise
von 60 bis 8O⁰C aussetzt.
20) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß man nach der Behandlung des lösungsmittelbehandelten Materials mit wässrigem Alkali das Protein mit vermindertem Nucleinsäuregehalt als festes Material isoliert.
21) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 20, dadurch gekennzeichnet, daß man das als festes Material isolierte -Proteinmaterial mit Wasser wäscht.
22) Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 21, dadurch gekennzeichnet, daß man das als festes Material isolierte Proteinmaterial mit Wasser wäscht, indem man es in
Wasser in einem Gewichtsverhältnis von etwa 1 Gew,-Teil Proteinmaterial pro Gew.-Teil V/asser suspendiert.

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