DE1470014C3

DE1470014C3 - 2-Anilinonicotinsäurederivate und Verfahren zu deren Herstellung

Info

Publication number: DE1470014C3
Application number: DE1470014A
Authority: DE
Inventors: Andree Paris Faure; Charles Enghien-Les- Bains Hoffmann
Original assignee: Laboratoire Upsa Gennevilliers (frankreich)
Current assignee: Laboratoire Upsa Gennevilliers (frankreich)
Priority date: 1963-12-19
Filing date: 1964-12-10
Publication date: 1976-01-08
Also published as: DK115111B; NO122370B; CH421105A; US3415834A; DE1470014B2; DE1470014A1; SE327199B; ES307328A1; FR4267M; NL6414717A; GB1064259A; BE657266A

Description

in der R und R' die angegebenen Bedeutungen besitzen, kondensiert.

Die Erfindung betrifft Derivate der 2-Anilino- Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbin-

nicotinsäure der allgemeinen Formel 20. düngen erfolgt in an sich bekannter Weise durch

Kondensation einer Halogeno-2-nicotinsäure mit einem Anilinderivat. Diese Kondensation findet zweckmäßig in Gegenwart eines Katalysators, z. B. Kupferpulver und Kaliumiodid, sowie in Gegenwart eines Lösungsmittels, wie Amylalkohol, statt.

in der R und R' je eine Methyl- oder Trifluormethylgruppe oder ein Chloratom bedeuten und gleich oder verschieden sein können, wobei R' außerdem auch ein Wasserstoffatom bedeuten kann, sowie deren Salze und ein Verfahren zu ihrer Herstellung.

COOH

Lj-Cl +H-NH-f>

\³ y

Ein Gemisch aus 5 g Chlor-2-nicotinsäure, 7,6 cm³ Xylidin-2,3 und 0,1 g Kaliumjodid wird auf einem ölbad auf 14O⁰C erhitzt. Die Masse schmilzt unter Bildung einer dunkelroien Flüssigkeit. Man läßt die Temperatur des Bades auf 100⁰C sinken und hält diese Temperatur 1,5 Stunden. Das Gemisch nimmt unter Volumenzunahme ein gelbkristallines Aussehen an. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur wird die Masse im Mörser zerkleinert und mehrmals mit geringen Äthermengen extrahiert, um überschüssiges Xylidin zu entfernen. Man wäscht anschließend zweimal mit 10 cm³ destilliertem Wasser, um dasXylidinhydrochlorid und Kaliumjodid zu entfernen, und anschließend zweimal mit 10 cm³ 95%igem Alkohol, um gefärbte Harze zu entfernen. Nach Trocknung bei 100⁰C erhält man 7,8 g eines pulverförmigen weißen oder weißrosafarbenen Produkts. Der mit dem Koflerblock gemessene Schmelzpunkt beträgt 246° C.

Die potentiometrische Analyse mit Perchlorsäure ergibt einen Gehalt von 98,2% der gewünschten Base, die in etwa dem 15fachen Volumen eines Dioxan-Wasser-Gemisches (80: 20) umkristallisiert werden kann. Der Schmelzpunkt auf dem Koflerblock beträgt nun 248°C. Eine erneute potentiometrische Analyse ergibt eine Reinheit von 100%.

Die Elementaranalyse ergibt für Ci₄H₁₄N₂O₂ folgende Werte (Molekulargewicht 242,27):

Berechnet ... C 69,40, H 5,82, N 11,56;
gefunden .... C 69,3, H 5,9, N 11,4.

Beispiel 1

2-(2,3-Dimethylanilino)-nicotinsäure wird wie folgt hergestellt: Chlor-2-nicotinsäure wird mit Xylidin-2,3 gemäß dem folgenden Reaktionsschema kondensiert:

+ HCl

40

45 Es ist auch möglich, die 2-(2,3-Dimethylanilino)-nicotinsäure durch Kondensation einer Brom-2-nicotinsäure mit Xylidin-2,3 in einem geeigneten Lösungsmittel, z. B. Anylalkohol, unter Rückfluß in Gegenwart einer geringen Menge Kupferpulver als Katalysator durchzuführen.

Beispiel 2

2-(2,6-Dimethylanilino)-nicotinsäure wird auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise hergestellt, wot>ei jedoch Xylidin-2,6 an Stelle von Xylidin-2,3 verwendet wird. Für dieses Produkt, das die Form weißer Kristalle hat, wurde ein Schmelzpunkt von 219 bis 220⁰C auf dem Koflerblock bestimmt.

55

60

COOH
NH

Beispiel 3

2-(2-Methyl-4-chloranilino)-nicotinsäure wird auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise hergestellt, wobei jedoch Methyl-2-chlor-4-anilin an Stelle von Xylidin-2,3 verwendet wird. Für dieses Produkt, das die Form gelber Kristalle hat, wurde ein Schmelz-

punkt von 208 bis 209⁰C auf dem Koflerblock ermittelt.

CH₃

IO

'5

Beispiel 4

2-(3-Trifluormethylanilino)-nicotinsäure wird auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise hergestellt, wobei jedoch m-Trifluormethylanilin an Stelle von Xylidin-2,3 verwendet wird. Das Produkt hat die folgende Formel:

COOH

NH

25

Es kristallisiert in Alkohol bei 70⁰C zu feinen blaßgelben Nadeln vom Schmelzpunkt 204° C (Koflerblock).

Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben gute analgetische und entzündungshemmende Eigenschaften, wie aus dem folgenden Versuchsbericht hervorgeht:

A. 2-(2,3-Dimethylamino)-nicotinsäure

35

Es wurde das Natriumsalz der 2-(2,3-Dimethylanilino)-nicotinsäure hergestellt, das in Wasser löslich ist. Im festen Zustand kristallisiert es mit einem Wassermolekül, es dehydratisiert vollständig bei 170⁰C und schmilzt bei 260⁰C. Außerdem wurden die Lithium- und Diäthylaminsalze hergestellt, die ebenfalls wasserlöslich sind.

Die analgetische Wirkung dieser Verbindung wurde nach dem Siegmund-Test und dem Eddy-Test ermittelt. Beim ersten Test, wird Mäusen intraperitoneal 0,25 cm³ einer Lösung von Phenylbenzochinon in wäßrigem Alkohol injiziert, wodurch Reckungen hervorgerufen werden. Eine Dosis von 54 mg des getesteten Produkts pro Kilogramm verringert die Zahl der Reckungen bei 50% der Tiere. Eine stark hemmende Wirkung wurde bei einer Dosis von 10 mg/kg und eine vollständige Hemmung bei einer Dosis von 100 mg/kg festgestellt. ■ ■ ■ ■ '

Bei dem Eddy-Test werden die Mäuse auf eine bei 64 bis 67° C gehaltene Heizplatte gestellt. Es wurde festgestellt, daß das untersuchte Produkt seine größte Wirkung 60 Minuten nach der Verabfolgung ausübt. Bei einer Dosis von 25 mg/kg wurde die Zeit, bevor die Mäuse sich die Pfoten zu lecken beginnen, stark verringert. Diese Zeit wurde verdoppelt, wenn den Mäusen eine orale Dosis von 200 mg/kg gegeben wurde. .·,.'■

Zum Nachweis der entzündungshemmenden Wirksamkeit des untersuchten Produkts wurde zunächst der Fußsohlenödem-Test an Ratten durchgeführt. Dieses ödem wird in Höhe des Fußgelenks durch Injizieren von reizenden Substanzen, wie 3%ige Formaldehydlösung, 6%iges Dextran oder Bradykinin in einer Menge von 2 meg hervorgerufen. Das untersuchte Produkt zeigte eine sehr deutliche entzündungshemmende Wirkung und brachte die Ödeme bei Dosen von 100 mg/kg zum Verschwinden.

Anschließend wurde die Wirksamkeit des untersuchten Produkts gegen Granuloma ermittelt, die durch Einpflanzen von Körnchen, die mit einer l%igen Carrageeninlösung imprägniert waren, hervorgerufen wurden. Eine orale Dosis von 100 mg/kg bewirkte eine Hemmung von 41 Gewichtsprozent im Vergleich zu den Vergleichstieren, denen das untersuchte Produkt nicht verabfolgt worden war. Eine orale Dosis von 200 mg/kg ergab eine Hemmung von 61%.

Bei diesen Versuchen wurde festgestellt, daß Dosen von 50 bis 200 mg/kg des Produkts keinerlei Wirkung auf das Verhalten der Mäuse hatten, bei denen keinerlei motorische Störungen beobachtet wurden.

B. 2-(3-Trifluormethylanilino)-nicotinsäure

Zur pharmacodynamischen Untersuchung des Produkts wurden einerseits der reine Wirkstoff, kristallin in Form von gelben Nadeln, Schmelzpunkt 204⁰C, und andererseits Kapseln von je 0,307 g mit folgendem Inhalt verwendet:

Wirkstoff ....'.' 0,250 g

Hilfsstoffe:

Talkum 0,025 g

Maisstärke 0,025 g

Magnesiumstearat 0,007 g

Das Präparat dieses Beispiels wird nachstehend als »UP 83« bezeichnet.

Entzündungshemmende Wirkung ödem an der Rattenpfote

Es werden immer Gruppen von je 12 Tieren verwendet.

a) Dextran-Ödem

Ein Fußsohlenödem wird durch Injektion von 0,5 ml 6%igem Dextran in Höhe des Fußgelenks oder unter die Sehnenhaut des Fußes erzeugt. Eine solche Injektion bewirkt eine erhebliche Zunahme des Volumens der Pfote gegenüber dem ursprünglichen Volumen. UP 83 wird oral verabfolgt, und 1,5 Stunden und 3 Stunden später wird die prozentuale Volumenzunahme der Pfote im Vergleich zum ursprünglichen Volumen ermittelt. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt. .,'■'..■.. .';" .'·■ . ·.·,.

UP 83	Prozentuale Vo	lumensteigerung der
	Pfote nach
mg/kg, oral	1,5 Stunden	3 Stunden
0	100	69
50	76	69
100	86	61
200	52	38

b) Carrageenin-Ödem

UP

Die gleiche Methode wird angewendet, wobei eine 2%ige Carrageeninlösung injiziert wird. mg/kg, oral 5

Zahl der
Rallen

Druck, der den Schmerz hervorruft, nach

1 Stunde

2 Stunden

UP 83
mg/kg, oral

Prozentuale Volumensteigerung der
Pfote nach

1,5 Stunden

3 Stunden

50

100

200

io

O 58,6 58,6

50 58,6 55

100 45 45

200 20 24 -

400 14 10

Analgetische Wirkung
1. Eddy-Test

Mäuse, die ein Gewicht zwischen 18 und 20 g haben, werden in Gruppen zu je 14 eingeteilt und dem Heizplattentest unterworfen, wobei die Heizplatte mit Methanol, das unter Rückfluß siedet, bei einer konstanten Temperatur gehalten wird. Ermittelt wird die Zeit, bis zu der die auf die Platte gesetzten Mäuse die ersten Schmerzreaktion zeigen. Die Bezugszeit, die mit 5 Gruppen von je 14 Mäusen bestimmt wurde, betrug 4,7 Sekunden. Die nachstehende Tabelle zeigt die Ergebnisse, die 30 Minuten, 1 Stunde und 2 Stunden nach der oralen Verabfolgung von UP 83 erhalten wurden.

UP 83	Reaktionszeit	in Sekunden nach	2 Stunden
mg/kg, oral	30 Minuten	1 Stunde	6
20	6,80	5,65	6,75
40	7,55	6,75	6,90
80	. 7,20	6,60	6,70
160	7,80	7,20	8,10
320	9,35	8,30	itto
2. Methode nach Ran	d a 11 und S e 1

35

40

45

Ratten werden wie folgt ausgewählt: Man übt auf das Fußgelenk der Tiere einen Druck aus, der allmählich steigt und in jedem Augenblick mit einem Quecksilbermanometer gemessen werden kann. Zurückgehalten werden nur die Tiere, die einen Schrei bei einem Druck unter 200 mm Hg ausstoßen (Schmerzreaktion). Die Tiere werden anschließend in Gruppen zu je 12 eingeteilt, worauf man ihnen unter die Sehnenhaut des Fußes 0,10 mm einer 20%igen Bierhefesuspension injiziert. 2 Stunden später gibt man ihnen oral UP 83 oder physiologisches Serum. Man mißt 1 Stunde und 2 Stunden nach der Verabfolgung des Produkts den Druck, den die Tiere aushalten. Die Ergebnisse sind in mm Hg ausgedrückt und in der folgenden Tabelle zusammengestellt. ·

UP 83
mg/kg, oral

Zahl der Ratten

102
6

Druck, der den Schmerz
hervorruft, nach

I Stunde 2 Stunden

94
107

82
111 12
24
12

139 133 158 155

144 135 148 153

Zur Ergänzung der Ermittlung der analgetischen Wirkung wurde die antipyretische Wirkung beim Kaninchen untersucht. Hierbei wurde eine Hyperthermie künstlich hervorgerufen. Bis zu einer oralen Dosis von 400 mg/kg bei 18 Tieren zeigte die Verbindung nie eine antipyretische Wirkung.

Die Schlußfolgerung ist zu ziehen, daß UP83 in pharmakologischer Hinsicht eine grundlegende Eigenschaft hat, nämlich die entzündungshemmende Wirkung.

Die entzündungshemmende Wirkung scheint sich in allen Entzündungsstadien zu zeigen, denn ausgezeichnete Ergebnisse wurden sowohl bei dem durch Dextran an der Rattenpfote hervorgerufenen ödem als auch bei der Reaktion gegenüber Carrageenin, bei der mit Silbernitrat oder mit Evans-BIau hervorgerufenen Pleuritis und bei künstlich hervorgerufenen Bauchfellentzündungen erhalten. In allen Fällen ist die erzielte Wirkung wenigstens ebenso gut und häufig besser als bei Phenylbutazon oder Aspirin.

Diese entzündungshemmende Wirkung ist von einer deutlichen analgetischen Wirkung begleitet. Die analgetische Wirkung ist derjenigen von Aspirin überlegen und mit derjenigen von Phenylbutazon vergleichbar. UP 83 übt keinerlei antipyretische Wirkung aus. Nebenwirkungen sind nicht vorhanden. Die Verbindung hat keine kardiovaskuläre Wirkung, keine Einwirkung auf das Zentralnervensystem und keine depressive Wirkung auf die Atmung.

Wichtig ist die Feststellung, daß UP 83 nur bei erheblichen Dosen Ulzer hervorruft. Bei schwachen Dosen, die noch sehr wirksam sind, ruft es nie Ulzerationen hervor. Dies ist ein grundlegender Unterschied zu Steroiden, Phenylbutazon, Indomethacin usw.

Abschließend ist festzustellen, daß UP 83 ein ausgezeichnetes nichtsteroides entzündungshemmendes Mittel von konstanter Wirksamkeit ist. Ein Vergleich der wirksamen Dosen und des Wirkungsspektrums ergibt, daß UP 83 allen bekannten nichtsteroiden entzündungshemmenden Mitteln überlegen ist.

C. Akute Toxizität

1. Bei der Maus

a) Wirkstoff, LD₅₀

oral 455 mg/kg

intraperitoneal 250 mg/kg

intravenös 152 mg/kg

b) Präparat (Kapsel)

oral 460 mg/kg

2. Bei der Ratte

a) Wirkstoff

oral 650 mg/kg

intraperitoneal 100 mg/kg

b) Präparat (Kapsel)

oral 660 mg/kg

3. Beim Meerschweinchen
Tödliche Mindestdosis intravenös 174 mg/kg

Die Ergebnisse der toxikologischen Untersuchung von UP 83 zeigen, daß die Verbindung als Substanz mit geringer Toxizität angesehen werden kann. Die Unterschiede bei der LD₅₀ zwischen den verschiedenen Darreichungen lassen eine ausgezeichnete intestinale Resorption des Produkts erkennen. Die Präparatezubereitung hat eine vergleichbare Toxizität,

In allen Fällen ist die Toxizität gering. Deutliche Symptome erscheinen erst bei tödlichen Dosen. Eine verzögerte Toxizität ist nie festzustellen.

Bei der klinischen Erprobung zeigte das Produkt dieses Beispiels analgetische und entzündungshemmende Eigenschaften. Insbesondere mit dem oral verabfolgten Produkt wurden gute Ergebnisse bei der Behandlung der folgenden verschiedenen Entzündungenerhalten:

Entzündliche Arthritis (Polyarthritis, Spondylarthritis, entzündlicher Rheumatismus anderen φ ' Ursprungs),

Arthrose der Glieder und Wirbelsäule, rheumatische Schmerzen und Neuralgien (Lumbago, Torticolis), .·>
Gicht,
lokale entzündliche Syndrome (Phlebitis).

Die klinischen Ergebnisse bestätigen die Ergebnisse der pharmakologischen Untersuchung: Das Produkt gemäß der Erfindung hat eine bemerkenswerte entzündungshemmende Wirkung und eine eindeutige, reproduzierbare und nahezu konstante analgetische Wirkung.

Der Wert des Produkts gemäß der Erfindung liegt vor allem in seiner Wirkung, die anderen entzündungshemmenden Mitteln gleichwertig oder überlegen ist, in der Möglichkeit, das Cortison zu reduzieren, und in seiner ausgezeichneten Verträglichkeit in allgemeiner Hinsicht sowie in bezug auf die Haut, das Blut und die Digestion.

C. Vergleichsversuche mit

λ 2-(3-Trifluormethylänilino)-nicotinsäure (UP 83), 2-(2,3-Dimethylanilino)-nicotinsäure (UP 74) und Phenylbutazon .

LLD

Ratte

20

Die LD₅₀ nach 7 Tagen ist in der folgenden Tabelle in mg/kg bei oraler Verabreichung genannt.

Maus

nach der Carrageenin-Injektion und 6 Stunden nach der Kaolin-Injektion, angegeben.

1. Carrageenin-Ödem '

mg/kg, oral	2-(3-Trifluor- methylanilino)- nicotinsäure	2-(2,3-Dimethyl- anilino)-nicotin- säure	2-(2,3-Dimethyl- änilino)-nicotin- säure	Phenyl butazon
25	39	27	26
50	58	35	37
100	51	40	44
200	68	50	59
ED₅₀, mg/kg oral	38	>200	125 '
	2. Kaolin-Ödem
mg/kg, oral	2-(3-Trifluor- methylanilino)- nicotinsäure	Phenyl butazon

25	23	19	25
30 50	42	38	50
100	44	33	49
200	48	39	70
ED₅₀,
35 mg/kg	140	200	77
oral

40

45 III. Experimentelle Pleuritis

Mit Äther anästhesierte Ratten erhalten 5 ml 0,01%iges Evans-Blau lauwarm und 0,2% = 0,3 ml Silbernitrat plus 1,5 ml Luft in die Pleurahöhle. Die Produkte werden oral 1 Stunde vor der Injektion des phlogogenen Mittels verabreicht. Nach 8 Stunden werden die Tiere getötet, worauf das Volumen der Pleuraflüssigkeit gemessen wird. Die prozentuale Hemmung der exsudativen Reaktion ist in der folgenden Tabelle angegeben.

1. Mit Evans-Bläu hervorgerufene Pleuritis

6o

2-(3-Trifluormethylanilino)- 650 455 nicotinsäure .

2-(2,3-Dimethylanilino)-nicotinsäure 1500 800

Phenylbutazon 500 700

II. Experimentelle Ödeme

Ratten erhalten die Produkte oral in zwei Dosen 2 Stunden und 30 Minuten vor der subkutanen Injektion des phlogogenen Mittels. Das Volumen der Pfote wird mit dem Plethysmographen gemessen. In den folgenden Tabellen ist die prozentuale Hemmung der Entzündungsreaktion beim Höhepunkt der Entzündung bei den Vergleichstieren, d. h. 4,5 Stunden _mg/kg,_oral

2-(3-Trifluor-

methylanilino)-

nicotinsäure

2-(2,3-Dimethyl-. anilino)-nicotin-

Pheriylbutazon

saure

50
100
200
400

ED

mg/kg
oral

50»

23
48
73

110

—	14
20	31
22	52
37	62
48	—
00	125
	509 520/404

2. Mit Silbernitrat hervorgerufene Pleuritis

mg/kg, oral

2-(3-Trifluor-

mettiylanilino)-

nicotinsäure

2-(2,3-Dimethylanilinoj-nicotinsäure

Phenylbutazon

25 .	10
50	32
100	42
200	58
400	■ —
ED₅₀, mg/kg oral	130

0 12 20 40

400

9 31 52 62

115

IV. Carrageeningetränkte Kügelchen

Unter Anästhesie pflanzt man Ratten unter das Fell Kügelchen ein, die mit einer 1 %igen Carrageenin-Lösung getränkt sind. Die Tiere werden während einer Zeit von 7 Tagen täglich behandelt. Nach der Tötung der Tiere werden die Kügelchen entnommen und nach der Trocknung gewogen. Die prozentuale Hemmung der Granulomabindung ist in der folgenden Tabelle angegeben.

mg/kg, oral

2-(3-Trifluor-

methylanüino)-

nicotinsäure

2-(2,3-Dimethylanilinoj-nicotin-

Phenylbutazon

33
39

41 61

17 21

V. Mit Hilfe von Hefe hervorgerufener Hyperthermie

Ratten erhalten subkutan 1 ml/100 g einer 12%igen Hefesuspension. 2 Stunden nach; dieser Behandlung

werden die entzündungshemmenden Mittel oral verabreicht. Die Rektaltemperatur wird jede Stunde notiert. In der folgenden Tabelle ist die prozentuale Hemmung der Hyperthermie auf dem Wärmehöhepunkt der Vergleichstiere angegeben.

mg/kg, ora|

2_:(3-Trifluor-

methylanilino)-

nicotihsäure

2-(2,3-Dimethylanilino)-nicotinsäure

Phenylbutazon

10 12,5

25

50
100
200

ED₅₀,
mg/kg
oral

24

41

76

100

47

45 75 91

15 40

72 83;

65

VI. Untersuchung der analgetischen Wirkung Test nach R a η d a 11 und S e 1 i 11 ο

Ratten erhalten subkutan in die Pfote 0,10 ml einer 20%igen Bierhefesuspension. Die entzündungshemmenden Mittel werden oral 2 Stunden nach der Hefe verabfolgt. Die Schmerzschwelle wird 1 Stunde nach der Verabreichung des entzündungshemmenden Mittels durch Ausübung eines zunehmenden Drucks auf die Pfote ermittelt. Die prozentuale Anhebung der Schmerzschwelle ist in der folgenden Tabelle angegeben. ■ ■"-■■. ^ ' _ :

35	mg/kg, oral	• 2-(3-Trifluor-	2-(2,3-Dimethyl-	Phenyl
		methylanilino)-	anilino)-nicotiri-	butazon
		nicotinsäure	saure

50
100
200
400

47
41
68
65

20 55 66 77

10 26

45

Claims

Patentansprüche:

1. 2-Anilinonicotinsäurederivate der allgemeinen Formel

IO

in der R und R' je eine Methyl- oder Trifluormethylgruppe oder ein Chloratom bedeuten und gleich oder verschieden sein können, wobei R' außerdem auch ein Wasserstoffatom bedeuten kann, sowie deren Salze.

2. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise Halogen-2-nicotinsäure mit einem Anilinderivat der allgemeinen Formel