DE2353998A1

DE2353998A1 - Antibiotika und verfahren zu deren herstellung

Info

Publication number: DE2353998A1
Application number: DE19732353998
Authority: DE
Inventors: Yukio Miyazaki; Junsaku Nagatsu; Hideo Saito; Mitsuo Shibuya; Aido Sugawara; Yoshiaki Tanaka
Original assignee: Kaken Chemical Co Ltd
Current assignee: Kaken Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1972-10-27
Filing date: 1973-10-27
Publication date: 1975-05-07
Also published as: DE2353031C2; DE2353031A1

Description

1A-576 . ,.■"'_"..- 2?. Oktober 1975

CHEMICAL CO., LTD., Tokyo, Japan

Antibiotika und Verfahren zu deren Herstellung (Zusatzpatentanmeldung zu P 22 -_r 53 031.0)-

Die Erfindung betrifft neue Antibiotika sowie ein Verfahren zur Herstellung derselben. ■ ' , ■ '

Es ist Aufgabe der Erfindung, neue Antibiotika, zu schaff entweiche gegen Mikroorganismen und.insbesondere gegen. Coccidien wirksam sind, sowie ein Verfahren zur Herstellung derselben.

Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch ein Antibiotikum Salinomycin der nachstehenden Pormel gelöst

• _Λο OH

/^;ΐ1

ι- i«,

oder durch pharmazeutisch verträgliche Salze oder Ester desselben. V ' " " ■ - ^: ' - '; I '

Das Antibiotikum Salinomycin wird erfindungsgemäß durch

: 509819/1131

Kultivierung von St3£ptomyces albus 80,614 in einem Medium und Isolierung des gebildeten Salinomycins durch Lösungsmittel-Extraktion aus d/em Mycel-Kuchen und nachfolgende Reinigung hergestellt. Das-Solinomycin dient als Anticoccidium und insbesondere' auch zur präventiven und therapeutischen . Behandlung von Geflügel (Hühner).

Der Salinomycin erzeugende Mikroorganismus Streptomyjoes albus 80,614 wurde am Fermentation Research. Institute of the Agency of Industrial Science and Technology of Japan unter der Bummer 419 hinterlegt.

Zur Kultivierung von Streptomyces albus 80,614 können die gleichen Verfahren wie bei der Kultivierung von Actinomyceten angewandt werden, insbesondere die aerobe Rührkultur im industriellen Maßstab. Die Temperatur der Züchtung liegt vorzugsweise bei 25 ⁰C bis 30 ⁰C. Die Kulturmedien können herkömmlichen Aufbau haben wie bei der Kultivierung von Actinomyceten. Es sind Kohlenstoffquellen, Stickstoffquellen, anorganische Salze, geringe Mengen organischer Komponenten und Antischaummittel erforderlich. Die größte Ansammlung von Salinomycin wurde nach 72 -120 h nach Beginn der Kultivierung beobachtet.

Die Isolierung von Salinomycin kann durchgeführt werden,. indem man die charakteristischen Eigenschaften von Salinomycin ausnützt. Das Salinomycin ist in verschiedenen organischen lösungsmitteln löslich. Daher wird es vorzugsweise durch Lösungsmittelextraktionsverfahren isoliert. Salinomycin findet sich sowohl im Mycel-Kuchen als auch im Piltrat. Somit wird in Gegenwart eines Lösungsmittels wie Butylacetat, Aceton oder Chloroform umgerührt, wobei der Mikroorganismus autolysiert wird. Das Salinomycin in dem Körper wird durch das organische Lösungsmittel extrahiert.

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Die Lösungsphase wird von der wässrigen Phase und der festen Phase abgetrennt. Die Salinomycin-Lösung wird im Vakuum konzentriert und durch Säulenchromatographie mit einer Aluminiumoxyd-Packung gereinigt.

Als Entwickler kommen Äthylacetat, Hexan oder eine Mischung derselben in Frage. Das Eluat wird fraktioniert um die Fraktionen mit großer antibiotischer Aktivität abzutrennen. Diese Fraktionen werden im Vakuum eingeengt. Die Reinigung wird unter Anwendung'der Säulenchromatographie mit Gel-Filtrationsmaterial Sephadex 3JH-2O wiederholt. Als Entwickler wird vorzugsweise Aceton eingesetzt. Das Eluat wird fraktioniert, wobei die aktiven Fraktionen abgetrenntund im Vakuum eingeengt werden. Dabei erhält man ein pulverförmiges, gereinigtes Salinomycin.

Streptomyces albus 80,614 hat einelange Hyphe, welche

nicht in Stäbchen oder Kugeln unterteilt ist. Das Luftmycel des Streptomyces albus 80,614 ist im wesentlichen gerade und in einigen Fällen verästelt mit Sporophoren mit 2 bis 3 Spiralwindungen. Die Oberfläche der Sporen ist glatt und ohne Wulst und die Sporengestalt ist lang ellipsoid oder zylindrisch mit den Abmessungen 0,5 - 1,0 ρ χ 1,0 - 1,5 tu

Streptomyces albus 80,614 hat die folgenden charakteristischen Eigenschaften:

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Physiologische Reaktionen von Streptomyces albus 80,614

lest

Ansprechen

Milchkoagulation Milchpeptonisierung Melaminbildung Tyfosinasereaktion Nitratreaktion Stärhehydrolyse Gelatineverflüssigung Cellulosezersetzung Chromogenität

negativ negativ negativ negativ positiv (manchmal negativ) positiv positiv negativ negativ

Sauerstoffbedarf

aerob

optimale. Wachstumsbedingungen pH 5,5 - 8,2

Temperatur 21 - 37

Verwertungsmuster von Kohlenstoffquellen durch Streptomyees

albus 80,614

(Pridham & Gottlieb's Grundmedium) ++: Glucose, Fructose, Galactose, Mannit, Xylose,

Cellobiose, Melibiose, Inulin + : Lactose, Trehalose, Stärke

- : Maltose, Mannose, Saccharose, Salicin, Arabinose

- : Melizitose, Inosit, Dulcit, Sorbit, Raffinose,

Adonit, Rhamnose

**: stark positiv

£ : zweifelhaft positiv

+: positiv -: negativ

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Im folgenden seien die physiko-chemisehen Eigenschaften, des Salinomyeins (Na-SaIz) angegeben:;

(1) Farbloses schwach saures Pulver: Schmelzpunkt 117

(2) Optische Drehung:

Schmelzpunkt 117 - 118 ⁰C

Γ Ί² ■■■ -

α- / = -25 ⁰C (c = 1, Methanol) .■ ^: . - -

(3) Löslichkeit:

Löslich in Alkoholen, Estern, Chloroform·', Äther, Tetrachlorkohlenstoff und Hexan; unlöslich in Viasser.

(4) Stabilität: ' :\ \ Stabil bei pH 7 - 9, leicht instabil bei pH unterhalb 5,

(.5) Farbreaktionen:'. . _r i ■ .

Negativ bei Lemieux-Reaktion, Kaliumpermanganat-Reaktion, liinhydrin-Reaktion, Eisen-III-Chlorid-Reaktion, und Fehling-Reaktion; positiv bei Jod-Reaktion mit rötlich-brauner Färbung.

(6) Molekulargewicht: Natriumsalz: 772

Säure: ■·" 750 X7)- Summe η formel:

^C42^Hö9^On^Nf ^bzw· ^C42^H7O°11

(8) Ultraviolett-Spektrum: , ■ ·

Siehe Pig. 1. Die ausgezogene Liniei_= zeigt das Spektrum in 0,01 N-HGl-saurer Methanol-Lösung und die gepunktete Linie zeigt das Spektrum in 0,01 N-ITaOH Methanoi-LÖsung.

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(9) Infrarot-Absorptions-Spektrum: Siehe Pig. 2.

(10) AntimikroMelles Spektrum:

Die minimalen Hemmkonzentrationen (mcg/ml) sind in der Tabelle angegeben.

Bacillus subtilis	2,0
Bacillus cercus	* 2,0
Bacillus circulans	4,0
Bacillus megaterium	) 100
Staphylococcus aureaus	2,0
Staphylococcus epidermidis	4,0
Sarcina lutea	8,0
Micrococcus flavus	8,0
Micrococcus luteus	4,0
Mycobacterium smegmatis ATCC	607 8,0
Macobacterium phlei	4,0
Macobacterium avium	8,0
Escherichia coli	>100
Klebsiella pneumoniae	)100
Proteus vulgaris	)100
Xanthomonas oryzae	64
Pseudomonas aeruginosa·	>100
Piri'eularia eryzae	16
Alternaria Kikuchiana	32

Duamycin, K-178, K-358, X-206, ÜTigericin, Monensin A. B.C, und Dianemycin oder dgl. haben bestimmte ähnliche Eigenschaften.
Diese Antibiotika haben jedoch einen anderen Schmelzpunkt,
sowie ein anderes Infrarot-Spektrum und andere Analysenwerte. Das Salinomycin zeigt eine maximale Ultraviolett-Absorption bei 220 mu und bei 285 mu wenn in sauerer Methanol-Lösung gemessen wird.

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Herstellung des Salinomyeins

Streptomyees albus 80,614 (J¹ERM-P No. 419) wurde zur Impfung von 100 1 eines flüssigen Mediums mit 2 % Glucose-, 1 $ Stärke, 2,5 1° Soyabohneimehl, 0,2 $bierhefe, 0,2 % Fleischextrakt und 0,2 ^ITatriumchlorid in einem 200 1-Edelstahl-Tank bei pH 7,0 verwendet und die Kultivierung wurde "bei 27 ⁰C während 84 h unter aeroben Bedingungen durchgeführt. Die Luft wurde • in einer Geschwindigkeit von 100 1/mih und bei einer Rührgeschwindigkeit von 250 Umdrehungen pro Minute eingeleitet. Nach der Kultivierung wurde das erhaltene Produkt auf pH 8 eingestellt, indem NaOH zugegeben wurde, worauf ferner 2 % Diatomeenerde hinzugegeben wurden. Danach wurde der Ansatz abfiltriert. 83 1 des Filtrats wurden mit 50 1 Butylacetat vermischt und danach zweimal extrahiert.

Andererseits wurde der Pilzkörper mit 30 1 70^-igem Aceton extrahiert und die Lösung wurde im Vakuum eingeengt und mit 10 1 Butylacetat extrahiert, nachdem das Aceton abgezogen wurde. Die Lösung wurde zu dem Filtrat gegeben und die Mischung wurde mit Wasser gewaschen und im Vakuum auf 0,4 1 eingeengt. Die konzentrierte Lösung wurde durch eine mit 3 1 aktiviertem Aluminiumoxyd gepackte Säule geschickt, um die Komponenten zu adsorbieren. Die Mischung von Äthylaeetat und n-Hexan (4:1) wurde zur Entwicklung und zur Abtrennung der Fraktionen mit aktiven Komponenten hindurchgeleitet und die Fraktionen wurden im Vakuum eingeengt. Die konzentrierten Lösungen wurden durch Säulenchromatographie an Sephadex LH-20 unter Verwendung von Aceton als Entwick*- lerlösungsmittel gereinigt. Die Chromatographieehe Behandlung wurde zweimal wiederholt, wobei 8,5 g'eines weißen pulverigen reinen Salinomyclns erhalten wurden.

Es wurde gefunden, daß sich Salinomycin ausgezeichnet als Anticopcidium insbesondere für Geflügel (Hühner) eignet. Es ist ein großes Problem bei Geflügel (Hühnern) Coccidienerkran-

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kungen zu verhindern, da es resistente Stämme gegen herkömmliche Mittel wie Anti-Thiamin, Chinolinverbindungen und Schwefel-Mittel gibt. Es wurde nun gefunden, daß Salinomycin sich ausgezeichnet für die vorbeugende und therapeutische Behandlung auch gegen resistente Stämme von Coccidium eignet.

Das gegen Coccidien wirksame Mittel wird vorzugsweise durch Vermischen von Salinomycin mit einem physiologisch nicht toxischen Festkörper oder einem Flüssigkeitsträger unter Ausbildung eines konzentrierten Gemisches hergestellt, welches der Nahrung oder der Tränke für Geflügel (Hühner) "beigemischt wird. Als fester Träger kommen Weizenmehl, Soyabohnenmehl, entölte Reiskleie, Talkum, Kaolin, Kreide und Diatomeenerde in Präge. Als flüssiger Träger kommen physiologische Salzlösungen, destilliertes Wasser und physiologisch nicht giftige organische lösungsmittel oder dgl« in Präge. Es ist auch möglich, geeignete Zusatzstoffe wie Emulgatoren, Dispersionsmittel, Suspensionsmittel, Benetzungsmittel, Konzentrationsmittel, Geliermittel und dem aktiven Bestandteil anhaftende Beschleuniger wie Soyabohnenöl zuzusetzen.

Die gegen Coccidien wirksame Mischung liegt vorzugsweise in fester Form vor. Als Träger kommen organische und anorganische Futterstoffe in Frage. Der aktive Bestandteil wird wachstumsfördernden Futterstoffen oder Futterstoffen für Legehühner oder Grillhühner durch Rühren, Schütteln oder Mahlen zugemischt. Der aktive Bestandteil kann den Futterstoffen in Form eines pulverigen Konzentrats mit einem physiologisch ungiftigen Träger zugemischt werden. Wenn das Mittel in flüssiger Form für die orale Verabreichung bestimmt ist, so ist es bevorzugt, das Salinomycin in einem physiologisch nicht-giftigen Träger wie Wasser zu dispergieren. Es ist möglich, andere Anticoccidienmittel beizumengen, sowie wachstumsfördernde Mittel für Yögel und.wachstumsfördernde Mittel für Legehühner. Es ist bevorzugt, mehr als 0,0001 Gewichtsprozent Salinomycin vorzusehen. :

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Die,Menge an Salinomycin welche zur vorb'.engenden öder therapeutischen Bekämpfung von Coecidium bei Geflügel (Hühnern) erforderlich, ist, liegt im Bereich von 0,001-0,05 Gewichtsprozent, bezogen auf das Futter, wobei die vorbeugende therapeutische Behandlung von Geflügel (Hühnern) gegen Eimeria tenella, in folgender Weise unter Verwendung von Salinomycin durchgeführt werden kann.:

Bei dem erfindungsgemäßen pharmazeutischen Salz handelt es sich vorzugsweise um ein Natrium-, Kalium-,; Calcium-, Magnesium- oder Ammoniumsalz. Der pharmazeutisch verträgliche Ester ist vorzugsweise ein niederer Alkylester öder ein Benzylester. Der niedere Alkylester umfaßt vorzugsweise 1 - 8 und insbesondere 1 -4 Kohlenstoffatome.

Der Ester kann nach, jedem bekannten Verfahren hergestellt werden, welches das Antibiotikum nicht angreift und welches insbesondere nicht zu einer Aufspaltung der Ketalringe führt oder zu einer Reaktion im Bereich der Cärbonylgruppe. Das · erfindungsgemäße Antibiotikum (Säure) ist bei pH 7 -9 stabil. Daher sollte dieser pH-Bereich beiallen Veresterungsmethoden eingehalten werden. Bevorzugt ist die Veresterung unter Verwendung wasserbindender Mittel, durch die das Veresterungswas- . ser gebunden wird. Hierzu eignen sieh verschiedene adsorptiv " wirkende Salze, wie Calciumcarbid, Galciumhydria und Caleiumsulfat, Magnesiumsulfat oder Kupfersulfat oder dgl. Ferner ■-eignet sich.in hohem Maße auch Carbodiimid oder U,N'-Carbonyl-^:, diimadazol. Mit letzteren beiden Verbindungen wird das Wasser' chemisch gebunden. Diese Methode erlaubt die Veresterung von säureempfindlichen sonst nicht veresterbaren Säuren.

Unter Umständen kann man auch amphotere Hydroxide zur Veresterung heranziehen oder eine Umsetzung: des Natriumsalzes '· der Carbonsäure mit einer Verbindung-der Formel ClSOg-R · (bei säureempfindlichen Säuren geeignet) durchführen. -.

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- ίο -

Schließlich sei auch noch die Silbersalzmethode erwähnt, "bei der ein Silbersalz der Säure mit einem Halogenalkyl in Gegenwart von Pyridin oder Triäthylamin oder dgl. umgesetzt wird, oder eine'Umsetzung mit Alkyl jodid in Gegenwart von

Auch die Salze und Ester haben hervorragende antimikrobielle Eigenschaften.

Test 1

Hähnchen (Highline) werden mit Oozysten von Eimeria tenella, welche resistent gegen 40 ppm Methylbenzoat (methylbenzo quate) sind in einer Menge von 7,2 χ 10 Oozysten.pro Hähnchen infiziert. Die Hähnchen (14 Tage nach Geburt) werden in zwei Gruppen Unterteilt. Das in Tabelle 1 angegebene Putter wird mit.0,01 fi des Salinomycins, welches mit Soyabohnenmehl verdünnt war, vermischt und in bestimmten Dosen der ersten Gruppe verabreicht. Der zwei- ten Hähnclien-Gruppe wurde kein Salinomycin gegeben.

50 98 19/113,1

- Ίΐ - ■ ,' ■ ■ -

Tabelle, i .;»··: '...;'

Zusammensetzung des Futteral . . ($) ' ,

Maismehl . 41_t81

EG-Putter (Weizenmehl 85 f°)

(Talg . .15 ^) ' 25

Soyabohnenmehl · .20

Piscüiniehl mit Löslichem / 8

Alfalfamehl . 3

Tricalciumphosphat 1

Calciumcarbonat · 0,2

Salz ■-.'■■■■ ' .. 0,45^

Yitaiain ADE 0,05

Vitamin B-Oruppe 0,1 .

anorganische. Komponenten .. ' 0,1

KetMonin ' 0,0?

Soyabolinenmehl lait ,Antibiotikum

vorgeinischt 0,14

100

Das Salinomycin wurde kontinuierlich in bestimmten Dosen von lag vor der Infektion mit den OosyBten an bis zum Ende des Tests der ersten Gruppe verabreicht. Die Hähnohen wurden 15 2age nach der Geburt mit den Ooaysten infiziert. Alle Hähnchen wurden nach 9 Tagen nach der Infektion seaiert· Die 2estergebnisse sind in den !Tabellen Z und 3 .zusarciaengeötellt.

(a) Gewichtszunahme und Sterblichkeit.

Das Gewicht der Hähnehen wurde sur Zeit der Impfung und am Ende des 2esta gemesoen und die Gewichtszunahme viTurde berechnet, v/obei das erste Geviioht als 100

angenommen wurde. . /: ■ ' · ;

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- 12 -■ · ' ·. ■ ■

("b) O.P.G. (Oozysten pro Gramm kof } D@r O«P.G_#-Wert wurde mit der Plankton Zähltafel dursh Beobachtung des Paeces nach 7 Tagen nach Impfung festgestellt.

(c) Paeces-Zustand

Der I*aeoee-Zustand wurde morgens und abends "beobachtet.

(d) Sektion

Die Erkrankung des Darms wurde festgestellt und die Anzahl der Oozysten im Duodenum, im Jejunuia, im DUnndarm und im Blinddarm wurde festgestellt. Die Zahlen in Säbel-. Ie 3 geben die Anzahl der untersuchten Hähnchen an« - Die + und - Zeichen (~r-bis ++++) beziehen sich auf die folgenden Zustände:

normal
♦ Gestalt dee Caecum normal

leicht flüssiger und gelblicher Inhalt

die Schleimhaut dee Blinddarms ist teilweise

leicht erweitert und weiBlich ++ Die Gestalt des Blinddarms ist im wesentlichen normal die Schleimhaut des Blinddarms ist täbBV die gesagte

Oberfläche erweitert

im Inhalt des Blinddarms findet sich k©in Blut

die Solileisumut ist gelblich

Auf der Sslileisahaut des Caecums finden sich

äleine Zahl weißer toter Stellen und blutiger

Stallen

*♦+ als® Atrophie raä Reformation des Caeoums 1st

ist ©twas

visa &®Ia η©%Μ8ιΧ®%. Inhalt (gefunden, ■ D®r lmka.1%

2353ÖÖ0

♦++♦

Das Caecum ist "bemerkenswert verdickt und brüchig. Eeι finden sich blutende Jleokeso Die Krankheit erreicht die Basis des Blinddarms,

jedoch nichts das Rectum·

eine Atrophie und Reformation des Caeoume. iat

klar erkennbar·

Bas Caecum hat eine wurstfUrmige Gestalt und die Länge des Caecume ist gleich oder geringer

als die des Eeotums,

Die anderen Beobachtungen stimmen mit denen ·

unter.+++ ttberein. .··■-..

Tabelle 2

Gruppe Zahl Gewichts— Todeszunahme fälle

(56) <5i>-^:.^:- Sterb- «

. lieh- -' keit

0. P. G·
<x 10⁴)

Eaeoos-Zustand

9

Tage Tage Tage
Abend 4bend Morgen

1. Gruppe 11 106,4-(Salinomycin

0,32

Faeces normal (in einoai Fall Faeces blutig "-Sa-locli Krholun^ olutretbnd)..

SiGrupp© 10

(ohne
Salinomycin)

91.2

70

18,24 14,88 0,32

Faeces in allen Γα] ■ nach 7 .2a weioh und v:x etvra CO j» blutig

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!Tabelle

«η
ο
co
οο

Sektion der	Hähnohen (außer toten Hähnchen)	der	Oosysien	Erkranlcung des Darms, außer ■ Caectim
Gruppe Zahl	Erkranlcung des Ca scums Zahl	-j·+	+++ ■<·
	- ·*■ ++ +++ ++++ — +

1· Gruppe 10

(Salinomycin)

2i Gruppe 3

(kein Salinomycin)

9 10 0

2 0

keine

0 0 0

0 '

keine

CD CD OO

Σβ seigt sieh somit der auegeseichnete therapeutische Effekt des Salinomycins am "Paeces-Zusir.and, am O₉P₄₁G., an der Gewicht Gzunähme, an der Sterblichkeit und an den Sektionsbofunden "bei der Gruppe mit SalinomyGin^Yerabreichung. -

Test 2 ■".-■■■■■ '■■'. - -^; - ' ^: ■"■;■-■

Neugeborene KUlcen (weißes Leghorn) wurden ialt Oosypten von Eimeria tenella in einer Henge" von 5 3C 10 Oosysten pro Küken infiziert« Die Küken (21 Sage naok Geburt)-.wurden lh vier Gruppen unterteilt. Bas Putter'gemäß Sabelle 1 wurde mit Salinomycin vermischt und O₉OOI 5> des SaIiaomycins wurde der ersten Gruppe ständig von_: 5 Tagen vor"der; Impfung mit den Oozysten an verabreicht«, Os01 $ des Ssiinomycins wurden kontinuierlich der sweiten Gruppe vom Impftag an verabreicht» 0,01 $ eines handelsUblishen iati^Shlamins (Aiaprolium) (I=- f(4~Araino°2-propyl^5-pyximidi3iyl)-ine:thyl J --2-picoliniuni-chlorid) wurden der 3₀ Gruppe ■ vom &_ö Sag '.vor der Impfung mit■.Oozysten an ständig TerabreieMo' De^ -4o ©ruppe. vmrde als Kontrollgruppe kein Araneimittel

Jede Gruppe \vurde 21 iDage nach Geburt mit Ooaystea---infiziert»' Alle ICüken wurden 7 Sage nach Impfung sezierte. Die Sestergeb-. nisse sind in Tabellen A■" und 5 "asusamiaeageotellto..Die 2ests sind die gleichen wie bei tabelle 1 /-und die Zahlen und. drücke Bind die gleichen wie bei Yersuoh I₀ · ..

U- I. w / I I■

Tabelle 4

cn

CO 00

CD Ca)

Gruppe Zahl Menge des aktiven Be standteils (*)	Gewichts zunahme (2)	Sterblich keit (#)	O.P.G. (7 Tage)	Faec es-Zus tand
\|l Gruppe" 10 0,001 (Salinomycin vor d.Impfling)	144,8	O	O	Faeces normal (in einem Fall Faeces fleischig)
2. Gruppe (Salinomycin von der Im pfling an) 10 0,01	144,4	O	O	Faeces normal
3^:· GruT>pe. (Vergleichs- 10 0,01 Gruppe)	137,7	20	2,1 χ .1	β in swei Fällen Faeces 0^p blutig
4· Gruppe 10 (Blind- Gruppe)	135,2	60 ·	11,8 χ	10⁴" in allen Fällen Faeces blutig und fleischig

K)

"CD OO

	Zahl	-'	Tabelle- 5	++■_	+++	ies Caecums	■ Erkrankung des Danas außer Gaeoum
	10 10 8 4	9 8 0		0 0 2 i	Ö 0 3	++++: ..;,'	keine - '■-- keine -'".'__ keine keine
Gruppe			Erkrankung <			O O Q O
			+"
I.Gruppe 2,Gruppe 3.Gruppe 4"· Gruppe			1.- 2 3 0
Tßst 3

Gemäß Test 1 wurde jede Gruppe mit Oozystea geimpft und @e v/urde die jeweilige Konzentration an Salinomyqin verabreicht. Die Ergebnisse sind in Tabelle β ausämmengestellt, zusainmöa mit Vergleichstests. Das-Alter der Vögel betafug 4 Wochen»

5 0981 9/ 1131:

Tabelle 6

Wirkung	verschiedener Konsentrationen von Salinomycin bei	Konzentration α»Mittels im. !Futter (p_ pm)	10	No,infizier te OoZysten	Dauer d, Behandl. • (Tage)	Infektion mit	Ho. d. toten Vögel	E. tenella	χ 10°	χ 10"*
- (Ürüppi	Mittel	^aiiadmycin 1	50	5x10^	8	ilo-d. toten Vögel	4	OPG * _s	7,8x1O⁶	χ 10⁵
	H	75	M	π	10	5	5,3	7 Λ	χ 10⁵
	'Jt ■	100	ti	3!	10	4		5,8	χ 10
3	η	125	π	η	10	O	no	X 10^
4 ■	η .	. 125	„..	\	10	O	.8,7	χ 10
5 ■ / '	η	Vergl. Vor such geisüft --	tr	8! '	10	O	5,8
6 '	Clopidol		ti	8«	JO	O	7 9
7	.ungeinrpft -	B	9t	10	7
8		81	,10	O
9	10

* Die tägliche Oozysten-Zählung erfolgte nach 8 !Tagen nach Impfung.
Die Zahl besieht sich auf die Anzahl von Oosysten pro Gramm !Faeces«,
Die angegebene Zahl ist die tägliche maxiiaale Qozysten-Anzahl.

<D CX) CO

!Tabelle6

	5	ν	-	Schädigung des	Gaeouias	, ■++♦+■
Gruppe ■ ITo. ·	6			^; .:.++ ■.'.:,		4·- . .
	8	■ .,;""-- +		Λ ■■: ■*	3 -" -	5
1	6			2 λ-;	4
2 ·		1	ν j- -;	^;:
•5 ■	10		■"■2-^£" ■■■■■■■■'.■-■
4	>
5	■;>.■-
6	2	^: .■-■■-' ;. K':.-'"-.
7		"-': -1 :.;=■■ :	2
3
S .

Paeces-Zustand, O.P.G., Gewichtssunahtae, .Sterblichkeit mid Sektions"befund zeigen, daß daa Salinoi^rois. ainen ausgezeichne ten therapeutischen Effekt gegenüber Coeeidium im Vergleich herkÖHimliohen Mitteln aufweist, .

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Claims

PATENTANSPRÜCHE 1/ Salinomycin der Formel

3. Verfahren zur Herstellung des Salinomycins nach, einem der Anspräche 1 oder 2 durch Kultivierung eines Salinomycin erzeugenden Stammes'des Streptomyces albus in einem flüssigen Medium, welches für die Actinomyceteskultur geeignet ist im Submersverfahren und durch Extrahieren des Salinomycins aus dem Medium und aus dem Mycelkuchen und Reinigung, worauf gegebenenfalls das Salinomycin in ein pharmazeutisch verträgliches Salz umgewandelt wird oder durch eine milde Veresterung in einen pharmazeutisch verträglichen Ester.

4. Antioöccidiosemittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt des Salinomycins nach einem der Ansprüche 1'oder 2.1

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