CZ291098B6 - Cytostatika modifikovaná uhlohydráty, léčiva tyto látky obsahující a jejich pouľití - Google Patents

Cytostatika modifikovaná uhlohydráty, léčiva tyto látky obsahující a jejich pouľití Download PDF

Info

Publication number
CZ291098B6
CZ291098B6 CZ19973143A CZ314397A CZ291098B6 CZ 291098 B6 CZ291098 B6 CZ 291098B6 CZ 19973143 A CZ19973143 A CZ 19973143A CZ 314397 A CZ314397 A CZ 314397A CZ 291098 B6 CZ291098 B6 CZ 291098B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
group
methanol
mmol
tlc
methyl
Prior art date
Application number
CZ19973143A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ314397A3 (cs
Inventor
Hans-Georg Lerchen
Dem Bruch Karsten Von
Uwe Petersen
Jörg Baumgarten
Norbert Piel
Horst Peter Antonicek
Walter Weichel
Michael Sperzel
Klaus Dieter Bremm
Original Assignee
Bayer Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Aktiengesellschaft filed Critical Bayer Aktiengesellschaft
Publication of CZ314397A3 publication Critical patent/CZ314397A3/cs
Publication of CZ291098B6 publication Critical patent/CZ291098B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/02—Halogenated hydrocarbons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

e en se t²k cytostatik, kter jsou modifikac s uhlohydr ty n dorov specifick . Vhodn² spacer zaru uje s rovou stabilitu a sou asn intracelul rn · inek. Novou modifikac cytostatik byla nalezena p°ekvapiv nov t° da konjug t , kter jsou p°i spojen uhlohydr t s cytostatiky s rov stabiln . Slou eniny podle p°edlo en ho °e en je mo no popsat pomoc n sleduj c ho obecn ho vzorce I K-Sp-L-AA1-AA2-C (I), ve kter m maj substituenty v²znamy uveden v popisn sti. D le se °e en t²k l iv, obsahuj c ch uveden slou eniny a jejich pou it pro v²robu l iv.\

Description

Oblast techniky
Vynález se týká cytostatik, která jsou modifikací s uhlohydráty nádorově specifická. Vhodný spacer zaručuje sérovou stabilitu a současně intracelulámí účinek.
Dosavadní stav techniky
Chemoterapie nádorových onemocnění je doprovázena většinou závažnými vedlejšími účinky, způsobenými toxicitou chemoterapeutik na proliferující buňky jiných tkání. Již mnoho let se zabývají vědci problémem zlepšení selektivity používaných účinných látek. Vícekrát používaným krokem je syntéza prodrugu, který je více nebo méně selektivně uvolňován v cílové tkáni, například změnou hodnoty pH (Tietze a kol., například DE-4 229 903), působením enzymů (například lukoronidáz; Jacquesy a kol., EP-511 917; Bosselt a kol., EP-595 133) nebo působením konjugátů protilátka-enzym (Bagshawe a kol., WO 88/07378; Senter a kol., US-PS 4 975 278; Bosslet a kol., EP-595 133). Problematická je při těchto aplikacích mimo jiné stabilita konjugátů v jiných tkáních a orgánech a obzvláště ubiquitámí rozdělení účinné látky, které navazuje na extracelulámí uvolňování účinné láky ve tkáni nádoru.
Význačný lektinový vzorek na povrchu nádorových buněk (Gabius; Onkologie 12, (1989), 175) otevírá principiální možnost adresovat tyto cíleně na nádorové buňky připojením korespondujících uhlohydrátových stavebních prvků na tato cytostatika. Tato perspektiva je omezena tím, že se také v jiných tkáních, obzvláště v játrech, vyskytují lektiny s podobnými uhlohydrátovými specifítami (galaktóza, laktóza, mannóza, N-acetyl-glukosamin, fruktóza a podobně) (Ashwell a kol., Annu. Rew. Biochem. 46 (1982), 531; Stáhl a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 74 (1977), 1521; Hill a kol., J. Biol. Chem. 262 (1986), 7433; Jansen a kol., J. Biol. Chem. 266 (1991), 3343). Vzhledem ktomu se musí počítat se značným obohacením účinnou látku obsahujících glykokonjugátů v játrech a jiných na lektin bohatých orgánech, když se použijí takovéto nemodifikované cukry.
Heterocyklický amin batracylin vzorce 1
vykazuje v různých modelech rakoviny střeva dobrý protinádorový účinek (US-PS 4 757 072).
Peptidové konjugáty sloučeniny vzorce 1 s dobrým účinkem in-vitro a se zlepšenou rozpustností (US 4 180 343) jsou při pokusech na zvířatech hůře snášenlivé než batracylin. Konjugáty s fruktózou, popsané v EP 501 250, se obohacují velmi silně v játrech.
Chinolin-a vzorce 2- kyselina 7[(3aRS,4RS,7aSR)-4-amino-l,3,3a,4,7,7a-hexahydro-izoindol-2-yl]-8-chlor-l-cyklopropyl-6-fluor-l,4-dihydro-4-oxo-3-chinolinkarboxylová
-1 CZ 291098 B6
(2) (Chinolon-a) vykazuje podle své výrazné antibakteriální aktivity také velmi dobrou účinnost vůči různým nádorovým buněčným liniím (EP 520 240, JP 4 253 973). Tomu jsou však na překážku značné toxikologické problémy, například genotoxicita, toxicita pro kostní dřeň, vysoká akutní toxicita in vivo a podobně.
Podstata vynálezu
Novou modifikací cytostatik byla nalezena překvapivě nová třída konjugátů, které se vyznačují následujícími vlastnostmi: Nové spojení uhlohydrátů s cytostatiky (například batracylinem a chinolonem-a) vede ke glykokonjugátům, které jsou sérově stabilní. Účinek nezávisí na extracelulámím uvolňování účinné látky. Aktivity in-vitro vůči různým nádorovým buněčným liniím jsou srovnatelné s odpovídajícími cytostatiky. Buněčně specifický příjem je závislý na uhlohydrátu.
Regioselektivní modifikaci v uhlohydrátové části popisovaných konjugátů se podstatně zlepší buněčná a tkáňová selektivita (obzvláště nádor ku játrům).
In vivo se vyznačují konjugáty podle předloženého vynálezu podstatně zlepšenou snášenlivostí ve srovnání s odpovídající účinnou látkou a odpovídajícími peptidovými konjugáty.
Kromě toho vykazují konjugáty podle předloženého vynálezu ve srovnání s odpovídajícími cytostatiky podstatně zlepšené vlastnosti při rozpuštění.
Předmětem předloženého vynálezu jsou uhlohydráty modifikovaná cytostatika obecného vzorce I
K-Sp-L-AAl-AA2-C (I) ve kterém
K značí uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II
*3 (II).
ve kterém
A značí methylovou skupinu, hydroxymethylovou skupinu, karboxyskupinu, alkoxymethylovou skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v alkoxylu, acyloxymethylovou skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v acyloxylu nebo karboxyalkyloxymethylovou skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v alkyloxylu; nebo může značit také skupinu CH2-B, přičemž B může být opět uhlohydrátový zbjtek obecného vzorce II, připojený přes anomemí centrum,
R2, R3 a R4 mohou být stejné nebo různé a značí vodíkový atom, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atom}·, karboxyalkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v alkoxylu, hydroxyalkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, aminoalkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, acyloxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy , karboxyalkylkarbonvloxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v alkylu, sulfátovou skupinu, fosfátovou skupinu, atom halogenu nebo další stejně modifikovaný a přes anomemí centrum připojený uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II, přičemž R2 může značit dodatečně také aminoskupinu nebo acylaminoskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, nebo dva ze zbytků R2, R3, R4 mohou také společně značit epoxyskupinu,
Sp značí arylenový zbytek se 6 až 10 uhlíkovými atomy, který je modifikován v ortho-, metanebo para-poloze s K a L a kromě toho může nést ještě 1 až 4 další substituenty, které mohou být stejné nebo různé a značí vodíkový atom, methylovou skupinu, methoxyskupinu, hydroxyskupinu, karboxyskupinu, methyloxykarbonylovou skupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, atom halogenu, sulfonylovou skupinou nebo sulfonamidovou skupinu, nebo může také značit lineární nebo rozvětvený alkylenový zbytek s 1 až 6 uhlíkovými atomy,
L značí skupinu
R přičemž R značí atom chloru nebo hydroxyalkylaminoskupinu,
AA1 značí zbytek aminokyseliny, odvozený od lysinu, alaninu, kyseliny asparagové, kyseliny glutamové, glycinu, omithinu, tyrosinu, valinu nebo šeřinu, v D- nebo L-konfíguraci, který je popřípadě spojen s další skupinou Κ-Sp-L-, ve které K, Sp a L mají významy uvedené výše, nebo značí vazbu,
AA2 značí aminokyselinový zbytek, odvozený od lysinu, alaninu, glycinu, omithinu, kyseliny diaminopropionové nebo šeřinu, v D- nebo L-konfíguraci, který je popřípadě spojen s další skupinou Κ-Sp-L-, ve které K, Sp a L mají významy uvedené výše, nebo značí vazbu, a
C značí cytotoxický zbytek nebo zbytek cytostatika nebo derivátu cytostatika, který může nést dodatečně aminoskupinu nebo hydroxyskupinu a jejich izomery a fyziologicky neškodné soli.
Strukturní prvek -Sp-L-AA1-AA2- dohromady představuje spacer, který spojuje K. a C.
Výhodná jsou uhlohydráty modifikovaná cytostatika obecného vzorce I, ve kterém
-3CZ 291098 B6
C značí nukleosid, endiin-antibiotikum, cytotoxické peptidové antibiotikum, kyselinu chinolonkarboxylovou nebo kyselinu nafthyridonkarboxylovou batracylin, 5-fluorouracil, cytosinarabinosid, methotrexat, etoposid, camptothecin, daunomycin, doxorubicin, taxol, vinblastin, vincristin, dynemicin, calicheamycin, esperamycin, quercetin, suramin, erbstatin, cyclophosphamid, mitomycin C, melphalan, cisplatin, bleomycin, staurosporin nebo jiné antineoplasticky aktivní účinné látky, a K, L, AA1, AA2 a Sp mají výše uvedený význam, a jejich izomery a fyziologicky neškodné soli.
Stereochemie na anomemím centru uhlohydrátového stavebního prvku může být a nebo β. Stereochemií na jiných centrech se může získat glukokonfígurace, mannokonfigurace, galaktokonfigurace, gulokonfígurace, rhamnokonfigurace nebo fruktokonfígurace.
Dále jsou výhodná uhlohydráty modifikovaná cytostatika obecného vzorce I, ve kterém
C značí zbytek obecného vzorce III
nebo
přičemž
Ra značí popřípadě halogenem nebo hydroxyskupinou jednou nebo dvakrát substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, vinylovou skupinu, popřípadě jedním nebo dvěma atomy fluoru substituovanou cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 uhlíkovými atomy, bicyklo[l.l.l]pent-l-ylovou skupinu, 1,1-dimethylpropargylovou skupinu, 3-oxetanylovou skupinu, methoxyskupinu, aminoskupinu, methylaminoskupinu, dimethylaminoskupinu, popřípadě halogenem, aminoskupinou nebo hydroxyskupinou jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu, nebo může také společně s Re tvořit také tam popsaný můstek.
-4CZ 291098 B6
Rb značí hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo nitromethylovou skupinu,
Rc značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo také může s Rs tvořit tam popsaný můstek,
Rd značí vodíkový atom, methylovou skupinu, fluormethylovou skupinu nebo methylenovou skupinu,
X1 značí vodíkový atom, atom halogenu nebo nitroskupinu,
X2 značí vodíkový atom, atom halogenu, aminoskupinu, hydroxyskupinu, methoxyskupinu, merkaptoskupinu, methylovou skupinu, halogenmethylovou skupinu nebo vinylovou skupinu,
Y značí dusíkový atom nebo skupinu C-Re, přičemž
Re značí vodíkový atom, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu, methylovou skupinu, kyanoskupinu, ethylenovou skupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s Ra mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2-CH-CH3 , -*S-CH2CH2- , -*S-CHr-CH-CH3 , -*CH2-CH2-CH-CH3 nebo -*O-CH2-N-Rf, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem Y a přičemž
Rf značí vodíkový atom, methylovou skupinu nebo formylovou skupinu a
D značí dusíkový atom nebo skupinu C-Rs, přičemž
R® značí vodíkový atom, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně s Rc mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2-, -♦NH-CHt-, -*N(CH3)-CH2, -*N(C3H5)-CH2nebo -*S-CH2-, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D, n značí číslo 1, 2 nebo 3 a
T značí zbytek vzorce přičemž
Rh značí skupiny O-, -N-Rk, CHr-O- nebo
CH2-N-R , přičemž
Rk značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a
-5CZ 291098 B6
R' značí vodíkový atom, alkylovou skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo cyklopropylovou skupinu, a K, L, AA1, AA2 a Sp mají výše uvedený význam, a jejich izomery' a fyziologicky neškodné soli.
Obzvláště výhodná jsou uhlohydráty modifikovaná cytostatika obecného vzorce I, ve kterém
Q značí zbytek vzorce
přičemž
Ra značí popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou alkylovou skupinu se 2 až 4 uhlíkovými atomy, popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou cyklopropylovou skupinu nebo popřípadě fluorem jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu, nebo společně s Re může tvořit tam popsaný můstek,
Rb značí hydroxyskupinu nebo alkoxyskupinu s 1 až 2 uhlíkovými atomy,
Rc značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo může společně s Rg tvořit tam popsaný můstek,
X1 značí atom fluoru,
X2 značí vodíkový atom nebo aminoskupinu,
Y značí dusíkový atom nebo skupinu C-Re, přičemž
Re značí vodíkový atom, atom fluoru nebo chloru, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s Ra mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2-CH-CH3 nebo -*O-CH2-N-Rf, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem Y a přičemž
Rf značí methylovou skupinu a
D značí dusíkový atom nebo skupinu C-R8, přičemž
Rg značí vodíkový atom, atom fluoru nebo chloru, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně s Rc mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2-, -*NH-CH2-, -*N(CH3)-CH2 nebo -*S-CH2-, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D a
-6CZ 291098 B6
T značí zbytek vzorce
přičemž
Rh značí -N-Rk , skupinu, přičemž
Rk značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a
R1 značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a jejich izomery a fyziologicky neškodné soli.
Jako edukty použité stavební prvky C, kyselina chinolonkarboxylová a kyselina nafthyridonkarboxylová, se dají znázornit obecnou strukturou vzorce III
nebo
přičemž
Ra značí popřípadě halogenem nebo hydroxyskupinou jednou nebo dvakrát substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, vinylovou skupinu, popřípadě jedním nebo dvěma atomy fluoru substituovanou cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 uhlíkovými atomy, bicyklo[l.l.l]pent-l-ylovou skupinu, 1,1-dimethylpropargylovou skupinu, 3-oxetanylovou skupinu, methoxyskupinu, aminoskupinu, methylaminoskupinu, dimethylaminoskupinu, popřípadě halogenem, aminoskupinou nebo hydroxyskupinou jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu, nebo může také společně s Re tvořit také tam popsaný můstek,
Rb značí hydroxyskupinu. alkoxyskupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo nitromethylovou skupinu,
Rc značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo také může s Rs tvořit tam popsaný můstek,
Rd značí vodíkový atom, methylovou skupinu, fluormethylovou skupinu nebo methylenovou skupinu,
X1 značí vodíkový· atom, atom halogenu nebo nitroskupinu,
X2 značí vodíkový atom, atom halogenu, aminoskupinu, hydroxyskupinu, methoxyskupinu, merkaptoskupinu, methylovou skupinu, halogenmethylovou skupinu nebo vinylovou skupinu,
Y značí dusíkový' atom nebo skupinu C-Re, přičemž
Re značí vodíkový' atom, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu, methylovou skupinu, kyanoskupinu, ethylenovou skupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s Ra mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2-CH-CH3 , -*S-CH2CH2- , -*S-CH2-CH-CH3 ,
-*CH2-CH2-CH-CH3 nebo -*O-CH2-N-Rf, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem Y a přičemž
Rf značí vodíkový atom, methylovou skupinu nebo formylovou skupinu a
D značí dusíkový atom nebo skupinu C-R8, přičemž
Rg značí vodíkový atom, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně sR‘ mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2-, -*NH-CHr-, -*N(CH3)-CH2, -*N(C3H5)-CH2- nebo -*S-CH2-, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D, n značí číslo 1,2 nebo 3 a
přičemž
Rh značí skupin -O-, , -CH2-O-nebo
-8CZ 291098 B6
-CH2-N-Rk přičemž
Rk značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a
R‘ značí vodíkový atom, alkylovou skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo cyklopropylovou skupinu.
Obzvláště výhodné jako cytostatika jsou sloučeniny obecného vzorce III, ve kterém
Q značí zbytek vzorce
přičemž
Ra značí popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou alkylovou skupinu se 2 až 4 uhlíkovými atomy, popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou cyklopropylovou skupinu nebo popřípadě fluorem jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu,
Rb značí hydroxyskupinu nebo alkoxyskupinu s 1 až 2 uhlíkovými atomy,
Rc značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo může společně s R8 tvořit tam popsaný můstek,
X1 značí atom fluoru,
X2 značí vodíkový atom nebo aminoskupinu,
Y značí dusíkový atom nebo skupinu C-Re, přičemž
Re značí vodíkový atom, atom fluoru nebo chloru, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s Ra mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2-CH-CH3 nebo -*O-CH2-N-Rf, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem Y a přičemž
Rf značí methylovou skupinu a
D značí dusíkový atom nebo skupinu C-R8, přičemž
-9CZ 291098 B6
R8 značí vodíkový atom, atom fluoru nebo chloru, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně s Rc mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2- , -*NH-CH2- , -*N(CH3)-CH2 nebo -*S-CH2přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D a
T značí zbytek vzorce
přičemž
Rh značí -N-R^ skupina přičemž
Rk značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu.
Rovněž obzvláště výhodné jsou glykokonjugáty s camptothecinem nebo jeho deriváty.
Obzvláštní význam mají dále sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém značí K, Sp a L vodíkový atom a C značí camptothecin. Tyto látky jsou nové, mohou se jako meziprodukty nechat reagovat na další deriváty sloučenin obecného vzorce I a vykazují samy již zajímavé spektrum farmaceutického účinku, obzvláště jako cytostatika.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu se mohou vyskytovat ve stereoizomemích formách, například jako enantiomery nebo diastereomery nebo jako jejich směsi, například jako racemát. Vynález se týká jak čistých stereoizomerů, tak také jejich směsí.
Směsi stereoizomerů se mohou, pokud je to potřebné, dělit pomocí známých způsobů na stereoizomemě jednotné součásti, například chromatografií nebo krystalizačními postupy.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu se mohou vyskytovat také ve formě svých směsí. Všeobecně je zde možno uvést soli s organickými nebo anorganickými bázemi nebo kyselinami, jakož i inertní soli.
Ke kyselinám, které se mohou adovat, patří výhodně halogenovodíkové kyseliny, jako je například kyselina chlorovodíková a kyselina bromovodíková, obzvláště kyselina chlorovodíková, dále kyselina fosforečná, kyselina dusičná, kyselina sírová, monofunkční a bifunkční karboxylové kyseliny a hydroxykarboxylové kyseliny, jako je například kyselina octová, kyselina maleinová, kyselina malonová, kyselina šťavelová, kyselina glukonová, kyselina jantarová, kyselina fumarová, kyselina vinná, kyselina citrónová, kyselina salicylová, kyselina sorbová a kyselina mléčná, jakož i kyseliny sulfonové, jako je například kyselina p-toluensulfonová, kyselina 1,5-naftalendisulfonová nebo kyselina camfersulfonová.
Fyziologicky neškodné soli mohou být stejně tak kovové jako amoniové soli sloučenin podle předloženého vynálezu, které mají volné karboxylové skupiny. Obzvláště výhodné jsou například sodné, draselné, hořečnaté nebo vápenaté soli, jakož i soli amoniové, které jsou odvozené od
-10CZ 291098 B6 amoniaku nebo organických aminů, jako je například ethylamin, diethylamin, triethylamin, diethanolamin, triethanolamin, dicyklohexylamin, dimethylaminoethanol, arginin, lysin, ethylendiamin nebo fenethylamin.
Příklady provedení vynálezu
Série A: Biologické testy
Příklad A. 1
Test inhibice růstu pro stanovení cytotoxických vlastností glykokonjugátů batracylinu a chinolonu-a
Buněčné linie lidského tlustého střeva SW 480 a HT 29 (ATCC-Nr. CCL 228 a HBT-38), jakož i buněčná linie myšího melanomu B 16 F 10 se dají do misek roux do RPMI 1640 média za přídavku 10 % FCS. Potom se trypsinují a v RPMI plus 10 % FCS se nastaví počet buněk na 50 000 buněk/ml. 100 μΐ suspenze buněk se dá do mikrotitrační destičky s 96 miskami a inkubuje se po dobu jednoho dne při teplotě 37 °C v atmosféře oxidu uhličitého v pomnožovací komoře. Potom se přidá dalších 100 μΐ RPMI média a 1 μΐ DMSO se zkoušenou látkou. Růst se kontroluje po třetím a šestém dnu. K tomu se ke každé mikromisce přidá 40 μΐ roztoku MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolinbromid] s výchozí koncentrací 5 mg/ml H2O. Inkubuje se po dobu 5 hodin v atmosféře oxidu uhličitého v pomnožovací komoře. Potom se médium odsaje a přidá se 100 μ! izopropylalkoholu na jednu misku. Po třicetiminutovém třepání se 100 μΐ vody se měří extinkce při 540 nm za použití Titertek Multiskan MCC/340 (Flow).
Cytotoxický účinek popsaných glykokonjugátů batracylinu je uveden v tabulce 1 a jako hodnota IC50 pro buněčné linie SW 480 a HT 29.
V tabulce lb jsou shrnuty hodnoty IC50 pro glykokonjugáty chinolonu-a na buněčných liniích SW480, HT29aB 16 F 10.
Tabulka la
látka IC 50 [μΜ] SW 480 IC 50 [μΜ] HT29
Batracylin 25 20
3.2 100 75
3.4 100 65
3.7 55 ng·
3.9 40 55
3.10 100 125
3.11 85 n.g.
3.14 40 _
3.18 15 n.g.
3.19 75 _
3.20 100 _
3.21 90 L&
3.23 50 n.g.
3.24 95 _
3.26 50 _
3.27 110 _
-11 CZ 291098 B6
Tabulka la - pokračování
látka IC 50 [μΜ] SW 480 IC 50 [μΜ] HT 29
3.28 60 n.g.
3.29 110 n.g.
3.30 >250 n.g.
3.33 90 70
4.1 25 30
4.3 20 20
4.4 30 25
4.5 15 15
4.6 10 10
4.7 15 15
4.8 50 40
4.9 20 30
4.10 30 30
4.11 15 15
4.12 15 9
5.1 55 45
5.2 20 55
5.6 >250 n.g.
5.8 100 >250
5.9 70 70
5.12 20 20
5.13 20 40
5.14 20 30
5.15 >250 70
5.19 35 25
5.20 50 30
5.21 60 80
5.22 30 40
5.23 25 35
6.2 40 50
6.3 70 105
6.7 60 >250
6.10 50 50
6.12 35 50
6.15 >250 >250
6.20 80 n.g.
6.21 150 n.g.
6.23 107 45
6.25 50 40
6.28 40 25
6.29 95 130
6.30 60 70
6.32 50 60
6.34 50 n.g.
6.35 20 n.g.
6.36 70 70
6.40 170 60
6.43 90 80
6.46 120 100
-12CZ 291098 B6
Tabulka la - pokračování
látka IC 50 [μΜ] SW480 IC 50 [μΜ] HT 29
6.59 50 50
6.60 50 40
6.80 40 25
6.81 30 30
6.82 125 n.g.
6.83 90 n.g.
6.85 22 n.g.
7.1 40 40
7.2 40 30
7.3 50 n.g.
7.5 80 n.g.
7.7 100 >250
7.8 40 30
7.11 30 25
7.12 10 10
8.10 70 n.g.
8.11 45 n.g.
8.12 30 BJL
-13CZ 291098 B6
Tabulka lb
látka IC 50 [μΜ] SW480 IC 50 [μΜ] HT 29 IC 50 [μΜ] B 16F 10
10.1 50 >250 15
10.2 4 3 5
10.3 5 4 0,7
11.2 30 n.g. 9
11.6 8 9 5
11.7 12 13 15
11.8 12 16 15
11.9 12 12 9
11.10 8 20 2
11.16 10 10 1,5
11.17 75 75 8
11.18 4,5 3,5 0,5
12.1 1 1,5 0,1
12.2 4 n.d. 0,8
12.3 2 n.d. 0,3
12.5 1 4 0,2
12.6 4 7 0,3
12.7 60 >250 20
12.8 8 7 1
12.9 4 8 2
12.10 15 15 4
12.11 2 2 0,5
12.12 8 13 0,5
12.13 35 100 1
12.14 1 2 0,3
12.15 0,3 1 0,1
14.1 0,8 1 1,5
14.2 1 6 1,5
14.3 8 4 4
14.4 1,5 1 0,4
15.1 20 20 2
15.2 50 70 15
16.1 50 100 200
16.2 50 60 80
17.1 10 5 5
17.2 4 4 4
18.1 0,03 0,01 0,2
18.2 0,02 0,02 0,2
18.4 0,02 0,02 0,3
18.5 0,2 0,2 1
18.9 0,08 0,06 0,7
18.14 0,015 0,01 0,08
Závislost biologického účinku na uhlohydrátu je dodatečně doložena neúčinností srovnávacích 5 sloučenin bez uhlohydrátu podle příkladů 5, 6 a 11, totiž
- 14CZ 291098 B6
N-[Nalfa,Neps,l°n-bis-(4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl)-lysyl]-batracylinu, N-[Nalfa,Nepsil°n-bis-(4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylinu a N-[Nalfa,Nepsilon-bis-(4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl)-D-lysyl-chinolonu-a (hodnoty IC5O>250).
Příklad A.2
Zkouška in-vitro štěpitelnosti glykokonjugátů
Kinetika štěpení s lidskou krví
1,225 ml lidské krve se inkubuje s 1,25 ml PBS a 25 μΐ základního roztoku substrátu (1 mg/ml ve 3% DMSO v PBS) při teplotě 37 °C. Po jedné hodině a 24 hodinách se odeberou vzorky 1 ml, smísí se s 1 ml ethylalkoholu a nechají se stát po dobu 20 minut při teplotě 4 °C. Po centrifugaci (5 minut při 3 500 otáčkách za minutu) se odebere 100 μΐ kapaliny pro HPLC-analýzu.
Kinetika štěpení s buňkami
2,25 ml PBS se inkubuje společně se 225 μΐ buněčné suspenze (30 mg/ml) a 25 μΐ základní roztoku substrátu (1 mg/ml ve 3% DMSO v PBS) při teplotě 37 °C. Po jedné hodině a 24 hodinách se odeberou vzorky 1 ml, smísí se s 1 ml ethylalkoholu a nechají se stát po dobu 20 minut při teplotě 4 °C. Po centrifugaci (5 minut při 3 500 otáčkách za minutu) se odebere 100 μΐ kapaliny pro HPLC-analýzu.
Podmínky HPLC
Přístroj: zařízení Waters sloupec: Bischoff Hypersil OCS RP 18 5 pm 250x4 mm eluent: A : 10 mM kaliumfosfátového pufru pH 4,5
B : 80 % aceton itri 1/20 % voda
tok: 1 ml/min
vlnová délka: 372 nm
gradient: 0 min 10 %B
10 min 60 % B
15 min 60 % B
18 min 10 %B
20 min 60 % B
Eluent pro konjugáty chinolonu-a:
A: 100 % methylalkohol
B: 10 mM kaliumfosfátový pufr pH 2,2 mM kyselina heptansulfonová
-15CZ 291098 B6
Tabulka 2a
Př. % štěpení v lidské krvi % štěpení v SW-480 % štěpení v hepatoma
1 h 24 h 1 h 24 h 1 h 24 h
3,4 n.d. n.d. 74* n.d. 98* n.d.
3,9 0 54* 28* 100* 32* 100*
4,4 0 0 0 0 0 0
5,9 0 0 0 0 0 0
6,2 n.d. n.d. 0 0 0 0
6,12 n.d. n.d. 0 0 0 0
7,3 0 0 0 0 0 0
* produkt štěpení je N-[D-alanyl]-batracylin
Tabulka 2b
Př. % štěpení v lidské krvi % štěpení v SW-480 % štěpení v hepatoma
1 h 24 h 1 h 24 h 1 h 24 h
11,2 0 0 0 0 0 0
11,6 0 11% 0 8% 0 12%
11,7 0 0 0 0 0 0
12,1 0 0 0 0 0 0
12,3 0 0 0 0 0 0
12,8 0 0 0 0 0 0
Příklad A.3
Zkouška rozptýlení v orgánech
Pro všechny experimenty se používají athymické lysé myši (kmen NMRI nu/nu), které byly vypěstovány v „Drug Development Laboratory, Oncotest GmbH“ prof. Η. H. Fiebigem, Freiburg. Zvířata byla udržována v macrolonových klecích za podmínek laminar flow. Jako nádorový materiál se použije tkáň buněčné linie SW 480, která byla předem zpracována v několika pasážích v lysých myších.
až 8 týdnů starým lysým myším se pro každé zvíře implantují dva nádory subkutánně do obou slabin. Až do okamžiku randomisace se zvířata ponechají 26 až 27 dnů. Střední velikost nádoru je potom 500 mg, což odpovídá průměru nádoru asi 10 mm.
Farmakokinetika samotná probíhá následujícím způsobem:
Lysým myším se injikuje zkoušená substance a myši se potom až do odběru vzorků po 1/2 h, popřípadě po 4 h umístí do klece. Odběr vzorku samotný začíná odběrem krve. K tomu se myši umrtví pomocí etheru pro narkózu (doba 1/2 až 1 minuta). 0,5 h, popřípadě 4 h po injekci substance se otevře břišní otvor a myš se v narkóze zbaví krve přes véna cava caudalis během 1 až 2 minut, načež se usmrtí zlomením vazu. Tím dochází ke klidovému stavu centrálního oběhu a k zastavení perfúze orgánů. Potom se odpreparují a vyjmou jednotlivé orgány, což je postup, který zabere asi 5 minut. Ihned potom se vzorky orgánů a potom zbylé tělo zváží a zmrazí se v kapalném dusíku.
-16CZ 291098 B6
Substance „konjugát 1“ se aplikuje v dávce 300 mg/kg tělesné hmotnosti i.p. a substance „konjugát 2“ se aplikuje v dávce 100 mg/kg tělesné hmotnosti i.v. do ocasní tepny. Pro každou substanci a časový úsek se použije vždy 5 zvířat.
Souhrn výsledků pro konjugát 1 je uveden v tabulce 3 a pro konjugát 2 v tabulce 4.
A. Kalibrační řada:
5, 10, 50, 100 a 200 pg substance, rozpuštěných ve směsi ethylalkoholu a vody (1:1 v/v), se přidá k 1 g hovězích jater, načež se směs rozetře s 1 g mořského písku a 2,5 ml ochlazené směsi ethylalkoholu a vody (1:1 v/v) a vzorky se odstředí po dobu 2 minut při 3 500 otáčkách za minutu. Po odebrání kapaliny se zbytek znovu rozmíchá se 2,5 ml směsi ethylalkoholu a vody, odstředí se a kapaliny se spojí. Potom se odebere 100 μΐ a analyzuje se pomocí HPLC.
Podmínky HPLC:
Přístroj: zařízení Waters
sloupec: Bischoff Hypersil ODS RP18 5 pm 250x4 mm
eluent: A : 80 % acetonitril, 20 % voda
B : 10 mM kaliumfosfátového pufru pH 4,5
gradient: 0 min 90 % B
10 min 40 % B
15 min 40 % B
18 min 90 % B
20 min 90 % B
tok 1 ml/min
vlnová délka: 372 nm
B. Zpracování orgánů
Zpracování orgánů se provádí analogicky jako je popsáno v odstavci A., přičemž se všechny orgány zpracují se 2,5 ml směsi ethylalkoholu a vody a extrahují se.
C. Zpracování krve
Odebrané množství krve se smísí se 2 ml směsi ethylalkoholu a vody (1:1, v/v), odstředí se po dobu 2 minut při 3 500 otáčkách za minutu a kapalina se oddekantuje. Ke zbytku se znovu přidají 2 ml směsi ethylalkoholu a vody (1:1, v/v), odstředí se a kapaliny se spojí. 100 μΐ těchto spojených kapalin se analyzuje pomocí HPLC za podmínek, používaných v odstavci A.
Konjugát 1 (EP 501 250-A1)
-17CZ 291098 B6
Konjugát 2 (příklad 3.9)
O
S
Tabulka 3
vyhodnocení vzorků orgánů
orgán látka střední hodnota 1 h (pg/g orgán) střední hodnota 4 h (pg/g orgán)
krev konjugát 1 31,2 -
batracylin - -
nádor konjugát 1 56,6 24,4
batracylin - -
játra konjugát 1 770 126
batracylin 34,1 22,4
ledviny konjugát 1 81 78,4
batracylin 26,1 27,5
mozek konjugát 1 - -
batracylin - -
Tabulka 4
vyhodnocení vzorků orgánů
orgán látka střední hodnota 0,5 h (pg/g orgán) střední hodnota 4 h (pg/g orgán)
krev konjugát 2 6,5 -
batracylin - -
nádor konjugát 2 2,0 -
batracylin 2,5 3,12
játra konjugát 2 0,9 1,2
batracylin - -
ledviny konjugát 2 17,5 0,5
batracylin 10,7 0,8
mozek konjugát 2 - -
batracylin - -
-18CZ 291098 B6
Příklad A.4
Stanovení akutní toxicity glykokonjugátů batracylinu (jednorázová aplikace)
Akutní toxicita derivátů batracylinu se stanovuje na nu/nu lysých myších.
Intravenózně aplikované substance se vstřikují jako vodné roztoky a intraperitoneálně aplikované substance se vstřikují jako DMSO-roztoky v koncentracích až 400 mg substance pro kg myši.
Tolerovaná jednorázová dávka se kalkuluje na základě úbytku hmotnosti zvířat až do 21. dne po aplikaci a podle počtu přežitých zvířat.
Tolerovatelné jednorázové dávky substancí jsou uvedené v tabulce 5.
Tyto tolerovatelné dávky jsou pro substance 3.16, 3.33, 3.9, 6.12, 6.14, 6.2, 6.81 a 8.2 přes 200 mg pro kg myši. U substancí 3.33, 6.12, 6.14, 6.2 a 6.81 nelze ještě při dávce 400 mg/kg prokázat žádnou akutní toxicitu.
Naproti tomu je cukru prostý lysyl-D-alanyl-batracylin (2.13) již při jednorázové dávce 25 a 50 mg/kg myši zřetelně toxický.
Tabulka 5
Maximálně tolerovatelné jednorázová dávka derivátů batracylinu a chinolonu-a
Př. tolerovaná jednorázová dávka v mg/kg myši
i.p. i.v.
2.13 50 25
3.4 200 <100 (2 zvířata zahynula)
3.9 200 200
3.16 >200 n.d.
3.33 n.g. >400
6.2 >400 n.g.
6.12 n.g. >400
6.14 >400 _
6.81 n.g. >400
8.2 >200 n.d.
Chinolon-a n.d. <25
12.3 n.d. >200
Příklad A.5
Stanovení akutní toxicity po vícenásobné aplikaci
Substance se aplikuje zčásti i.v. a zčásti i.p., buď ve dnech 1 až 4 a 7 až 10, nebo ve dnech 1, 5 a 9. Dávkování činí 400, 200 a 100 mg/kg/den. Vyhodnocení se provádí podle úbytku hmotnosti až do 21. dne a podle počtu přežívajících zvířat. Při pokusech se pro každou substanci a dávku použije 5 zvířat. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 6.
-19CZ 291098 B6
Tabulka 6
Maximálně tolerovatelná dávka při vícenásobné aplikaci
aplikace dávek za den MTD mg/kg'den
3.9 i.v. 1-4, 7-10 1-4 -50 -100
3.33 i. v. 1,5,9 >400
6.2 i.p. 1-4,7-10 1,5,9 -400 >400
6.12 i.v. 1-4,7-10 1,5,9 >400 >400
6.14 i.p. 1,5,9 >400
6.81 i.v. 1-4,7-10 1,5,9 -200 >400
Batracylin i.p. 1,5,9 -100
Příklad A.6
Hematopoetická aktivita glykokonjugátů chinolonu-a ve srovnání s odpovídající účinnou látkou
Materiál a metody in vitro:
Buňky kostní dřeně se spláchnou ze stehenní kosti myši. 105 buněk se inkubuje vMcCoy 5A-médiu (0,3 % agaru) společně s rekombinantním murinním GM-CSF (Genenzyme: tvorba kolonií základních buněk) a se substancemi (10*4 až 100 pg/ml) při teplotě 37 °C a 7 % CO2. Po 7 dnech se spočítají kolonie (> 50 buněk) a shluky (17 až 50 buněk).
in vivo:
Myši se subkutánně ošetří 1,3, 10 a 30 mg/kg substancí. V různých časových obdobích (3,24,48 a 72 hodin po injekci) se stehenní kost odstraní a izolují se buňky kostní dřeně, 2 x 105 buněk se inkubuje jak je popsáno výše s GM-CSF a po 7 dnech se spočítají kolonie a shluky.
Výsledky:
Jak je patrno z tabulky 7, vykazují zkoušené glykokonjugáty inhibici proliferace základních buněk kostní dřeně, sníženou ve srovnání s chinolonem-a o faktor 105 až 103.
Také in vivo se nepozoruje ve srovnání s chinolonem-a žádná inhibice proliferace základních buněk sloučeninou 12.3 až 30 mg/kg. Již se 3 mg/kg chinolonu-a se indukuje masivní suprese proliferace základních buněk.
-20CZ 291098 B6
Tabulka 7
CSF-indukovaná proliferace základních buněk kostní dřeně myší
Příklady Chinolin-a IC5o [pg/ml] 0,0002
11.2 22,5
11.7 2,9
12.1 0,21
12.3 0,27
12.6 0,3
12.8 0,3
14.1 2,9
14.2 3,6
14.4 3,6
Příklad A.7
Antineoplastická aktivita chinolon-a-konjugátů
In-vitro-aktivita glykokonjugátů chinolonu-a se stanovuje na lidském tumorxenograftu v systému dvouvrstvé kultury měkkého agaru podle Hamburgera a Salomona (Science 197: 461-463).
Solidní nádory se nejprve pasážují vathymických lysých myších (NMRI nu/nu), operativně se získají a mechanicky se rozmělní. Jednotlivé buňky se potom získají inkubací v enzymové směsi kollagenázy 0,05 %, DNA-ázy 0,07 % a hyaluronidázy 0,1 % v RPMI při teplotě 37 °C po dobu 30 minut. Buňky se dvakrát promyjí a potom se převedou přes síto se 200 pm a vzdálenosti ok 20 pm.
Použije se následující kultivační metoda:
Spodní vrstva obsahuje 0,2 ml Iscoves's Modified Dulbeccos Medium se 20 % fetálního telecího séra a 0,7 % agaru. Na tuto vrstvu se nanese ve 24 nádobkové plotně 40 000 až 200 000 buněk v 0,2 ml toho samého média a 0,4 % agaru. Cytostatické substance se přidávají v 0,2 ml média.
Kultury se inkubují při teplotě 37 °C v 7% atmosféře oxidu uhličitého po dobu 6 až 15 dnů. Potom se vzrostlé kolonie spočívají v invertmikroskopu, přičemž se 24 hodin před vyhodnocením vybarví žijící kolonie pomocí tetrazoliumchloridového barviva.
Efekt účinné látky se vyjadřuje v procentech přežívajících kolonií ve srovnání s počtem kolonií neošetřených ploten (T/C = počet kolonií ošetřených x 100/počet kolonií neošetřených).
Substance je aktivní, když hodnota T/C < 30 %.
V následující tabulce 8 je tato hodnota jako hodnota IC70 v pg/ml.
-21 CZ 291098 B6
Tabulka 8
1C7O / gg/ml
Př. 11.7 12.1 12.3 12.5 Chinolon-a
CXF 280 >100 70 5 <0,3 6
HT 29 56 6 5 11 20
SW 480 18 8 11 10 3
LXFL 529 4 0,9 2 2 3
LXFS 538 18 0,4 0,5 <0,3 <0,3
MEXF 989 3 <0,3 <0,3 0,5 <0,3
OVXF 899 234 45 162 55 2
OVXF 1023 136 12 10 9 0,5
Příklad A.8
Pokusy in-vivo:
Metoda:
Myši se v den 0 inokulují 5 x 106 nádorových buněk B16F10. Nádory transplantovaná zvířata vyvíjejí solidní peritoneální nádory a ošetřují se potom denně testovanými substancemi, popřípadě se ošetřují vehikulem jako kontrola. V kontrolní skupině pojde normálně 50 % zvířat mezi dnem 14 a 20. Testované substance se aplikují v pufru nebo v systému organických rozpouštědel, sestávajícím ze 20 % methylalkoholu a 20 % dimethylsulfoxidu v 0,7% roztoku chloridu sodného.
Dávka vehikula nevykazuje žádný vliv na přežití zvířat. Terapeutický úspěch vyplývá z prodloužení doby přežití ošetřených zvířat. Snášenlivost sloučenin se paralelně analyzuje na zvířatech, která nenesou nádor. Ze snášenlivosti a prodloužení doby přežití se může odvodit terapeutický index.
Tabulka 9 % přežívajících
den 0 den 20 den 25 den 30 den 35
kontrola 100 70 30 10 10
11.12 lmg/kg 100 90 60 30 30
11.12 (lOOmg/kg) 100 100 100 90 90
Chinolon-a (0, lmg/kg) 100 100 100 60 40
Etoposin (5mg/kg) 100 90 80 80 70
Tabulka 9 ukazuje terapeutickou účinnost sloučenin z příkladu 11.12 na myších, kterým byl transplantován nádor B16F10.
-22CZ 291098 B6
Příklad A.9
In-vivo inhibice růstu nádoru za použití modelu lysých myší
Materiál:
Pro všechny in-vivo experimenty pro zkoumání inhibice růstu nádorů se používají athymické lysé myši (kmen NMRI nu/nu). Zvolený velkobuněčný karcinom plic LXFL 529 se vyvine sériovým pasážováním na lysých myších. Lidský původ nádoru je doložen izoenzymatickými a imunohistochemickými metodami.
Stavba experimentu:
Nádor se implantuje do obou slabin lysých myší nu/nu o stáří 6 až 8 týdnů. Ošetření se nastartuje jakmile nádory dosáhnou průměru 5 až 7 mm. Myši se zařadí do skupiny pro ošetření a kontrolní skupiny (5 myší pro skupinu s 8 až 10 vyhodnotitelnými nádory) randomizací. Jednotlivé nádory kontrolní skupiny rostou všechny progresivně. Velikost nádorů se měří ve dvou rozměrech pomocí posuvného měřítka. Objem nádorů, který dobře koreluje s počtem buněk, se potom použije pro všechna vyhodnocení. Objem se počítá podle vzorce „délka x šířka x šířka/2 ([a x b2]/2; a a b jsou dva pravoúhle měřené průměry).
Hodnoty relativního objemu nádoru (RTV) se počítají pro jednotlivý nádor dělením velikosti nádoru v den X velikostí nádoru v den 0 (v okamžiku randomizace). Střední hodnoty RTV se potom použijí pro další vyhodnocení.
Inhibice přírůstku objemu nádoru (objem nádoru testované skupiny/kontrolní skupiny, T/C, v procentech) je závěrečná měrná hodnota.
Ošetření:
Všechny sloučeniny se podle plánu aplikují v den 1, 5 a 9. Dále se všechny sloučeniny aplikují intraperitoneálně (i.p.) za použití vody jako rozpouštědla.
Tabulka 10
terapie látka’2 [mg/kg/den] doba přežití [dny] počet nádorů relativní objem nádoru [% ze dne 0]a) b) optimální T/Cb)
Kontrolní skupina — 19 >21 >21 >21 14 10 1552 100%
12.6 100 23 >26 26 >26 >26 8 300.7 19.4%
12.8 50 >21 >21 >21 >21 >21 9 502.2 32.3 %
12.14 25 23 >26 19 26 >26 8 519.5 33.5%
a) maximálně tolerovaná dávka (MTD)
b) v den 19
-23 CZ 291098 B6
Camptothecin-sloučeniny série příkladů 18 vykazují v tomto testu zpravidla srovnatelný nebo lepší účinek.
Série příkladů B
Příklady syntézy
Příklad 1.1 p-Aminofenyl-2-O-methyl-p-L-fukosid
OH Me
1.1 .a) p-Nitrofenyl-3,4-O-izopropyliden-[3-L-fukosid
Roztok p-nitrofenyl-fL-L-fukosidu (750 mg, 2,63 mmol) ve 40 ml směsi dimethylformamidu adioxanu (1 : 2) se při teplotě 0 °C smísí se 65 mg kyseliny p-toluensulfonové a ve třicetiminutových intervalech s 5 x 10 μ! 2-methoxypropenu. Po šestnáctihodinovém míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie (dichlormethan/methylalkohol 99 : 1). Po zahuštění se získá 710 mg (83 %) bílé pevné látky.
1.1 .b) p-N itrofeny 1-2-O-methy 1-3,4-O-izopropy liden-p-L-fukosid
100 mg (0,307 mmol) sloučeniny z příkladu 1.1.a) se předloží společně s 96 μΐ methyljodidu do 10 ml tetrahydrofuranu a potom se po částech smísí s 11 mg hydridu sodného (80%). Po tříhodinovém míchání při teplotě 20 °C se ještě jednou přidá 96 μΐ methyljodidu a 11 mg hydridu sodného. Po dalších 16 hodinách míchání při teplotě 20 °C se přidá malé množství vody a 100 ml dichlormethanu. Vsázka se dvakrát vytřepe vodou, organická fáze se zahustí a produkt se potom čistí pomocí sloupcové chromatografie za použití směsi petroletheru a ethylesteru kyseliny octové (8 : 1).
Výtěžek: 78 mg (75 %).
1.1) p-Aminofenyl-2-O-methyl-P-L-fukosid mg (0,23 mmol) p-nitrofenyl-2-O-methyl-3,4-O-izopropyliden-p-L-fukosidu se míchá po dobu 16 hodin při teplotě 20 °C ve 3 ml 80% kyseliny octové. Potom se kyselina octová ve vakuu odstraní, vsázka se smísí s 10 ml methylalkoholu a po přídavku oxidu platičitého se hydrogenuje ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku. Získaná suspenze se potom přefiltruje přes celit a filtrační koláč se promyje methylalkoholem. Po chromatografickém čištění za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (97,5 :2,5) se získá 77 mg (80 %) v názvu uvedeného produktu (DC: dichlormethan/methylalkohol 9 : 1; Rf= 0,42).
-24CZ 291098 B6
Příklad 1.2 p-Aminofenyl-3-0-methyl-[3-L-fukosid
1.2.a) p-Nitrofenyl-3-0-methyl-P~L-fukosid g (21 mmol) p-nitrofenyl-P-L-fukosidu ve 300 ml absolutního methylalkoholu se smísí se 7,84 g (31,5 mmol) dibutylcínoxidu a reakční směs se zahřívá po dobu 2 hodin kvaru pod zpětným chladičem. Potom se zahustí, získaný zbytek se vysuší a potom se vyjme do 300 ml dimethylformamidu. Po přídavku 15,7 ml methyljodidu se vsázka míchá po dobu 40 hodin při teplotě 70 °C. Rozpouštědlo se potom ve vakuu odstraní a získaný zbytek se vyjme do 300 ml dichlormethanu. Suspenze se přefiltruje, zbylý roztok se znovu zahustí a podrobí se mžikové chromatografíi za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu 99 : 1. Po zahuštění se získá 3 815 mg (61 %) v názvu uvedené sloučeniny.
1.2) p-Aminofenyl-3-O-methyl-|3-L-fukosid
3,81 g (12,73 mmol) p-nitrofenyl-3-O-methyl-[3-L-fukosidu se hydrogenuje analogicky jako je popsáno v příkladě 1.1). Výtěžek: 3 g (88 %) (DC: dichlormethan/methylalkohol 9: 1; Rf=0,53).
Příklad 1.3 p-Aminofenyl-3-O-methyl-a-L-fukosid
nh2
Výroba se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 1.2, přičemž se vychází z p-nitrofenylα-L-fukosidu. Výtěžek: 63% přes dva stupně. (DC: dichlormethan/methylalkohol 9:1; Rf=0,39).
-25CZ 291098 B6
Příklad 1.4 p-Aminofenyl-4-0-methyl-p-L-fukosid
1.4. a) p-Nitrofenyl-2-0-benzyM-0-acetyl-[3-L-fukosid g (3,5 mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukosidu ve 100 ml absolutního tetrahydrofuranu se smísí se 31 mg kyseliny p-toluensulfonové a 1 134 mg (7 mmol) triethylorthoacetátu. Po patnáctiminutovém míchání při teplotě 20 °C se rozpouštědlo ve vakuu oddestiluje, získaný zbytek se vyjme do 50 ml tetrahydrofuranu a 3 ml dimethylformamidu a smísí se se 4 165 μΐ benzylbromidu a 210 mg hydridu sodného (60%). Po jednohodinovém míchání při teplotě 20 °C se přidá 10 ml 80% kyseliny octové, zahustí se a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (99: 1). Po zahuštění a usušení se získá 1236 mg (85 %) v názvu uvedené sloučeniny.
1.4. b) p-Nitrofenyl-2-O-benzyl-3-O-acetyl-4-0-methyl-p-L-fukosid
000 mg (2,39 mmol) p-nitrofenyl-2-0-benzyl-4-0-acetyl-p-L-fukosidu se rozpustí v 60 ml benzenu. Po přídavku 2 988 μΐ methyljodidu a 1 109 mg oxidu stříbrného se reakční směs zahřívá po dobu 8 hodin k varu pod zpětným chladičem. Vzniklá směs produktů se rozdělí na komponenty pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (99 : 1). Vedle 653 mg (63 %) izomemího p-nitrofenyl-2-0-benzyl-3-0-methyl-4-0-acetylβ-L-fukosidu se jako bílá pevná látka izoluje 239 mg (23 %) p-nitrofenyl-2-O-benzyl-3-Oacetyl-4-O-methyl-p-L-fukosidu.
1.4) p-Aminofenyl-4-O-methyl-p-L-fukosid
224 mg (0,52 mmol) p-nitrofenyl-2-0-benzyl-3-0-acetyl-4-0-methyl-[3-L-fukosidu se rozpustí ve 20 ml methylalkoholu a smísí se se 390 μΐ IN roztoku methylátu sodného. Po šestnáctihodinovém míchání při teplotě 20 °C se směs neutralizuje 80% kyselinou octovou, zahustí se a vyjme se do dichlormethanu. Organická fáze se promyje IN roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší se a zahustí. Získaný zbytek se vyjme do 20 ml methylalkoholu a hydrogenuje se na palladiu na aktivním uhlí analogicky jako je popsáno v příkladě 1.1). Po zahuštění se produkt vyjme do vody a lyofilizuje se. Izoluje se takto 119 mg (88 %) bílé amorfní pevné látky (DC: dichlormethan/methylalkohol 9 : 1; Rf = 0,38).
-26CZ 291098 B6
Příklad 1.5 p-Aminofenyl-3-O-n-propyl-p-L-fukosid
1.5.a) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3-0-n-propyl-4-0-acetyl-p-L-fukosid
Analogicky jako je popsáno v příkladě 1.4.b) se vyrobí ze sloučeniny 1.4.a) s propyljodidem izomemí produkty 3- a 4-propylace a oddělí se chromatografícky. Získá se takto p-nitrofenyl2-0-benzyl-3-0-n-propyl-4-0-acetyl-p-L-fukosid ve 49% výtěžku vedle p-nitrofenyl-2-Obenzyl-3-O-acetyl-4-O-n-propyl-|3-L-fukosidu ve 29% výtěžku.
1.5 .b) p-Aminofenyl-3-0-n-propyl-p-L-fukosid
Syntéza se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 1.4) z produktu z příkladu 1.5 .a) frakce 1. Výtěžek: 78 % (DC: dichlormethan/methylalkohol 9 : 1; Rf= 0,42).
Příklad 1.6 p-Aminofenyl-3-desoxy-|3-L-fukosid
1.6. a) p-Nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-4-0-acetyl-[3-L-guIosid g (3,5 mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukosidu ve 100 ml tetrahydrofuranu se smísí se 31 mg kyseliny p-toluensulfonové a 1134 mg (7 mmol) triethylorthoacetátu. Po patnáctiminutovém míchání při teplotě 20 °C se rozpouštědlo ve vakuu oddestiluje a přidá se 100 ml nasyceného roztoku chlorovodíku v dichlormethanu. Po reakční době 10 minut se směs zahustí a produkt se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (99 : 1). Získá se takto 793 mg (65 %) v názvu uvedeného produktu. (DC: dichlormethan/methylalkohol 9: l;Rf=0,36).
1.6. b) p-Nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-|3-L-gulosid
375 mg (1,08 mmol) p-nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-4-O-acetyl-P-L-gulosidu se rozpustí ve 25 ml methylalkoholu a smísí se s 10 kapkami IN roztoku methylátu sodného. Po 20 minutách se okyselí kyselinou octovou, zahustí se a rozdělí se mezi 400 ml dichlormethanu a 60 ml vody.
-27CZ 291098 B6
Organická fáze se vysuší, zahustí a vysráží se ze směsi dichlormethanu a diethyletheru. Získá se takto 315 mg (96 %) v názvu uvedeného produktu.
1.6) p-Aminofenyl-3-desoxy-p-L-fukosid
315 mg (1,04 mmol) p-nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-P-L-gulosidu se rozpustí ve 40 ml methylalkoholu, smísí se se 200 mg palladia na aktivním uhlí a se 290 μ! triethylaminu a hydrogenuje se ve vodíkové atmosféře při nepatrném přetlaku po dobu 4 dnů. Suspenze se potom přefiltruje, promyje, zahustí a produkt se čistí pomocí mžikové chromatografíe za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (97,5: 2,5). Získá se takto 160 mg (65%) desoxysloučeniny [DC: dichlormethan/methylalkohol 95 : 5, Rf = 0,18].
Příklad 1.7 p-Am inofeny 1-3,4-d idesoxy-p-L-fukos id
400 mg (1,16 mmol) p-nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-4-0-acetyl-|3-L-gulosidu (příklad 1.6.a)) se rozpustí v 55 ml methylalkoholu, smísí se se 323 μΐ triethylaminu a hydrogenuje se ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku za použití palladia na aktivním uhlí (10%). Po šestnáctihodinovém míchání při teplotě 20 °C se směs přefiltruje přes celit, promyje se, zahustí a znovu se vyjme do 100 ml methylalkoholu. Potom se přidá 1,5 ml IN roztoku methylátu sodného a míchá se po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se zneutralizuje kyselinou octovou, zahustí se a vzniklé produkty se rozdělí pomocí mžikové chromatografíe za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (97,5 : 2,5). Po zahuštění odpovídajících frakcí a přesrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá 120 mg (46 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC: dichlormethan/methylalkohol 95 : 5, Rf = 0,18].
Příklad 1.8 p-Aminofenyl-3,4-epoxy-[3-L-fukosid
mg (0,23 mmol) p-nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-4-0-acetyl-p-L-gulosidu (příklad 1.6.a)) se vyjme do 10 ml methylalkoholu a smísí se se 345 μΐ IN roztoku methylátu sodného. Po jednohodinovém zpracování ultrazvukem se směs okyselí 80% kyselinou octovou, zahustí se a chromatografuje se za pomoci směsi dichlormethanu a methylalkoholu (99 : 1). Po zahuštění relevantních frakcí se získaný zbytek vyjme do methylalkoholu a hydrogenuje se na palladiu na aktivním uhlí analogicky jako je uvedeno v příkladě 1.1). Získá se takto 46 mg (75 %) v názvu uvedené sloučeniny (FAB-MS: m/e = 238 = M + 1).
-28CZ 291098 B6
Příklad 1.9 p-Aminofenyl-4-desoxy-p~L-fukosid
Tato sloučenina se vyrobí analogicky jako je popsáno v předpisu T. Lindhorsta a J. Thiema v Carbohydr. Res. 209 (1991), 119, když se vychází z p-nitrofenyl-p-L-fukosidu přes p-nitrofenyl-2,3-di-0-benzoyl-4,6-didesoxy-4-jodo-B-L-fukosid [DC : díchlormethan/methylalkohol 95 : 5, Rf= 0,3],
Příklad 1.10 p-Aminofenyl-3-0-karboxymethyl-(3-L-fukosid
COOH
1.10.a) p-Nitrofenyl-3-O-methoxykarbonylmethyl-[3-L-fukosid g (3,5 mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukosidu a 1,3 g (5,2 mmol) dibutylcínoxidu se zahřívá v 50 ml methylalkoholu po dobu 2 hodin kvaru pod zpětným chladičem. Roztok se potom 20 zahustí, získaný zbytek se vyjme do 50 ml dioxanu, smísí se se 2 ml methylesteru kyseliny bromoctové a 100ml tetrabutylamoniumjodidu a zahřívá se po dobu 16 hodin kvaru pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo se potom odpaří a získaný produkt se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu 99: 1. Po zahuštění odpovídajících frakcí a přesrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá 455 mg 25 (37 %) v názvu uvedené sloučeniny.
1.10) p-AminofenyI-3-O-karboxymethyl-P-L-fukosid
282 mg (0,79 mmol) p-nitrofenyl-3-methoxykarbonylmethyl-P-L-fukosidu se rozpustí ve 30 20 ml methylalkoholu a smísí se se 440 μΐ 2N roztoku hydroxidu lithného. Po dvouhodinovém míchání při teplotě 20 °C se hodnota pH směsi nastaví pomocí kyselého iontoměniče SC108 a 3 a přefiltruje se. K filtrátu se přidá 250 mg palladia na aktivním uhlí, hydrogenuje se po dobu 1,5 hodiny vodíkem za mírného přetlaku a katalyzátor se oddělí a promyje se methylalkoholem. Po zahuštění, vyjmutí do vody a lyofilizaci se získá v názvu uvedená sloučenina v 86% výtěžku 35 (212 mg) [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2, Rf = 0,24],
-29CZ 291098 B6
Příklad 1.11 p-Aminofenyl-3-0-methoxykarbonylmethyl-p-L-fukosid
COOMe
250 mg (0,7 mmol) p-nitrofenyl-3-methoxykarbonylmethyl-P-L-fukosidu (příklad 1.10.a)) se rozpustí ve 20 ml methylalkoholu a po dobu 1,5 hodiny se hydrogenuje vodíkem za mírného přetlaku na palladiu na aktivním uhlí. Katalyzátor se potom oddělí a promyje se methylalkoholem. Po zahuštění, vyjmutí do vody a lyofílizací se získá 195 mg (85 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5, Rf = 0,43; FAB-MS: m/e = 328 = M+1J.
Příklad 1.12 p-Aminofenyl-3-0-hydroxyethyl-p-L-fukosid
Me
HO
nh2
OH
1.12.a) p-Nitrofenyl-3-O-hydroxyethyl-p-L-fukosid
000 mg (2,8 mmol) p-nitrofenyl-3-methoxykarbonylmethyl-|3-L-fukosidu se rozpustí ve směsi 160 ml tetrahydrofuranu a 40 ml vody a smísí se s 53 mg natriumborhydridu. Po 10 minutách se rozpouštědlo odpaří a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (95 : 5). Po zahuštění odpovídajících frakcí, vyjmutí do vody a lyofilizaci se získá 362 mg (40 %) v názvu uvedené sloučeniny.
1.12) p-Aminofenyl-3-O-hydroxyethyl-P-L-fukosid
Po hydrogenaci 362 mg sloučeniny z příkladu 1.12a) se analogicky jako je popsáno v příkladě 1.1 získá 270 mg (82 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : Acetonitril/voda 10 : 1; Rf=0,43J.
-30CZ 291098 B6
Příklad 1.13 p-Aminofenyl-2-O-karboxymethyl-p-L-fukosid
1.13 .a) p-N itrofenyl-2-O-methoxykarbonylmethy Ι-β-L-fukosid
250 mg (0,88 mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukosidu se rozpustí ve 25 ml absolutního tetrahydrofuranu a 3 ml dimethylformamidu, přidá se 80 mg (2,64 mmol) 80% hydridu sodného a po desetiminutovém míchání při teplotě 20 °C 35 μΐ benzylesteru kyseliny bromoctové. V desetiminutových intervalech se provede třikrát vždy přídavek 35 μΐ benzylesteru kyseliny bromoctové, načež se reakční směs míchá po dobu 30 minut a zředí se methylalkoholem. Po dalších 10 minutách se okyselí 5 ml 80% kyseliny octové. Potom se zahustí a destiluje se s dichlormethanem. Čištění pomocí mžikové chromatografie se začíná s pohyblivou fází dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90:10:1, později stoupá ve stejném systému poměr na 80 : 20 : 2. Po zahuštění odpovídajících frakcí se zbytky digerují sdiethyletherem a zodpovídajícího eluátu se získá 157 mg (42 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2, Rf = 0,65]. Z pozdějších eluátů se získají izomery 3-O-alkylované sloučeniny (33 %) [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2, Rf = 0,54],
1.13.) p-Aminofenyl-2-O-karboxymethyl-P-L-fukosid
Zmýdelnění a hydrogenace 150 mg p-nitrofenyl-2-0-methoxykarbonylmethyl-[3-L-fukosidu se provádí metodou, popsanou v příkladě 1.10) s 83% výtěžkem na 109 mg v názvu uvedené sloučeniny [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2, Rf = 0,35].
Příklad 1.14a)
Syntéza regioizomerních produktů monosukcinylace p-nitrofenyl-p-L-fukosidu
100 mg (3,86 mmol) ρ-nitrofenyl-p-L-fukosidu se rozpustí v 50 ml pyridinu a smísí se s 580 mg (5,79 mmol) anhydridu kyseliny jantarové. Po šestnáctihodinovém míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a dvakrát se destiluje s dichlormethanem. Vysráží se ze směsi dichlormethanu a diethyletheru a získá se 1 g nedělitelné směsi látek. Tato se vyjme do směsi methylalkoholu a vody a smísí se s 846 mg (2,6 mmol) uhličitanu cezného, rozpouštědlo se odpaří a destiluje se s dimethylformamidem. Získaný zbytek se vyjme do dimethylformamidu a smísí se s 618 μΐ benzylbromidu. Po jednohodinovém zpracování ultrazvukem se bromid cezný odfiltruje a filtrát se zahustí. Získaný zbytek se rozdělí mezi 500 ml ethylesteru kyseliny octové a 50 ml vody. Organická fáze se potom vysuší a zahustí. Při dělení komponent pomocí mžikové chromatografie za použití pohyblivé fáze dichlormethan/methylalkohol (99 : 1) se získá:
Frakce 1: 87 mg (4,8 %) p-nitrofenyl-3-0-(3-benzyloxykarbonylpropionyl)-P-L-fukosidu [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5, Rf = 0,45].
-31 CZ 291098 B6
Frakce 2: 27 mg (1,5 %) p-nitrofenyl-2-0-(3-benzyloxykarbonylpropionyl)-p-L-fukosidu [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5, Rf = Ó.34].
Frakce 3: 190 mg (10,3 %) p-nitrofenyl-4-0-(3-benzyloxykarbonylpropionyl-|3-L-fukosidu [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5, Rf= 0.28].
Příklad 1.14.
p-Aminofenyl-3-O-sukcinyl-p-L-fukosid
mg (0,17 mmol) frakce 1 z příkladu 1.13.a) se rozpustí v 5 ml tetrahydrofuranu a 1 ml vody, přidá se 20 mg oxidu platičitého a hydrogenuje se po dobu 8 hodin. Katalyzátor se potom odfiltruje, promyje se směsí tetrahydrofuranu a vody a filtrát se zahustí. Získaný zbytek se vyjme do vody a lyofilizuje se. Získá se takto 57 mg (94 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2, Rf = 0,65].
Příklad 1.15 p-Aminofenyl-2-0-sukcinyl-p-L-fukosid
Frakce 2 z příkladu 1.14.a) se hydrogenuje analogicky jako je uvedeno v příkladě 1.14). Výtěžek činí 16 mg (87 %) [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2, Rf = 0,62].
-32CZ 291098 B6
Příklad 1.16 p-Aminofenyl-4-O-sukcinyl-|3-L-fukosid
Frakce 2 z příkladu 1.14.a) se hydrogenuje analogicky jako je uvedeno v příkladu 1.14). Výtěžek činí 125 mg (88 %) [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2, Rf - 0,63].
Příklad 1.17 p-Aminofenyl-3,4-di-O-methyl-|3-L-fukosid
1.17. a) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4-0-izopropyliden-P_L-fukosid
377 mg (1,16 mmol) sloučeniny z příkladu l.l.a) se rozpustí ve 30 ml absolutního tetrahydrofuranu, postupně se smísí se 690 μΐ benzylbromidu a 52 mg hydridu sodného a míchá se při teplotě 20 °C. Po 4 hodinách a 6 hodinách se přidá ještě 690 μΐ benzylbromidu a hydrid sodný. Reakční směs se zpracuje analogicky jako je popsáno v příkladě 1.1.b) a získá se takto 245 mg (51 %) v názvu uvedené sloučeniny.
1.17. b) p-Nitrofenyl-2-O-benzyl-3,4-di-O-methyl-(3-L-fukosid
245 mg (0,59 mmol) p-nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4-0-izopropyliden-(3-L-fukosidu se míchá po dobu 16 hodin při teplotě 20 °C v 80% kyselině octové. Potom se reakční směs zahustí a získaný zbytek se rozmíchá se směsí diethyletheru a pentanu. Po odsátí a vysušení se zbylý produkt vyjme do 20 ml absolutního tetrahydrofuranu, přidá se 45 mg 80% hydridu sodného a po 15 minutách se vstříkne 160 μΐ methyljodidu. Po dvacetihodinovém míchání při teplotě 20 °C se přidá methylalkohol a ledová kyselina octová, zahustí se a získaný zbytek se rozdělí mezi dichlormethan a vodu. Organická fáze se vysuší a potom se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (100: 1). Po zahuštění a vysušení odpovídajících frakcí se získá 188 mg (79 %) v názvu uvedené sloučeniny.
1.17) p-Aminofenyl-3,4-di-0-methyl-p-L-fukosid
180 mg (0,45 mmol) sloučeniny z příkladu 1.17.b) se ve směsi 15 ml methylalkoholu a 3 ml dichlormethanu po přídavku 50 mg palladia na aktivním uhlí hydrogenuje po dobu dvou dnů při
-33CZ 291098 B6 teplotě místnosti. Katalyzátor se potom odfiltruje, filtrát se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (97,5 : 2,5). Získá se takto 86 mg (68 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5, Rf = 0,21],
Příklad 1.18 p-Aminofenyl-3-O-karbamoylmethyl-[3-L-fukosid
conh2
100 mg (0,305 mmol) sloučeniny z příkladu 1.11) se rozpustí v 10 ml methylalkoholu a smísí se s 0,5 ml 17% roztoku hydroxidu amonného. Po 4 hodinách se reakční směs zahustí, vyjme se do vody a lyofilizuje se. Získá se takto 95 mg (kvantitativní výtěžek) v názvu uvedené sloučeniny [DC : acetonitril/voda 10:1; R,-= 0,43].
Příklad 1.19 p-Aminofenyl-2-0-hydroxyethyl-|3-L-fukosid
OH
Tato sloučenina se vyrobí tak, se vychází ze 200 mg (0,56 mmol) p-nitrofenyl-2-O-methoxykarbonylmethyl-(3-L-fukosidu (příklad 1.13.a)), přičemž se postupuje analogicky jako je popsáno v příkladech 1.12.a) a 1.12). Výtěžek činí 76 mg (45% přes 2 stupně) (DC : dichlormethan/methylalkohol 9 : 1, Rf = 0,2].
-34CZ 291098 B6
Příklad 1.20 p-Aminofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-p-L-gulosid
mg (0,165 mmol) sloučeniny z příkladu 1.6.b)se hydrogenuje v 5 ml methylalkoholu na palladiu na aktivním uhlí po dobu jedné hodiny. Katalyzátor se potom odfiltruje, promyje se, filtrát se zahustí, získaný zbytek se vyjme do vody a lyofilizuje se. Získá se takto 45 mg (89 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : dichlormethan/methylalkohol 9: 1, Rf = 0,35].
Příklad 1.21 p-Aminofenyl-a-L-rhamnosid
Tato sloučenina se vyrobí analogicky jako je uvedeno v příkladě 1.1), když se vychází ze 300 mg p-nitrofenyl-a-rhamnosidu (Sigma). Výtěžek: 96 %.
Příklad 1.22 p-Aminofenyl-3-O-karboxymethyl-a-L-rhamnosid
COOH
1.22.a) p-Nitrofenyl-3-O-methoxykarbonylmethyl-a-L-rhamnosid
481 mg (1,63 mmol) p-nitrofenyl-a-L-rhamnosidu se vyjme do 30 ml methylalkoholu a smísí se se 629 mg (2,45 mmol) dibutylcínoxidu. Reakční směs se zahřívá po dobu 2 hodin k varu pod zpětným chladičem, načež se zahustí a vyjme se do 30 ml dioxanu. Potom se přidá 85 mg tetrabutylamoniumjodidu a 950 μΐ methylesteru kyseliny bromoctové a zahřívá se po dobu 16 hodin k varu pod zpětným chladičem. Popřípadě se ještě jednou přidá 1 ml methylesteru kyseliny
-35CZ 291098 B6 bromoctové a reakční doba se prodlouží. Potom se směs zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie. Směsí dichlormethanu a methylalkoholu (99 : 1) se eluuje p-nitrofenyl3-O-methoxykarbonylmethyl-a-rhamnosid a po usušení se získá 408 mg (70 %) této látky [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5, Rf = 0,36].
1.22) p-Aminofenyl-3-O-karboxymethyl-a-L-rhamnosid
Syntéza probíhá zcela analogicky jako je popsáno v příkladě 1.10), když se vychází zp-nitrofenyl-3-O-methoxy-karbonylmethyl-a-L-rhamnosidu. Získá se konečný produkt v 80% výtěžku. [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2, Rf = 0,26].
Příklad 1.23 p-Aminofenyl-P-D-galaktopyranosid
3,0 g (10 mmol) p-nitrofenyl-P-D-galaktopyranosidu se rozpustí v 50 ml směsi methylalkoholu a vody (1 : 1) a po přídavku palladia na aktivním uhlí (10 % Pd, 200 mg) se hydrogenuje po dobu 3 hodin ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku. Suspenze se přefiltruje přes celit a filtrační koláč se promyje 100 ml horké směsi methylalkoholu a vody (1 : 1). Po zahuštění filtrátu ve vakuu a krystalizaci z methylalkoholu se získá bezbarvá krystalická látka (211 g, 78%); DC [methylalkohol]: Rf = 0,62; [a]20 = -39,5° (c = l,0/H2O); t.t. = 166 °C.
Příklad 1.24 p-Aminofenyl-2-O-methyl-P-D-galaktopyranosid
1.24 ,a) p-N itrofeny 1-6-O-trifenyl methyl-(3-D-galaktopyranosid
Roztok p-nitrofenyl-P-D-galaktopyranosidu (9,0 g, 30 mmol), chlortrifenylmethanu (16,7 g, 60 mmol) a N,N-dimethylaminopyridinu (609 mg, 5 mmol) v absolutním pyridinu 100 ml) se zahřívá po dobu 4 hodin na tepotu 60 °C. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek čistí pomocí mžikové chromatografie (petrolether/ethylacetát 2 : 1 —> 3 : 2, vždy s 0,5 % triethylaminu). Získá se takto bezbarvá krystalická látka (9,23 g, 57 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,55; t.t. = 82 °C.
-36CZ 291098 B6
1.24. b) p-Nitrofenyl-3,4-0-izopropyliden-6-0-trifenylmethyl-P-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (8,7 g, 16 mmol) se smísí s dimethoxypropanem (400ml) a katalytickým množstvím kyseliny (±)-camfer-10-sulfonové (400 mg, 1,7 mmol). Pojedná hodině při teplotě místnosti se reakce ukončí přídavkem triethylaminu (240 m, 1,7 mmol) a reakční směs se ve vakuu zahustí. Po mžikové chromatografii (petrolether/ethylacetát 1 : 1) se získá bezbarvá pěnovitá látka (6,2 g, 66 %). DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf=0,46; [a]20 = -42,1° (c = O,94/CH2C12).
1.24. c) p-Nitrofenyl-2-O-methyl-3,4-O-izopropyliden-6-O-trifenylmethyl-(3-D-galakto- pyranosid
Sloučenina 1.24.b) (5,83 g, 10 mmol) se rozpustí v dimethylformamidu (100 ml), smísí se s methyljodidem (25 ml, 40 mmol) a po částech s 80% suspenzí hydridu sodného v minerálním oleji (450 mg, 15 mmol). Po 2 hodinách při teplotě místnosti se reakce ukončí přikapáním methylalkoholu (10 ml) a reakční směs se ve vakuu zahustí. Získaný zbytek se vyjme do dichlormethanu (1 000 ml) a tento roztok se silně rozmíchá s vodou (500 ml). Organická fáze se vysuší pomocí síranu hořečnatého (50 g), ve vakuu se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie (petrolether/ethylacetát 12 : 1-> 8 : 1). Získá se bezbarvá pěnovitá látka (4,72 g, 79 %); DC [petrolether/ethylacetát 1:1]: Rf= 0,72; [a]20 = -35,7° (c = 1,0/CH3OH).
1.24.d) p-Nitrofenyl-2-O-methyl-p-D-galaktopyranosid
Roztok výše uvedené sloučeniny (4,48 g, 7,5 mmol) v dichlormethanu (200 ml) se smísí s 99% kyselinou trifluoroctovou (20 ml) a míchá se po dobu 3 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek čistí pomocí mžikové chromatografie (petrolether/ethylester kyseliny octové 5 : 1 —> 2: 1). Získá se takto produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,09 g, 46 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15: 3:0,2]; Rf=0,42; t.t. = 177 °C.
1.24) p-Aminofenyl-2-0-methyl-p-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.24.d) (946 mg, 3 mmol) se rozpustí v methylalkoholu (50 ml) a po přídavku vody (0,5 ml) a bazického Raneyova niklu (asi 200 mg) se hydrogenuje po dobu 2 hodin ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku. Suspenze se potom přefiltruje přes celit a filtrační koláč se důkladně promyje methylalkoholem (100 ml). Zahuštěním filtrátu ve vakuu se získá hnědá pěnovitá látka (579 mg, 68 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]; Rf = 0,28; [a]20 = -39,3° (c = 1,5/CH3OH).
Příklad 1.25 p-Aminofenyl-3-0-methyl-p-D-galaktopyranosid
OH
HO
-37CZ 291098 B6
1.25 .a) p-N itrofeny l-3-O-methyl-p-D-galaktopyranosid
Roztok p-nitrofenyl-p-D-galaktopyranosidu (1,5 g, 5,0 mmol) v absolutním methylalkoholu (40 ml) se smísí s dibutylcínoxidem (1,87 g, 7,5 mmol) a reakční směs se zahřívá pod zpětným chladičem. Po 3 hodinách se ve vakuu odpaří a získaný zbytek se suší jednu hodinu ve vakuu olejové vývěvy. Potom se vyjme do absolutního dioxanu (40 ml), získaný roztok se smísí s methyljodidem (1,9 ml, 30 mmol) a vsázka se míchá po dobu 16 hodin při teplotě lázně 100 °C. Potom se rozpouštědlo ve vakuu oddestiluje a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 2 : 1 -> ethylacetát). Získá se takto produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,32 g, 84 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3:0,2]; Rf = 0,34; t.t. = 196 °C; [a]20 = -53,3° (c = 1,0/CH3OH).
1.25) p-Aminofenyl-3-0-methyl-p-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (946 mg, 3 mmol) se redukuje a zpracuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.24). Získá se takto hnědavá krystalická látka (656 mg, 77 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3:0,2]; Rf= 0,21; t.t. = 196 °C; [a]20 = -25,2° (c = 1,0/CH3OH).
Příklad 1.26 p-Aminofenyl-4-O-methyl-p-D-galaktopyranosid, acetát
1.26.a) p-Nitrofenyl-3-O-benzyl-p-D-galaktopyranosid
Roztok p-nitrofenyl-fl-D-galaktopyranosidu (1,5 g, 5,0 mmol) v absolutním dioxanu (40 ml) se smísí s dibutylcínoxidem (1,87 g, 7,5 mmol) a zahřívá se kvaru pod zpětným chladičem. Po 3 hodinách se získaný roztok smísí s benzylbromidem (3,6 ml, 30 mmol) a reakční směs se míchá po dobu dalších 48 hodin za varu pod zpětným chladičem. Potom se rozpouštědlo ve vakuu oddestiluje a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 2 : 1 —> 1 : 1). Získá se takto produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,58 g, 81 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]; Rf= 0,69; t.t. = 127 °C.
1.26.b) p-Nitrofenyl-3-O-benzyM,6-O-izopropyliden-P-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.26.a) (6,26 g, 16 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.b) a produkt se čistí pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1 : 5 —» 1 : 3). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (6,54 g, 95 %); DC [petrolether/ethylacetát 1:1]; Rf= 0,34; [a]20 = -25,2° (c = 1,O/CH2C12).
-38CZ 291098 B6
1.26. c) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-benzyM,6-0-izopropyliden-[3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.26.b) (4,31 g, 10 mmol) se rozpustí v dimethylformamidu (100 ml), smísí se s benzylbromidem (12 ml, 100 mmol) a po částech se smísí s 80% suspenzí hydridu sodného v minerálním oleji (450 mg, 15 mmol). Po 2 hodinách při teplotě místnosti se reakce ukončí přikapáním methylalkoholu (10 ml) a směs se ve vakuu zahustí. Získaný zbytek se vyjme do dichlormethanu (1 000 ml) a roztok se důkladně rozmíchá s vodou (500 ml). Organická fáze se potom vysuší pomocí bezvodého síranu hořečnatého (50 g), ve vakuu se zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1 : 20 —> 1 : 15 —> 1 . 10). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé olejovité látky (2,72 g. 52 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]; Rf = 0,62.
1.26. d) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-benzyl-P~D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (2,6 g, 5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1,24.d). Po zahuštění ve vakuu a rozvařením získaného zbytku s diethyletherem se získá produkt ve formě bezbarvých krystalů (805 mg, 33 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]; Rf= 0,23; t.t. = 160 °C.
1.26. e) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-benzyl-6-0-trifenylmethyl-P-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.26.d) (722 mg, 1,5 mmol) se trityluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.a). Po čištění pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1:15—>1:10—>l:5)se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (880 mg, 81 %); DC [petrolether/ethylacetát 2:1]; Rf = 0,79; [a]20 = -25,3° (c = 0,3/CH2Cl2).
1.26. f) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-benzyl-4-0-methyl-6-0-trifenylmethyl-fl-D-galaktopyran- osid
Sloučenina 1.26.e) (724 mg, 1 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po čištění pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1 : 10 —> 1 : 5) se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (662 mg, 90 %); DC [petrolether/ethylacetát 5 : 1]; Rf= 0,66; [a]20 = -38,7° (c = O,2/CH2C12).
1.26) p-AminofenyM-0-methyl-[3-galaktopyranosid, acetát
Výše uvedená sloučenina (590 mg, 0,8 mmol) se rozpustí v 90% kyselině octové (50 ml) a po přídavku palladia na aktivním uhlí (10% Pd, 200 mg) se hydrogenuje po dobu 16 hodin ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku. Suspenze se potom přefiltruje přes celit a filtrační koláč se důkladně promyje methylalkoholem (100 ml). Po zahuštění filtrátu ve vakuu a přesrážení získaného zbytku ze směsi diethyletheru a petroletheru se získá produkt ve formě bezbarvých krystalů (253 mg, 92 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1): Rf= 0,12.
-39CZ 291098 B6
Příklad 1.27 p-Aminofenyl-6-O-methyl-|3~D-galaktopyranosid
1.27. a) Benzylace sloučeniny 1.24.b):
Sloučenina 1.24.b) (5,84 g, 10 mmol) se benzyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.c). Po čištění pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1 :15 —> 1 : 10-> 1 : 5, vždy s 0,5 % triethylaminu) se získají dvě frakce produktu:
Frakce 1: p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4-0-izopropyliden-6-0-trifenylmethyl-3-Dgalaktopyranosid; žlutavá pěnovitá látka (1,71 g, 25%); DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1J; Rf = 0,72; [a]20 = -8,1° (c = 1,O/CH2C12).
Frakce 2: p-Nitrofenyl-2-O-benzyl-3,4-O-izopropyliden-P_D-galaktopyranosid; žlutavá olejovitá látka (806 mg, 19 %); DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1]; Rf = 0,45; [a]20 = +2,8° (c = 1,2/CH3OH).
1.27. b) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4-0-izopropyliden-6-0-methyl-|3-D-galaktopyranosid
Frakce 2 z příkladu 1.27.a) (777 mg, 1,8 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě
1.24.c). Po čištění pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1 : 10 —> 1 : 8) se získá produkt ve formě hnědavé olejovité látky (730 mg, 91 %); DC [petrolether/ethylacetát 2 : l];Rf=0,54; [a]20 = -l 1,6° (c = 1,1/CH2C12).
1.27. c) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-6-0-methyl-P-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (668 mg, 1,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.d). Po zahuštění ve vakuu a rozvaření získaného zbytku s malým množstvím diethyletheru se získá po ochlazení na teplotu místnosti produkt ve formě světle žlutých krystalů (388 mg, 64 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]; Rf = %,15; t.t. = 143 °C.
1.27) p-Aminofenyl-6-O-methyl-(3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.27.c) (324 mg, 0,8 mmol) se redukuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.24) po dobu 16 hodin. Po zahuštění filtrátu ve vakuu a rozvaření získaného zbytku s malým množstvím diethyletheru se získá produkt ve formě béžových krystalů (184 mg, 81 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,05; t.t. = 115 °C (rozklad).
-40CZ 291098 B6
Příklad 1.28 p-Aminofenyl-2,3-di-O-methyl-P-D-galaktopyranosid
1.28. a) Izopropylidenace p-nitrofenyl-[3-D-galaktopyranosidu
Roztok p-nitrofenyl-P-D-galaktopyranosidu (7,5 g, 25 mmol) v absolutním acetonu (1 000 ml) se smísí s bezvodou kyselinou toluensulfonovou (500 mg). Za normálního tlaku se během 30 minut oddestiluje aceton (250 ml) a zneutralizuje se potom ihned přídavkem uhličitanu draselného (500 mg). Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek rozmíchá s diethyletherem (1000 ml), přefiltruje se a filtrát se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 2 : 1 —> 1 : 1 —> 3 : 2]. Přitom vy padnou dvě frakce produktů:
Frakce 1: p-Nitrofenyl-3,4-0-izopropyliden-p-D-galaktopyranosid; bezbarvá pěnovitá látka (3,74 g, 44%); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3:0,2]; Rf = 0,59; [a]20 = -54,2° (c = 0,38/CH3OH).
Frakce 2: p-NitrofenyM,6-0-izopropyliden-p-D-galaktopyranosid; bezbarvá pěnovitá látka (4,3 g, 50%); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15: 3 : 0,2]; Rf= 0,54; [a]20 = -81,0° (c = O,31/CH3OH).
1.28. b) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-methyl-4,6-0-izopropyliden-|3-D-galaktopyranosid
Frakce 2 z příkladu 1.28.a) (4,1 g, 12 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 5 : 1 -> 2 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (2,3 g, 66 %); DC [petrolether/ethylacetát 1:1]: Rf = 0,42; [a]20 = -52,6° (c = 0,34/CH3OH).
1.28. c) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-methyl-(3-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (2,77 g, 7,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.d). Po jedné hodině při teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny za vakua olejové vývěvy. Digerací se směsí diethyletheru a petroletheru 1:1 (100 ml) se získá produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,11 g, 45 %); DC [petrolether]: Rf = 0,24; t.t. = 156 °C.
1.28) p-Aminofenyl-2,3-di-O-methyl-[3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.38.c) (989 mg, 3 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé olejovité kapaliny (396 mg, 44 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,50; [a]20 = -19,4° (c = O,16/CH3OH).
-41 CZ 291098 B6
Příklad 1.29 p-Aminofenyl-2,4-di-O-methyl-|3-D-galaktopyranosid
1.29. a) Tritylace sloučeniny 1.26.a)
Sloučenina 1.26.a) (11,7 g, 30 mmol) se trityluje stejně, jako je uvedeno v příkladě 1.24.a). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 10 : 1 —> 7 : 1 —> 5 : 1, vždy s 0,5 % triethylaminu] se získají dva produkty:
Frakce 1: Trifenylmethyl-2-0-(p-nitrofenyl)-3-0-benzyl-6-0-trifenylmethyl-|3-D-galaktopyranosid, bezbarvá pěnovitá látka (8,5 g, 32 %); DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1 ]: Rf = 0,68; [a]20 = +42,8° (c = 0,l/CH2Cl2).
Frakce 2: p-Nitrofenyl)-3-C)-benzyl-6-0-trifenylmethyl-(3-D-galaktopyranosid, bezbarvá pěnovitá látka (9,0 g, 47 %); DC [petrolether/ethylacetát 2: 1]: Rf=0,22; [a]20 = -22,6° (c = 1,O3/CH2C12).
1.29. b) p-Nitrofenyl-2,4-di-0-methyl-3-0-benzyl-6-0-trifenylmethyl-|3-D-galakto- pyranosid
Frakce 2 z příkladu 1.29.a) (7,6 g, 12 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě
1.24.c). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 15 : 1 —> 10 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (7,07 g, 89 %); DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1]: Rf=0,79; [a]20 = -35,8° (c = 1,09/CH3OH).
1.29. c) p-Aminofenyl-2,4-di-0-methyl-3-0-benzyl-(3-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (6,0 g, 9 mmol) se hydrogenuje po dobu 48 hodin, jak je popsáno v příkladě 1.26). Získá se takto produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,39 g, 40 %); DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1]; Rf= 0,20; t.t. = 148 °C.
1.29) p-Aminofenyl-2,4-di-0-methyl-P-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.29.c) (779 mg, 2 mmol) se hydrogenuje po dobu 5 dnů stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po odpaření spojených filtrátů ve vakuu a rozvaření získaného zbytku s diethyletherem (2x 50 ml) se získá lehce zelenavá krystalická látka (391 mg, 65%); DC [ethylacetát]: Rf = 0,16; t.t. = 260 °C (rozklad).
-42CZ 291098 B6
Příklad 1.30 p-Aminofenyl-2,6-di-O-methyl-p-D-galaktopyranosid
1.30. a) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-methyl-3,4-0-izopropyliden-|3-D-galaktopyranosid
Frakce 1 z příkladu 1.28.a) (4,1 g, 12 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě
1.24.c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 10 : 1—> 8 : 1 —> 5:1] se získá produkt ve formě bezbarvé olejovité látky (3,25 g, 73 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]; Rf=0,65.
1.30. b) p-Nitrofenyl-2,6-di-O-methyl-p-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (2,77 g, 7,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1,24.d). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 1 : 2] se získá produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,63 g, 66 %); DC [ethylacetát]: Rf= 0,31; t.t. = 222 °C.
1.30) p-Aminofenyl-2,6-di-O-methyl-J3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.30.b) (989 mg, 3 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé olejovité látky (597 mg, 66 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf - 0,56; [a]20 = -53,1° (c = 0,49/CH3OH).
Příklad 1.31 p-Aminofenyl-3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosid, acetát
CH3COOH
1.31 .a) p-N itrofenyl-2,6-di-O-benzyl-3,4-O-izopropyliden-p-D-gylaktopyranosid
Frakce 1 z příkladu 1.28.a) (4,1 g, 12 mmol) se benzyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 6 : 1] se získá produkt ve formě žlutavé olejovité látky (5,3 g, 85%); DC [ethylacetát/petrolether 2 : 1]: Rf=0,76; [a]20 = +8,8° (c = 1,3/CH3OH).
-43CZ 291098 B6
1.31 .b) p-N itrofenyl-2,6-di-O-benzy Ι-β-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (4,69 g, 9 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
1.24.d). Po 30 minutách při teplotě místnosti se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny za vakua olejové vývěvy. Rekrystalizací z ethylalkoholu se získá bezbarvá kiystalická látka (2,89 g, 67%); DC [petrolether/petrolether 2 : 1]: Rf = 0,42; t.t. = 133°C [a]20 = -64,2° (c = 1,0/CH3OH).
1.31 .c) p-Nitrofenyl-2,6-di-O-benzyl-3,4-di-O-methyl-p-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (2,4 g, 5 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po rekiystalizaci ze směsi ethylalkoholu a n-hexanu se získá bezbarvá krystalická látka (1,74 g, 69 %); DC [ethylacetát/petrolether 1 : 1]: Rf = 0,74; t.t. = 149 °C.
1.31) p-Aminofenyl-3,4-di-O-methyl-[3-D-galaktopyranosid, acetát
Sloučenina 1.31 .c) (1,52 g, 3 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26). Získá se takto bezbarvá krystalická látka (664 mg, 62 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,47; t.t. = 140 °C (rozklad).
Příklad 1.32 p-Aminofenyl-3,6-di-0-methyl-|3-D-galaktopyranosid ^ch3
O
h3c'°
1.32. a) p-Nitrofenyl-3-O-methyl-6-O-(terc.-butyl-dimethylsilyl)-p-D-galaktopyranosid
Roztok sloučeniny 1.25.a) (1,58 g, 5 mmol) v dimethylformamidu (150 ml) se smísí s imidazolem (1 g, 15 mmol) a terc.-butyldimethylsilyl-chloridem (1,25 g, 8 mmol) a míchá se po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Potom se reakce přídavkem vody (100 ml) ukončí. Reakční směs se zředí dichlormethanem (1000 ml), organická fáze se promyje vodou (2 x 1000 ml), vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého (20 g) a ve vakuu se zahustí. Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 15 : 1 -> 10 : 1 —> 5 : 1] se získá produkt ve formě žlutavé pěnovité látky (826 mg, 38 %), která je ještě lehce znečištěná; DC [ethylacetát]: Rf = 0,65; [a]20 = -56,3° (c = l,0/CH2Cl2).
1.32. b) p-Nitrofenyl-2,4-di-O-benzyl-3-O-methyl-6-O-(terc.-butyldimethylsilyl)-|3-D- galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (446 mg, 0,9 mmol) se benzyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.c). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 30 : 1 -> 5 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (810 mg, 74 %); DC [petrolether/ethylacetát 5 : 1]: Rf = 0,58.
-44CZ 291098 B6
1.32. c) p-Nitrofenyl-2,4-di-0-benzyl-3-0-methyl-p-D-gaiaktopyranosid
Sloučenina 1,32.b) (732 mg, 1,2 mmol) se rozpustí v tetrahydrofuranu (6 ml) a při teplotě 0 °C se smísí s 1M roztokem tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu (2,4 ml). Reakční směs se míchá po dobu 40 minut při teplotě místnosti a potom se ve vakuu zahustí. Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 5 : 1 —> 3 : 1 —> 2 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (512 mg, 86 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]; Rf= 0,58; t.t. = 177 °C.
1.32. d) p-Nitrofenyl-2,4-di-0-benzyl-3,6-di-0-methyl-[3-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (446 mg, 0,9 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě
1.24.c). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 20 : 1 —> 10 : 1 —> 8 :1] se získá produkt ve formě bezbarvé olejovité látky (410 mg, 87%); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf = 0,70; [a]20 = -56,5° (c = O,96/CH2C12).
1.32) p-Aminofenyl-3,6-di-O-methyl-p~D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.32.d) (357 mg, 0,7 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po odpaření spojených filtrátů ve vakuu a rozvaření získaného zbytku s diethyletherem (20 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (207 mg, 99 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf= 0,02; t.t. => 280 °C (rozklad).
Příklad 1.33 p-Aminofenyl-4,6-di-0-methyl-(3-D-galaktopyranosid
1.33 .a) p-Nitrofenyl-2,3-di-O-benzyl-4,6-di-O-methyl-[3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.26.d) (2,4 g, 5 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 5 : 1 —>3 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (1,89 g, 74%); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf= 0,76; t.t. = 100 °C.
1.33) p-Aminofenyl-4,6-di-0-methyl-(3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.33.a) (1,53 g, 3 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (890 mg, 99 %); DC [methylalkohol/ethylacetát 1:1]: Rf= 0,71; t.t. = 180 °C (rozklad).
-45CZ 291098 B6
Příklad 1.34 p-Aminofenyl-2,3,4-tri-0-methyl-[3-D-galaktopyranosid
1.34. a) p-Nitrofenyl-2,3,4-tri-0-methyl-6-0-trifenylmethyl-(3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.24.a) (1,63 g, 3 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 5 : 1 —> 3:1] se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (1,24 g, 71 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf= 0,54; [a]20 = -53,6° (c = 0,3/CH3OH).
1.34. b) p-Nitrofenyl-2,3,4-tri-0-methyl-P-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (1,17 g, 2 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.d). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 3 : 1 —> 2 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (468 mg, 68 %); DC [petrolether/ethylacetát 1:1]: Rf = 0,12; t.t. = 104 °C; [a]20 = -68,2° (c = 0,47/CH3OH).
1.34) p-Aminofenyl-2,3,4-tri-0-methyl-P~D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.34.b) (343 mg, 1 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Získá se takto produkt ve formě béžové krystalické látky (224 mg, 71 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,67; t.t. = 138 °C.
Příklad 1.35 p-Aminofenyl-2,3,6-tri-0-methyl-P-D-galaktopyranosid
1.3 5.a) p-Nitromethyl-2,3,6-tri-O-methyl-P-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.30.b) (2,63 g, 3 mmol) se selektivně methyluje stejně jako je popsáno v příkladě 1.25.a). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 5 : 1 —> 2 : 1] se získá
-46CZ 291098 B6 produkt ve formě hnědavé olejovité látky (890 mg, 32 %); DC [ethylacetát]: Rf= 0,37; [a]20 = -63,3° (c = O,O/CH2C12).
1.35) p-Aminofenyl-2,3,6-tri-0-meth\ Ι-β-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (858 mg, 2.5 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Získá se takto produkt ve formě béžové pěnovité látky (519 mg, 66%); DC [ethylacetát]: Rf = 0,23; [a]20 = -34,5° (c = 0,86/CH3OH).
Příklad 1.36 p-Aminofenyl-2,3,4-tri-0-methyl-P-D-galaktopyranosid
1.36.a) p-Nitrofenyl-2,4,6-tri-O-methyl-3-O-benzyl-f)-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.26.a) (1,96 g, 5 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 10 : 1 —> 8 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (1,47 g, 68 %); DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1]: Rf= 0,46; t.t. = 164 °C.
1.36) p-Aminofenyl-2,4,6-tri-0-methyl-[3-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (1,3 g, 3 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (642 mg, 68 %); DC [ethylacetát/petrolether 2 : 1]: Rf= 0,12; t.t. = 147 °C (rozklad).
Příklad 1.37 p-Aminofenyl-3,4,6-tri-O-methyl-[3-D-galaktopyranosid
-47CZ 291098 B6
1.37. a) p-Nitromethyl-2-0-benzyl-p-D-galaktopyranosid
Frakce 1 z příkladu 1.27.a) (1,17 g, 2 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
1.24. d). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát3 : 1 -> 2 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (468 mg, 68 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rt- = 0,12; t.t. = 104 °C; [a]20 = -68,2° (c = 0,47/CH3OH).
1.37. b) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4,6-tri-0-methyl-|3-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (391 mg, 1 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě
1.24. c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 10 : 1 —> 5 : 1] se získá produkt ve formě světle žluté krystalické látky (303 mg, 70%); DC [ethylacetát]: Rf=0,81; [a]20 =-76,5° (c=l,l/CH2Cl2).
1.37) p-Aminofenyl-3,4,6-tri-O-methyl-[3-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (260 mg, 0,6 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Získá se takto produkt ve formě béžové krystalické látky (161 mg. 86%); DC [ethylacetát]: Rf = 0,20; t.t. = 132 °C.
Příklad 1.38 p-Aminofenyl-2,3,4,6-tetra-0-methyl-p-D-galaktopyranosid
1.38.a) p-Nitrofenyl-2,3,4,6-tetra-0-methyl-P-D-galaktopyranosid p-Nitrofenyl-p-D-galaktopyranosid (904 mg, 3 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 8 : 1 —> 6 : 1 —> 4 : l]se získá produkt ve formě bezbarvé voskovité látky (633 mg, 59 %); DC [ethylacetát]: Rf= 0,67; [a]20 = -55,7° (c = O,9/CH2C12).
1.38) p-Aminofenyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl-(3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.33.a) (536 mg, 1,5 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po odpaření spojených filtrátů ve vakuu a vyvaření získaného zbytku s diethyletherem (20 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (412 mg, 84 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,42; t.t. = 204 °C (rozklad).
-48CZ 291098 B6
Příklad 1.39 p-Aminofenyl-a-mannopyranosid
OH
OH p-Nitrofenyl-a-D-mannopyranosid (3,0 g, 10 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je uvedeno v příkladě 1.23). Vysrážením ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá bezbarvá krystalická látkám (2,03 g, 75 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,69; [a]20 = +102,7° (c = l,0/H2O); t.t. = 161 °C.
Příklad 1.40 p-Aminofenyl-3-O-methyl-a-D-mannopyranosid
1.4O.a) p-Nitrofenyl-6-O-trifenylmethyl-a-D-mannopyranosid p-Nitrofenyl-a-D-mannopyranosid (30 g, 10 mmol) se trityluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.a). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (4,35 g, 80 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,52; [a]20 =+104,0° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 102 až 104 °C.
1.40 .b) p-N itromethy 1-3-O-methy l-6-O~trifenylmethyl~a-D-mannopyranos id
Výše uvedená sloučenina (2,72 g, 5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.a) s methyljodidem (2 ml, 30 mmol). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát2 :1] a přesrážení ze směsi ethylalkoholu a hexanu se získá bezbarvá krystalická látka (1,83 g, 66%); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf= 0,68; [a]20 = +106,4° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 104 °C.
1.40) p-Aminofenyl-3-O-methyl-a-D-mannopyranosid
Sloučenina 1.40.b) (1,4 g, 2,5 mmol) se rozpustí v methylalkoholu (50 ml) a po přídavku palladia na aktivním uhlí (10 % Pd, 300 mg) se hydrogenuje po dobu 24 hodin ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku. Suspenze se přefiltruje přes celit a filtrační koláč se důkladně promyje
-49CZ 291098 B6 methylalkoholem (100 ml). Po zahuštění filtrátu ve vakuu se získaný zbytek vyjme do vody (50 ml), přefiltruje se a filtrát se lyofilizuje. Získá se takto hnědavá emfotemí pevná látka (709 mg, 99 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :3 : 0,2): Rf = 0,33; [a]20 = +92,9° (c = 1,1/CHjOH).
Příklad 1.41 p-Aminofenyl-2,3-di-0-methyl-a-D-mannopyranosid
1.41 .a) p-N itrofenyl-4,6-O-benzyliden-a-D-mannopyranosid
Roztok p-nitrofenyl-a-D-mannopyranosidu (6,0 g, 20 mmol) v dimethylformamidu (120 ml) se smísí s benzaldehyd-dimethylacetalem (3,2 ml, 21,4 mmol) a 54% roztokem kyseliny tetrafluorborité v diethyletheru (2,7 ml, 20 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 5 hodin při teplotě místnosti, potom se reakce ukončí přídavkem triethylaminu (2,8 ml, 20 mmol) a ve vakuu se zahustí. Po mžikové chromatografií [toluen -> toluen/ethylalkohol 20 : 1] se získá bezbarvá krystalická látka (6,48 g, 83 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,82; [a]20 = +170,7° (c = l,0/CH2Cl2); t.t. = 116 °C.
1.41 .b) p-N itrofenyl-2,3-di-O-methyl-4,6-O-benzyliden-a-D-mannopyranosid
Výše uvedená sloučenina (3,9 g, 10 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.C. Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 20 : 1-» 7: 1] a přesrážení ze směsi ethylalkoholu a hexanu se získá bezbarvá pěnovitá látka (3,2 g, 77 %); DC [ethylacetát/petrolether 2 : 1]: Rf = 0,67; [a]20 = +167,3° (c = 1,05/CH3OH).
1.41) p-Aminofenyl-2,3-di-O-methyl-a-D-mannopyranosid
Sloučenina 1.41.b) (1,25 g, 3 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26). Po mžikové chromatografií [ethylacetát/petrolether 2:1-+ ethylacetát se vždy 0,5 % triethylaminu] se získá produkt ve formě červenavě hnědé pěnovité látky (480 mg, 53 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,31; [a]20 = +83,6° (c = 0,76/CH3OH).
-50CZ 291098 B6
Příklad 1.42 p-Am inofeny 1-3-O-methoxykarbony 1 methy Ι-β-D-galaktopyranos id
1.42.a) p-Nitrofenyl-3-O-methoxykarbonylmethyl-P-D-galaktopyranosid
Roztok p-nitrofenyl-p-D-galaktopyranosidu (7,53 g, 25 mmol) v absolutním dioxanu (180 ml) se smísí s dibutylcínoxidem (9,3 g, 37,5 mmol) a reakční směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Po 4 hodinách se získaný roztok smísí s methylesterem kyseliny bromoctové (8,3 ml, 90 mmol) a tetrabutylamoniumjodidem (9,25 g, 25 mmol) a vsázka se míchá další 3 hodiny za varu pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo se potom ve vakuu oddestiluje a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 50 : 1 —> 20 : 1]. Vedle některých vedlejších produktů se získá sloučenina 1.42.a) ve formě bezbarvé krystalické látky (4,05 g, 43 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf = 0,54; [a]20 = -62,0° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 176 °C.
1.42) p-Aminofenyl-3-O-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.42.a) (3,73 g, 10 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je uvedeno v příkladě 1.24). Vysrážením ze směsi ethylalkoholu a n-hexanu se získá bezbarvá krystalická látka (2,98 g, 87 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,39; [a]20 = -36,3° (c = 1,07/CH3OH); t.t. = 155 °C.
Příklad 1.43 p-Aminofenyl-3-O-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosid, sodná sůl
-51 CZ 291098 B6
1.43.a) p-Nitrofenyl-3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosid, sodná sůl
Roztok sloučeniny 1.42.a) (3,73 g, 10 mmol) v methylalkoholu se smísí s roztokem hydroxidu sodného (400 mg, 10 mmol) ve vodě (5 ml) a míchá se po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek suší po dobu 2 hodin ve vakuu olejové vývěvy a potom se smísí s ethylalkoholem (100 ml). Reakční směs se zahřívá kvaru pod zpětným chladičem po dobu 5 minut, po ochlazení v ledové lázni se přefiltruje a získá se bezbarvá krystalická látka (366 g, 96 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,62; [a]20 = -50,0° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 180 až 185 °C.
1.43) p-Aminofenyl-3-O-karboxymethyl-|3-D-galaktopyranosid, sodná sůl
Výše uvedená sloučenina (3,05 g, 8 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po vyvaření s ethylalkoholem (50 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (2,03 g, 72 %); DC [methylalkohol]: Rf= 070; [a]20 =-22,4° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 180 až 182 °C.
Příklad 1.44 p-Aminofenyl-3-0-karbamoylmethyl-[3-D-galaktopyranosid
1.44.a) p-Nitrofenyl-3-0-karbamoylmethyl-[3-D-galaktopyranosid
Roztok sloučeniny 1.42.a) (373 mg, 1 mmol) v methylalkoholu (30 ml) se smísí s 25% vodným roztokem amoniaku (10 ml) a reakční směs se míchá po dobu 15 minut při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek suší po dobu 2 hodin za vakua olejové vývěvy a potom se smísí s ethylalkoholem (30 ml). Potom se vaří po dobu 5 minut pod zpětným chladičem, po ochlazení na ledové lázni se přefiltruje a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (306 mg, 85 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf= 0,14; [a]20 = -41,7° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 229 °C (rozklad).
1.44) p-Aminofenyl-3-O-karbamoylmethyl-[3-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (287 mg, 0,8 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po vysrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (207 mg, 79 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,10; t.t. = 205 °C (rozklad).
-52CZ 291098 B6
Příklad 1.45 p-Aminofenyl-3-O-(N-inethyl-karbamoylmethyl)-p-D-galaktopyranosid
H
1.45.a) p-Nitrofenyl-3-0-(N-methyl-karbamoylmethyl)-P-D-galaktopyranosid
Roztok sloučeniny 1.42.a) (373 mg, 1 mmol) v methylalkoholu (30 ml) se smísí se 30% vodným roztokem methylaminu (10 ml) a míchá se po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek suší po dobu 2 hodin ve vakuu olejové vývěvy a potom se překrystalizuje z ethylalkoholu. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (372 mg, 100%); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :3 : 0,2]: Rf = 0,33; [a]20 = -36,7° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 205 °C.
1.45) p-Aminofenyl-3-0-(N-methyl-karbamoylmethyl)-[3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.45.a) (298 mg, 0,8 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po vysrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (180 mg, 66 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak(25%) 15:3: 0,2]: Rf= 0,16; t.t. = 239 °C.
Příklad 1.46 p-Aminofenyl-3-O-(N-propyl-karbamoylmethyl)-p-D-galaktopyranosid
OH
H
-53CZ 291098 B6
1.46.a) p-Nitrofenyl-3-0-(N-propyl-karbamoylmethyl)-p-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.42.a) (373 mg, 1 mmol) se nechá stejně jako je popsáno v příkladě 1.45.a) reagovat s n-propylaminem (823 μΐ, 10 mmol). Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek přesráží ve směsi ethylalkoholu a n-hexanu. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (340 mg, 85 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,49; [a]20 = -32,4° (c = 0,1/CH3OH); t.t. = 155 °C. '
1.46) p-Aminofenyl-3-0-(N-propyl-karbamoylmethyl)-p-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.46.a) (320 mg, 0,8 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po vysrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (188 mg, 63 %): DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf= 0,31; t.t.= 154 °C.
Příklad 1.47 p-Aminofenyl-3-0-(N-butyl-karbamoylmethyl)-P-D-galaktopyranosid
H
1.47.a) p-Nitrofenyl-3-0-(N-butyl-karbamoylmethyl)-|3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.42.a) (373 mg, 1 mmol) se nechá stejně jako je popsáno v příkladě 1.45.a) reagovat s n-butylaminem (900 μΐ, 10 mmol). Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek přesráží ve směsi ethylalkoholu a n-hexanu. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (413 mg, 100 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,51; [a]20 = -26,8° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 92 °C.
1.47) p-Aminofenyl-3-O-(N-butyl-karbamoylmethyl)-3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.47.a) (332 mg, 0,8 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po vysrážení ze směsi ethylalkoholu a n-hexanu se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (105 mg, 34 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,32; t.t.= 135 °C.
-54CZ 291098 B6
Příklad 1.48 p-Aminofenyl-3-O-methoxykarbonylmethyl-a-D-mannopyranosid
1.48.a) p-Nitrofenyl-3-O-methoxykarbonylmethyl-a-D-mannopyranosid
Sloučenina 1.40.a) (13,6 g, 25 mmol) se nechá reagovat stejně jako je popsáno v příkladě 1.42.a). Po mžikové chromatografií se získá takto vedle někteiých vedlejších produktů produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (2,79 g, 18 %); DC [ethylacetát/petrolether 2 : 1]; Rf=0,50; t.t. = 95 až 97 °C.
1.48) p-Aminofenyl-3-0-methoxykarbonylmethyl-<x-D-mannopyranosid
Sloučenina 1.48.a) (1,23 g, 2 mmol) se hydrogenuje a zpracuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.40). Získá se takto produkt ve formě hnědavé amorfní pevné látky (250 mg, 36 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]; Rf = 0,45.
Příklad 1.49 p-Aminofenyl-3-O-karboxymethyl-a-D-mannopyranosid
1.49.a) p-Nitrofenyl-3-0-benzoxykarbonylmethyl-6-0-trifenylmethyl-a-D-mannopyranosid
Sloučenina 1.40.a) (13,6 g, 25 mmol) se nechá reagovat stejně jako je popsáno v příkladě 1.42.a) s benzylesterem kyseliny bromoctové (14,4 ml, 90 mmol). Po mžikové chromatografií [petroiether/ethylacetát 20 : 1 —> 10 : 1] se získá takto vedle některých vedlejších produktů
-55CZ 291098 B6 produkt ve formě žlutavé pěnovité látky (5,0 g, 29 %); DC [ethylacetát/petrolether 2 :1]: Rf = 0,66; [a]20 = +74,8° (c = 1,0/CH2Cl2).
1.49) p-Aminofenyl-3-O-karboxymethyl-a-D-mannopyranosid
Sloučenina 1.49.a) (2,08 g, 3 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.40) po dobu 36 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek přesráží ze směsi ethylalkoholu a n-hexanu. Promytím ethylacetátem a novým přesrážením ze směsi ethylalkoholu adiethyletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (485 mg, 50 %); DC [methyl10 alkohol]: Rf= 0,53; t.t. = 205 až 207 °C.
Příklad 1.50 p-Aminofenyl-3-O-karbamoylmethyl-a-D-mannopyranosid
OH
1.50.a) p-Nitrofenyl-3-0-karbamoylmethyl-6-0-trifenylmethyl-a-mannopyranosid
Sloučenina 1.49.a) (1,04 g, 1,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 20 1.44.a). Po usušení ve vakuu olejové vývěvy se získaný zbytek čistí pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 2 : 3]. Získá se takto produkt ve formě bílé krystalické látky (561 mg, 62 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,67; [a]20 = +91,3° (c = 1,O/CH2C12); t.t. = 125 až 127 °C.
1.50) p-Aminofenyl-3-O-karbamoylmethyl-a-D-mannopy ranosid
Výše uvedená sloučenina (541 g, 0,9 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.40) po dobu 48 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek důkladně promyje methylalkoholem a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (134 mg, 45 %); 30 DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,21; t.t. = 126 až 128 °C.
-56CZ 291098 B6
Příklad 1.51 p-Aminofenyl-3-desoxy-p-D-galaktopyranosid
OH
1.51.a) p-Nitrofenyl-2,6-di-O-benzyl-4-O-acetyl-p-D-galaktopyranosid
Roztok sloučeniny 1.31 .b) (2,7 g, 56 mmol) v dichlormethanu (20 ml) se smísí s triethylorthoacetátem (3 ml, 16,3 mmol) a kyselinou toluensulfonovou (20 mg). Po 30 minutách při teplotě místnosti se vsázka zředí dichlormethanem (200 ml), promyje se nasyceným roztokem ío hydrogenuhličitanu sodného (50 ml), organická fáze se vysuší pomocí bezvodého síranu hořečnatého a po filtraci se ve vakuu zahustí. Získaná bezbarvá pěnovitá látka se rozpustí v 80% kyselině octové (15 ml). Po dalších 30 minutách při teplotě místnosti se vlije vsázka do nasy ceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (200 ml), extrahuje se chloroformem (3x75 ml), spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší se pomocí bezvodého síranu 15 hořečnatého a po filtraci se ve vakuu zahustí. Vysrážením ze směsi ethylalkoholu a petroletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (2,43 g, 83 %); DC [ethylacetát/petrolether 2:1]: Rf = 0,64; [a]20 = -62,1° (c = l,0/CH2Cl2); t.t. = 83 °C.
1.51 .b) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-benzyl-3-0-trifluormethansulfonyl-4-0-acetyl-[3-D-gala20 ktopyranosid
Roztok sloučeniny 1.51.a) (2,3 g, 4,4 mmol) ve směsi dichlormethanu (30 ml) a pyridinu (3 ml) se pod argonovou atmosférou při teplotě -20 °C po kapkách smísí s roztokem anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové (2 ml, 11,8 mmol) v dichlormethanu (30 ml). Po jedné hodině při teplotě 25 -20 °C se vlije vsázka do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (200 ml), organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a po filtraci se ve vakuu zahustí.
Po mžikové chromatografií získaného zbytku [toluen -> toluen/ethylacetát 20 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (2,39 g, 83%); DC [toluen/ethylacetát 5 : 1]: Rf = 0,55; [a]20 = -61,4° (c = l,0/CH2Cl2); t.t. = 105 °C.
1.51 .c) p-Nitrofenyl-2,6-di-O-benzyl-3-desoxy-[3-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (1,31 g, 2 mmol) se rozpustí v toluenu (25 ml) a smísí se s tetrabutylamonium-tetraborhydrátem (1,54 g, 6 mmol). Po 2 hodinách při teplotě 80 °C se vsázka zředí 35 dichlormethanem (200 ml), promyje se jednou vodou (50 ml), organická fáze se vysuší pomocí bezvodého síranu hořečnatého a po filtraci se ve vakuu zahustí. Po mžikové chromatografii získaného zbytku [toluen/ethylacetát 7 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (596 mg, 64%); DC [toluen/ethylacetát 5 : 1]: Rf= 0,10; [a]20 = -81,3° (c = l,0/CH2Cl2); t.t.= 14 °C.
1.51) p-Aminofenyl-3-desoxy-[3-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (465 mg, 1 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě
1.40) po dobu 6 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek přesráží ze směsi ethylalkoholu 45 a petroletheru a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (206 mg, 81 %);
DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf= 0,22.
-57CZ 291098 B6
Příklad 1.52 p-Aminofenyl-3,4-didesoxy-P-D-galaktopyranosid
OH
1.52.a) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-benzyl-3,4-di-0-trifluormethansulfonyl-|3-D-galaktopyranosid
Sloučenina 1.3l.b) (2,12 g, 4,4 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
1.51. b) s anhydridem kyseliny trifluormethansulfonové (4 ml, 23,6 mmol). Po mžikové chromatografií získaného zbytku [toluen -> toluen/ethylacetát 50 : 1] se získá produkt ve formě žlutavé olejovité látky (2,75 g, 84 %); DC [toluen/ethylacetát 5 : 1]: Rf= 0,67; [a]20 = -22,5° (c = 1,O/CH2C12).
1.52. b) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-benzyl-3,4-didesoxy-[3-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (1,49 g, 2 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.51.c), s tetrabutylamonium-tetraborhydrátem (2,31 g. 9 mmol). Po mžikové chromatografii získaného zbytku [toluen-> toluen/ethylacetát 50: 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (629 mg, 70 %); DC [toluen/ethylacetát 5 : 1]: Rf = 0,53; [a]20 = -79,1° (c = 1,O/CH2C12); t.t. = 89 °C.
1.52) p-Aminofenyl-3,4-didesoxy-P~D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (450 mg, 1 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě
1.40) po dobu 5 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek přesráží ze směsi ethylalkoholu a petroletheru a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (183 mg, 76 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf= 0,22; [a]20 = -115,1° (c = 1,0/CHjOH); t.t. = 187 °C.
Příklad 1.53 p-Aminofenyl-6-O-acetyl-P~D-galaktopyranosid
-58CZ 291098 B6
1.53.a) p-Nitrofenyl-6-0-acetyl-|3-D-galaktopyranosid
Roztok p-nitrofenyl-p-D-galaktopyranosidu (7,53 g, 25 mmol) v absolutním acetonitrilu (80 ml) se při teplotě 0 °C po kapkách smísí s čerstvě připraveným roztokem z pyridinu (2 ml, 25 mmol) a acetylchloridu (1,85 ml, 26 mmol) v acetonitrilu (20 ml). Reakční směs se míchá po dobu 30 minut při teplotě 0 °C a potom se ve vakuu zahustí. Po mžikové chromatografii získaného zbytku [dichlormethan/methylalkohol 50 : 1 —> 20 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (4,02 g, 47 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf = 0,50.
1.53) p-Aminofenyl-6-O-acetyl-p-D-galaktopyranosid
Výše uvedená sloučenina (1,72 g, 5 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě
1.40) po dobu 2 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek přesráží ze směsi methylalkoholu a diethyletheru a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (1,34 g, 86 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf =0,34; [a]20 = -41,0° (c = 0,56/CH3OH); t.t. = 187 °C (rozklad).
Příklad 1.54 p-Aminofenyl-3,4-di-0-methoxykarbonylmethyl-[3-D-galaktopyranosid
NHj
1.54,a) Acylace sloučeniny 1.24.a)
Sloučenina 1.24.a) (1,36 g, 3 mmol) se rozpustí v dimethylformamidu (25 ml) a smísí se s methylesterem kyseliny bromoctové (1 ml, 10,6 mmol) a po částech s 80% suspenzí hydridu sodného v minerálním oleji (300 mg, 10 mmol). Po 3,5 hodinách při teplotě místnosti se přidá znovu methylester kyseliny octové (250 μΐ, 2,65 mmol) a hydrid sodný v minerálním oleji (75 mg, 2,5 mmol). Po dalších 2 hodinách se reakce ukončí přikapáním methylalkoholu (5 ml) a ve vakuu se reakční směs zahustí. Získaný zbytek se vyjme do dichlormethanu (250 ml) a roztok se důkladně rozmíchá s vodou (100 ml). Organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého (10 g), zahustí se ve vakuu a čistí se pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 10 : 1 —> 7 : 1 —> 5 : 1 —> 3 : 1]. Získají se takto tři frakce produktů:
Frakce 1: p-Nitrofenyl-2,3,4-tri-0-methoxykarbonylmethyl-[3-D-galaktopyranosid; bezbarvá pěnovitá látka (401 mg, 21 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf = 0,47; [a]20 = -51,9° (c = 0,26/CH3OH).
Frakce 2: neidentifikováno; bezbarvá pěnovitá látka (88 mg); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf = 0,39; [a]20 = -61,5° (c = 0,26/CH3OH).
-59CZ 291098 B6
Frakce 3: p-Nitrofenyl-3,4-di-0-methoxykarbonylmethyl-[3-D-galaktopyranosid; bezbarvá pěnovitá látka (275 mg, 16 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf= 0,30; [a]20 = -38,6° (c = 0,28/CH3OH).
1.54) p-Aminofenyl-3,4-di-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosid
Frakce 3 z příkladu 1.54.a) (206 mg, 0,3 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě
1.40) po dobu 16 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek rozvaří s diethyletherem (20 ml) a získá se takto produkt ve formě šedé krystalické látky (45,6 mg, 37 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf= 0,22; t.t. - 155 °C (rozklad).
Příklad 1.55 p-Aminofenyl-2,3,4-tri-O-methoxykarbonylmethyl-[3-D-galaktopyranosid
OH
Frakce 1 z příkladu 1.54.a) (380 mg, 0,5 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě 1,40) po dobu 16 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek rozvaří s diethyletherem (20 ml) a získá se takto produkt ve formě žlutohnědé olejovité látky (46,8 mg, 19 %); DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf = 0,29; t.t. = 106 °C (rozklad).
Příklad 1.56 p-Aminofenyl-4-O-(P-D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid
p-Nitrofenyl-4-0-([3-D-galaktopyranosyl)-[3-D-galaktopyranosid (4,63 g, 10 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.23). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (3,04 g, 70 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,55; t.t. = 235 až 237 °C (rozklad).
-60CZ 291098 B6
Příklad 1.57 p-Aminofenyl^4-0-(3'-sulfát-p-D-galaktopyranosyl)-|3-D-glukopyranosid, sodná sůl
1.5 7.a) p-N itrofenyl-4-O-(3 ',4'-0-izopropyl iden-[3-D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid p-NitrofenyM-O-([3-D-galaktopyranosyl)-|3-D-glukopyranosid (23,2 g, 50 mmol) se smísí ío s dimethoxypropanem (400 ml) a katalytickým množstvím kyseliny (±)-camfer-10-sulfonové (400 mg, 1,7 mmol). Po 3 dnech při teplotě místnosti se reakce ukončí přídavkem trimethylaminu (240 μΐ, 1,7 mmol), ve vakuu se zahustí a získaný zbytek se suší po dobu 2 hodin ve vakuu olejové vývěvy. Získaná krystalická látka se vyjme do směsi methylalkoholu a vody 10 :1 (500 ml) a vaří se po dobu 6 hodin pod zpětným chladičem. Po zahuštění ve vakuu a mžikové 15 chromatografií získaného zbytku [dichlormethan/methylalkohol 25 : 1 —> 10 : 1, vždy s 0,5 % triethylaminu] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (15,2 g, 60 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,49; t.t. = 253 až 255 °C (rozklad).
1.57. b) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-0-benzoyl-4-0-(2',6'-di-0-benzoyl-3',4'-0-izopropyliden- [3-D-galaktopyranosyl)-|3-D-glukopyranosid
K roztoku sloučeniny 1.57.a) (15,1 g, 30 mmol) v pyridinu (300 ml) se při teplotě 0° pomalu přikape v průběhu 30 minut benzoylchlorid (50 ml, 430 mmol). Reakční směs se nechá míchat po dobu 2 hodin při teplotě místnosti a potom se vlije za míchání do ledové vody (2000 ml). Po 25 15 minutách se vysrážené krystaly odfiltrují a vyjmou se do dichlormethanu (1 500 ml). Roztok se potom promyje vodou (2x 500 ml) a 1N roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x 500 ml), organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého (50 g), zahustí se ve vakuu a čistí se krystalizací z methylalkoholu. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (26,7 g, 87 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 50:1]: Rf=0,49;
[a]20 = +23,6° (c = 1,O8/CH2C12); t.t. = 272 až 274 °C.
1.57. c) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-0-benzoyl-4-0-(2',6'-di-0-benzoyl-p-D-galaktopyrano- sylj-P-D-glukopyranosid
Roztok sloučeniny 1.57.b) (20,5 g, 20 mmol) v dichlormethanu (400 ml) se smísí s 99% kyselinou trifluoroctovou (20 ml) a reakční směs se míchá po dobu 20 minut při teplotě místnosti. Potom se promyje 1N roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x 200 ml), organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého (10 g), zahustí se ve vakuu a získaný zbytek se čistí přesrážením ze směsi dichlormethanu a diethyletheru. Získá se takto produkt ve
-61CZ 291098 B6 formě bezbarvé krystalické látky (18,0 g, 91 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1]: Rf= 0,18; t.t. = 234 °C.
1.57. d) p-Nitrofeny)-2,3,6-tri-O-benzoyl—4-O-(2',6'-di-O-benzoyl-4'-O-acetyl-P-D- galaktopyranosyl)~p-D-glukopyranosid
Sloučenina 1.57.c) (5,5 g, 5,6 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.51,a) a po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 3 : 1 -> 1 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (4,03 g, 70 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 20: 1]: ío Rf= 0,67; t.t. = 118 °C.
1.57. e) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-0-benzoyl-4-0-(2',6'-di-0-benzoy]-3'-sulfát-4'-0-acetyl- [3-D-galaktopyranosyl)-|3-D-glukopyranosid, sodná sůl
Roztok sloučeniny 1.57.d) (3,59 g, 3,5 mmol) v pyridinu (200 ml) se smísí s komplexem oxid sírový-pyridin (4,5 g, 28 mmol) a míchá se nejprve po dobu 2 hodin při teplotě 60 °C a potom po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se reakce ukončí přikapáním methylalkoholu (50 ml) a reakční směs se ve vakuu zahustí. Získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10: 1]. Získá se takto pevný produkt, který se vyjme do směsi 20 dichlormethanu a methylalkoholu 1 : 1 (200 ml) a smísí se s Amberlite 1R120 (Na+-forma, 10 g).
Tato směs se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti, přefiltruje se a filtrát se ve vakuu zahustí. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (3,64 g, 92 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 2:1]: Rf = 0,87; t.t. = 168 °C.
1.57.f) p-Nitrofenyl-4-0-(3'-sulfát-p-D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid, sodná sůl
Sloučenina 1.57.e) (3,4 g, 3 mmol) se rozpustí v absolutním methylalkoholu (150 ml), smísí s methylátem sodným (200 mg) a míchá se po dobu 7 hodin při teplotě 60 °C. Po ochlazení na teplotu místnosti se neutralizuje pomocí Lewatitu SC108 (IT-forma) a potom se přefiltruje. 30 Hodnota pH filtrátu se zvýší přikapáním IN hydroxidu sodného na pH 7 až 8, ve vakuu se odpaří a vysrážením ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě lehce nahnědlé krystalické látky (1,30 g, 77 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 2 : 1]: Rf= 0,55; t.t. = 230 °C (rozklad).
1.57) p-Aminofenyl-4-O-(3'-sulfát-p-D-galaktopyranosyl)-[3-D-glukopyranosid, sodná sůl
Výše uvedená sloučenina (1,13 g, 2 mmol) se redukuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.24).
Po rozvaření s diethyletherem (50 ml) získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky 40 (983 mg, 92 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,22; t.t. = 176 °C (rozklad).
-62CZ 291098 B6
Příklad 1.58 p-Aminofenyl-4-0-(3'-0-methyl-(3-D-galaktopyranosyl)-P-D-glukopyranosid
1.58.a) Selektivní methylace p-nitrofenyl-4-O-([3-D-galaktopyranosyl)-P-D-glukopyranosid p-Nitrofenyl-4-0-(P-D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid (2,3 g, 5 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.25.a). Pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 —> 10 : 1 —> 5 : 1 ] se získají dva produkty:
Frakce 1: p-Nitrofenyl-2-O-methyl-4-O-(3'-O-methyl-|3-D-galaktopyranosyl)-[3-Dglukopyranosid; bezbarvé krystaly (264 mg. 11 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,46; [a]20 = -73,9° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 228 °C (rozklad).
Frakce 2: p-NitrofenyM-0-(3'-0-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid; bezbarvé krystaly (1,0 g, 11 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf0,29; [a]20 = -65,3° (c = 1,1/CHjOH); t.t. = 220 °C.
1.58) p-Aminofeny 1-4-0-(3 '-O-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid
Frakce 2 z příkladu 1.58.a) (955 mg, 2 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po promytí diethyletherem (50 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (894 mg, 100 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5:1]: Rf = 0,08; t.t. = 129 °C (rozklad).
Příklad 1.59 p-Aminofenyl-2-O-methyl—4-0-(3'-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid
-63CZ 291098 B6
Frakce 1 z příkladu 1.58.a) (246 mg, 0,5 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Po promytí diethyletherem (50 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (186 mg, 81%); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf=0,13;
[a]20 = -3,6° (c = 1,0/CH3OH); t.t. = 105 °C.
Příklad 1.60 p-Aminofenyl-4-0-(3',4'-di-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid
OH
1.60. a) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-0-benzyl-4-0-(2',6'-di-0-benzyl-3',4'-0-izopropyliden-p-
D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid
Sloučenina 1.57.a) (5,0 g, 10 mmol) se nechá reagovat s benzylbromidem (30 ml, 250 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.c) po dobu 16 hodin. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vyjme do ethylesteru kyseliny octové (300 ml) a získaný roztok se promyje vodou (200 ml). Organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého (10 g), zahustí se ve vakuu a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/petrolether 5 : 1 -> dichlormethan]. Získá se takto produkt ve formě hnědavé olejovité látky (5,3 g, 56 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 50 :l]:Rf=0,70; [a]20 = -23,2° (c=1,0/CH2C12).
1.60. b) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-0-benzyl-4-0-(2',6'-di-0-benzyl-p-D-galaktopyranosyl)- β-D-glukopyranosid
Výše uvedená sloučenina (4,77 g, 5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.57.c). Po zahuštění ve vakuu a přesrážení ze směsi diethyletheru a petroletheru se takto získá produkt ve formě bezbarvé kiystalické látky (3,94 g, 86 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 50 : 1]: Rf = 0,36; t.t. = 116 °C.
1.60. c) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(2',6'-di-O-benzyl-3',4'-O-methyl-p-D- galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosid
Výše uvedená sloučenina (1,8 g, 2 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po zahuštění ve vakuu a přesrážení ze směsi dichlormethanu a petroletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (1,55 g, 82 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 50 : 1]: Rf=0,74; t.t. = 161 až 162 °C.
1.60) p-Aminofenyl-4-O-(3 ',4'-di-0-methyl-|3-D-galaktopyranosyl)-[3-D-glukopyranosid
-64CZ 291098 B6
Sloučenina 1.60.c) (1,41 g, 1.5 mmol) se rozpustí v methylalkoholu (50 ml) a po přídavku hydroxidu palladnatého na uhlí (vlhký, 20 % Pd, 500 mg) se hydrogenuje po dobu 6 dnů ve vodíkové atmosféře za nepatrného přetlaku. Suspenze se přefiltruje přes celit a filtrát se důkladně promyje methylalkoholem (100 ml). Po zahuštění filtrátu ve vakuu a promytí získaného zbytku dichlormethanu se získá produkt ve formě hnědavé kry stalické látky (425 mg, 61 %); t.t. 124 °C (rozklad).
Příklad 2.1
N-Alanyl-batracylin
2.1 .a) N-[N-(terc.-butoxykarbonyl)-alanyl]-batracylin
N-(terc.-butoxykarbonyl)-alanin (3,3 g, 17,5 mmol) a 2-izobutoxy-l-izobutoxykarbonyl-l,2dihydro-chinolin (6,8 ml, 23 mmol) se rozpustí ve 100 ml dichlormethanu. Po dvacetiminutovém míchání při teplotě místnosti se přidá roztok batracylinu (4,1 g, 16,5 mmol) v absolutním dimethylformamidu (350 ml) a vsázka se míchá po dobu 48 hodin při teplotě místnosti. Potom se ve vakuu zahustí na objem 50 ml, doplní se ethylesterem kyseliny octové na objem 300 ml a ihned se zahřeje na 10 minut kvaru. Potom se nechá vychladnout na teplotu místnosti, přefiltruje se a filtrační koláč se znovu vyvaří s ethylesterem kyseliny octové (200 ml). Ochlazením za míchání na teplotu 0 °C a po filtraci se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (6,18 g, 84 %); DC [ethylacetát]: Rf= 0,57; t.t. = 246 až 247 °C (rozklad).
2.1) N-Alanyl-batracylin
Roztok sloučeniny 2.1.a) (10,5 g, 25 mmol) v bezvodé kyselině trifluoroctové (150 ml) se míchá po dobu 15 minut při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu na objem 30 ml se vsázka za silného míchání vlije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (1000 ml). Míchá se ještě dále po dobu 10 minut, načež se směs promyje vodou, malým množstvím izopropylalkoholu a diethyletheru. Produkt vypadne ve formě žluté krystalické látky (7,15 g, 89 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,06; t.t. = 261 až 262 °C (rozklad).
Příklad 2.2
N-(Lysyl-alanyl)-batracylin, di-trifluoracetát
CFjCOOH H2N
-65CZ 291098 B6
2.2.a) N[Nalfa,Nepsllon-di(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-alanyl]-batracylin
N,N-Di-(terc.-butoxykarbonyl)-lysin (2,1 g, 6 mmol) a 2-izobutoxy-l-izobutoxykarbonyl-l,2dihydro-chinolin (2,4 ml, 8 mmol) se rozpustí ve 20 ml dichlormethanu. Po dvacetiminutovém míchání při teplotě místnosti se přidá roztok sloučeniny 2.1) (1,6 g, 5 mmol) vdimethylformamidu (40 ml) a reakční směs se míchá po dobu dalších 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 2 : 1 -> 1 : 1 -> ethylacetát). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (2,89 g, 89 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,52; t.t. = 203 až 204 °C.
2.2) N-(Lysyl-alanyl)-batracylin, di-trifluoracetát
Suspenze výše uvedené sloučeniny (2,6 g, 4 mmol) v dichlormethanu (25 ml) se smísí sbezvodou kyselinou trifluoroctovou (10 ml) a získaný roztok se míchá po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vykrystalizuje přídavkem diethyletheru (100 ml). Sraženina se potom odfiltruje a důkladně se promyje diethyletherem. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (2,68 g, 99 %); DC [ethylacetát]: Rf= 0,05; t.t. = 144 až 146 °C (rozklad).
Příklad 2.3
N-(D-Alanyl)-batracylin
2.3 .a) N-(N-benzyloxykarbonyl-D-alanyl)-batracylin
N-Benzyloxykarbonyl-D-alanin (3,9 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat a zpracuje stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Získaná žlutá krystalická látka (6,4 g, 80 %) se oddělí filtrací a spojené filtráty se po zahuštění ve vakuu čistí pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 3 :2 —> 1 : 1]. Získá se takto dalších 1,35 g produktu (17 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,45; [a]20 = +75,1° (c = 1,O/CH2C12 + 0,5 % C3OH).
2.3) N-(D-Alanyl)-batracylin
Sloučenina 2.3.a) (11,4 g, 25 mmol) se rozpustí ve 33% roztoku bromovodíku v ledové kyselině octové (100 ml). Po 30 minutách při teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu zahustí na objem 30 ml, načež se za silného míchání vlije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (1 000 ml). Reakční směs se míchá dalších 10 minut, produkt se odfiltruje a promyje se vodou, malým množstvím izopropylalkoholu a diethyletherem. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (7,87 g, 98 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,06; t.t. = 267 °C (rozklad).
Příklad 2.4
N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylin
-66CZ 291098 B6
2.4.a) N-[N-alfa-(terc.-butoxykarbonyl)-Nepsllon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-Dalanylj-batracylin
N^-fterc.-butoxykarbonylj-N^^-ífluorenyl-O-methoxykarbonylj-lysin (5,3 g, 11,3 mmol) a 2-izobutoxy-l-izobutoxykarbonyl-l,2-dihydro-chinolin (4 ml, 14 mmol) se rozpustí ve 40 ml dichlormethanu. Po dvacetiminutovém míchání při teplotě místnosti se přidá roztok sloučeniny (2.3) (3,2 g, 10 mmol) v dimethylformamidu (80 ml) a reakční směs se míchá po dobu dalších 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suspenduje v dichlormethanu (100 ml). Získaná suspenze se doplní diethyletherem na objem 300 ml. Po odfiltrování a promytí filtračního koláče diethyletherem se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (5,65 g, 65 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,45; t.t. = 186 °C.
2.4) N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylin
Výše uvedená sloučenina (5,6 g, 7,3 mmol) se rozpustí v dimethylformamidu (50 ml). Po přídavku piperidinu (50 ml) se míchá po dobu 3 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :3 : 0,1 —> 15 : 5 : 0,1]. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (2,5 g, 62 %); t.t. = 217 °C (rozklad).
Příklad 2.5
N-[Nalfi,-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylin, trifluoracetát
2.5 .a) N-[Nalfa-(fluorenyl-9-methoxykarbony l)-Nepsilon-(terc .-butoxykarbony 1)—ly sy 1-Dalanyl]-batracylin
Nalfa-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-Nepsllon-(terc.-butoxykarbonyl)-lysin (5,3 g, 11,3 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.4.a). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (7,0 g, 80 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,51; t.t. = 223 °C.
2.5) N-[Nalfa-(fluorfenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylin, trifluoracetát
-67CZ 291098 B6
Sloučenina 2.5.a) (6,17 g, 8 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2). Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vysráží ze směsi dichlormethanu a diethyletheru a produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (6,08 g, 97 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,05; t.t. = 224 °C (rozklad).
Příklad 2.6
N-[Xípsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyi)-lysyl-D-alanyl]-batracylin, trifluoracetát
Sloučenina 2.4.a) (6,17 g, 8 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2). Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vysráží ze směsi dichlormethanu a diethyletheru a produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (5,97 g, 95 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,04; t.t. = 188 °C (rozklad).
Příklad 2.7
N-(Lysyl-D-asparagyl)-batracylin, di-trifluoracetát
2.7.a) N-[N-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-D-asparagyl-(|3-terc.-butylester)]-batracylin
N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-D-asparagyl-(p-terc.-butylester) (2,7 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1). Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vyjme do dichlormethanu (1 000 ml) a promyje se IN kyselinou chlorovodíkovou (2x 200 ml) a IN roztokem hydrogenuhličitanu sodného (lx 200 ml). Po vysušení pomocí bezvodého síranu hořečnatého (20 g), filtraci, zahuštění na objem 100 ml a přídavku petroletheru vypadne sloučenina 2.7.a) ve formě žluté krystalické látky (9,7 g, 86 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,71; t.t. = 195 °C.
2.7.b) N-[D-Asparagyl-(|3-terc.-butylester)]-batracylin
-68CZ 291098 B6
Výše uvedená sloučenina (6,4 g, 10 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (100 ml). Po přídavku morfolinu (50 ml) se reakční směs míchá po dobu 5 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/petrolether4 : 1 -> ethylacetát-» ethylacetát/ethylalkohol 109 : 1). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (3,44 g, 82 %); DC [ethylacetát)]: Rf= 0,21; t.t. = 209 °C.
2.7.c) N-[Nalfa,Nepsilon-di-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-asparagyl-(p-terc.-butylester)batracylin
Sloučenina 2.7.b) (2,1 g, 5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2.a). Produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (1,71 g, 46%); DC [ethylacetát]: Rf=0,61; t.t. = 142 °C.
2.7) N-(Lysyl-D-asparagyl)-batracylin, di-trifluoracetát
Sloučenina 2.7.c) (1,65 g, 2,2 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2). Produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (1,5 g, 95%); DC [methylalkohol/kyselina octová 10 : 1]: Rf= 0,29; t.t. = 154 až 155 °C (rozklad).
Příklad 2.8
N-(lysyl-D-glutamyl)-batracylin, di-hydrobromid
2.8.a) N-[N-(terc.-butoxykarbonyl)-D-glutamyl-(p-benzylester)]-batracylin
N-(Terc.-butoxykarbonyl)-D-glutamyl-(P-benzylester) (5,9 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Po zahuštění ve vaku se získaný zbytek čistí pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 1:1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (9,45 g, 95%); DC [ethylacetát]: Rf= 0,61; [a]20 = +53,1° (c = 1,O/CH2C12); t.t. = 159 °C.
2.8.b) N-[D-Glutamyl-([3-benzylester)]-batracylin
Sloučenina 2.8.a) (9,1 g, 10 mmol) se rozpustí v kyselině mravenčí (100 ml) a roztok se míchá po dobu 6 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vyjme do methylalkoholu (100 ml) a hodnota pH roztoku se upraví opatrným přídavkem 25% vodného roztoku amoniaku na 8. Po novém zahuštění ve vakuu a následující mžikové chromatografií [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1] se získá produkt ve formě žluté olejovité kapaliny (4,2 g, 56 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,06.
-69CZ 291098 B6
2.8 .c) N-[Nalfa,Neps,lon-D i-(terc .-butoxykarbony 1)—ly sy 1-D-glutamy l-( β-benzy lester)]-batracylin
Výše uvedená sloučenina (3,75 g, 8 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2.a). Produkt se získá ve formě žluté amorfní látky (2,26 g, 35 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,40; [a]20 = +32,1° (c = 1,2/CH2C12).
2.8) N-(lysyl-D-glutamyl)-batracylin, di-hydrobromid
Sloučenina 2.8.c) (2,0 g, 2,5 mmol) se rozpustí ve 33% roztoku bromovodíku v ledové kyselině octové (50 ml). Po jedné hodině při teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu zahustí a získaný zbytek se důkladně promyje diethyletherem. Produkt se vysráží ve formě žlutočervených krystalů (1,63 g, 98 %); t.t. = 207 až 209 °C (rozklad).
Příklad 2.9
N-[Lysyl-glycyl]-batracylin, di-trifluoracetát
2.9. a) N-[N-(terc.-butoxykarbonyl)-glycyl]-batracylin
N-(Terc.-butoxykarbonyl)-glycin (3,07 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Po 3 dnech při teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu odpaří a získaný zbytek se vyjme do ethylalkoholu (200 ml). Po třicetiminutovém míchání za varu pod zpětným chladičem a filtraci po ochlazení se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (4,73 g, 66 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,44; t.t. = 279 °C.
2.9. b) N-Glycyl-batracylin, hydrochlorid
Výše uvedená sloučenina (4,1 g, 10 mmol) se za zahřátí rozpustí v ultrazvukové lázni v dichlormethanu (1200 ml). Po přídavku chlorovodíku v diethyletheru (100 ml) se reakční směs míchá po dobu 30 minut při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se smísí s ethylalkoholem (200 ml). Po desetiminutovém míchání za varu pod zpětným chladičem a filtraci po ochlazení se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (3,21 g, 94 %); t.t. = 297 až 299 °C (rozklad).
2.9. c) N-[Nalfa,Nepsilon-Di-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-glycyl]-batracylin
N,N-di(terc.-butoxykarbonyl)-lysin (2.1 g, 6 mmol) a 2-izobutoxy-l-izobutoxykarbonyl-l,2dihydro-chinolin (2,4 ml, 8 mmol) se rozpustí ve 20 ml dichlormethanu. Po dvacetiminutovém míchání při teplotě místnosti se přidá roztok sloučeniny 2.9.b) (1,71 g, 5 mmol), ethyldiizopropylaminu (0,86 ml, 5 mmol) a dimethylformamidu (40 ml) a reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/petrolether 1 : 1 -» ethylacetát]. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (1,69 g, 53 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,31; t.t. = 211 °C (rozklad).
-70CZ 291098 B6
2.9) N-[Lysyl-glycyl]-batracylin, di-trifluoracetát
Výše uvedená sloučenina (1,4 g. 2,2 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2). Produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (1,33 g, 91 %); t.t. = 153 °C (rozklad).
Příklad 2.10
N-[Lysyl-seryl]-batracylin, di-rrifluoracetát
OH
2.10.a) N-[N-(terc~butoxykarbonyl)-seryl]-batracylin
N-(Terc.-butox\ karbon} Ij-serin (3,6 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Po 48 hodinách při teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu odpaří na objem 100 ml a získaný zbytek se smísí se 2 1 dichlormethanu. Z9skaný roztok se promyje vodou (1x500 ml), 0,5N kyselinou chlorovodíkovou 2x250ml) a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (1x250 ml). Po vysušení pomocí bezvodého síranu hořečnatého (50 g), 20 oddestilování rozpouštědla ve vakuu a mžikové chromatografií získaného zbytku [petrolether/ethylacetát 1 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (4,6 g, 64 %); DC [ethylacetát/kyselina octová 100 : 1]: Rf = 0,38; t.t. = 219 °C (rozklad); [a]20 = -61,0° (c = O,5/CH2C12 + 0,5 % CH3OH).
2.10.b) N-Seryl-batracylin, hydrochlorid
Suspenze výše uvedené sloučeniny (4,6 g, 10,4 mmol) vdioxanu (70 ml) se za míchání smísí s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (10 ml) a potom se reakční směs míchá po dobu 60 minut při teplotě místnosti, načež se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu 30 2 hodin za vakua olejové vývěvy. Po přídavku ethylalkoholu (100 ml) se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 15 minut. Po ochlazení a filtraci se získá produkt ve formě oranžové krystalické látky (1,97 g, 96%); DC [ethylacetát]; Rf=0,05; [a]20 = +51,8° (c= l,0/H2O; t.t. > 270 °C (rozklad).
2.10.c) N-[Nalfa,NepsilOD-Di-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-seryl]-batracylin
Sloučenina 2.10.b) (1,86 g, 5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.9.c). Po mžikové chromatografií [eihylacetát/petrolether 2 : 1 -> ethylacetát] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (1,18 g, 36 %); DC [ethylacetát/kyselina octová 100 : 1]: Rf = 0,24;
t.t. = 188 °C (rozklad); [a]20 = -13,10 (c = 0,5/CH2Cl2 + 0,5 % CH3OH).
2.10) N-[Lysyl-seryl]-batracylin, di-trifluoracetát
-71 CZ 291098 B6
Výše uvedená sloučenina (1,0 g, 1,5 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2). Produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (1,0 g, 96%); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,10; t.t. = 188 až 190 °C (rozklad).
Příklad 2.11
N-[Lysyl-D-seryl]-batracylin, di-hydrobromid
OH
io 2.11.a) N-[N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-O-(terc.-butyl)-D-seryl]-batracylin
N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-O-(terc.-butyl)-D-serin (6,7 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografii získaného zbytku [petrolether/ethylacetát 1 : 1] se získá sloučenina 2.11.a) (5,64 g, 52 %) 15 ve formě žluté krystalické látky; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2];
Rf = 0,87; t.t. = 225 až 226 °C (rozklad).
2.11 .b) N-[O-(terc.-butyl>-D-seryl]-batracylin
Výše uvedená sloučenina (2,89 g, 4,7 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2,7.b). Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografii získaného zbytku [petrolether/ethylacetát 3 : 2 -> ethylacetát] se získá sloučenina 2.1 l.b) (1,15 g, 62 %) ve formě žluté krystalické látky; DC [ethylacetát]: Rf = 0,11; t.t. = 197 °C.
2.1 l.c) N-[Nalfa,Neps'lon-Di-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-0-(terc.-butyl>-D-seryl]-batracylin
Výše uvedená sloučenina (1,1 g, 2,8 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.2.a). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (1,94 g, 96%); DC [ethylacetát]: Rf = 0,59; t.t. = 208 °C.
2.11 .d) N-[Lysyl-O-(terc.-butyl)-D-seryl]-batracylin, di-trifluoracetát
Výše uvedená sloučenina (1,08 g, 1,5 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.2). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (1,1 g, 98 %);
DC [methylalkohol/kyselina octová 10 : 1]: Rf = 0,30; t.t. = 128 °C.
2.11) N-[Lysyl-D-seryl]-batracylin, di-hydrobromid
Výše uvedená sloučenina (1,05 g, 1,4 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je uvedeno 40 v příkladě 2.8). Získá se takto produkt ve formě žlutočervené krystalické látky (846 mg, 96 %);
t.t. = 247-248 °C.
-72CZ 291098 B6
Příklad 2.12
N-[Lysyl-D-threonyl]-batracylin, di-hydrobromid
2.12. a) N-[N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-O-(terc.-butyl)-D-threonyl]-batracylin
N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-O-(terc.-butyl)-D-threonin (6,96 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografii získaného zbytku [petrolether/ethylacetát 1 : 1] se získá sloučenina 2.12.a) (7,45 g, 68 %) ve formě žluté krystalické látky; DC [ethylacetát]: Rf = 0,63; t.t. = 225 až 226 °C.
2.12. b) N-[O-(terc.-butyl)-D-threonyl]-batracylin
Výše uvedená sloučenina (3,8 g, 6 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.7.b). Po zahuštěni ve vakuu se získá sloučenina 2.12.b) (1,9 g, 78 %) ve formě žluté krystalické látky; DC [ethylacetát]: Rf = 0,21; t.t. = 110 až 111 °C.
2.12. c) N-[Nalfa,Nep l0n-Di-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-O-(terc.-butyl)-D-threonyl]- batracylin
Výše uvedená sloučenina (1,8 g, 4,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.2.a). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (2,6 g, 79 %); DC [ethylacetát]: Rf = 0,59; t.t. = 212 °C.
2.12. d) N-[Lysyl-0-(terc.-butyl)-D-threonyl]-batracylin, di-trifluoracetát
Výše uvedená sloučenina (2,5 g, 3,4 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.2). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (2,5 g, 96 %); DC [methylalkohol/kyselina octová 10 : 1]: Rf = 0,30; t.t. = 142 °C (rozklad).
2.12) N-[Lysyl-D-threonyl]-batracylin, di-hydrobromid
Výše uvedená sloučenina (2,29 g, 3 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.8). Získá se takto produkt ve formě žlutočervené krystalické látky (1,86 g, 97 %); t.t. = 232 °C (rozklad).
-73CZ 291098 B6
Příklad 2.13
N-[Lysyl-D-alanyl]-batracylin, di-trifluoracetát
2.13 .a) N-[Nalfa,Neps,lon-bis-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylin g (17,3 mmol) Nalfa,Nepsilon-bis-(terc.-butoxykarbonyl)-lysinu se rozpustí v 75 ml dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se smísí se 3 g (26 mmol) N-hydroxysukcinimidu a 4,29 g (20,8 mmol) Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimidu. Po 3 hodinách se vytvořená močovina odfiltruje, k filtrátu se přidá 5 g (15,6 mmol) N-[D-alanyl]-batracylinu (př. 2.3)) a reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě 20 °C. Potom se odfiltruje ještě zbylá močovina, filtrát se zahustí a získaný zbytek se rozmíchá s methylalkoholem a znovu přefiltruje. Filtrát se znovu zahustí a zpracuje methylalkoholem. Opět se přefiltruje a filtrační koláče se spojí, načež se rozpustí ve směsi dichlormethanu a methylalkoholu 10:1a vysráží se diethyletherem. Získá se takto 8,22 g (81 %) krystalického produktu.
2.13) N-[Lysyl-D-alanyl]-batracylin, di-trifluoracetát
Z 8,2 g sloučeniny 2.13.a) se analogicky jako je popsáno v příkladě 2.2) získá 7,58 g (89 %) produktu.
Příklad 2.14
N-[Nepsilo-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin, trifluoracetát
-74CZ 291098 B6
2.14,a) N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-Neps'lon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin
Příprava se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 2.4.a) z N^^-íterc.-butoxykarbonyljN^s^on-^fluorenyl^-methoxykarbonylj-lysinu a batracylinu. Výtěžek činí 78 %.
2.14) N-[Nepsilon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin, trifluoracetát
Příprava se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 2.5) ze sloučeniny z příkladu 2.14.a). Výtěžek činí 90 %.
Příklad 2.15
N-[Lysyl-Nepsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin, di-trifluoracetát
2.15.a) N-[Nalfa,Neps,1°n-di-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-Nepsilon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-batracylin
240 mg (4,54 mmol) sloučeniny 2.14) se rozpustí v 50 ml dimethylformamidu a smísí se se 2 550 mg (5,45 mmol) Nalfa,Nepsilon-di-(terc.-butoxykarbonyl)-lysin-p-n:trofenylesteru a s 938 μΐ ethyldiizopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě 20 °C, načež se zahustí a získaný zbytek se rozmíchá s diethyletherem. Směs se přefiltruje a zbytek na filtru se ještě jednou rozmíchá se směsí methylalkoholu a diethyletheru 1 : 1. Po odsátí a vysušení se takto získá 3 811 mg (92 %) produktu.
2.15) N-[Lysyl-Nepsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin, di-trifluoracetát
Deblokace sloučeniny 2.15.a) pomocí směsi bezvodé kyseliny trifluoroctové a dichlormethanu 1 : 1 se provede analogicky, jako je popsáno v příkladě 2.2) s výtěžkem 95 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 6 : 0,6 : Rf = 0,08.
-75CZ 291098 B6
Příklad 2.16
N-[lysyl-Nbe,a-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-a,P-diaminopropionyl]-batracylin, di-trifluoracetát
Tento peptidový konjugát se vyrobí analogicky jako je popsáno v příkladech 2.14) a 2.15) přes čtyři stupně z batracylinu a Na’fa-(terc.-butoxykarbonyl)-Nbe‘a-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)diaminopropionové kyseliny; DC [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 5:1 : 0,2]: Rf= 0,15.
Příklad 2.17
N-[lysyl]-batracylin
nh2
Odštěpení Fmoc se provádí analogicky, jako je popsáno v příkladě 2.4) z N-[Nepsilon-(fluorenyl9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin trifluoracetátu (příklad 2.14)). Výtěžek činí 65 %.
-76CZ 291098 B6
Příklad 2.18
N-[seryl-D-alanyl]-batracylin, trifluoracetát cf3cooh
2.18.a) N-[N-(terc.-butoxykarbonyl)seryl-D-alanyl]-batracylin
Příprava probíhá analogicky jako je uvedeno v příkladě 2.13.a) z N-(terc.-butoxykarbonyl)serinu a N-[D-alanyl]-batracylinu (příklad 2.3)). Výtěžek činí 77 %.
2.18) N-[seryl-D-alanyl]-batracy 1 in, trifluoracetát
Příprava probíhá analogicky jako je uvedeno v příkladě 2.2) ze sloučeniny 2.18.a). Výtěžek činí 98 %.
Příklad 2.19
N-[D-alanyl-D-alanyl]-batracylin, trifluoracetát cf3cooh
Příprava probíhá ve dvou stupních analogicky jako je popsáno v příkladě 2.18).
Příklad 2.20
N-[Glutamyl-D-alanyl]-batracylin
COOH
Příprava probíhá ve dvou stupních analogicky jako je popsáno v příkladě 2.18), když se vychází zN-terc.-butoxykarbonyl-glutamyl-S-terc.-butylesteru a N-(D-alanyl)-batracylinu (příklad 2.3)). Po odštěpení Boc se reakční směs zahustí, získaný zbytek se vyjme do vody, hodnota pH se upraví pomocí 0,lN hydroxidu sodného na 7 a betain se odsaje.
-ΤΊ CZ 291098 B6
Příklad 3.1-3.34
Obecný vzorec
R
Příklad 3.1
N-{Nepsilon-[0-(P-L-Fukosyl)-4—hydroxy-fenylaminothio-karbonyl]-lysyl-D-alanyl}batracylin
3.1 .a) N-{Nalfa(terc.-butoxykarbonyl)-Neps'lon-[0-((3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin mg (0,22 mmol) p-aminofenyl-P-L-fukosidu se v 10 ml směsi dioxanu a vody 1 : 1 za míchání smísí s thiofosgenem (34 μΐ, 0,44 mmol). Po 10 minutách se reakční směs zahustí ve vakuu a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny za vysokého vakua. Získaná olejovitá látka se potom v absolutním dimethylformamidu kopuluje se 109 mg (0,21 mmol) N-[Nalfa-(terc.butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylinu (příklad 2.4)) za přítomnosti 115 μΐ ethyldiizopropylaminu. Po dvojnásobném vysrážení surového produktu ze směsí methylalkoholu a izopropylalkoholu se získá 132 mg (75 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [dichlormethan/methylalkohol 9 : 1]: Rf = 0,15.
3.1) N-{Nepsil°n-[0-(p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
127 mg (0,15 mmol) sloučeniny z příkladu 3.1.a) se v 10 ml dichlormethanu míchá se 6 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové po dobu 2 hodin při teplotě 0 °C. Reakční směs se potom zahustí, třikrát se destiluje s 5 ml dichlormethanu a chromatografuje se za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2. Po následující lyofilizaci se získá 80 mg (71 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,4]: Rf=0,3.
Analogicky jako je popsáno v příkladě 3.1) se z částečně chráněného peptidového konjugátu z příkladu 2.4), popřípadě z analogicky vyrobeného izomemího N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-alanyl]-batracylinu vyrobí následující glykokonjugáty:
-78CZ 291098 B6
Příklad 3.2
N-{Nepall°n-[0-(2-0-methyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-Dalanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.1).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 a konečného stupně dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2; výtěžek: 55 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf=0,4.
Příklad 3.3
N-{Nep51lon-[0-(2-0-methyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.1).
Čištění mezistupně pomocí srážení ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2; výtěžek: 65 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 5:2: 0.2]: Rf= 0,21.
Příklad 3.4
N-{Nep'llon-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-Dalanylj-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.2).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 97,5 :2,5 a srážení konečného stupně z methylalkoholu pomocí diethyletheru; výtěžek: 59 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2]: Rf = 0,19.
Příklad 3.5
N-fN^^H-fO-fS-O-methyl-p-L-fukosylj^-hydroxy-fenylamino-thiokarbonylj-lysyl-alanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.2).
Čištění mezistupně pomocí srážení ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2; výtěžek: 36%; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 5:2: 0,2]: Rf = 0,57.
-79CZ 291098 B6
Příklad 3.6
N-{N'psil°n-[0-(3-0-methyl-a-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-Dalanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.3).
Čištění mezistupně pomocí srážení z methylalkoholu pomocí diethyletheru a konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2:0,2; výtěžek: 44%; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 :0,2]: Rf=0,15.
Příklad 3.7
N-{Nepsil°n-[0-(3-0-desoxy-(3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-Dalanylj-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.6).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 a srážení konečného stupně z methylalkoholu pomocí diethyletheru; výtěžek: 35 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,42.
Příklad 3.8
N-{Neps,l°n-[O-(3,4-epoxy-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.8).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 a vícenásobné srážení konečného stupně z methylalkoholu pomocí diethyletheru a následující rozmíchání s ethylesterem kyseliny octové; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,49.
Příklad 3.9
N-{Neps,1°n-[O-(3,0-karboxymethyl-(3-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysylD-alanyl}-batracylin, sodná sůl
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.10).
Čištění mezistupně rozmícháním v methylalkoholu a srážením pomocí diethyletheru a konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3, později ve stejném systému 15:6:0,6. Odpovídající frakce se zahustí, vyjmou se do vody a hodnota pH se upraví pomocí 0,lN hydroxidu sodného na 7. Odsaje se, zbytek na filtru se vyjme do směsi dimethylformamidu a vody 1:3a přidá se ekvivalent 0,lN hydroxidu sodného. Potom se směs zahustí, sodná sůl se vyjme do vody a lyofilizuje se. Výtěžek: 43 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]: Rf = 0,15.
-80CZ 291098 B6
Příklad 3.10
N-{Ncps''-[O-(3.0-karbarnoylmethyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]Iysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.18).
Čištění mezistupně rozmícháním v methylalkoholu a srážením pomocí diethyletheru a konečného stupně pomocí mžikové chromatografíe za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3]: Rf = 0,38; t.t. = 190 :C (rozklad).
Příklad 3.11
N-{Nepsi!cn-[O-(4,0-methyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracvlin, acetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.4).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografíe za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 a konečného stupně pomocí směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%). Po zahuštění se získaný zbytek smísí s ekvivalentem ledové kyseliny octové a 10 ml vody a lyofílizuje se. Výtěžek: 52 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1: 0,2]: Rf=0,43.
FAB-MS: m/z = 760 = M+l.
Příklad 3.12
N-[Nepsi'-[O-(a-D-glukosyl)-4—hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: p-aminofenyl-a-glukosid.
Čištění mezistupně i konečného stupně rozmícháním v methylalkoholu a srážením pomocí diethyletheru. Výtěžek: 83 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 8 : 0,8 : Rf=0,48.
Příklad 3.13
N-{Nepsflni-[O-(a-D-glukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: p-aminofenyl-a-glukosid.
Výroba probíhá analogicky jako je uvedeno v příkladě 3.12).
-81 CZ 291098 B6
Příklad 3.14
N-{Nepsilon-[0-(3-0-methyl-3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
3.14.a) N-{Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-Nepsdon-[0-(3-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Roztok sloučeniny 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1 : 1 se za míchání smísí s thiofosgenem (33,5 ml, 0,44 mmol). Po 10 minutách se směs zahustí ve vakuu a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný izothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 2.4) (109,7 mg, 0,2 mmol) a s ethyldiizopropylaminem (0,5 ml). Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1]. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (108,3 mg, 62 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf= 0,42; t.t. = 194 až 195 °C (rozklad).
3.14) N-{Neps,l°n-[0-(3-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Ze sloučeniny 3.14.a) (105,1 mg, 0,12 mmol) se odštěpí analogicky jako je popsáno v příkladě 2.2) terc.-butoxykarbonylová skupina. Po zahuštění ve vakuu a přesrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (57,4 mg, 54 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf= 0,16; t.t. = 188 až 189 °C (rozklad).
Analogicky jako je popsáno v příkladech 3.14.a) a 3.14) se z peptidového konjugátu 2.4) (vždy 109,7 mg, 0,2 mmol) vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 3.15
N-{Nepsilo-[O-([3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl [-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.23) (59,7 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 10:1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (79,5 mg, 46 %); DC [methylalkohol]: Rf= 0,74; t.t. = 182 °C.
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (77,1 mg, 44 %); DC [methylalkohol]: Rf= 0,27; t.t. = 191 až 192 °C (rozklad).
Příklad 3.16
N-{NepslI°-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl [-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.31) (79 mg, 0,22 mmol).
-82CZ 291098 B6
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 —> 20 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (150,7 mg, 85 %);
DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,35; t.t. = 197 až 199 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (137 mg, 76 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,13; t.t. = 184 až 186 °C (rozklad).
Příklad 3.17
N-{Nepsilon-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 —> 25 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (124,1 mg, 66%); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,50; t.t. = 165 °C.
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (107 mg, 57 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf= 0,53; t.t. = 183 °C (rozklad).
Příklad 3.18
N-{Neps,l°n-[0-(3-0-karbonylmethyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: sloučenina z příkladu 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí srážení za použití směsi ethylalkohol/diethylether poskytne sodnou sůl ve formě žluté krystalické látky (172 mg, 91 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,71; t.t. - 225 až 228 °C.
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (136,5 mg, 73 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,12; t.t. = 217 až 220 °C (rozklad).
Příklad 3.19
N-{Nepsil°n-[0-(3-0-karbamoylmethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 10:1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (137,7 mg, 75 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf = 0,41; t.t. = 198 až 201 °C (rozklad).
-83CZ 291098 B6
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladu 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (140,2 mg, 75 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf= 0,16; t.t. = 188 až 190 °C (rozklad).
Příklad 3.20
N-{Neps'lo-[0-(3-0-(N-Methyl-karbamoylmethyl)~P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.45) (75,3 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 7 : 1 : 0,1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (158,4 mg, 85 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,25; t.t. = 161 až 163 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (132,5 mg, 70 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,10; t.t. = 191 až 193 °C (rozklad).
Příklad 3.21
N-{Nepsil°n-[0-(3-0-(N-propyl-karbamoylmethyl)-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-th iokarbonyl]-lysyl-D-alany 1 }-batracyI in, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.46) (81,5 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 8 : 1 : 0,1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (153,1 mg, 80 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,33; t.t. = 187 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (154,9 mg, 79%); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf= 0,21; t.t. = 179 °C.
Příklad 3.22
N-{Nepsil°n-[O-(3-O-(N-butyl-karbamoylmethyl)-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl }-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.47) (84,6 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 12 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (132,7 mg, 68 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,54; t.t. = 180 až 182 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (115,2 mg, 58 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,30; t.t. = 176 °C.
-84CZ 291098 B6
Příklad 3.23
N-{Neps,l°n-[0-(3,4-didesoxy-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.52) (52,6 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 25 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (127,4 mg, 77 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,60; t.t. = 166 až 167 °C:
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (103,1 mg, 61%); DC [dichlormethan/meihylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,44; t.t. 173 až 175 °C (rozklad).
Příklad 3.24
N-{Neps,1°n-[0-(6-0-acetyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl} -batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.53) (78,2 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 25 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (88,3 mg, 49 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf= 0,61; t.t. = 196 až 199 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (89,6 mg, 49 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf= 0,31; t.t. = 186 °C (rozklad).
Příklad 3.25
N-{Nepsil°n-[0-(a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.39) (59,7 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (101,7 mg, 59 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,79; t.t. = 180 ° (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (103,1 mg, 59 %); DC [methylalkohol]: Rf =0,34; t.t. = 177 až 178 °C (rozklad).
Příklad 3.26
N-{Neps,1°n-[0-(3-0-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl} -batracylin,
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.40) (62,8 mg, 0,22 mmol).
-85CZ 291098 B6
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (56,6 mg, 32 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,38; t.t. = 191 až 192 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (46,6 mg, 26 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,13; t.t. = 190 až 191 °C (rozklad).
Příklad 3.27
N-{Neps,lon-[0-(2,3-di-0-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl }-batracy lin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.41) (66 mg, 0,22 mmol). Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 25 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (77,8 mg, 44 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf= 0,65; t.t. = 182 až 183 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,1 mg, 37 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1 ]: Rf = 0,40; t.t. = 181 °C.
Příklad 3.28
N-{Nepsil°-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.48) (75,5 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 18:1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (62,1 mg, 33 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2): Rf = 0,66; t.t. = 165 °C.
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (57,6 mg, 30 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15:3: 0,2]: Rf = 0,43; t.t. = 183 až 184 °C.
Příklad 3.29
N-{Nepsil°n-[0-(3-0-karboxymethyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.49) (77,3 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí srážení ze směsi ethylalkoholu a diethyletheru poskytne sodnou sůl ve formě žluté krystalické látky (173,4 mg, 92 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,57; t.t. = 201 až 205 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (171,7 mg, 92 %); DC [methylalkohol]: Rf= 0,29; t.t. = 196 až 198 °C (rozklad).
-86CZ 291098 B6
Příklad 3.30
N-{Nepi,cn-[O-(3-O-karbamoylmethyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.50) (72,2 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 10:1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (106,6 mg, 58%); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf = 0,34; t.t. = 192 až 194 °C.
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (107,7 mg, 58 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf = 0,13; t.t. = 186 až 187 °C.
Příklad 3.31
N-{Nepí:1°n-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4—hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
3.31 .a) N-{Nalfa-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-Nepsilon-[0-(3,4-di-0-methyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin,
Roztok sloučeniny 1.31 (79 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1:1(10 ml) se za míchání smísí s thiofosgenem (33,5 ml, 0,44 mmol). Po 10 minutách se reakční směs ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný izothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 2.5) (157 mg, 0,2 mmol) a s ethyldiizopropylaminem (0,5 ml). Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se zahustí ve vakuu a vyjme se do směsi dichlormethanu a methylalkoholu 1:1. Produkt se vysráží přídavkem diethyletheru a promyje se malým množstvím ledového methylalkoholu. Získá se takto produkt ve formě žlutých krystalů (100 mg, 94 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,35; t.t. = 203 °C (rozklad).
3.31) N-{Neps,l°n-[O-(3,4-di-O-methyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminoth iokarbony l]-lysy 1-D-alany 1} -batracy 1 in
Ze sloučeniny 3.31.a) (182,2 mg, 0,18 mmol) se stejně, jako je popsáno v příkladě 2.4), odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina. Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi dichlormethanu a methylalkoholu 1 : 1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (127,1 mg, 89 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,46; t.t. = 158 °C.
Analogicky jako je popsáno v příkladech 3.31.a) a 3.31 se zpeptidového konjugátu 2.5) (vždy 157 mg, 0,2 mmol) vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 3.32
N-{Nepsllon-[0-(3-0-(piperidyl-N)-karbonylrnethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol).
-87CZ 291098 B6
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31 .a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (191,2 mg, 91 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,28; t.t. = 208 °C (rozklad). Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.31), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (155,8 mg, 88 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,47; t.t. = 120 °C (rozklad).
Příklad 3.33
N-{Nepsil°n-[0-(3-0-karbonylmethyl-(3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31 .a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (192 mg, 90 %); DC [ethylalkohol/methylalkohol 1:1]: Rf = 0,05; t.t. = 211 až 213 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.31), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (110,6 mg, 66%); DC [methylalkohol]: Rf= 0,33; t.t. = 233 až 235 °C (rozklad).
Příklad 3.34
N-{N'psil°n-[0-(3-0-karbamoylmethyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol).
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (159,2 mg, 76 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,04; t.t. = 177 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.31), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (125,1 mg, 76%); DC [methylalkohol]: Rf= 0,48; t.t. = 106 °C (rozklad).
Příklad 4.1-4.12
Obecný vzorec
-88CZ 291098 B6
Příklad 4.1
4.1 .a) N-{Nalfa-[0-(p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Nepsilon-(fluorenyl9-methoxy-karbonyl)-lysyl-D-alanyl}-batracylin
140 mg (0,55 mmol) p-aminofenyl-[3-L-fukosidu se nejprve převede podle předpisu v příkladě 3.1.a) na hořčičný olej a potom se se 430 mg (0,55 mmol) N-[Nepsllon-(fluorenyl-9methoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylinu, trifluoracetátu (příklad 2.5)) kopuluje za přítomnosti 375 μΐ ethyldiizopropylaminu. Po srážení surového produktu ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu se tento čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi acetonitrilu a vody 10: 1. Po rozmíchání získaného zbytku s diethyletherem se získá 358 mg (67 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,48.
4.1) N-{Na-[O-([3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}batracylin
356 mg (0,37 mmol) sloučeniny z příkladu 4.1.a) se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a 5 ml piperidinu a reakční směs se potom míchá po dobu jedné hodiny při teplotě 20 °C. Potom se zahustí a získaný zbytek se chromatografuje za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:6:0,6. Produkt se získá ve 46% výtěžku; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]: Rf= 0,11.
Analogicky jako je popsáno v příkladě 4.1) se vyrobí z částečně chráněného peptidového konjugátu 2.5) následující glykokonjugáty:
Příklad 4.2
N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.10)
Chromatografické čištění mezistupně se provádí pomocí směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:3: 0,3; později se stejným systémem 15:4: 0,5.
Čištění konečného produktu na stupni betainu se provádí rozmícháním s vodou; následuje převedení na sodnou sůl pomocí 0,1 N hydroxidu sodného a lyofilizace ze směsi dioxan/voda. Výtěžek činí 65 %; t.t. = 220 °C.
Příklad 4.3
N-{Nalfa-[0-(4-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.2)
Čištění mezistupně se provádí srážením z dichlormethanu pomocí diethyletheru.
Čištění konečného produktu se provádí několikanásobným srážením z dimethylformamidu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 88 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2]: Rf= 0,28.
-89CZ 291098 B6
Příklad 4.4
N-{Nalfa-[0-(3,4-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.4)
Čištění mezistupně se provádí vícenásobným srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru. Čištění konečného produktu pomocí sloupcové chromatografie se provádí za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 8 : 0,8 a srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 74 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 10:10: 1]: Rf = 0,19.
Příklad 4.5
N-{NaIfa-[0-(3,4-di-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]ly sy 1-D-alany 1} -batracylin
4.5.a) N-{Nalfa-[O-(3,4-di-O-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylarnino-thiokarbonyl-Nepsil0n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Roztok sloučeniny 1.31 (79 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1 : 1 (10 ml) se za míchání smísí s thiofosgenem (33,5 ml, 0,44 mmol). Po 10 minutách se reakční směs ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný izothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a potom se smísí se sloučeninou (2.6) (157 mg, 0,2 mmol) a s ethyldiizopropylaminem (0,5 ml). Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, načež se ve vakuu zahustí. Vícenásobným přesrážením získaného zbytku ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a závěrečným promytím malým množstvím ledového methylalkoholu se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (198 mg, 98%); DC [dichlormethan/methylalkohol 10:1]: Rf= 0,23; t.t.= 175 °C.
4.5) N-{Nalfa-[0-(3,4-di-0-methyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin
Ze sloučeniny 4.5.a) (172,1 mg, 0,17 mmol) se stejně, jako je popsáno v příkladě 2.4) vyloučí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina. Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění ve směsi methylalkohol/dichlormethan 1 : 1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (114,5 mg, 85%); DC [dichlormethan/methylalkohol 0: 1]: Rf = 0,16; t.t. = 206 °C (rozklad).
Analogicky jako je popsáno v příkladech 4.5.a) a 4.5) se z peptidového konjugátu 2.6) (vždy 157 mg, 0,2 mmol) vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 4.6
N-{Nalfa-[0-([3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.23 (59,7 mg, 0,22 mmol)
-90CZ 291098 B6
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (185,8 mg, 94%); DC [dichlormethan/methylalkohol 10: 1]: Rf= 0,09; t.t. = 182 °C (rozklad). Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (134,3 mg, 88 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1J: Rf = 0,04; t.t. = 221 °C (rozklad).
Příklad 4.7
N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysylD-alanyl]-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmol)
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (193,5 mg, 97 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf= 0,27; t.t. = 178 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 2 : 1 —> 1 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (130,5 mg, 84 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 1:1]: Rf = 0,09; t.t. = 206 °C (rozklad).
Příklad 4.8
N-{Nalfa-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbony 1] lysy 1-D-alany 1} -batracy 1 in
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.42 (75,5 mg, 0,22 mmol)
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (209,8 mg, 99%); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf= 0,32; t.t. = 235 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (164,3 mg, 99 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1]: Rf- 0,05; t.t. = 217 °C (rozklad).
Příklad 4.9
N-{Nalfa-[0-(3-0-karbonylmethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmol)
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (210,3 mg, 99 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf= 0,02; t.t. = 183 °C.
Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5), přičemž se získaný zbytek suspenduje ve vodě (10 ml) a suspenze se za míchání po kapkách smíchá s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10). Po lyofilizaci přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (150,8 mg, 90 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1]: Rf= 0,04.
-91 CZ 291098 B6
Příklad 4.10
N-{Nalfa-[0-(3-0-karbonylmethyI-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmol)
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (152,7 mg, 73 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,11; t.t. = 229 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5), přičemž se získaný zbytek suspenduje ve směsi voda/dioxan 1 : 1 (20 ml). Po lyofílizaci přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (98,4 mg, 61 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1]: Rf = 0,10; [a]20 = +44,9° (c = 0,2/1^0).
Příklad 4.11
N-[Nalfa-[0-(a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.39 (59,7 mg, 0,22 mmol)
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (179,6 mg, 91 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf= 0,07; t.t. = 176 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (137,5 mg, 90%); DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1]: Rf = 0,09; t.t. = 213 °C (rozklad).
Příklad 4.12
N-{Nalía-[O-(3-O-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysylD-alanyl }-batracylin
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.40 (62,8 mg, 0,22 mmol)
Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (94,2 mg, 48 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,13; t.t. = 173 °C (rozklad).
Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,6 mg, 43 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1]: Rf- 0,07; t.t. = 215 °C (rozklad).
-92CZ 291098 B6
Příklad 5.1 až 5.23
Obecný vzorec
Příklad 5.1
N-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]Nepsil°n-[0-(3-0-methyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}batracylin mg (0,16 mmol) p-aminofenyl-3-O-karboxymethyl-P-L-fukosidu (příklad 1.10) se v 10 ml směsi dioxanu a vody 1 : 1 smísí za míchání se 30 μΐ (0,18 mmol) thiofosgenu. Po 10 minutách se reakční směs zahustí a suší se po dobu jedné hodiny za vysokého vakua. Získaná olejovitá kapalina se potom v absolutním dimethylformamidu kopuluje se 109 mg (0,144 mmol) konjugátu z příkladu 3.4) za přítomnosti 82 μΐ ethyldiizopropylaminu. Potom se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]. Látka, získaná po zahuštění se lyofilizuje z vody. Výtěžek činí 89 mg (56 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:6: 0,6]: Rf = 0,22.
Analogicky jako je popsáno v příkladě 5.1) se získají následující směsně substituované konjugáty:
Příklad 5.2
N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-Neps'lon-[0-(30-karboxymethyl~3-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukty: uhlohydrát z příkladu 1.2), konjugát z příkladu 3.10)
Čištění se provádí srážením surového produktu z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 78 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,45.
Příklad 5.3
N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-Nepsilon-[4hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukty: konjugát z příkladu 4.3), 4-hydroxy-anilin
-93CZ 291098 B6
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2], Výtěžek činí 60%; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 :2 :0,2]: Rf= 0,31Příklad 5.4
N-(Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]Nepsiion_[4_hydroXyfenyiamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}batracylin
Edukty: konjugát z příkladu 4.2), 4-hydroxy-anilin
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]. Potom se získaný zbytek rozmíchá se směsí methylalkoholu a diethyletheru. Výtěžek činí 55 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:6: 0,6]: Rf = 0,3.
Příklad 5.5
N-{Nalfa-[0-(4-0-methyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylarnino-thiokarbonyl]-Ní:íllon-[4hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukty: konjugát z příkladu 4.4), 4-hydroxy-anilin
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2]. Potom se získaný zbytek sráží ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 49 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2]: Rf= 0,26.
Příklad 5.6
N-{Nalfa-[4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-Nepsil°n-[O-(4-O-methyl-p-L-fuko5\l}-4hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukty: konjugát z příkladu 3.11), 4-hydroxy-anilin
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2], Potom se získaný zbytek lyofilizuje ze směsi vody a dioxanu. Výtěžek činí 50 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2]: Rf = 0,29.
Příklad 5.7
N-{Nalfa-[4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-Nep51l0n-[O-(3-O-methyl-(3-L-fuko5yl)-4hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukty: konjugát z příkladu 3.4), 4-hydroxy-anilin
Čištění se provádí srážením z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 76 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2]: Rf = 0,26.
-94CZ 291098 B6
Příklad 5.8
N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-Nepsilon-[4hydroxyethylamino-2-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl}-4-hydroxyfenylamino]-triazin-6-yl]]lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukty: konjugát z příkladu 8.10), uhlohydrát z příkladu 1.2)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2], Výtěžek činí 9 %; FAB-MS: m/z = 1165 = M+l; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:3: 0,3]: Rf = 0,27.
Příklad 5.9
N-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-Nepsilon[acetyl] lysyl-D-alanyl }-batracy lin
Edukty: N-[Nepsilon-(acetyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylin, uhlohydrát z příkladu 1.10)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2, později ve stejném systému 15:4: 0,5]. Potom se získaný zbytek lyofilizuje z vody. Výtěžek činí 40 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,31.
Příklad 5.10
N-{Nalfa-[0-(4-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-Nepsilon-[acetyl]lysy 1-D-alany 1 }-batracy 1 in mg (0,067 mmol) konjugátu z příkladu 4.4) se v 5 ml dimethylformamidu smísí s 10 μΐ acetanhydridu a míchá se po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Potom se reakční směs zahustí a sráží se z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 46 mg (86 %); DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,6.
Příklad 5.11
N-{Nalfa-[0-(3-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-Nepsilon-[succinyl]lysyl-Dalanyl}-batracylin, sodná sůl mg (0,027 mmol) konjugátu z příkladu 4.1) se ve 2 ml dimethylformamidu smísí se 3 mg anhydridu kyseliny jantarové a míchá se po dobu 6 hodin při teplotě místnosti. Potom se reakční směs zahustí a sráží se z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Získaný zbytek se vyjme do vody a přidá se 27 μΐ 0,1 N hydroxidu sodného. Výtěžek činí 26 mg (86 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 8:2: 0,2]: Rf = 0,2.
Příklad 5.12
N-{Nalfa-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxyfenylaminothiokarbonyl]-Nepsil°n-[0-(3,4-di-0-methyl-P-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
-95CZ 291098 B6
Uhlohydrát 1.42) (37,7 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
3.31.a), speptidovým konjugátem 3.31) (79 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografii [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 —> 10 : 1] se získá produkt ve formě žluté 5 krystalické látky (52,9 mg, 45 %); [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,14; t.t. = 178 °C (rozklad).
Příklad 5.13
N-{Nalfa-[0-(3-0-karboxylmethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-Nepsil°n-[0-(3,4-di-0-methyl-[3-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl
Uhlohydrát 1.43) (38,6 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a), speptidovým konjugátem 3.31) (79mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,05N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH<10).
Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (87,9 mg, 74 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,17; [a]20 = +56,0° (c = 0,l/H2O).
Příklad 5.14
N-{Nalfa-[O-(3-O-karbamoylmethyl-[3-D-galaktopyranosyl}-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Nepsll°n-[O-(3,4-di-O-methyl-|3-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Uhlohydrát 1.44) (36,1 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a), speptidovým konjugátem 3.31) (79 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění ve směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 se získá produkt vysrážením přídavkem diethyletheru ve formě žluté krystalické látky (45,9 mg, 39 %); DC [ethylalkohol]: Rf= 0,38; t.t. = 219 °C (rozklad).
Příklad 5.15
N-{Nalfa-[0-(3,4-di-0-methyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]40 Neps,l°n-[0-(3-0-(piperidyl-N)-karbonylmethyl-p-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl)-batracylin
Uhlohydrát 1.31) (39,5 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně jako je popsáno v příkladě 3.31.a), s peptidovým konjugátem 3.32) (88,7 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu 45 a mžikové chromatografii [dichlormethan/methylalkohol 20: 1 —> 10: 1 se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (38,8 mg, 32 %); DC [dichlormethan/methylalkohol]: Rf - 0,79; t.t. = 205 °C (rozklad).
Příklad 5.16
N-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Nepsil°n-[0-(3-0-(piperidyl-N)-karbonylmethyl-P-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin sodná sůl
-96CZ 291098 B6
Uhlohydrát 1.43) (38,6 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31 .a), s peptidovým konjugátem 3.32) (88,7 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,05N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10). Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (90,3 mg, 71 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,05; [a]20 +39,0° (c = 0,l/H2O).
Příklad 5.17
N-{Nalfa-[0-(3-0-karbamoylmethyl-(3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Neps,l°n-[0-(3-0-(piperidyl-N)-karbonylmethyl-p-D-galactopyranosyl)—4-hydroxyfeny 1 am ino-th iokarbony 1 ]—ly sy 1-D-alany 1 }-batracy 1 in
Uhlohydrát 1.44) (36,1 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a), s peptidovým konjugátem 3.32) (88,7 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění ve směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru ve formě žluté krystalické látky (44,8 mg, 36%); DC [ethylalkohol]: Rf= 0,06; t.t. = 223 °C (rozklad).
Příklad 5.18
N-{Nalfa-[0-(3,4-di-0-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]NePs,ion_[o_(3_o_karboxymethyl-p-D_galactOpyranOSyl)-4—hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl
Uhlohydrát 1.31) (39,5 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
3.31.a), s peptidovým konjugátem 3.33) (84,2 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 (20 ml) se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,05N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH<10). Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (80,7 mg, 68 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,09; [a]20 = +35,0° (c = 0,l/H2O).
Příklad 5.19
N-{Nalfa-[O-(3-O-methoxykarbonylmethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-Nepsil°n-[O-(3-O-karboxymethyl-[3-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl
Uhlohydrát 1.42) (37,7 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
3.31.a), s peptidovým konjugátem 3.33) (84,2 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 (20 ml) se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,05N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH<10). Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (87,5 mg, 71 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,10; [a]20 = +24,6° (c = 0,l/H2O).
-97CZ 291098 B6
Příklad 5.20
N-{Nalfa-[O—(3-0-karbamoylmethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Ncpsil°n-[0-(3-0-karboxymethyl-p-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin. sodná sůl
Uhlohydrát 1.44) (36,1 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
3.31.a), s peptidovým konjugátem 3.33) (84,2 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 (20 ml) se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,05N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH<10). Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (78,6 mg, 65 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,11; [a]20 = -44,0° (c = 0,13/H2O).
Příklad 5.21
N-{Nalfa-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]^epSiion_|-Q_^2_0-karbainoylmethyl-P-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Uhlohydrát 1.31) (39,5 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
3.31.a), s peptidovým konjugátem 3.34) (81,9 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografií [ethylalkohol -> ethylalkohol/methylalkohol 2 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (17,4 mg, 15 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,20; t.t. > 205 °C (rozklad).
Příklad 5.22
N-{Nalfa-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-Neps‘lon-[0-(3-0-karbamoylmethyl-P-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-th iokarbony 1] lysy 1-D-alany 1} -batracyl in
Uhlohydrát 1.42) (37,7 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
3.31.a), s peptidovým konjugátem 3.34) (81,9 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (72 mg, 60 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,21; t.t. = 222 °C.
Příklad 5.23
N-{Nalf’-[0-(3-0-karboxymethyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Neps'lon-[0-(3-0-karbamoylmethyl-[3-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl
Uhlohydrát 1.43) (38,6 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31 .a), s peptidovým konjugátem 3.34) (81,9 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,05N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10). Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (78,2 mg, 65 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,07; [a]20 = +33,0° (c = 0,l/H2O).
-98CZ 291098 B6
Příklad 6.1 až 6.89
Obecný vzorec
n (n = 1.0)
Příklad 6.1
N-{Nalfa,Neps,Ion-bis-[0-(2-0-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysy 1-D-alanyl }-batracy 1 in
Roztok sloučeniny 1.1) (50 mg, 0,19 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1 : 1 (10 ml) se za míchání smísí s thiofosgenem (30 μΐ, 0,4 mmol). Po 10 minutách se reakční směs ve vakuu zahustí 15 a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný izothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 2.13) (61 mg, 0,09 mmol) a s ethyldiizopropylaminem (0,5 ml). Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se zahustí ve vakuu a čistí se pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2). Získaný zbytek po zahuštění se 20 z methylalkoholu vysráží pomocí diethyletheru. Získá se takto 48 mg (50 %) produktu ve formě žluté krystalické látky.
Analogicky jako je popsáno v příkladě 6.1) se zpeptidového konjugátu z příkladu 2.13), popřípadě z L-alanyl-izomeru (příklad 2.2)), vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 6.2
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[O-(3-O-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: 100 mg (0,38 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 0,5 : 0,5, později ve stejném systému 15:1: 0,1] a potom srážením ze směsi dichlor35 methan/methylalkohol/diethylether. Výtěžek: 59 %; t.t. = 178 °C (rozklad); DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,51.
-99CZ 291098 B6
Příklad 6.3
N-{Nalfa,N'ps,l°n-bis-[O-(4-O-methyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: 115 mg (0,44 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.4)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2] a potom srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol (1 : l)/diethylether. Výtěžek: 58 %; t.t. = 175 °C (rozklad); DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,52.
Příklad 6.4
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-alanyl}-batracylin
Edukt: 115 mg (0,44 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2)
Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol (1 : 1 )/diethylether. Výtěžek: 93 %; t.t. = 192 °C (rozklad); DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,46.
Příklad 6.5
N-{Nalfa,Nepsll°n-bis-[O-(3-O-methyl-a-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl }-batracyl in
Edukt: 100 mg (0,38 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.3)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1] a potom srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol (1 : l)/diethylether. T.t. = 178 °C (rozklad); FAB-MS: m/z = 1071 = M+l.
Příklad 6.6
N-{Nalfa,N'ps,l°n-bis-[0-(3-0-n-propyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl }-batracylin
Edukt: 38 mg (0,127 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.5)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1] a potom srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol (1 : l)/diethylether. Výtěžek: 42 %; t.t. = 167 až 170 °C (rozklad); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%)]; Rf=0,34.
Příklad 6.7
N-{Nalfa,Neps,1°n-bis-[O-(3-desoxy-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysylD-alanyl}-batracylin
Edukt: 40 mg (0,167 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.6)
-100CZ 291098 B6
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2] a potom srážením ze směsi methylalkoholu a diethyletheru. Výtěžek: 81 %; DC [acetonitril/voda 10 : 1 ]: Rf = 0,46.
Příklad 6.8
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(3,4-didesoxy-p-L-fukosyl)-4-hydrox>-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: 41 mg (0,183 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.7)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 95 : 5] a potom lyofilizací ze směsi vody a dioxanu. Výtěžek: 60 %; DC [dichlormethan/methylalkohol 9: l]:Rf=0,22.
Příklad 6.9
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(3-hydroxyethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: 75 mg (0,25 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.12)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2, později ve stejném systému 15:4: 0,5] a potom srážením ze směsi methylalkohol/diethylether. Výtěžek: 66 %; DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,28.
Příklad 6.10
N-{NaIfa,Nepsil°n-bis-[0-(2-hydroxyethyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysy 1-D-alany 1} -batracy li n
Edukt: 50 mg (0,167 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.19)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:3: 0,3] a potom srážením ze směsi methylalkohol/diethylether a lyofilizací ze směsi voda/acetonitril. Výtěžek: 72 %; DC [acetonitril/voda ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2]: Rf=0,39.
Příklad 6.11
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(2-0-karboxymethyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Edukt: 50 mg (0,16 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.13)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:8: 0,8, později ve stejném systému 15 : 10 :1] a potom se získaný zbytek digeruje s diethyletherem a lyofilizuje se ze směsi voda/dioxan. Převedení na dvojsodnou sůl se provede se 2 ekvivalenty 0,lN hydroxidu sodného a lyofilizací z vody. Výtěžek: 49 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,5]; Rf = 0,38; FAB: m/z = M - 2Na+ + H+.
-101CZ 291098 B6
Příklad 6.12
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, dvoj sodná sůl
Edukt: 200 mg (0,64 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.10)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5, později ve stejném systému 15 : 8 : 0,8 a nakonec 15 : 10 : 1] a potom se získaný zbytek digeruje s diethyletherem a lyofilizuje se ze směsi voda/dioxan 1 : 1. Převedení na dvojsodnou sůl se provede se 2 ekvivalenty 0,lN hydroxidu sodného a lyofilizací z vody. Výtěžek: 59 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%)]: Rf- 0,1.
Příklad 6.13
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysy 1-D-alany 1} -batracy 1 in
Edukt: 60 mg (0,19 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.18)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3] a potom srážením získaného zbytku ze směsi methylalkohol/dichlormethan 1 : 1 pomocí diethyletheru a lyofilizací ze směsi voda/dioxan 1:1. Výtěžek: 36 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,46; t.t. = 190 °C (rozklad).
Příklad 6.14
N-{Nalfa,Nepsll°n-bis-[O-(p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}batracylin
Edukt: 100 mg (0,39 mmol) p-aminofenyl-|3-L-fukosidu
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2, později ve stejném systému 15:4: 0,5] a potom srážením získaného zbytku z dimethylformamidu pomocí diethyletheru. Výtěžek: 48 %; t.t. = 195 až 198 °C.
Příklad 6.15
N-jN^^N^^^-bis-fO-ía-L-rhamnosylj-A-hydroxy-fenylamino-thiokarbonylfylysyl-D-alanyl}-batracylin
Edukt: 158 mg (0,61 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.21)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:3: 0,3, později ve stejném systému 15:4: 0,5] a potom lyofilizací získaného zbytku ze směsi vody a dioxanu. Výtěžek: 87 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 :4 : 0,5]: Rf= 0,25.
-102CZ 291098 B6
Příklad 6.16
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-a-L-rhamnosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Edukt: 208 mg (0,64 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.22)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5, později ve stejném systému 15:8: 0,8 a nakonec 15 : 10 : 1], následující digerací s diethyletherem a potom lyofilizací získaného zbytku ze směsi vody a dioxanu 1:1.
Analogicky jako je popsáno v příkladě 6.1) se z různých peptidových konjugátů batracylinu, které obsahují na aminovém konci úplně deblokovaný lysinový stavební prvek, vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 6.17
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Edukty: 32 mg (0,1 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.10), 32 mg (0,045 mmol) N-(lysylglycyl)-batracylin, di-trifluoracetátu (příklad 2.9)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:8: 0,8, později ve stejném systému 15 : 15 : 1,5], následujícím srážením ze směsi dimethylformamid/methylalkohol (1:1) s diethyletherem a potom lyofilizací získaného zbytku ze směsi vody a dioxanu. Převedení na dvojsodnou sůl se provede pomocí 2 ekvivalentů 0,lN hydroxidu sodného a lyofilizací z vody. Výtěžek: 25 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:8: 0,8]: Rf = 0,19; FAB-MS: m/z = 1189 = M+l.
Příklad 6.18
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-glycyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Edukty: 60 mg (0,22 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2), 66 mg (0,1 mmol) N-(lysyl-glycyl)_ batracylin, di-trifluoracetátu (příklad 2.9)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90: 10 : 1], následujícím srážením z methylalkoholu pomocí diethyletheru a potom lyofilizací získaného zbytku ze směsi vody a dioxanu. Výtěžek: 68 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80 : 20 : 2]: Rf = 0,62.
Příklad 6.19
N-{Nalfa,Nepsil0n-bis-[O-(P-L-fiikosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-lysyl}batracylin
6.19.a) N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysylNeps|lon-(fluorenyl-9-methOxykarbOnyl)-lysyl}-batracyÍin
-103CZ 291098 B6
Edukty: 297 mg (1 mmol) p-aminofenyl-p-L-fukosidu, 66 mg (0,1 mmol) N—[lysyl—
Nepsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin, di-trifluoracetátu (příklad 2.15)
Čištění se provádí dvojnásobným srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1:1] pomocí diethyletheru a promytím filtračního koláče diethyletherem. Výtěžek: 89 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]: Rf = 0,31.
6.19) N-{Nalfa,Neps'lon-bis-[0-(P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyllysyl}-batracylin
515 mg (0,39 mmol) sloučeniny z příkladu 6.19.a) se rozpustí v 5 ml dimethylformamidu a 5 ml piperidinu a reakční směs se míchá po dobu 30 minut při teplotě 20 °C. Vsázka se potom zahustí a získaný zbytek se digeruje s diethyletherem, načež se odsaje a filtrační koláč se vyjme do dimethylformamidu. Po srážení diethyletherem a promytí filtračního koláče se získá 335 mg (78 %) produktu ve formě krystalické látky. FAB-MS: m/z = 1100 = M+l.
Příklad 6.20
N-{Nalía,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-diaminopropionyl}-batracylin
6.20.a) N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(3-O-methyl-p-L-fukosyl)—4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-diaminopropionyl}-batracylin
Syntéza se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 6.19).
Edukty: 60 mg (0,22 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2), 100 mg (0,11 mmol) N-[lysyl-Neps,lon(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-diamino-propionyl]-batracylin, di-trifluoracetátu (příklad 2.16), 76 μΐ ethyldiizopropylaminu
Čištění se provádí dvojnásobným srážením z methylalkoholu pomocí diethyletheru a promytím filtračního koláče diethyletherem. Výtěžek: 105 mg (73 %).
6.20) N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-()-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-diaminopropionyl}-batracylin
103 mg (0,079 mmol) sloučeniny z příkladu 6.20.a) se deblokuje piperidinem analogicky, jako je popsáno v příkladě 6.19). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:3: 0,3], později ve stejném systému 15 :6 : 0,6 a potom lyofilizací získaného zbytku ze směsi vody a dioxanu. Výtěžek: 21 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf= 0,32.
Příklad 6.21
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-diaminopropionyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Tato sloučenina se vyrobí analogicky jako je popsáno v příkladě 6.20) přes dva stupně, přičemž se vychází z uhlohydrátu z příkladu 1.10) a peptidového konjugátu z příkladu 2.16). Chromatografické čištění může odpadnout, neboť vedlejší produkty se mohou odstranit digerací s methylalkoholem a diethyletherem. Potom se provede převedení na dvojsodnou sůl se 2 ekvivalenty
-104CZ 291098 B6
O,1N hydroxidu sodného. Výtěžek: 66% přes dva stupně; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10:3: 1,5]: Rf = 0,3.
Příklad 6.22
N-{Nalfa,Nepsilon-bis-[0-(3-0-methyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-seryl}-batracylin
Edukty: 60 mg (0,22 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2), 76 mg (0,11 mmol) N-(lysyl-seryl)batracylin, di-trifluoracetátu (příklad 2.10)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2] a následujícím srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol/diethylether. Výtěžek: 26 %; DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,39.
Příklad 6.23
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysy 1-D-sery 1} -batracy 1 in
Edukty: 60 mg (0,22 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2), 69 mg (0,11 mmol) N-(lysyl-D-seryl)batracylin, di-hydrobromidu (příklad 2.11)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2] a následující lyofilizací ze směsi dioxanu a vody. Výtěžek: 29 %; DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,36.
Příklad 6.24
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysylj-batracylin
Edukty: 80 mg (0,3 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2), 53 mg (0,14 mmol) N-(lysyl)batracylinu (příklad 2.17)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 :0,1, později ve stejném systému 15:2: 0,2], následujícím srážením ze směsi methylalkohol/diethylether. Výtěžek: 26 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2]: Rf= 0,22.
Příklad 6.25
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thÍokarbonyl]-lysyl}-batracylin
Edukty: 60 mg (0,19 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.10), 24 mg (0,063 mmol) N-(lysyl)-batracylinu (příklad 2.17)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2, později ve stejném systému 15 :4:0,5] a následující lyofilizací z vody. Výtěžek: 26 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,25.
-105CZ 291098 B6
Příklad 6.26
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(3-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysy 1 }-batracy 1 in
Roztok sloučeniny 1.31)(79 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanuavody 1 : 1 (10 ml) se za míchání smísí s thiofosgenem (33,5 μΙ, 0,44 mmol). Po 10 minutách se reakční směs zahustí ve vakuu a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný izothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 2.17) (37,7 mg, 0,1 mmol) a s ethyldiizopropylaminem (0,5 ml). Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 —> 20 : 1 —> 10 : 1]. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (56,7 mg, 53 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf= 0,72; t.t. = 125 °C (rozklad).
Příklad 6.27
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-batracylin
Sloučenina 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.17) (37,7 mg, 0,1 mmol). Čištěním mžikovou chromatografií [dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 -> 20: 1 -> 10 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (51,1 mg, 44 %); DC [ethylalkohol]: Rf= 0,80; t.t. = 176 °C (rozklad).
Příklad 6.28
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.17) (37,7 mg, 0,1 mmol). Čištěním srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 za použití diethyletheru se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (53 mg, 47 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,75; t.t. = > 260 °C (rozklad).
Příklad 6.29
N-{Nalfa,Nepsllon-bis-[0-(3-0-karbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-batracylin
Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.17) (37,7 mg, 0,1 mmol). Čištěním srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 za použití diethyletheru se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (55,6 mg, 48 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,09; t.t. = 206 °C (rozklad).
-106CZ 291098 B6
Příklad 6.30
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin
Sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění reakční směsi ve vakuu se získaný zbytek vyjme směsí dichlormethanu a methylalkoholu 1:1(10 ml), produkt se vysráží přídavkem diethyletheru (15 ml) a promyje se malým množstvím ledového methylalkoholu. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (46 mg, 41 %); DC [ethylacetát/ethy 1alkohol 2 : 1]; Rf = 0,12; t.t. = 190 až 191 °C.
Příklad 6.31
N-{Nalfa,Neps'lon-bis-[O--([3-L-íylaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysylseryl}-batracylin p-Aminofenyl-|3-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát -> ethylalkohol] a srážením ze směsi methylalkohol/dichlormethan 1 : 1 pomocí diethyletheru, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (73,8 mg, 70 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,15; t.t. = 123 °C.
Příklad 6.32
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3,4-di-0-rnethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin
Sloučenina 1.31) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol). Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 7 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (43,8 mg, 38 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1 ]: Rf = 0,31; t.t. = 176 °C.
Příklad 6.33
N-{Nalfa,Neps'lon-bis-[O-(3-O-methoxykarbonylmethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin
Sloučenina 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol). Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 3 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (46,2 mg, 37 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,12; t.t. = 161 °C.
Příklad 6.34
N-{Nalfa,N'psil°n-bis-[0-(3-0-karboxylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin, dvojsodná sůl
-107CZ 291098 B6
Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol). Čištěním uvedeným výše se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (39,2 mg, 31 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,77; t.t. = 213 až 215 °C (rozklad).
Příklad 6.35
N-{Nalfa,Nepsilon-bis-[0-(3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin
Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol). Čištěním mžikovou chromatografii [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,1 mg, 53 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,14; t.t. = 192 °C (rozklad).
Příklad 6.36
N-{Nalfa,Neps,1°n-bis-[0-(3-0-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin
Sloučenina 1.40) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (48,9 mg, 44 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf= 0,10; t.t. = 204 °C.
Příklad 6.37
N-{Nalfa,NepsiI°n-bis-[0-(2,3-di-0-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin
Sloučenina 1.41) (66 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol). Čištěním mžikovou chromatografii [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 7 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (52 mg, 45 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,28; t.t. = 164 až 165 °C (rozklad).
Příklad 6.38
N-{Na*fa,Nepsilon-bis-[0-(4-0-(P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-sery 1} -batracylin
Sloučenina 1.56) (95,4 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění reakční směsi ve vakuu se produkt důkladně promyje horkým methylalkoholem (50 ml). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (61,6 mg, 44 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,32; t.t. = 222 °C (rozklad).
Příklad 6.39
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyI-Dserylj-batracylin
-108CZ 291098 B6 p-Aminofenyl-p-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol). Čištěním pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát -> ethylalkohol] a srážením získaného zbytku ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 pomocí diethyletheru se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (50,9 mg, 48 %); DC [ethylalkohol]: Rf= 0,14; t.t. = 133 °C.
Příklad 6.40
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(3,4-di-O-methyl-p-L-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-seryl}-batracylin
Sloučenina 1.31) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol). Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 5 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (53,8 mg, 47 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,38; t.t. = 145 až 146 °C (rozklad).
Příklad 6.41
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-seryl}-batracylin
Sloučenina 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol). Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 3 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (52,4 mg, 42 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,12; t.t. = 168 °C.
Příklad 6.42
N-{Nalfa,Neps,lon-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-seryl}-batracylin, dvojsodná sůl
Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (69,2 mg, 55 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,71; t.t. = 214 až 216 °C (rozklad).
Příklad 6.43
N-{Nalfi>,Neps,lon-bis-[O-(3-O-karboxymethyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-seryl}-batracylin
Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol). Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (46,4 mg, 38 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,10; t.t. = 173 °C.
-109CZ 291098 B6
Příklad 6.44
N-{Nalfa,Nepsilon-bis-[0-(p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-Dasparagy 1} -batracy 1 in p-Aminofenyl-p-L-fukopyranosid (56.2 mg, 0.22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.7) (72,1 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 pomocí diethyletheru, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (69,4 mg, 64 %): DC [ethylalkohol]: Rf = 0,14; t.t. = 185 ažl87°C.
Příklad 6.45
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(3,4-di-O-meth}l-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-asparagyl}-batracylin
Sloučenina 1.31 (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.7) (72,1 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/kyselina octová 200 : 1 -> ethylacetát/ethylalkohol 3:1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (99,5 mg, 85 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,59; t.t. = 145 °C (rozklad).
Příklad 6.46
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-asparagyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Sloučenina 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.7) (72,1 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 pomocí diethyletheru, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (93,4 mg, 73 %); t.t. = 220 °C (rozklad).
Příklad 6.47
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-asparagyl}-batracylin
Sloučenina 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.7) (72,1 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol/kyselina octová 400 : 100 : 2], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (69,7 mg, 57 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,11; t.t. = 111 °C.
Příklad 6.48
N-{Nalfa,Nepsll°n-bis-[O-(P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-Dasparagyl [-batracylin, sodná sůl
-110CZ 291098 B6
Sloučenina 6.44) (21,7 mg, 20 mmol) se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,05N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10). Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (20,6 mg, 93 %).
Příklad 6.49
N-{Na,fa,Nepsil°n-bis-[0-(3,4-di-0-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-asparagyl}-batracylin, sodná sůl
Sloučenina 6.45) (23,5 mg, 20 pmol) se nechá reagovat a zpracovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.48). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (23,9 mg, 100 %).
Příklad 6.50
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]lysyl-D-asparagyl}-batracylin, trojsodná sůl
Sloučenina 6,46 (25,6 mg, 20 pmol) se rozpustí ve vodě (10 ml) a tento roztok se za míchání po kapkách smísí s 0,05N hydroxidem sodným, dokud se nedosáhne pH 8. Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (24 mg, 92 %).
Příklad 6.51
N-{Nalfa,Nepsl'°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]lysyl-D-asparagyl}-batracylin, sodná sůl
Sloučenina 6.47) (24,7 mg, 20 pmol) se nechá reagovat a zpracovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.48). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (23,0 mg, 92 %).
Příklad 6.52
N-{Nalfa,Nep5ll°n-bis-[0-(P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-Dglutamylj-batracylin p-Aminofenyl-[3-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.8) (66,8 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/kyselina octová 200: 1 -> ethylacetát/ethylalkohol/kyselina octová 10 : 1 : 0,1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (39,5 mg, 36 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,09; t.t. = 138 až 139 °C (rozklad).
Příklad 6.53
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-glutamyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 pmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.8) (66,8 mg, 0,1 mmol) a zpracovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (97,4 mg, 92 %); t.t. = 180 °C (rozklad).
-111 CZ 291098 B6
Příklad 6.54
N-{Na'fa,Neps’’°n-bis-[O-(3-O-karboxymethyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-glutamyl}-batracyIin, trojsodná sůl
Sloučenina 6.53) (25,6 mg, 20 pmol) se nechá reagovat a zpracovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.50). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (24,3 mg, 92 %); [a]20 = +20,0° (c = 0,26/H,O).
Příklad 6.55
N-IN^/N^^-bis-fO-TP-L-fukopyranosylj-A-hydroxy-fenylamino-thiokarbonylJlysylglycyl}-batracylin p-Aminofenyl-p-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát -> ethylalkohol], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (62,2 mg, 60 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,12; t.t. = 176 °C.
Příklad 6.56
N-{Nalfa,Neps'ion-bis-[C)-(3-O-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy--fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin
Sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1 —> 2 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (56,2 mg, 52 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,22; t.t. = 197 °C.
Příklad 6.57
N-{Nalfa,Neps'lon-bis-[0-(3,4-di-0-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin
Sloučenina 1.31) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1 —> 2 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (26,2 mg, 23 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,39; t.t. = 209 °C.
Příklad 6.58
N-{NaIfa,Nepsilon-bis-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin
Sloučenina 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté
-112CZ 291098 B6 krystalické látky (22 mg, 18 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,06; t.t. =194 až 195 CC (rozklad).
Příklad 6.59
N-{N'alfa,Nepi,l°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg. 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu se získaný produkt důkladně promyje methylalkoholem, dichlormethanem a diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (86,8 mg, 71 %); t.t. = 230 až 232 °C (rozklad).
Příklad 6.60
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin
Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu se získaný produkt důkladně promyje methylalkoholem, dichlormethanem a diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (40,9 mg, 35 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,05; t.t. = 214 až 216 °C (rozklad).
Příklad 6.61
N-íN^feN^^-bis-tO-fS-O-methyl-a-D-mannopyranosyl^-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin
Sloučenina 1.40) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1 -> 2 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (72,2 mg, 66 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,18; t.t. = 175 °C.
Příklad 6.62
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(2,3-di-0-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamÍnothiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin
Sloučenina 1.41) (66 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1 —> 3 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,6 mg, 60 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf= 0,41; t.t. = 173 °C.
-113CZ 291098 B6
Příklad 6.63
N-{Nalfa,Neps,lon-bis-[O-(p-L-fukopyranosyl)—4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-Dthreonylj-batracylin p-Aminofenyl-p-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.12) (64 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát -> ethylalkohol] a přesrážením produktu ze směsi methylalkohol/dichlormethan 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (30,5 mg, 28 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,10; t.t. = 172 °C.
Příklad 6.64
N-{Nalfa,N'psil°n-bis-[C)-(|3-D-galaktopyranosyl)--4-hydroxy--fenylamino-thiokarbonyl]--lysylD-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.23) (59,7 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 —> 1 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (68,3 mg, 64 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 1:1]: Rf = 0,49; t.t. = 222 až 224 °C (rozklad).
Příklad 6.65
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(2-0-rnethyl-(3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.24) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (69,6 mg, 63 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,24; t.t. =208 °C (rozklad).
Příklad 6.66
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(3-O--methyl-|3--D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 15 : 1 —> 10 : 1 —> 5 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (94,3 mg, 85 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,16; t.t. = 212 °C (rozklad).
Příklad 6.67
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(4-O-methyI-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony l]-lysy 1-D-alany 1} -batracylin
-114CZ 291098 B6
Sloučenina 1.26) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 15 : 1 —> 10 : 1 —> 5 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (52,6 mg, 48 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,88; t.t. = 192 °C (rozklad).
Příklad 6.68
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(6-0-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.27) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (96,7 mg, 88 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf =0,04; t.t. = 210 °C (rozklad).
Příklad 6.69
N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(2,3-dÍ-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.28) (65,9 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (57,4 mg, 51%); DC [dichlormethan/methylalkohol 5: 1]: Rf= 0,40;
t.t. = 148 °C (rozklad).
Příklad 6.70
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(2,4-di-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.29) (65,9 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 —> 15 : 1 —> 10: 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (74,2 mg, 65 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,40; t.t. = 140 °C (rozklad).
Příklad 6.71
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(2,6-di-O-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.30) (65,9 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 -> 15 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (43,9 mg, 40 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5:1]: Rf = 0,43; t.t. = 229 °C (rozklad).
-115CZ 291098 B6
Příklad 6.72
N-{Nalfa,Neps,lon-bis-[0-(3,4-di-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.31) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,2 mg, 59 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :3 :0,2]: Rf= 0,39; t.t. = 184 °C.
Příklad 6.73
N-{Nalfa,Nepsilon-bis-[0-(3,6-di-0--methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.32) (65,9 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 15 : 1 —> 10: 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (57,1 mg, 50 %). DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,42; t.t. = 190 °C.
Příklad 6.74
N-{Nalfa,Neps'lon-bis-[0-(4,6-di-0-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.33) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 —► 10 : 1 —> 5 : 1 ], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (47,0 mg, 42 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf=0,39; t.t.= 169 °C.
Příklad 6.75
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(2,3,4-tri-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.34) (69 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 30 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (83,8 mg, 72 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf =0,36; t.t. = 165 °C (rozklad).
Příklad 6.76
N-{Nalfa,Nepsilon-bis-[O-(2,3,4-tri-O-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
-116CZ 291098 B6
Sloučenina 1.35) (69 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (105 mg, 91 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf= 0,48; t.t. = 194 °C (rozklad).
Příklad 6.77
N-{Nalí\Neps'lon-bis-[0-(2,4,6-tri-0-methyl-[3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.36) (69 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 —> 10 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (67 mg, 58 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf= 0,54; t.t. = 228 °C (rozklad).
Příklad 6.78
N-{Nalfa,Nepsll°n-bis-[0-(3,4,6-tri-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminoth iokarbony 1 ]—ly sy 1-D-alany 1 }-batracyl in
Sloučenina 1.37) (69 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (109,3 mg, 94 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,52; t.t. = 180 °C (rozklad).
Příklad 6.79
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(2,3,4,6-tetra-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.38) (69 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (99,2 mg, 84 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,73; t.t. = 188 °C (rozklad).
Příklad 6.80
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (22 mg, 18 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,33;
t.t. = 194 až 195 °C (rozklad).
-117CZ 291098 B6
Příklad 6.81
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí tam uvedeným způsobem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (99,7 mg, 81 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,80; t.t. = 230 °C (rozklad).
Příklad 6.82
N-{Nalfa,N'psil°n-bis-[0-(3-0-karbamoylmethyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 7:1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (29,4 mg, 25 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 3 : 1]: Rf = 0,23; t.t. = 201 až 202 °C.
Příklad 6.83
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3,4-didesoxy-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.52) (52,6 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 17 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (38,8 mg, 37 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :3 : 0,2]: Rf= 0,40; t.t. = 175 °C.
Příklad 6.84
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysylD-alanyl }-batracy 1 in
Sloučenina 1.39) (59,7 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 —> 1 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (52 mg, 48 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1]: Rf = 0,19; t.t. = 196 °C.
-118CZ 291098 B6
Příklad 6.85
N-{Nalfa,Nepsilo-bis-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.31) (79 mg. 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), speptidovým konjugátem 2.2) (67,7 mg, 0.1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan methylalkohol 10 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (77.6 mg. 69 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :3 : 0,2]: Rf= 0,33; t.t. = 186 °C.
Příklad 6.86
N-{Nalfa,Neps,lon-bis-[O-(4-O-methyl-( β-D-galaktopy ranosy l)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin. dvojsodná sůl
Sloučenina 1.56) (95,4 mg, 0.22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), speptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek důkladně promyje horkým methylalkoholem (50 ml), přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (102,8 mg, 73 %); DC [methylalkohol]: Rf= 0,27; t.t. = 225 až 226 °C.
Příklad 6.87
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(4-0-(3'-sulfát-(3-D-galaktopyranosyl)-P-D-glukopyranosyl)-4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, dvojsodná sůl
Sloučenina 1.57) (117,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (152,8 mg, 95 %); t.t. = 232 CC (rozklad).
Příklad 6.88
N-{Nalfa,Neps,I°n-bis-[0-(4-0-(3'-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-P-D-glukopyranosyl)-4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.58) (98,4 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (118,2 mg, 83 %); t.t. = 221 CC (rozklad).
Příklad 6.89
N-{Nalfa,Nepsllon-bis-[0-(2-0-methyl4-0-(3'-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-p-D-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.59) (101,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě
6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 15 : 1 —> 10 : 1 —> 5 :1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (101,3 mg, 70 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 2: 1]:
Rf = 0,58; t.t. = 233 °C (rozklad).
-119CZ 291098 B6
Příklad 7.1 až 7.13
Obecný vzorec
n (n = 0,1,2)
Když se vychází zjiných aminokyselinových nebo peptidových konjugátů batracylinu nebo z batracylinu, vyrobí se analogicky, jako je popsáno v příkladě 4.1.a), následující glykokonjugáty:
Příklad 7.1
N-{N-[O-(3-O-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin
Edukty: uhlohydrát z příkladu 1.2), aminokyselinový konjugát z příkladu 2.3)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1) a lyofílizace ze směsi dioxanu a vody. Výtěžek: 42 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2]: Rf = 0,31.
Příklad 7.2
N-(N-[O-(3-O-karboxymethyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl
Edukty: uhlohydrát z příkladu 1.10), aminokyselinový konjugát z příkladu 2.3)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3) a lyofílizace ze směsi dioxanu a vody. Následující převedení na sodnou sůl se provádí pomocí 0,lN hydroxidu sodného. Výtěžek: 43 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak(17%) 15:4: 0,5]: Rf= 0,14.
Příklad 7.3
N-{N-[0-([3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-seryl-D-alanyl}-batracylin
Edukty: p-Aminofenyl-p-L-fukosid, aminokyselinový' konjugát z příkladu 2.18)
- 120CZ 291098 B6
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:3: 0,3) a lyofilizace ze směsi dioxanu a vody. Výtěžek: 93 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:3: 0,3]: Rf = 0,28: FAB-MS: m/z = 705 = M+l.
Příklad 7.4
N-{N-[0-([3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl-D-alanyl}-batracylin
Edukty: p-Aminofenyl-(3-L-fukosid, aminokyselinový konjugát z příkladu 2.19)
Čištění se provádí digerací s methylalkoholem a srážením ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu etherem. Výtěžek: 65 %; DC [acetonitril voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf=0,78.
Příklad 7.5
N-{N-[O-(P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-glutamyl-D-alanyl}batracylin
Edukty: p-Aminofenyl-p-L-fukosid, aminokyselinový konjugát z příkladu 2.20)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5 a později stejný systém 15:6: 0,6] a lyofilizace ze směsi dioxanu a vody. Výtěžek: 93 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:8: 0,8]: Rf = 0,55.
Příklad 7.6
N-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-batracylin
250 mg (1 mmol) batracylinu se rozpustí v 50 ml dioxanu a po přídavku 184 μΐ thiofosgenu se reakční směs míchá po dobu 2 hodin při teplotě 20 °C. Potom se zahustí, digeruje se diethyletherem a přefiltruje se. Zbytek na filtru se suší po dobu 16 hodin za vysokého vakua a potom se vyjme do 30 ml dimethylformamidu. Přidá se 312 mg (1 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.10) a 500 μΐ ethyldiizopropylaminu a reakční směs se zpracovává po dobu 4 hodin ultrazvukem. Potom se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2, později ve stejném systému 15:6: 0,6]. Relevantní frakce se zahustí a lyofilizují se ze směsi dioxanu a vody. Výtěžek: 363 mg (60 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:6: 0,6]: Rf = 0,38.
Příklad 7.7
N-[CH3-O-methyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-batracylin
Výroba probíhá analogicky jako je popsáno v příkladě 7.6), přičemž se vychází z batracylinu a z uhlohydrátů z příkladu 1.2). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0.1]. Výtěžek: 58 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2]: Rf = 0,39; FAB-MS: m/z = 561 = M+l.
-121 CZ 291098 B6
Příklad 7.8
N-{N-[0-(3,4-di-0-methyl-^D-galaktopyranosyl)-4”hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.31) (37,5 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 30 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (49,3 mg, 75 %); DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1]: Rf = 0,81; t.t. = 185 °C (rozklad).
Příklad 7.9
N-{N-[0-(2,3,4-tri-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.34) (34,5 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 40 : 1 -> 15 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (54,9 mg, 81%); DC [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1]: Rf= 0,15; t.t. = 190 °C (rozklad).
Příklad 7.10
N-{N-[O-(3-O-methoxykarbonylmethyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alany 1} -batracy 1 in
Sloučenina 1.42) (37,8 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 —> 10 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (44,3 mg, 63 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,85; t.t. = 195 °C (rozklad).
Příklad 7.11
N-{N-[0-(3-0-karboxyfenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl }-batracylin, sodná sůl
Sloučenina 1.43) (38,6 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26). Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (63,8 mg, 89 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,15; t.t. = 217 °C (rozklad).
Příklad 7.12
N-[N-[0-(3-0-karbamoylmethyl-|3-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin
Sloučenina 1.44) (37,8 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 —> 10 : 1 —> 5 : 1], přičemž se získá produkt
-122CZ 291098 B6 ve formě žluté krystalické látky (20 mg, 29 %); DC [ethylalkohol]: Rf = 0,15; t.t. = 184 °C (rozklad).
Příklad 7.13
N-{N-[O-(P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin, p-Aminofenyl-p-L-fukopyranosid (28,1 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/petrolether 2 : 1 -> 5 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (49,8 mg, 81 %); DC [ethylalkohol]: Rf= 0,50; t.t. = 173 °C.
Příklad 8.1 až 8.12
Obecný vzorec
R
Příklad 8.1
N-{Nepsil°n-[2-chlor-4-[0-(3-0-methyl-(3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]lysyl-D-alanyl [-batracylin, trifluoracetát
8.1 .a) N-{Nalfa-[terc.-butoxykarbonyl]_Neps,lon-[2-chlor-4-[0-(3-0-methyl-[3-L-fukosyl)4-hydroxyfenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
265 mg (0,98 mmol) p-aminofenyl-3-O-methyl-p-L-fukosidu (příklad 1.2)) a 181 mg (0,98 mmol) kyanurchloridu se rozpustí v 50 ml směsi dioxanu a vody 1:1, ochladí se na teplotu -5 °C a po přídavku 83 mg hydrogenuhličitanu sodného se při této teplotě míchá po dobu 15 minut. Potom se přidá 538 mg (0,98 mmol) N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylinu (příklad 2.4)), rozpuštěných ve 14 ml dimethylformamidu a dalších 83 mg hydrogenuhličitanu sodného a reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti. Po 16 hodinách míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a získaný zbytek se zpracuje s vodou. Směs se odsaje a zbytek na filtru se za vysokého vakua usuší, přičemž se získá 890 mg (96 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,26.
-123CZ 291098 B6
8.1) N-{Nepsll°n-[2-chlor-4-[0-(3-0-methyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl]-batracylin, trifluoracetát
100 mg (0,11 mmol) sloučeniny z příkladu 8.1.a) se rozpustí ve 3 ml dioxanu, načež se přidá 60 mg uhličitanu draselného a 6,5 ml 0,lN roztoku ethanolaminu v dioxanu a reakční směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 80 °C. Potom se zahustí.
Příklad 8.2
N-{Neps,1°n-[4-hydroxyethylamino-2-[O-(3-O-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
8.2.a) N-{Nalfa-[terc.-butoxykarbonyl]-Neps,lon-[4-hydroxyfenylamino-2-[O-(3-O-methyl[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin
100 mg (0,11 mmol) sloučeniny z příkladu 8.1.a) se rozpustí ve 3 ml dioxanu, přidá se 60 mg uhličitanu draselného a 6,5 ml 0,1 N roztoku ethanolaminu v dioxanu a reakční směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 80 °C. Potom se zahustí a získaný zbytek se rozmíchá s vodou, přefiltruje se a zbytek na filtru se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15: 1 :0,1]. Po zahuštění relevantních frakcí a vysušení získaného zbytku za vysokého vakua se získá 83 mg (80 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2]: Rf = 0,23.
8.2) N-{Neps,l°n-[4-hydroxyfenylamino-2-[0-(3-0-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát mg (0,07 mmol) sloučeniny z příkladu 8.2.a) se deblokuje analogicky, jako je popsáno v příkladě 8.1). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:2: 0,2]. Následující srážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru vede k produktu v 90% výtěžku; FAB-MS m/z = 854 = M+l.
Analogicky jako je popsáno v příkladě 8.1) se vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 8.3
N-{N'p5ll0n-[2-chlor-4-[0-(2-O-methyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]lysyl-D-alanyl }-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.1):
Výtěžek: 76 %; FAB-MS: m/z = 829 = M+l.
Příklad 8.4
N-{Nepsll°n-[2-chlor-4-[O-([3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: p-Aminofenyl-P-L-fukosid;
Výtěžek: 76 %; FAB-MS: m/z = 815 = M+l; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5]: Rf = 0,44.
-124CZ 291098 B6
Příklad 8.5
N-{Neps,l°n-[2-chlor-4-[O-(3-desoxy-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.6);
Výtěžek: 56 %; FAB-MS: m/z= 799 = M+1; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5: 1 : 0,2]: Rf= 0,54.
Analogicky jako je uvedeno v příkladech 8.1.a), 8.2.a) a 8.2) se z peptidového konjugátu batracylinu z příkladu 2.4), popřípadě zodpovídajícím způsobem vyrobitelných L-alanyl-izomerů, vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 8.6
N-{Neps,lon-[4-hydroxyethylamino-2-[0-(2-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.1);
Výtěžek: 78 %; FAB-MS: m/z = 854 = M+l; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5]; Rf = 0,33.
Příklad 8.7
N-{Nepsil°n-[4-hydroxyethylamino-2-[0-(4-0-methyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl]-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.4);
Výtěžek: 38 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]: Rf= 0,4.
Příklad 8.8
N-{Nepsil°n-[4-hydroxyethylamino-2-[0-(3-desoxy-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.6);
Výtěžek: 78 %; FAB-MS: m/z= 824 = M+1; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5]: Rf = 0,37.
Příklad 8.9
N-{Nepsil°n-[4-hydroxyethylamino-2-[0-(P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: p-aminofenyl-P-L-fukosid;
-125CZ 291098 B6
Výtěžek: 52 %; FAB-MS: m/z = 820 = M+l; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 :4:0,5): Rf= 0,37.
Příklad 8.10
N-{Neps,,°n-[4-hydroxyethylamino-2-[0-(3-0-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.2);
Výtěžek: 88 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]: Rf = 0,35.
Příklad 8.11.
N-{Nepsilo-[4-hydroxyethylamino-2-[0-(2-0-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.1);
Výtěžek: 88 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]: Rf= 0,40.
Příklad 8.12
N-{Nepsilon-[4-hydroxyethylamino-2-[0-(4-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát
Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.4);
Výtěžek: 88 %; FAB-MS: m/z = 854 = M+l; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 :4:0,5]:Rf=0,37.
Příklad 9.1
N-[D-alanyl]-chinolon-a, trifluoracetát
CF3COOH
COOH
9.1 .a) N-[N-(terc.-butoxykarbonyl)-D-alanyl]-chinolon-a
-126CZ 291098 B6
Ve 200 ml dimethylformamidu se rozpustí n-(terc.-butoxykarbonyl)-D-alanin (3,6 g, 19,2 mmol) a 2-izobutoxy-l-izobutoxykarbonyl-1.2-dihydro-chinolon (5,8 g, 19.2 mmol) a po osmihodinovém míchání při teplotě místnosti se přidá chinolin-a (4 g, 9,6 mmol) a 3,3 ml ethyldiizopropylaminu a vsázka se zpracuje po dobu 10 hodin ultrazvukem. Potom se zahustí, získaný zbytek se vyjme do dichlormethanu a vysráží se diethyleiherem. Po filtraci, promytí diethyletherem a vysušení za vysokého vakua se získá 4,58 g (81 %) v názvu uvedené sloučeniny, která se nechá bez dalšího čištění dále reagovat.
9.1) N-[D-alanyl]-chinolon-a, trifluoracetát
4,56 g (7,75 mmol) sloučeniny z příkladu 9.1.a) se při teplotě 0 °C rozpustí v 50 ml dichlormethanu a 50 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové a reakční směs se míchá při této teplotě po dobu jedné hodiny. Potom se zahustí, destiluje se s dichlormethanem a vysráží se z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Získá se takto 4,07 g (87 %) krystalické látky uvedené v názvu. DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0.2]: Rf = 0,34.
Příklad 9.2
N-[alanyl]-chinolon-a, trifluoracetát
CF-jCOOH
Syntéza se provádí stejně, jako syntéza izomeru v příkladě 9.1).
Příklad 9.3
N-[lysyl-D-alanyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát
-127CZ 291098 B6
9.3 .a) N-[Nalfa,Nepsilon-bis-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-chinolon-a
341 mg (9,84 mmol) Nalfa,Neps,lon-bis-(terc.-butoxykarbonyi)-lysinu se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se smísí se 200 mg (1,48 mmol) N-hydroxybenzotriazolu a 227 mg (1,18 mmol) N'-(3-dimethylaminopropyl)-N-ethylkarbodiimidu hydrochloridu. Po tříhodinovém míchání při teplotě 10 °C se přidá 432 mg (0,82 mmol) sloučeniny z příkladu 9.1 a reakční směs se míchá po dobu dalších 2 hodin při teplotě 20 °C. Potom se zahustí, získaný zbytek se promíchá třikrát s 50 ml vody, načež se vyjme do dichlormethanu a vysuší se pomocí bezvodého síranu sodného. Srážení se provádí pomocí diethyletheru, přičemž se získá 516 mg (78 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [acetonitril/voda 10 : 1): Rf = 0,55.
9.3) N-[-lysyl-D-alanyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát
Provede se deblokace 512 mg (0,63 mmol) sloučeniny z příkladu 9.3.a) z ethylesteru kyseliny octové pomocí diethyletheru, analogicky jako je popsáno v příkladě 9.1), přičemž se dosáhne výtěžku 479 mg (90 %); DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10:3: 1,5]: Rf = 0,3.
Příklad 9.4
N-[-lysyl-alanyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát
Syntéza se provádí stejně, jako syntéza izomerů v příkladě 9.3).
Příklad 9.5
N-[Ndfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-alanyl]-chinolon-a nh2
9.5.a) N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-Nepsilon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-Dalanyl]-chinolon-a
1,57 g (3,36 mmol) N^^terc.-butoxy-karbonylj-N^^-Xfluorenyl^-methoxykarbonyl)lysinu se rozpustí ve 25 ml dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se smísí se 600 mg (5,04 mmol) N-hydroxysukcinimidu a 820 mg (4,03 mmol) Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimidu. Po 3 hodinách se odfiltruje vzniklá močovina, k filtrátu se přidá 1,5 g (2,86 mmol) sloučeniny z příkladu 9.1)
-128CZ 291098 B6 a reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Zbytek močoviny se odfiltruje a filtrát se čistí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol 97,5 : 2.5, později ve stejném systému 90 : 10], načež se vysráží ze směsi dichlormethan/diethylether 1 : 1 pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 1,5 g (56 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 9 : 1]: Rf = 0,47.
9.5) N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-chinolon-a
Odštěpení Fmoc ze sloučeniny z příkladu 9.5.a) se provádí pomocí piperidinu vdimethylformamidu. Srážení surového produktu z dimethylformamidu se provádí pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 72 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,43.
Příklad 9.6
N-[Nepsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-chinolon-a, trifluoracetát
cf3cooh
COOH
Odštěpení Boc ze sloučeniny z příkladu 9.5.a) se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 9.1). Srážení surového produktu se provádí ze směsi methylalkohol/diethylether. Výtěžek činí 80 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]: Rf = 0,36.
Příklad 9.7
N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-alanyl]-chinolon-a
Syntéza se provádí stejně, jako syntéza izomeru v příkladě 9.5).
Příklad 9.8
N-[lysyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát
-129CZ 291098 B6 cf3cooh cf3cooh
COOH
9.8.a) N-[Nalfa,Nepsll°n-bis-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl]-chinolon-a
317 mg (3,8 mmol) Nalfa,Nepsilon-bis-(terc.-butoxykarbonyl)-lysinu se spojí podle předpisu v příkladě 9.1) s chinolonem-a. Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak(17%) 15 : 1 : 0,1]. Získá se takto 1 010 mg (71 %) v názvu uvedené sloučeniny.
9.8) N-[lysyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát
005 mg (1,347 mmol) sloučeniny z příkladu 9.8.a) se deblokuje stejně, jako je uvedeno v příkladě 9.1). Po srážení ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru se získá 966 mg (93 %) v názvu uvedené sloučeniny ve formě krystalické látky DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10 : 5 : 3]: Rf = 0,33.
Příklad 9.9
N-[D-lysyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát
Syntéza se provádí stejně, jako syntéza izomeru v příkladě 9.8).
Příklad 9.10
N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl]-chinolon-a,
COOH
9.10.a) N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-Nepsllon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-chinolon-a
-130CZ 291098 B6
350 mg (2,88 mmol) Nalfaterc.-butoxykarbonyl)-Nepsi,on-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)lysinu se spojí podle předpisu v příkladě 9.1) s chinolonem-a. Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 :0,1, později ve 5 stejném systému 15:2: 0,2]. Získá se takto 1 025 mg (82 %) v názvu uvedené sloučeniny.
9.10) N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl]-chinolon-a
Odštěpení Fmoc ze sloučeniny z příkladu 9.10.a) se provádí analogicky, jako je popsáno io v příkladě 9.5). Dvojnásobné srážení surového produktu z methylalkoholu se provádí pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 86 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf=0,48.
Příklad 9.11
N-[Nepsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-chinolon-a, trifluoracetát
O
COOH
Odštěpení Boc ze sloučeniny z příkladu 9.10.a) se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 9.1). Srážení surového produktu se provádí ze směsi methylalkohol/diethylether. Výtěžek činí 92 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5]: Rf = 0,44.
-131 CZ 291098 B6
Příklad 10.1-10.3
Příklad 10.1
N-{Nepsil°n-[O-(3-C)-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylaminothiokarbonyl]-lysylD-alanyl }-ch inolon-a
10.1 .a) N-{Nalfa(terc.-butoxykarbonyl)-Nepsllon-[0-(3-0-karboxymethyl-P-L-fukosyl)-4hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-chinolon-a mg (0,25 mmol) p-aminofenyl-3-0-karboxymethyl-|3-L-fukosidu (příklad 1.10)) se v 15 ml směsi dioxanu a vody 1 : 1 smísí za míchání se 47 μΐ (0,28 mmol) thiofosgenu. Po desetiminutovém míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a suší se po dobu jedné hodiny za vysokého vakua. Získaná olejovitá látka se potom spojí v absolutním dimethylformamidu se 180 mg (0,25 mmol) N-[Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-chinolonu-a (příklad 9.5)) za přítomnosti 86 μΐ ethyldiizopropylaminu. Po dvojnásobném srážení surového produktu ze směsi dichlormethanu a diethyletheru a následujícím rozmíchání s vodou alyofilizaci ze směsi dioxanu a vody se získá 210 mg (78%) v názvu uvedené sloučeniny; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,62.
10.1) N-{Neps,l°n-[0-(3-0-karboxyrnethyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-chinolon-a
208 mg (0,193 mmol) sloučeniny z příkladu 10.1.a) se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě 0°C v 10 ml dichlormethanu a 10 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové. Potom se reakční směs zahustí, destiluje se s 15 ml methylalkoholu a chromatografuje se za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 10: 10 : 0,8. Po následujícím srážení z dimethylformamidu za použití diethyletheru se získá 52 mg (28 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,53.
-132CZ 291098 B6
Analogicky jako je popsáno v příkladě 10.1) se z částečně chráněných peptidových konjugátů podle příkladů 9.5), 9.7). popřípadě 9.10), vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 10.2
N-{Nepsi,0n-[O-(3-O-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenyl-amino-thiokarbonyl]-lysyl-Dalanyl}-chinolon-a ίο Edukty: uhlohydrát z příkladu 1.2); peptidový konjugát z příkladu 9.7).
Čištění mezistupně se provádí vícenásobným srážením z methylalkoholu pomocí dimethyletheru. Čištěním konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) , později se stejným systémem 15 : 8 : 0,8 se získá v názvu i? uvedená sloučenina ve výtěžku 20 %; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 8 : 0,8]: Rf = 0,15.
Příklad 10.3
N-{Nepsil°n-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenyl-amino-thiokarbonyl]-lysyl}chinolon-a
Čištění mezistupně se provádí srážením z methylalkoholu pomocí dimethyletheru. Čištěním konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) se získá v názvu uvedená sloučenina ve výtěžku 39 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,33.
Příklad 11.1-11.18
-133CZ 291098 B6
Příklad 11.1
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-rnethyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysy 1-D-alany 1} -ch inolon-a mg (0,19 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-[3-L-fukosidu (příklad 1.2)) se podle předpisu z příkladu 10.1.a) nejprve převede na olejovitou látku a potom se nechá reagovat v 5 ml dimethylformamidu se 68 mg (0,08 mmol) N-(lysyl-D-alanyl)-chinolonu a, di-trifluoracetátu (příklad 9.3) za přítomnosti 55 μΐ ethyldiizopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, načež se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografíe za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 85 : 15 : 1,5. Srážením z methylalkoholu za použití diethyletheru se získá 62 mg (63 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80 : 20 : 2]: Rf= 0,5; MS-MALDI: m/z= 1242 = M+l.
Analogicky jako je popsáno v příkladě 11.1) se zpeptidových konjugátů podle příkladů 9.3), 9.4), 9.8), popřípadě 9.9), vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 11.2
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-rnethyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylarnino-thiokarbonyl]lysyl-alanyl}-chinolon-a
Edukty: 50 mg (0,19 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.2); 0,08 mmol peptidový konjugát z příkladu 9.4).
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 : 1 a srážením z methylalkoholu pomocí diethyletheru se získá v názvu uvedená sloučenina ve výtěžku 79 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2]: Rf= 0,42.
Příklad 11.3
N-{Nalfa,Nepsilon-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl]-chinolon-a
Edukty: 52 mg (0,166 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.10); 0,07 mmol peptidový konjugát z příkladu 9.4).
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80 : 20 : 2 a rozmícháním získaného zbytku s methylalkoholem; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10 : 3 : 1,5]: Rf=0,62.
Příklad 11.4
N-{Nalía,Nepsllon-bis-[O-(3-O-karboxymethyl-β-L·-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl-alanyl}-chinolon-a
Edukty: 44 mg (0,14 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.10); 0,06 mmol peptidový konjugát z příkladu 9.3).
-134CZ 291098 B6
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80 : 20 : 2 a rozmícháním získaného zbytku s methylalkoholem. Výtěžek činí 57 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10:3: 1,5]: Rf = 0,62.
Příklad 11.5
N-{Nalfa,Neps'lon-bis-[0-(ct-L-rhamnosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysylalanyl}-chinolon-a
Edukty: 44 mg (0,166 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.21); 0,07 mmol peptidový konjugát z příkladu 9.4).
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80:20:1 a rozmícháním získaného zbytku se směsí methylalkohol/diethylether. Výtěžek činí 90 mg (89 %); DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5: 1 : 0,2]: Rf= 0,62; MS-ESI: m/z = 1212 = M+1.
Příklad 11.6
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl}-chinolon-a
Edukty: 70 mg (0,258 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.2); 0,11 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.8).
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 : 1, srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a rozmícháním získaného zbytku s vodou. Výtěžek činí 41%; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,65.
Příklad 11.7
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Dlysyl}-chinolon-a
Edukty: 50 mg (0,19 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.2); 0,08 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.9).
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 : 1, srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a rozmícháním získaného zbytku s vodou. Výtěžek činí 67 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,65, MS-FAB: m/z =1169 = M+l.
Příklad 11.8
N-{Nalfa,Neps,lon-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, dvojsodná sůl
Edukty: 50 mg (0,16 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.10); 0,07 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.8).
-135CZ 291098 B6
Po zahuštění reakční směsi, vyjmutí do 10 ml dimethylformamidu a přídavku 8 ml 0,1 N hydroxidu sodného se reakční směs míchá po dobu 2 hodin při teplotě 20 °C. Po novém zahuštění se vyjme získaný zbytek do vody a hodnota pH se nastaví na 5. Potom se lyofilizuje a digeruje s methylalkoholem a potom se směsí methylalkohol/diethylether. Získá se takto 68 mg (65 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,26.
Příklad 11.9
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-a, dvojsodná sůl
Edukty: 100 mg (0,32 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.10); 0,13 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 12.9).
Po zahuštění reakční směsi, vyjmutí do 10 ml dimethylformamidu a přídavku 16 ml 0,lN hydroxidu sodného se reakční směs míchá po dobu 2 hodin při teplotě 20 °C. Po novém zahuštění se vyjme získaný zbytek do vody a hodnota pH se nastaví na 5. Potom se lyofilizuje a digeruje s methylalkoholem a potom se směsí methylalkohol/diethylether. Získá se takto 160 mg (77%) v názvu uvedené sloučeniny; t.t. = 218 až 220 °C; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10:3: 1,5]: Rf = 0,69.
Příklad 11.10
N-{Nalfa,Neps,lon-bis-[0-(3-0-methyl-a-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Dlysyl}-chinolon-a
Edukty: 50 mg (0,19 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.3); 0,08 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.9).
Příprava probíhá analogicky jako je popsáno v příkladě 11.7). Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak(17%) 10:10:1] a následujícím srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem; výtěžek: 66 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,62.
Příklad 11.11
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(a-L-rhamnosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}chinolon-a
Edukty: 50 mg (0,19 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.21); 0,08 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.9).
Příprava probíhá analogicky jako je popsáno v příkladě 11.7); výtěžek: 57%; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2]: Rf=0,63.
Příklad 11.12
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Dlysyl}-chinolon-a, sodná sůl
-136CZ 291098 B6 mg (0,05 mmol) sloučeniny z příkladu 11.7) se suspenduje ve vodě a převede se s jedním ekvivalentem 0,1 N hydroxidu sodného na sodnou sůl. Po lyofilizací se získá 60 mg v názvu uvedené sloučeniny.
Příklad 11.13
N-{Nalfa,Nepsll°n-bis-[0-(3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl
Roztok sloučeniny 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1 : 1 (10 ml) se za míchání smísí s thiofosgenem (33,5 ml, 0,44 mmol). Po 10 minutách se reakční směs zahustí ve vakuu a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný izothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 9.8) (77,4 mg, 0,1 mmol) a s ethyldiizopropylaminem (0,5 ml), načež se reakční směs míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, zahustí se ve vakuu a čistí se pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 10 : 10 : 1 —> methylalkohol/amoniak (25%) 20: 1]. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, která se suspenduje ve vodě (10 ml). Suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,05N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10). Lyofilizací filtrátu tohoto roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (39,7 mg, 32 %); [a]D 20 = +25,8° (c = 0,26/H2O).
Příklad 11.14
N-{Nalfa,Nepsil°-bis-[0-(4-0-3'-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-b-D-glukopyranosyl)-4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl
Sloučenina 1.58) (98,4 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 11.13), s peptidovým konjugátem 9.8) (77,4 mg, 0,1 mmol). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (62,5 mg, 40 %); [a]D 20 = +12,9° (c = 0,26/H2O).
Příklad 11.15
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(2-0-methyl-4-0-(3'-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-b-E)-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl
Sloučenina 1.59) (101,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 11.13), s peptidovým konjugátem 9.8) (77,4 mg, 0,1 mmol). Čištění se provádí srážením ze směsi methylalkohol/dichlormethan 1 : 1 pomocí diethyletheru a vyvařením s ethylalkoholem. Získá se takto žlutá krystalická látka, která se převede výše uvedeným způsobem na sodnou sůl, přičemž se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (51,1 mg, 32 %); [a]D 20 = +27,9° (c = 0,24/H2O).
Příklad 11.16
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-b-D-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl
Sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 11.13), s peptidovým konjugátem 9.9) (77,4 mg, 0,1 mmol). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (77,3 mg, 63 %); [a]D 20 = -23,8° (c = 0,63/H2O).
-137CZ 291098 B6
Příklad 11.17
N-[Nalfa,Nepsllon-bis-[0-(3-0-methyl“a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl
Sloučenina 1.40) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 11.13), s peptidovým konjugátem 9.9) (77,4 mg, 0,1 mmol). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (33,6 mg, 27 %); [a]20 = +0,7° (c = 0,28/H2O).
Příklad 11.18
N-{Nalfa,Nepsilon-bis-[0-(4-0-(3'-0-methyl-b-I>-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl
Sloučenina 1.58) (98,4 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 11.13), s peptidovým konjugátem 9.9) (77,4 mg, 0,1 mmol). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (63,0 mg, 41 %); [a]D 20 = -21,8° (c = 0,22/H2O).
Příklad 12.1-12.15
Obecný vzorec cooPříklad 12.1
N-{N'-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4—hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}chinolon-a
447 mg (1,66 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-[3-L-fukosidu (příklad 1.2)) se podle předpisu podle příkladu 10.1.a) nejprve převede na olejovitou látku a potom se ve 40 ml dimethylformamidu nechá reagovat s 1 g (1,66 mmol) N-(D-alanyl)-chinolonu-a, trifluoracetátu (příklad 9.1)) za přítomnosti 568 μΐ ethyldiizopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 2 hodin při teplotě místnosti, načež se zahustí a čistí několikanásobným srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru. Potom se získaný zbytek na filtru
-138CZ 291098 B6 rozmíchá ještě dvakrát s vodou. Získá se takto 876 mg (66 %) v názvu uvedené sloučeniny; t.t. - 198 °C; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: R.-= 0,63.
Analogicky jako je popsáno v příkladě 12.1) se z aminokyselinových konjugátů z příkladů 9.1), popřípadě 9.2), vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 12.2
N-{N'-[0-(3-0-methyl-(3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-alanyl}-chinolon-a
Edukt: 25 mg (0,092 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.2)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 : 1], srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a rozmícháním zbytku na filtru s vodou. Výtěžek činí 53 mg (52 %); DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,65.
Příklad 12.3
N-{N'-[0-(3-0-karboxymethyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-chinolon-a, monosodná sůl
Edukty: 523 mg (1,67 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.10), 840 mg (1,39 mmol) sloučeniny z příkladu 12.1)
Po šestihodinové reakční době se reakční směs zahustí a rozmíchá se s vodou. Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak(17%) 15 :8:0,8, později ve stejném systému 10 : 1 : 1] a lyofilizuje ze směsi dioxan/voda. Potom se vyjme získaný zbytek do vody a smísí se s jedním ekvivalentem 0,lN hydroxidu sodného a znovu se lyofilizuje. Výtěžek činí 525 mg (45 %); DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf=0,39.
Příklad 12.4
N-{N'-[0-(a-L-rhamnosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-chinolon-a,
Edukt: 20 mg (0,076 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.21)
Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90: 10 : 1] a srážením z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 20 mg (34 %); DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0.2]: Rf = 0,42.
Z částečně chráněných N-(lysyl)-chinolon-a-konjugátů, popřípadě N-(lysyl-D-alanyl)chinolon-a-konjugátů, se vyrobí následující glykokonjugáty:
-139CZ 291098 B6
Příklad 12.5
N-{Nalfa-[O-(3-O-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Nepsilra-[fluorenyl-9-methoxykarbonyl]-lysyl}-chinolon-a,
12.5.a) N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbon)l]Nepsil°n-[fluorenyl-9-methoxykarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, mg (0,34 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-p-L-fukosidu (příklad 1.2)) se podle předpisu 10 podle příkladu 10.1.a) nejprve převede na olejovitou látku a potom se ve 20 ml dimethylformamidu nechá reagovat se 300 mg (0,34 mmol) N-[Nepsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)lysyl]-chinolonu-a, trifluoracetátu (příklad 9.11) za přítomnosti 116 μΐ ethyldiizopropylaminu.
Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, načež se zahustí a čistí srážením z dichlormethanu pomocí diethyletheru. Potom se získaný zbytek na filtru rozmíchá ještě s vodou 15 a lyofilizuje se ze směsi dioxanu a vody. Získá se takto 290 mg (79 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,6.
12.5) N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl}-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl}-chinolon-a,
288 mg (0,267 mmol) sloučeniny z příkladu 12.5.a) se rozpustí ve 20 ml dichlormethanu a smísí se s 8 ml pyridinu. Po třicetiminutovém míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a získaný zbytek se sráží z dichlormethanu pomocí diethyletheru. Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak(17%) 10 : 10:2], Získaný 25 zbytek se rozmíchá s diethyletherem a lyofilizuje se z vody. Získá se takto 90 mg (39 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 10:10: 5]: Rf = 0,4.
Analogicky jako je popsáno v příkladě 12.5) se zkonjugátů z příkladů 9.11), popřípadě 9.6), vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 12.6
N-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-(3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]35 lysyl}-chinolon-a, dvojsodná sůl
Edukty: 63 mg (0,2 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.10), 158 mg (0,18 mmol) sloučenina z příkladu 9.11)
Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15:4: 0,5, později ve stejném systému 10 : 10 : 1] a v konečném stupni vícenásobným rozmícháním s methylalkoholem a promjtím zbytku na filtru diethyletherem. Výtěžek činí 44 %. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě a smíšením se dvěma ekvivalenty 0,lN hydroxidu sodného se vyrobí dvojsodná sůl a roztok se lyofilizuje. DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10:3: 1,5]: Rf = 0,39.
Příklad 12.7
N-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysylD-alanyl}-chinolon-a,
Edukty: 147 mg (0,47 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.10), 448 mg (0,47 mmol) sloučenina z příkladu 9.6)
-140CZ 291098 B6
Čištění meziproduktu se provádí pomocí dvojnásobného srážení ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a rozmícháním zbytku na filtru s vodou. Výtěžek činí 92 %. Čištění konečného stupně se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 10:10:2] a srážením z dimethylformamidu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 59 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10:3: 1,5]: Rf = 0,4.
Příklad 12.8
N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-b-D-gaIaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl}-chinolon-a, hydrochloríd
Edukty: 62,8 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.25), 180 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 9.11)
Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10: 1 -> 7 : 1 -»2 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (145,7 mg, 67 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,48. Potom se stejně, jako je uvedeno v příkladě 4.5), odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a provede se čištění. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, který se suspenduje ve vodě (10 ml). Tato suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,lN kyselinou chlorovodíkovou, dokud nevznikne čirý roztok (pH > 3). Lyofilizací zfiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (119,4 mg, 66 %); [a]D 20 = +33,8° (c = 0,28/PLO).
Příklad 12.9
N-{Nalfa-[0-(3,6-di-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl}-chinolon-a, hydrochlorid
Edukty: 65,9 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.32), 180 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 9.11)
Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 -> 7 : 1 -> 2 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté kry stalické látky (115,0 mg, 52 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,44. Potom se stejně, jako je uvedeno v příkladě 4.5), odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a provede se čištění. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, který se suspenduje ve vodě (10 ml). Tato suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,lN kyselinou chlorovodíkovou, dokud nevznikne čirý roztok (pH > 3). Lyofilizace zfiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (94,3 mg, 51 %); [a]D 20 = +44,2° (c = 0,34/H2O).
Příklad 12.10
N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl}-chinolon-a, hydrochlorid
Edukty: 62,8 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.40), 180 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 9.11)
Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 -> 5 : 1 -> 1 : 1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (96,7 mg, 44 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,47. Potom se stejně, jako je uvedeno
-141 CZ 291098 B6 v příkladě 4.5), odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a provede se čištění. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, který se suspenduje ve vodě (10 ml). Tato suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,lN kyselinou chlorovodíkovou, dokud nevznikne čirý roztok (pH > 3). Lyofilizací zfiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (78,2 mg, 43 %); [a]D 20 = -157,2° (c = 0,30/H20).
Příklad 12.11
N-{Nalfa-[0-(4-0-(3'-O-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-b-D-glukopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, hydrochlorid
Edukty: 98,4 mg, (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.58), 180 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 9.11)
Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 20 : 10 : 1 -> 10 : 10 : 1 -> methylalkohol/amoniak (25%) 20 : 1], přičemž se získá produkt ve formě béžové krystalické látky (132,1 mg, 53 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 10 : 10 : 3]: Rf = 0,60. Potom se stejně, jako je uvedeno v příkladě 4.5), odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a provede se čištění. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, který se suspenduje ve vodě (10 ml). Tato suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou, dokud nevznikne čirý roztok (pH > 3). Lyofilizací zfiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (90,0 mg, 42 %); [a]D 20 = +192,2° (c = 0,27/H2O).
Když se vychází z nesubstituovaného chinolonu-a, vyrobí se podle předpisu podle příkladu 12.1) následující glykokonjugáty:
Příklad 12.12
N-[0-(3-0-karboxymethyl-fL-L-fukosyi)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-chinolon-a, dvojsodná sůl
Edukty: 78,5 mg (0,25 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.10; 70 mg (0,167 mmol) chinolon-a
Po šestihodinové reakční době se reakční směs zahustí, vyjme se do dimethylformamidu a smíchá se se 4 ml 0,lN hydroxidu sodného. Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak(17%) 15 : 4 : 0,5]. Potom se hodnota pH nastaví pomocí 0,lN hydroxidu sodného na pH 7 a lyofilizuje se. Výtěžek činí 60 mg (44 %); DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,42; FAB-MS: m/z = 773 = M-2Na++3H+.
Příklad 12.13
N-[0-(3-0-methyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-chinolon-a
Edukty: 32 mg (0,12 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2); 50 mg (0,12 mmol) chinolon-a
Po dvouhodinové reakční době se čištění provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 : 1] a srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 59 mg (51 %); DC [acetonitril/voda 10: l]:Rf=0,43.
-142CZ 291098 B6
Příklad 12.14
N-{Nalfa-[O-(3-O-methyl-[3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, hydrochlorid mg (0,1 mmol) sloučeniny z příkladu 12.5) se vyjme do vody a převede se s jedním ekvivalentem 0,lN kyseliny chlorovodíkové na sůl. Po lyofilizaci se získá 88 mg v názvu uvedené sloučeniny.
Příklad 12.15
N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-|3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-diaminopropionyl}-chinolon-a, hydrochlorid
Když se vychází z kyseliny Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-Nbeta-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)L-diaminopropionové a chinolonu-a, tak se vyrobí analogicky jako je popsáno v příkladě 12.14) přes více stupňů glykokonjugát 12.15); DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf=0,3.
Příklad 13
Obecný vzorec
R.
COOH
Příklad 13.1
N-{N'-[0-(3-0-methyl-3-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}chinolon-a
13.1.a) Chinolon b: 4-amino-7-[(3aRS, 4RS,7aSR)-4-amino-l,3,3a,4,7,7a-hexahydro-izoindol-2-yl]-l-cyklopropyl-6-fluor-l,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-chinolinkarbonová kyselina
310 mg (1 mmol) kyseliny 5-amino-l-cyklopropyl-6,7-difluor-l,4-dihydro-8-methoxy-4oxo-3-chinolinkarboxylové se ve směsi 4 ml acetonitrilu a 2 ml dimethylformamidu smísí se
170 ml (1,5 mmol) l,4-diazabicyklo[2.2.2]oktanu a 152 mg (1,1 mmol) (3aRS, 4RS, 7aSR)-4amino-l,3,3a,4,7,7a-hexahydro-izoindolu a reakční směs se zahřívá po dobu jedné hodiny
-143CZ 291098 B6 k varu pod zpětným chladičem. Směs se potom ve vakuu zahustí, získaný zbytek se rozmíchá v asi 20 ml vody a vysrážený zbytek se odsaje a vysuší se při teplotě 100 °C ve vakuu. Výtěžek činí 301 mg (70 % teorie), t.t. = 237 až 239 °C (rozklad).
13.1 .b) N-[D-alanyl]-chinolon-b, trifluoracetát
Když se '.vchází ze sloučeniny 13.1.a) aN-(terc.-butoxykarbonyl)-D-alaninu, tak se analogicky, jako je popsáno v příkladě 9.1), vyrobí v názvu uvedená sloučenina.
13.1) N-(N'-[O-(3-O-methy Ι-β-L-fukosy l)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D- alanyl}-chinolon-b
Když se vychází ze sloučeniny 13.1 .b) a p-aminofenyl-3-O-methyl-p-L-fukosidu (příklad 1.2)), tak se analogicky, jako je popsáno v příkladě 12.1), vyrobí v názvu uvedená sloučenina.
Příklad 14
Obecný vzorec
COOH
Chinolon-c: kyselina 8-(2-amino-5-methyl-8-azabicyklo[4.3.0]non-3-en-8-yl)-l-methyl-7fluoro-5-oxo-5H-thiazolo[3,2-a]chinolon-4-karboxylová
Příklad 14.1
N-{Nalfa-[O-(3-O-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl}-chinolon-c, hydrochlorid
14.1 .a) N-[Neps,1°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl-lysyl]-chinolon-c, trifluoracetát
Edukty: Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-Nepsilon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysin (1,4 g,
3,0 mmol); chinolon-c (820 mg, 1,9 mmol)
Výroba meziproduktu se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 9.1.a). Přesrážením ze směsi ethylalkohol/diethylether se získá produkt ve formě světle žluté krystalické látky (1,37 g, 82 %), ze které se analogicky, jako je popsáno v příkladě 9.1 .b), uvolní sloučenina 14.1.a). Získá se takto produkt ve formě oranžové krystalické látky (1,25 g, 74 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30 : 10 : 1]: Rf = 0,7; t.t. = 180 °C.
-144CZ 291098 B6
14.1) N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-c, hydrochlorid
Analogicky jako je popsáno v příkladě 12.5) se nechá reagovat sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0.22 mmol) s peptidovým konjugátem 14.1.a) (178,4 mg, 0,2 mmol). Čištění mezistupně se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30 : 6 : 1 -> 30 : 10 : 1]. Získá se takto produkt ve formě světle žluté krystalické látky (97,0 mg, 44 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30 : 10 : 1]: Rf = 0,23. Potom se, jak je popsáno, odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina. Získá se produkt ve formě žluté krystalické látky, která se suspenduje ve vodě (10 ml), načež se suspenze za míchání po kapkách smísí s 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou, dokud se nezíská čirý roztok (pH> 3). Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (75,8 mg, 41 %); [a]D 20 = +12,5° (c = 0,27/H2O).
Analogicky jako je popsáno v příkladě 14.1) se zpeptidového konjugátu 14.1.a) vyrobí následující glykokonjugáty:
Příklad 14.2
N-{Nalťa-[0-(3-0-methyl-b-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}chinolon-c, hydrochlorid
Edukty: 59,5 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.2), 178,4 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 4.1 .a)
Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30 : 6 : 1 —> 30 : 10 : 1 ], přičemž se získá produkt ve formě světle žluté krystalické látky (146,6 mg, 67 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30:6: 1]: Rf=0,48.
Potom se stejně, jako je uvedeno výše, odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a převede se na hydrochlorid. Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní látky (107,7 mg, 60 %); [a]D 20 = +51,6° (c = 0,36/H2O).
Příklad 14.3
N-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethy]-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl}-chinolon-c, dvojsodná sůl
Když se vychází ze sloučeniny 14.1.a), tak se analogicky, jako je popsáno v příkladě 12.6), vyrobí přes několik stupňů glykokonjugát 14.4); FAB-MS: m/z = 911= M-2Na+3h.
Příklad 14.4
N-fN^-fO-^-O-methyl-p-L-fukopyranosylj-^l-hydroxy-fenylamino-thiokarbonylJ-Dlysyl}-chinolon-c, hydrochlorid
Konjugát se vyrobí analogicky jako izomer v příkladu 14.2); FAB-MS: m/z = 867 = M+H.
- 145CZ 291098 B6 r
Příklad 15
Obecný vzorec
COOH
Chinolon-d: kyselina 4-(2-amino-8-azabicyklo[4.3.0]non-4-en-8-yl)-l-cyklopropyl-6,8-difluoro-l,4-dihydro-4-oxo-chinolin-3-karboxylová
Příklad 15.1
N-{Nalfa-[C)-(3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl}-chinolon-d, hydrochlorid
15.1 .a) N-[Nepsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl}-chinolon-d, trifluoracetát
Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-Nepsilon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysin (1,4 g, 3,0 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 9.1.a), s chinolonem-d, hydrochloridem (1,28 mg, 2,8 mmol). Srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru se získá produkt ve formě béžové krystalické látky (1,97 g, 83 %), ze které se analogicky, jako je 20 popsáno v příkladě 9.1.b), uvolní sloučenina 15.1). Získá se takto produkt ve formě béžové krystalické látky (1,7 g, 70 %). DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 28 : 14 : 1]: Rf=0,60; t.t. = 215 °C.
15.1) N-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino- thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-d, hydrochlorid
Analogicky jako je popsáno v příkladě 12,5) se nechá reagovat sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) speptidovým konjugátem 15.1.a) (173,2 mg, 0,2 mmol). Čištění mezistupně se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30 28 : 14 : 1 -> methylalkohol/amoniak (25%) 20 : 1]. Získá se takto produkt ve formě béžové krystalické látky (140,8 mg, 65 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) : 14 : 1]: Rf= 0,06. Potom se odštěpí, jak je uvedeno výše, fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a produkt se čistí. Získá se takto béžová krystalická látka, která se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspenze se za míchání po kapkách smísí s 0,lN kyselinou chlorovodíkovou, dokud 35 nevznikne čirý roztok (pH > 3). Lyofilizací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (102,6 mg, 57 %); [a]D 20 = -49,0° (c = 0,26/H2O).
Analogicky, jako je popsáno v příkladě 15.1), se zpeptidového konjugátu 15.1.a) vyrobí následující glykokonjugáty:
- 146CZ 291098 B6
Příklad 15.2
N-{Nalfa-[0-(4-0-(3'-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-b-D-glukopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-d, hydrochlorid
Edukty: 98,4 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.58), 173,2 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 15.1.a)
Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 20 : 10 : 1 -> 10 : 10 : 1 -> methylalkohol/amoniak (25%) 20 : 1], přičemž se získá produkt ve formě béžové krystalické látky (106,5 mg, 43 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 10 : 10 : 3]: Rf= 0,51. Potom se stejně, jako je uvedeno výše, odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a převede se na hydrochlorid. Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní látky (82,0 mg, 39 %); [a]D 20 = +22,8° (c = 0,29/H2O).
Příklad 16
Glykokonjugáty s melfalanem
Obecný vzorec
Příklad 16.1
N-{N'-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-Dalanyl}-melfalan
16.1 .a) N-terc.-butoxykarbonyl-d-alanyl-melfalan
114 mg (0,6 mmol) N-terc.-butoxykarbonyl-D-alaninu se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a při teplotě 0°C se smísí se 138 mg N'-(3-dimethylaminopropyl)-N-ethyl-karbodiimidu, hydrochloridu a s 1-hydroxy-benzotriazolem. Po 10 minutách se přidá 153 mg melfalanu a reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se zahustí a rozdělí se mezi dichlormethan a vodu. Organická fáze se promyje, vysuší se pomocí bezvodého síranu
-147CZ 291098 B6 sodného, zahustí a potom se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 —» 15 : 4 : 0,5. Získá se takto 134 mg (56%) v názvu uvedené sloučeniny; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5]: Rf= 0,45.
16.1) N-{N'-[0-(3-0-methyl-[3-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]D-alanyl }-melfalan
Odštěpení ochranné skupiny a kopulace s uhlohydrátem se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 9.1), popřípadě 12.1); DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,26; FAB-MS: m/z = 685 = M+H.
Příklad 16.2
N-{N'-[0-(3-0-methyl-|3-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-alanyl}melfalan
Tato sloučenina se může vyrobit přes několik stupňů analogicky, jako je popsáno v příkladě 16.1); DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,2; FAB-MS: m/z = 756 - M+H.
Příklad 17
Glykokonjugáty s doxorubicinem (adriamycin)
Obecný vzorec
MeO
Me n= 1,2
-148CZ 291098 B6
Příklad 17.1
N-{N'-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-alanylalanyl}-doxorubicín
17.1 .a) N-[0-(3-0-methyl-P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-alanyl-alanyl
160 mg (1 mmol) alanyl-alaninu se vyjme do 20 ml směsi dioxan/voda 1:1a smísí se s 1 ml Hiinnigovy báze. 1,2 mmol p-aminofenyl-2-O-methyl-|3-L-fukosidu (příklad 1.2)) se podle příkladu 10.1.a) nejprve přemění na olejovitou látku a potom se přidá k roztoku dipeptidu. Reakční směs se nechá míchat po dobu 16 hodin při teplotě místnosti a potom se zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie (acetonitril/voda 15 : 1). Po zahuštění odpovídajících frakcí se produkt vysráží ze směsi methylalkohol/diethylether. Výtěžek činí 267 mg (57 %).
17.1) N-{N'-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]alanyl-alanyl}-doxorubicin mg (0,1 mmol) sloučeniny z příkladu 17.1.a) se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a smísí se se 23,1 mg N'-(3-dimethylaminopropyl)-N-ethyl-karbodiimidu, hydrochloridu a se 21 mg 1-hydroxy-benzotriazolu. Po 5 minutách se přidá 30 mg doxorubicinu a 35 μΐ Hiinnigovy báze a reakční směs se míchá po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Potom se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie (dichlormethan/methylalkohol 88 : 12). Odpovídající frakce se zahustí a lyofilizují se ze směsi dioxan/voda. Získá se takto 20 mg (40 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,17; ESI: m/z = 997 = M+H.
Příklad 17.2
N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(3-O-methyl-[3-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl-alanyl}-doxorubicin
17.2.a) N-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(3-0-methyl-P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-D-lysyl-alanin
580 mg (1,31 mmol) bis-trifluoracetátu D-lysyl-alaninu se nechá reagovat stejně, jako je uvedeno v příkladě 17.1.a), za přítomnosti 1,3 ml Hiinnigovy báze se 2,2 ekvivalenty uhlohydrátu z příkladu 1.2). Po čištění pomocí mžikové chromatografie se směsí acetonitril/voda 10 : 1 se získá 446 mg (41 %) v názvu uvedené sloučeniny.
17.2) N-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[O-(3-O-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-D-lysyl-alanyl}-doxorubicin
Reakce 59 mg sloučeniny z příkladu 17.2.a) se 20 mg doxorubicinu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 17.1), přičemž se získá 15 mg konjugátu; DC [dichlormethan/methylalkohol 85 : 15]: Rf= 0,43; FAB: MS: m/z = 1365 = M+H.
-149CZ 291098 B6 f
Příklad 18
Glykokonjugáty s camptothecinem
Obecný vzorec
Příklad 18.1
20-0-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony 1 ]—ly sy 1—alany 1} -camptothecin
18.1 .a) 20-O-(alanyl)-camptothecin, trifluoracetát
500 mg (1,44 mmol) camptothecinu se rozpustí ve 20 ml dimethylformamidu a potom se smísí s 50 mg 4-dimethylaminopyridinu a s N-terc.-butoxykarbonyl-alanin-N-karboxyanhydridu. Po 3 hodinách se přidá dalších 775 mg N-terc.-butoxykarbonyl-alanin-N-karboxy-anhydridu a suspenze se po dobu 16 hodin zpracovává ultrazvukem. Potom se zahustí, surový produkt se vyjme do 50 ml dichlormethanu a při teplotě 0 °C se přidá do 5 ml kyseliny trifluoroctové. Po třicetiminutovém míchání se směs znovu zahustí a produkt se čistí pomocí mžikové chromatografie (acetonitril/voda 20 : 1). Odpovídající frakce se spojí, zahustí a lyofilizují se ze směsi dioxanu a vody. Získá se takto 712 mg (93 %) v názvu uvedené sloučeniny; FAB-MS: m/z = 420 = M+H.
18.1.b) 20-O-(lysyl-alanyl)-camptothecin, bis-trifluoracetát
Konjugát z příkladu 18.1.a) se nechá reagovat podle standardního předpisu s Nalfa,Nepsllon-bis(terc.-butoxykarbonyl)-lysinem a potom se deblokuje. Získá se takto v názvu uvedená sloučenina v 65% výtěžku.
- 150CZ 291098 B6
18.1) 20-0-{Nalfa,Nepsilon-bís-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopj'ranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin
Analogicky, jako je popsáno v příkladě 11.1), se nechá reagovat p-aminofenyl-3-O-methyl-[3L-fukosid (příklad 1.2)) s konjugátem z příkladu 18.1.b); výtěžek: 40 %; DC [acetonitril/voda 10: l]:Rf=0,44.
Příklad 18.2
20-0-{Nalfe-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin
18.2. a) 20-O-[Nepsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyi)-lysyl-alanyl]-camptothecin
Konjugát z příkladu 18.1.a) se podle standardního předpisu nechá reagovat s Nalfa-(terc.-butoxykarbonyl)-Nepsilon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysinem a potom se na a-aminofunkci deblokuje. Získá se takto v názvu uvedená sloučenina ve 24% výtěžku; DC [acetonitril/voda 20: 1]: Rf= 0,15.
18.2. b) 20-0-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-3-L-fukopyranosyl-4-hydroxy-fenylamino- thiokarbonyl]-Nepsil°n-[fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-alanyl]-camptothecin
Sloučenina z příkladu 18.1.a) se modifikuje analogicky, jako je popsáno v příkladě 12.6), popřípadě 12.5) s derivátem uhlohydrátu z příkladu 1.10). Surový produkt, který se dá čistit digerací s vodou, se lyofilizuje ze směsi dioxan/voda a dá se použít bez další charakterizace v následujícím stupni.
18.2) 20-0-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethy l-^-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin
Konjugát 18.2.b) se deblokuje piperidinem v dimethyformamidu. Po 30 minutách se zahustí a získaný zbytek se digeruje dvakrát s dichlormethanem. Potom se vyjme do dimethylformamidu a sráží se pomocí směsi methylalkohol/diethylether. Produkt se odsaje, promyje se diethyletherem a lyofilizuje se ze směsi dioxan/voda. Výtěžek činí 86 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf = 0,17.
Příklad 18.3
20-0-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-[3-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyi}-camptothecin, sodná sůl mg (0,074 mmol) konjugátu z příkladu 18.2) se vyjme do směsi dioxan/voda a převede se pomocí ekvivalentu 0,lN hydroxidu sodného na sodnou sůl. Výtěžek je kvantitativní; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2]: Rf= 0,17.
Analogicky, jako je popsáno v příkladech 18.1) a 18.2), se vyrobí následující glykokonjugáty camptothecinu:
-151 CZ 291098 B6
Příklad 18.4
20-0-{Nalfa,Ncpsll°n-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-camptothecin
Příklad 18.5
20-0-{Nalfa,Nepsil°n-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyi-valinyl}-camptothecin
Příklad 18.6
20-0-{Nalfa-[0-(3-0-karboXymethyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-valinyl}-camptothecin
Příklad 18.7
20-0-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-valinyl}-camptothecin
Příklad 18.8
20-0-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-P-I>-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-alanyl}-camptothecin
Příklad 18.9
20-0-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-valinyl}-camptothecin, hydrochlorid
Sloučenina 18.6) se převede s jedním ekvivalentem O,1N kyseliny chlorovodíkové na hydrochlorid.
Příklad 18.10
20-0-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl }-camptothecin, hydrochlorid
Sloučenina 18.2) se převede sjedním ekvivalentem 0,lN kyseliny chlorovodíkové na hydrochlorid.
Příklad 18.11
20-0-{Nalfa-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-fenylalanyl}-camptothecin, hydrochlorid
- 152CZ 291098 B6
Příklad 18.12
20-0-{Nalfa,Neps,l°n-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-3-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin, sodná sůl
Příklad 18.13
20-0-{Nalfa,Neps‘lon-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-ů-L-ftikopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-valinyl}-camptothecin, sodná sůl
Příklad 18.14
20-0-{Nalfa-bis-[0-(3-0-methyl-P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-alanyl)-camptothecin, sodná sůl
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (6)

  1. 20-0-{Nalfa-bis-[0-(3-0-methyl-P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-alanyl)-camptothecin, sodná sůl
    PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika obecného vzorce I
    K-Sp-L-AAl-AA2-C (I), ve kterém
    K značí uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II (II).
    ve kterém
    A značí methylovou skupinu, hydroxymethylovou skupinu, karboxyskupinu, alkoxymethylovou skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v alkoxylu, acyloxymethylovou skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v acyloxylu nebo karboxyalkyloxymethylovou skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v alkyloxylu; nebo může značit také skupinu CH^-B, přičemž B může být opět uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II, připojený přes anomemí centrum,
    R2, R3 a R4 mohou být stejné nebo různé a značí vodíkový' atom, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, karboxyalkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, karboxyalkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v alkoxylu, hydroxyalkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, aminoalkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, acyloxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, karboxyalkylkarbonyloxyskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy v alkylu, sulfátovou skupinu, fosfátovou skupinu, atom halogenu nebo další stejně
    -153CZ 291098 B6 modifikovaný a přes anomemí centrum připojený uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II, přičemž R2 může značit dodatečně také aminoskupinu nebo acylaminoskupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, nebo dva ze zbytků R2, R3, R» mohou také společně značit epoxyskupinu,
    Sp značí arylenový zbytek se 6 až 10 uhlíkovými atomy, který je modifikován v ortho- metanebo para-poloze s K a L a kromě toho může nést ještě 1 až 4 další substituenty, které mohou být stejné nebo různé a značí vodíkový· atom, methylovou skupinu, methoxyskupinu, hydroxyskupinu, karboxyskupinu, methyloxykarbonylovou skupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, atom halogenu, sulfonylovou skupinu nebo sulfonamidovou skupinu, nebo může také značit lineární nebo rozvětvený alkylenový zbytek s 1 až 6 uhlíkovými atomy, přičemž R značí atom chloru nebo hydroxyalkylaminoskupinu,
    AA1 značí zbytek aminokyseliny, odvozený od lysinu, alaninu, kyseliny asparagové, kyseliny glutamové, glycinu, omithinu, tyrosinu, valinu nebo šeřinu, v D- nebo L-konfíguraci, který je popřípadě spojen s další skupinou K-Sp-L, ve které K, Sp a L mají významy uvedené výše, nebo značí vazbu,
    AA2 značí aminokyselinový zbytek, odvozený od lysinu, alaninu, glycinu, omithinu, kyseliny diaminopropionové nebo šeřinu, v D- nebo L-konfíguraci, který je popřípadě spojen s další skupinou Κ-Sp-L-, ve které K, Sp a L mají významy uvedené výše, nebo značí vazbu a
    C značí cytotoxický zbytek nebo zbytek cytostatika nebo derivátu cytostatika, který může nést dodatečně aminoskupinu nebo hydroxyskupinu a jejich izomery a fyziologicky neškodné soli.
  2. 2. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém
    C značí nukleosid, endiin-antibiotikum, cytotoxické peptidové antibiotikum, kyselinu chinolonkarboxylovou nebo kyselinu nafthyridonkarboxylovou, batracylin, 5-fluorouracil, cytosinarabinosid, methotrexat, etoposid, camptothecin, daunomycin, doxorubicin, taxol, vinblastin, vincristin, dynemycin, calicheamycin, esperamycin, quercetin, suramin, erbstatin, cyclophosphamid, mitomycin C, melphalan, cisplatin, bleomycin, staurosporin nebo jiné antineoplasticky aktivní účinné látky, a K, L, AA1, AA2 a Sp mají výše uvedený význam, a jejich izomery a fyziologicky neškodné soli.
  3. 3. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém
    C značí zbytek obecného vzorce III
    T-Q (III),
    - 154CZ 291098 B6 ve kterém
    Q značí zbxtek vzorce přičemž
    Ra značí popřípadě halogenem nebo hydroxyskupinou, jednou nebo dvakrát substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, vinylovou skupinu, popřípadě jedním nebo dvěma atomy fluoru substituovanou cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 uhlíkovými atomy, bicyklo[l.l.l]pent-l-ylovou skupinu, 1,1-dimethylpropargylovou skupinu, 3-oxetanylovou skupinu, methoxyskupinu, aminoskupinu, methylaminoskupinu, dimethylaminoskupinu, popřípadě halogenem, aminoskupinou nebo hydroxyskupinou jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu, nebo může také společně s Re tvořit také tam popsaný můstek,
    Rb značí hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo nitromethylovou skupinu,
    Rc značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo také může s R6 tvořit tam popsaný můstek,
    Rd značí vodíkový atom, methylovou skupinu, fluormethylovou skupinu nebo methylenovou skupinu,
    X1 značí vodíkový atom, atom halogenu nebo nitroskupinu,
    X2 značí vodíkový atom, atom halogenu, aminoskupinu, hydroxyskupinu, methoxyskupinu, merkaptoskupinu, methylovou skupinu, halogenmethylovou skupinu nebo vinylovou skupinu,
    Y značí dusíkový atom nebo skupinu C-Re, přičemž
    Re značí vodíkový atom, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu, methylovou skupinu, kyanoskupinu, ethylenovou skupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s Ra mohou tvořit můstek
    -155CZ 291098 B6 struktury -*O-CH2-CH-CH3 , -*S-CH2CH2- , -*S-CH2-CH-CH3 , -*CH2-CH2-CH-CH3 nebo -*O-CH2-N-Rf, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem Y a přičemž
    Rf značí vodíkový atom, methylovou skupinu nebo formylovou skupinu a
    D značí dusíkový atom nebo skupinu C-Rg, přičemž
    Rg značí vodíkový atom, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně s Rc mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2~, -*NH-CH2-, -*N(CH3)-CH2, -*N(C3H5)-CH2- nebo -*S-CHr-, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D, n značí číslo 1, 2 nebo 3 a
    T značí zbytek vzorce přičemž
    Rh značí skupiny O- ,
    -N-R^ , CHr-O-nebo
    Rk značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a
    R1 značí vodíkový atom, alkylovou skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo cyklopropylovou skupinu, a K, L, AA1, AA2 a Sp mají výše uvedený význam, a jejich izomery a fyziologicky neškodné soli.
    -156CZ 291098 B6
  4. 4. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 3 obecného vzorce I, ve kterém
    Q značí zbytek vzorce přičemž
    Ra značí popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou alkylovou skupinu se 2 až 4 uhlíkovými atomy, popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou cyklopropylovou skupinu nebo popřípadě fluorem jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu, nebo společně s Re může tvořit tam popsaný můstek,
    Rb značí hydroxyskupinu nebo alkoxyskupinu s 1 až 2 uhlíkovými atomy,
    Rc značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo může společně s RE tvořit tam popsaný můstek,
    X1 značí atom fluoru,
    X2 značí vodíkový atom nebo aminoskupinu,
    Y značí dusíkový atom nebo skupinu C-Re, přičemž
    Re značí vodíkový atom, atom fluoru nebo chloru, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s Ra mohou tvořit můstek struktury -*O-CH2-CH-CH3 nebo -*O-CH2-N-Rf, přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem Y a přičemž
    Rf značí methylovou skupinu a
    D značí dusíkový atom nebo skupinu C-Rg, přičemž
    R6 značí vodíkový atom, atom fluoru nebo chloru, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně s Rc mohou tvořit můstek struktury -*O-CHt-, -^NH-CH?-, -*N(CH3)-CH2 nebo -*S-CH2přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D a
    - 157CZ 291098 B6 ι· přičemž
    Rh značí skupinu -N-R^ , přičemž
    I
    Rk značí vodíkový atom nebo mythylovou skupinu a
    R1 značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a jejich izomery a fyziologicky neškodné soli.
  5. 5. Léčivo, vyznačující se tím, že obsahuje jednu nebo několik sloučenin podle nároků 1 až 4.
  6. 6. Použití sloučenin obecného vzorce I podle nároků 1 až 4 pro výrobu léčiv pro ošetření rakoviny.
CZ19973143A 1995-04-04 1996-03-22 Cytostatika modifikovaná uhlohydráty, léčiva tyto látky obsahující a jejich pouľití CZ291098B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19512484A DE19512484A1 (de) 1995-04-04 1995-04-04 Kohlenhydratmodifizierte Cytostatika

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ314397A3 CZ314397A3 (cs) 1998-01-14
CZ291098B6 true CZ291098B6 (cs) 2002-12-11

Family

ID=7758679

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19973143A CZ291098B6 (cs) 1995-04-04 1996-03-22 Cytostatika modifikovaná uhlohydráty, léčiva tyto látky obsahující a jejich pouľití

Country Status (27)

Country Link
US (1) US6271342B1 (cs)
EP (1) EP0819135B1 (cs)
JP (1) JPH11502860A (cs)
KR (1) KR19980703591A (cs)
CN (1) CN1185786A (cs)
AT (1) ATE186738T1 (cs)
AU (1) AU713466B2 (cs)
BG (1) BG63048B1 (cs)
BR (1) BR9604825A (cs)
CA (1) CA2217164A1 (cs)
CZ (1) CZ291098B6 (cs)
DE (2) DE19512484A1 (cs)
DK (1) DK0819135T3 (cs)
EE (1) EE03619B1 (cs)
ES (1) ES2140078T3 (cs)
GR (1) GR3032605T3 (cs)
HU (1) HUP9800513A3 (cs)
IS (1) IS1822B (cs)
MX (1) MX9707613A (cs)
NO (1) NO974564L (cs)
NZ (1) NZ305855A (cs)
PL (1) PL183574B1 (cs)
RU (1) RU2170234C2 (cs)
SK (1) SK281785B6 (cs)
TW (1) TW384290B (cs)
UA (1) UA61054C2 (cs)
WO (1) WO1996031532A1 (cs)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT934329E (pt) * 1996-09-30 2002-05-31 Bayer Ag Glicoconjugados de derivados de camptotecina modificados (ligacao 20-o)
DE19640970A1 (de) * 1996-10-04 1998-04-16 Bayer Ag Modifizierte Cytostatika
ID23424A (id) * 1997-05-14 2000-04-20 Bayer Ag Glikokonjugat dari 20(s)-kamptotesin
US6387928B1 (en) 1997-09-15 2002-05-14 The Procter & Gamble Co. Antimicrobial quinolones, their compositions and uses
HUP0100051A3 (en) 1997-09-15 2002-08-28 Procter & Gamble Antimicrobial quinolones, their compositions and uses
US6613879B1 (en) * 1999-05-14 2003-09-02 Boehringer Ingelheim Pharma Kg FAP-activated anti-tumour compounds
DE10005275A1 (de) * 2000-02-07 2001-08-09 Bayer Ag Neuartige Glycokonjugate
US7220824B1 (en) * 2000-08-28 2007-05-22 Bayer Aktiengesellschaft Integrin-mediated drug targeting
EP1219634A1 (en) * 2000-12-27 2002-07-03 Bayer Aktiengesellschaft Cytostatic-glycoconjugates having specifically cleavable peptidic linking units
EP1238678A1 (en) * 2001-03-08 2002-09-11 Bayer Aktiengesellschaft Enzyme-activated cytostatic conjugates with integrin ligands
WO2003040093A2 (de) * 2001-11-09 2003-05-15 Bayer Healthcare Ag Isotopencodierte affinitätsmarker 2
US7199149B2 (en) * 2003-10-01 2007-04-03 Bristol Myers Squibb Company Monocyclic and bicyclic lactams as factor Xa inhibitors
NZ547438A (en) 2003-12-19 2010-01-29 Genentech Inc Monovalent antibody fragments useful as therapeutics
CA2647457C (en) 2006-03-28 2011-05-24 The Procter & Gamble Company A hydride reduction process for preparing quinolone intermediates
MX2008012328A (es) 2006-03-28 2008-10-09 Procter & Gamble Sales de malato, y polimorfos de acido (3s,5s)-7-[3-amino-5-metil- piperidinil]-1-ciclopropil-1,4-dihidro-8-metoxi-4-oxo-3-quinolinc arboxilico.
KR101084521B1 (ko) 2006-03-28 2011-11-18 워너 칠콧 컴퍼니 엘엘씨 퀴놀론 중간체를 제조하기 위한 커플링 방법
CN107531736B (zh) * 2015-01-06 2022-04-15 免疫疫苗科技公司 脂质a模拟物、其制备方法和用途
LT3380124T (lt) 2015-11-25 2024-06-25 Ligachem Biosciences Inc. Konjugatai, apimantys savaime skaidančias grupes, ir su jais susiję būdai
JP7327899B2 (ja) 2015-11-25 2023-08-16 レゴケム バイオサイエンシズ， インク． 分岐リンカーを含む抗体－薬物複合体及びそれらに関連する方法
US11654197B2 (en) 2017-03-29 2023-05-23 Legochem Biosciences, Inc. Pyrrolobenzodiazepine dimer prodrug and ligand-linker conjugate compound of the same
CA3099680A1 (en) 2018-05-09 2019-11-14 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-cd19 antibody drug conjugates
KR20210028544A (ko) 2019-09-04 2021-03-12 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5977356A (ja) * 1982-06-30 1984-05-02 Fuji Photo Film Co Ltd 螢光アツセイ用多層分析要素およびそれを用いる螢光アツセイ法
DE3611194A1 (de) 1986-04-04 1987-10-08 Bayer Ag Cancerostatisches mittel
DE3889956T2 (de) * 1987-03-26 1994-12-22 Neorx Corp Metall-Radionuklid-markierte Proteine und Glykoproteine zur Diagnose und Therapie.
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
DE3837825A1 (de) 1988-11-08 1990-05-10 Hoechst Ag Neue insulinderivate, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung
US5965695A (en) 1990-05-15 1999-10-12 Chiron Corporation Modified peptide and peptide libraries with protease resistance, derivatives thereof and methods of producing and screening such
US5420297A (en) 1990-10-24 1995-05-30 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Peptides having substance P antagonistic activity
US5399363A (en) * 1991-01-25 1995-03-21 Eastman Kodak Company Surface modified anticancer nanoparticles
DE4106101A1 (de) * 1991-02-27 1992-09-03 Bayer Ag Fucose-markierte cytostatika
US5595732A (en) * 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
FR2676058B1 (fr) 1991-04-30 1994-02-25 Hoechst Lab Prodrogues glycosylees, leur procede de preparation et leur utilisation dans le traitement des cancers.
DE4120646A1 (de) 1991-06-22 1992-12-24 Bayer Ag 7-isoindolinyl-chinolon- und naphthyridoncarbonsaeure-derivate
ES2137937T3 (es) 1991-11-29 2000-01-01 Hoechst Ag Peptidos con efecto del tipo de insulina.
SE9103612D0 (sv) 1991-12-04 1991-12-04 Astra Ab New peptide derivatives
ZA935697B (en) 1992-08-07 1994-03-10 Sankyo Co Peptides capable of inhibiting the activity of hiv protease their preparation and their therapeutic use
US5872207A (en) 1992-09-04 1999-02-16 Sanofi Pharmaceuticals, Inc. N-terminal-marked peptides immobilized on glass beads and method of preparation and method of use thereof
IL106998A0 (en) 1992-09-17 1993-12-28 Univ Florida Brain-enhanced delivery of neuroactive peptides by sequential metabolism
DE4236237A1 (de) * 1992-10-27 1994-04-28 Behringwerke Ag Prodrugs, ihre Herstellung und Verwendung als Arzneimittel
US5576298A (en) 1992-11-30 1996-11-19 Research And Development Institute, Inc. At Montana State University Peptides from pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antibiotic activity
SE9300012D0 (sv) 1993-01-05 1993-01-05 Astra Ab New peptides
US5750648A (en) 1993-08-20 1998-05-12 G.D. Searle & Co. Retroviral protease inhibitors and combinations thereof
EP0647450A1 (en) 1993-09-09 1995-04-12 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Improved prodrugs for enzyme mediated activation
GB9320781D0 (en) 1993-10-08 1993-12-01 Erba Carlo Spa Polymer-bound camptothecin derivatives
JPH09504522A (ja) * 1993-10-12 1997-05-06 グリコメド・インコーポレイテッド 細胞接着インヒビターの同定に有用なグリコ−ペプチドのライブラリー
US5610145A (en) 1994-04-15 1997-03-11 Warner-Lambert Company Tachykinin antagonists
US5780589A (en) 1994-11-30 1998-07-14 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Ultraselective opioidmimetic peptides and pharmacological and therapeutic uses thereof
FR2729668A1 (fr) 1995-01-23 1996-07-26 Adir Nouveaux derives de mercaptoalcanoyldipeptides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US5677286A (en) * 1995-04-27 1997-10-14 The University Of Michigan Glycosylated analogs of camptothecin
US6143931A (en) 1997-04-16 2000-11-07 Arqule, Inc. Synthesis and use of α-ketoamide derivatives and arrays

Also Published As

Publication number Publication date
WO1996031532A1 (de) 1996-10-10
AU5397696A (en) 1996-10-23
CZ314397A3 (cs) 1998-01-14
ES2140078T3 (es) 2000-02-16
IS1822B (is) 2002-10-01
UA61054C2 (en) 2003-11-17
KR19980703591A (ko) 1998-11-05
JPH11502860A (ja) 1999-03-09
IS4562A (is) 1997-09-18
DE59603678D1 (de) 1999-12-23
NO974564D0 (no) 1997-10-02
SK281785B6 (sk) 2001-07-10
CN1185786A (zh) 1998-06-24
RU2170234C2 (ru) 2001-07-10
US6271342B1 (en) 2001-08-07
EE9700258A (et) 1998-04-15
HUP9800513A3 (en) 1998-09-28
PL322681A1 (en) 1998-02-16
BR9604825A (pt) 1999-01-05
BG101892A (en) 1998-05-29
DK0819135T3 (da) 2000-05-08
SK134597A3 (en) 1998-05-06
CA2217164A1 (en) 1996-10-10
DE19512484A1 (de) 1996-10-17
EP0819135B1 (de) 1999-11-17
ATE186738T1 (de) 1999-12-15
HUP9800513A2 (hu) 1998-06-29
EE03619B1 (et) 2002-02-15
NO974564L (no) 1997-11-25
AU713466B2 (en) 1999-12-02
NZ305855A (en) 1999-11-29
EP0819135A1 (de) 1998-01-21
MX9707613A (es) 1997-12-31
BG63048B1 (bg) 2001-02-28
TW384290B (en) 2000-03-11
PL183574B1 (pl) 2002-06-28
GR3032605T3 (en) 2000-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ291098B6 (cs) Cytostatika modifikovaná uhlohydráty, léčiva tyto látky obsahující a jejich pouľití
EP1447099B1 (de) Antineoplastisch wirkende Polyethylenkonjugate zytostatischer Verbindungen und diese enthaltende Arzneimittel
DE69432627T2 (de) Polymergebundene camptothecin-derivate
RU2410389C2 (ru) Противоопухолевое средство
EP0939765B1 (de) Glycokonjugate von modifizierten camptothecin-derivaten(a- oder b-ring-verknüpfung)
EP3152223B1 (en) Mitomycin conjugate
DE102009051799B4 (de) Bifunktionale Prodrugs und Drugs
SA93130351B1 (ar) مشتقات إندولبيرولوكربازول
KR20150027217A (ko) 항진균성 항생 암포테리신 b의 n-치환된 제2 세대 유도체, 및 이의 제조 및 응용 방법
JP2023515034A (ja) 標的送達及び活性化した免疫刺激性複合体の調製と使用
JPH03505744A (ja) サイトカラシン組成物および治療法
WO2000026223A2 (en) Methods and compositions for the manufacture of highly potent anthracycline-based antitumor agents
WO2020189937A9 (ko) 핵 유전자 손상을 최소화한 암 치료를 위한 변형 항생제 화합물 및 이를 포함하는 항암 약학 조성물
JP2021161109A (ja) 新規なベンゾイミダゾール誘導体、この製造方法及び、これの抗がん剤の用途
WO2001058932A1 (de) Glycokonjugate von cytostatika
IL119334A (en) Carbohydrate modified cytostatics and medicaments containing them
DE10005275A9 (de) Neuartige glycokonjugate
HRP960440A2 (en) Sugar-modified cytostatics
KR102162351B1 (ko) 약물-결합 화합물 및 이의 용도
CN117731798A (zh) 抗体偶联药物、其中间体、制备方法及应用
RU2184122C2 (ru) Гликоконъюгаты 20(s)-камптотецина
CA2036007A1 (en) Cytotoxic n, n&#39;-bis (succinyl-peptide)-derivatives of 1,4-bis (aminoalkyl)-5,8-dihydroxyanthraquinones and antibody conjugates thereof
CZ401799A3 (cs) Glykokonjugáty 20(S)-camptothecinu, způsob jejich výroby, jejich použití a léčiva tyto látky obsahující
WO1996006069A1 (en) D-b-lysylmethanediamine derivatives with bacteria, aids virus and tumor cell growth inhibiting activity and preparation thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20040322