DE2404947C2 - Steroidspirolactone, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft die in 17-Stellung substituierten Derivate aus der Androstan-Relhe der allgemeinen Formein

VI

COOaIc

worin R₂ ein Wasserstoffatom oder einen Methylrest und alc einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffamtomen bedeuten, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung gemäß den vorstehenden Patentansprüchen.

Der Alkylrest alc kann beispielsweise ein Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl- oder tert.-Butyl-Rest sein.

Besonders nützlich sind die Verbindung der Formel

vr

COOC₂H₅

und die Verbindung der Formel

45

50

55

D I I I

worin R₂ ein Wasserstoffatom oder einen Methylrest und

)0 R₃ einen Alkylrest mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen bedeuten, in Gegenwart eines basischen Agens mit einem Trimethylsulfoniumhalogenid der Formel (CH₃)₃ S⁺ X", worin X ein Brom- oder Jodatom bedeutet, umsetzt, die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formellll

20

COOC₂H₅

Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel VI, das durch das Formelschema 1 veranschaulicht wird, ist dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel 11 RjO

worin R₂ und R₃ wie oben definiert sind, mit einem Dehydrierungsmittel behandelt und die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel IV

30

worin R₂ wie oben definiert ist, in Anwesenheit eines basischen Agens mit einem Malonsäurealkylester der Formel V

alc —O —C —CH₂-C —O—alc V

worin alc einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen darstellt, behandelt, wobei man eine Verbindung der allgemeinen Formel VI erhält. Diese Verbindungen der Formel VI kann man gewünschtenfalls einer alkalischen Hydrolyse mit anschließendem Ansäuern unterziehen und die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel VII

VII

gewünschtenfalls entweder mit einer äquimolaren Menge einer Alkallbase behandeln, um das entsprechende Alkalisalz der allgemeinen Formel XI

^N ' COOM

worin R₂ wie vorstehend definiert ist und M ein Alkalimetallatom darstellt, zu erhalten, oder mit einem Überschuß an Alkalibase behandeln, um eine Verbindung der allgemeinen Formel VIII

COOM

worin R₂ und M wie vorstehend definiert sind, zu erhalten.

In diesem Verfahren Ist basische Agens, In dessen Gegenwart das Trlmethylsulfoniumhalogenld auf die Verbindung der allgemeinen Formel II einwirkt, vorzugsweise ein Alkalialkoholat, wie Natrlumäthylat. Man kann jedoch gleichfalls ein Alkalihydrid, wie z. B. Natriumhydrid, verwenden.

Das Dehydrierungsmlttel", das man zur Umwandlung der Verbindungen der Formel III in Verbindungen der Formel IV verwenden kann, ist vorzugsweise Chloranil, jedoch kann man gleichfalls andere p-Benzochinonderivate, wie z. B. 2,3-Dichlor-5,6-dlcyanbenzochinon, verwenden.

Das basische Agens, in dessen Gegenwart man einen Malonsäurealkylester der Formel V auf eine Verbindung der Formel IV einwirken läßt, Ist vorzugsweise ein Alkalialkoholat, wie z. B. Natrlumäthylat, jedoch kann man gleichfalls ein Alkaliamld, wie z. B. Natrlumamid, oder ein Alkalihydrid, wie z. B. Natriumhydrid, verwenden.

Die alkalische Hydrolyse, die man zur Überführung der Verbindungen der Formel VI In Verbindungen der Formel VII durchführt, wird vorzugsweise mit Hilfe von Natriumhydroxyd in wäßrigem Medium durchgeführt, jedoch kann man gleichfalls andere alkalische Reagentien, wie z. B. Kaliumhydroxyd oder Natriumbicarbonat, verwenden, wobei die Hydrolyse entweder in wäßrigem Medium oder in wäßrig-alkoholischem Medium durchgeführt wird.

Die Alkalibasen, die man zur Überführung der Verbindungen der allgemeinen Formel VII In die entsprechenden Alkalisalze der allgemeinen Formel XI oder in Verbindungen der allgemeinen Formel VIII verwanden kann, sind Natrium- oder Kaliumhyroxid.

Die Epoxyde der allgemeinen Formel III befinden sich in der 17/J-Konformation. Die zu ihrer Herstellung verwendete Reaktion ist stereospezifisch und führt ausschließlich zu diesem Isomeren.

Be! den A.lkoxycarbony!- und Hydrcxylcarbonyl-Resten, die an den Lactonring der verschiedenen erfindungsgemäßen Verbindungen gebunden sind, wird ihre Bindung an diesen Ring durch einen geschlängelten Bindungsstrich dargestellt, was darauf hinweist, daß die beiden a- und ^-Isomeren erhalten werden können und daß eine Mischung davon vorliegen kann. Das erfindungsgemäße Herstellungsverfahren ist in mehrfacher Hinsicht überraschend: So sind die im Verlauf der Verfahrensschritte erhaltenen Ausbeuten im Hinblick darauf, daß diese Verfahrensschritte sich Steroidmolekülen komplexer Struktur bedienen, sehr zufriedenstellend; insbesondere jedoch stellt man überraschenderweise bei der Stufe, die darin besteht, daß man die Verbindung der Formel IV auf das Reaktionsprodukt eines Malonsäurealkylesters der Formel V mit einem basischen Agens, d. h. auf ein Malonatanion, einwirken läßt, fest, daß dieses Anion sich selektiv an die 17-Stellung der Verbindung der Formel IV bindet.

Man hätte erwarten können, daß dieses Anion eine Kondensation gleichzeitig mit dem konjugierten 3-Keto-J-4,6-System, um eine Addition in 7-Stellung zu ergeben, und mit dem Epoxyd in 17-Stellung, um das Lacton zu bilden, eingehen würde.

In der Tat sind In der Literatur viele Beispiele zu finden, bei denen ein Malonatanion oder ein von einem ίο Methylcarbanlon abstammendes Anion sich an Ketodlen-Systeme anlagern, die in jeder Hinsicht mit demjenigen der Verbindungen der Formel IV vergleichbar sind (vgl. u. a. M. Yanaglta, »J. Org. Chem.«, 1958, 23, 690 und J. W. Rails, »J. Am. Chem. Soc«, 1953, 75 2123 oder J. A. Campbell und J. C. Babcock, »J. Am. Chem. Soc«, 1959, 81, 4069, J. A. Campbell et coll., »Steroids«, 1963, 1,317).

Somit erfolgt die Kondensation ausschließlich mit dem Epoxyd in 17-Stellung, ohne daß jegliche Addition In 7-Stellung nachgewiesen werden könnte.

Im Rahmen des Verfahrens gemäß der vorliegenden Erfindung betrifft diese insbesondere das Verfahren zui Herstellung der Verbindung der Formel VI'

COOC₂H₅

das dadurch gekennzeichnet 1st, daß man die Verbindung der Formel ΙΓ

'S/V

C₂H₅O

In Anwesenheit eines basischen Agens mit Trimethylsul foniumbromid (CH₃J₃S⁺Br umsetzt, die erhaltene Ver bindung der Formel III'

/W ,0

C₂H₅O

mit einem Dehydrierungsmittel behandelt, die erhalten« Verbindung der Formel IV

IV

O

in Anwesenheit eines basischen Agens mit Malonsäure äthylester

C₂H₅-O-C-CH₂-C-O-C₂H₅

behandelt und die gewünschte Verbindung der Forme
VI' erhält.

Gemäß bevorzugten Ausführungsformen dieses Verfahrens Ist das basische Agens, In dessen Gegenwart die Verbindung der Formel ΙΓ mit Trimethylsulfonlumbromid umgesetzt wird, Natriumhydrid, das Dehydrlerungsmittel Chloranll und das basische Agens, In dessen Gegenwart die Verbindung der Formel IV mit dem Malonsäureäthylester umgesetzt wird, Natrlumäthylat.

Ebenfalls erfindungsgemäß können die Verbindungen der vorstehenden Formel VI, worin alc die angegebene Bedeutung besitzt und R₂ den Methylrest bedeutet, nach einem Verfahren hergestellt werden, das Im Formelschema 2 veranschaulicht wird und das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine Verbindung der vorstehenden Formel III, worin R₂ den Methylrest bedeutet, in Gegenwart eines basischen Agens mit einem Malonsäurealkylester der vorstehenden allgemeinen Formel V umsetzt und eine Verbindung der allgemeinen Forme! IX

IX

COOaIc

worin R₂ ein Wasserstoffatom oder den Methylrest bedeutet, die dadurch gekennzeichnet ist, daß man die Verbindungen der Formel VI durch Erhitzen in Gegenwart von Wasser in Verbindungen der Formel C überführt.

Vorzugswelse wird bei einer Temperatur oberhalb 80° C und besonders bevorzugt zwischen 100 und 160° C gearbeitet. Da die Anwesenheit von Wasser notwendig ist. ist es in Anbetracht der bevorzugten Temperaturen

worin R₃ einen Alkylrest mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen und alc die angegebene Bedeutung besitzt, erhält, die man mit einem Dehydrierungsmittel behandelt, um eine Verbindung der allgemeinen Formel VI zu erhalten, worin alc einen Alkylrest und R₂ den Methylrest bedeuten.

Das basische Agens, in dessen Gegenwart der Malonsäurealkylester der Formel V mit der Verbindung der Formel III umgesetzt wird, ist vorzugsweise ein Alkalialkoholat, wie z. B. Natrlumäthylat, jedoch kann man gleichfalls ein Alkaliamid, wie Natriumamld, oder ein Alkalihydrid, wie Natriumhydrid, verwenden. *o

Das Dehydrierungsmittel, das man zur Überführung der Verbindungen der Formel IX in Verbindungen der Formel Vl verwenden kann. Ist vorzugsweise Chloranil, jedoch kann man gleichfalls andere p-Benzochinonderivate, wie z. B. 2,3-Dchlor-5,6-dicyanbenzochinon, verwenden.

Die Erfindung betrifft ebenfalls die Verwendung der Verbindungen der allgemeinen Fomel VI für die Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel C

50 vorteilhaft, in geschlossenen Gefäßen, d. h. unter einem leichten Druck, zu arbeiten.

Die Überführung der Verbindungen der allgemeinen Formel VI in Verbindungen der allgemeinen Formel C durch Erhitzen In neutralem Milieu Ist überraschend. Der wahrscheinliche Mechanismus einer solchen Reaktion bei analogen Verbindungen wird in der nachstehenden Beschreibung der Herstellung von Steroidspirolactonen erläutert.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel C sind, wie nachstehend ausgeführt wird, therapeutisch interessant.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel VI sind auch für die Herstellung weiterer therapeutisch Interessanter Verbindungen, außer den Derivaten der allgemeinen Formel C, verwendbar.

Die Erfindung betrifft daher auch die Verwendung der vorliegenden Verbindungen zur Herstellung der Steroidspirolactone der allgemeinen Formel

25

SCORi

worin R, einen geradkettigen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und R₂ ein Wasserstoffatom oder einen Methylrest bedeuten.

Es Ist bekannt, daß die Eliminierung einer an einen Lactonrlng gebundenen Estergruppe durch Hydrolyse in saurem Medium oder in basischem Medium mit anschließender Decarboxylierung erfolgt (vgl. u. a. J. Ficlni und A. Maujean, »C. R. Acad. Sei.«, 1966, 263, 425; M. Newman und C. Vanderwerf, »J. Am. Chem. Soc«, 2945, 67, 233; E. B. ReId, »J. Am. Chem. Soc«, 1959, 81, 4632), jedoch Ist in der chemischen Literatur eine solche Reaktion im neutralen Medium nicht erwähnt.

Der Stand der Technik führte somit zur Schlußfolgerung, daß diese Reaktion nicht Im neutralen Medium durchgeführt werden kann. Es wurde nunmehr überraschenderweise gefunden, daß diese Reaktion mit ausgezeichneten Ausbeuten tatsächlich durchführbar ist.

Die Erfindung betrifft somit auch die Verwendung der vorliegenden Verbindungen bei einer derartigen Eliminierungsreaktion zur Herstellung von Verbindungen der Formel I, wobei man Verbindungen der allgemeinen Formel VI

(VI

COOaIc

55

60 worin alc einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und R₂ ein Wasserstoffatom oder den Methylrest bedeuten, mit einer Thioalkansäure der allgemeinen Formel R,COSH, worin R₁ einen geradkettigen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen darstellt, umsetzt und die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel X

COOalc

SCOR₁

worin ale, Ri und R₂ die vorstehende Bedeutung haben, in neutralem Milieu und In Anwesenheit von Wasser durch Erhitzen In die Verbindungen der allgemeinen Formel I umwandelt.

Der Alkylrest alc Ist beispielsweise ein Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl- oder tert.-Butyl-Rest.

Der Alkylrest R₁ wird unter den Methyl-, Äthyl-, Propyl- und Butyl-Resten gewählt.

Der Übergang der Verbindungen der allgemeinen Formel X In Verbindungen der allgemeinen Formel I erfolgt in Gegenwart von Wasser und im neutralen Milieu und somit im vorliegenden Fall ohne Zugabe einer sauren oder alkalischen Substanz, wobei man bei einer Temperatur von mindestens 80° C und vorteilhafterweise bei einer Temperatur zwischen 100 und 16O⁰C arbeitet. Die Verwendung von Wasser bei diesen Temperaturen bringt es

mit sich, daß es bequemer Ist, in geschlossenen Gefäßen und somit unter einem leichten Druck zu arbeiten.

Die Überführung dieser Verbindungen der Formel X in Verbindungen der Formel I Ist auf folgenden Gründen unerwartet: Zur Hydrolyse eines Restes der Formel X bedarf es nach der Literatur saurer oder alkalischer Bedingungen, die im Falle dieser Verbindungen bei der Herstellung von Verbindungen der Formel I zu mäßigen oder gar keinen Ausbeuten führten. Dies trifft nicht zu für die erfindungsgemäß verwendeten neutralen Bedingungen, die zu den gewünschten Verbindungen mit sehr guten Ausbeuten führen. Man hätte bei dieser Stufe des Verfahrens Schwierigkelten bei der Hydrolyse der -COO-alc-Gruppe, begleitet von einem tellwelsen oder vollständlgen Abbau der Acyltiogruppe, erwarten können.

Man nimmt an, daß der Mechanismus dieser unerwarteten Reaktion wie folgt ist: Es erfolgt eine hydrolytische Öffnung des )'-Lactons, wobei die freie Säure auftritt, die bei Ihrer Bildung decarboxyliert wird, wonach eine erneute Intramolekulare Lactonbildung zwischen dem Hydroxylrest In 17/?-Stellung und der Estergruppe der Kette erfolgt, welche erneute Lactonbildung unter Eliminierung eines Alkanols abläuft.

Das folgende Schema veranschaulicht diese Umwandlung:

— H

OaIc X)H

J^CH₂CH₂

⁷ I

COOalc

+ alcOH

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung die Verwendung der Verbindung der nachstehenden Formel VI' zur Herstellung der Verbindung der Formel 1'

^SCOCH₃

bei der man die Verbindung der Formel VI'

VI'

COOC₂H₅ In neutralem Medium und In Anwesenheit von Wasser durch Erhitzen auf eine Temperatur zwischen 80 und 160° C In die Verbindung der Formel Γ umwandelt.

Dieses Verfahren erlaubt es somit, die Verbindungen der allgemeinen Formel X, die eine Acylthiogruppe In 7-Stellung aufweisen, unter Bedingungen, die mit der Anwesenheit dieser Acylthiogruppe trotz ihrer Labilität verträglich sind. In Verbindungen der allgemeinen For-■ mel I zu überführen. Dies erfolgt mit besseren Ausbeuten, auf kürzerem Syntheseweg und mit einfacher zugänglichen Reagentien, als es bisher gemäß der US-PS 35 06 652 in Verbindung mit der Literaturstelle Journal of Organic Chemistry, Band 24, S. 1109 und 1110 (1959) möglich war.

Gemäß einer Abänderung der vorstehenden Verwendung kann man erfindungsgemäß die Verbindungen der allgemeinen Formel VI alkalisch hydrolysieren, der allgemeinen Formel VII und anschließend ansäuern und die erhaltenen Verbindungen

mit Thloesslgsäure CH₃COSH behandelt und die erhaltene Verbindung der Formel X A

XA

COOCH₅

SCOCH₃

COOH

(VII)

worin R₂ die vorstehende Bedeutung hat, entweder mit einer Thioalkansäure der Formel R₁COSH, worin R₁ die vorstehende Bedeutung hat, behandeln und die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel X'

COOH

X'

XI

COOM

OH

vm

SCOR₁

worin R, und R₂ die vorstehende Bedeutung haben, durch Erhitzen in die Verbindungen der allgemeinen Formel I umwandeln oder mit einer äqulmolaren Menge einer Alkallbase behandeln das erhaltene entsprechende Alkalisalz der allgemeinen Formel XI

io

15

20

worin R₂ die vorstehende Bedeutung hat und M ein Alkallmetallatom darstellt, mit einer Thioalkansäure der allgemeinen Formel R,COSh behandeln und die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel X' durch Erhitzen in Verbindungen der allgemeinen Formel I umwandeln,

oder mit einem Überschuß an Alkalibase behandeln, die erhlaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel VIII

35

45

^CH₂-CH₂-COOM

COOM

worin R₂ und M die vorstehende Bedeutung haben, mit einer Thioalkansäure der allgemeinen Formel R₁COSH behandeln und die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel X' durch Erhitzen in Verbindungen der allgemeinen Formel I umwandeln.

Die alkalische Hydrolyse zur Überführung der Verbindungen der allgemeinen Formel VI in Verbindungen der allgemeinen Formel VII wird vorzugsweise mit Hilfe von Natriumhydroxyd in wäßrigem Milieu durchgeführt, jedoch kann man gleichfalls andere alkalische Reagentien, wie z. B. Kaliumhydroxyd oder Natriumbicarbonat, verwenden, wobei die Hydrolyse entweder im wäßrigen öder wäßrig-alkoholischen Milieu durchgeführt wird.

Die Alkalibasen, die man zur Überführung der Verbindungen der allgemeinen Formel VII in Alkalisalze der allgemeinen Formel XI und VIII verwenden kann, sind Natrium- oder Kaliumhydroxyd. Die Überführung der Verbindungen der allgemeinen Formel X' in Verbindungen der allgemeinen Formel I wird durch Erhitzen auf Temperaturen oberhalb 80° C und vorteilhafterweise auf eine Temperatur zwischen 100 und 220° C durchgeführt.

Die über die erfindungsgemäßen Verbindungen erhältlichen Verbindungen der Formel I, worin R₁ einen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und R₂ ein Wasserstoffatom oder den Methylrest bedeuten, besitzen interessante pharmakologische Eigenschaften, wie aus der US-PS 30 13 012 hervorgeht. Die Verbindung der allgemeinen Formel I, worin R, und R₂ den Methylrest

65 bedeuten, und die Verbindung der allgemeinen Formel C, worin R₂ den Methylrest bedeutet, die als Splronolacton bzw. Canrenon bekannt sind, wirken dem Aldosteron entgegen (vgl. A. Burger, »Medicinal Chemistry«, 3. Auflage, 1970, Seite 1001 bis 1003) und können somit wegen Ihrer Wirkung auf die Diurese verwendet werden. Insbesondere werden sie bei der Behandlung bestimmter Herzbeschwerden eingesetzt.

Die vorliegenden Zwischenprodukte erlauben es somit, interessante therapeutische Verbindungen der Steroid-Relhe zu erhalten, und dies ausgehend von einfachen Ausgangssubstanzen und mit einer geringen Stufenzahl, wobei jede Stufe mit guter Ausbeute abläuft, was aus den folgenden Beispielen hervorgeht.

Beispiel 1

Spiro-[(4,6-androstadien-3-on)-17/?,2'-(4'-äthoxycarbonyI-l'-oxacyclopentan-5'-on)]

Stufe A: 3-Äthoxy-spiro-17/?-oxlranyl-3,5-androstadien

45,2 g Natriumhydrid werden in 1500 ecm Dimethylsulfoxyd suspendiert. Man erhitzt 2 Stunden auf 60° C und läßt bei Raumtemperatur über Nacht stehen. Anschießend gibt man zu der erhaltenen schwarzen Lösung 1200 ecm Tetrahydrofuran hinzu, kühlt auf - 5° C ab und gibt 384 g Trimehtylsulfoniumjodld, suspendiert in 1350 ecm Dlmethylsulfoxyd, hinzu. Man führt In die vorstehende, auf- 5° C abgekühlte Mischung 150 g 3-Äthoxy-3,5-androstadien-17-on (hergestellt gemäß A. Serini und H. Koster, »Ber.«, 1938, 71, 1766, ausgehend von 4-Androsten-3,17-dion), gelöst in 1200 ecm Tetrahydrofuran, hinzu. Man läßt die Temperatur wieder auf Raumtemperatur ansteigen und rührt 17 Stunden. Man gießt das Reaktionsprodukt anschließend in 151 Eiswasser und rührt 1 Stunde. Man saugt den gebildeten Niederschlag ab, wäscht ihn mit Wasser und trocknet ihn. Man reinigt das Produkt durch Umkristallisation aus Aceton, wobei 139,7 g 3-Äthoxy-spiro-17/)-oxiranyl-3,5-androstadien in Form farbloser Kirstalle erhalten werden. F = 105° C. [z]f = - 161° (c = 1%, Äthanol mit 1% Pyridin).

Analyse: C₂₂H₃₂O₂

Berechnet: C 80,44 H 9,82%

Gefunden: 80,5 10,0%

Stufe B: Spiro-17/?-oxiranyl-4,6-androstadien-3-on

Man suspendiert 50 g des in der vorstehenden Stufe erhaltenen Produkts in 750 ecm Aceton mit einem Wassergehalt von 5%. Zu dieser vor Licht geschützten Suspension gibt man 37,5 g Chloranil hinzu und rührt 3 Stunden bei Normaltemperatur.

Man gießt das Reaktionsgemisch anschließend in 2,5 1 Wasser, das 100 ecm Natronlauge von 36° Be enthält, und rührt 1 Stunde.

Man saugt den gebildeten Niederschlag ab. wäscht ihn mit Wasser und trocknet ihn.

Man reinigt das in Methylenchlorid gelöste Produkt durch Filtration über Aluminiumoxyd und erhält nach dem Verdampfen des Lösungsmittels und Verreiben des Rückstands in Aceton 39 g Spiro-17/3-oxiranyl-4,6-androstadien-3-on in Form farbloser Kristalle. F = 240° C. |g> = + 39° (c = 0,5% Chloroform).

Analyse: C₂₀H₂₆O₂
Berechnet: C 80,50
Gefunden: 80,2

8,78% 9,0%

Stufe C: Spiro-[(3-äthoxy-3,5-androstadien)-17y3,2'-(4'-äthoxycarbonyl-l'-oxacyclopentan-5'-on)]

Ausgehend von 3,15 g Natrium und 150 ecm Äthanol stellt man eine äthanolische Natriumäthylatlösung her. Man gibt zu dieser Lösung 45,8 g Äthyimalonat und 30 g des In Stufe A hergestellten Produkts hinzu. Man erhitzt 5 Standen unter Rückfluß und kühlt dann auf Raumtemperatur ab. Man gießt das Reaktionsgemisch in eine gesättigte wäßrige Ammoniumchloridlösung und rührt 1 Stunde, man saugt den gebildeten Niederschlag ab, wäscht ihn mit Wasser und trocknet ihn.

Man reinigt das Produkt durch Umkristallisation aus absolutem Äthanol, wobei 31,6 g Splro-[(3-äthoxy-3,5-androstadlen)-17^,2'-(4'-äthoxycarbonyl-l'-oxacyclopentan-5'-on)] in Form farbloser Kristalle erhalten werden. F=131°C.

Analyse: C27H38O5
Berechnet: C 73,27 H 8,65% Gefunden: 73,0 ' 8,8%

UV-Spektrum (Äthanol):

X_mac bei 284 nm e = 26000

UV-Spektrum (Äthanol):

k_max. bei 284 nm ε = 26000

Das Produkt ist mit demjenigen der Stufe D identisch.

Stufe D: Spiro-[(4,6-androstadier.-3-on)-17/?,2'-(4'-äthoxycarbonyl-l'-oxacyclopentan-5'-on)]

Ausgehend von 5,39 g Natrium und 350 ecm absolutem Äthanol stellt man eine äthanolische Natriurnäthylatlösung her. Man gibt zu dieser Lösung 46,9 g Äthyimalonat und 35 g des In Stufe B hergestellten Produkts hinzu. Man erhitzt 3 Stunden unter Rückfluß und kühlt dann auf Raumtemperatur ab. Man gießt das Reaktionsgemisch in eine Lösung aus 175 g Ammoniumchlorid in 875 ecm Eiswasser und rührt 1 Stunde. Man saugt den gebildeten Niederschlag ab, wäscht ihn mit Wasser und trocknet ihn.

Man reinigt das Produkt durch Umkristallisation aus absolutem Äthanol, wobei 41,3 g Spiro-[(4,6-androstadlen-3-on)-17^,2'-(4'-äthoxycarbonyl-l'-oxacyclopentan-5'-on)] in Form farbloser Kristalle erhalten werden.

Das NMR-Spektrum zeigt, daß dieses Produkt aus fast gleichen Mengen einer jeden der bezüglich des Äthoxycarbonylrestes isomeren Verbindungen besteht. F = 149° C. [Jt]?? = - 25° (c = 0,596 Chloroform).

Beispiel 2

Spiro-[(4,6-androstadien-3-on)-17/J,2'-(4'-carboxy-roxacyclopentan-5'-on)]

:o Man gibt 40 g des in Stufe D des Beispiels 1 erhaltenen Produkts zu 200 ecm einer wäßrigen 2n-Natriumhydroxydlösung. Man rührt die erhaltene Mischung 15 Stunden bei Raumtemperatur, wobei man eine orangefarbene Lösung erhält, die man auf 5° C abkühlt und mit 70 ecm einer wäßrigen 6n-Chlorwasserstoffsäurelösung behandelt. Man saugt den nach 1 stündigem Rühren erhaltenen Niederschlag ab, wäscht ihn mit Wasser und trocknet ihn.

Man reinigt das Produkt durch Auflösen in wäßriger ln-Natriumcarbonatlösung und Wiederausfällung mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure. Man erhält 35,4 g Spiro-[(4,6-androstadlen-3-on)-17/3,2'-(4'-carboxy-r-oxacyclopentan-5-οπ)] in Form farbloser Kristalle. F = Zersetzung beginnend bei 130° C. [a$ = - 35° (c = 1%, ChIoroform).

UV-Spektrum (Äthanol):

X_mm. bei 283 nm e = 25850

Analyse: C23H28O5

Berechnet: C 71,85 H 7,34%

Gefunden: 71,6 7,5%

Stufe D': Spiro-[(4,6-androstadlen-3-on)-17/?,2'-(4'-äthoxycarbonyl-l'-oxacyclopentan-5'-on)]

Man suspendiert 30 g des in Stufe C hergestellten Produkts In 300 ecm Aceton mit einem Wassergehalt von 596. Man gibt zu dieser Suspension 18,2 g chloranll hinzu und rührt 2 Stunden bei Raumtemperatur. Man gießt das Reaktionsgemisch anschließend In 1500 ecm Wasser und extrahiert mit Methylenchlorid. Nach dem Trocknen und Verdampfen des Extraktionslösungsmittels nimmt man den Rückstand In 280 ecm Methylenchlorid auf, filtriert das unlösliche Material ab und behandelt mit AIumlnlumoxyd. Nach dem Entfernen des Aluminiumoxyds und Verdampfen des Lösungsmittels kristallisiert man den Rückstand aus Äthanol um. Man erhält 15,1 g Spiro-[(4,6-androstadlen-3-on)-17/2,2'-(4'-äthoxycarbonyl-l'-oxacyclopentan-5'-on)] In Form farbloser Kristalle. F= 149° C.

Beispiel 3

Spiro-[(4,6-östradien-3-on)-17/?,2'-(4'-äthoxycarbonyl-roxacyclopentan-5'-on)]

Stufe A: S-Ähoxy-spiro-n/J-oxlranylO^-östradien

Man suspendiert 14,3 g Natrlummehtylat In 125 ecm Dimethylsulfoxyd. Man erhitzt 2 Stunden auf 60° C und kühlt dann die Suspension auf 7° C ab. Man gibt 50 ecm Tetrahydrofuran, 26 g Trimethylsulfonlumbromld und 25 g 3-Äthoxy-3,5-östradien-17-on (hergestellt gemäß

■»■-> C. Djerassi, »J. Am. Chern. Soc«, 1953, 75, 4117), gelöst in 150 ecm Tetrahydrofuran, hinzu. Man läßt auf 20° C erwärmen und rührt bei dieser Temperatur 2 Stunden. Man gibt anschließend 1 1 Eiswasser hinzu und saugt den gebildeten Niederschlag ab und wäscht Ihr mit Wasser.

so Man kristallisiert aus Äthanol um und erhält 22,7 g 3-Äthoxy-splro-17/?-oxiranyl-3,5-östradlen in Form farbloser Kristalle. F = 160° C, [a]f = 177° (c = \%, Pyridln).

Analyse: C21H30O2
Berechnet: C 80,21 H 9,62% " Gefunden: 79,9 9,7%

Stufe B: Splro-17/?-axlranyl-4,6-östradlen-3-on

Indem man gemäß Stufe B des Beispiels 1, jedoch ^b0 unter Verwendung von 20 g 3-Äthoxy-spiro-17/J-oxiranyl-3,5-östradlen, verfährt, erhält man nach der Umkristallisation aus Aceton 12,3 g Spiro-17/J-oxlranyl-4,6 östradlen-3-on in Form farbloser Kristalle. F = 184° C lx]ff = - 32,6° (c = 0,5%, Chloroform).

Analyse: C19H24O2
Berechnet: C 80,24 H 8,51% Gefunden: 80,5 8,7%

306 116/6

Stufe C: Spiro-[(4,6-östradien-3-on)-l 7/3,2-(4'-äthoxycarbonyl-r-oxacyclopentan-5'-on)]

Indem man gemäß Stufe D des Beispiels 1 verfährt, jedoch 11g Spiro-17ß-oxiranyl-4,6-östradien-3-on verwendet, erhält man nach der Lmkristallisation aus Ätha-.lol 9 g Spiro-[(4,6-östradien-3-on)-17/?,2'-(4'-äthoxycarbonyl-l'-oxacyclopentan-5'-on)] in Form farbloser Kristalle.

Das NMR-Spektrum zeigt, daß das Produkt aus einer Mischung der bezüglich des Äthoxycarbonyl-Substituenten isomeren Verbindungen besteht.

Durch zwei zusätzliche Umkristallisationen aus Äthanol erhält man ein einheitliches Produkt. F = 185 bis 186° C, [sr]²,⁰ = - 103° (c = 0,5%, Chloroform).

Analyse: C24H30O5
Berechnet: C 72,34 H 7,59% Gefunden: 72,2 7,3%

Beispiel 6

y-Lacton der

21-carbonsäure

10

15 Man gibt in einen Autoklaven 1 g des in Stufe C des Beispiels 3 erhaltenen Produkts, 8 ecm Toluol und 2 ecm Wasser. Man erhitzt unter Rühren auf 140° C, wobei sich ein Druck von 3 kg/cm² einstellt. Man erhitzt unter Rühren weitere 15 Stunden. Man verdampft anschließend das Reaktionsmedium im Vakuum und erhält einen Rückstand, den man in Äthanol unter Rückfluß aufnimmt. Nach dem Abkühlen saugt man die erhaltenen Kristalle ab und wäscht sie mit eisgekühltem Ä.hanol. Man erhält 0,6g des y-Lactons der 19-Nor-i7ßhydroxy-4,6-pregnadien-3-on-21-carbonsäure in Form farbloser Kristalle. F = 244 bis 245° C, [ar],²? = -47° (c = 1%, Chloroform).

20

Beispiel 4

Dinatriumsalz der 2'-Carboxy-3'-[17-(170-hydroxy-3-oxo-4,6-androstadien)]-propionsäure

5 g Spiro-[(4,6-androstadien-3-on)-17^,2'-(4'-carboxyl'-oxacyclopentan-5'-on)] werden in 30 ecm Wasser suspendiert. Man gibt 1,09 g Natriumcarbonat hinzu und rührt 3'/₂ Stunden bei Raumtemperatur. Man kühlt die erhaltene Lösung auf 0⁰C ab und gibt tropfenweise 12 7 ecm einer wäßrigen ln-Natriumcarbonatlösung hinzu, rührt VZ₁ Stunden bei O⁰C und anschließend 24 Stunden bei Raumtemperatur. Man verdampft anschließend das Wasser Im Vakuum bei niedriger Temperatur und erhält einen weißen Feststoff, den man durch Auflösen in Wasser und Ausfällen mit Aceton umkrisiallisiert. Man erhält so 4,28 g des Dinatriumsalzes der 2'-Carboxy-3'-[17-(17/}-hydroxy-3-oxo-4,6-androstadlen)]-proplonsäure in Form cremefarbener Kristalle. F = oberhalb 25O=C.

UV-Spektrum (Äthanol/0,1 n-HCl): λ_ηαχ. bei 284 um ε = 25600

Analyse: C₂JH₂₈Na₂O₆

Berechnet: C 61,87 H 6,32 Na 10,3%

Gefunden: 61,9 6,0 10,4%

Beispiel 7

Stufe A: Spiro-[(7jr-acetylthio-4-androsten-3-on)-17/?,2'-(4'-äthoxycarbonyl-l'-oxacyclopentan-5'-on)]

Man suspendiert 25 g des in Beispiel 1 erhaltenen Produkts in 50 ecm Äthanol, die 6 ecm Thioessigsäure enthalten. Man erhitzt diese Suspension auf etwa 65° C, wobei eine gelbe Lösung erhalten wird, die man 2 Stunden bei dieser Temperatur hält. Nach dem Abkühlen saugt man den erhaltenen Niederschlag ab und wäscht

ihn mit kaltem Äthanol. Man erhält 25,5 g Splro-[(75racetylthio-4-androsten-3-on)-l 7/},2'-(4'-carbäthoxy-l '-oxacyclopentan-5'-on)] in Form farbloser Kristalle.

Das NMR-Spektrum zeigt, daß das Produkt aus

fast gleichen Teilen eines jeden der Isomeren bezüglich des Äthoxycarbonylsubstltuenten besteht. F = 23O⁰C. [x],²,° = - 16° (c - 1% Chloroform).

UV-Spektrum (Äthanol):
k_max. bei 239 nm ε= 19800

Analyse: C₂₇H₃₆O₆S
Berechnet: S 6,56%
Gefunden: 6,5%
45

Beispiel 5

y-Lacton der 17/?-Hydroxy-4,6-pregnadien-3-on-21-carbonsäure

Man gibt in einen Autoklaven 3 g Spiro-[(4,6-androstadlen-3-on)-17/?,2'-(4'-äthoxycarbonyl-r-oxacyclopentan-5'-on)] 57 ecm Toluol und 3 ecm Wasser. Man schließt den Autoklaven und erhitzt unter Rühren auf 120 bis 125° C, wobei sich der Druck auf 3 kg/cm² einstellt. Unter Rühren wird weitere 15 Stunden erhitzt. Man verdampft anschließend das Reaktionsmedium im Vakuum und erhält einen Rückstand, den man durch Zugabe von Isopropyläther umkristallisiert. Man wäscht die erhaltenen Kristalle mit siedendem lsopropyUither und saugt anschließend ab. Man erhält so 2.45 g des -/-Lactons der 17/j-Hydroxy-4.6-pregnadlen-3-on-21-carbonsäure in Form farbloser Kristalle vom F = 163 C. bl;!' = + 2V (c = I¹V, Chloroform).

Das Produkt ist mit demjenigen des Beispiels 5 iden-Stufe B: y-Lacton der 7a:-Acetylthio-17/i-hydroxy-4-pregnen-3-on-21 -carbonsäure

Man gibt in einen 1 1-A"utoklaven 10 g Spiro-[(7a> acetylthio-4-androsten-3-on)-17/3,2'-(4'-äthoxycarbonylr-oxacyclopentan-5'-on)], 200 ecm Toluol und 20 ecm Wasser. Man schließt den Autoklaven und erhitzt unter Rühren auf 130 bis 14O⁰C, wobei sich ein Druck von etwa 4 kg/cm² einstellt. Man erhitzt unter Rühren weitere 16 Stunden. Man verdampft anschließend das Reaktionsmedium Im Vakuum und erhält einen gummiartigen Rückstand, den man durch Zugabe von 1 Volumenteil Methanol kristallisiert. Man saugt die Kristalle ab

und kristallisiert sie zweimal aus Methanol um. Man erhält so 6,8 g des y-Lactons der 7»-Acetylthlo-17/ihydroxy-4-pregnen-3-on-21 -carbonsäure in Form farbloser Kristalle, die bei 140° C und nach dem Wiederfestwerden bei 210° C schmelzen, [x]}? = - 35° (c --- 1%, ChIo-

65 rofonn).

UV-Spektrum (Äthanol):

A_mav. bei 239 nm c = 19500

Beispiel 8

Stufe A: Spiro-[(7cr-acetylthio-4-androsten-3-on)-17/J,2'-(4'-carboxy-r-oxacyclopentan-5'-on)]

Man löst 5 g des in Beispiel 2 hergestellten Produkts in 10 ecm Thioesslgsäure auf und erhitzt 1 Stunde unter Rückfluß. Nach dem Abkühlen gibt man 10 ecm Methanol mit einem Wassergehalt von 10% hinzu und gießt die erhaltene Lösung In 100 ecm Wasser. Man rührt V₂ Stunde bei Raumtemperatur und saugt dann den erhaltenen Niederschlag ab, wäscht ihn mit Wasser und trocknet ihn.

Man reinigt das erhaltene Produkt durch Auflösen in einer wäßrigen Natrlmbicarbonatlösung, Filtrieren und Wiederausfäüen mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure. Man erhält so 4,2 g Splro-t(7a-acetylthio-4-androsten-3-on)-l 7/3,2'-(4'-carboxy-r-oxacyclopentan-5'-on)] in Form farbloser Kristalle. F: Decarboxylierung oberhalb 16O⁰C. Mo⁰ = - 7° (c = 1%, Chloroform).

Analyse:
Berechnet: C 65,19
Gefunden: 64,9

-7,00
7,1

S 6,96%
7,1%

Stufe B: y-Lacton der 7cr-Acetylthio-17/J-hydrocy-4-pregnen-3-on-21 -carbonsäure

Man gibt In einen Kolben 1 g Spiro-[(7ar-acetylthio-4-androsten-3-on)-17^,2'-(4'-carboxy-r-oxacyclopentan-5'-on)] und erhitzt den Kolben mit Hilfe eines auf 185° C gehaltenen Bades. Man stellt eine sehr deutliche und schnelle Decarboxylierung fest. Man kühlt ab und löst den erhaltenen gummiartigen Rückstand unter Rückfluß in heißem Methanol auf. Bei der Abkühlung tritt eine Kristallisation ein. Man saugt die Kristalle ab und kristallisiert sie aus Methanol um. Man erhält so 278 mg des γ-Lactons der 7ar-Aectylthio-17/?-hydrocy-4-pregnen-3-on-21-carbonsäure in Form farbloser Kristalle vom F = 210° C. [crß° = - 34° (c = \%, Chloroform).

UV-Spektrum (Äthanol):

X_m„ bei 238 nm ε= 18900

Beispiel 9

Stufe A: Spiro-[(7a-acetylthio-4-östren-3-on)-17/?,2'-(4'-äthoxycarbonyl-l'-oxacyclopentan-S'-on)]

Indem man wie in Stufe A des Beispiels 7 verfährt, jedoch ausgehend von 7 g des in Beispiel 3 erhaltenen Produkts, erhält man 7,1 g Spiro-[(7sf-acetylthio-4-östren-3-on)-17/3,2'-(4'-äthoxycarbonyl-r-oxacyclopentan-5'-on)] in Form farbloser Kristalle.

Das NMR-Spektrum zeigt, daß das Produkt aus einer Mischung der Isomeren bezüglich des Äthoxycarbonylrestes besteht. F = 210° C.

UV-Spektrum (Äthanol):
Λ-max. bei 238 nm

e = 20700

Analyse: H₂₆H₃₄O₆S

Berechnet: C 65,80 H 7,22 S 6,76%

Gefunden: 65,8 7,5 6,7%

Stufe B: ;-Lacton der 19-Nor-7ar-acetylthio-17^-
hydroxy-4-pregnen-3-on-carbonsäuie

Indem man wie in Stufe B des Beispiels 7 verfährt, jedoch ausgehend von 2 g des in der vorstehenden Stufe A erhaltenen Produkts, erhält man 1,4 g des y-Lactons der ^-Nor^cr-acetylthio-n/i-hydroxy^-pregnen^- on-21-carbonsäure in Form farbloser Kristalle. F = 126 bis 127° C und dann nach dem Wiederfestwerden 185° C.

I*],²,⁰ = - 73,5° (c = 0,5%, Chloroform).

UV'Spektrum (Äthanol):

k_maxbt\ 237 nm c= 19750

(Π)

R₃O

(m)

(VII)

-CH₂-CH₂-COOM

21 22

R₃O

R₃O

(III, mit R₂ = CH₃) (IX)

COOalc

(Vl, mit R₂ = CH₃)

Claims (8)

1. Patentansprüche: 1. Steroidspirolactone der allgemeinen Formel VI

   COOalc

   10

   worin R₂ ein Wasserstoffatom oder einen Methylrest und alc einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeuten.
2. 2. Verbindung der Formel VI'

   (VI')

   COOC₂H₅

   25
3. 3. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel VI

   30

   (VI)

   COOaIc

   worin R₂ ein Wasserstoffatom oder einen Methylrest und alc einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeuten, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel II

   R₃O

   45

   (H)

   worin R, einen Alkylrest mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen bedeutet und R₂, wie oben definiert ist. In Anwesenheit eines basischen Agens mit einem Trimethylsulfoniumhalogenid der Formel (CH₃)₃S⁺ X , worin X ein Brom- oder Jodatom bedeutet, umsetzt, die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel III

   R₃O

   50

   55

   60

   (ΙΠ)

   worin R₂ und R₃. wie oben definiert sind, mit einem Dehydrierungsmittel behandelt, die erhaltene Verbindung der aligemeinen Formel IV

   65

   worin R₂, wie oben definiert ist, in Anwesenheit eines basischen Agens mit einem Malonsäuiealkylester der Formel V

   alc —O —C —CH₂-C —O—alc (V)

   worin alc einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen darstellt, behandelt und eine Verbindung der Formel VI erhält.
4. 4. Abänderung des Verfahrens gemäß Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß man bereits eine Verbindung der allgemeinen Formel 111, worin R₃ wie in Anspruch 3 definiert Ist, und R₂ jedoch stets einen Methylrest bedeutet. In Anwesenheit eines basischen Agens mit Malonsäurealkylester der allgemeinen Formel V, wie im Anspruch 3 definiert, umsetzt, die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel IX

   COOaIc

   worin R₃ einen Alkylrest mit 1 bis 2 Kohlenstoffatomen un alc einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet, mit einem Dehydrierungsmittel behandelt und eine Verbindung der allgemeinen Formel VI, worin R₂ stets einen Methylrest darstellt, erhält.
5. 5. Verwendung der Verbindungen gemäß Anspruch 1 zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel 1

   SCOR,

   worin R, einen geradkettigen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und R₂ ein Wasserstoffatom oder einen Methylrest bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man die Verbindungen der allgemeinen Formel VI

   (VI)

   \ 1 COOaIc

   worin R₂ ein Wasserstoffatom oder einen Methylrest und alc einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeuten,
   Λ) mit einer Thioalkansäure der allgemeinen Formel R₁COSH, worin Ri einen geradkettigen Alkylrest mil 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet, umsetzt und die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel X

   (X)

   COOaIc

   SCOR₁

   worin alc, R, und R₂ wie vorstehend definiert sind, diTch Erhitzen in neutralem Mi'.leu und in Anwesenheit von Wasser in Verbindungen der allgemeinen Formel I umwandelt, oder

   B) die Verbindungen der Formel VI, worin R₂ und alc wie oben definiert sind, alkalisch hydrolysiert und anschließend ansäuert, die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel VII

   COOH

   (VH)

   COOH

   b) mit einer äquimolaren Menge einer Alkalibase behandelt, das erhaltene entsprechende Alkalisalz der allgemeinen Formel XI

   (XD

   ^s· 1 COOM

   worin R₂ wie vorstehend definiert ist und M ein Alkalimetallatom darstellt, mit einer Thioalkansäure der allgemeinen Formel R]COSH unter Bildung der Verbindungen der vorstehenden allgemeinen Formel X' behandelt oder

   c) mit einem Überschuß an Alkalibase behandelt, die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel VIII

   25

   30

   worin R₂ ein Wasserstoffatom oder einen Methylrest bedeutet,

   a) mit einer Thioalkansäure der Formel RiCOSH, worin R| wie vorstehend definiert, behandelt unter Bildung von Verbindungen der allgemeinen Formel X'

   60

   (vm)

   "CH₂-CH₂-COOM

   COOM

   worin R₂ wie vorstehend definiert ist und M ein Alkalimetallatom darstellt, mit einer Thioalkansäure der allgemeinen Formel R,COSH unter Bildung der Verbindungen der vorstehenden allgemeinen Formel X' behandelt,

   und die gemäß a), b) und c) erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel X' durch Erhitzen in die Verbindungen der allgemeinen Formel I umwandelt.
6. 6. Verwendung gemäß Ansprucch 5 zur Herstellung der Verbindung der Formel Γ

   ^SCOCH₃

   dadurch gekennzeichnet, daß man die Verbindung der Formel VI'

   mit Thloesslgsäure CH₃COSH behandelt und die erhaltene Verbindung der Formel X A

   45

   '-SCOCH₃

   in neutralem Milieu und in Anwesenheit von Wasser durch Erhitzen auf eine Temperatur zwischen 80° C und 160°C in die Verbindung der Formell' umwandelt.
7. 7. Verwendung der Verbindungen gemäß Anspruch 1 zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel C

   worin R₂ ein Wasserstoffatom oder einen Methylrest bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man die Verbindungen der allgemeinen Formel VI

   COjalc

   (VI)

   durch Erhitzen in Gegenwart von Wasser in Verbindungen der Formel C überführt
8. 8. Verwendung gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Überführung der Verbindungen der Formel VI in Verbindungen der Formel C durch Erhitzen in Gegenwart von Wasser bei einer Temperatur durchgeführt wird, die zwischen 100 und 160° C liegt.