DE1937497A1

DE1937497A1 - A-nor-Pregnane und Verfahren zu ihrer Herstellung

Info

Publication number: DE1937497A1
Application number: DE19691937497
Authority: DE
Inventors: Principe Pacifico A; Levine Seymour D
Original assignee: ER Squibb and Sons LLC
Current assignee: ER Squibb and Sons LLC
Priority date: 1968-08-01
Filing date: 1969-07-23
Publication date: 1970-02-05
Also published as: FR2014881A1; GB1283991A; US3531517A; CH518925A

Description

23. Juli 1363

tto Zo: B 583 (TTo/kä);
Oase 749 349 -S

BoRo SQUIBiB & SOlISs, HC₅
Sew Toric, Ιϊοΐο, Yo StnAo,

" Anaor-Pregsmne und Verfahren su ihrer Herstellung "

Priorität? I₀ Av^ust 1$6B_P VcSt₀A₀, Ir« 749 349

Die Erfindung; betrifft, raeue A-nor-Pregnanderivate- der Teilstruk·= türen I oder'Ii

fs · . . ?^B5

Ü" .0E / J*L- - OR

oder

/■ ■ « j

(I)' . (II)

in denen R entweder ein Wasserstoffatom oder ein-Acylrest ist«,

Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen, das dadurcii gekeimsei ohne t ist, dass man das entsprechende 17 ß~Hydroxy~A-nor~pragestexon der Einwiricung der SttHyme vos. Streptoriyces roseochromogenes unterwirft₀ Man erhält als iindproctairir ei« 17 ύ, _r20^-JJihyd:eo3r.y™A---nor-progeßtei^aon.

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-.--" BADORIQtNAU

benenfalls kann dieses'-17 Φ »200-Dihydrexysteroid entweder in der 17 0?- oder 20.Ot»Stellung in an sieh bekannter Weise acyliert wer-*, den«. So kann &„B₀ die 20 <Sf «Stellung isunächst aeyliert werden durch Umsetzung des Vf öl .-20Oi-Dihydr.oxysteroids mit einem Acy» lierungsmittel in Gegenwart einer organischen Base, wie Pyridino Die 17 Of _? 20 Qf =Diaeyl verbindung kann unmittelbar durch Umsetzung des 1? Cf *20 Qf^Dihydroxysteroids mit einem AGylierungsmittel in Gegenv/art einer Säure., wie Perchlorsäure₈ hergestellt werden*

Die beTorzugten loylreste leiten sich ron Kohlenwasserstoffcarbonsäuren mit weniger als 12 C=Ätomea ab_o Beispiele für diese Carbonsäurea sind die Medersa. älipiiatisehen Carbonsäuren-₈ wie Ameisensäure^ Essigsäure _t Propionsäure_p Buttersäure* Tölerian=-- säure _t Irimethylessig-säüre" und Capronsäure_& die olefiniseh unge-sättigten niederen aliphatischen Carbonsäuren_p wie Acrylsäure.j, Methacrylsäure _t Crotonsäure, 3-Butenoarbonsäure- und 3eneciosäure_? die -.monocyclisehen aromatischen Carbonsäuren₉ wie Benzoesäure_p und !Toluylsäure_s die durch einen Etonocyelisehen aromatischen Best substituierten niederen aliphatischen Carbonsäuren* wie Phenylessigsäure _P ß-Phenylpropionsäure _t oi-»Phenylbuttersäure und 5"( p-Me thy !phenyl )-pent ancarbonsäure, die Cy el oalkyloar bonsäuren wie CyclobutancarboKsäure a Cyclopentäncarbonsäure und Cyclohexan·= carbonsäure_e die Oycloalkenylcarbonsäurens, -wie" 2-Cyclqbutenear='. bonsäure und 3-CyGlopentencarbonsäure _s sowie die durch einen

- - ■ ■-■"'■" ' "■ " . - -" " ' Cycloalkyl- oder Gycloalkenylrest substituierten niederen aliphatischen .Carbonsäuren, v/ie Cyclohexanessigsäure,."ßi«=Cyclöpentanbuttersäureg 2=Cyclopentene.ssigsäure und 3~(3«"Cyclohexen).=pen·=* tencarbonsäureo '" -

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BAD ORIGINAL

Die enzymatische Hydroxylierung wird am besten so durchgeführt, dass man das Ausgangssteroid zxl einer aeroben Kultur des Miero~ Organismus gibt oder das Äusgangssteroid in wässrigem Medium mit Luft und dem Microorganismus susaranienbringt„ Ira allgemeinen 3ind die Bedingungen sur Züchtung des MicroOrganismus im Verfahren der Erfindung die gleichen wie die jsur Züchtung anderer Pilze aur Herstellung von Antibiotica und bs$w_o oder ^Riboflavin angewandten Bedingungen. . ■

Der MicroOrganismus wird aerob in oder auf einem geeigneten iiäh.rboden gezüchtet,- Bin geeigneter Fährboden enthält Stickstoffverbindungen sowie Quellen für Kohlenstoff und Energie«. Als Kohlenstoff- und Energiequellen !kommen■ Kohlenhydrate* wie Eohr*. zucker, Melasse_? Glucose, Maltosef Stärke oder Dextrin^ Fett«· säuren_t Fette und bav/o oder daa luegangssteroid in Fraget, Tor- . zugsweise enthält der Nährboden ausser dem Äusgangssteroid eine assimilierbare Quelle für Kohlenstoff und Energie« Als Stickst off quelle kommen Naturstoffe, 'wie So jafrohnenitiehl „ Mai squellvasser, FIe i-s chez.tr akt and" bzw & oder die löslichen Süekstände der Alkoholdestillationj, oder synthetische Produktes die aus einfachenj.. synteetisch herstellbaren organischen oder anorganic sehen Verbindungen ,bestehen* in Frage? v/ie Asuaoniumsalze _r Alkalinitrate _r Affiiiiößäüren oder Harnstoff,, V/ährend der Yergärung muss für auai'eichende Zufuhr steriler Luft gesorgt werden _r indem max>: s,B_t eine-"grosse-Oberfläche-des Nährbodens der Luft aussetzt oder nach dem SubmersheXüftungs-yerfähren arbeitet. Das Steroid, kann dem Nährboden ^.iährend der Inkubationszeit oder Tor der StsriXicsrtior, oier Beimpfuxi^ sinTerleibt werden. "Der ■ beTor·» sug-te Konsen-*;r«tio*;.£^!l5ereiQh des Steroids im" Nährboden-beträgt.

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■■ ■ . ■, ■ ν.

etwa OpOl bis 0„l0 G-ewv~$o Die Züchtungsdauer kann beträchtlich schwanken, z-.„-B:_e zwischen etwa 6 und 96 Stunden betragen« Das umgewandelte Steroid wird aus dem lährboden in üblicher Waise abgetrennt,, wie in den Beispielen erläutert ist₀

Die Endprodukte des Verfahrens der Erfindung sind physiologisch aktive Verbindungen;, die sowohl in der Humanmedizin als auch in der Veterinärmedizin verwendet werden közmeno Sie hemmen die Wirkung der Androgene, wie Testosteron* und werden daher als Anti=· androgene bezeichnete So können sie z.B« zur Behandlung von hyperandrogener Akne verwendet werden₀ Zu diesem Zweck wird das Intiandrogen peroral in Dosen von etwa 10 bis 200 mg/kg Körpergewicht νtäglich, verabfolgt. Die Verbindungen können auch parenteral, ZoBo subcuianp in Dosen von etwa 2 bis 60 mg/kg Körperge·=' - wicht täglich verabfolgt werden. Ferner können die Verbindungen zur lokalen Behandlung_f ZoB₀ in Form einer Creme oder einer Lotion,verwendet werden„ die etwa 1 bis 25 $ des Endproduktes der Erfindung enthalte

Die Verbindungen der Erfindung sind auf Grund ihrer antiandrogenen Wirkung auch wertvoll in der Veterinärmedizin₀ Männliche Schweine, deren Fleisch gewöhnlich infolge des charakteristischen Geruches ungeniesgbar ist _t können mit den Verbindungen «der Erfindung behandelt werden _t um die Geruchsentwicklung zu unterdrücken und damit das Fleisch geniessbar zu machen«, In ähnlicher Weise kann man eine Kapaunisierung von Hähnchen erreichen,, ohne die Tiere Kastrieren zu■-müssen«, Zu diesem Zweck können die Ver- ' bindungen der Erfindung in Dosen von etwa 10 bis 200 mg/kg Kör-, pergewicht täglich oral oder in Dosen von etwa 2 bis 60 mg/kg Körpergewicht täglich parenteral verabfolgt werden.

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■ ©eraäss einer weiteren Ausfu^hrungsforia der Erfindung--können ' 17 etj^Oß^Dihyärozy-Ä-nor-progesterone auch durch Hydrierung des entsprechenden 17 Cf-=-Hydroxy-Ä»nor-progestero3aSBiit latriumborhy-= drid hergestellt werden_o Ifas erhaltene Mhydroxysteroid kann: hierauf^Λ unter den vorgenanntenBedingungen au den 17# -Äoylosy- oder 17 & $ 2Oß«-Diäcyl03Eysteroiden der Erfindung acyliert werden₀

Die Beispiele erläutern die Erfindung.

A) .germentation

Ia Schrägagarröfereiienf. die den nachstellend genannten Hährboden

(A) enthalten,, wird Streptomyces roseoehromogeneß ('ATCC 13 400) auf der Oberfläche wachsen gelassen_o -

~" - Gramm ^:

Glucose .10

Hefeestrakt 2,5

K₂HOP^ l :

Agar- : " ' 20 ■. - . .:..'■

destilliertes Wasser auf 1 Liter

Das Oberflächenwachsturn einer 2 Woohen alten Kultur wird in 5 ml einer 0_a01 $^ige"n v;ässrigen Matriiimlaurylsulfatlösuiig sus^ . pendierto'-X ml Anteile dieser Suspension werden hierauf zum Be-' impfen von acht 250 ml fassenden Erleniaeyer-Kölben verwendet, die jeweils 50 ml des sterilisierten lährbödens (B) enthielten:

6> ■.-..■ ■ .■ ■■■■ :. ■ - ■.

ß-raiaia

Glucose ;; . 30

Sojjabohnenmehl 20

Sojaboiuaenöl . ■ · 2,2

destilliertes Wasser auf 1 Liter« .

lach 7-tägiger Iniaibation bei 25⁰C unter kontinuierlichem Schüt~ tsln auf einer "Dre&sehütteemaschine mit 280 U/Min _a und einem Hula τοπ etwa 5 ßia werden ..XO vo! „-^-ige Übertragungen auf vier=- unddreiesig 250 ral fassende Erleumeyer-Kolben durchgeführtt die jeweils 50 ml frisch sterilisierten Mährbo&en(B) enthielten«, Dann wird jeder Kolben mit 0_P25 mi einer sterilen Lösung von 60 mg/sil 17 0f-»Hydro3£y-.ß,^nor-progeßteron in sryii'-Diraethylforiniamid beschickt ο Die SteroidkonsentratiGn beträgt 300 Microgramm/ial. Es werden insgesamt 510'-mg fermentiert_o

■Hach etwa 48~stündiger Inkubation unter den vorstehend beschrie-=· benen Bedingungen wird der Inhalt der Kolben zusamniengegosaen und die ßärmaische mit 12 η HgSO. auf Pg 4_S5 eingestellte Die angesäuerte Gärmaische wird hierauf durch ein Klärfilter filtrierte Die Kolben, das Mycel und der. Filterkuchen -werden nacheinander mit 100 ml Anteilen warmem Wasser -gewaschen,. Das vereinigte Jll~ trat lind die Waschlösungen beeitisen ein Tolumen von 2 200 ßil_P

B) Das erlialtene Filtrat wird dreimal mit Chloroform extrahiert.. Die GhloroforjaextralEts i^erclen dreimal mit Wasser gewaschen _t über ifetriumsulfat !getrocknet und sur irodlcene eingedampfte Der üücks-tand wird ans öinem Gamisoh -von .-!thy lace-feat und Diiso-propyl-EVüfcisr umjErißtalliplert,- Ausbeute 227 mg 17 S.(.'20Uf-.-!Diiiyd

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, ... ., BAD ORIGINAL

.■'..-.■ 193749?

• ■ „ γ - ·

vom F₀. 195 Ms 196_f5°C·. Die Analysenprobe schmilzt nach Ui?kristal.!isation aus Äthylacetat/Diisopropyläther bei 196,5 Ms 197»5°C; A^ 2»81» 2,94, 5,96 und 6,18/*; λ°2^Η5^ΟΗ 234 ω;; (£ « 15 900)_f T g|^X3 9,22 (s_f !8-GH₃), 8,82 (s, 19-σΗ_ν),-8,81 (d_f 21-CH₃, J«6 c/e)_f 6,13 (m, 20 Of-H) und 4,24 (e_f >-H)o '

C H .

ber«: 75,43?- 9,50;

gef.: 75,63; 9,70.

Beispiel 2 ' ' ■ -

17 Cf"°Hydroxy-"2C

■- I* nilHn HIlMlIl ■ IHl IMlIl Jffc III ■ I I

E3.ne !lösung von 40 mg 17 ^V 20 OC -Di
in 0_r2 ml Essigöäureanliydrid und 0,4" nil Pyridin. wird 4 Stunden bei iiaumtemperatur stehengelassen_p anschliessend mit Wässer verdünnt und die ausgeßchiedene Fällung abfiltriert₀ Ausbeute 41 mg Produkt vom P₀ 235 bis 237⁰C „Nach Uralcri sterilisation aus Aceton/ DiäthylEtker schmilzt die Analysenpjrobe bei 236_f5 bis 237/5⁰C; Λ^ΚΒΓ2_Ρ91, 5-,76_f 5,96 und 6,18 ja; Λ ^e2^H5^OH 234 ψ (Β »16 500); r gJs¹? 9,17 (b, 18-CE₅>_f ^: 8_P82 (s| 19-CH₅), 8,77 (d_t 21-CH₃, J= 6 c/ß), 7,64 (s, 2OS-CH₅C-), 4p9 " (in_r 20 Oi-H) und 4,25 (s, 3-H).

C H

her»: 75,30; 8_r95;

73,23; 8_f82..

Beispiel 3

e-Lösung von 0,0033 ml Percluios^iaure in 0_P3 ml Essigsäurean hydrid wird su 500 rag 17 se

'-. ■■;■;■■■ ; ■■. " ■ .; ./ ^:: ■.„■ a» : . >/ ' : V-

oder 17 ß'-Hydrbxy-aO Cf-.ao@toxy-A~aor~pregn-3-en-2-on in IO ml Essigsäureanhydrid gegeben₀ Das Reaktionsgemisch. wird 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt,, anschliessend in Eiawaeser eingegossen und mit Chloroform extrahierte Die Ghloroformextrakte worden mit 8 $~iger Kochsalzlösung gewaschen,, getrocknet und« zur Trocke ne eingedampfte Es hinterbleibt das 17 <* _P200^~Diacetoxy-A~nor<"

Beispiel 4

Eine lösung von 1,4-g 17 $-Hydroxy~A~nor<~progesteron in 225 ml Methanol wird mit 280 rag Hatriuratsorhydrid versetzt und 1 Stunde bei 0 Q gerührte Danach wird das Reaktionsgemisch mit Essigsäure verse tat und aur Iroclcene eingedampfte Der Rückstand wird mit'Wasser versetzt und mit Chloroform extrahiertο Die Ghloroformextrakte werden mit 8 $-iger Kochsalzlösung gewaschen^ getrocknet und ^ Der Rückstand wird aus Chlor of ora/Diisopropyläther

umkristallisiertη Ausbeute l_sl g Produkt vom P_o 208 bis 209⁰C₀ Nach tJmkristallisation a.us Chloroform/Diisoprspyläther schmilzt die Analysenprobe bei Fo 211 bis 212⁰C₀ Ä^KBr 2,81-, 2_P87_P 5_P95 imd6_r19jü? A^q2^H5^0H 233 mu ( £ - 15.000)? T ™C1 ^9sU (b_? M8-CH )ρ 8_f83 (s_f 19-0H₃)i 8,83 (d, J^6 c/e, 21^CH₅), 5_P98 (q_r J-6 c/s_c 20Of-E) und 4,27 (s_F 5J=H)₀

^: - ^c - ^H , ■ «' ' ■' ■ .,■■■■' . '■ ■'■-.■■ Jj 75^43; 9_Ρ50»

i 75_P44; 9_C51_O

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SAD ORIGINAL

Eine Iiösimg von 50 mg 17& j.2
iii Op25 ml EsalgsäxiK'-easliydrid und O_s ^fjÖ ml Pyridin wird 4 Stunden" bsi -Eauäfliissiperätur stehengelassene Ilanaeh -wird das Reaktioasgemiseil mit Wasser .verdünnt und. die" Milling atefiltriexto .toe"beüte_ tag Produkt vom 3?_o 205 bis 207⁰G₀ Wä&h Umkristallisation aus

ßchmilst die Asalysenprobe /bei 211 bis 212⁰C? Λ ^ϊίΒΓ 2_?80,;,5',80_? "5,95 und- 6_P19>r-A^C2^H5^0H U » 15-000);· T |g_:i 9,2? (b, IS-GH-}« 8_S81 (-s, 19^C 8,7t Cd₂ J*6 e/s₂ 2I=GE^), 7,94 (a, '200-0^-6-0.), 4,89

(β_ϋ -20^"H) und 4,a7"'(:B» 3-H)₀ . V-. V -.. . - ,-C /-Η - . ■ ■■■■■;;

ber.oi -73,-30-ϊ ^: β,95; ' . - ""' .■ " " ■ ■"

1*7 gf_)l2OiB-'Sia.oetcK£y~A

G-eisäss Beispiel 3» jedpe^b. unter Verv/endung des entsprseilenden X? ^% EOß-'üila^drosyster-oids ©rhäXt .mazi das genannts "Produkt _Q .

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imim am.-: ■. V^;;:

Claims

- ίο

Fa. t eat a .ti s ox ü ο h e

narie der Seilstruktur I oder II

R-G-OR

KO-C-H

OR oder

OR

in denen R ein Wasserst of fatoai oder ein Jtcylrest ist_c 2> 1? (M 3 20ß- oder 17 Cf _p 20 ^-Li^arosy-i^Bor-progesterone der

GH,

BO-C-H

GH

in denen R ein WasiserstoJTfatoni oder ein Aeylrest 1st,

-17 ©f ? 2D ei -Diacet oxy-A-nor«-pregB.~3-sn=»2-on«

6 _o 17

7 ο 17 ^ ^Hjdroxj-«20fl-aeetoxy-i.-nor-pr-ega-3-o:a~2^oa c 8 ο 17 ίί _?2uß

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BAO OHlQiNAL

9 ο Verfahren jsur Here teilung "der 17$ ? 20 Ρί -Düiydrosiysteroide nach .Anspruch 1 _? d & d u r c h g e k β η η ζ e i c h η e t ₁ dass man ein 17 #'^Hydroxy~A~nor~progeeteron enzymatisch hydroxyliert und gegebenenfalls daß erhaltene 17a ?20 ßf«Dihydroxysteroid acyliertr,

10ο Verfahren nach Anspruch 9_f dadurch g elie iin-S! e i c h η e X,_t dass raan zur eiiaymatisehen Hydroxylierung die Enzyme von Streptoayces rosecchroaogenss \rerwendet.

He Verfahren .nach Anspruch 9_t d a du roh g e K en η -» zeichnet, dass man die Acylierung in &egem\'ar"t einer organischen Base durchfuhrt» ·

12. Verfahren nach Anspruch 11. d a d u r c h g e -k e η n" - ζ e i c h η e t_f dasβ man als organische Base Pyridin verwendete

12 ο Verfahren nach" Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass raan die Acylierung in Gegenwart einer Säure durchführt, .

14 ο Verfahren nach Anspruch 13, dadurch g e Ic e η η ~ js ei c h η e t, class man als Säure Perchlorsäure verwendete

15c Verfahren zur Herstellung von 17 Of ,2Oß-Dihydroxy-A-norpregn-3"-en~2-unen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet _r dass raan ein 17 OC -Hydroxy«A-=nor-pi'ogesteron mit einem Eorhydricl behandelt, imd gegebenenfalls das erhaltene 17Of ,20lS-Diii:-droxyt!tdroId acyliertr ' ' ' . . '

0AD ORIGINAL

16. Verfahren «ach Anspruch. 15, d ad υ r c h g e k e η η -- ζ e I c h η. e t_f dass roan ale Borhydrid Uatriumtiqrhydrid verwendet O

17 ο Verfahren nach Anspruch 15, d a ö. u r eh. g e k e η η ~" ζ e i c h η β t, dase man die Acylieioing in Gegenwart einer ' organiBchen.Base durchfuhrt_o ,

18ο Vari.ahien nach Anspruch 17, dadurch g e k-e η η ~ zeichnet, dass man als organische Base Pyridin verwendete

" ■ ■ ' '. . ■■■-:■■:

19 ο Verfahren nach Anspruch 15",. dadurch ge k en η - ze i ch η et₅ dass man die Acylierung in Gegenwart einer ; Säure durchfülirt.

20. Verfahren nach Anspruch 19_? d a d u r c h g e ken n - ζ e 1 c h η e t_f dass man als Säure Perchlorsäure verwendet.

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