DE2329745A1

DE2329745A1 - Therapeutisches mittel und verwendung desselben

Info

Publication number: DE2329745A1
Application number: DE2329745A
Authority: DE
Inventors: Djordje Ajdukovic; Kekhusroo R Bharucha; Vytautas Pavilanis; Heinrich Maria Schrenk
Original assignee: INST OF MICROBIOLOGY AND HYGIE; Canada Packers Inc
Current assignee: INST OF MICROBIOLOGY AND HYGIE; Maple Leaf Foods Inc
Priority date: 1972-06-16
Filing date: 1973-06-12
Publication date: 1974-01-17
Also published as: FR2189040A1; FR2189040B1; BE801068A; DE2329745C2; JPS4954369A; IE39443L; NL7308355A; JPS6117828B2; GB1439318A; CA1034584A; IE39443B1; GB1434074A

Description

Therapeuti seines Mittel mod Verwendung desselben

Die Erfindung betrifft eine Reihe von in 5-Stellung durch gegebenenfalls substituierte Benzaireste substituierten Hydantoinen und ihrer Acylderivate sowie ihre Verv/endung als antivirale Mittel, d.h. ihre Verwendung zur Bekämpfung von Virusinfektionen von Wirbeltieren. Die therapeutischen Mittel gemäß der Erfindung haben sich besonders wirksam gegen Viren der Picorna-Gruppe erwiesen. Unter dem Ausdruck "Wirbeltiere" sind im folgenden sowohl Säugetiere ganz allgemein (einschließlich Menschen) als auch Vögel zu verstehen, da beide Gruppen gegen Infektionen durch Viren der Picorna-Gruppe anfällig sind.

Die Erfindung betrifft insbesondere pharmazeutische Zubereitungen, die als Wirkstoff eine Verbindung der Formel:

CH= C

2

-2-

.Dr.Fe/jo

3 09883/U08

worin bedeuten:

R₂ und R, einzeln Jeweils ein Wasserstoff- oder Halogenatom oder einen Hydroxyrest, Alkoxy- oder Acyloxyrest mit Jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder Nitrorest, oder

und R, zusammen einen Rest der Formel -OCHpO- oder ein Acylderivat hiervon, bei welchem der Hydantointeil eine oder mehrere Acyigruppe(n) enthält und jede Acylgruppe 1 bis 20 Kohlenstoff atome aufweist,

enthalten, sowie ihre Verwendung zur Bekämpfung von Virusinfektionen, insbesondere von Virusinfektionen mit Viren aus der Picorna-Gruppe. Selbstverständlich fallen unter die angegebene Formel sämtliche geometrischen Isomeren und Mischungen der in 5-Stellung durch gegebenenfalls substituierte BenzF.-.rsste substituierten Hydantoine gemäß der Erfindung.

Verschiedene in 5-Stellung durch substituierte Benzaireste substituierte Hydantoine und ihre Herstellung sind bereits bekannt (vgl. beispielsweise die US-PS 2 605 282, 2 861 079, und 2 479 065, DT-PS 1 038 050, Deulofeu und Mendivelzua, in "Z. physiol. Chem., Band 219, 233 (1933)" und G. Billek, in "Monatshefte für Chemie", Band 92, 352 - 1961 -).

Es wurde nun unerwartet und überraschenderweise gefunden, daß bestimmte in 5-Stellung durch gegebenenfalls substituierte Benzaireste substituierte Hydantoine der angegebenen Formel in vitro und in vivo eine antivirale Aktivität, inabesondere gegen Viren der Picorna-Gruppe, entfalten.

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309883/UOe

Die Erfindung ist somit insbesondere mit der Verwendung von Verbindungen der angegebenen Formel bzw. deren Acylderivaten zur Vorbeugung und Bekämpfung von Infektionen von Wirbeltieren durch Viren der Picoma-Gruppe befaßt, wobei die betreffenden Verbindungen bzw. deren Acylderivate anfälligen oder infizierten Wirbeltieren in wirksamer, jedoch nicht-toxischer Menge verabreicht werden.

Bei bevorzugten Verbindungen der angegebenen Formel bzw. deren Acylderivaten besitzen der Rest R₁ die Bedeutung einer Methoxygruppe (-OCH,) oder eines Wasserstoffatoms und die Reste Rp und R, die Bedeutung einer Methoxygruppe (-OCH,). Besonders bevorzugt sind Verbindungen, in welchen der Rest R.. für ein Wasserstoff atom steht, der Rest Rp einen 3'-0CH»-Rest bedeutet und der Rest R, einen 4¹-OCH,-Rest darstellt, sowie deren acetylierte und propionierte Derivate.

Zu ihrer Verabreichung bzw. als Handelsformen werden die genannten Verbindungen bzw. deren Acylderivate zweckmäßigerweise mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger verschnitten.

Die Verbindungen können entweder einzeln oder in Form von Isomerengemischen, und zwar sowohl von geometrischen Isomeren als auch von Stellungsisomeren, sowie von Mono- und Diacyletsalz-Mischungen, wie sie in einem Rohreaktionsgemisch anfallen, verwendet werden. Höchst geeignete derartige Mischungen bestehen aus den acetylierten Derivaten (der genannten Verbindungen), die durch Umsetzen einer Verbindung der angegebenen Formel mit Essigsäureanhydrid, gegebenenfalls in Anwesenheit von wasserfreiem Natriumacetat, oder durch Acetylieren der betreffenden Verbindung

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309883/HOfi

mit Essigsäureanhydrid oder einem Acetylhalogenid in einem geeigneten dipolaren, aprotischen Lösungsmittel, wie Dimethylacetamid, in Gegenwart einer organischen Base_f z.B. von Pyridin, hergestellt werden.

Ein Verfahren zur Herstellung von nicht-acetylierten, in 5-Stellung durch substituierte Benzalreste substituierten Hydantoinen ist in der US-PS 2 861 079 beschrieben. Andererseits eignen sich zur Herstellung solcher substituierter Hydantoine auch das in der US-PS 2 605 282 sowie das von Wheeler und Hoffman in "American Chemical Journal", Band 45, 368 (1911) beschriebene Verfahren.

Bei dem aus der US-PS 2 861 079 bekannten Verfahren wird ein geeignet substituierter Benzaldehyd in Gegenwart eines Monoalkanolamins mit einem Hydantoin erwärmt. Wenn die Umsetzung nach etwa 4 std beendet ist, wird das Reaktionsgemisch mit verdünnter Mineralsäure, z.B. Chlorwasser stoffsäure, angesäuert, dann abgekühlt und schließlich von dem ausgefallenen Niederschlag abfiltriert. Das den Filterrückstand bildende, in 5-Stellung durch einen substituierten Benzalrest substituierte Hydantoin wird getrocknet und kann - gewünschtenfalls - durch Umkristallisieren aus einem geeigneten Lösungsmittel gereinigt werden.

Die nicht-acetylierte Verbindung kann auch durch Verseifung des wie im folgenden beschrieben hergestellten Acetylderivats gewonnen werden.

Die Acetylderivate der genannten, in 5-Stellung durch gegebenenfalls substituierte Benzalreste substituierten Hydantoine können auf verschiedenen Wegen hergestellt werden.

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S09883/H0Ö

Es hat sich gezeigt, daß die in 5-Steilung durch gegebenenfalls substituierte Benzalreste substituierten Hydantoine in üblichen organischen Lösungsmitteln weitgehend unlöslich sind, was ihre Acetylierung oder Acylierung erheblich erschwert. Bei Verwendung eines dipolaren, aprotischen Lösungsmittels, wie Dimethylacetamid oder Dimethylformamid, lassen sich jedoch die in 5-Stellung durch gegebenenfalls substituierte Benzalreste substituierten Hydantoine ohne weiteres in Lösung bringen. In solchen Lösungen können diese Hydantoine dann durch übliche Acylierungsmittel, wie Acylhalogenide, z.B. Acetylchlorid, Pivaloylchlorid, oder Palmitoylchlorid, oder Säureanhydride, z.B. Essigsäureanhydrid, in Gegenwart einer Base, wie Pyridin, acyliert werden.

Es wurde bereits von Deulofeu und Mendivelzua in ⁿZ. physiol. Chem.", Band 219, 233 (1933) berichtet, daß die Kondensation von Veratraldehyd (3,4-Dimethoxybenzaldehyd) mit Hydantoin in Essigsäureanhydrid in Gegenwart von aufgeschmolzenem, wasserfreien Natriumacetat zur Bildung von 5-(3^l,V-^Dimetk°^xyb^enzal)-^hy^dant°ⁱⁿ führt. Es hat sich jedoch im vorliegenden Falle gezeigt, daß diese Umsetzung zur Bildung eines entsprechenden Acylderivats führt.

Wie bereits erwähnt, besitzen die Verbindungen gemäß der Erfindung eine antivirale Aktivität gegen Viren aus der Picorna-Gruppe«. Es hat sich jedoch gezeigt, daß sich die antivirale Wirksamkeit durch Acylierung der in 5-Stellung durch gegebenenfalls substituierte Benzalreste substituierten Hydantoine im Hydantointeil drastisch erhöhen läßt. So wurde gefunden, daß das bei der Kondensation von 3,4-Dimethoxybenzaldehyd mit Hydantoin nach dem von Deulofeu und Mendivelzua aaO beschriebenen Verfahren gebildete ace-

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309883/U09

tylierte 5-(3*,4·-Dimethoxybenzal)-hydantoin eine stärkere antivirale Aktivität besitzt als die nicht-acetylierte Verbindung 5-(3',4·-Dimethoxybenzal)-hydantoin.

In entsprechender Weise lassen sich die anderen aeylierten, in 5-Stellung durch gegebenenfalls substituierte Benzalreste substituierten Hydantoine durch Erwärmen eines geeignet substituierten Benzaldehyds mit Hydantoin und dem entsprechenden Säureanhydrid in einem wasserfreien Alkalimetallalkanoat gewinnen. Die Umsetzung wird in der Regel bei erhöhter Temperatur solange ablaufen gelassen, bis sie praktisch vollständig ist. Beispielsweise wird bei der Umsetzung von Benzaldehyden mit Hydantoin in Gegenwart von wasserfreiem Natriumacetat und Essigsäureanhydrid die Reaktion bei einer Temperatur von etwa 125° bis 14O°C durchgeführt. Es hat sich ferner gezeigt, daß sich mit praktisch gleichen Ergebnissen anstelle des wasserfreien Alkalimetallalkanoats auch Kaliumbicarbonat verwenden läßt. Nach Beendigung der Kondensation wird das Reaktionsgemisch abgekühlt, in der Regel über Nacht, mit Wasser versetzt und dann mehrere std lang gekühlt. Das hierbei ausgefallene kristalline Produkt wird abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Der Hauptteil des gebildeten Reaktionsprodukts besteht offensichtlich aus einer monoacylierten Verbindung neben geringeren Mengen diacylierter Verbindungen. Wenn der als Ausgangsmaterial verwendete aromatische Aldehyd phenolische Hydroxylgruppen aufweist, hat es sich gezeigt, daß diese unter den Reaktionsbedingungen acyliert werden. So entsteht beispielsweise aus Protocatechualdehyd, Hydantoin, wasserfreiem Natriumacetat und Eesigsäureanhydrid acetyliertes 5-(3^f,4·-Diacetoxybenzal)-hydantoin.

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309883/1408

Wie bereits erwähnt, ist die antivirale Aktivität der Acylderivate der beschriebenen substituierten Hydantoine stärker als die der nicht-acetylierten Verbindungen.

Es hat sich gezeigt, daß eine weitere Acylierung des bei der Kondensation des aromatischen Aldehyds mit Hydantoin in Gegenwart des Alkanoatsalzes erhaltenen Acylderivats zu einem Produkt mit größerer antiviraler Aktivität als der des Ausgangsmaterials führt. Die weitere Acylierung wird in der Regel mit einem geeigneten Säureanhydrid durchgeführt. So erhält man bei etwa 5-stündigem Erhitzen des acetylierten 5-(3',4'-Dimethoxybenzal)-hydantoins, das durch Kondensation von 3,4-Dimethoxybenzaldehyd mit Hydantoin in der geschilderten Weise hergestellt worden war, in Essigsäureanhydrid auf Rückflußtemperatur ein Produkt mit im Vergleich zur antiviralen Aktivität des Ausgangsmaterials erhöhter antiviraler Aktivität.

Es hat sich ferner gezeigt, daß bei mehrstündiger Umsetzung des entweder nach dem aus der US-PS 2 861 079 bekannten Verfahren oder durch Verseifung des bei der Kondensation des aromatischen Aldehyds mit Hydantoin erhaltenen Produkts hergestellten, in 5-Stellung durch einen gegebenenfalls substituierten Benzairest substituierten Hydantoins mit Essigsäureanhydrid bei Rückflußtemperatur ein Acylderivat mit gesteigerter antiviraler Aktivität gewinnen läßt.

Ungeachtet in dieser Steigerung des antiviralen Verhaltens wurde ferner noch gefunden, daß die Umsetzung des in 5-Stellung durch einen gegebenenfalls substituierten Benzalrest substituierten Hydantoins mit einem geeigneten wasserfreien Alkalimetallalkanoat und Essigsäureanhydrid zu einem

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309883/U06

Acylderivat mit noch höherer antiviraler Aktivität führt. So führt beispielsweise eine 30-minütige Umsetzung von 5—(3*,4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin mit wasserfreiem Natriuraacetat und Essigsäureanhydrid bei einer Badtemperatur von 125° bis 130°C zu einem acetylierten 5-(3',4«-Dimethoxybenzal) -hydantoin mit ausnehmend guter antiviraler Aktivität.

Obwohl die Gründe für dieses Verhalten noch nicht abschließend bekannt sind, wird bei der Prüfung der allgemeinen Strukturformel der in 5-Stellung durch gegebenenfalls substituierten Benzaireste substituierten Hydantoine gemäß der Erfindung klar, daß die Acylierung in den 1- und 3-Stellungen des Hydantointeils stattfinden kann. Vermutlich hängt der Grad der antiviralen Aktivität der substituierten Hydantoine gemäß der Erfindung vom Ort und dem Ausmaß der Acylierung sowie von der geometrischen Konfiguration der Verbindung ab. Wenn beispielsweise 5-(3¹A¹-Dimethoxybenzal)-hydantoin mit Essigsäureanhydrid bei Rückflußtemperatur acetyliert wird, läßt sich das Rohacetylderivat in reine Mono- und Diacetate auftrennen. Bei Gewebekulturtests zeigte die Diacetatverbindung eine größere antivirale Aktivität als die Monoacetatverbindung, welche ihrerseits aktiver war als die nicht-acetylierte Verbindung. PUr den Fachmann dürfte es ferner selbstverständlich sein, daß der Hydantointeil zur Keto-enol-Tautomerie fähig ist, so daß folglich bei der Acylierung etwas0-Acylierungs- als auch etwas N-Acylierungsprodukt entsteht. Sämtliche derartige Acylierungsprodukte liegen im Rahmen der Erfindung.

Die Anwesenheit der Doppelbiüung zwischen dem Kohlenstoffatom des Hydantoinrings und dem tu -Kohlenstoff der Benzaleinheit schafft die Möglichkeit einer Cis-trans-Isomerie.

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309883/UQ8

Selbstverständlich fallen in den Rahmen der Erfindung beide isomere Formen der beschriebenen, in 5-Stellung durch gegebenenfalls substituierte Benzaireste substituierten Hydantoinverbindungen und ihre Acylderivate einzeln sowie als Isomerengemische. Im Falle der Acylderivate fallen An den Rahmen der Erfindung die Mono- und Diacylate einzeln sowie als Gemische.

Die Gemische lassen sich durch fraktionierte Kristallisation aus dipölaren, aprotischen Lösungsmitteln, wie Dimethylsulfoxid und DimethyIacetamid, in die reinen Verbindungen auftrennen. So können beispielsweise durch diese Maßnahmen die Mono- und Diacetate sowie ihre Stellungsisomeren und geometrischen Isomeren getrennt werden.

Die zur Herstellung der Verbindungen gemäß der Erfindung als Ausgangsmaterialien verwendeten Benzaldehyde können die verschiedensten Substituenten, z.B. Hydroxy-, Alkoxy-, Acyloxy-, Nitro- und Methylendioxygruppen oder Halogenatome, z.B. Fluor-, Chlor- und Bromatome, tragen. Besonders bevorzugte Substituenten sind Alkoxygruppen mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen, insbesondere Methoxygruppen. Es hat sich gezeigt, daß man mit Di- und Trimethoxybenzalhydantoinen eine hervorragende Aktivität gegen Viren der Picorna-Gruppe erreichen kann. Besonders bevorzugte Verbindungen sind die 5-(3',^^l-^Dime'^tno^xy^ben2^a1)- u*¹*¹ 5-(2',4',S¹-Trimethoxybenzal)-hydantoine sowie ihre Acylderivate.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung besitzen eine hohe Wirksamkeit als antivirale Mittel, insbesondere gegen Viren der Picorna-Gruppe. Bei den Picorna-Viren handelt es sich um eine Gruppe kleiner RHA-Viren, nämlioh von Enteroviren (Poliomyelitis^ Coxsackie- und Echoviren), Rhino-

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309883/UG8

viren und Viren nicht-menschlichen Ursprungs, z.B. die Maul- und Klauenseuche-Viren von Rindern. Die hervorstechendsten Eigenschaften der Verbindungen gemäß der Erfindung bestehen in ihrem hohen Inhibierungsvermögen gegen die genannten Viren selbst bei Konzentrationen unter 1 u g/ ml und ihrer niedrigen Toxizität.

Die in vitro-Aktivität von repräsentativen Verbindungen gemäß der Erfindung wird im folgenden angegeben:

Bei der Herstellung der zu testenden Verbindungen wurde von Anfang bis Ende unter aseptischen Bedingungen gearbeitet. Die Verbindungen wurden in einer Ilindestmenge an einem geeigneten Lösungsmittel gelöst, die Endverdünnungen wurden bis zu dem erforderlichen Volumen in einem vollständigen Kulturmedium in einer die vorherbestimmten maximalen nichfccytotoxischen Mengen nicht-übersteigenden Konzentration durchgeführt. Sämtliche Materialien wurden auf Gewichtsbasis getestet, zunächst bei drei Konzentrationen, 100 - 10 - 1 ug/ml, wobei diejenigen, die in dem angegebenen Bereich eine inhibierende Aktivität zeigten, unterhalb der maximalen nicht-cytotoxischen Menge in verschiedenen Konzentrationen sorgfältig nochmals getestet wurden.

Die bei sämtlichen primären in-vitro-Antipicornavirus-Screeningtests verwendeten Zellkulturen bestanden aus einer künstlichen Züchtung von Nierenzellen (VERO) der afrikanischen grünen Meerkatze (established cell line of the African green monkey kidney), einer primären Zellkultur von Meerkatzenniere oder aus menschlichen embryonalen dlploiden Lungenzellen WI-38.

Die cytotoxischen Studien wurden mit jeder der Verbindungen durchgeführt, um den Grad der Ansprechbarkeit der

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309883/UOg

verwendeten Zellen auf die mögliche toxische Wirkung der Substanzen zu ermitteln. Die cytotoxischen Mengen wurden als 50%ige Inhibierung des Zellwachstums im Vergleich zu geeigneten Standards (CTD₅₀) oder als maximale nicht-toxische Konzentration (CTDq), die keine morphologisch nachweÄare Inhibierung des Zellwachstums hervorruft, angegeben,

Standardchargen der Viren wurden durch Züchten des Virus in einer geeigneten Zellkultur und Herstellen eines Pools, der in Ampullen verteilt und bis zur Verwendung bei einer Temperatur von -76⁰C gefroren gehalten wurde, hergestellt. Der Titer von jedem Virus wurde in den verwendeten Zellkulturen bestimmt.

Die Zellen wurden in Teströhrchen iii einem geeigneten Medium gezüchtet. Unmittelbar vor der Verwendung wurde das ursprüngliche Medium durch eines ersetzt, in welchem die Testverbindung in einer geeigneten Konzentration enthalten war. Nach Zugabe des Virus wurde die infizierte Kultur eine Anzahl von Tagen bei einer Temperatur von 37°C inkubiert, worauf der cytopathische Effekt des Virus bestimmt und aufgezeichnet wurde. Die Ergebnisse wurden jeden Tag in sämtlichen Teströhrchen abgelesen, wobei die Zerstörung der Zellen als prozentuale Zerstörung der Zellenschicht O-25-5O-75-1OO96 angegeben wird. Zu Vergleichszwecken wurden Zellen mit lediglich dem Virus (zur Ermittlung des cytopathischen Einflusses) oder mit lediglich der Verbindung (zur Ermittlung des cytotoxischen Effekts) sowie normale, nicht-infizierte Zellen (kein cytotoxlscher/kein cytopathischer Effekt) verwendet. Der Grad des spezifischen cytopathischen Effekts oder seiner Hemmung bzw. Inhibierung wurde zu dem Zeitpunkt berechnet, an welchem die nur Zellen und Virus enthaltenden Vergle i chte ströhrchen eine voll-

-12-

309883/U08

ständige Zerstörung des einschichtigen Zellengefüges zeigte. Der Nettounterschied im cytopathischen Effekt zwischen den die betreffenden Verbindungen enthaltenden Röhrchen und den Vergleichsröhrchen, ausgedrückt in Prozent, stellt das Ausmaß der inhibierenden Aktivität der betreffenden Substanz dar. Aus diesen Ergebnissen wurde eine Dosis/Ansprechbarkeits-Kurve berechnet und aufgetragen.

Der Wert TCID₅₀ stellt diejenige Gewebekulturinfektionsdosis des Virus dar, die 50% der Zellen zerstört.

5-(3'.4'-Dimethoxvbenzal)-hydantoin

Polio I, primäre Affennierenzellen; 316 TCID₅₀

Konzentration der Verbindung %-uale Hemmung

100 Mikrogramm/ml 45

50 " 34

Acetyliertes 5-(3'.4'-Dimethoxvbenzal)-hydantoin

(A) hergestellt nach dem von Deulofeu und Mendivelzua aaO (Beispiel 14) beschriebenen Verfahren

Polio, Verozellen; 316 TCID₅₀

Konzentration der Verbindung 9o-uale Hemmung

10 Mikrogramm/ml 100

5 " 100

1 " 100

0,5 " 93

-13-

309883/14Ü8

Coxsackie B,, Verozellen;

Konzentration der Verbindung %-uale Hemmung

Mikrogramm/ml

5	Il
1	Il
0,5	Il

100

97

88

Echo 9, Verozellen; 31,6

Cytotoxizität	Konzentration	/■i-uale Hemmung
CTD CTD ₀	der Verbindung
^j\j ν/ (yag/ (yug/ml)	(yug/ml)
>100 >10	10,0	100
	6,7	100
	3,3	92
	1,0	71
	0,7	42
	0,3	29
	0,1	8

Echo 11, primäre Affennierenzellen; 178 TCID₅₀

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTD₀ der Verbindung

(^ g/ml) (^ g/ml) ⁽/* g^/ml)

>100 >100 100

50

25

10
6,7 3,3 1,0

0,7 0,3 0,1

309883/UOi

100 100

100

-14-

Rhino 2, WI-38-Zellen; 316 TCID

50

Cytotoxizität	Konzentration	%-uale Hemmung
CTD CTD	der Verbindung
(^i g/ml) (^u g/ml)	(^u g/ml)
>100 >100	10	100
	6,7	100
	3,3	100
	1,0	71
	0,7	43
	0,3	32
	0,1	12

(B) Hergestellt durch Acetylierung von 5-(3',4'-Dime thoxybenzal) -hydantoin mit Essigsäureanhydrid.

Coxsackie B,, Verseilen; 562 TCID₅₀ Konzentration der Verbindung %-uale Hemmung

1,0 Mikrogramm/ml

0,5	Il
0,1	Il
0,05	η
0,01	Il

100 95 75 50 20

(C) Hergestellt durch Acetylierung von 5-(3',4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin mit Natriumacetat/Essigsäureanhydrid .

Coxsackie B,, Verozellen; 562 TCID Konzentration der Verbindung 96-uale Hemmung

1,0 Mikrogramm/ml

0,5 0,1 0,05 0,01

η η η η

100 100

100

50

25

309883/U08

-15-

Acetyliertes 5-(5'-Hethoxy-4'-acetoxvbenzal)-hydantoin (Beispiel 15)

Polio I, Verozellen; 56,2 TCID₅₀

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTD₀ der Verbindung

( Ji g/ml) (jig/ml) (/»g/nP

>100 >10 10

5 100

1 12

0,5 19

0,1 7

Coxsackie B,, Verozellen; 562 TCID₅₀

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTD₀ der Verbindung

(jig/ml) (ji g/1) (/*g/^ml> ·

N 100 >10 10

5 60

1 4

Acetyliertes 5-(Benzal)-hydantoin (Beispiel 16) Polio I, Verozellen; 56,2 TCID₅₀

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTD₀ der Verbindung

(ji g/ml) (^g/ml) (/»«/"Ρ

83 10 10 19

5 0

1 0

-16-

309883/H08

Coxsackie B,, Verozellen; 562 TCID₅₀

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTD₀ der Verbindung

(^q g/ml) (^i g/ml)

83	5-(2«	10	10	25
		5	0
		1	0
Acetvliertes	,4',	5«-Trimethoxvbenzal)-hydantoin

(Beispiel 22)

Polio I, Verozellen; 100 TCID₅₀

Cytotoxizität	Konzentration	%-uale Hemmung
CTD₅₀ CTD₀	der Verbindung
(^ g/ml) (^Li g/ml)	(yug/ml)
1	1	100
	0,7	93
	0,3	90
	0,1	50
	0,07	25
	0,03	0
	0,01	0

Polio I_f Verozellen; 10 TCID₅₀

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTDq der Verbindung

(^ g/ml) {μ g/ml) (/**/■*>

1 100

0,7 98

0,3 98

0,1 54

0,07 27

0,03 8

0,01 4

-17-309883/U08

Coxsackie B,, Verozellen; 178

Cytotoxizität	Konzentration %-uale Hemmung	90
CTD₅₀ CTD₀	der Verbindung	88
(^u g/ml) (^i g/ml)	(^u g/ml)	75
>100 1	1	50
	0,7	37
	0,3	12
	0,1	0
	0,07
	0,03
	0,01

Coxsackie B,, Verozellen; 56,2 TCID₅₀

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTD₀ d Vbd (^ g/ml) (μ g/ml)

y
CTD₅₀ CTD₀ der Verbindung

>100 1 1	100
0,7	97
0,3	90
0,1	50
0,07	43
0,03	37
0,01	19
Acetvliertes 5-(3'.4'.5'-Trimethoxvbenzal)-hydantoin

(Beispiel 23)

Polio I, Verozellen; 316 TCID₅₀

-18-

309883/U03

Cytotoxizität	Konz entration	/b-uale Hemmung
CTD₅₀ CTD₀	der Verbindung
(yug/ml) (^i g/ml)	(ug/ml)
50 10	10	96
	6,7	72
	3,3	56
	1	46
	0,7	36
	0,3	14
•	0,1	0

Polio I, Verozellen; 17,8 TCID

50

Cytotoxizität CTD CTD	Konzentration	%-uale Hemmung
(^u g/ml) (^i g/ml)	der Verbindung
50 10	(^i g/ml)
	10	100
	6,7	95
	3,3	60
	1	56
	0,7	42
	0,3	32
0,1	21

Coxaackie B^, Yerozellen; 316 TCID₅₀

Cytotoxizität	Konzentration der	%-uale Hemmung
CiD₅₀ CTD₀	Verbindung
*(^ g/ml) {/x* g/ml)**	(^i g/ml)
50 10	10	97
	6,7	93
	3,3	88
	1,0	68
	0,7	25
	0,3	0
	0,1	0

309883/UOg

-19-

Coxsackie B,, Verozellen; 178

Cytotoxizität

CTD

₅₀ CTD₀
(^ g/ml) (^ g/ml)

Konzentration der Verbindlang ⁽ /) %-uale Hemmung

50	10 10	100
	6,7	100
	3,3	100
	1,0	88
	0,7	62
	0,3	25
	0,1	12
Acetvliertes	5-(3 V. 5 *-Dimethoxvbenzal)-hydantoin (Beispiel 21)

Polio I, Verozellen; 100 TCID

50

Cytotoxizität

50

Konzentration CTD₀ der Verbindung

(^ g/ml) (^ g/ml) </»8/1>

>100 100 10

5 1

0,5 %-uale Hemmung

100

Polio I, Verozellen; 10 TCID,

50

Cytotoxizität

CTD₅₀

CTD,

Konzentration der Verbindung

(11 g/ml) (11 g/ml)

%-uale Hemmung

>100

100

10

5 1

0,5 100

100

-20-

309883/U08

Coxsackie B,, Verozellen; 316 TCID

50

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTD₀ der Verbindung

(^ g/ml) (^ g/ml) (/^ g/ml)

100 100 10 100

5 100

1 50

0,5 25

Coxsackie B₅, Verozellen; 17,8 TCID₅₀

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTDj-^ CTD_n der Verbindung

(^ g/ml) (^ g/ml) (/*g/^ml)

100 100 10 100

5 99

1 44

0,5 21

Reines 5-(3'.4'-Dimethoxvbenzal)-hvdantoinmonoacetat (Beispiel 31)

Coxsackie B,, Verozellen; 1000 TCID₅₀

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTD₀ der Verbindung

100 10 50 25

10 7

5 0

1 0

Coxsackie B,, Verozellen; 100

-21-

309883/U08

Cytotoxizität	Konzentration	%-uale Hemmung
CTD CTD	der Verbindlang
(^i g/ml) (^ g/ml)	(^i g/ml)
100 10	50	56
	10	25
	5	0
	1	0

Polio I, Verozellen; 316

Cytotoxizität CTD₅₀ CTD

Konzentration %-uale Hemmung der Verbindung

100

10

50

10

84 7 ο 0

Reines 5- (3 ^!. 4 ^! -Dlmethoxvbenzal)-hvdantoindiacetat (Beispiel 32)

Coxsackie B,, Verozellen; 1000

Cytotoxizität Konzentration %-uale Hemmung CTD₅₀ CTD₀ der Verbindung

(^g/ml) (^g/ml) (/^l) 33

10

50

10

100 100 97 50

Coxsackie B,, Verozellen; 100 TCID₅₀

-22-

309883/U08

Cytotoxizität	Konzentration	%-uale Hemmung
CTD₅₀ CTD₀	der Verbindung
(^u g/ml) (^ g/ml)	(^i g/ml)
33 10	50	100
	10	100
	5	100.
	1	75

Polio I, Verozellen; 316 TCID

Cytotoxizität	Konzentration	p-uale Hemmung
CTD₅₀ CTD₀	der Verbindung
( jd g/ml) (^i g/ml)	(yug/ml)
33 10	50	100
	10	100
	5	100
	1	100

Polio I, Verozellen; 56,2 TCID₁

Cytotoxizität	Konzentration	96-uale Hemmung
CTD₅₀ CTD₀	der Verbindung
(^a g/ml) (^tI g/ml)	(^i g/ml)
33 10	50	100
	10	100
	5	100
	1	86

Cvtotoxizität von acetvliertem 5-(3'.4^t-Dimethoxvbenzal)-hvdantoin gegenüber Verozellen und primären Affennierenzellen

-23-

309883/U08

Konzentration Toxizität (%)

in Mikrogramm/ml Verozellen primäre Affennierenzellen

300 250 200 150 100 75

66,7 50 33,3 25 10 6,7 3,3 1,0 0,7 0,3 0,1

Wurde acetyliertes 5-(3',4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin (Beispiel 14) Mäusen intraperitoneal injiziert, betrug die subakute LDc₀ während 16-tägiger täglicher Injektion 400 bis 500 mg/kg. Bei oraler Verabreichung konnte bei Mäusen eine höhere LDc₀ ^a^-^s 1300 mg/kg beobachtet werden.

Acetyliertes 5-(3',4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin (Beispiel 14) wurde auch bei 2 bis 4 kg schweren Cynomolgus-Affen getestet. Diese waren vorher mit dem Mahoney-Stamm des Poliovirus infiziert worden. Den infizierten Affen wurde die Testverbindung - zunächst 6 Tage lang intraperitoneal in einer täglichen Dosis von 25 mg/kg und dann v/eitere 8

-24-

309883/ UOg

100	100
75	100
25	75
10	10
10	0
10	0
10	0
10	0
10	0
10	0
10	0
0	0
0	0
0	0
0	0
0	0
0	0

Tage lang in entsprechender Dosis subkutan verabreicht.
Die Verbindung wurde in 0,5%iger Salzlösung mit einer geringen Menge Dimethylsulfoxid und Emulgator, die zum Auflösen und Dispergieren der Verbindung in der Lösung einer Ultraschallbehandlung ausgesetzt worden war, verabreicht.

Die bei dem Affenversuch erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt. Diese Ergebnisse zeigen, daß acetyliertes 5-(3',4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin bei mit Mahoney-Poliovirus infizierten Tieren wirksam ist.

-25-

309883/U08

Acetvliertes 5- (3 ^f.4'-Dimethoxvbenzal)-hydantoin

25 mg/kg/Tag intraperitoneal bzw. subkutan Poliovirus 2 (Mahoney), TCIDc₀: 10^» Cynomolgus-Affe

Gruppe Behandlung Paralyse

An- % Durchzahl

ο to co co

Kumulative Morbidität

Auftreten von Poliovirus auf Rektal· abstrichtupfern

schnitt- 4.Tag 8. Tag 11. Tag 15. Tag licher An- % An- % An- % An- 96 Tag der zahl zahl zahl zahl Paralyse

Histopathologische Veränderungen im Gehirn Anzahl %

I Virus *

Verbindung 2/8 25,0 13,5

II Virus allein4/i1 36,4 11,0

III Verbindung

allein 0/5 4/11 3^42/8 25,0 2/8 25,0 1/6 16,7 2/10 10/12 83,3 6/8 75,0 4/9 44,4 2/5 40,0 5/11

0/5 0 0/5 0- 0/5 0 0/5 0 0/5

20,0 54,5

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Die Verbindungen gemäß der Erfindung lassen sich - als Zubereitung in einem geeigneten flüssigen oder festen Träger - zur Vorbeugung oder Bekämpfung von VirusInfektionen von Wirbeltieren verwenden. Sie können intranasal, oral und parenteral verabreicht werden. Die erste Verabreichungsform erfolgt in üblicher Weise mittels Aerosolzubereitungen, die zusammen mit üblichen Treibmitteln in geeigneten Behältern untergebracht sind. Ein injizierbares Präparat bzw. eine injizierbare Zubereitung kann aus einer Suspension oder Lösung der- aktiven Verbindung in einer Mischung aus normaler Salzlösung und einem pharmazeutisch unbedenklichen Lösungsmittel, in einer Konzentration von etwa 0,05 bis 0,1096 bestehen.

Zur oralen Verabreichung können die Verbindungen gemäß der Erfindung in Form von Tabletten, Pillen oder Kapseln, als Granulat oder Pulver, in Sirupen und dergleichen in den Handel gebracht werden.

Geeignete pharmazeutisch unbedenkliche feste Träger sind beispieleweise Stärke, Zucker, verschiedene Stearate und Carbonate, Kaolin, Talkum, Dicalciumphosphat, Calciumsulfat und Gummi. Pharmazeutisch unbedenkliche flüssige Träger sind Wasser, öle und Wasser/Öl-Emulsionen, die in vorteilhafter Weise ein geeignetes Dispergier- oder Suspendiermittel, wie Traganth, ein Alginat, ein Dextran, Methylcellulose, Polyvinylpyrrolidon, Gelatine oder Mischungen hiervon, enthalten. Geeignete öle für Losungen und Wasser/ Öl-Emulsionen sind pflanzliche öle, wie Baumwollsaatöl, Kokosnußöl, Erdnußöl und dergleichen. Für injizierbare Lö sungen kann der flüssige Träger, z.B. eine normale Salz lösung, eine lösliohmaohende Verbindung, z.B. N,N-Dimethylacetamid oder-NjN-Dimethylformamid, enthalten.

-27-

309883/UQg

Die therapeutischen Mittel "bzw. Verbindungen gemäß der
Erfindung werden in wirksamen, jedoch nicht toxischen
Dosen, zweckmäßigerweise in einer Menge von 1 bis 500 mg pro kg Körpergewicht pro Tag, vorzugsweise von 1 bis 100 mg pro kg Körpergewicht pro Tag, auf einmal oder in mehreren Gaben verabreicht.

-28-

309883/U08

Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher veranschaulichen·

Beispiel 1

5- ( 3'. 4' -Dihvdroxvbenzal) -»hydantoin

Eine Mischung aus 2,072 g 3,4-Dihydroxybenzaldehyd und 1,50 g Hydantoin in 15 ml Wasser wurde solange auf eine Temperatur von 70⁰C erwärmt, bis eine klare Lösung erhalten wurde· Die erhaltene klare Lösung wurde mit 1,38 g Monoäthanolamin versetzt und ausfließend unter Rühren mit einem Magnetrührer 4 std lang bei einer Badtemperatur von 90° bis 92°€ erwärmt. Innerhalb von 10 min kam es zur Kristallisation. Das erhaltene Produkt wurde auf Raumtemperatur abkühlen und dann über Nacht stehen gelassen. Nach dem Eintauchen in ein Eisbad wurde das Gemisch mit Chiorwasserstoffsäure angesäuert und dann 5 std lang gekühlt. Der hierbei ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert, mit einem -1O⁰C kalten 1:1 Methanol/Wasser-Gemisch gewaschen und getrocknet. Hierbei wurden 2,776 g 5-(3',4'-Dihydroxybenzal)-hydantoin in Form eines fahlbraunen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 300° bis 310⁰C erhalten. Beim Verreiben mit heißem absoluten Äthanol wurde in etwa 6596iger Ausbeute ein fahlbrauner Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 320⁰C (unter Zersetzung) erhalten.

Beispiel 2

5-(3 *-MethoxY-4'-hydroxvbenzal)-hydantoin

3,04 g Vanillin und 2,0 g Hydantoin wurden auf einem Dampfbad einige min lang in 20 ml Wasser erwärmt, bis die genannten Verbindungen in Lösung gingen. Nach Zugabe von 0,174 g Ethanolamin wurde die Lösung 4,5 std lang bei einer

-29-309883/U08

- 29 - ?329745

Badtemperatur von 85° bis 90°C erwärmt. Innerhalb von 0,5 std schieden sich aus der Lösung Kristalle ab und verfestigte sich die Lösung. Nach Zugabe von 5 ml konzentrierter Chlorwasserstoffsäure wurde das Reaktionsgemisch 18 std lang gekühlt, worauf der ausgefallene Niederschlag abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet wurde. Hierbei wurden, in 93%iger Ausbeute 4,18 g 5-(3^f-Methoxy-4*-hydroxybenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 266° bis 271⁰C (unter Zersetzung) erhalten.

4,122 g der erhaltenen Verbindung wurden über Nacht bei einer Temperatur von -10⁰C aus wäßrigem Äthanol umkristallisiert, wobei 3,420 g,eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 267° bis 271⁰C erhalten wurden (T.B. Johnson und R. Bengis geben in"J. Amer. Chem. Soc", Band 35, 1611 (1913) einen Schmelzpunkt von 264° bis 265⁰C an).

Beispiel 3

5-(2'-Chlorbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,50 g o-Chlorbenzaldehyd und 1,78 g Hydantoin (Molverhältnis 1:1) wurde mit 15 ml Wasser versetzt und auf eine Temperatur von 70°C erwärmt. Nach Zugabe von 1,63g Monoäthanolamin (1,5-fache molare Menge) wurde das Reaktionsgemisch 4,25 std lang bei einer Badtemperatur von 90° bis 92⁰C mit Hilfe eines Magnetrührers gemischt. Hierauf wurde das Reaktionsgemisch in einem Eisbad abgekühlt, mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure angesäuert und über Nacht gekühlt, worauf der erhaltene Niederschlag filtriert, mit Wasser gewaschen und bei 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 55°C getrocknet

-30-309883/UQ8

wurde. Hierbei wurden 2,63 g 5-(2'-Chlorbenzal)-hydantoin in Form eines rosafarbenen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 266° bis 270°C (unter Zersetzung) erhalten.

Beispiel 4

5-(4'-Nitrobenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,510 g p-Nitrobenzaldehyd und 1,671 g Hydantoin (Molverhältnis 1 : 1) In 15 ml Wasser wurde auf eine Temperatur von 70⁰C erwärmt. Nach Zugabe von 1,53 g Monoäthanolamin (1,5-fache molare Menge) wurde das Reaktionsgemisch 4 1/4 std lang bei einer Badtemperatur von bis 92°C mit Hilfe eines Magnetrührers gerührt. Hierauf wurde das Reaktionsgemisch in einem Eisbad abgekühlt und mit Chlorwasserstoffsäure angesäuert. Nachdem das Reaktionsgemisch über Nacht gekühlt worden war, wurde der ausgefallene Niederschlag abfiltriert, mit Wasser gewaschen und bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 55⁰C getrocknet. Hierbei wurden 3,258 g 5-(4·-Nitrobenzal)-hydantoin in Form eines braunen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 252° bis 253°C (unter Zersetzung) erhalten.

Beispiel 5

5-(3'.4^f-Methvlendloxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,515 g 3,4-Methylendioxybenzaldehyd und 1,668 g Hydantoin (Molverhältnis 1 : 1) in 15 ml Wasser wurde auf eine Temperatur von 7O⁰C erwärmt und mit 1,40 g Monoäthanolamin (1,5-fache molare Menge) versetzt. Das hierbei erhaltene zweischichtige flüssige Gemisch wurde

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309883/U08

4 std lang bei einer Badtemperatur von 90° bis 92⁰C mit Hilfe eines Magnetrührers gerührt und dann in üblicher Weise aufgearbeitet. Hierbei wurden 3,440 g 5-(3»,4^f-Methylendioxybenzal)-hydantoin in Form eines fahlgelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 248⁰C erhalten.

Beim Ifakristallisieren des Rohmaterials eus Dioxan wurde in 90%iger Ausbeute ein farbloser Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 251° bis 252°C erhalten.

Beispiel 6

5-(2'.5'-Dimethoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,504 g 2,5-Dimethoxybenzaldehyd und 1,507 g Hydantoin (Molverhältnis 1 : 1) in 15 ml Wasser wurde auf eine Temperatur von 70⁰C erwärmt. Die erhaltene zweischichtige Flüssigkeit wurde mit 1,38 g Monoäthanolamin (1,5-fache molare Menge) versetzt und 4 std lang bei einer Badtemperatur von 90° bis 92°C mittels eines Magnet-¹ rührers gerührt. Beim Aufarbeiten wurden 3,288 g 5-(2',5'-Dimethoxybenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 250° bis 252⁰C erhalten. Beim Umkristallisieren aus Dioxan wurde in 86%iger Ausbeute das gewünschte Endprodukt mit einem Schmelzpunkt von 251° bis 252°C erhalten.

Beispiel 7

5-(3^f.5'-Dimethoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,550 g 3,5-Dimethoxybenzaldehyd und 1,505 g Hydantoin (Molverhältnis 1 t 1) in 15 ml Wasser wurde auf eine Temperatur von 70⁰C erwärmt und mit 1,38 g

-32-309883/U08

- ³² - 23297A5

Monoäthanolamin (1,5-fache molare Menge) versetzt. Das erhaltene zweischichtige flüssige Gemisch wurde dann 4 std lang bei einer Badtemperatur von 90° bis 92⁰C mittels eines Magnetrührers gerührt. Bei der Aufarbeitung wurden 2,870 g 5-(3',5^l-Dimethoxybenzal)-hydantoin in Form eines beigen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 285° bis 287⁰C erhalten.

Beispiel 8

^-(2'.4'.5'-Trimethoxybenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,503 g 2,4,5-Trimethoxybenzaldehyd und 1,275.g Hydantoin (Molverhältnis 1 : 1) in 15 ml Wasser wurde auf eine Temperatur von 70⁰C erwärmt und mit 1,17 g Monoäthanolamin versetzt. Die hierbei erhaltene Suspension wurde 4 std lang bei einer Badtemperatur von 90° bis 92°C gerührt. Bei der Aufarbeitung wurden 3,306 g 5-(2',4',5' Trimethoxybenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 276° bis 277⁰C (unter Zersetzung) erhalten. Beim Umkristallisieren aus Dioxan ließ sich der Schmelzpunkt des Produkts nicht mehr weiter erhöhen.

Beispiel 9

5-(3'«4^f.5'-Trimethoxybenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,497 g 3,4,5-Trimethoxybenzaldehyd und 1,276 g Hydantoin (Molverhältnis 1 : 1) in 15 ml Wasser wurde auf eine Temperatur von 70°C erwärmt. Nach der Zugabe von 1,17 g (1,5-fache molare Menge) Monoäthanolamin wurde dae Reaktionsgemisch 4 std lang bei einer Badtemperatur von 90° bis 92°C mittels eines Magnetrührers gerührt.

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309883/U08

Beim Aufarbeiten wurden 2,950 g 5-(3',4',5'-Trimethoxybenzal)· hydantoin in Form eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 266° bis 268°C erhalten. Beim Umkristallisieren aus Dioxan wurde in 80%iger Ausbeute das Endprodukt mit einem Schmelzpunkt von 268° bis 270°C erhalten.

Beispiel 10

5-(2'-Methoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,00 g o-Methoxybenzaldehyd (14,7 mMole) und 1,47 g Hydantoin (Molverhältnis 1 : 1) in 12 ml Wasser wurde auf eine Temperatur von 70°C erwärmt und mit 1,35 g Monoäthanolamin (1,5-fache molare Menge) versetzt. Hierauf wurde das Reaktionsgemisch in einem 90 bis 92 C heißen Ölbad erwärmt und 4 std lang mittels eines Magnetrührers gerührt. Beim Aufarbeiten wurden 2,90 g 5-(2'-Methoxybenzal)-hydantoin in Form eines orangen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 174° bis 179°C erhalten.

Beispiel 11

5-(3'-Methoxybenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,00 g m-Methoxybenzaldehyd (14,7 mMole) und 1,47 g Hydantoin in 12 ml Wasser wurde auf eine Temperatur von 70⁰C erwärmt. Nach der Zugabe von 1,35 g Monoäthanolamin (1,5-fache molare Menge) wurde das Reaktionsgemisch unter Rühren mit einem Magnetrührer 4 std lang in einem ölbad einer Temperatur von 90° bis 92⁰C erwärmt. Beim Aufarbeiten wurden 2,56 g 5-(3'-Methoxybenzal)-hydantoin in Form eines beigen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 229° bis 231°C erhalten.

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Beispiel 12

^.(4'-Methoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischiang aus 2,00 g p-Methoxybenzaldehyd (14,7 mMole) und 1,47 g Hydantoin (Molverhältnis 1 : 1) in 12 ml Wasser wurde auf eine Temperatur von 70° C erwärmt und anschließend mit 1,35 g Monoäthanolamin (1,5-fache molare Menge) versetzt. Hierauf wurde das Reaktionsgemisch 4 std lang unter Rühren mit einem Magnetrührer in einem Ölbad einer Temperatur von 90° bis 92⁰C erwärmt. Beim Aufarbeiten wurden 2,74 g 5-(4'-Methoxybenzal)-hydantoin in Form eines fahlgelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 250° bis 252°C erhalten.

Beispiel 13

5-(3'.4'-DimethoxybenaL )-hydantoIn

Unter Rühren mit einem Magnetrührer wurde eine Mischung aus 9,00 g Veratraldehyd einer Reinheit von 93%, 5,00 g Hydantoin, 10 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats und 20 ml Eisessig 1,5 std lang bei einer Badtemperatur von 160° bis 165°C auf Rückflußtemperatur erhitzt, wobei innerhalb von 5 min eine Lösung erhalten wurde und während der gesamten Erhitzungsdauer Kristallisation erfolgte. Beim Abkühlen wurde Wasser zugegeben. Die hierbei erhaltene Mischung wurde 1 std lang gerührt und dann 2 std lang gekühlt. Der hierbei ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und über Nacht bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 55°C getrocknet. Hierbei wurden in 38#lger Ausbeute 4,72 g 5-(3^l,4^l-Dimethoxybenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 280° bis 282°C erhalten.

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Beispiel 14 Acetvliertes 5-(3*.4'-Dimethoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 4,20 g 3,4-Dimethoxybenzaldehyd einer Reinheit von 99,996, 2,80 g Hydantoin, 3,20 g Kaliumbicarbonat und 10 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem Magnetriihrer 30 min lang in einem Ölbad einer Temperatur von 130° bis 14O°C erwärmt. Nachdem die erhaltene Lösung über Nacht stehen gelassen worden war, wobei Kristallisation eintrat, wurden innerhalb von 30 min unter Rühren 100 ml Wasser zugegeben. Das hierbei ausgefallene Reaktionsprodukt wurde abfiltriert, mit 250 ml heißem Wasser gewaschen und über Nacht tei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 50⁰C getrocknet. Die Ausbeute an gelbem Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 183° bis 218°C betrug 3,90 g. Der Acetylwert betrug 15,5 (bei einer Monoacetylierung theoretisch 14,8).

Ein entsprechendes Ergebnis wurde bei Verwendung von aufgeschmolzenem, wasserfreien Natriumacetat anstelle von Kaliumbicarbonat erhalten.

Beispiel 15 Acetyliertes 5-(3'-Methoxy-4'-acetoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 1,900 g Vanillin, 1,4 g Hydantoin und 1,3 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in 5 ml Essigsäureanhydrid wurde 30 min lang unter Rühren mit einem Magnetrührer bei einer Badtemperatur von 125° bis 130⁰C in einem mit RückfluBkühler ausgestatteten Kolben erwärmt. Beim Stehenlassen über Nacht verfestigte eich die Lösung vollständig. Nach Zugabe von 50 ml Wasser wurde das

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Reaktionsgemisch etwa 1 std lang bei Raumtemperatur gerührt und dann 5 std lang gekühlt. Der hierbei ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert, mit etwa 200 ml siedendem Wasser gewaschen und 18 std lang bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 50⁰C getrocknet. Hierbei wurden in 86ftLger Ausbeute 2,950 g rohes acetyliertes 5-(3'-Methoxy-^'-acetoxybenzal)-hydantoin mit einem Schmelzpunkt von 188° bis 191⁰C in Form eines gelben Feststoffs erhalten.

Beispiel 16 Acetyliertes 5-Benzalhydantoin

Eine unter Verwendung eines Magnetrührers gerührte Mischung aus 2,60 g Benzaldehyd, 2,80 g Hydantoin, 2,60 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats und 10 ml Essigsäureanhydrid wurde bei einer Badtemperatur von 125° bis 135⁰C 30 min lang in einem mit Rückflußkühler ausgestatteten Kolben erwärmt. Innerhalb dieser Zeit erfolgte Lösung und Kristallisation. Beim schrittweisen Abkühlen auf Raumtemperatur innerhalb von 1,5 std wurde Wasser zugegeben, worauf das Reaktionsgemisch 18 std lang gekühlt wurde. Der hierbei ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert und mit 150 ml heißem Wasser und mit Leichtpetroläther gewaschen. Das erhaltene Produkt wurde 24 std lang bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 50⁰C getrocknet. Hierbei wurden 4,76 g acetyliertes 5-Benzalhydantoin in Form eines beigen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 214° bis 217⁰C erhalten.

Beispiel 17 Acetyliertes 5- (2'-Methoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,58 g o-Methoxybenzaldehyd, 1,95 g Hy-

309883/U08 ~³⁷~

dantoin, 1,95 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats und 7,5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem. Magnetrührer 30 min lang in einem Ölbad einer Temperatur von 125° bis 130°C erwärmt. Hierbei gingen sämtliche Verbindungen nach 2 min in Lösung. Nach beendetem Erwärmen wurde das Reaktionsgemisch aus dem ölbad entnommen und bei Raumtemperatur stehen gelassen (beim Kühlen über Nacht kam es zu einer Kristallisation). Nach der Zugabe von Wasser wurde das Reaktionsgemisch 6 std lang gekühlt. Die hierbei ausgefallenen Kristalle wurden abfiltriert, mit heißem Wasser gewaschen und bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 55°C getrocknet. Hierbei wurden 3,80 g acetyliertes 5-(2'-Methoxybenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs erhalten.

Beispiel 18 Acetyliertea 5-(3'-Methoxybenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,58 g m-Methoxybenzaldehyd, 1,95 g Hydantoin, 1,95 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats und 7,5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem Magnetrührer 30 min lang in einem Ölbad einer Temperatur von 125° bis 130⁰C erwärmt. Innerhalb von 10 min trat Lösung ein, beim Kühlen kam es zur Kristallisation. Hierauf wurde das Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen, dann mit Wasser versetzt und 6 std lang gekühlt. Der hierbei ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert, mit heißem Wasser gewaschen und getrocknet. Hierbei wurden 4,12 g acetyliertes 5-(3'-Methoxybenzal)-hydantoin in Form eines fahlgelben Feststoffe erhalten.

Beispiel 19 Acetyliertea 5-(4'-Mathoxvbenzal)-hydantoin

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Eine Mischung aus 2,58 g p-Methoxybenzaldehyd, 1,95 g Hydantoin, 1,95 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetata und 7,5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem MagnetrUhrer 30 min lang in einem ölbad einer Temperatur von 125° bis 130⁰C erwärmt. Hierauf wurde das Reaktionsgemisch über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen, dann mit Wasser versetzt und 6 std lang gekühlt. Der hier-'bei ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert, mit heißem Wasser gewaschen und getrocknet. Hierbei wurden 3,61 g acetyliertes 5-(4'-Methoxybenzal)-hydantoin in Form eines fahlgelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 218° bis 223⁰C (unter Zersetzung) erhalten.

Beispiel 20 Acetvliertes 5-(2 *.5'-Dimethoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,10 g 2,5-Dimethoxybenzaldehyd, 1,40 g Hydantoin und 1,30 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in 5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem MagnetrUhrer 30 min lang bei einer Badtemperatur von 125° bis 130⁰C erwärmt. Innerhalb von 10 min trat Lösung ein. Beim Stehenlassen über Nacht bei Raumtemperatur verfestigte sich das Reaktionsgemisch. Nach Zugabe von 15 bis 20 ml Wasser wurde das Reaktionsgemisch 1 bis 1,5 std lang gerührt. Hierauf wurden weitere 60 bis 70 ml Wasser zugegeben und das Reaktionsgemisch über Nacht gekühlt. Das hierbei ausgefallene Reaktionsprodukt wurde abfiltriert, und mit etwa 150 ml heißem Wasser gewaschen. Hierbei wurden 3,35 g acetyliertes 5-(2',5'-Dimethoxybenzal)-hydantoin in Fora eines klebrigen Feststoffs erhalten.

2,893 g des erhaltenen Rohprodukts wurden aus Essigsäure umkristalllslert, wobei 1,977 g eines gelben Festetoffs erhalten wurden.

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Beispiel 21 Acetvliertes 5-(3'.5 *-Dimethoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischtang aus 2,10 g 3,5-Dimethoxybenzaldehyd, 1,40 g Hydantoin und 1,30 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in 5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem Magnetrührer 30 min lang bei einer Badtemperatur von 125° bis 130⁰C erwärmt. Hierauf wurde das Reaktionsgemisch über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen, wobei eine Kristallisation erfolgte, anschließend mit 15 bis 20 ml Wasser versetzt, dann 1 bis 1,5 std gerührt, dann mit weiteren 60 bis 70 ml Wasser verdünnt und schließlich über Nacht gekühlt. Der hierbei ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet, wobei 3,24 g acetyliertes 5-(3^f _>5'-Dimethoxybenzal)-hydantoin in Form eines fahlgelben Feststoffs erhalten wurden.

Beispiel 22 Acetvliertes 5-(2*.4*.5'-Trimethoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,10 g 2,4,5-Trimethoxybenzaldehyd, 1,40 g Hydantoin und 1,30 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in 5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter magnetischem Rühren 30 min lang bei einer Badtemperatur von 125° bis 130⁰C erwärmt. Während des anschließenden Stehenlassens bei Raumtemperatur verfestigte sich das Reaktionsgemisch. Nach Zugabe von 15 bis 20 ml Wasser wurde das Reaktionsgemisch 1 bis 1,5 std lang gerührt, dann mit weiteren 60 bis 70 ml Wasser versetzt und schließlich über Nacht gekühlt. Der hierbei ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert, mit heißem Wasser gewaschen und 20 std lang bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 50°C

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getrocknet, wobei 2,417 g acetyliertes 5-(2',4',5'-Trimethoxybenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs erhalten wurden.

Beispiel 23 Acetvliertes 5-(3'.4'.5'-Trimethoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,10 g 3,4,5-Trimethoxybenzaldehyd, 1,40 g Hydantoin und 1,30 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in 5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem Magnetrührer bei einer Badtemperatur von 125° bis 130°C erwärmt. Hierbei trat nach 5 min Lösung ein. Beim Stehenlassen über Nacht bei Raumtemperatur verfestigte sich das Reaktionsgemisch. Hierauf wurde das Reaktionsgemisch mit 15 bis 20 ml Wasser versetzt, 1 bis 1,5 std lang gerührt und schließlich mit weiteren 60 bis 70 ml Wasser versetzt. Beim anschließenden Kühlen über Nacht schieden sich Kristalle ab, die abfiltriert, mit etwa 150 ml heißem Wasser gewaschen und 20 std lang bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 50°C getrocknet wurden. Hierbei wurden 2,60 g acetyliertes 5-(3',4',5'-Trimethoxybenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 185° bis 195⁰C erhalten. Beim Umkristallisieren aus Essigsäure wurde in 81%iger Ausbeute ein Endprodukt mit einem Schmelzpunkt von 190° bis 201⁰C erhsLten.

Beispiel 24

Acetvliertes 5- (3'.4'-Methvlendioxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,199 g Piperonal, 1,60 g Hydantoin und 1,50 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in

+ ) 30 min lang -41.-

3 09883/U08

5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem Magnetrührer 30 min lang in einem Ölbad einer Temperatur von 130° - 2°C erwärmt, wobei innerhalb von 5 min Lösung und Kristallisation erfolgten. Hierauf wurde das Reaktionsgemisch 16 std lang bei Raumtemperatur stehengelassen, dann mit Wasser versetzt, anschließend 0,5 std lang gerührt, mit weiterem Wasser versetzt und schließlich 6,5 std lang gekühlt. Der Hierbei ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert, mit 150 ml heißem Wasser gewaschen und 20 std lang bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 50⁰C getrocknet. Hierbei wurden 3,105 g acetyliertes 5-(3^!,4'-Methylendioxybenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 260° bis 262°C (unter Zersetzung) erhalten.

Beispiel 25 Acetvliertes 5-(3*.4'-Diacetoxvbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,50 g Protocatechualdehyd, 2,50 g Hydantoin und 1,25 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in 12,5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem Magnetrührer 0,75 std lang bei einer Badtemperatur von 105° bis 110⁰C erwärmt, wobei innerhalb von 10 min Lösung erfolgte. Die heiße Lösung wurde mit 12,5 ml Wasser versetzt und über Nacht gekühlt, worauf der ausgefallene Niederschlag abfiltriert, mit Wasser gewaschen und 5 std lang bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 55⁰C getrocknet wurde. Hierbei wurden 1,64 g acetyliertes 5-(3^f,4'-Diacetoxybenzal)-hydantoin in Form eines farblosen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 200° bis 210⁰C erhalten.

0,958 g des erhaltenen Rohprodukts wurden aus Essigsäure bei Raumtemperatur umkristallisiert, wobei 0,703 g farbloser Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 233° bis 239⁰C erhalten wurde.

309883/U08 ~⁴²~

Beispiel 26 Acetvliertes 5-(2KJhlorbenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,10 g o-Chlorbenzaldehyd, 1,80 g Hydantoin und 1,50 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in 5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem Magnetrührer 30 min lang in einem Ölbad einer Temperatur von 125° bis 130⁰C erwärmt, wobei nach 5 min Lösung erfolgte. Beim Abkühlen auf Raumtemperatur verfestigte sich das Reaktionsgemisch. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur stehen gelassen, dann mit etwa 25 ml Wasser versetzt, hierauf 1 bis 1,5 std lang gerührt und schließlich 5 std lanegekühlt. Der hierbei ausgefallene feste Niederschlag wurde abfiltriert, mit heißem Wasser gewaschen und 18 std lang bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 55⁰C gewaschen. Hierbei wurden 3,61 g acetyliertes 5-(2'-Chlorbenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs erhalten.

Beispiel 27 Acetvliertes 5-(4¹Nitrobenzal)-hydantoin

Eine Mischung aus 2,00 g p-Nitrobenzaldehyd, 1,40 g Hydantoin und 1,30 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in 5 ml Essigsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem Magnetrührer 30 min lang bei einer Badtemperatur von 125° bis 130⁰C erwärmt, wobei innerhalb von 5 min Lösung erfolgte. Beim Abkühlen auf Raumtemperatur verfestigte sich das Reaktionsgemisch. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht stehengelassen, mit etwa 25 ml Wasser versetzt und dann 1,5 std lang gerührt. Nach Zugabe von weiteren etwa 75 ml Wasser wurde das Reaktionsgemisch 40 std lang gekühlt,

-43-309883/U08

worauf der ausgefallene, etwas klebrige Feststoff abfiltriert, mit etwa 50 ml heißem Wasser gewaschen und Über das Wochenende bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 50°C getrocknet wurde. Hierbei wurden 3,59 g acetyliertes 5-(4'-Nitrobenzal)-hydantoin in Form eines braunen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von über 300°C erhalten.

Beispiel 28 Proploniertes 5-(3*.4'-Dlmethoxvbenzal)-hydantoin

Eire Mischung aus 2,10 g Veratraldehyd einer Reinheit von 99,98%, 1,40 g Hydantoin und 1,60 g Kaliumbicarbonat in 6 ml Propionsäureanhydrid wurde unter Rühren mit einem Magnetrührer 30 min lang in einem ölbad einer Temperatur von 125° bis 130°C erwärmt. Nach etwa 5 min erfolgte Lösung, hierauf schrittweise Kristallisation. Das Reaktionsgemisch wurde nun 20 std lang bei Raumtemperatur stehengelassen, dann mit Wasser versetzt und schließlich zur Zersetzung von restlichem Anhydrid 45 min lang mittels eines Magnetrührers gerührt. Bei 8,5-stündigem Kühlen fiel aus dem Reaktionsgemisch ein Niederschlag aus, der abfiltriert, mit 25 bis 35 ml heißem Wasser gewaschen und über Nacht bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 55°C getrocknet wurde. Hierbei wurden 3,07 g rohes propioniertes 5-(3',4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin in Form eines gelben Feststoffs erhalten.

Praktisch dieselben Ergebnisse wurden erhalten, wenn die in den vorherigen Beispielen genannten Benzaldehyde in entsprechender Weise umgesetzt wurden.

Beispiel 29 Mono- und Diacetylierung von 5-(3^f.4'-Dimethoxvbenzal)-hydantoin

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Eine Mischung aus 1,00 g 5-(3',4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin mit einem Schmelzpunkt von 280° bis 281⁰C und 10 ml Essigsäureanhydrid wurde 6 std lang bei einer Badtemperatur von 150° i 5⁰C auf Rückflußtemperatur erhitzt, wobei beim Abkühlen Kristallisation erfolgte. Das Reaktionsgemisch wurde nun über Nacht gekühlt, worauf der ausgefallene Niederschlag abfiltriert und über Nacht bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 50⁰C getrocknet wurde. Hierbei wurde O,416 g gelber Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 204° bis 208⁰C erhalten. 0,375 g dieses gelben Feststoffs wurde aus Eisessig umkristallisiert, wobei 0,298 g Endprodukt mit einem Schmelzpunkt von 207° bis 211⁰C und einem Acetylwert von 16,1 (theoretisch für eine Monoacetylierung 14,8%) erhalten wurde.

Die von der ersten Charge befreite Mutterlauge wurde mit Wasser versetzt (Bildung eines Niederschlags) und gekühlt. Der ausgefallene Niederschlag wurde abfiltriert und bei einem Druck von 10 mm Quecksilbersäule und einer Temperatur von 50⁰C getrocknet. Es wurde 0,530 g eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 152° bis 154⁰C erhalten. Beim Umkristallisieren aus Eisessig wurde in 76%iger Ausbeute ein Endprodukt mit einem Schmelzpunkt von 150° bis 155°C und einem Acetylwert von 22,0 (theoretisch für eine Diacetylierung 25,9%) erhalten.

Wurde die Reaktionsdauer auf 16 std verlängert, wurden entsprechende Ergebnisse erhalten.

Beispiel 50

Acetvlierung von 5-(5'.4^l-Dimethoxybenzal)-hvdantoln mit Natriumacetat/Essigsäureanhvdrid

Eine Mischung aus 1,04 g 5-(3',4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin,

-45-

+ ) -on 0,41b s 309883/ U 08

welches durch Natriumhydroxidhydrolyse des Reaktionsprodukts von Beispiel 14 erhalten wurde, und 0,44 g aufgeschmolzenen, wasserfreien Natriumacetats in 6 ml Essigsäureanhydrid wurden unter Rühren mit einem Magnetrührer etwa 30 min lang bei einer Badtemperatur von 125° bis 130⁰C erwärmt. Beim Stehenlassen des Reaktionsgemischs über Nacht bei Raumtemperatur erfolgte Kristallisation. Nach der- Zugabe von Wasser wurde der gebildete Niederschlag abfiltriert, wobei 1,49 g eines gelben Feststoffs erhalten wurden. Dieser wurde aus Essigsäure umkristallisiert, wobei ein kristalliner gelber Feststoff mit einem Acetylwert von 15,1% erhalten wurde.

Dieses Produkt besaß eine hohe Wirksamkeit gegen Viren der Picorna-Gruppe.

Praktisch dieselben Ergebnisse wurden erhalten, wenn die gemäß den vorherigen Beispielen hergestellten, in 5-Stellung durch einen substituierten Benzalrest substituierten hydantoine in entsprechender Weise behandelt wurden.

Beispiel 31

Herstellung von reinem 5-(3*.4'-Dimethoxvben2al)-hvdantoinmonoacetat

110 g gemäß Beispiel 29 hergestelltes rohes 5-(3',^'-Dime thoxybenzal) -hydantoinmonoacetat wurden durch Erwärmen auf eine Temperatur von 90⁰C in 180 ml Dimethylsulfoxid gelöst. Beim Stehenlassen über Nacht erfolgte Kristallisation. Die Kristalle wurden abfiltriert und getrocknet, wobei 92,8 g Produkt erhalten wurden. Dieses wurde unter ähnlichen Bedingungen auf 150 ml Dimethylsulfoxid umkristalli-

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siert, wobei die ausgefallenen Kristalle abfiltriert, mit Äthanol gewaschen und dann getrocknet wurden. Das hierbei erhaltene Produkt wurde fein gemahlen, in 250 ml Äthanol aufgeschlämmt, abfiltriert und schließlich getrocknet, wobei 77,7 g reines Monoacetat mit einem Schmelzpunkt von 223° bis 225°C erhalten wurden. Das Kernresonanz Spektrum bestätigte die Anwesenheit von einer Acetatgruppe pro Molekül.

Beispiel 32

Herstellung von reinem 5-(3'.4'-Dimethoxvbenzal)-hvdantoindiacetat

Das in Beispiel 29 angefallene Filtrat mit darin enthaltenem 5-(5f4'-Dimethoxybenzal)-hydantoindiacetat wurde zur Trockene eingedampft, worauf der Rückstand (128 g) durch Erhitzen auf eine Temperatur von 100⁰C in 250 ml Dimethylacetamid gelöst wurde. Beim Stehenlassen über Nacht kristallisierten 69 g Produkt aus, welches unter entsprechenden Bedingungen aus 100 ml Dimethylacetamid umkristallisiert wurde. Die getrockneten Kristalle (55,1 g) besaßen einen Schmelzpunkt von 181° bis 183°C.

Das KernresonanzSpektrum bestätigte die Anwesenheit von zwei Acetatgruppen pro Molekül.

Beispiel 33

Trennung der reinen Mono- und Dlacetate von 5-(3'.4'-Dimethoxvbenzal)-hydantoin und deren Isomeren

Das bei der Acetylierung von 5-(3' ,4^Dimethoxybenzal)-hydantoin mit aufgeschmolzenem, wasserfreien Natriumacetat und Essigsäureanhydrid gemäß Beispiel 30 erhaltene Rohprodukt

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wurde aus Dimethylsulfoxid fraktioniert kristallisiert. Die einzelnen Fraktionen wurden hierauf wiederholt aus Dimethylsulfoxid umkristallisiert, wobei folgende fünf Verbindungen erhalten wurden:

a) Monoacetat A

Diese Verbindung besaß einen Schmelzpunkt von 254° bis 256°C. Das KernresonanzSpektrum bestätigte die Anwesenheit von einer Acetatgruppe pro Molekül.

b) Monoacetat B

Diese Verbindung besaß einen Schmelzpunkt von 221° bis 224°C_# Das KernresonanzSpektrum bestätigte die Anwesenheit von einer Acetatgruppe pro Molekül.

c) Monoacetat C

Diese Verbindung war identisch mit der Verbindung von Beispiel 31.

d) Diacetat A

Diese Verbindung besaß einen Schmelzpunkt von 134^C bis 137 C. Das Kernresonanzspektrum bestätigte di« Anwesenheit von zwei Acetatgruppen pro Molekül.

e) Diacetat B

Diese Verbindung war identisch mit der Verbindung von Beispiel

Beispiel 34

Herstellung von reinen Mono- und Diacetaten von 5-(2'.3'.5' Trimethoxvbenzal)-hydantoin und deren Isomeren

Die in Beispiel 8 hergestellten 5-(2',4',5'-Trimethoxybenzal)-

3 0 9 8 8 3 / U 0

23297Α5

hydantoine wurden in der in Beispiel 29 geschilderten Weise unter Rückflußtemperatur mit Essigsäureanhydrid acetyliert. Eine fraktionierte Kristallisation des Rohprodukts aus dLpolaren, aprotischen Lösungsmitteln, wie Dimethylsulfoxid und Dimethylacetamid, lieferte vier reine Verbindungen:

a) Monoacetat A

Nach mehrmaligem Umkristallisieren aus Dimethylsulfoxid besaß diese Verbindung einen Schmelzpunkt von 195° bis 197⁰C. Das Kernresonanzspektrum bestätigte die Anwesenheit von einer Acetatgruppe pro Molekül.

b) Monoacetat B

Nach Umkristallisieren aus Dimethylacetamid besaß diese Verbindung einen Schmelzpunkt von 223° bis 226°C. Das Kernresonanzspektrum bestätigte die Anwesenheit einer Acetatgruppe pro Molekül.

c) Diacetat A

Diese Verbindung besaß nach Umkristallisieren zunächst aus Dimethylsulfoxid und dann aus Dimethyl-.acetamid einen Schmelzpunkt von 187° bis 189°C. Das Kernresonanzspektrum bestätigte die Anwesenheit von zwei Acetatgruppen pro Molekül.

d) Diacetat B

Diese Verbindung besaß nach Umkristallisieren aus Dimethylacetamid einen Schmelzpunkt von 175° bis 177⁰C. Das Kernresonanzspektrum bestätigte die Anwesenheit von zwei Acetatgruppen pro Molekül.

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23297A5

Beispiel 35

Acetylierunff von 5-(3'.4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin in Dimethylacetamid/Pyridin

Eine Lösung von 0,5 g des genannten Hydantoins in 5 ml wasserfreiem Dimethylacetamid und 0,6 ml wasserfreiem Pyridin wurde mit 0,5 ml Acetylchlorid behandelt, wobei sich unter geringem Erwärmen unmittelbar ein gelber fester Niederschlag bildete. Nach 17-stündigem Stehenlassen bei Raumtemperatur wurde durch Fällen in Wasser 0,53 g Reaktionsprodukt in Form eines gelben Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 204° bis 208⁰C erhalten. Beim Umkristallisieren aus Dimethylsulfoxid in der in Beispiel 31 geschilderten Weise wurden0,170 g gelbe Kristalle mit einem identischen Kernresonanzspektrum wie das des in Beispiel 31 beschriebe nen 5-(3',4^!-Dimethoxybenzal)-hydantoinmonoacetats erhalten.

Beispiel 36 Pivalovllerung von 5-(3'.4^!-Dimethoxybenzal)-hydantoin

Eine Lösung von 0,5 g des Hydantoins in 5 ml Dimethylacet amid und 2 ml wasserfreien Pyridine wurde mit 2 ml Pi valoylchlorid versetzt. Die erhaltene fahlgelbe Lösung wurde 67 std lang bei Raumtemperatur stehengelassen und anschließend in Wasser eingegossen. Das Ganze wurde dann mit Methylenchlorid extrahiert, worauf der Methylenchloridextrakt einmal mit Natriumhydrogencarbonatlösung, dann mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure und schließlich mit Wasser gewaschen wurde. Beim Eindampfen des über NagSO^ getrockneten Extrakts wurde 0,5 g gelber F_eststoff mit einem Schmelzpunkt von 153° bis 158°C erhalten. Beim Umkristallisieren aus Methylenchlorid/Leichtpetroleum (Siede-

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- 50 - 2379745

punkt 30° bis 60°C) wurde 0,27 g Monopivalat in Form gel ber Kristalle mit einem Schmelzpunkt von 177° bis 178° erhalten.

Beispiel 37

Palmitqylierung von 5- (3* .4 '-Dime thoxvbenzal) -hydantoin

Eine Lösung von 0,5 g des genannten Hydantoins in 5 ml trok- kenem Dimethylacetamid und 1,0 ml wasserfreiem Pyridin wurde mit 2,75 g Palmitoylchlorid versetzt, wobei sich ein gelber Niederschlag abschied. Das Reaktionsgemisch wurde 64 std lang bei Raumtemperatur stehengelassen und dann mit Wasser versetzt, wobei sich ein fester Niederschlag abschied. Dieser wurde abfiltriert und zunächst mit Wasser und dann wiederholt mit Hexan gewaschen. Die erhaltenen 1,5 g beigen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 75° bis 78° " wurden aus einer Mischung von Chloroform und Leicht petroleum umkristallisiert, wobei 0,9 g Dipalmitat in Form eines nahezu farblosen Feststoffs mit einem Schmelzpunkt von 87° bis 88° erhalten wurde.

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Claims

Patentansprüche

worin bedeuten: R₁, R₂ und R,

und

einzeln jeweils ein Wasserstoff- oder Halogenatom oder einen Hydroxyrest, Alkoxy- oder Acyloxyrest mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder Nitrorest, oder

zusammen einen Rest der Formel -OCH₂-O oder ein Acylderivat hiervon, bei welchem der Hydantointeil eine oder mehrere Acylgruppe(n) enthält und jede Acylgruppe 1 bis 20 Kohlenstoffatome aufweist,

besteht.
2. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeich net, daß es aus einem Acylderivat einer Verbindung der angegebenen Formel besteht.

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3. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem aus einem Acetat bestehenden Acylderivat der Verbindung der angegebenen Formel besteht,
4. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem aus einem Propionat bestehenden Acylderivat einer Verbindung der angegebenen Formel besteht.
5. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem aus einem Pivaloylat bestehenden Acylderivat einer Verbindung der angegebenen Formel besteht.
6. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichn e t , daß es aus einem Acylderivat einer Verbindung der angegebenen Formel besteht, welches durch Umsetzen der betreffenden Verbindung mit Essigsäureanhydrid zur Ausbildung mindestens einer Acetylgruppe im Hydantointeil hergestellt wurde.
7. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem Acylderivat einer Verbindung der angegebenen Formel besteht, welches durch Umsetzen der betreffenden Verbindung mit Essigsäureanhydrid in Gegenwart von Natriumacetat zur Ausbildung mindestens einer Acetylgruppe im Hydantointeil hergestellt wurde.
8. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem 5-(3^!,4'-Dimethoxybenzal)-hydantoin besteht.
9. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem acetylierten 5-(3',^'-Dimethoxybenzal)-hydantoin besteht.

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10. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem acetylierten 5-(3'-Methoxy-4-acetoxybenzal)-hydantoin besteht.
11. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem acetylierten 5-(Benzal)-hydantoin besteht.
12. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem acetylierten 5-(2',4¹,5'-Trimethoxybenzal)-hydantoin besteht.
13. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem acetylierten 5-(3',4*,5'-Trimethoxybenzal)-hydantoin besteht.
14. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem acetylierten 5-(3',5'-Dimethoxybenzal)-hydantoin besteht.
15. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem Diacetat von 5-(3',^¹-⁰*- methoxybenzal)-hydantoin besteht.
16. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem Monoacetat von 5-(3^l»^^l~^D^~ methoxybenzal)-hydantoin besteht.
17. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem Monoacetat von 5-(2^!,4',5'-Trimethoxybenzal)-hydantoin besteht.
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2379745
Canada Packers Limited
und Institute ...
22. August 1973

18. Mittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem Diacetat von 5-(2',4',5'-Trimethoxybenzal)-hydantoin besteht.

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