CZ295234B6

CZ295234B6 - Triazolo[4,5-d]pyrimidinové deriváty

Info

Publication number: CZ295234B6
Application number: CZ20011962A
Authority: CZ
Inventors: Simon Guile; David Hardern; Anthony Ingall; Brian Springthorpe; Paul Willis
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1998-12-04
Filing date: 1999-12-02
Publication date: 2005-06-15
Also published as: TWI229674B; NO2011007I2; KR100776484B1; AU766618B2; CA2351709A1; AR023920A1; KR20070086540A; HK1039933A1; WO2000034283A1; IL143232A; TR200101567T2; SK286007B6; DE69915675T2; JP5043749B2; NZ511778A; CZ20011962A3; EP1386921B1; CY1111759T1; ID29927A; PL201283B1

Abstract

Triazolo[4,5-d]pyrimidinové deriváty obecného vzorce I, kde R.sup.1.n. je alkylová skupina popřípadě substituovaná atomy halogenu, R.sup.2.n. je fenylová skupina, R.sup.3.n. a R.sup.4.n. je hydroxyskupina, R je CH.sub.2.n.OH, CH.sub.2.n.OCH.sub.2.n.CH.sub.2.n. nebo vazba, jejich použití jako léčivých přípravků, pro léčení infarktu myokardu, ischemických atak, periferního onemocnění cév, a způsob jejich přípravy.ŕ

Description

Přítomný vynález se týká nových triazol[4,5-d]pyrimidinových derivátů, jejich použití jako léčivých přípravků, prostředků, které je obsahují, a způsobů jejich přípravy.

Dosavadní stav techniky

Adheze a agregace krevních destiček jsou iniciálními událostmi procesu arteriální trombózy. I když proces adheze krevních destiček na subendoteliální povrch může hrát důležitou úlohu při reparaci poškozené cévní stěny, může agregace krevních destiček, která tento proces iniciuje, vyvolat akutní trombotický uzávěr vitálně důležitých cévních struktur, vedoucí k příhodám s vysokou morbiditou, jako je infarkt myokardu a nestabilní angína pectoris. Také úspěšnost intervencí, používaných k prevenci či zmírnění těchto stavů, jako jsou například trombolýza a angioplastika, je kompromitována destičkami zprostředkovanou okluzí nebo reokluzí.

V agregaci krevních destiček vede řada konvertujících cest. Ať už je vyvolávací stimul jakýkoliv, společným finálním efektem je zesítění destiček navázáním fibrinogenu na membránové vazebné místo, glykoprotein Ilb/IIIa (GPIIb/IIIa). Vysoká účinnost protilátek proti destičkám nebo antagonistů GPIIb/IIIa se vysvětluje jejich interferenci s tímto společným finálním dějem. Nicméně účinnost tohoto procesu může také vysvětlit vznik krvácivých příhod, které byly pozorovány v souvislosti s přípravky této třídy. Trombin může zapříčinit agregaci destiček ve velké míře bez závislosti na ostatních cestách, avšak je nepravděpodobné, že jsou přítomna podstatná množství trombinu, aniž by došlo k předchozí aktivaci destiček jiným mechanizmem. Inhibitory trombinu, jako je například hirudin, jsou vysoce účinné antitrombotické přípravky, avšak opět mohou vést k závažnému krvácení v důsledku jejich účinku, jak jako antiagregačních, tak jako antikoagulačních přípravků (The TIMI9a Investigators, Circulation 90, 1624 až 1630 (1994); The Globál Use of Strategies to Open Occluded Coronary Arteries (GUSTO) Ila Investigators, Circulation 90, 1631 až 1637 (1994); K. L. Neuhaus a kol., Circulation 90,1638 až 1642 (1994)).

Bylo nalezeno, že adenosin-5'-difosfát (ADP) působí jako klíčový mediátor v procesu trombózy. Klíčová role ADP je podpořena faktem, že ostatní přípravky, jako adrenalin a 5-hydroxytryptamin (5HT, serotonin) vedou k agregaci pouze za přítomnosti ADP. Omezená antitrombotioká účinnost aspirinu může reflektovat fakt, že blokuje pouze jeden zdroj ADP, který je uvolňován způsobem, závislým na tromboxanu po adhezi destiček (viz například Antiplatelet Trialists' Collaboration, Br. Med. J. 308, 81 až 106 (1994) a Antiplatelet Trialists' Collaboration, Br. Med. J. 308 159 až 168 (1994)). Aspirin nemá žádný vliv na agregaci, vyvolanou jinými zdroji ADP, například poškozenými buňkami nebo ADP, uvolněným za podmínek turbulentního krevního toku.

ADP-indukovaná agregace destiček je zprostředkována P₂t receptorovým subtypem, lokalizovaným na membráně destiček. P_2T receptor (známý též jako P2Y_ADP nebo P2T_AC) se primárně účastní zprostředkování agregace a aktivace destiček, a je to s G-proteinem kuplovaný receptor, který nebyl ještě nakloňován. Farmakologické charakteristiky tohoto receptoru byly dosud popsány například v publikacích Humphries a kol., Br. J. Pharmacology 113, 1057 až 1063 (1994) a Fagura a kol., Br. J. Pharmacology 124, 157 až 164 (1998)). Nedávno se ukázalo, že antagonisté tohoto receptoru nabízejí signifikantní zdokonalení při porovnání s ostatními antitrombotickými přípravky (viz J. Med. Chem. 42, 213 (199)). Následně vyvstává potřeba nalézt další P₂t (P2Yadp nebo P2T_Ac) antagonisty, které bude možno použít jako antitrombotické přípravky.

-1 CZ 295234 B6

Publikovaná mezinárodní patentová přihláška WO 99/05143 popisuje genericky řady triazolo[4,5-d]pyrimidinových sloučenin, účinkujících jako P_2T (P2Y_adp nebo P2T_Ac) antagonisté. Nyní bylo nalezeno, že určité sloučeniny, zahrnuté do rámce publikované mezinárodní patentové přihlášky WO 99/05143, které ale nejsou v tomto spisu jmenovitě popsány, vykazují vysokou účinnost, spojenou s překvapivě vysokou metabolickou stabilitou a biologickou dostupností, takže pro člověka bude výhodná predikovaná terapeutická dávka pro prodlouženou inhibici agregace.

Určité triazolo[4,5-d]pyrimidinové deriváty, které jsou P_2T receptorovými antagonisty, jsou uvedeny v dokumentu WO 98/28300.

GB patent 1 393 993 popisuje některé 5-nitropyrimidinové deriváty, které jsou vhodné pro řízení metabolizmu rostlin.

Podstata vynálezu

V prvém aspektu předmětný vynález poskytuje triazolo[4,5-d]pyrimidinové deriváty obecného vzorce I

R·

SR

kde

R¹ znamená alkylovou skupinu se 3 až 5 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jedním či více atomy halogenu;

R² znamená fenylovou skupinu, popřípadě substituovanou jedním či více atomy fluoru;

R³ a R⁴ znamenají obě hydroxyskupinu;

R je XOH, kde X je CH₂, OCH₂CH₂ nebo vazba;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty, či solváty těchto solí, s podmínkami, že:

* pokud X je CH₂ nebo vazba, potom R¹ není propylová skupina;

* pokud X je CH₂ a R¹ je CH₂CH₂CF₃, butylová skupina nebo pentylová skupina, potom fenylová skupina na R² musí být substituována atomem fluoru;

* pokud X je OCH₂CH₂ a R¹ je propylová skupina, potom fenylová skupina na R² musí být substituována atomem fluoru.

-2CZ 295234 B6

Alkylové skupiny, buď jako takové či jako součást jiné skupiny, mají přímý řetězec a jsou plně nasycené.

R¹ je vhodně alkylová skupina se 3 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovaná jedním či více atomy fluoru. R¹ je s výhodou alkylová skupina se 3 až 5 atomy uhlíku, substituovaná na terminálním atomu uhlíku třemi atomy fluoru. Ještě výhodněji je R¹ je 3,3,3-trifluorpropylová skupina, butylová skupina nebo propylová skupina.

R² je vhodně fenylová skupina nebo fenylová skupina, substituovaná jedním či více atomy fluoru. R² je s výhodou fenylová skupina, 4-fluorfenylová skupina nebo 3,4-difluorfenylová skupina.

R je vhodně XOH, přičemž X je CH₂, OCH₂CH₂, nebo vazba.

R je s výhodou CH₂OH nebo OCH₂CH₂OH.

Obzvláště výhodné sloučeniny zahrnují:

{1 R-[ 1 α,2α,3 β( 1R VS *),5 β] }-3-{7-[(2-(4-fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxymethyl)cyklopentan-l,2-diol;

{1 R-[ 1 α,2a,3 β( 1 R*,2S*),5 β] }-3-{7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxymethyl)cyklopentan-l,2diol;

{lS-[la,2a,33(lS*,2R*),53]}-3-{7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylthio)3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(2-hydroxyethoxy)cyklopentan-l,2-diol;

{1 R-[ 1 a,2a,3 β( 1 R*,2S *),5 β] }-3- {5—(butylthio)—7—[(2—(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxymethyl)-cyklopentan-l,2-diol;

{1 S-[ 1 a,2a, 3 β,4α( 1S * ,2R*)]} -4-[5-(butylthio)-7- {[2-(4-fluorfenyl)cyklopropyl] amino} -3Hl,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]cyklopentan-l,2,3-triol;

{lS-[la,2a,33(lS*,2R*),53]}-3-{7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(2-hydroxyethoxy)cyklopentan-

1,2—diol;

{1 S-[ 1 a,2a,3 β,5 β(1 S*,2R*)J }-3-(2-hydroxyethoxy))-5-[7-(2-fenylcyklopropyl)amino]-5[(3,3,3-trifluorpropylthio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]cyklopentan-l,2-diol;

{1 S-[ 1 α,2β,3 β,4α(1 S*,2R*)J }-4-[5-(butylthio))-7-{[2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl]amino}3H-1,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]cyklopentan-l ,2,3-triol;

{1 S-[ 1 a,2a,3 β( 1 S*,2R*),5 β] }-3-[5-butylthio))-7-[(2-fenylcyklopropyl)amino]-3H-l ,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-5-(2-hydroxyethoxy)-cyklopentan-l,2-diol;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli či jejich solváty, nebo solváty těchto solí.

-3 CZ 295234 B6

Dále je podle přítomného vynálezu poskytnut způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, který zahrnuje:

a) reakci sloučeniny obecného vzorce II

kde

R, R¹, R³ a R⁴ mají význam popsaný v definici sloučeniny obecného vzorce I, nebojsou to jejich chráněné deriváty, nebo

R³ a R⁴ vytváří společně vazbu v pětičlenném kruhu, nebo

R je CH₂CH₂OR', kde R' je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo benzylová skupina, a

L je odstupující skupina, například atom halogenu nebo SR, se sloučeninou obecného vzorce III

(III), kde

R² má význam popsaný v obecném vzorci I, nebo je jeho chráněným derivátem, nebo kde

X je vazba;

b) hydroxylaci sloučeniny obecného vzorce IV

kde

R¹ má význam popsaný v definici sloučeniny obecného vzorce I a (IV),

-4CZ 295234 B6

R⁸ je atom vodíku nebo skupina CH₂CH₂OP³, kde P³ znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu, nebo

R⁸ je CH₂COOR', kde R' je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo benzylová skupina, a

Z je NH₂ nebo skupina

R* kde R² má význam jako v obecném vzorci I.

A popřípadě v obou případech a) i b) v jakémkoliv pořadí, mohou být použity následující kroky:

konverze jedné či více funkčních skupin na jiné funkční skupiny;

odstranění jakékoliv ochranné skupiny;

vytvoření farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, nebo solvátu této soli.

Sloučeniny obecného vzorce II mohou reagovat s aminy obecného vzorce II za přítomnosti báze, například terciárního organického aminu, v inertním rozpouštědle, například dichlormethanu, při teplotě místnosti nebo při mírně zvýšené teplotě. Další vhodné báze zahrnují anorganické báze, například uhličitan draselný.

Hydroxyskupiny R³ a R⁴ mohou být chráněny jako skupiny OP¹ a OP², kde P¹ a P² jsou ochranné skupiny. Příklady vhodných ochranných skupin pro sloučeniny obecného vzorce II zahrnují alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (s výhodou methylovou skupinu), benzylovou skupinu, (alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku)₃Si (s výhodou terc.-butyldimethylsilylovou skupinu) a C(O)alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, například acetylovou skupinu. S výhodou dvě skupiny P¹ a P² společně s atomy, na které jsou navázány, vytváří alkylidenový kruh, jako je například methylidenový nebo izopropylidenový kruh. Alternativně mohou skupiny P¹ a P²vytvářet alkoxymethylidenový kruh, jako je například ethoxymethylidenový kruh.

Ochranné skupiny mohou být nasazeny a odstraněny za použití známých reakčních podmínek. Použití ochranných skupin je kompletně popsáno v publikaci „Protective Groups in Organic Chemistry“, vyd. J. W. F. McOmie, Plenům, Press (1973), a „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vydání, T. W. Greene & P. G. M. Wutz, Wiley - Interscience (1991).

Esterové ochranné skupiny mohou být sejmuty bazickou hydrolýzou, například za použití hydroxidu kovu, s výhodou hydroxidu alkalického kovu, například hydroxidu sodného nebo hydroxidu lithného, nebo kvartémího amoniového hydroxidu v rozpouštědle, jako například vodném ethanolu nebo vodném tetrahydrofuranu, při teplotách od 10 do 100 °C, s výhodou při teplotě, pohybující se okolo teploty místnosti; nebo kyselou hydrolýzou za použití minerální kyseliny, například HC1 nebo silné organické kyseliny, například kyseliny trichloroctové, v rozpouštědle, jako je vodný 1,4—dioxan. Trialkylsilylové ochranné skupiny mohou být sejmuty například za použití zdroje fluoridového iontu, jako je tetra-n-butylamoniumfluorid nebo fluorovodík. Pokud je jedna nebo obě ze skupin P¹ nebo P² alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, může být sejmutí ochranné skupiny dosaženo použitím bromidu boritého. Benzylové skupiny mohou být odstraněny hydrogenolýzou za použití katalyzátoru z přechodného kovu, například palladia na aktivním uhlí, v atmosféře vodíku, při tlaku 100 až 500 kPa, v rozpouštědle, jako je například kyselina octová.

-5 CZ 295234 B6 (V),

Sloučenina obecného vzorce II může být připravena diazotací sloučeniny obecného vzorce V

kde

R¹ má význam popsaný v obecném vzorci I, a

R má význam popsaný v obecném vzorci I, nebo se jedná o její chráněný derivát, nebo je to OCH₂CO₂R', kde R'je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo benzylová skupina a

L má význam definovaný výše a

R³ a R⁴ mají význam popsaný v obecném vzorci I, nebo se jedná o chráněné deriváty této skupiny, nebo R³ a R⁴ vytváří společně vazbu v pětičlenném kruhu;

s nitritem kovu, například nitritem alkalického kovu, obzvláště nitritem sodným ve zředěné vodné kyselině, například 2M HC1, nebo alkylnitritem s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, v inertním rozpouštědle, při teplotě v rozmezí přibližně -20 až 100 °C. Výhodné podmínky představují použití izoamylnitritu v acetonitrilu při teplotě přibližně 80 °C.

Sloučenina obecného vzorce V, kde R je CH₂OH, R³ a R⁴ jsou hydroxylová skupina nebo její chráněný derivát a L má význam definovaný výše, může být připravena redukcí sloučeniny obecného vzorce VI

(VI), kde

R¹, L, P¹ a P² mají význam popsaný výše.

Redukce nitroskupiny může být provedena například hydrogenací s katalyzátorem z přechodného kovu zhruba při teplotě místnosti, například za použití palladia na aktivním uhlí v atmosféře vodíku, s výhodou při tlaku od 100 do 500 kPa, v rozpouštědle, jako je například ethanol, nebo za použití železa v kyselém rozpouštědle, například kyselině octové, za teploty zhruba 100°C.

-6CZ 295234 B6

Redukce laktamové sloučeniny může být provedena za použití komplexních hydridů kovů, jako je například lithium-aluminiumhydrid, v rozpouštědle, jako je ether, nebo s výhodou za použití tetrahydroboritanu sodného ve vodném rozpouštědle, například methanolu.

Sloučenina obecného vzorce VI může být připravena redukcí sloučeniny obecného vzorce VII

(VID, kde

L a R¹ mají význam popsaný výše a

L¹ je odstupující skupina, například atom halogenu, přičemž L a L¹ jsou s výhodou totožné, se sloučeninou obecného vzorce VIII

kde

P¹ a P² mají význam popsaný výše, za přítomnosti báze, jako je M-alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo hydrid kovu, kde kovem se míní kovový iont, například n-butyllithium, v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, za teploty v rozmezí od přibližně -10 do přibližně 100 °C. S výhodou se použije hydrid sodný v tetrahydrofuranu při teplotě místnosti.

Jedna či více funkčních skupin mohou být konvertovány na další funkční skupiny za použití standardních chemických postupů. Sloučenina, kde X je vazba, může být konvertována na sloučeninu, kde X je O(CH₂)₂, a to zpracováním s bází, následovaným zpracováním s LY, kde L je odstupující skupina a Y je (CPLúOH nebo její chráněná verze, nebo Y je CH₂COOR', kde R' je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo benzylová skupina. Sloučenina, kde R je CH₂CH₂OR', může být konvertována na sloučeninu, ve které R je O(CH₂)₂OH redukcí, například použitím DIBAL-H®. Skupina SR¹ může být vnitřně přeskupena oxidací síry, například za použití oxonu™ nebo mCBPA, následovanou zpracováním se sloučeninou R’-SM, kde R¹ je odlišná R¹ skupina a M je atom kovu, například sodík. Alternativně může být produkt oxidace síry zpracován s MSH, kde M je atom kovu, jako například sodíku, následovaným zpracováním s bází a R^{1 x}, kde R¹ je odlišná R¹ skupina a X je odstupující skupina. Vhodné báze zahrnují Ν,Ν-diizopropylethylamin.

Sloučenina obecného vzorce II, kde R, R¹, R³ a R⁴ mají význam, definovaný v obecném vzorci I, nebo se jedná o jejich chráněné deriváty, nebo R³ a R⁴ společně vytváří vazbu v pětičlenném kruhu nebo R je OCH₂CO₂R', kde R' je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo benzylová skupina, a L je odstupující skupina, například atom halogenu, může být konvertována na sloučeninu obecného vzorce II, kde R, R¹, R³ a R⁴ mají význam definovaný výše a L je NH₂, zpracováním s diazotačním činidlem za přítomnosti halogenačního činidla, například izoamylnitritu a tetrabrommethanu.

Sloučenina obecného vzorce II, kde R, R¹, R³ a R⁴ mají význam, definovaný výše a L je NH₂, lze připravit zpracováním sloučeniny obecného vzorce II, kde R, R¹, R³ a R⁴ mají význam definovaný výše a L je odstupující skupina, například atom halogenu, s amoniakem v rozpouštědle, jako je například methanol.

Sloučeniny obecného vzorce V mohou být též připraveny zpracováním sloučeniny obecného vzorce XI

kde

R, R³ a R⁴ mají význam definovaný v obecném vzorci I nebo se jedná o jejich chráněné deriváty, nebo

R je OCH₂CO₂R', kde R' je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo benzylová skupina, nebo

R³ a R⁴ spolu vytváří vazbu v pětičlenném kruhu;

se sloučeninou obecného vzorce VII, jak je definována výše, následovanou redukcí nitroskupiny. Reakce se provede v inertním rozpouštědle, například dichlormethanu nebo 1,4-dioxanu, za přítomnosti non-nukleofilní báze, například Ν,Ν-diizopropylaminu, při teplotě přibližně -20 °C až přibližně 150 °C, s výhodou při teplotě místnosti.

Sloučeniny obecného vzorce II, kde R má význam definovaný v obecném vzorci I a R³ a R⁴ spolu vytváří vazbu v pětičlenném kruhu a L je skupina SR¹ nebo její chráněný derivát, mohou být připraveny reakcí sloučeniny obecného vzorce XII

kde R¹ skupiny mají význam popsaný v obecném vzorci I,

-8CZ 295234 B6 se sloučeninou obecného vzorce XIII

kde

R⁷ je atom vodíku nebo jeho chráněný derivát.

Reakci lze provést za přítomnosti vhodné komplexní sloučeniny přechodného kovu, s výhodou tetrakistrifenylfosfínpalladia(O).

Sloučeniny obecného vzorce XII mohou být připraveny ze sloučenin obecného vzorce XIV

SH

SH reakcí se sloučeninou R’X, kde R¹ má význam definovaný v obecném vzorci I a X je odstupující skupina, například atom halogenu, následované cyklizaa.

Sloučeniny obecného vzorce XI, kde R je OH či jeho chráněná verze a R³ a R⁴ mají význam definovaný v obecném vzorci I nebo jsou jejich chráněnými deriváty, mohou být připraveny ze sloučenin obecného vzorce XIII, kde R⁷ je atom vodíku nebo chráněná skupina, zpracováním s bisesterem kyseliny imidodikarbamové za použití palladiového katalyzátoru, následovaným hydroxylací dvojné vazby, a popřípadě sejmutím ochranné skupiny atomu dusíku. S výhodou se použije bis-(l,l-dimethylethyl)ester kyseliny imidodiuhličité a tetrakistrifenylfosfínpalladium(0), následované oxidem osmičelým a sejmutím ochranné skupiny za použití kyseliny chlorovodíkové v methanolu.

Sloučeniny obecného vzorce XI, kde R je OCH₂CO₂R', kde R'je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku a R³ a R⁴ vytváří společně vazbu v pětičlenném kruhu, mohou být připraveny ze sloučenin obecného vzorce ΧΙΠ, kde R⁷ je atom vodíku nebo ochranná skupina, zpracováním s azidem za přítomnosti palladiového katalyzátoru, následovaným redukcí azidu a alky lácí alkoholu, jak je popsáno výše.

Sloučeniny obecného vzorce XI, kde R je OCH₂CO₂OH, a R³ a R⁴ mají význam definovaný v obecném vzorci I neb jsou jejich chráněnými deriváty, mohou být připraveny ze sloučenin obecného vzorce XI, kde R je OH a R³ a R⁴ mají význam definovaný v obecném vzorci I, nebo jsou jejími chráněnými deriváty, prostřednictvím ochrany atomu dusíku, alkylací alkoholu za použití esteru kyseliny 2-halogenoctové, následované redukcí esteru a sejmutím ochranné skupiny atomu dusíku. Původce vynálezu preferuje ochranu atomu dusíku, například jako karbobenzyloxylový derivát za použití benzylchlorformiátu, následované alkylací alkoholu za použití ethylbromacetátu a terc.-butoxidu draselného, redukcí esteru prostřednictvím tetrahydroboritanu lithného v tetrahydrofuranu a sejmutím ochranné skupiny atomu dusíku hydrogenací za přítomnosti palladia na aktivním uhlí. Navíc původce vynálezu považuje za výhodný ten způsob, kde alkoholy R³ a R⁴ jsou chráněny jako izopropylidenový kruh.

Aminy obecného vzorce III lze připravit za použití postupů, popsaných v publikaci H. Nishiama a kol., Bull. Chem. Soc., 68, 1247 (1995) Japonsko, P. Newman, Optical Resolution Procedures

-9CZ 295234 B6 for Chemical Compounds, svazek 1, Amines and Related Compounds; Optical Resolution and Information Centre, str. 120 (1978) Manhattan College, Riverdale, NY; J. Vallgarda a kol., J. Chem. Soc. Perkin, 1, 461 (1994) nebo Mezinárodní patentová přihláška WO 9 905 143.

Všechny nové intermediární produkty vytváří další aspekty přítomného vynálezu.

Soli sloučeniny obecného vzorce I mohou být připraveny reakcí volné kyseliny nebo její soli či volné báze s jedním či více ekvivalenty příslušné báze (například hydroxidu amonného, popřípadě substituovanou alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo hydroxidem alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy) nebo jedním či více ekvivalenty příslušné kyseliny (například kyseliny halogenu /obzvláště kyseliny chlorovodíkové/, kyseliny sírové, oxalové nebo fosforečné). Reakce může být provedena v rozpouštědle nebo médiu, ve kterém je sůl nerozpustná, nebo v rozpouštědle, ve kterém je sůl rozpustná, například ve vodě, ethanolu, tetrahydrofuranu nebo diethyletheru, které mohou být odpařeny ve vakuu, nebo vysoušením za mrazu. Reakce může být rovněž podvojnou výměnou nebo může být provedena v iontoměniči. Netoxické fyziologicky přijatelné soli jsou výhodné, ačkoliv vhodné mohou být i další soli, například pro izolaci nebo čištění produktu.

Sloučeniny podle přítomného vynálezu účinkují jako antagonisté receptoru pro P_2T(P2Y_adp nebo P2T_Ac)· Následně jsou tyto sloučeniny vhodné pro terapii, včetně terapii kombinační, a obzvláště jsou vhodné pro použití jako inhibitory aktivace, agregace a degranulace krevních destiček, promotory deagregace krevních destiček, antitrombotické přípravky, nebo v léčbě nebo profylaxi nestabilní angíny pectoris, primárních arteriálních trombotických komplikací aterosklerózy, jako jsou například trombotická či embolická cévní mozková příhoda, transientní ischemické ataky, periferní vaskulámí onemocnění, infarkt myokardu s nebo bez trombolýzy, arteriální komplikace v důsledku intervencí pro aterosklerotické choroby, například angioplastika včetně koronární angioplastiky (PTCA), endarterektomie, implantace stentu, operativní koronární a jiné vaskulámí implantace cévních náhrad, trombotické komplikace chirurgického nebo mechanického poškození tkáně, například při sběru tkání po náhodném či chirurgickém traumatu, rekonstrukční chirurgie včetně kožních a svalových štěpů, stavů s difuzní trombotickou /destičkovou konsumpční komponentou, jako například u disseminované intravaskulámí koagulace, trombotické trombocytopenické purpury, hemolyticko-uremického syndromu, trombotických komplikací septikémie, syndromu dechové tísně dospělých (ARDS), anti-fosfolipidového syndromu, heparinem indukované trombocytopenie a preeklampsie/eklampsie, nebo u venózní trombózy, jako u hluboké venózní trombózy, venookluzivní choroby, u hematologických stavů, jako u myeloproliferativní choroby včetně trombocytemie, srpkovité anémie; nebo při prevenci mechanicky indukované aktivace krevních destiček in vivo, jako v případě kardiopulmonálního bypassu a extrakorporální membránové oxygenaci (prevence mikrotromboembolických příhod), mechanicky indukované aktivace krevních destiček in vitro, jako při skladování krevních produktů, například destičkových koncentrátů, nebo v případě komplikací typu uzávěru shuntů, například při renální dialýze a plazmaferéze, u trombózy, zapříčiněné sekundárně cévním poškozením nebo zánětem, jako bývá v případě vaskulitidy, artritidy, glomerulonefritidy, zánětlivých chorobách střeva a rejekce orgánového transplantátu, dále u stavů jako jsou migréna, Raynadův fenomén, u stavů, kde mohou destičky přispívat k základnímu zánětlivému onemocnění cévní stěny, jak je tomu při vytváření a progresi /růstu/ ateromového plátu, stenózy a restenózy, a může přispívat rozvoji jiných zánětlivých stavů, například astmatu, při kterých jsou destičky a z destiček odvozené faktory zahrnuty v rozvoji imunologického onemocnění. Další indikace zahrnují léčení poruch centrálního nervového systému a prevenci růstu a šíření maligních tumorů.

Dále je poskytnuto použití sloučeniny podle přítomného vynálezu jako účinné složky při výrobě léčiva pro léčení nebo prevenci výše vyčtených poruch. Konkrétně jsou sloučeniny podle přítomného vynálezu vhodné pro léčení infarktu myokardu, mozkové cévní příhody trombotické etiologie, transientních ischemických atak, periferní cévní choroby a stabilní a nestabilní angíny pectoris, konkrétně nestabilní angíny pectoris. Přítomný vynález také poskytuje způsob léčení nebo prevence výše uvedených chorob, zahrnující podání terapeuticky účinného množství slouče

-10CZ 295234 B6 niny podle přítomného vynálezu osobě takovouto chorobou trpící nebo osobě se sklony ke vzniku takovéto choroby.

Dále je poskytnuto použití sloučeniny podle přítomného vynálezu jako účinné složky při výrobě léčiva pro léčení nebo prevenci výše vyčtených poruch. Konkrétně jsou sloučeniny podle přítomného vynálezu vhodné pro léčení infarktu myokardu, mozkové cévní příhody trombotické etiologie, transientních ischemických atak, periferní cévní choroby a stabilní a nestabilní angíny pectoris, konkrétně nestabilní angíny pectoris. Přítomný vynález také poskytuje způsob léčení nebo prevence výše uvedených chorob, zahrnující podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle přítomného vynálezu osobě takovouto chorobou trpící nebo osobě se sklony ke vzniku takovéto choroby.

Sloučeniny mohou být podány topicky, tedy do plic a/nebo dýchacích cest, ve formě roztoků, suspenzí, HFA aerosolů a suchých práškových formulací; nebo systémově, například perorálně ve formě tablet, pilulek, kapslí, sirupů, prášků nebo granulí, nebo parenterálně ve formě sterilních parenterálních roztoků nebo suspenzí, subkutánně nebo rektálně ve formě čípků nebo transdermálně.

Sloučeniny podle přítomného vynálezu mohou být podány jako takové nebo jako farmaceutický prostředek, obsahující sloučeninu podle přítomného vynálezu v kombinaci s farmaceuticky přijatelným ředidlem, přídatným přípravkem a/nebo nosičem. Obzvláště výhodné jsou prostředky, které neobsahují látky, schopné zapříčinit nežádoucí, například alergické, reakce.

Suché práškové formulace a stlačené HFA aerosoly sloučenin podle přítomného vynálezu mohou být podány perorálně nebo inhalací do nosu. Pro inhalaci se sloučenina s výhodou rozmělní na malé částice. Sloučeniny podle přítomného vynálezu mohou být také podány inhalátorem se suchým práškem. Inhalátor může být bud’jednodávkový či vícedávkový a může to být dechově poháněný inhalátor se suchým práškem.

Jedna z možností je smísení jemně rozmělněné sloučeniny s látkou nosiče, například s mono-, di- nebo polysacharidem, alkoholem cukru nebo jiným polyolem. Vhodné nosiče zahrnují cukr a škrob. Alternativně může být jemně rozdělená sloučenina povlečena další látkou. Prášková směs může být také vložena do tvrdých želatinových kapslí, z nichž každá obsahuje požadovanou dávku účinné sloučeniny.

Další možností je naplnit jemně rozdělený prášek do kuliček, které se rozpadnou v průběhu inhalační procedury. Takto sféronizovaný prášek může být naplněn do lékového obalu vícedávkového inhalátoru, například inhalátoru Turbohaler®, ve kterých dávková jednotka vyměří požadovanou dávku, kterou poté pacient inhaluje. Takto je účinná sloučenina s nosičem nebo bez nosiče dodána pacientovi.

Farmaceutický prostředek, obsahující sloučeninu podle přítomného vynálezu, může být pohodlně ve formě tablet, pilulek, kapslí, sirupů, prášků nebo granulí pro perorální způsob podání; sterilních parenterálních nebo subkutánních roztoků, suspenzí pro parenterální podání nebo čípků pro podání rektální.

Pro perorální způsob podání může být účinná sloučenina smísena s přídatným přípravkem nebo nosičem, například laktózou, sacharózou, sorbitolem, mannitolem, škroby, například bramborovým škrobem, kukuřičným škrobem nebo amylopektinem, deriváty celulózy, pojidlem, například želatinou nebo polyvinylpyrrolidonem, a zvlhčujícím přípravkem, například stearátem hořečnatým, stearátem vápenatým, polyethylenglykolem, vosky, parafínem a jim podobným, a potom stlačena do tablet. Pokud jsou požadovány povlečené tablety, mohou být jádra, připravená způsobem popsaným výše, povlečena koncentrovaným roztokem cukru, který může obsahovat například arabskou gumu, želatinu, mastek, oxid titaničitý a látky těmto podobné. Alternativně může

-11 CZ 295234 B6 být tableta povlečena vhodným polymerem, rozpuštěným bud’ ve snadno těkavém organickém rozpouštědle nebo ve vodném rozpouštědle.

Pro přípravu měkkých želatinových kapslí může být sloučenina smísena například s rostlinným olejem nebo polyethylenglykolem. Tvrdé želatinové kapsle mohou obsahovat granule sloučeniny, obsahující výše zmíněné tabletové excipienty, například laktózu, sacharózu, sorbitol, mannitol, škroby, celulózové deriváty nebo želatinu. Také kapalné nebo polotuhé formulace léčiva mohou být naplněny do tvrdých želatinových kapslí.

Kapalné prostředky pro perorální podání mohou být ve formě sirupů nebo suspenzí, například roztoků, obsahujících sloučeninu, doplněnou cukrem a směsí ethanolu, vody, glycerolu a propylenglykolu. Tyto kapalné formulace mohou popřípadě obsahovat barvidla, ochucovadla, sacharin a karboxymethylcelulózujako zahušťovací přípravek nebo jiné excipienty, které jsou odborníkovi v oboru známé.

Příklady provedení vynálezu

Přítomný vynález je dále ilustrován následujícími příklady, avšak není jimi vymezen.

V příkladech jsou NMR spektra měřena na spektrometru Varian Unity lnová 300 nebo 400 a MS spektra se měří následujícím způsobem: El spektra se získají na spektrometru VG 70-250S nebo Finnigan Incos-XL spektrometru, FAB spektra se měří na spektrometru VG70-250SEQ, ESI a APCI spektra se měří na Finnigan Mat SSQ7000 nebo na Micromass Platform spektrometru. Preparativní HPLC separace se obecně provedou za použití Novapak®, Bondapak® nebo Hypersilyl® sloupců, naplněných BDSC-18 reverzní fází ze siliky. Blesková chromatografie (vyznačená v příkladech jako (SiO₂)) se provede za použití Fisher Matrix siliky s velikostí částic 35 až 70 pm. V příkladech, vykazujících přítomnost rotamerů v protonových NMR spektrech, jsou vyznačeny pouze chemické posuny hlavního rotamerů.

Příklad 1 {1 R-[ 1 α,2a,3 β( 1 R*,2S*),5 β]}—3—{7—[(2—(4—Fluorfenyl)-l-oxo-2-propenyl]-hexahydro-8,8dimethyl-3H-3a,6-methan-2,l-benziso-thiazol-2,2-dioxid

a) {3aS-[l(E)3aa,6a,7aft]}-i-[3-(4~Fluorfenyl)-l-oxo-2-propenyl]-hexahydro-8,8-di- methyl-3H-3a,6-methan-2,l-benziso-thiazol-2,2-dioxid

Směs 3,0 g kyseliny 3-(4-fluorfenyl)-2-propenové a 5,0 ml thionylchloridu se míchá při teplotě 70 °C po dobu 1 hodiny, reakční směs se potom odpaří a sníženého tlaku. Odparek se dvakrát azeotropuje s dichlormethanem, potom se rozpustí v 10 ml toluenu. K suspenzi 0,99 g 60% disperze hydridu sodného voleji ve 40 ml toluenu se přidá roztok 3,89 g [3η8-(3ηα,6α,78β)]hexahydro-78,8-dimethyl-3H-3a,6-methan-2,l-benzizothiazol-2,2-dioxidu ve 40 ml toluenu a směs se míchá po dobu 30 minut. Reakční směs se potom přidá do roztoku, popsaného výše a výsledná suspenze se míchá po dobu 16 hodin. Přidá se 200 ml vody, organické látky se seberou a vodná fáze se extrahuje do třikrát 100 ml dichlormethanu. Organické látky se spojí, vysuší a odpaří. Rekrystalizací z ethanolu se dostane 5,92 g sloučeniny, uvedené v podtitulku, jako jehličky bez barvy.

MS (APCI) 364 (M+ H, 100%).

-12CZ 295234 B6

b) {3aS-[l(lS*,2S*),3aa,6a,7aP]}-l-{[(2-(4-Fluorfenyl)cyklopropyl]karbonyl)-hexahydro8,8-dimethyl-3H-3a,6-methan-2,l-benzizothiazol-2,2-dioxid

Roztok 2,9 g diazomethanu ve 150 ml etheru, připravený postupem, popsaným ve Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry, 5. vydání, Longman Scientific and Technical, 432, se přidá do roztoku 5,90 g produktu z kroku a) a 18 mg octanu palladnatého ve 350 ml dichlormethanu při teplotě 0 °C a reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 5 hodin. Přidá se 5 ml kyseliny octové a reakční směs se potom promyje 200 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a organické látky se přefiltrují přes zátku ze siliky. Po odpaření ve vakuu odparek rekrystaluje zethanolu, čímž se dostane 3,81 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku, jako jehličky bez barvy.

MS (APCI) 378 (M+ H, 100%).

c) Kyselina (lR-trans)-2-(4-fluorfenyl)-cyklopropankarboxylová

Suspenze 3,74 g produktu z kroku b) a 4,11 g monohydrátu hydroxidu lithného ve 100 ml tetrahydrofuranu a 3 ml vody se míchá při teplotě 50 °C po dobu 24 hodin. Reakční směs se odpaří ve vakuu a odparek se rozpustí ve 100 ml vody, okyselí 2N HC1 a extrahuje se do třikrát 75 ml dichlormethanu. Organické látky se vysuší a odpaří. Bleskovou chromatografií na SiO₂, za použití směsi izohexanu a diethyletheru v poměru 2:1 jako eluentu se dostane 1,78 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku, jako bezbarvé pevné látky.

MS (APCI) 179 (M-H⁺, 100%).

d) Směs (lR-trans)-2-(4-fluorfenyl)cyklopropanaminu a [R-(R*,R*)]-2,3-dihydroxybutandioátu v poměru 1:1

K roztoku 1,78 g produktu z kroku c) a 2,7 ml triethylaminu ve 23 ml směsi acetonu a vody v poměru 10:1 se při teplotě 0 °C v průběhu 5 minut přidává 2,0 ml ethylchlorformiátu. Roztok se udržuje při teplotě 0 °C po dobu 30 minut a potom se přidá 1,52 g azidu sodného v 6 ml vody. Po uplynutí další 1 hodiny se přidá 350 ml vody a reakční směs se extrahuje třikrát 100 ml toluenu. Organické extrakty se spojí a vysuší, potom se zahřívají při zpětném toku po dobu 2 hodin za nárazovým krytem. Po ochlazení roztoku se přidá 50 ml 6N HC1 a směs se zahřívá při zpětném toku po dobu 3 hodin. Přidá se 150 ml vody, vodná fáze se alkalizuje vodným 2NNaOH a potom se extrahuje do třikrát 100 ml dichlormethanu. Organická fáze se vysuší a odpaří. Amin se rozpustí v 5 ml ethanolu a přidá se roztok 1,48 g kyseliny L-vinné ve 20 ml ethanolu. Po 20 minutách se pevná látka sebere, čímž se dostane 1,12 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku, jako jehličky bez barvy.

NMR δΗ (d₆-DMSO) 1,07 až 1,39 (1H, m), 1,22 až 1,29 (lH,m), 2,16 až 2,70 (lH,m), 3,95 (2H, s), 7,06 až 7,19 (4H, m).

e) {3aR-[3a,4a,6a(lR*2S*),6aa]}-6-{7-[(2-(4-Fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-A-methanol

1,29 g Ν,Ν-diizopropylethylaminu se přidá k roztoku 1,0 g {3aR-[3a,4oc,6a,6aa]}-6-{7-chlor5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxoW-methanolu (připraví se podle postupu, popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 9 703 084) a 0,75 g produktu z kroku d) v 25 ml dichlormethanu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin, potom se promyje vodou, vysuší a odpaří se. Odparek se čistí bleskovou chromatografií na SiO₂, za použití směsi ethylacetátu a izohexanu v poměru 1:1 jako eluentu, čímž se dostane 1,25 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

-13CZ 295234 B6

MS (APCI) 515 (M+H⁺, 100%).

f) {3aR-[3a,4a,6a(lR*2S*),6aa]}-6-{7-[(2-(4-Fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylsulfonyl)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}tetrahydro-2,2-dimethyMH-cyklopenta-l,3dioxol-4-methanol

1,8 g 80% kyseliny 3-chlorperoxybenzoové se přidá k suspenzi 1,25 g produktu z kroku e) ve 25 ml ethanolu a výsledný roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Reakční směs se odpaří, odparek se vyjme do 500 ml ethylacetátu, promyje dvakrát 100 ml 10% vodného roztoku metabisiřičitanu sodného a dvakrát 100 ml 10% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, potom se vysuší a odpaří, čímž se dostane 1,4 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 547 (M+H⁺, 100%).

g) {[3aa,4a,6a(lR*2S*),6aa]}-6-{7-[(2-(4-Fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-1,3-dioxol-4—methanol

1,4 g hydrátu hydrogensulfídu sodného se přidá k roztoku 1,4 g produktu z kroku f) ve 20 ml dimethylsulfoxidu a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 1,5 hodiny. Přidá se 150 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného, směs se okyselí kyselinou octovou a potom se extrahuje třikrát 100 ml ethylacetátu. Organická fáze se vysuší a odpaří a odparek se azeotropuje s třikrát 100 ml toluenu. Odparek se rozpustí ve 20 ml Ν,Ν-dimethylformamidu a potom se přidá 0,33 g Ν,Ν-diizopropylethylaminu a 0,48 g 3,3,3-trifluorpropylbromidu. Po míchání při teplotě 50 °C po dobu 30 minut se reakční směs zředí 100 ml ethylacetátu, potom se promyje třikrát 100 ml vodného roztoku chloridu sodnému, vysuší se a odpaří a odparek se čistí bleskovou chromatografií na S1O₂, za použití směsi izohexanu a ethylacetátu v poměru 1:1 jako eluentu, čímž se dostane 1,4 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 569 (Μ+ΙΓ, 100%).

h) {lR-[la,2a,3P(lR*,2S*),53]}-3-{7-[(2-(4-Fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxymethyl)-cyklopentan-l,2diol

Roztok 1,4 g produktu z kroku g) v 10 ml kyseliny trifluoroctové a 2 ml vody se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Reakční směs se zředí 400 ml ethylacetátu, potom se promyje 400 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se a odpaří. Odparek se čistí bleskovou chromatografií na SiO₂, za použití směsi methanolu a chloroformu v poměru 3:47 jako eluentu, čímž se dostane 0,44 g sloučeniny, pojmenované v nadpisu.

MS (APCI) 529 (M+H⁺, 100%).

NMR ÓH (d₆-DMSO) 9,42 (1H, d), 7,27 až 7,22 (2H, m), 7,14 až 7,08 (2H, m), 5,01 až 4,95 (2H, m), 4,73 až 4,70 (2H, m), 4,44 až 4,41 (1H, m), 3,87 až 3,84 (1H, m), 3,50 až 3,45 (2H, m), 3,26 až 3,13 (3H, m), 2,60 až 2,55 (1H, m), 2,28 až 2,20 (2H, m), 2,10 až 2,06 (1H, m), 1,90 až 1,80 (1H, m), 1,49 až 1,46 (1H, m), 1,33 až 1,30 (1H, m).

-14CZ 295234 B6

Příklad 2 {1 R-[ 1 α,2α,3 β( 1 R*,2S*),5 β] }-3- {7-[(2-(3,4-Difluorfenyl)-cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxymethyl)-cyklopentan-l,2diol

a) {3 aS-[ 1 (E)3 πα,όα^β]} -1 -[3-(3,4-Difluorfenyl)-1 -oxo-2-propenyl]-hexahydro-8,8-dimethyl-3H-3a,6-methan-2,l-benzizothiazol-2,2-dioxid

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví způsobem, popsaným v příkladu 1, krok a) za použití kyseliny 3-(3,4-difluorfenyl)-2-propenové.

MS (APCI) 382 (M+H⁺, 100%).

b) {3aS-[l(lS*,2S*),3aα,6α,7aβ]}-l-{[(2-(3,4-Difluorfenyl)cyklopropyl]karbonyl}hexahydro-8,8-dimethyl-3H-3a,6-methan-2,l-benzizothiazol-2,2-dioxid

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví způsobem z příkladu 1, krok b), za použití produktu z kroku a).

MS (APCI) 396 (M+H⁺, 100%).

c) Kyselina (lR-trans)-2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropankarboxylová

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví způsobem z příkladu 1, krok c), za použití produktu z kroku b).

NMR δΗ (CDC1₃) 7,06 (1H, dt, J = 10,0, J = 8,5 Hz), 6,93 až 6,80 (2H, m), 2,58 až 2,52 (1H, m), 1,88 až 1,82 (1H, m), 1,66 (1H, dt, J= 9,2, J= 5,2 Hz), 1,34 (1H, ddd, J = 8,5, J = 6,5 a J = 4,8 Hz).

d) Směs (lR-trans)-2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropanaminu a [R-(R*,R*)]-2,3-dihydroxybutandioátu v poměru 1:1

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví způsobem z příkladu 1, krok d), za použití produktu z kroku c).

MS (APCI) 170 (M+H⁺, 100%).

e) {3aS-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa]}-6-{7-[(2_(3,4-Diíluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,-

3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-tetrahydro-2,2-dimethyl^4Hcyklopenta-1,3-dioxol-4-methanol

5,1 ml izoamylnitritu se přidá do roztoku 8,1 g {3aS-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aoc]}-6-[(5-amino6-chlor-2-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-4-pyrimidyl)amino]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4Hcyklopenta-1,3-dioxol-4-methanolu (připraví se podle postupu, popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 9 703 084) v 1000 ml acetonitrilu a roztok se míchá při teplotě 70 °C po dobu 1 hodiny. Ochlazení reakční směs se odpaří a čistí se bleskovou chromatografií na SiO₂, za použití směsi dichlormethanu a ethylacetátu v poměru 4:1 jako eluentu, čímž se dostane intermediární produkt, který se konvertuje na sloučeninu, pojmenovanou v nadpisu, způsobem z příkladu le) za použití produktu z kroku d).

MS (APCI) 587 (M+H⁺, 100%).

-15CZ 295234 B6

í) {1 R-[ 1 α,2a,3 β( 1R* ,2S*),5 β] }-3- {7—[(2—(3,4—Difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,-

3.3- trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxymethyl)-cyklopentan-1,2-diol

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví způsobem z příkladu 1, krok h), za použití produktu z kroku g).

MS (APCI) 547 (M+H⁺, 100%).

NMR δΗ (d₆-DMSO) 9,43 (1H, d), 7,35 až 7,28 (2H, m), 7,14 až 7,02 (1H, m), 5,01 až 4,96 (2H, m), 4,72 až 4,69 (2H, m), 4,42 (1H, q), 3,87 až 3,84 (1H, m), 3,50 až 3,44 (2H, m), 3,25 až 3,12 (3H, m), 2,58 až 2,50 (2H, m), 2,28 až 2,21 (3H, m), 1,85 až 1,80 (1H, m), 1,52 až 1,50 (1H, m), 1,39 až 1,37 (lH,m).

Příklad 3 {1 S-[ 1 α,2a,3 β( 1R* ,2R*),5 β] }-3- {7-[(2-(3,4-Difluorfenyl)cyklopropyl)ammo]-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxyethoxy)-cyklopentan-l,2-diol

a) (1 R-cis)-Bis-( 1,1 -dimethylethyl)^l-hydroxy-2-cyklopentenylimidodikarbonát

K suspenzi 0,31 g 60% olejové disperze etherem promytého hydridu sodného ve 30 ml tetrahydrofuranu se přidá 1,84 g bis-(l,l-dimethylethyl)esteru kyseliny imidokarboxylové. Směs se míchá při teplotě 40 °C po dobu 1 hodiny. Ke směsi se poté při teplotě místnosti přidá 0,5 g (lS-cis)-4~acetoxy-2-cyklo-l-pentenolu a 0,18 g tetrakis(trifenylfosfín)palladia(0). Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin a potom se čistí bleskovou chromatografíí na SiO₂, za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 1:9 jako eluentu, čímž se dostane 0,90 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku, jako bezbarvého oleje.

NMR δΗ (d₆-DMSO) 1,43 (18H, s), 1,61 (1H, ddd, J = 12,3, 7,7 a 6,4 Hz), 2,54 (1H, dt, J = 12,6 a 7,4 Hz), 4,51 až 4,57 (1H, m), 4,86 (1H, tq, J = 8,0 a 1,8 Hz), 4,91 (1H, d, J = 5,4 Hz), 5,71 až 5,77 (2H, m).

b) Bis-(l,l-dimethylethyl)ester kyseliny [lR-(la^^,4a)]-2,3,4-trihydroxy-cyklopentenylimidodokarboxylové

K roztoku 17,1 g produktu z kroku a) ve směsi 500 ml tetrahydrofuranu a 50 ml vody se přidá 9,4 g N-methylmorfolin-N-oxidu, následovaných 10 ml 2,5% roztoku oxidu osmičelého v terc.-butanolu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 dní a potom se zpracuje se 6,0 g hydrogensiřičitanu sodného. Suspenze se přefiltruje přes vrstvu rozsivkové zeminy a produkt se čistí bleskovou chromatografíí na SiO₂, za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 1:1 jako eluentu, čímž se dostane 19,1 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

NMR δΗ (d₆-DMSO) 1,44 (18H, s), 1,46 až 1,60 (1H, m), 3,55 až 3,58 (1H, m), 3,66 až 3,73 (1H, m), 4,11 až 4,21 (2H, m), 4,54 (1H, d, J = 4,8 Hz), 4,56 (1H, d, J = 5,9 Hz), 4,82 (1H, d, J = 4,6 Hz).

c) Hydrochlorid [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-aminotetrahydro-2,2-dimethyl^4H-cyklopenta-

1.3- dioxol-4-olu

K 17,4 g produktu z kroku b) ve 6M HC1 (lOOmlv 500 ml methanolu) se míchá po dobu 18 hodin. Směs se odpaří a potom se azeotropuje ve čtyřikrát 200 ml toluenu, aby se dostalo 8,7 g bezbarvého prášku. Tato pevná látka se suspenduje ve 250 ml acetonu, obsahujícího 25 ml

-16CZ 295234 B6

2,2-dimethoxypropanu a 0,2 ml koncentrované HC1 a potom se zahřívá při zpětném toku po dobu 2 hodin. Směs se ochladí, odpaří a azeotropuje s třikrát 200 ml toluenu. Odparek se rozpustí ve 20% vodné kyselině octové a míchá se po dobu 2 hodin. Směs se potom odpaří a azeotropuje se ve čtyřikrát 200 ml toluenu, čímž se dostane 10,1 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 174 (M+H⁺, 100%).

d) [3aR-(3aa,4oc,6a,6aa)]-6-{[6-Chlor-5-nitro-2-(propylthio)-4-pyrimidyl]amino}-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol^4-ol

Roztok 10,0 g produktu z koku c) a 35 ml Ν,Ν-diizopropylethylaminu v 600 ml tetrahydrofuranu se míchá po dobu 1 hodiny. Směs se přefiltruje a roztok se během 1 hodiny přidává do roztoku 25,6 g 4,6-dichlor-5-nitro-2-(propylthio)-pyrimidinu (připraví se způsobem, popsaným v mezinárodní patentové přihlášce WO 9 703 084) v 1000 ml tetrahydrofuranu a míchá se po dobu dalších 2 hodin. Objem rozpouštědla se sníží odpařením ve vakuu a přidá se 1000 ml ethylacetátu. Směs se promyje vodou a organické vrstvy se vysuší, odpaří a čistí bleskovou chromatografií na SiO₂, za použití směsi izohexanu a ethylacetátu jako eluentu, čímž se dostane 14,2 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 405 (M+H⁺, 100%).

e) [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-{[5-Amino-6-chlor-2-(propylthio)^b-pyrimidyl]amino}-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-ol

3,0 g práškového železa se přidá do míchaného roztoku 2,7 g produktu z kroku d) ve 100 ml kyseliny octové. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin, odpaří se na poloviční objem, zředí ethylacetátem a promyje se vodou. Organická fáze se vysuší a odpaří se, aby se dostalo 2,0 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 375 (M+H⁺, 100%).

f) [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-Chlor-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl^lH-cyklopenta-l,3-dioxol-4-ol

1,1 ,1 izoamylnitritu se přidá k roztoku 2,0 g produktu z kroku e) ve 100 ml acetonitrilu a roztok se zahřívá na teplotu 70 °C po dobu 1 hodiny. Ochlazená reakční směs se odpaří a čistí se bleskovou chromatografií na SiO₂, za použití směsi ethylacetátu a izohexanu v poměru 1:3 jako eluentu, čímž se dostane 1,9 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 386 (M+H⁺, 100%).

g) [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-Amino-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-ol

K 13,2 g produktu z kroku f) ve 200 ml tetrahydrofuranu, obsahujícím 5 ml 0,88 amoniaku, se míchá po dobu 2 hodin, potom se odpaří do sucha a odparek se rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Organické látky se vysuší a odpaří se, aby se dostalo 12,5 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 367 (M+H⁺, 100%).

-17CZ 295234 B6

h) Methylester kyseliny [3aR—(3aoc,4a,6a,6aoc)]—6—[7—amino—5—(propylthio)—3H—1,2,3—triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-ol]octové

K roztoku 0,50 g produktu z kroku g) ve 25 ml tetrahydrofuranu se při teplotě 0 °C přidá 0,62 ml 2,5N butyllithia v hexanech. Po 20 minutách se suspenze zpracuje s roztokem 0,34 g methylesteru kyseliny trifluormethansulfonyloxyoctové (připraví se způsobem podle Bitona, Tetrahedron, 51, 10 513 (1995)) v 10 ml tetrahydrofuranu. Výsledný roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti, potom se odpaří a čistí se bleskovou chromatografíí na SiO₂, za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 4:6 jako eluentu, čímž se dostane 0,25 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 439 (M+H⁺, 100%).

ch) Methylester kyseliny [3aR-(3aa,4a,6oc,6aoc)]-{[6-(7-brom-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol [4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l ,3-dioxol-4-oljoxy} octové

K 1,1 g produktu z kroku h) a 2,4 ml izoamylnitritu ve 30 ml bromoformu se zahřívá na teplotu 80 °C po dobu 30 minut. Ochlazená směs se čistí bleskovou chromatografíí na SiO₂, za použití směsi ethylacetátu a izohexanu v poměru 1:4 jako eluentu, čímž se dostane 0,44 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 502/4 (M+H⁺) 504 (100%).

i) Methylester kyseliny [3aR-(3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa)]-{[6-[7-([2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl]amino)-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l ,3-dioxol-4-yl]oxy} octové

Ke směsi 0,80 g produktu z kroku i a) a 0,61 g produktu s příkladu 2d) v 25 ml dichlormethanu se přidá 0,85 ml Ν,Ν-diizopropylethylaminu. Výsledný roztok se zahřívá při teplotě místnosti po dobu 16 hodin a potom se odpaří ve vakuu. Čištěním bleskovou chromatografíí na SiO₂, za použití směsi izohexanu a ethylacetátu v poměru 3:1 jako eluentu se dostane 0,77 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku jako bezbarvé pěny.

MS (APCI) 591 (M+H⁺ 100%).

j) [3aR-(3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa)]-2-{6-[(7-[2-(3,4-Difluorfenyl)cyklopropyl]amino)-5(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-

1,3-dioxol^4-yl]oxy}-ethanol

5,15 ml l,0M roztoku látky DIBAL-H® v hexanech se přidá do ledově vychlazeného roztoku 0,76 g produktu z kroku j) v 1 ml tetrahydrofuranu a roztok se při této teplotě míchá po dobu 2 hodin. Reakční směs se odpaří ve vakuu a odparek se rozpustí v 75 ml ethylacetátu. Přidá se 75 ml nasyceného vodného roztoku natrium-kalium-vínanu a směs se důkladně míchá po dobu 16 hodin. Organické látky se seberou a vodná fáze se potom znovu extrahuje dvakrát 50 ml ethylacetátu. Spojené organické látky se vysuší a odpaří a odparek se čistí bleskovou chromatografií na SiO₂, za použití směsi izohexanu a ethylacetátu v poměru 1:1 jako eluentu se dostane 0,63 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 563 (M+H⁺ 100%).

-18CZ 295234 B6

k) {lS-[la,2a,3P(lR*,2R*),5aP]}-3-{7-[(2-(3,4-Difluorfenyl)cyklopropyl]amino)-5(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-5-(hydroxyethoxy)cyklopentan-l,2-diol

Připraví se způsobem z příkladu 1, krok h) za použití produktu z kroku k).

MS (APCI) 523 (M+H⁺ 100%).

NMR δΗ (dg-DMSO) 8,95 (1H, d, J = 3,3 Hz), 7,39 až 7,21 (2H, m), 7,10 až 7,00 (1H, m), 5,12 (1H, d, J = 6,4 Hz), 5,05 (1H, d, J = 3,6 Hz), 4,96 (1H, q, J = 9,0 Hz), 4,62 až 4,54 (2H, m), 3,95 (1H, široký s), 3,79 až 3,73 (1H, m), 3,55 až 3,47 (4H, m), 3,20 až 3,13 (1H, m), 2,98 až 2,81 (2H, m), 2,63 (1H, dt, J = 13,6 a 8,5 Hz), 2,29 až 2,21 a 2,16 až 2,09 (1H, m), 2,07 až 2,00 (1H,

m), 1,73 až 1,33 (4H, m), 0,99 (3H, t, J = 7,4 Hz).

Příklad 4 {1 R-[ 1 α,2α,3 β( 1R* ,2S *),5 ap]}-3-[(5-(Butylthio)-7--{[2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl] amino)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-5-(hydroxyethoxy)-cyklopentan-l,2-diol

a) [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-Amino-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-methanol

Připraví se způsobem z příkladu 3g) za použití [3aR-(3aa,4oc,6a,6aa)]-6-[7-chlor-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxoU4-methanolu (připraví se způsobem, popsaným v mezinárodní patentové přihlášce WO 9 703 084). Surový produkt se čistí bleskovou chromatografíí na SiO₂, za použití směsi methanolu a dichlormethanu v poměru 1:19 jako eluentu, čímž se dostane sloučenina, pojmenovaná v podtitulku.

MS (APCI) 381 (M+H⁺ 100%).

b) [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-Amino-5-(propylsulfonyl)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxoM—methanol

Připraví se způsobem z příkladu 1 f) za použití příkladu z kroku a).

MS (APCI) 413 (M+H⁺ 100%).

c) [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-Amino-5-(butylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-methanol

2,38 ml 1-butanthiolu ve 25 ml DMF se přidá do suspenze 1,09 g 60% hydridu sodného v 50 ml DMF. Po 1 hodině se po kapkách přidá 3,66 g produktu z kroku b) v 65 ml DMF a výsledná směs se míchá přes noc. Reakční směs se pomalu přidává do 1000 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom se extrahuje do třikrát 200 ml ethylacetátu. Organická fáze se vysuší MgSO₄, odpaří se ve vakuu a odparek se čistí bleskovou chromatografíí na SiO₂ za použití směsi methanolu a dichlormethanu v poměru 1:19 jako eluentu, čímž se dostane sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, v množství 3,32 g.

MS (APCI) 395 (M+H⁺ 100%).

-19CZ 295234 B6

d) Octan [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-amino-5-(butylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-di-methyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-methanolu

K roztoku 3,3 g produktu z kroku c) v 50 ml dichlormethanu se přidá 2,7 ml pyridinu, 0,4 g

4-dimethylaminopyridinu a 2,0 ml acetanhydridu. Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc, odpaří se ve vakuu a čistí bleskovou chromatografíí na SiO₂ za použití směsi diethyletheru a izohexanu v poměru 3:2 jako eluentu, čímž se dostane sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, v množství 2,7 g.

MS (APCI) 437 (M+H⁺ 100%).

e) Octan [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-brom-5-(butylthio)-3H-l ,2,3-triazol[4,5-d]-3pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-di-methyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-methanolu

Připraví se způsobem z příkladu 3 i), za použití příkladu z kroku d).

MS (APCI) 500/502 (M+H⁺), 500 (100%).

f) Octan [3 aR-(3 aa,4a,6a,( 1R* ,2S *),6aa)]-6-[5-(butylthio)-7-(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-di-methyl-4H-cyklopenta-1,3-dioxoM—methanolu

Připraví se způsobem z příkladu 3j), za použití příkladu z kroku 2d) a produktu z kroku e).

MS (APCI) 589 (M+H⁺, 100%).

g) {1 R-[ 1 α,2α, 3 β( 1R* ,2S *),5 β] }-3-[(5-(Butylthio)-7- {[2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl] amino}-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-5-(hydroxymethyl)-cyklopentan-l,2-diol

0,64 g produktu z kroku f) ve 30 ml 80% vodné kyseliny octové se zahřívá na teplotu 80 °C po dobu 1 hodiny. Ochlazená směs se vlije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se do ethylacetátu. Organická fáze se vysuší a odpaří ve vakuu, aby se dostala gumovitá látka, která se rozpustí ve směsi 50 ml methanolu a 3 ml 10% vodného roztoku uhličitanu draselného. Roztok se míchá po dobu 30 minut, neutralizuje se kyselinou octovou a odpaří se ve vakuu. Potom se čistí bleskovou chromatografíí na SiO₂ za použití směsi methanolu a dichlormethanu v poměru 1:19 jako eluentu, čímž se po rekrystalizaci z acetonitrilu dostane sloučenina, pojmenovaná v nadpisu, v množství 0,25 g.

MS (APCI) 507 (M+H⁺ 100%).

NMR δΗ (d₆-DMSO).9,34 (1H, široký r), 7,40 až 7,23 (2H, m), 7,11 až 7,00 (1H, m), 5,06 až 4,93 (2H, m), 4,76 až 4,67 (2H, m), 4,48 až 4,38 (1H, m), 3,91 až 3,84 (1H, m), 3,56 až 3,39 (2H, m), 3,21 až 3,08 (1H, m), 3,03 až 2,83 (2H, m), 2,32 až 2,17 (1H, m), 2,17 až 2,03 (2H, m), 1,91 až 1,77 (1H, m), 1,71 až 1,32 (4H, m), 1,32 až 1,17 (2H, m), 0,81 (3H, t).

-20CZ 295234 B6

Příklad 5 {1 S-[ 1 α,2a,3 3,4a(lS*,2R*)]}-4-[5-(Butylthio)-7-{[2-(4-fluorfenyl)cyklopropyl]amino}-3H- l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-cyklopentan-l,2,3-triol

a) {3aR-[3aa,4a,6a,6aa(lS*,2R*)]}-6-{7-[(4-Fluorfenyl)cyklopropyl]amino}-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxo-4-ol

Postupuje se způsobem z příkladu le) za použití produktu z ld) a za použití produktu z příkladu 3f).

MS (APCI) 501 (M+H⁺, 100%).

b) {3aR-[3aa,4a,6a,6aa(lS*,2R*)]}-6-{7-[(4-Fluorfenyl)cyklopropyl]ammo}-5-(propylsulfonyl)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrirnidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3dioxo-4-ol

Postupuje se způsobem z příkladu 1 f) za použití produktu z kroku a).

MS (APCI) 532 (M+H⁺, 100%).

c) {3aR-[3aa,4a,6a,6aa(lS*,2R*)]}-6-{7-[(4-Fluorfenyl)cyklopropyl]amino}-5-(butylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxo-4-ol

Postupuje se způsobem z příkladu 4c) za použití produktu z kroku b).

MS (APCI) 515 (M+lT, 100%).

d) {1 S-[ 1 α,2a,3 β,4α(1 S*,2R*)] }-4-[5-(Butylthio)-7-{ [2-(4-fluorfenyl)cyklopropyl]amino}-3H-l ,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-cyklopentan-l ,2,3-triol

Postupuje se způsobem z příkladu lh) za použití produktu z kroku c).

MS (APCI) 575 (M+H⁺, 100%).

NMR ÓH (d₆-DMSO) 7,26 až 7,22 (2H, m), 7,11 (2H, t), 4,99 až 4,90 (1H, m), 4,67 až 4,63 (1H, m), 3,93 (1H, s), 3,77 (1H, široký s), 3,35 až 3,13 (1H, m), 3,00 až 2,80 (2H, m), 2,59 až 2,51 (1H, m), 2,15 až 2,11 (1H, m), 1,91 až 1,86 (1H, m), 1,53 až 1,41 (3H, m), 1,35 až 1,30 (1H, m), 1,22 (2H, sextet), 0,80 (3H, t).

Příklad 6 {lS-[la,2a^(lS*,2R*)^]}-3-{7-[(2-(3,4-Dífluorfenyl)cyklopropyl]amino}-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-5-(2-hydroxyethoxy)cyklopentan-l,2diol

a) {1 S-[ 1 α,2a,3 β(1 S*,2R*),5 β] }-3-{7-[2-(3,4-Difluorfenyl)cyklopropyl]ammo}-5-(propyl- sulfonyl)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-5-(2-hydroxyethyl)-cyklopentan-l,2-diol

Postupuje se způsobem z příkladu 1 f) za použití produktu z příkladu 3, krok 1).

-21 CZ 295234 B6

MS (APCI) 555 (M+H⁺, 100%).

b) {lS-[la,2a,33(lS*,2R*),5|3]}-3-{7-[2-(3,4-Difluorfenyl)cyklopropyl]amino}-5-[(3,3,3trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3--pyrimidyl]-5-(2-hydroxyethoxy)cyklopentan1,2—diol

Sloučenina, pojmenovaná v nadpisu, se připraví postupem z příkladu lg) za použití produktu z kroku a).

MS (APCI) 555 (M+H⁺, 100%).

NMR 8H (de-DMSO) 9,45 (1H, d), 7,36 až 7,05 (3H, m), 5,05 (1H, d), 5,02 (1H, d), 4,95 (1H, m), 4,60 (2H, m), 3,95 (1H, m), 3,86 (1H, m), 3,47 (4H, m), 3,30 až 3,11 (3H, m), 2,63 až 2,49 (3H, m), 2,19 (1H, m), 2,00 (1H, m), 1,53 (1H, m), 1,40 (1H, m).

Příklad 7 {1 S-[ 1 α,2a,3 β, 5 β( 1 S*,2R*)] }-3-(2-Hydroxyethoxy))-5-[7-(2-fenylcyklopropyl)amino]-5[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-cyklopentan-l,2-diol

a) Ethylester kyseliny (lS-cis)-2-[(4-[(6-chlor-5-nitro-2-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-4pyrimidyl)amino]-2-cyklopenten-l-yl)oxy]octové

Roztok 4,70 g azidu sodného v 25 ml odplyněné vody se přidá do roztoku 9,99 g (lR,4S)-4hydroxy-2-cyklo-l-pentenylacetátu v 60 ml tetrahydrofuranu a míchá se po dobu 10 minut. Přidá se 365 mg tetrakis(trifenylfosfín)palladia(0) a míchá se po dobu 10 minut. Vodná vrstva se oddělí a dvakrát se extrahuje ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se vysuší MgSO₄, odpaří se a čistí se bleskovou chromatografíí na krátkém sloupci z SiO₂ za použití směsi ethylacetátu aizohexanu v poměru 1:2 jako eluentu, čímž se dostane žlutý olej. Tento olej se rozpustí ve 25 ml tetrahydrofuranu a pomalu se přidá do suspenze 2,94 g 60% olejové disperze hydridu sodného v 60 ml tetrahydrofuranu při teplotě -78 °C. Přidá se roztok 8,2 ml ethylbromacetátu v 5 ml tetrahydrofuranu a směs se nechá ohřát na teplotu 20 °C a míchá se po dobu 30 minut. Přidá se vodný roztok chloridu amonného a směs se extrahuje etherem. Organické vrstvy se vysuší MgSO₄, odpaří a čistí se bleskovou chromatografíí na SiO₂ za použití směsi etheru a izohexanu v poměru 1:5 jako eluentu, čímž se dostane olej bez barvy. Roztok tohoto oleje a 17,89 g trifenylfosfínu v 90 ml tetrahydrofuranu se míchá po dobu 10 minut. Přidá se 15 ml vody a roztok se míchá po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a odparek se azeotropuje s toluenem a potom se čistí bleskovou chromatografíí na SiO₂ za použití ethylacetátu a potom směsi ethylacetátu, methanolu a amoniaku v poměru 30:9:1 jako eluentu, čímž se dostane 7,14 g oleje světle žluté barvy.

Roztok této sloučeniny v 50 ml tetrahydrofuranu se v průběhu 25 minut přidává do roztoku 4,6-dichlor-5-nitro-2-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]pyrimidinu (připraví se podle postupu, popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 9 073 084) a 77,5 ml N,N-diizopropylethylenaminu ve 100 ml suchého tetrahydrofuranu a potom se míchá po dobu 30 minut. Přidá se voda a směs se třikrát extrahuje etherem. Organické vrstvy se vysuší MgSO₄, odpaří se a čistí se bleskovou chromatografíí na SiO₂ za použití směsi ethylacetátu a izohexanu v poměru 1:4 jako eluentu, čímž se dostane 7,39 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 367/369 (M-(EtO₂CCH₂O)⁺), 367(100%).

-22CZ 295234 B6

b) Ethylester kyseliny (lS-cis)-2-[(4-[(7-chlor-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-2-cyklo-l-pentenyl)oxy]octové

Postupuje se způsobem z příkladu 3e) a 3f) za použití produktu z kroku a).

MS (APCI) 348/350 (M-(EtO₂CCH₂O)⁺), 348(100%).

c) Ethylester kyseliny (lS-cis)-2-[(4-[(7-amino-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-2-cyklo-l-pentenyl)oxy]octové

Postupuje se způsobem z příkladu 3g) za použití produktu z kroku b).

MS (APCI) 433 (M+H⁺, 100%).

d) (1 S-cis)-2-[(4-[7-Amino-5-[(3,3,3-(trifluorpropyl)thio]-3H-l ,2,3-triazol[4,5-d]-3pyrimidyl]-2-cyklo-1 -pentenyl)oxyj-1 -ethanol

Postupuje se způsobem z příkladu 3k) za použití produktu z kroku c).

MS (APCI) 391 (M+H⁺, 100%).

e) {3aR-[3aa,4a,6a,6aa]}-2-{6-[7-Amino-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopentan-l,3-dioxol-4-yloxy}ethanol

Roztok 454 mg produktu z kroku d), 0,17 ml 0,1 M roztoku oxidu osmičelého v terč-butanolu, 210 mg N-methylmorfolin-N-oxidu a 0,09 ml pyridinu v 5 ml acetonu a 1 ml vody se zahřívá na teplotu 70 °C po dobu 5 hodin. Přidá se 330 mg hydrogensiřičitanu sodného v 1 ml vody, rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a odparek se azeotropuje s toluenem. Roztok tohoto produktu a 50 mg kyseliny paratoluensulfonové v 5 ml acetonu a 2 ml 2,2-dimethoxy-propanu se míchá po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, přidá se vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a směs se extrahuje ethylacetátem. Organické vrstvy se vysuší MgSO₄, odpaří se ve vakuu a čistí se bleskovou chromatografií na SiO₂ za použití směsi izohexanu a acetonu v poměru 5:2 jako eluentu, čímž se dostane 367 mg sloučeniny pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 465 (M+H⁺, 100%).

f) {3aR-[3aa,4a,6a,6aa]}-2-{6-[7-Brom-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-yloxy}ethanol

Postupuje se způsobem z příkladu 3i) za použití produktu z kroku e).

MS (APCI) 528/30 (M+H⁺), 528 (100%).

g) {3aR-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa]}-2-{[[6-(7-Fenylcyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-l,3-dioxol4—yloxy} ethanol

Postupuje se způsobem z příkladu 3j) za použití produktu z kroku f) a směsi (lR-trans)-2-fenylcyklopropanaminu a [R-(R*,R*)]-2,3-dihydroxybutandioátu v poměru 1:1 (připraví se podle popisu v publikaci L. A. Mitscher a kol., J. Med. Chem., 29, 2044 (1986)).

MS (APCI) 581 (M+H⁺), (100%).

-23CZ 295234 B6

h) {1 S-[ 1 α,2a, 3 β ,5 β( 1S * ,2R*)]} -3-(2-Hydroxyethoxy))-5-[7-(2-fenylcyklopropyl)amino]~

5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-cyklopentan-l,2-diol

Sloučenina, pojmenovaná v nadpisu, se připraví postupem z příkladu lh) za použití produktu z kroku g).

MS (APCI) 540 (M+H⁺, 100%).

NMR δΗ (d₆-DMSO) 7,35 až 7,16 (5H, m), 4,97 (1H, q), 4,62 až 4,54 (1H, m), 3,98 až 3,92 (1H, m), 3,78 až 3,72 (1H, m), 3,55 až 3,44 (4H, m), 3,26 až 3,19 (2H, m), 3,16 až 3,07 (1H, m), 2,70 až 2,61 (1H, m), 2,58 až 2,52 (1H, m), 2,23 až 2,18 (H, m), 2,05 až 1,97 (1H, m), 1,86 (1H, s), 1,54 až 1,46 (1H, m), 1,38 až 1,30 (1H, m).

Příklad 8 {1 S-[ 1 α,2β,3 β,4α( 1 S*,2R*)]}-A- [5-(Buty 1 thio))—7- {[2—(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl] amino}-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-cyklopentan-l,2,3-triol

a) {3 aR-[3 aa,4a,6a( 1R* ,2S *),6aa] }-6- {[7-[(3,4-Difluorfenyl)cyklopropyl] amino]-5(propylthio)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-

1,3-dioxol-4-ol

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví způsobem z příkladu le) za použití produktu z příkladu 3f) a produktu z příkladu 2d).

MS (APCI) 519 (M+H⁺, 100%).

b) {3aR-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa]}-6-{[7-[(3,4-Difluorfenyl)cyklopropyl]amino]-5(propylsulfonyl)-3H-l,2,3-triazol-[4,5-d]-3-pyrimidyl}-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-1,3-dioxol-4-ol

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví způsobem z příkladu lf) za použití produktu z kroku a).

MS (APCI) 551 (M+H⁺, 100%).

c) {3 aR-[3 aa,4a,6a( 1 R*,2S*),6aa] }-6-[5-(Butylthio)-7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3dioxol-4-ol

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví způsobem z příkladu 4c) za použití kroku b).

MS (APCI) 533 (M+H⁺, 100%).

d) {1 S-[la^^,4a(lS*,2R*)]}-4-[5-(Butylthio))-7-{[2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-cyklopentan-l,2,3-triol

Sloučenina, pojmenovaná v nadpisu, se připraví postupem z příkladu lh) za použití produktu z kroku c).

NMR δΗ (d₆-DMSO) 7,15 až 6,98 (3H, m), 6,67 (1H, s), 5,11 až 5,09 (1H, m), 4,82 až 4,76 (1H, m), 4,34 až 4,21 (3H, m), 3,7 (1H, s), 3,2 až 2,92 (4H, m), 2,77 (1H, m), 2,42 až 2,36 (1H, m), 2,2 až 2,18 (1H, m), 1,42 až 1,25 (6H, m), 0,9 (3H, q).

-24CZ 295234 B6

MS (APCI) 493 (M+H⁺, 100%).

Příklad 9 {1 S-[l α,2β,3 β( 1 S*,2R*),5 β] }-3-[5-(Butylthio)-7-[(2-fenylcyklopropyl)amino]-3H-l ,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-5-(2-hydroxyethoxy)-cyklopentan-l,2-diol

a) Fenylmethylester kyseliny {3aS-[3aa,4a,6a,6aa]}-[tetrahydro-6-hydroxy-2,2-dimethyl4H-cyklopenta-1,3-dioxol-4-yl]karbamové

39,3 g uhličitanu draselného se přidá do suspenze 27,1 g hydrochloridu {3aR-[3acc,4oc,6oc,6aa]}-

6-aminotetrahydro-2,2-dimethyl^4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-olu (připraví se způsobem, popsaným ve WO 9 905 142) v 500 ml 4-methyl-2-pentanonu. Poté se přidá 150 ml vody, následovaných přidáním po kapkách 23,1 g benzyl-chlorformiátu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin předtím, než se organická fáze oddělí. Vodná fáze se extrahuje dvakrát 50 ml 4-methyl-2-pentanonu. Spojené organické extrakty se odpaří a odparek se čistí bleskovou chromatograíií na SiO₂ za použití směsi dichlormethanu a methanolu v poměru 90:5 až 90:10 jako eluentu, čímž se dostane 39,23 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 465 (M+H⁺, 100%).

NMR δΗ (CDClj) 7,32 (5H, m), 5,65 (1H, široký s), 5,10 (2H, široký s), 4,59 (1H, d), 4,48 (1H, d), 4,27 (1H, m), 4,19 (1H, široký m), 2,24 (1H, široký s), 1,69 (1H, d), 1,41 (3H, s), 1,26 (3H, s).

b) Fenylmethylester kyseliny {3aS-[3aa,4oc,6a,6aa]}-[2,2-dimethyl-6-(2-hydroxyethoxy)tetrahydro-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-yl]karbamové

3,6 g terc.-butoxidu draselného ve 20 ml tetrahydrofuranu se v průběhu 5 minut přidává do roztoku 39,23 g produktu z kroku a) v 200 ml tetrahydrofuranu. Po 15 minutách se po kapkách přidá 3,7 g ethylbromacetátu v 10 ml tetrahydrofuranu. Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 10 minut, potom se přidá dalších čtyřikrát 3,7 ml ethylbromacetátu. Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu dalších 2 hodin. K výsledné suspenzi se poté po částech přidá 2,79 g tetrahydroboritanu lithného a reakční směs se míchá při teplotě nižší než 5 °C po dobu 16 hodin. K chladné směsi se po kapkách přidá 23 g ledové kyseliny octové. Po míchání po dobu 30 minut se po kapkách přidá 1000 ml vody a výsledná směs se míchá po dobu 30 minut. Fáze se poté oddělí a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem. Spojené organické látky se promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem NaCl a odpaří se. Odparek se čistí bleskovou chromatografíí na SiO₂ za použití směsi ethylacetátu a methanolu v poměru 25:75 až 50:50 jako eluentu, čímž se dostane 38,6 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 218 (M+H⁺, 100%).

c) {3aR-[3 aa,4a,6a,6aa] }-2- {[6-Amino-2,2-dimethyltetrahydro-4H-cyklopenta-l ,3-dioxol-4—yl]oxy}ethanol

Suspenze 4 g 14% palladia na aktivním uhlí v ethanolu se přidá do roztoku 39,96 g produktu z kroku b) ve 250 ml ethanolu a směs se hydrogenuje při tlaku 102 kPa po dobu 20 hodin. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se odpaří, aby se dostalo 23,65 g sloučeniny, pojmenované v podtitulku.

MS (APCI) 160 (M+H⁺, 100%).

-25 CZ 295234 B6

d) 2-(Butylthio)-4,6-dichlorpyrimidin-5-amin

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví postupem z příkladu 3e) za použití 2-(butylthio)^4,6-dichlor-5-nitropyrimidinu (připraví se způsobem, popsaným vDE 2 223 644).

NMR δΗ (CDC1₃) 4,20 (2H, široký s), 3,10 (2H, t), 1,70 (2H, m), 1,47 (2H, m), 0,95 (3H, t).

e) {3aR-[3aa,4a,6a,6aoc] }-2-{ [6-[(5-Amino-2-(butylthio)-6-chlor-A-pyrimidyl)amino]tetrahydro-6-hydroxy-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-yl]oxy}ethanol

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví postupem z příkladu 3d) za použití produktů z kroku c) a d).

MS (APCI) 433 (M+H, 100%).

f) {3aR-[3aa,4a,6(lR*,2S*),6aa]}-2-{[6-[(5-(Butylthio)-7-chlor-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]3-pyrimidyl]-tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-yl]oxy}ethanol

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví postupem z příkladu 3f) za použití produktu z kroku e).

NMR δΗ (CDC1₃) 5,53 (1H, m), 5,21 (1H, m), 4,88 (1H, d), 4,05 (1H, m), 3,59 (4H, m), 3,24 (2H, t), 2,70 (1H, m), 2,53 (1H, m), 2,13 (1H, m), 1,79 (2H, m), 1,55 (5H, m), 1,37 (3H, s), 0,98 (3H, t).

g) {3aR-[3aa,4a,6(lR*,2S*),6aa]}-2-{6-[(5-(Butylthio)-7-[2-fenylcyklopropyl]amino]3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl)-tetrahydro-2,2-dimethyl—4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4— yljoxy} ethanol

Sloučenina, pojmenovaná v podtitulku, se připraví postupem z příkladu 3j) za použití produktu z kroku f).

MS (APCI) 541 (M+H⁺, 100%).

h) {1 S-[ 1 α,2a,3 β( 1S* ,2R*),5 β] }-3-[5-butylthio))-7-[(2-fenylcyklopropyl)amino]-3H-l ,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-5-(2-hydroxyethoxy)-cyklopentan-l,2~diol

MS (APCI) 541 (M+H⁺, 100%).

NMR δΗ (de-DMSO) 9,33 (1H, d), 7,30 (2H, m), 7,18 (3H, m), 5,12 (1H, d), 5,04 (1H, d), 4,96 (1H, q), 4,59 (2H, m), 3,94 (1H, s), 3,76 (1H, m), 3,51 (4H, m), 3,22 (1H, m), 2,98 (1H, m), 2,86 (1H, m), 2,65 (1H, m), 2,14 (1H, m), 2,05 (1H, m), 1,21 až 1,53 (6H, m), 0,80 (3H, t).

Farmakologické údaje

Příprava stanovení agonistické/antagonistické aktivity sloučenin podle přítomného vynálezu na receptor P₂i(P2Y_adp nebo P2T_AC) promytých lidských destiček se provede následujícím způsobem.

100 ml lidské žilní krve se rovnoměrně rozdělí do 3 zkumavek, z nichž každá obsahuje 4 ml 3,2% trinatrium citrátu jako antikoagulačního prostředku. Zkumavky se centrifugují po dobu

-26CZ 295234 B6 minut při 240G, aby se dostala na destičky bohatá krevní plazma, do které se přidá 300 ng/ml prostacyklinu pro stabilizaci destiček v průběhu promývacího postupu. Na destičky bohatá krevní plazma bez červených krvinek se dostane centrifugací při rychlosti otáček 125G po dobu 10 minut, následované další centrifugací po dobu 15 minut při rychlosti otáček 640G. Supernatant se odstraní a destičkové pelety se opětovně suspendují v 10 ml modifikovaného Tyrode roztoku bez vápníku, jehož složení je 137 mM NaCl, ll,9mM NaHCO₃, 0,4 mM NalfyPCfy 2,7 mM KC1, 1,1 mM MgCl₂, 5,6 mM dextrózy, proháněné 95% kyslíkem a 5% CO₂ a udržovaném při teplotě 37 °C. Po přidání dalších 300 ng/ml PGT₂ se sdružená suspenze ještě jednou centrifuguje při rychlosti otáček 640G po dobu 15 minut. Supematant se odstraní a destičky se resuspendují nejdříve v 10 ml CFT s dalším CFT, přidaným pro upravení konečného počtu destiček na 2 x 10⁵/ml. Tato konečná suspenze se skladuje ve stříkačce o objemu 60 ml při teplotě 3 °C v prostředí bez přítomnosti vzduchu. Pro umožnění obnovení normální funkce z inhibice zprostředkované PGI₂ se destičky použijí pro agregační studie ne dříve než 2 hodiny po konečné resuspenzi.

Ve všech studiích se alikvoty destičkové suspenze o objemu 3 ml vloží do zkumavek, obsahujících 60 μΐ 50mM roztoku CaCl₂ o konečné koncentraci 1 mM. Přidá se lidský fibrinogen (Sigma, F4883) a 8-sulfofenyltheofylin (8-SPT, který se použije pro zablokování jakékoliv Pi-agonistické aktivity sloučenin) tak, aby konečné koncentrace byly 0,2 mg/ml (60 μΐ roztoku 10 mg/ml srážlivého proteinu ve fyziologickém roztoku) a 300 nM (10 μΐ 15mM roztoku v 6% glukóze). Následně se příslušně přidají destičky nebo pufr do objemu 150 μΐ na každou jednotlivou jamku plotny s 96 jamkami. Všechna měření se provedou ve třech provedeních pro destičky každého individuálního dárce.

Agonistické nebo antagonistické účinky se stanoví následujícím způsobem.

Agregační odpovědi na plotnách s 96 jamkami se měří prostřednictvím změny absorbance, určené odečítačem ploten při vlnové délce 660 nm. Jako odečítač plotny se použije buď Bio-Tec Ceres 900C nebo Dynatech MRX.

Absorbance každé jednotlivé plotny se odečte při vlnové délce 660 nm pro stanovení základní hodnoty. Do každé jamky se v celkovém objemu 10 μΐ tak přidá buď fyziologický roztok, nebo příslušný roztok testované sloučeniny tak, aby konečná koncentrace byla 0, 0,01, 0,1, 1, 10 nebo 100 mM. Plotna se potom protřepává po dobu 5 minut na orbitální třepačce při nastavení na 10 a absorbance se odečte při 660 nm. Agregace v tomto okamžiku indikuje agonistickou aktivitu testované sloučeniny. Potom se do každé jamky přidá fyziologický roztok nebo ADP (30 mM; 10 μΐ se 450 mM) a plotna se protřepává po dobu dalších 5 minut, po kterých se opět odečte absorbance při vlnové délce 660 nm.

Účinnost agonisty se stanoví jako % inhibice kontrolní odpovědi ADP, s následným stanovením hodnoty IC₅o. Sloučeniny, uvedené v příkladech přítomného vynálezu, mají hodnoty IC₅₀ vyšší než 5,0.

Claims

1. Pyrimidinové deriváty obecného vzorce I kde

R³ a R^{4 5} znamenají obě hydroxyskupinu;

R je XOH, kde X je CH₂, OCH₂CH₂ nebo vazba;

- pokud X je CH₂ nebo vazba, potom R¹ není propylová skupina;

pokud X je CH₂ a R¹ je CH₂CH₂CF₃, butylová skupina nebo pentylová skupina, potom fenylová skupina na R² musí být substituována atomem fluoru;

pokud X je OCH₂CH₂ a R¹ je propylová skupina, potom fenylová skupina na R² musí být substituována atomem fluoru.

2. Pyrimidinový derivát podle nároku 1, obecného vzorce I, kde R¹ je 3,3,3-trifluorpropylová skupina, butylová skupina s přímým řetězcem nebo propylová skupina s přímým řetězcem.

3. Pyrimidinový derivát podle nároku 1 nebo 2, obecného vzorce I, kde R² je fenylová skupina nebo 4-fluorfenylová skupina nebo 3,4-difluorfenylová skupina.

4. Pyrimidinový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, obecného vzorce I, kde R je CH₂OH nebo OCH₂CH₂OH.

5. Pyrimidinový derivát podle nároku 1, kterým je:

{1 R-[ 1 a, 2a, 3 β( 1 R*,2S*),5 β] }-3- {7-[(2-(4-fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxymethyl)cyklopentan-l,2-diol;

-28CZ 295234 B6 {lR-[la,2a,3P(lR*,2S*),5P]}-3-{7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxymethyl)cyklopentan-l,2diol;

{1 S-[ 1 α,2a,3 β( 1 S*,2R*),5 β] }-3-{7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylthio)3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(2-hydroxyethoxy)cyklopentan-l,2-diol;

{lR-[la,2a,3p(lR*,2S*),5P]}-3-{5-(butylthio)-7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(hydroxymethyl)-cyklopentan-l,2-diol;

{1 S-[ 1 a,2a, 3 β,4α( 1S *,2R*)]} -4-[5-(butylthio)-7- {[2-(4-fluorfenyl)cyklopropyl] amino} -3H-

I, 2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]cyklopentan-l ,2,3-triol;

{1S—[ 1 a,2a,3 β( 1 S*,2R*),5 β] }-3-{7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}-5-(2-hydroxyethoxy)cyklopentan-l,2-iol;

{1 S-[ 1 a,2a,3 β,5 β( 1 S*,2R*)J }-3-(2-hydroxyethoxy))-5-[7-(2-fenylcyklopropyl)amino]-5[(3,3,3-trifluorpropylthio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]cyklopentan-l,2-diol;

{lS-[la^^,4a(lS*,2R*)]}-4-[5-(butylthio))-7-{[2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl]amino}3H-1,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]cyklopentan-l ,2,3-triol;

{1 S-[ 1 a,2a,3 β( 1S * ,2R*),5 β]} -3-[5-butylthio))-7-[(2-fenylcyklopropyl)amino]-3H-1,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl]-5-(2-hydroxyethoxy)-cyklopentan-l,2-diol;

přičemž alkylové skupiny mají přímý řetězec;

nebo farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty těchto sloučenin, nebo sol váty takových solí.

6. Pyrimidinový derivát kterým j e:

{1 S-[ 1α,2α,3 β(1 S*,2R*),5 β] }-3-{7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(n-propylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl}-5-(2-hydroxyethoxy)cyklopentan-l,2-diol.

7. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 v kombinaci s farmaceuticky přijatelným ředidlem, přídatným přípravkem a/nebo nosičem.

8. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, pro použití pro léčení nebo prevenci infarktu myokardu, trombotické cévní mozkové příhody, transientních ischemických atak a/nebo periferního onemocnění cév.

9. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, pro použití pro léčení nebo prevenci nestabilní či stabilní angíny pectoris.

10. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, pro prevenci růstu nebo šíření tumoru.

II. Pyrimidinový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití v terapii.

-29CZ 295234 B6

12. Pyrimidinový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití v terapii nebo prevenci infarktu myokardu, trombotické cévní mozkové příhody, transientních ischemických atak a/nebo periferního onemocnění cév.

13. Pyrimidinový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití v terapii nebo prevenci nestabilní či stabilní angíny pectoris.

14. Použití pyrimidinového derivátu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 jako účinné složky pro výrobu léčiva pro použití pro léčení nebo prevenci infarktu myokardu, trombotické cévní mozkové příhody, transientních ischemických atak a/nebo periferního onemocnění cév.

15. Použití pyrimidinového derivátu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 jako účinné složky pro výrobu léčiva pro použití pro léčení nebo prevenci nestabilní či stabilní anginy pectoris.

16. Použití pyrimidinového derivátu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 jako účinné složky pro výrobu léčiva pro prevenci růstu nebo šíření tumoru.

17. Způsob přípravy derivátu obecného vzorce I podle nároku 1,vyznačující se tím, že zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce II

SR kde

R, R¹, R³ a R⁴ mají význam, definovaný v nároku 1, nebo jde o jejich chráněné deriváty, nebo

R³ a R⁴ vytváří společně vazbu v pětičlenném kruhu, nebo

L je odstupující skupina, se sloučeninou obecného vzorce III kde

R² má význam, definovaný v nároku 1, nebo jde o jeho chráněný derivát, za přítomnosti báze v inertním rozpouštědle za teploty místnosti nebo za teploty zvýšené, a popřípadě potom v jakémkoliv pořadí se provede:

konverze jedné či více funkčních skupin na jiné funkční skupiny;

-30CZ 295234 B6 odstranění jakékoliv ochranné skupiny;

vytvoření farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, nebo solvátu takové soli.

18. Pyrimidinový derivát kterým j e:

{3aR-[3a,4a,6a(lR*2S*),6aa]}-6-{7-[(2-(4—fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylsulfonyl)-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3dioxol^f-methanol;

{[3aa,4a,6a(lR*2S*),6aa]}-6-{7-[(2-(4-fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazol[4,5-d]-3-pyrimidyl}tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-

1,3-dioxoM~methanol;

{[3aa,4a,6a(lR*2S*),6aa]}-6-{7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidyl}tetrahydro-2,2-dnnethyl-4H-cyklopenta-1,3-dioxol-4-methanol;

[3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-amino-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2“dimethyMH-cyklopenta-l,3-dioxol-4-ol;

methylester kyseliny [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-amino-5-(propylthio)-3H-l ,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-ol]octové;

methylester kyseliny [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-{[6-(7-brom-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl)tetrahydro-2,2-dimethyWH-cyklopenta-l,3-dioxol-4-ol]-oxy}octové;

methylester kyseliny [3aR-(3aoc,4a,6a(lR*,2S*),6aa)]-{[6-[7-([2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl]amino)-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl^lH-cyklopenta-1,3-dioxol^4-yl]oxy} octové;

[3 aR-(3 aa,4a,6a( 1R* ,2 S *),6aa)]- {6—[(7—[2—(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl] amino-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl)tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-yl]oxy} ethanol;

[3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-amino-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyMH-cyklopenta-l,3dioxol^l-methanol;

[3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-amino-5-(propylsulfonyl)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4—methanol;

[3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-amino-5-(butylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-methanol;

octan [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-amino-5-(butylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-methanolu;

octan [3aR-(3aa,4a,6a,6aa)]-6-[7-brom-5-(butylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidmyl]tetrahydro-2,2-dimethyl~4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-methanolu;

octan [3aR-(3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa)]-6-[5-(butylthio)-7-[(2-(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3dioxol-4-methanolu;

-31 CZ 295234 B6 [3aR-(3aa,4a,6a(lS*,2R*))]-6-{7-[((4-fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-

1.2.3- triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol^l-ol;

[3aR-(3aa,4a,6a(lS*,2R*))]-6-{7-[((4-fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylsulfonyl)3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-di-oxol4-ol;

[3 aR-(3 aa,4a, 6α( 1S * ,2R*))]-6-{7-[((4-fluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(butylthio)-3H-

1.2.3- triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-ol;

[ 1 S-( 1 α,2a, 3 β( 1S * ,2R*))5 β]-3- { 7-[2-((3,4—difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylsulfonyl)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl}-5-(2-hydroxyethoxy)-cyklopentan-l,2-diol;

ethylester kyseliny (1 S-cis)-2-{[4-[(6-chlor-5-nitro-2-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-4-pyrimidinyl)amino]-2-cyklopenten-l-yl]oxy}octové;

ethylester kyseliny (1 S-cis)-2-{[4-[(7-chlor-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidyl]-2-cyklopenten-l-yl]oxy}octové;

ethylester kyseliny (1 S-cis)-2- {[4-[(7-amino-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l ,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidyl]-2-cyklopenten-l-yl]oxy}octové;

(1 S-cis)-2- {[4-[(7-amino-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-1,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]-2-cyklopenten-l-yl]oxy}-l-ethanol;

[3aR-(3aa,4a,6a]-2-{6-[7-amino-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-yloxy}ethanol;

{3aR-[3aa,4a,6a,6aa]}-2-{6-[7-brom-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazolo[4,5d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4—yloxy}ethanol;

{3aR-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa]}-2-{[[6-(7-fenylcyklopropyl)amino]-5-[(3,3,3-trifluorpropyl)thio]-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-l,3-dioxol4-yloxy}ethanol;

{3aR-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa]}-6-{[7-[(3,4-difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl}tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxoM—ol;

{3aR-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa]}-6-{[7-[(3,4—difluorfenyl)cyklopropyl)amino]-5-(propylsulfonyl)-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl}tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-

1.3- dioxol-4-ol;

{3aR-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa]}-6-[5-(butylthio)-7-[(2-(3,4-difluorfenyl)-cyklopropyl)amino]-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3dioxol-4-ol;

fenylmethylester kyseliny {3aS-[3aa,4a,6a,6aa]}-[tetrahydro-6-hydroxy-2,2-dimethyl-4Hcyklopenta-l,3-dioxoM—yl]karbamové;

fenylmethylester kyseliny {3aS-[3aa,4a,6a,6aa]}-[2,2-dimethyl-6-(2-hydroxyethoxy)tetrahydro-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-yl]karbamové;

-32CZ 295234 B6 {3 aR-[3 aa,4a,6a,6aa] }-2- {[6-amino-2,2-dimethyltetrahydro-4H-cyklopenta-l ,3-dioxol-4yljoxy} ethanol;

2-(butylthio)-4,6-dichlorpyrimidin-5-amin;

{3aR-[3aa,4a,6a,6aa]}-2-{[6-[(5amino-2-(butylthio)-6-chlor-4-pyrimidinyl)amino]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l ,3-dioxol-4-yl]oxy} ethanol;

{3aR-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa]}-2-{[6-[(5-(butylthio)-7-chlor-3H-l,2,3-triazolo[4,5-d]-3pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4-yl]oxy} ethanol;

{3aR-[3aa,4a,6a(lR*,2S*),6aa]}-2-{6-[(5-(butylthio)-7-[2-fenylcyklopropyl]amino-3H- l,2,3-triazolo[4,5-d]-3-pyrimidinyl]tetrahydro-2,2-dimethyl—4H-cyklopenta-l,3-dioxol-4yl]oxy} ethanol.

19. Sloučenina obecného vzorce II kde

R, R¹, R³ a R⁴ mají význam definovaný v nároku 1, nebo jde o jejich chráněné deriváty, nebo

R³ a R⁴ vytváří společně vazbu v pětičlenném kruhu, nebo

L je odstupující skupina.