CN1185786A - 糖修饰的细胞抑制剂 - Google Patents

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W·维彻尔
M·斯佩泽尔
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Abstract

本发明涉及由于糖修饰而对肿瘤有特异性的细胞抑制剂。适当的间隔保证了血清稳定性,同时保证了细胞内作用。

Description

糖修饰的细胞抑制剂
本发明涉及由于糖修饰而对肿瘤有特异性的细胞抑制剂。适当的间隔保证了血清稳定性，同时保证了细胞内作用。
用化学疗法治疗肿瘤疾病常常伴有严重的副作用，这是由于化疗对其它组织的增生细胞也有毒性。科学家们致力于改进所用活性化合物的选择性已经许多年了。一种常用的方法是前药的合成，例如，通过改变pH(Tietze等人，如DE-4229903)，或通过酶(如葡糖苷酶；Jacquesy等人，EP-511917；Bosslet等人，EP-595133)，或通过抗体-酶共轭(Bagshawe等人，WO88/07378；Senter等人，US-PS4975278；Bosslet等人，EP-595133)，使前药在靶组织中或多或少选择地释放。除此之外，这些方法的问题是共轭体在其它组织和器官中缺乏稳定性，尤其是活性化合物到处分布，这是由于活性化合物在肿瘤组织细胞外释放造成的。
肿瘤细胞表面的明确的植物血凝素模式(Gabius；Onkologie 12，(1989)，175)开辟了通过将相应的糖类单元与细胞抑制剂连接特别地选址于肿瘤细胞的主要可能性。但这些观点受到有类似糖类特性(半乳糖，乳糖，甘露糖，N-乙酰基-葡糖胺，岩藻糖等)的植物血凝素也出现在其它组织中，尤其是在肝中这个事实的限制(Ashwell等人，《生物化学年度综述)》(Annu.Rev Biochem)，46(1982)，531；Stahl等人，《美国国立科学研究院研究进展)》(Proc.Natl Acad.Sci.USA)，74(1977)，1521；Hill等人，《生物化学杂志)》(J.Biol.Chem.)，262(1986)，7433；Jansen等人，《生物化学杂志)》(J.Biol.Chem.)，266(1991)，3343)。如果使用这些未修饰的糖类，则必须期望含有活性化合物的葡糖共轭体在肝和其它富集植物血凝素器官中具有很高的浓度。
杂环胺batracyline(1)对各种肠癌模型表现出良好的抗肿瘤活性(US-PS4757072)。
具有良好体外活性和更好的溶解性的(1)的肽共轭体(US-4180343)在动物研究中比batracyline更难以被接受。EP-501250所述的岩藻糖共轭体在肝有相当高的浓度。
喹诺酮-a(2)，7-[(3aRS，4RS，7aSR)-4-氨基-1，3，3a，4，7，7a-六氢-异氮茚-2-基]-8-氯-1-环丙基-6-氟-1，4-二氢-4-氧-3-喹啉羧酸，
Figure A9619418000081
(2)(喹诺酮-a)
除了表现出突出的抗细菌活性外还表现出非常好的抗多种肿瘤细胞系活性(EP-520240，JP-4253973)。然而，它们又面临毒性很大的问题(例如，基因毒性，骨髓毒性，体内高急性毒性等)。
通过对新修饰的细胞抑制剂的研究我们惊喜地发现，它是一类具有下列不同性质的新型共轭体：糖类与细胞抑制剂(如batracyline，喹诺酮-a)的新型连接方式在血清中稳定的葡糖共轭体。其活性不取决于活性化合物的细胞外释放。其抗多种肿瘤细胞系的体外活性可与其基础细胞抑制剂媲美。细胞特异性吸收取决于糖类。
由于在上述共轭体的糖部分实现了区域选择性修饰，使细胞和组织选择性(特别是肝肿瘤)得到显著提高。
本发明共轭体在体内的承受性比活性化合物和相应的肽共轭体有显著提高。
而且，本发明共轭体的溶解性比其基础细胞抑制剂的有显著提高。
本发明提供了下面通式化合物：
    K-Sp-L-AA1-AA2-C         (I)
其中
K＝未取代的或区域选择性修饰的糖基，
Sp＝任意取代的亚芳基或亚烷基，
其中R＝氯或羟基烷基氨基，
通过NH基连接到Sp，
AA1是D或L构型的氨基酸基，它可以任意带有第二个K-SpL-基团，其中，独立于第一个K-Sp-L-基团，K，Sp和L可以有上述涵义，或是一个直键。氨基酸基可以通过α-氨基，或者如果需要，通过侧链氨基或羟基官能团，也可以通过这两种官能团与L连接。如果AA1还带有其它官能团，它们可以脱保护形式或用已知的保护基以保护形式存在。适当的保护基有，例如，乙酰基，烯丙氧羰基，苄氧羰基，芴基甲氧羰基，叔丁氧羰基，烯丙基，苄基，甲基或叔丁基。
AA2是D或L构型的氨基酸基，它可以任意带有第二个K-SpL-基团，其中，独立于第一个K-Sp-L-基团，K，Sp和L可以有上述涵义，或是一个直键。氨基酸基可以通过α-氨基，或者如果需要，通过侧链氨基或羟基官能团，也可以通过这两种官能团与AA1连接。如果AA2还带有其它官能团，它们可以脱保护形式或用已知的保护基以保护形式存在。适当的保护基有，例如，苄氧羰基，乙酰基，烯丙氧羰基，芴基甲氧羰基，叔丁氧羰基，烯丙基，苄基，甲基或叔丁基。
C＝细胞抑制基团或细胞抑制剂衍生物基团，它可以另外带有一个氨基或羟基。C可以是嵌入物，局部异构酶抑制剂，抗代谢物，烷基化剂，小管抑制剂，酪氨酸磷酸激酶抑制剂，蛋白激酶-C-抑制剂，或具有另一个或未知细胞抑制性或细胞毒性机理的活性化合物。C可以是，例如，核苷，endiine抗菌素，喹诺酮-或naphthyridone-羧酸，或细胞毒性肽抗菌素如从dolastatins类得到的。C可以是batracyline，喹诺酮-a，5-氟尿嘧啶，胞嘧啶阿糖苷(arabinoside)，甲氨蝶呤，表鬼臼毒素吡喃葡糖苷(鬼臼亚乙苷)，喜树碱，道诺霉素，阿霉素，紫杉醇，长春花碱，长春新碱，动力霉素(dynemycin)，刺孢霉素，埃斯波霉素(esperamycin)，槲皮素，苏拉明，erbstatin，环磷酰胺，丝裂霉素(mitamycin)C，苯丙氨酸氮芥，顺氯氨铂，博来霉素，星形孢菌素或其它有抗肿瘤作用的活性化合物。
结构单元-Sp-L-AA1-AA2-整个代表连接K和C的间隔区。
优选的的式(I)化合物是
其中
K＝具有通式(II)的糖基，
Figure A9619418000101
    其中
    A＝甲基，羟甲基，羧基及其衍生的酯和酰胺，烷氧基甲基，
酰氧基甲基或羧基烷氧基甲基及其衍生的酯和酰胺。A也可以是
CH2-B，其中B也可以是通过异头中心(anomeric centre)连接的通
式(II)糖基。
    R2，R3，R4＝分别或同时一起为H，羟基，烷氧基，羧基烷
氧基及其衍生的酯和酰胺，羟基烷氧基，氨基烷氧基，酰氧基，羧
基烷基羰氧基，硫酸根，磷酸根，卤素或在同一结构中被修饰并通
过异头中心连接的另外的糖基(II)。另外，R2还可以是氨基或
酰氨基。
    R2，R3，R4其中的两个还可以一起代表一个环氧基。
糖结构单元的异头中心的立体化学结构可以是α或β。葡糖，甘露糖，半乳糖，古洛糖，鼠李糖或岩藻糖构型可以由其它中心的立体化学结构产生。
Sp＝被K和L在邻-，间-或对位修饰，而且还可以带有1-4个取代基的亚芳基，这些取代基可以彼此不同或相同，可以是H，甲基，甲氧基，羟基，羧基，甲氧羰基，氰基，硝基，卤素，磺酰基或磺酰胺；
Sp还可以是直链或支链亚烷基。
Figure A9619418000102
其中R＝氯或羟基烷基氨基，
AA1是D或L构型的氨基酸基，它可以任意带有第二个K-Sp-L-基团，其中独立于第一个K-Sp-L-基团的K，Sp和L可以有上述涵义，或是一个直键。氨基酸基可以通过α-氨基，或者如果适当，通过侧链氨基或羟基官能团，也可以通过这两种官能团与L连接。如果AA1还带有其它官能团，它们可以脱保护形式或用已知的保护基以保护形式存在。适当的保护基有，例如，乙酰基，烯丙氧羰基，苄氧羰基，芴基甲氧羰基，叔丁氧羰基，烯丙基，苄基，甲基或叔丁基。
AA2是D或L构型的氨基酸基，它可以任意带有第二个K-Sp-L-基团，其中独立于第一个K-Sp-L-基团的K，Sp和L可以有上述涵义，或是一个直键。氨基酸基可以通过α-氨基，或者如果适当，通过侧链氨基或羟基官能团，也可以通过这两种官能团与AA1连接。如果AA2还带有其它官能团，它们可以脱保护形式或用已知的保护基以保护形式存在。适当的保护基有，例如，苄氧羰基，烯丙氧羰基，乙酰基，芴基甲氧羰基，叔丁氧羰基，烯丙基，苄基，甲基或叔丁基。
C可以是，例如，核苷，endiine抗菌素，或细胞毒性肽抗菌素如从dolastatms类得到的，或下面定义的喹诺酮-或naphthyridone-羧酸残基。C可以是，例如，batracyline，5-氟尿嘧啶，胞嘧啶阿糖苷，甲氨蝶呤，鬼臼亚乙苷，喜树碱，道诺霉素，阿霉素，紫杉醇，长春花碱，长春新碱，动力霉素，刺孢霉素，埃斯波霉素，槲皮素，苏拉明，erbstatin，环磷酰胺，丝裂霉素C，苯丙氨酸氮芥，顺氯氨铂，博来霉素，星形孢菌素或其它有抗肿瘤活性的活性化合物。该细胞抑制剂通过氨基或羟基官能团与AA2连接。
特别优选的的式(I)化合物是
其中
K＝具有通式(II)的糖基，
Figure A9619418000111
其中
A＝甲基，羟甲基，羧基和甲氧羰基甲基和CH2-B，其中B也可以是通过异头中心连接的通式(II)糖基。
R2，R3，R4＝分别或同时一起为H，羟基，C1-C3烷氧基，羧基-C1-C3-烷氧基及其衍生的C1-C3烷基酯和酰胺，羟基
烷氧基，酰氧基，羧基-(C1-C3烷基)-羰氧基，硫酸根，或
通过异头中心连接到R3或R4位置的其它糖基。
    R2，R3或R4其中的两个还可以一起代表一个环氧基。
异头中心的立体化学结构可以是α或β。D-甘露糖，D-半乳糖，L-古洛糖，D-葡糖，L-鼠李糖或L-岩藻糖构型可以从其它中心的立体化学结构产生。
Sp＝被K和L在邻-或对位修饰，而且，除了可以带有氢原子以外还可以带有其它取代基的亚芳基，该取代基可以是甲基，硝基或氯；
Figure A9619418000121
其中R＝氯或羟基烷基氨基，
AA1是D或L构型的氨基酸基如赖氨酸，丙氨酸，谷氨酸，甘氨酸，乌氨酸，酪氨酸，缬氨酸或丝氨酸，或是一个直键。氨基酸基可以通过α-氨基，或者如果适当，通过侧链氨基官能团，也可以通过这两种官能团与L连接，并且可以任意带有另一个与第一个相同或不同的K-Sp-L-基团。如果AA1还带有其它官能团，它们优选是脱保护形式的。
AA2是D或L构型的氨基酸基如丙氨酸，赖氨酸，甘氨酸，丝氨酸，鸟氨酸或二氨基丙酸，或是一个直键。氨基酸基可以通过α-氨基，或者如果适当，通过侧链氨基官能团，也可以通过这两种官能团与AA1连接，并且可以任意带有另一个与第一个相同或不同的K-Sp-L-基团。如果AA2还带有其它官能团，它们优选是脱保护形式的。
C可以是batracyline，甲氨蝶呤，喹诺酮-a，鬼臼亚乙苷，苯丙氨酸氮芥，紫杉醇，喜树碱，道诺霉素或阿霉素，或下面定义的喹诺酮-或naphthyridone-羧酸。该细胞生长抑制体通过氨基或羟基官能团与AA2连接。
用作离析物的喹诺酮-或naphthyridone-羧酸结构单元C可以用通式(III)结构表示，
    T-Q           (III)
其中
Q代表下列基团，
其中
Ra代表有1-4个碳原子并且任意被卤素或羟基一-或二-取代的烷基，乙烯基，有3-6个碳原子并且被1或2个氟原子任意取代的环烷基，双环[1.1.1]戊-1-基，1，1-二甲基炔丙基，3-环氧丙基(oxetanyl)，甲氧基，氨基，甲氨基，二甲氨基，或任意被卤素，氨基或羟基一-或二-取代的苯基，或与Re一起形成在Re定义中所述的桥，
Rb代表羟基，有1-3个碳原子的烷氧基或硝基甲基，
Rc代表氢或甲基，或者与Rg一起形成在Rg定义中所述的桥，
Rd代表氢，CH3，CH2F或＝CH2，
X1代表氢，卤素或硝基，
X2代表氢，卤素，氨基，羟基，甲氧基，巯基，甲基，卤代甲基或乙烯基，
Y代表N或C-Re，其中
    Re代表氢，卤素，CF3，OCH3，OCHF2，CH3，CN，
CH＝CH2或C＝CH，或者与Ra一起形成有下列结构的桥：
-*O-CH2-CH-CH3，-*S-CH2-CH2-，-*S-CH2-CH-CH3，
-*CH2-CH2-CH-CH3或-*O-CH2-N-Rf，其中带*的原子与Y的碳原子连
接，其中
    Rf代表氢，甲基或甲酰基，及
D代表N或C-Rg，其中
    Rg代表氢，卤素，CF3，OCH3，OCHF2或CH3，或者与
Rc一起形成有下列结构的桥：-*O-CH2-，-*NH-CH2-，-*N(CH3)-CH2-
，-*N(C2H5)-CH2-，-*N(C3H5)-CH2-或-*S-CH2-，其中带*
的原子与D的碳原子连接，
n代表1，2或3，及T代表下列基团：
Figure A9619418000141
其中
Rh代表
Figure A9619418000142
    其中
    Rk代表氢或甲基，及
Ri代表氢，C1-C3烷基或环丙基。作为细胞抑制体C的特别优选的式(III)化合物是其中Q代表下列基团，其中Ra代表有2-4个碳原子并且任意被1个氟原子取代的烷基，任意被1个氟原子取代的环丙基，或任意被氟一-或二-取代的苯基，
Rb代表羟基，或有1-2个碳原子的烷氧基，
Rc代表氢或甲基，或者与Rg一起形成在Rg定义中所述的桥，
X1代表氟，
X2代表氢或氨基，
Y代表N或C-Re，其中
Re代表氢，氟，氯，CF3，OCH3，OCHF2或C≡CH，或
者与Ra一起形成有下列结构的桥：-*O-CH2-CH-CH3或
-*O-CH2-N-Rr，其中带*的原子与Y的碳原子连接，其中
    Rf代表甲基，及
D代表N或C-Rg，其中
    Rg代表氢，氟，氯，CF3，OCH3或CH3，或者与Re一起
形成有下列结构的桥：-*O-CH2-，-*NH-CH2-，-*N(CH3)-CH2-或
-*S-CH2-，其中带*的原子与D的碳原子连接，及T代表下列基团：
Figure A9619418000151
其中
Rh代表
Figure A9619418000152
      其中
      Rk代表氢或甲基，及
   Ri代表氢或甲基。
与喜树碱或其衍生物产生的葡糖共轭体可能是特别优选的。
其中K，Sp和L代表氢且C代表喜树碱的通式I化合物尤为重要。这是些新物质，并且可以作为中间产物进行反应进而得到通式I的其它衍生物，尤其是作为细胞抑制剂它们还表现出令人感兴趣的药物活性谱。
本发明化合物可以是立体异构体形式如对映体或非对映体形式，或者是它们的混合物如外消旋形式。本发明还涉及纯立体异构体和它们的混合物形式。
如果需要，可以用已知方法如色谱法或结晶法将立体异构体混合物分离成单一的立体异构体构型。
本发明化合物也可以是盐的形式。与有机或无机碱或酸形成的盐和内盐全部概括如下。
可加入的酸包括，例如，优选氢卤酸如盐酸和氢溴酸，特别是盐酸，以及磷酸，硝酸，硫酸，单-和双-官能团羧酸及羟基羧酸如乙酸，马来酸，丙二酸，草酸，葡糖酸，琥珀酸，甲酸，酒石酸，柠檬酸，水杨酸，山梨酸和乳酸，以及磺酸如对甲笨磺酸，1，5-萘-二磺酸或樟脑磺酸。
生理上可接受的盐可以是有游离羧基的本发明化合物的金属盐或铵盐。特别优选的盐有，例如，钠，钾，镁或钙盐，以及从氨或有机胺衍生的铵盐，例如，乙胺，二-或三乙胺，二-或三乙醇胺，二环己胺，二甲氨基乙醇，精氨酸，赖氨酸，1，2-乙二胺或苯乙胺。
实施例系列A：生物试验
实施例A.1  生长抑制试验以确定batracyline和喹诺酮-a的葡糖共轭体的细胞毒性
将人体结肠细胞系SW480和HT29(ATCC号CCL228和HBT-38)和鼠黑瘤细胞系B16F10在Roux盘中，在加入10％FCS的RPMI1640培养基中培养。然后将培养物用胰蛋白酶作用，并将其溶解于加有10％FCS的RPMI中使细胞浓度达到50,000细胞/mL。以100μL细胞悬浮液/孔加到一个96孔微孔板内，并在一个37℃的充有CO2的培养室内培养1天。再加入100μL RPMI培养基和1μL带有试验物质的二甲亚砜。3天和6天后检查生长情况。在每个孔中加入40μL初始浓度为5mg/mL的MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物)水溶液。将该微孔板在37℃的充有CO2的培养室内培养5小时。然后吸出培养基并加入100μL异丙醇/孔。与100μL H2O一起摇动30分钟后，用Titertek Multiskan MCC/340(Flow)在540nm测量消光。
batracyline的葡糖共轭体的细胞毒性作用示于表1a，用IC50表示每种情况的SW480和HT29细胞系。
喹诺酮-a的葡糖共轭体的对SW480，HT29和B16F10细胞系的IC50值汇总于表1b。表1a
  物质     IC50[μM]SW 480     IC50[μM]HT 29
 Batracyline     25     20
  3.2     100     75
  3.4     100     65
  3.7     55     n.m
  3.9     40     55
  3.10     100     125
  3.11     85     n.m.
  3.14     40     n.m.
  3.18     15     n.m.
  3.19     75     n.m.
  3.20     100     n.m.
  3.21     90     n.m.
  3.23     50     n.m.
  3.24     95     n.m.
  3.26     50     n.m.
  3.27     110     n.m.
  3.28     60     n.m
  3.29     110     n.m.
  3.30     ＞250     n.m.
  3.33     90     70
  4.1     22     30
  4.3     20     20
表1a(续)
  物质     IC50[μM]SW 480   IC50[μM]HT 29
 4.4     30     25
 4.5     15     15
 4.6     10     10
 4.7     15     15
 4.8     50     40
 4.9     20     30
 4.10     30     30
 4.11     15     15
 4.12     15     9
 5.1     55     45
 5.2     20     55
 5.6     ＞250     n.m.
 5.8     100     ＞250
 5.9     70     70
 5.12     20     20
 5.13     20     40
 5.14     20     30
 5.15     ＞250     70
 5.19     35     25
 5.20     50     30
 5.21     60     80
 5.22     30     40
 5.23     25     35
表1a-(续)
 物质     IC50[μM]SW 480   IC50[μM]HT 29
  6.2     40     50
  6.3     70     105
  6.7     60     ＞250
  6.10     50     50
  6.12     35     50
  6.15     ＞250     ＞250
  6.20     80     n.m.
  6.21     150     n.m.
  6.23     107     45
  6.25     50     40
  6.28     40     25
  6.29     95     130
  6.30     60     70
  6.32     60     60
  6.34     50     n.m.
  6.35     20     n.m.
  6.36     70     70
  6.40     170     60
  6.43     90     80
  6.46     120     100
  6.59     50     50
  6.60     50     40
  6.80     40     25
表1a-(续)
  物质     IC50[μM]SW 480   IC50[μM]HT 29
  6.81     30     30
  6.82     125     n.m.
  6.83     90     n.m.
  6.85     22     n.m.
  7.1     40     40
  7.2     40     30
  7.3     50     n.m.
  7.5     80     n.m.
  7.7     100     ＞250
  7.8     40     30
  7.11     30     25
  7.12     10     10
  8.10     70     n.m.
  8.11     45     n.m.
  8.12     30     n.m.
表1b
物质 IC50[μM]SW 480   IC50[μM]HT 29     IC50[μM]B 16 F 10
  0.1     50     ＞250     15
  10.2     4     3     5
10.3 5 4 0.7
  11.2     30     n.m.     9
  11.6     8     9     5
  11.7     12     13     15
  11.8     12     16     15
  11.9     12     12     9
  11.10     8     20     2
  11.16     10     10     1.5
  11.17     75     75     8
  11.18     4.5     3.5     0.5
  12.1     1     1.5     0.1
  12.2     4     n.d.     0.8
  12.3     2     n.d.     0.3
  12.5     1     4     0.2
  12.6     4     7     0.3
  12.7     60     ＞250     20
  12.8     8     7     1
  12.9     4     8     2
  12.10     15     15     4
  12.11     2     2     0.5
表1b-(续)
 物质   IC50[μM]SW 480     IC50[μM]HT 29     IC50[μM]B 16 F 10
  12.12     8     13     0.5
  12.13     35     100     1
  12.14     1     2     0.3
  12.15     0.3     1     0.1
  14.1     0.8     1     1.5
  14.2     1     6     1.5
  14.3     8     4     4
  14.4     1.5     1     0.4
  15.1     20     20     2
  15.2     50     70     15
  16.1     50     100     200
  16.2     50     60     80
  17.1     10     5     5
  17.2     4     4     4
  18.1     0.03     0.01     0.2
  18.2     0.02     0.02     0.2
  18.4     0.02     0.02     0.3
  18.5     0.2     0.2     1
  18.9     0.08     0.06     0.7
  18.14     0.015     0.01     0.08
根据实施例系列5，6和11，生物活性对糖类的依赖性由无糖对照化合物N-[Nα，Nε-二-(4-羟基苯基氨基-硫代羰基)-赖氨酰]-batracyline和N-[Nα，Nε-二-(4-羟基苯基氨基-硫代羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline和N-[Nα，Nε-二-(4-羟基苯基氨基-硫代羰基)-D-赖氨酰]-喹诺酮-a(IC50＞250)的无活性另外加以说明。
实施例A.2  葡糖共轭体的可裂解性的体外研究
人血的裂解动力学
将1.225mL人血与1.25mL PBS和25μL底物储藏溶液(1mg/mL 3％二甲亚砜的PBS溶液)一起在37℃培养。1小时和24小时后分别取出1mL样品，并与1mL乙醇混合，在4℃放置20分钟。离心(3500rpm)5分钟后取出100μL上清液进行HPLC分析。
细胞中的裂解动力学
将2.25mL PBS与225μL细胞悬浮液(30mg/mL)和25μL底物储藏溶液(1mg/mL 3％二甲亚砜的PBS溶液)一起在37℃培养。1小时和24小时后分别取出1mL样品，并与1mL乙醇混合，在4℃放置20分钟。离心(3500rpm)5分钟后取出100μL上清液进行HPLC分析。
HPLC条件：
仪器：  Waters unit
柱：    Bischoff Hypersil OCS RP 185μm 250×4mm
洗脱剂：A：10mM磷酸钾缓冲液，pH4.5
        B：80％乙腈/20％水
流量：  1mL/分钟
波长：  372nm
梯度：  0分钟：10％B
        10分钟：60％B
        15分钟：60％B
        18分钟：10％B
        20分钟：60％B
对喹诺酮-a共轭体的洗脱剂：A：100％甲醇
        B：10mM磷酸钾缓冲液，pH2.2；
           10mM庚磺酸
表2a
实施例       人血裂解的％     SW-480裂解的％   肝癌裂解的％
  1小时   24小时   1小时   24小时  1小时   24小时
    3.4   n.d.   n.d.   74*   n.d.   98*   n.d.
    3.9   0   54*   28*   100*   32*   100*
    4.4   0   0     0     0     0     0
    5.9   0   0     0     0     0     0
    6.2   n.d   n.d.     0     0     0     0
    6.12   n.d.   n.d.     0     0     0     0
    7.3   0   0     0     0     0     0
*  裂解产物是N-[D-丙氨酰]-batracyline
表2b
实施例   人血裂解的％   SW-480裂解的％   肝癌裂解的％
1小时 24小时 1小时 24小时   1小时 24小时
  11.2     0     0     0     0     0     0
  11.6     0    11％     0   8％     0   12％
  11.7     0     0     0     0     0     0
  12.1     0     0     0     0     0     0
  12.3     0     0     0     0     0     0
  12.8     0     0     0     0     0     0
实施例A.3  器官分布研究
全部实验都采用“药物开发实验室，Oncotest GmbH”，Freiburg，H.H.Fiebig教授饲养的无胸腺的裸鼠(品系NMRI nu/nu)。将动物放在层流条件下的Macrolon笼中。将预先在裸鼠身上生长了几代的细胞系SW480组织用作肿瘤物质。
按每个动物的两块肿瘤组织同时移植到6-8周的裸鼠的两肋。饲养动物26-27天直到随机取样。肿瘤的平均大小为500mg，相当于直径10mm的肿瘤。
药物动力学本身处理如下：将要研究的物质注射到裸鼠体内，然后将其放回笼中等到1/2小时和4小时后取样。从所取的鼠样身上抽取血样。为达到这一目的要用麻醉醚麻醉老鼠(持续1/2-1分钟)。注射后0.5小时和4小时后打开老鼠的腹腔，然后在麻醉条件下通过尾部Vena腔静脉给鼠放血1-2分钟，最后，折断其脖颈将其致死。结果，中央循环系统停止工作，并压入器官灌注液。然后，暴露出各器官并除去，手术进行约5分钟。然后立即称重各器官样品和身体的其余部分，并将它们冷冻在液氮中。
物质“共轭体1”以300mg/kg体重的量进行腹膜内给药，而物质“共轭体2”以100mg/kg体重的量静脉内注射到尾部静脉。每种物质和每次使用5只动物。
共轭体1和共轭体2的分布情况分别汇总于表3和4。
A.校正系列
将溶解于乙醇/水(1∶1，v/v)的5，10，50，100和200μg物质加到1g牛肝中。将样品与1g海沙和2.5mL冷乙醇/水(1∶1，v/v)一起在一个研钵中研磨，并以3500rpm离心2分钟。除去上清液后再次将剩余物与2.5mL乙醇/水混合，离心并合并上清液。对于每种情况，各取100μL样品进行HPLC分析。
HPLC条件：
仪器：  Waters unit
柱：    Bischoff Hypersil OCS RP 185μm 250×4mm
洗脱剂：A：80％乙腈/20％水
        B：10mM磷酸钾缓冲液，pH4.5
梯度：  0分钟：90％B
        10分钟：40％B
        15分钟：40％B
        18分钟：90％B
        20分钟：90％B
流量：  1mL/分钟
波长：  372nm
B.器官的处理
器官的处理类似于A，整个器官用2.5mL乙醇/水破碎，然后提取。
C.血液的处理
将一定量的血样与2mL乙醇/水(1∶1，v/v)混合，并以3500rpm离心2分钟。倒掉上清液，并在剩余物中加入2mL乙醇/水(1∶1，v/v)，离心并合并上清液。对于每种情况，各取100μL样品进行HPLC分析，HPLC条件同A。
共轭体1(EP 501 250-A1)
Figure A9619418000271
共轭体2(实施例39)
表3
                            器官样品的评价
器官   物质 平均1小时(μg/g器官) 平均4小时(μg/g器官)
血液 共轭体1     31.2     -
batracyline     -     -
肿瘤 共轭体1     56.6     24.4
batracyline     -     -
肝脏 共轭体1     770     126
batracyline     34.1     22.4
肾脏 共轭体1     81     78.4
batracyline     26.1     27.5
  脑 共轭体1 - -
batracyline - -
表4
                          器官样品的评价
器官   物质 平均0.5小时(μg/g器官) 平均4小时(μg/g器官)
血液 其轭体2     6.5     -
batracyline     -     -
肿瘤 共轭体2     2.0     -
batracyline     2.5     31.2
肝脏 共轭体2     0.9     1.2
batracyline     -     -
肾脏 共轭体2     17.5     0.5
batracyline     10.7     0.8
  脑 共轭体2     -     -
batracyline     -     -
实施例A.4 batracyline葡糖共轭体(单独给药)的急性毒性的测定
batracyline衍生物的急性毒性用nu/nu裸鼠测定。
以每kg鼠重量400mg的浓度给老鼠静脉内注射batracyline水溶液，腹膜内注射该物质的二甲亚砜溶液。
根据21天后动物体重的减少和动物存活数计算老鼠对药物可以承受的单次剂量(individual dose)。老鼠对药物可以承受的单次剂量见表5。
对于物质3.16，3.33，3.9，6.12，614，6.2，6.81和8.2，老鼠每kg体重可以承受200mg以上的剂量。对于物质3.33，6.12，6.14，6.2和6.81，即便使用400mg/kg以上的单次剂量也无法检测到老鼠有急性毒性反应。
相比之下，使用25-50mg/kg单次剂量的无糖赖氨酰-D-丙氨酰-batracyline(2.13)就已经有明显的毒性反应了。
表5 老鼠所能承受的batracyline衍生物和喹诺酮-a衍生物的最大单次剂量
  实施例     老鼠所能承受的单次剂量(mg/kg)
    i.p.            i.v.
  2.13     50     25
  3.4     200     ＜100(2只鼠死亡)
  3.9     200     200
  3.16     ＞200     n.d.
  3.33     n.m.     ＞400
  6.2     ＞400     n.m.
  6.12     n.m.     ＞400
  6.14     ＞400     n.m.
  6.81     n.m.     ＞400
  8.2     ＞200     n.d.
  喹诺酮     n.d.     ＜25
  12.3     n.d.     ＞200
实施例A.5  几次给药之后的急性毒性的测定
在第1-4天和第7-10天，或者在第1，5和9天，分别以400，200和100mg/kg/天的剂量，给老鼠部分静脉内注射及部分腹膜内注射药物。根据第21天动物体重的减少和动物存活数进行估算。在实验中每种药物和每种剂量各使用5只老鼠。结果汇总于表6。
表6  对于多次给药老鼠所能承受的最大剂量
给药方式 给药的日程 MTD mg/kg/天
 3.9  i.v. 1-4，7-101-4 -50-100
 3.33  i.v. 1，5，9 ＞400
6.2 i.p. 1-4，7-101，5，9 -400＞400
 6.12  i.v. 1-4，7-101，5，9 ＞400＞400
6.14 i.p. 1，5，9 ＞400
 6.81 i.v. 1-4，7-101，5，9 -200＞400
 Batracyline i.p. 1，5，9 -100
实施例A.6  喹诺酮-a葡糖共轭体的haematopoietic活性与它们的基础活性化合物的比较
原料和方法
体外：
从鼠的股骨冲洗出骨髓细胞。将105个细胞与重组鼠GM-CSF(Genzyme；母细胞群形式)和药物(10-4-100μg/mL)在McCoy 5A培养基(0.3％琼脂)和37℃和7％CO2条件下培养。7天后数一数细胞群(＜50个细胞)和簇(17-50个细胞)的个数。
体内：
分别以1，3，10或30mg/kg的剂量给鼠皮下使用试验化合物。在各时间点(3，24，48，72p.inj(小时/每次注射后))切下股骨并分离出骨髓细胞。将2×105个细胞与上述GM-CSF一起按上述方法培养。7天后数一数细胞群和簇的个数。
结果：
如表7所示，对葡糖共轭体的研究表明它对骨髓母细胞增生有抑制作用，相比喹诺酮-a降低了105-103倍。
在体内试验中还发现，相比喹诺酮-a将化合物12.3加到30mg/kg的用量也没有观察到对母细胞增生有抑制作用。用3mg/kg喹诺酮-a已经大大抑制了母细胞增生(见图1)。
表7  CSF诱发鼠骨髓母细胞增生
 实施例  IC50 [μg/ml]
 喹诺酮  0.0002
 11.2  22.5
 11.7  2.9
 12.1  0.21
 12.3  0.27
 12.6  0.3
 12.8  0.3
 14.1  2.9
 14.2  3.6
 14.4  3.6
实施例A.7  喹诺酮-a共轭体的抗肿瘤活性
喹诺酮-a葡糖共轭体的体外活性是根据Hamburger和Salmon(科学Science 197：461-463)所述方法在双层软琼脂培养系统中用人体肿瘤异种移植测定的。
实体肿瘤最初生长在无胸腺裸鼠(NMRI nu/nu)体内，手术分离并机械粉碎后，在0.05％胶原酶，0.07％DNAse和0.1％透明质酸酶的RPMI酶混合物中在37℃培养30分钟便可得到单独的细胞。将细胞洗涤两次，然后用200μm和20μm目的筛子筛过。
所用培养方法如下：
底层由0.2mL Iscoves’s Modified Dulbeccos Medium和20％胎牛血清及0.7％琼脂构成。在24孔多孔板中将含有40,000-200,000个细胞的0.2mL该培养基和0.4％琼脂用于该基层，并将抑细胞生长抑制剂加到0.2mL培养基中。
将培养物在37℃和7％CO2气氛中培养6-15天。在反转显微镜下数数已经生长的菌落的个数，在评估进行前24小时用氯化四唑鎓染色剂给存活的菌落染色。
活性化合物的效果用存活菌落相对于未处理的板上存活的菌落数量之比的百分数表示(T/C＝处理过的菌落数量×100/未处理过的对照组的菌落数量)。如果T/C值≤30％，说明该抑制剂是活性的。该值以μg/mL为单位表示为IC70，列于表8。表8
                IC70/μg/ml
实施例     11.7     12.1     12.3     12.5 喹诺酮-a
 CXF 280     ＞100     70     5     ＜0.3     6
 HT 29     56     6     5     11     20
 SW 480     18     8     11     10     3
 LXFL 529     4     0.9     2     2     3
 LXFS 538     18     0.4     0.5     ＜0.3     ＜0.3
 MEXF 989     3     ＜0.3     ＜0.3     0.5     ＜0.3
 OVXF 899     234     45     162     55     2
 OVXF 1023     136     12     10     9     0.5
实施例A.8：体内试验：方法：
在第0天给鼠接种5×106B16F10肿瘤细胞。被移植到动物体内的肿瘤细胞发展成实体腹膜肿瘤，然后每天用试验物质或载体对照物治疗动物。在对照组50％的动物在第14天到20天之间一般就死亡了。试验物质以在缓冲剂或在含有20％甲醇和20％二甲亚砜的有机溶剂体系中以0.7％氯化钠溶液中的形式给药。
用载体给药对动物的存活时间没有影响。提高治疗效果就是延长被治疗动物的存活时间。承受化合物的能力用没有接种肿瘤的动物的平行试验分析。治疗指数可根据承受力和延长的存活时间估算。
表9  存活的百分数％
    0天     20天     25天     30天     35天
  对比组     100     70     30     10     10
    11.121mg/kg 100 90 60 30 30
    11.12(100mg/kg) 100 100 100 90 90
  喹诺酮-a(0.1mg/kg)     100     100     100     60     40
  依托泊甙(5mg/kg)     100     90     80     80     70
表9证明了实施例11.12化合物对接种了B16F10肿瘤的鼠的治疗活性。
实施例A.9：用裸鼠模型对体内肿瘤生长的抑制
原料：
在全部研究抑制肿瘤生长的体内实验中均采用无胸腺裸鼠(NMRInu/nu)。选用的大细胞肺癌LXFL529在裸鼠体内经过一系列过程后得以发展。人体肿瘤的起源由同功酶和免疫组织化学方法证明。
实验的建立：
将肿瘤皮下植入6-8周的nu/nu裸鼠的两肋。不考虑两倍时间，待肿瘤直径达到5-7mm马上开始治疗。将这些鼠随机分成治疗组和对照组(每组5只带有8-10可测肿瘤的鼠)。对照组的各肿瘤全都迅速生长。
用滑尺测量肿瘤的两维尺寸。肿瘤的体积与细胞数量密切相关，因此体积被用于所有测算。根据等式“体积＝长度×宽度×宽度/2”([a×b2]/2，a和b代表成直角的两个直径)”计算体积。用第X天的肿瘤尺寸除以第0天(随机的时间)的肿瘤尺寸来计算各肿瘤的相对肿瘤体积(RTV)的值。RVT平均值被用于进一步的测算。
肿瘤体积增长的抑制(试验组与对照组肿瘤体积之比，T/C，用百分数表示)是推断的测量值。
治疗：
根据每种情况的周期性计划在第1，5和9天进行所有化合物的给药。而且，所有化合物用水作为溶剂进行腹膜内给药。
表10
  治疗   剂量a)[mg/kg/天]  存活时间(天)   肿瘤数量   肿瘤相对体积[第0天的％]   最佳T/Cb)
对照组 -   19  ＞21＞21  ＞2114 10 1552 100％
12.6 100   23  ＞2626  ＞26＞26 8 300.7 19.4％
12.8 50 ＞21  ＞21＞21  ＞21＞21 9 502.2 32.3％
12.14 25   23  ＞2619    26＞26 8 519.5 33.5％
a)最大承受剂量(MTD)
b)第19天
在本试验中，实施例系列18的喜树碱化合物有极好的可比较性或更好的作用，因此被用作标准。
实施例系列B：合成实施例
实施例1.1  对氨基苯基2-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
1.1.a)对硝基苯基3，4-O-异亚丙基-β-L-岩藻糖苷
在0℃间隔30分钟先后将65mg对甲苯磺酸和5×100μL 2-甲氧基丙烯加到对硝基苯基β-L-岩藻糖苷(750mg，2.63mmol)的40mL二甲基甲酰胺/二噁烷(1∶2)溶液中。混合物在20℃搅拌16小时后将其浓缩，剩余物经快速色谱(二氯甲烷/甲醇99∶1)提纯。浓缩后得到710mg(83％)白色固体。
1.1.b)对硝基苯基2-O-甲基-3，4-O-异亚丙基-β-L-岩藻糖苷
先将100mg(0.307mmol)实施例1.1.a)得到的化合物加到含96μL甲基碘的10mL四氢呋喃中，然后分批加入11mg氢化钠(80％浓度)。混合物在20℃搅拌3小时后加入96μl甲基碘和11mg氢化钠。混合物再在20℃搅拌16小时后加入一点水和100mL二氯甲烷。用水摇荡两次进行萃取，浓缩有机相，然后用柱色谱(石油醚/乙酸乙酯8∶1)提纯产物，得到78mg(75％)目标产物。
1.1)对氨基苯基2-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
将78mg(0.23mmol)对硝基苯基2-O-甲基-3，4-O-异亚丙基-β-L-岩藻糖苷在20℃在3mL 80％浓乙酸中搅拌16小时。真空除去乙酸后在混合物中加入10mL甲醇。加入二氧化铂后在稍微加压的氢气中进行氢化。用Celite(硅藻土)滤出悬浮液，用甲醇洗涤滤饼上的物质。经色谱(二氯甲烷/甲醇97.5∶2.5)提纯后得到77mg(80％)目标产物。[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1Rf＝0.42]
实施例1.2  对氨基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000351
1.2.a)对硝基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
将784g(31.5mmol)二丁基氧化锡加到6g(21mmol)对硝基苯基β-L-岩藻糖苷的300mL无水甲醇中，并将混合物加热回流2小时。浓缩后干燥剩余物，然后将其溶于300mL二甲基甲酰胺。加入15.7mL甲基碘后将混合物在70℃搅拌40小时。真空除去溶剂，将剩余物溶于300mL二氯甲烷。滤掉悬浮物，再次浓缩留下的溶液，并将剩余物进行快速色谱(二氯甲烷/甲醇99∶1)提纯。浓缩后得到381.5mg(61％)目标产物，
1.2)对氨基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
将3.81g(12.73mmol)对硝基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷用类似实施例1.1的方法氢化。得到3g(88％)目标产物。[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.53]
实施例1.3  对氨基苯基3-O-甲基-α-L-岩藻糖苷
用类似实施例1.2的方法从对硝基苯基α-L-岩藻糖苷开始制备。两个阶段的总产率为63％。[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.39]
实施例1.4  对氨基苯基4-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000353
1.4.a)对硝基苯基2-O-苄基-4-O-乙酰基-β-L-岩藻糖苷
将31mg对甲苯磺酸和1134mg(7mmol)原乙酸三乙酯加到1g(3.5mmol)对硝基苯基β-L-岩藻糖苷的100mL无水四氢呋喃中，混合物在20℃搅拌15分钟后真空蒸馏除去溶剂。将剩余物溶于50mL四氢呋喃和3mL二甲基甲酰胺，然后加入4165μL苄基溴和210mg氢化钠(60％浓度)。混合物在20℃搅拌1小时后加入10mL 80％浓度的乙酸。浓缩混合物，剩余物经快速色谱(二氯甲烷/甲醇99∶1)提纯。浓缩并干燥后得到1236mg(85％)目标产物。
1.4.b)对硝基苯基2-O-苄基-3-O-乙酰基-4-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
将1000mg(2.39mmol)对硝基苯基2-O)-苄基-4-O-乙酰基-β-L-岩藻糖苷溶解在60mL苯中。加入2988μL甲基碘和1109mg氧化银后将混合物加热回流8小时。用快速色谱(二氯甲烷/甲醇99∶1)将产生的混合产物分离成几部分，其中包括239mg(23％)对硝基苯基2-O-苄基-3-O-乙酰基-4-O-甲基-β-L-岩藻糖苷和653mg(63％)异构体对硝基苯基2-O-苄基-3-O-甲基-4-O-乙酰基-β-L-岩藻糖苷，后者为白色固体。
1.4)对氨基苯基4-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
将224mg(0.52mmol)对硝基苯基2-O-苄基-3-O-乙酰基-4-O-甲基-β-L-岩藻糖苷溶解于20mL甲醇，然后加入390μL1N甲醇钠溶液。混合物在20℃搅拌16小时后用80％浓乙酸中和，然后浓缩，并将剩余物溶于二氯甲烷。有机相用1N碳酸氢钠溶液和水洗涤，干燥并浓缩。将剩余物溶于20mL甲醇，用类似实施例1.1的方法在钯/活性炭上进行氢化。浓缩后将产物溶于水并冻干。分离得到119mg(88％)白色非晶形固体。[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.38]
实施例1.5  对氨基苯基3-O-正丙基-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000361
1.5.a)对硝基苯基2-O-苄基-3-O-正丙基-4-O-乙酰基-β-L-岩藻糖苷
类似于实施例1.4.b，从化合物1.4.a用丙基碘制备异构体3-和4-丙基化产物，并用色谱分离。以49％产率得到对硝基苯基2-O-苄基-3-O-正丙基-4-O-乙酰基-β-L-岩藻糖苷，另外以29％产率得到对硝基苯基2-O-苄基-3-O-乙酰基-4-O-正丙基-β-L-岩藻糖苷。
1.5.b)对氨基苯基3-O-正丙基-β-L-岩藻糖苷
类似于实施例1.4，从实施例1.5.a)馏分1合成目标产物。产率：78％。[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.42]
实施例1.6  对氨基苯基3-脱氧基-β-L-岩藻糖苷
1.6.a)对硝基苯基3，6-二脱氧基-3-氯-4-O-乙酰基-β-L-古洛糖苷
将31mg对甲苯磺酸和1134mg(7mmol)原乙酸三乙酯加到1g(3.5mmol)对硝基苯基-β-L-岩藻糖苷的100mL无水四氢呋喃中，混合物在20℃搅拌15分钟后真空蒸馏除去溶剂。加入100mL盐酸的二氯甲烷饱和溶液。反应10分钟后浓缩混合物，产物经快速色谱(二氯甲烷/甲醇99∶1)提纯，得到793mg(65％)目标产物。[TLC：二氯甲烷甲醇97.5∶2.5 Rf＝0.36]
1.6.b)对硝基苯基3，6-二脱氧基-3-氯-β-L-古洛糖苷
将375mg(1.08mmol)对硝基苯基3，6-二脱氧基-3-氯-4-O-乙酰基-β-L-岩藻糖苷溶解在25mL甲醇中，并加入10滴1N甲醇钠溶液。20分钟后用乙酸酸化混合物并浓缩，剩余物在400mL二氯甲烷和60mL水之间分配。干燥和浓缩有机相，剩余物从二氯甲烷/乙醚沉淀，得到315mg(96％)目标产物。
1.6)对氨基苯基3-脱氧基-β-L-岩藻糖苷
将315mg(1.04mmol)对硝基苯基3，6-二脱氧基-3-氯-β-L-岩藻糖苷溶解于40mL甲醇，然后加入200mg钯/活性炭和290μL三乙胺，并在稍微加压的氢气中氢化4天。过滤所得悬浮液，洗涤并浓缩，产物经快速色谱(二氯甲烷/甲醇97.5∶2.5)提纯，得到160mg(65％)脱氧基化合物。[TLC：二氯甲烷/甲醇95∶5 Rf＝0.18]
实施例1.7  对氨基苯基3，4-二脱氧基-β-L-岩藻糖苷
将400mg(1.16mmol)对硝基苯基3，6-二脱氧基-3-氯-4-O-乙酰基-β-L-古洛糖苷(实施例1.6.a)溶解于55mL甲醇，并加入323μL三乙胺，然后并在稍微加压的氢气中在钯/活性炭上(10％)氢化。混合物在20℃搅拌16小时后用Celite过滤，冲洗滤饼上的物质，浓缩滤液，再将剩余物溶于100mL甲醇。加入1.5mL 1N甲醇钠溶液，并将混合物在室温搅拌16小时。用乙酸中和后浓缩，形成的产物经快速色谱(二氯甲烷/甲醇97.5∶2.5)提纯。浓缩相应的馏分，并从甲醇/乙醚沉淀，得到120mg(46％)目标化合物[TLC：二氯甲烷/甲醇95∶5Rf＝0.31]以及77mg(28％)对氨基苯基3-脱氧基-β-L-岩藻糖苷[TLC：二氯甲烷/甲醇95∶5 Rf＝0.18]。
实施例1.8  对氨基苯基3，4-环氧基-β-L-岩藻糖苷
将80mg(0.23mmol)对硝基苯基3，6-二脱氧基-3-氯-4-O-乙酰基-β-L-古洛糖苷(实施例1.6.a)溶解于10mL甲醇，并加入345μL甲醇钠溶液。超声处理1小时后混合物用80％浓度的乙酸酸化。浓缩后剩余物经色谱(二氯甲烷/甲醇99∶1)提纯。浓缩有关的馏分后将剩余物溶于甲醇，类似于实施例1.1在钯/活性炭上进行氢化，得到46mg(75％)目标化合物。FAB-MS：m/e＝238＝M+1。
实施例1.9  对氨基苯基4-脱氧基-β-L-岩藻糖苷
用类似于T.Lindhorst和J.Thiem在糖类研究(Carbohydr Res.)209(1991)，119中所述方法，从对硝基苯基-β-L-岩藻糖苷经过对硝基苯基2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-二脱氧基-4-碘-β-L-岩藻糖苷制备标题化合物。[TLC：二氯甲烷/甲醇90∶10 Rf＝0.3]。
实施例1.10对氨基苯基3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖苷
1.10.a)对硝基苯基3-O-甲氧羰基甲基-β-L-岩藻糖苷
将1g(3.5mmol)对硝基苯基-β-L-岩藻糖苷和1.3g(5.2mmol)二丁基氧化锡在50mL甲醇中加热回流2小时。浓缩溶液，将剩余物溶于50mL二噁烷，然后加入2mL溴乙酸甲酯和100mg四丁基碘化铵，并将混合物加热回流16小时。蒸发掉溶剂，产物经快速色谱(二氯甲烷/甲醇99∶1)提纯。浓缩相应的馏分后剩余物从甲醇/乙醚重新沉淀，得到455mg(37％)目标化合物。
1.10)对氨基苯基3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖苷
将282mg(0.79mmol)对硝基苯基3-甲氧羰基甲基-β-L-岩藻糖苷溶解于20mL甲醇，然后加入440μL 2N氢氧化锂溶液。混合物在20℃搅拌2小时后用酸性离子交换剂SC108酸化至pH3，然后过滤。在稍微加压的氢气中氢化1.5小时，然后除去催化剂，并用甲醇洗涤。浓缩混合物，将剩余物溶于水。冻干后以86％产率得到目标产物(212mg)。[TLC：乙腈/水/乙酸5∶1∶0.2 Rf＝0.24]
实施例1.11对氨基苯基3-O-甲氧羰基甲基-β-L-岩藻糖苷
将250mg(0.7mmol)对硝基苯基-3-甲氧羰基甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.10.a)溶解于20mL甲醇，然后在稍微加压的氢气中在钯/活性炭上氢化1.5小时。除去催化剂，并用甲醇洗涤。浓缩混合物，将剩余物溶于水。冻干后得到195mg目标产物(85％)。[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.43；FAB-MS：m/e＝328＝M+1]
实施例1.12对氨基苯基3-O-羟乙基-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000401
1.12.a)对硝基苯基3-O-羟乙基-β-L-岩藻糖苷
将1000mg(2.8mmol)对硝基苯基3-甲氧羰基甲基-β-L-岩藻糖苷溶解于160mL四氢呋喃和40mL水的混合物，然后加入53mg硼氢化钠。10分钟后蒸发掉溶剂，剩余物经快速色谱(二氯甲烷/甲醇95∶5)提纯。浓缩相应的馏分后将剩余物溶于水中，冻干混合物，得到362mg(40％)目标产物。
1.12)对氨基苯基3-O-羟乙基-β-L-岩藻糖苷
用类似实施例1.1的方法氢化362mg实施例1.12.a)得到的化合物后得到270mg(82％)目标产物。[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.43]
实施例1.13对氨基苯基2-O-羧甲基-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000402
1.13.a)对硝基苯基2-O-甲氧羰基甲基-β-L-岩藻糖苷
将250mg(0.88mmol)对硝基苯基β-L-岩藻糖苷溶解于25mL无水四氢呋喃和3mL二甲基甲酰胺的混合物，然后加入80mg(2.64mmol)80％浓度的氢化钠。将混合物在20℃搅拌10分钟后加入35μL溴乙酸苄酯。以后再每间隔10分钟加入35μL溴乙酸苄酯，共加三次。连续搅拌混合物30分钟，然后用甲醇淬灭。10分钟后用5mL 80％浓度的乙酸酸化。浓缩混合物，接着用二氯甲烷蒸馏剩余物。采用快速色谱提纯，先用流动相系统二氯甲烷/甲醇/冰醋酸90∶10∶1洗脱，然后用比例为80∶20∶2的同一系统洗脱。浓缩相应的馏分后用乙醚溶解剩余物，从先前的洗脱液中得到157mg(42％)目标化合物。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2Rf＝0.65]。从后面的洗脱液得到异构体3-O-烷基化化合物(33％)。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.54]。
1.13)对氨基苯基2-O-羧甲基-β-L-岩藻糖苷
用实施例1.10所述方法水解和氢化150mg对硝基苯基2-O-甲氧羰基甲基-β-L-岩藻糖苷，得到109mg(83％)目标产物。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.35]
实施例1.14.a  对硝基苯基β-L-岩藻糖苷单琥珀酰基化区域异构体产物的合成
将1100mg(3.86mmol)对硝基苯基β-L-岩藻糖苷溶解于50mL吡啶，并加入580mg(5.79mmol)琥珀酸酐。混合物在20℃搅拌16小时后浓缩，然后用二氯甲烷蒸馏剩余物两次。产物从二氯甲烷/乙醚沉淀，得到1g不可分离的混合物。将该物质溶于甲醇/水，并加入846mg(2.6mmol)碳酸铯。蒸发掉溶剂，剩余物用二甲基甲酰胺蒸馏。将剩余物溶于二甲基甲酰胺，并加入618μL苄基溴。超声处理1小时后滤除溴化铯。浓缩滤液，剩余物在500mL乙酸乙酯和50mL水之间分配。干燥并浓缩有机相，经快速色谱分离出几部分(流动相系统二氯甲烷/甲醇99∶1)为：
馏分1：87mg(4.8％)对硝基苯基3-O-(3-苄氧羰基-丙酰基)-β-L-岩藻糖苷[TLC：二氯甲烷/甲醇95∶5 Rf＝0.45]。
馏分2：27mg(1.5％)对硝基苯基2-O-(3-苄氧羰基-丙酰基)-β-L-岩藻糖苷[TLC：二氯甲烷/甲醇95∶5 Rf＝0.34]。
馏分3：190mg(10.3％)对硝基苯基4-O-(3-苄氧羰基-丙酰基)-β-L-岩藻糖苷[TLC：二氯甲烷/甲醇95∶5 Rf＝0.28]。
实施例1.14对氨基苯基3-O-琥珀酰基-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000411
将85mg(0.1 7mmol)实施例1.14.a得到的馏分1溶解于5mL四氢呋喃和1mL水的混合物中。加入20mg二氧化铂，然后氢化8小时。滤出催化剂用四氢呋喃/水洗涤，浓缩滤液。将剩余物溶于水并冻干，得57mg(94％)目标产物[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.65]。
实施例1.15对氨基苯基2-O-琥珀酰基-β-L-岩藻糖苷
类似于实施例1.14，将实施例1.14.a得到的馏分2氢化，得到16mg(87％)目标产物[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.62]。
实施例1.16对氨基苯基4-O-琥珀酰基-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000422
类似于实施例1.14，将实施例1.14.a得到的馏分3氢化，得到125mg(88％)目标产物[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.63]。
实施例1.17对氨基苯基3，4-二-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
1.17.a)对硝基苯基2-O-苄基-3，4-O-异亚丙基-β-L-岩藻糖苷
将377mg(1.16mmol)实施例1.1.a得到的化合物溶解于30mL无水四氢呋喃中，然后依次加入690μL苄基溴和52mg氢化钠，并将化合物在20℃搅拌。4和6小时后再在混合物上先后添加690μL苄基溴和氢化钠。用类似实施例1.1.b的方法处理，得到245mg(51％)目标化合物。
1.17.b)对硝基苯基2-O-苄基-3，4-二-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
在20℃将245mg(0.59mmol)对硝基苯基2-O-苄基-3，4-O-异亚丙基-β-L-岩藻糖苷在80％浓度的乙酸中搅拌16小时。浓缩混合物，剩余物用乙醚/戊烷搅拌。吸滤混合物并干燥剩余物后将所得产物溶于20mL无水四氢呋喃。加入45mg 80％浓度的氢化钠，15分钟后注入160μL甲基碘。将混合物在20℃搅拌20小时后用甲醇和冰醋酸淬灭，浓缩混合物，剩余物在二氯甲烷和水之间分配。干燥和浓缩有机相，剩余物经快速色谱(二氯甲烷/甲醇100∶1)提纯。浓缩和干燥相应的馏分，得到188mg(79％)目标产物。
1.17)对氨基苯基3，4-二-O-甲基-β-L-岩藻糖苷
室温下将180mg(0.45mmol)实施例1.17.b所得化合物在加入50mg钯/活性炭的15mL甲醇和3mL二氯甲烷的混合物中氢化2天。滤除催化剂，浓缩滤液，剩余物经快速色谱(二氯甲烷/甲醇97.5∶2.5)提纯，得到86mg(68％)目标化合物。[TLC：二氯甲烷/甲醇95∶5 Rf＝0.21]
实施例1.18对氨基苯基3-O-氨基甲酰基甲基-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000431
将100mg(0.305mmol)实施例1.11所得化合物溶解于10mL甲醇，并加入0.5mL 17％浓度的氢氧化铵。4小时后浓缩混合物，将剩余物溶于水并冻干，得到95mg(定量的)目标化合物。[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.43]
实施例1.19 对氨基苯基2-O-羟乙基-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000441
类似于实施例1.12.a和1.12，从200mg(0.56mmol)对硝基苯基2-O-甲氧羰基甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.13.a)制备标题化合物，得到76mg(两个阶段的产率为45％)。[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1Rf＝0.2]
实施例1.20对氨基苯基3，6-二脱氧基-3-氯-β-L-岩藻糖苷
Figure A9619418000442
将50mg(0.165mmol)实施例1.6.b所得化合物在5mL甲醇中用钯/活性炭氢化1小时。滤出催化剂并冲洗，浓缩滤液，将剩余物溶于水中并冻干，得到45mg(89％)目标化合物。[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.35]
实施例1.21对氨基苯基α-L-鼠李糖苷
Figure A9619418000443
类似于实施例1.1，从300mg对硝基苯基α-L-鼠李糖苷(Sigma)制备标题化合物，产率为96％。
实施例1.22对氨基苯基3-O-羧甲基-α-L-鼠李糖苷
1.22.a)对硝基苯基3-O-甲氧羰基甲基-α-L-鼠李糖苷
将481mg(1.63mmol)对硝基苯基α-L-鼠李糖苷溶于30mL甲醇，并加入629mg(2.45mmol)二丁基氧化锡。将混合物加热回流2小时，然后浓缩，将剩余物溶于30mL二噁烷。加入85mg四丁基碘化铵和950μL溴乙酸甲酯，并将混合物加热回流16小时。如果需要，上面再加上1mL溴乙酸甲酯，并延长反应时间。浓缩混合物，剩余物经快速色谱提纯(二氯甲烷/甲醇99∶1洗脱)，干燥后得到408mg(70％)对硝基苯基3-O-甲氧羰基甲基-α-L-鼠李糖苷。[TLC：二氯甲烷/甲醇95∶5 Rf＝0.36]
1.22)对氨基苯基3-O-羧甲基-α-L-鼠李糖苷
用完全类似于实施例1.10的方法，从对硝基苯基3-O-甲氧羰基甲基-α-L-鼠李糖苷进行合成，以80％的产率得到目标产物。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.26]
实施例1.23对氨基苯基β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000451
将对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(3.0g，10mmol)溶解于甲醇水1∶1(50mL)。在加入钯/活性炭(10％Pd，200mg)之后在稍微加压的氢气中氢化3小时。用Celite过滤该悬浮液，用热甲醇/水1∶1(100mL)洗涤滤饼上的物质。真空浓缩滤液，从甲醇重结晶，得到无色晶体(2.11g，78％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.62；[α]20＝-39.5°(c＝1.0/H2O)；熔点＝166℃。
实施例1.24对氨基苯基2-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000452
1.24.a)对硝基苯基6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
将对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(9.0g，30mmol)，氯三苯基甲烷(16.7g，60mmol)和N，N-二甲氨基吡啶(609mg，5mmol)的无水吡啶(100mL)在60℃加热4小时。真空浓缩后剩余物用快速色谱法提纯[石油醚/乙酸乙酯2∶1→3∶2，每种情况下都含有0.5％三乙胺]，得到无色晶体(9.23g，57％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.55；熔点＝82℃。
1.24.b)对硝基苯基3，4-O-异亚丙基-6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
将二甲氧基丙烷(400mL)和催化量的(±)-樟脑-10-磺酸(400mg，1.7mmol)加到上步化合物(8.7g，16mmol)中。在室温下反应1小时后加入三乙胺(240mL，1.7mmol)使反应结束。真空浓缩混合物，剩余物用快速色谱法提纯[石油醚/乙酸乙酯2∶1]，得到无色泡沫(6.2g，66％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0 46；[α]20＝-42.1°(c＝0.94/CH2Cl2)。
1.24.c)对硝基苯基2-O-甲基-3，4-O-异亚丙基-6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
将化合物1.24.b(5.83g，10mmol)溶解于二甲基甲酰胺(100mL)和甲基碘(2.5mL，40mmol)，然后分批加入80％氢化钠的矿物油(450mg，15mmol)悬浮液。在室温下反应2小时后滴加甲醇(10mL)使反应结束。真空浓缩混合物，将剩余物溶于二氯甲烷(1000mL)，并将溶液与水(500mL)一起剧烈搅拌。有机相用硫酸镁(50g)干燥并真空浓缩，剩余物经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯12∶1→8∶1]，得到无色泡沫(4.72g，79％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.72；[α]20＝-35.7°(c＝1.0/CH3OH)。
1.24.d)对硝基苯基2-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
将99％浓度的三氟乙酸(20mL)加到上步化合物(4.48g，7.5mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中，并将混合物在室温搅拌3小时。真空浓缩混合物后剩余物经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯5∶1→2∶1]，得到无色晶体(1.09g，46％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.42；熔点＝177℃。
1.24)对氨基苯基2-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
将化合物1.24.d(946mg，3mmol)溶解于甲醇(50mL)，加入水(0.5mL)和碱性阮内镍(约200mg)后在稍微加压的氢气中氢化2小时。用Celite过滤该悬浮液，用甲醇(100mL)洗涤滤饼上的物质。真空浓缩滤液，得到棕色泡沫(579mg，68％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.28；[α]20＝-39.3°(c＝0.15/CH3OH)。
实施例1.25对氨基苯基3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000471
1.25.a)对硝基苯基3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
将二丁基氧化锡(1.87g，7.5mmol)加到对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(1.5g，5.0mmol)的无水甲醇(40mL)溶液中，并将混合物加热回流。3小时后真空浓缩混合物，剩余物用真空油泵干燥1小时。将产物溶于二噁烷(40mL)，并在其中加入甲基碘(1.9mL，30mmol)，然后在100℃浴温度搅拌16小时。真空蒸馏除去溶剂，剩余物快速色谱法提纯[乙酸乙酯/石油醚2∶1→乙酸乙酯]，得到无色晶体(1.32g，84％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.34；熔点＝196℃；[α]20＝-53.3°(c＝1.0/CH3OH)。
1.25)对氨基苯基3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
将上步化合物(946mg，3mmol)按照实施例1.24所述还原，并对产物进行处理，得到棕色晶体(656mg，77％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.21；熔点＝196℃；[α]20＝-25.2°(c＝1.0/CH3OH)。
实施例1.26对氨基苯基4-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷，乙酸盐
Figure A9619418000472
1.26.a)对硝基苯基3-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖苷
将二丁基氧化锡(1.87g，7.5mmol)加到对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(1.5g，5.0mmol)的无水二噁烷(40mL)溶液中，并将混合物加热回流。3小时后将苄基溴(3.6mL，30mmol)加到所得溶液中，然后在回流状态下搅拌48小时。真空蒸馏除去溶剂，剩余物快速色谱法提纯[乙酸乙酯/石油醚2∶1→1∶1]，得到无色晶体(1.58g，81％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.69；熔点＝127℃。
1.26.b)对硝基苯基3-O-苄基-4，6-O-异亚丙基-βD-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.b所述方法反应化合物1.26.a。快速色谱法提纯[石油醚/乙酸乙酯5∶1→3∶1]后得到无色泡沫(6.54g，95％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.34；[α]20＝-38.9°(c＝1.0/CH2Cl2)。
1.26.c)对硝基苯基2，3-二-O-苄基-4，6-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖苷
将化合物1.26.b(4.31g，10mmol)溶解于二甲基甲酰胺(100mL)和苄基溴(12mL，100mmol)，然后分批加入80％氢化钠的矿物油(450mg，15mmol)悬浮液。在室温下反应2小时后滴加甲醇(10mL)使反应结束。真空浓缩混合物，将剩余物溶于二氯甲烷(1000mL)，并将溶液与水(500mL)一起剧烈搅拌。有机相用硫酸镁(50g)干燥并真空浓缩，剩余物经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯20∶1→15∶1→10∶1]，得到含有杂质的无色油(2.72g，52％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.62。
1.26.d)对硝基苯基2，3-二-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.d所述方法反应上步化合物(2.6g，5mmol)。真空浓缩后通过用乙醚沸腾萃取剩余物，得到无色晶体(805mg，33％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.23；熔点＝160℃。
1.26.e)对硝基苯基2，3-二-O-苄基-6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.a所述方法将化合物1.26.d(722mg，1.5mmol)三苯甲基化。快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯15∶1→10∶1→5∶1]后得到无色泡沫(880mg，81％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.79；[α]20＝-25.3°(c＝0.3/CH2Cl2)。
1.26.f)对硝基苯基2，3-二-O-苄基-4-O-甲基-6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将上步化合物(724mg，1mmol)甲基化。快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯10∶1→5∶1]后得到无色泡沫(662mg，90％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯5∶1]：Rf＝0.66；[α]20＝-38.7°(c＝0.2/CH2Cl2)。
1.26)对氨基苯基4-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷，乙酸盐
将上步化合物(590mg，0.8mmol)溶解于90％浓度的乙酸(50mL)，加入钯/活性炭(10％Pd，200mg)后在稍微加压的氢气中氢化16小时。用Celite过滤该悬浮液，用甲醇(100mL)洗涤滤饼上的物质。真空浓缩滤液，剩余物从乙醚/石油醚重新沉淀，得到无色晶体(253mg，92％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.12。
实施例1.27对氨基苯基6-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
1.27.a)化合物1.24.b的苄基化
按照实施例1.26.c所述方法将化合物1.24.b(5.84g，10mmol)苄基化。快速色谱法提纯[石油醚/乙酸乙酯15∶1→12∶1→5∶1→乙酸乙酯，每种情况都含有0.5％三乙胺]后得到两种产物馏分：
馏分1：对硝基苯基2-O-苄基-3，4-O-异亚丙基-6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷；黄色泡沫(1.71g，25％)：TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.72；[α]20＝-8.1°(c＝1.0/CH2Cl2)。
馏分2：对硝基苯基2-O-苄基-3，4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖苷；黄色泡沫(806mg，19％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.45；[α]20＝+2.8°(c＝1.2/CH3OH)。
1.27.b)对硝基苯基2-O-苄基-3，4-O-异亚丙基-6-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将实施例1.27.a的馏分2(777mg，1.8mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯10∶1→8∶1]后得到棕色油(730mg，91％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.54；[α]20＝-11.6°(c＝1.1/CH2Cl2)。
1.27.c)对硝基苯基2-O-苄基-6-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.d所述方法反应上步化合物(668mg，1.5mmol)。真空浓缩后通过用少量乙醚沸腾萃取剩余物，冷却到室温后得到淡米色晶体(388mg，64％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.15；熔点＝143℃。
1.27)对氨基苯基6-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将化合物1.27.c(324mg，0.8mmol)还原16小时。真空浓缩滤液后通过用少量乙醚沸腾萃取剩余物，得到米色晶体(184mg，81％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.05；熔点＝115℃(分解)。
实施例1.28对氨基苯基2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000501
1.28.a)对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷的异亚丙基化
将无水甲苯磺酸(500mg)加到对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(7.5g，25mmol)的加到丙酮(1000mL)溶液中。在常压下蒸馏30分钟除去丙酮(250mL)，之后立即添加碳酸钾(500mg)来中和混合物。真空浓缩后将剩余物与乙醚(1000mL)一起搅拌。过滤混合物，浓缩滤液，剩余物经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯2∶1→1∶1→3∶2]后得到两种产物馏分：
馏分1：对硝基苯基3，4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖苷；无色泡沫(3.74g，44％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.59；[α]20＝-54.2°(c＝0.38/CH3OH)。
馏分2：对硝基苯基4，6-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖苷；无色泡沫(4.3g，50％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.54；[α]20＝-81.0°(c＝0.38/CH3OH)。
1.28.b)对硝基苯基2，3-二-O-甲基-4，6-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将实施例1.28.a的馏分2(4.1g，12mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯5∶1→2∶1]后得到无色泡沫(2.93g，66％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.42；[α]20＝-52.6°(c＝0.34/CH3OH)。
1.28.c)对硝基苯基2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.d所述方法反应上步化合物(2.77g，7.5mmol)。在室温1小时后真空浓缩混合物，用真空油泵干燥剩余物1小时。用乙醚/石油醚1∶1蒸煮，得到无色晶体(1.11g，45％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.24；熔点＝156℃。
1.28)对氨基苯基2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将化合物1.28.c(989mg，3mmol)还原。得到无色油(396mg，44％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.50；[α]20＝-19.4°(c＝0.16/CH3OH)。
实施例1.29对氨基苯基2，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000511
1.29.a)化合物1.26.a的三苯甲基化
按照实施例1.24.a所述方法将化合物1.26.a(11.7g，30mmol)三苯甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯10∶1→7∶1→5∶1，每种情况都含有0.5％三乙胺]后得到两种产物馏分：
馏分1：三苯甲基2-O-(对硝基苯基)-3-O-苄基-6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷；无色泡沫(8.5g，32％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.68；[α]20＝+42.8°(c＝1.0/CH2Cl2)。
馏分2：对硝基苯基3-O-苄基-6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷；无色泡沫(9.0g，47％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.22；[α]20＝-22.6°(c＝1.03/CH2Cl2)。
1.29.b)对硝基苯基2，4-二-O-甲基-3-O-苄基-6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将实施例1.29.a的馏分2(7.6g，12mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯15∶1→10∶1]后得到无色泡沫(7.07g，89％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.79；[α]20＝-35.8°(c＝1.09/CH3OH)。
1.29.c)对氨基苯基2，4-二-O-甲基-3-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.26所述方法将上步化合物(6.0g，9mmol)氢化48小时。得到无色晶体(1.39g，40％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.20；熔点＝148℃。
1.29)对氨基苯基2，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将化合物1.29.c(779mg，2mmol)氢化5天。将合并的滤液真空蒸发和将剩余物用乙醚(2×50mL)煮沸萃取后得到微绿色油(391mg，65％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.16；熔点＝260℃(分解)。
实施例1.30对氨基苯基2，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000521
1.30.a)对硝基苯基2，6-二-O-甲基-3，4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将实施例1.28.a的馏分1(4.1g，12mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯101→8∶1→5∶1]后得到无色油(3.25g，73％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.65。
1.30.b)对硝基苯基2，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.d所述方法进行上步化合物(2.77g，7.5mmol)的反应。经快速色谱提纯[乙酸乙酯/石油醚2∶1]后得到无色晶体(1.63g，66％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.31；熔点＝222℃。
1.30)对氨基苯基2，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将化合物1.30.b(989mg，3mmol)还原。得到无色油(597mg，66％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.56；[α]20＝-53.1°(c＝0.49/CH3OH)。
实施例1.31对氨基苯基3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷，乙酸盐
1.31.a)对硝基苯基2，6-二-O-苄基-3，4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.26.c所述方法将实施例1.28.a的馏分1(4.1g，12mmol)苄基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯6∶1]后得到黄色油(5.3g，85％)；TLC[乙酸乙酯/石油醚2∶1]：Rf＝0.76；[α]20＝+8.8°(c＝1.2/CH3OH)。
1.31.b)对硝基苯基2，6-二-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.d所述方法进行上步化合物(4.69g，9mmol)的反应。在室温30分钟后真空浓缩混合物，并将剩余物用真空油泵干燥1小时。从乙醇重结晶后得到无色晶体(2.89g，67％)；TLC[乙酸乙酯/石油醚2∶1]：Rf＝042；熔点＝133℃；[α]20＝-64.2°(c＝1.0/CH3OH)。
1.31.c)对硝基苯基2，6-二-O-苄基-3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将上步化合物(2.4g，5mmol)甲基化。从乙醇/正己烷重结晶后得到无色晶体(1.74g，69％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.74；熔点＝149℃。
1.31)对氨基苯基3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷，乙酸酯
按照实施例1.26所述方法将化合物1.31.c(1.52g，3mmol)氢化。得到无色晶体(664mg，62％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.47；熔点＝140℃(分解)。
实施例1.32对氨基苯基3，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
1.32.a)对硝基苯基3-O-甲基-6-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-β-D-吡喃半乳糖苷
将咪唑(1g，15mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.25g，8mmol)加到化合物1.25.a(1.58g，5mmol)的二甲基甲酰胺(150mL)溶液中。将混合物在室温搅拌24小时，然后加水(100mL)使反应中断。用二氯甲烷(1000mL)稀释混合物，有机相用水(2×1000mL)洗涤，硫酸镁(20g)干燥并真空浓缩。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯15∶1→10∶1→5∶1]后得到还有点杂质的黄色泡沫(826mg，38％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.59；[α]20＝-56.3°(c＝1.0/CH2Cl2)。
1.32.b)对硝基苯基2，4-二-O-苄基-3-O-甲基-6-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.26.c所述方法将上步化合物(773mg，1.8mmol)苄基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯30∶1→5∶1]后得到无色泡沫(810mg，74％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯5∶1]：Rf＝0.58。
1.32.c)对硝基苯基2，4-二-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
在0℃将化合物1.32.b(732mg，1.2mmol)溶解于四氢呋喃(6mL)，并加入1M四丁基氟化铵的四氢呋喃(2.4mL)溶液。将混合物在室温搅拌40分钟，然后真空浓缩。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯5∶1→3∶1→2∶1]后得到无色晶体(512mg，86％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.36；熔点＝177℃。
1.32.d)对硝基苯基2，4-二-O-苄基-3，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将上步化合物(446mg，0.9mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯20∶1→10∶1→8∶1]后得到无色油(401mg，87％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.70；[α]20＝-56.5°(c＝0.96/CH2Cl2)。
1.32)对氨基苯基3，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将化合物1.32.d(357mg，0.7mmol)氢化。真空蒸发合并的滤液并通过用乙醚(20mL)沸腾萃取剩余物后得到无色晶体(207mg，99％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.02；熔点＞280℃(分解)。
实施例1.33对氨基苯基4，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000551
1.33.a)对硝基苯基2，3-二-O-苄基-4，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将化合物1.26.d(2.4g，5mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯5∶1→3∶1]后得到无色晶体(1.89g，74％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.76；熔点＝100℃。
1.33)对氨基苯基4，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将化合物1.33.a(1.53g，3mmol)氢化。得到无色晶体(890mg，99％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.71；熔点＝180℃(分解)。
实施例1.34对氨基苯基2，3，4-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000561
1.34.a)对硝基苯基2，3，4-三-O-甲基-6-O-三苯基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将化合物1.24.a(1.63g，3mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯5∶1→3∶1]后得到无色泡沫(1.24g，71％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.54；[α]20＝-53.6°(c＝0.3/CH3OH)。
1.34.b)对硝基苯基2，3，4-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.d所述方法进行上步化合物(1.17g，2mmol)的反应。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯3∶1→2∶1]后得到无色晶体(468mg，68％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.12；熔点＝104℃；[α]20＝-68.2°(c＝0.47/CH3OH)。
1.34)对氨基苯基2，3，4-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将化合物1.34.b(343mg，1mmol)还原。得到米色晶体(224mg，71％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.67；熔点＝138℃。
实施例1.35对氨基苯基2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000562
1.35.a)对硝基苯基2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.25.a所述方法将化合物1.30.b(2.63g，3mmol)有选择地进行甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯5∶1→2∶1]后得到棕色油(890mg，32％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0 37；[α]20＝-63.3°(c＝0.9/CH2Cl2)。
1.35)对氨基苯基2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将上步化合物(858mg，2.5mmol)还原。得到米色泡沫(519mg，66％)；TLC[乙酸乙酯]Rf＝0.23；[α]20＝-34.5°(c＝0.86/CH3OH)。
实施例1.36对氨基苯基2，4，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
1.36.a)对硝基苯基2，4，6-三-O-甲基-3-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将化合物1.26.a(1.96g，5mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯10∶1→8∶1]后得到无色晶体(1.47g，68％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.46；熔点＝164℃。
1.36)对氨基苯基2，4，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.26所述方法将上步化合物(1.3g，3mmol)还原。得到无色晶体(642mg，68％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯2∶1]：Rf＝0.12；熔点＝147℃(分解)。
实施例1.37对氨基苯基3，4，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
1.37.a)对硝基苯基2-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.d所述方法进行实施例1.27.a馏分1(1.17g，2mmol)的反应。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯3∶1→2∶1]后得到无色晶体(468mg，68％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.12；熔点＝104℃；[α]20＝-68.2°(c＝0.47/CH3OH)。
1.37.b)对硝基苯基2-O-苄基-3，4，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将上步化合物(391mg，1mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯10∶1→5∶1]后得到浅黄色晶体(303mg，70％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.81；[α]20＝-76.5°(c＝1.1/CH2Cl2)。
1.37)对氨基苯基3，4，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将化合物1.37.b(260mg，0.6mmol)氢化。得到米色晶体(161mg，86％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.20；熔点＝132℃。
实施例1.38对氨基苯基2，3，4，6-四-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000582
1.38.a)对硝基苯基2，3，4，6-四-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(904mg，3mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯8∶1→6∶1→4∶1→2∶1]后得到无色蜡状固体(633mg，59％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.67；[α]20＝-55.7°(c＝0.9/CH2Cl2)。
1.38)对氨基苯基2，3，4，6-四-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法将化合物1.33.a(536mg，1.5mmol)氢化。真空蒸发合并的滤液并通过用乙醚(20mL)煮沸萃取剩余物后得到无色晶体(412mg，84％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.42；熔点＝204℃(分解)。
实施例1.39对氨基苯基α-D-吡喃甘露糖苷
Figure A9619418000591
按照实施例1.23所述方法将对硝基苯基α-D-吡喃甘露糖苷(3.0g，10mmol)氢化。从甲醇/乙醚沉淀后得到无色晶体(2.03g，75％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.69；[α]20＝+102 7°(c＝1.0/H2O)；熔点＝161℃。
实施例1.40对氨基苯基3-O-甲基-(α-D-吡喃甘露糖苷
1.40.a)对硝基苯基6-O-三苯基甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例1.24.a所述方法将对硝基苯基α-D-吡喃甘露糖苷(3.0g，10mmol)三苯甲基化，得到无色晶体(4.35g，80％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.52；[α]20＝+104.0°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝102-104℃。
1.40.b)对硝基苯基3-O-甲基-6-O-三苯基甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例1.26.a所述方法将上步化合物(2.72g，5mmol)与甲基碘(2mL，30mmol)反应。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯2∶1]并重新从乙醇/正己烷沉淀后得到无色晶体(1.83g，66％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.68；[α]20＝+106.4°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝104℃。
1.40)对氨基苯基3-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
将化合物1.40.b(1.4g，2.5mmol)溶解于甲醇(50mL)。加入钯/活性炭(10％Pd，300mg)后在稍微加压的氢气中氢化24小时。用Celite过滤该悬浮液，用甲醇(100mL)充分洗涤滤饼上的物质。真空浓缩滤液后剩余物用水(50mL)萃取。过滤混合物，冻干滤液，得到棕色非晶形固体(709mg，99％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.33；[α]20＝+92.9°(c＝1.1/CH3OH)。
实施例1.41对氨基苯基2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
Figure A9619418000601
1.41.a)对硝基苯基4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃甘露糖苷
将苯甲醛缩二甲醇(3.2mL，21.4mmol)和54％四氟硼酸的乙醚溶液(2.7mL，20mmol)加到对硝基苯基α-D-吡喃甘露糖苷(6.0g，20mmol)的二甲基甲酰胺(120mL)溶液中。将混合物在室温搅拌5小时，然后添加三乙胺(2.8mL，20mmol)使反应中断。真空浓缩混合物，经快速色谱提纯[甲苯→甲苯/乙醇20∶1]后得到无色晶体(6.48g，83％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.82；[α]20＝+170.7°(c＝1.0/CH2Cl2)；熔点＝116℃。
1.41.b)对硝基苯基2，3-二-O-甲基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例1.24.c所述方法将上步化合物(3.9g，10mmol)甲基化。经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯20∶1→7∶1]并重新从乙醇/正己烷沉淀后得到无色泡沫(3.2g，77％)；TLC[乙酸乙酯/石油醚2∶1]：Rf＝0.67；[α]20＝+167.3°(c＝1.05/CH3OH)。
1.41)对氨基苯基2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例1.26所述方法氢化化合物1.41.b(1.25g，3mmol)。经快速色谱提纯[乙酸乙酯/石油醚2∶1→乙酸乙酯，每种情况都含有0.5％三乙胺]后得到红棕色泡沫(480mg，53％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.31；[α]20＝+83.6°(c＝0.76/CH3OH)。
实施例1.42
Figure A9619418000611
1.42.a)对硝基苯基3-O-甲氧羰基甲基-α-D-吡喃半乳糖苷
将二丁基氧化锡(9.3g，37.5mmol)加到对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(7.53g，25mmol)的无水二噁烷(180mL)溶液中，并将混合物加热回流。4小时后在所得溶液中加入溴乙酸甲酯(8.3mL，90mmol)和四丁基碘化铵(9.25g，25mmol)，并在回流状态下继续搅拌3小时。真空蒸馏除去溶剂，剩余物经快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇50∶1→20∶1]。除了得到一些副产物之外还得到化合物1.42.a(4.05g，43％)，为无色晶体；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.54；[α]20＝-62.0°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝176℃。
1.42)对氨基苯基3-O-甲氧羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法氢化化合物1.42.a(3.73g，10mmol)。从乙醇/正己烷重新沉淀后得到无色晶体(2.98g，87％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.39；[α]20＝-36.3°(c＝1.07/CH3OH)；熔点＝155℃。
实施例1.43
1.43.a)对硝基苯基3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖苷，钠盐
将氢氧化钠(400mg，10mmol)的水(5mL)溶液加到化合物1.42.a(3.73g，10mmol)的甲醇(100mL)溶液中，并将混合物在室温搅拌2小时。真空浓缩后将剩余物用真空油泵干燥1小时。在冰浴中冷却后滤出固体，得到无色晶体(3.66g，96％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.62；[α]20＝-50.0°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝180-185℃。
1.43)对氨基苯基3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖苷，钠盐
按照实施例1.24所述方法氢化上步化合物(3.05g，8mmol)。通过用乙醇(50mL)沸腾萃取后得到无色晶体(2.03g，72％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.70；[α]20＝-22.4°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝180-182℃。
实施例1.44对氨基苯基3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000622
1.44.a)对硝基苯基3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
将25％氨水溶液(10mL)加到化合物1.42.a(373mg，1mmol)的甲醇(30mL)溶液中，并将混合物在室温搅拌15分钟。真空浓缩后将剩余物用真空油泵干燥2小时，然后加入乙醇(30mL)。将混合物煮至回流5分钟，在冰浴中冷却后过滤，得到无色晶体(306mg，85％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.14；[α]20＝-41.7°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝229℃(分解)。
1.44)对氨基苯基3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法氢化上步化合物(287mg，0.8mmol)。从甲醇/乙醚重新沉淀后得到无色晶体(207mg，79％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.10；熔点＝205℃(分解)。
实施例1.45对氨基苯基3-O-(N-甲基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000631
1.45.a)对硝基苯基3-O-(N-甲基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖苷
将30％甲胺水溶液(10mL)加到化合物1.42.a(373mg，1mmol)的甲醇(30mL)溶液中，并将混合物在室温搅拌2小时。真空浓缩后将剩余物用真空油泵干燥2小时，然后从乙醇重结晶，得到无色晶体(372mg，100％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.33；[α]20＝-36.7°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝205℃。
1.45)对氨基苯基3-O-(N-甲基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法氢化化合物1.45.a(298mg，0.8mmol)。从甲醇/乙醚重新沉淀后得到无色晶体(180mg，66％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.16；熔点＝239℃。
实施例1.46对氨基苯基3-O-(N-丙基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000641
1.46.a)对硝基苯基3-O-(N-丙基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.45.a所述方法将化合物1.42.a(373mg，1mmol)与正丙胺(823μL，10mmol)反应。真空浓缩后剩余物从乙醇/正己烷重新沉淀，得到无色晶体(340mg，85％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.49；[α]20＝-32.4°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝155℃。
1.46)对氨基苯基3-O-(N-丙基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法氢化化合物1.46.a(320mg，0.8mmol)。从甲醇/乙醚重新沉淀后得到无色晶体(188mg，63％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.31；熔点＝154℃。
实施例1.47对氨基苯基3-O-(N-丁基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖苷
1.47.a)对硝基苯基3-O-(N-丁基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.45.a所述方法将化合物1.42.a(373mg，1mmol)与正丁胺(900μL，10mmol)反应。真空浓缩后剩余物从乙醇/正己烷重新沉淀，得到无色晶体(413mg，100％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.51；[α]20＝-26.8°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝92℃。
1.47)对氨基苯基3-O-(N-丁基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.24所述方法氢化化合物1.47.a(332mg，0.8mmol)。从乙醇/正已烷重新沉淀后得到无色晶体(105mg，34％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.32；熔点＝135℃。
实施例1.48对氨基苯基3-O-甲氧羰基甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
1.48.a)对硝基苯基3-O-甲氧羰基甲基-6-O-三苯基甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例1.42.a所述方法进行化合物1.40.a(13.6g，25mmol)的反应。快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯10∶1]后，除一些副产品外得到无色晶体(2.79g，18％)；TLC[乙酸乙酯/石油醚2∶1]：Rf＝0.50；熔点＝95-97℃。
1.48)对氨基苯基3-O-甲氧羰基甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例1.40所述方法氢化化合物1.48.a(1.23g，2mmol)并处理产物，得到棕色非晶形固体(250mg，36％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.45。
实施例1.49对氨基苯基3-O-羧甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
1.49.a)对硝基苯基3-O-苄氧羰基甲基-6-O-三苯基甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例142.a所述方法将化合物1.40.a(13.6g，25mmol)与溴乙酸苄酯(14.4mL，90mmol)反应。快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯20∶1→10∶1]后，除一些副产品外得到黄色泡沫(5.0g，29％)；TLC[乙酸乙酯/石油醚2∶1]：Rf＝0.66；[α]20＝+74.8°(c＝1.0/CH2Cl2)。
1.49)对氨基苯基3-O-羧甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例1.40所述方法氢化上步化合物(2.08g，3mmol)36小时。浓缩滤液后剩余物从乙醇/正己烷重新沉淀。用乙酸乙酯洗涤，并从乙醇/乙醚重新沉淀，得到无色晶体(495mg，50％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.53；熔点＝205-207℃。
实施例1.50对氨基苯基3-O-氨基甲酰基甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
Figure A9619418000661
1.50.a)对硝基苯基3-O-氨基甲酰基甲基-6-O-三苯基甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例1.44.a所述方法进行化合物1.49.a(1.04g，1.5mmol)的反应。用真空油泵干燥后剩余物经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯2∶3]，得到无色晶体(561mg，62％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.67；[α]20＝+91.3°(c＝1.0/CH2Cl2)；熔点＝125-127℃。
1.50)对氨基苯基3-O-氨基甲酰基甲基-α-D-吡喃甘露糖苷
按照实施例1.40所述方法氢化上步化合物(541mg，0.9mmol)48小时。浓缩滤液后剩余物用甲醇充分洗涤，得到无色晶体(134mg，45％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.21；熔点＝126-128℃。
实施例1.51对氨基苯基3-脱氧基-β-D-吡喃半乳糖苷
Figure A9619418000671
1.51.a)对硝基苯基2，6-二-O-苄基-4-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖苷
将原乙酸三乙酯(3mL，16.3mmol)和甲苯磺酸(20mg)加到化合物1.31.b(2.7g，5.6mmol)的二氯甲烷(20mL)中。在室温30分钟后用二氯甲烷(200mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤。有机相用硫酸镁干燥，过滤后真空浓缩滤液。将所得无色泡沫溶解于80％的乙酸(15mL)。在室温30分钟后将混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，用氯仿(3×75mL)萃取。合并的有机相用水(100mL)洗涤，硫酸镁干燥，过滤后真空浓缩滤液。从乙醇/石油醚重新沉淀后得到无色晶体(2.43g，83％)；TLC[乙酸乙酯/石油醚2∶1]：Rf＝0.64；[α]20＝-62.1°(c＝1.0/CH2Cl2)；熔点＝83℃。
1.51.b)对硝基苯基2，6-二-O-苄基-3-O-三氟甲磺酰基-4-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖苷
在-20℃的氩气中将三氟甲磺酸酐(2mL，11.8mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液滴加到化合物1.51.a(2.3g，4.4mmol)的二氯甲烷(30mL)和吡啶(3mL)的混合溶液中。在-20℃1小时后将混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)中。分离出有机相，用硫酸镁干燥，过滤后真空浓缩滤液。经快速色谱提纯[甲苯→甲苯/乙酸乙酯20∶1]后得到无色晶体(2.39g，83％)；TLC[甲苯/乙酸乙酯5∶1]：Rf＝0.55；[α]20＝-61.4°(c＝1.0/CH2Cl2)；熔点＝105℃。
1.51.c)对硝基苯基2，6-二-O-苄基-3-脱氧基-β-D-吡喃半乳糖苷
将上步化合物(1.31g，2mmol)溶解于甲苯(25mL)，并加入四氢硼化四丁基铵(1.54g，6mmol)。在80℃2小时后混合物用二氯甲烷(200mL)稀释，并用水(50mL)洗涤一次。有机相用硫酸镁干燥，过滤后真空浓缩滤液。经快速色谱提纯[甲苯/乙酸乙酯7∶1]后得到无色晶体(596mg，64％)；TLC[甲苯/乙酸乙酯5∶1]：Rf＝0.10；[α]20＝-81.3°(c＝1.0/CH2Cl2)；熔点＝114℃。
1.51)对氨基苯基3-脱氧基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.40所述方法氢化化合物1.51.c(465mg，1mmol)6小时。浓缩滤液后剩余物从乙醇/石油醚重新沉淀，得到无色晶体(206mg，81％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.22。
实施例1.52对氨基苯基3，4-二脱氧基-β-D-吡喃半乳糖苷
1.52.a)对硝基苯基2，6-二-O-苄基-3，4-二-O-三氟甲磺酰基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.51.b所述方法将化合物1.31.b(2.12g，4.4mmol)与三氟甲磺酸酐(4mL，23.6mmol)反应。经快速色谱提纯[甲苯→甲苯/乙酸乙酯50∶1]后得到黄色油(2.75g，84％)；TLC[甲苯/乙酸乙酯5∶1]：Rf＝0.67；[α]20＝-22.5°(c＝1.0/CH2Cl2)。
1.52.b)对硝基苯基2，6-二-O-苄基-3，4-二脱氧基β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.51.c所述方法将化合物1.52.a(1.49g，2mmol)与四氢硼化四丁基铵(2.31g，9mmol)反应。经快速色谱提纯[甲苯→甲苯/乙酸乙酯50∶1]后得到无色晶体(629mg，70％)；TLC[甲苯/乙酸乙酯5∶1]：Rf＝0.53；[α]20＝-79.1°(c＝1.0/CH2Cl2)；熔点＝89℃。
1.52)对氨基苯基3，4-二脱氧基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.40所述方法氢化化合物1.52.b(450mg，1mmol)5小时。浓缩滤液后剩余物从乙醇/石油醚重新沉淀得到无色晶体(183mg，76％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.47；[α]20＝-115.1°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝187℃。
实施例1.53对氨基苯基6-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖苷
1.53.a)对硝基苯基6-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖苷
在0℃将新制备的吡啶(2mL，25mmol)和乙酰氯(1.85mL，26mmol)的乙腈(20mL)滴加到对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(7.53g，25mmol)的无水乙腈(80mL)溶液中。将混合物在0℃搅拌30分钟后真空浓缩。经快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇50∶1→20∶1]后得到无色晶体(4.02g，47％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.50。
1.53)对氨基苯基6-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.40所述方法氢化化合物1.53.a(1.72g，5mmol)2小时。浓缩滤液后剩余物从甲醇/乙醚重新沉淀得到无色晶体(1.34g，86％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.34；[α]20＝-41.0°(c＝0.56/CH3OH)；熔点＝180℃(分解)。
实施例1.54对氨基苯基3，4-二-O-甲氧羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
1.54.a)酰基化化合物1.24.a
将化合物1.24.a(1.36g，3mmol)溶解于二甲基甲酰胺(25mL)，并分批加入溴乙酸甲酯(1mL，10.6mmol)和80％氢化钠的矿物油(300mg，10mmol)悬浮液。在室温3.5小时后再次加入溴乙酸甲酯(250μL，2.65mmol)和氢化钠的矿物油(75mg，2.5mmol)。2小时后通过滴加甲醇(5mL)使反应结束。真空浓缩混合物，将剩余物溶于二氯甲烷(250mL)，并将溶液与水(100mL)一起剧烈搅拌。用硫酸镁干燥有机相并真空浓缩，剩余物经快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯10∶1→7∶1→45∶1→3∶1]后得到三种产物馏分：
馏分1：对硝基苯基2，3，4-三-O-甲氧羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷；无色泡沫(401mg，21％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.47；[α]20＝-51.9°(c＝0.26/CH3OH)。
馏分2：未确定；无色泡沫(88mg)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.39；[α]20＝-61.5°(c＝0.26/CH3OH)。
馏分3：对硝基苯基3，4-二-O-甲氧羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷；无色泡沫(275mg，16％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.30；[α]20＝-38.6°(c＝0.28/CH3OH)。
1.54)对氨基苯基3，4-二-O-甲氧羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
按照实施例1.40所述方法氢化化合物1.54.a(206mg，0.3mmol)16小时。浓缩滤液后通过用乙醚(20mL)沸腾萃取剩余物，得到灰色晶体(45.6mg，37％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.22；熔点＝155℃(分解)。
实施例1.55对氨基苯基2，3，4-三-O-甲氧羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖苷
如实施例1.40中描述的那样将来自实施例1.54.a的馏分1(380mg，0.5mmol)氢化。浓缩滤液之后，剩余物通过用乙醚(20ml)煮沸萃取得到棕黄色油(46.8mg，19％)；TLC[石油醚/乙酸乙酯1∶1]：Rf＝0.29；熔点＝106℃(分解)。
实施例1.56
对-氨基苯基4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷
Figure A9619418000702
如实施例1.23中描述的那样将对-硝基苯基4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4.63g，10mmol)氢化。得到无色结晶(3.04g，70％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.55；熔点＝235-237℃(分解)。
实施例1.57
对-氨基苯基4-O-(3’-硫酸根合-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷钠盐
Figure A9619418000711
1.57.a)对-硝基苯基4-O-(3’，4’-O-异亚丙基-βD-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷：
将二甲氧基丙烷(400ml)和催化量的(±)-樟脑-10-磺酸(400mg，1.7mmol)加入对-硝基苯基4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(23.2g，50mmol)中。室温下3天之后，通过加入三乙胺(240μ1，1.7mmol)终止反应，真空浓缩混合物，剩余物在油泵真空下干燥2小时。得到的结晶在10∶1的甲醇/水(500ml)中溶解，混合物经回流煮沸6小时。经过真空浓缩和快速色谱[二氯甲烷/甲醇25∶1→10∶1，每次用0.5％的三乙胺]之后，得到无色结晶(15.2g，60％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.49；熔点＝253-255℃(分解)。
1.57.b)对-硝基苯基2，3，6-三-O-苯甲酰基-4-O-(2’，6’-二-O-苯甲酰基-3’，4’-(O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷
在0℃用30分钟将苯甲酰氯(50ml，430mmol)慢慢滴入化合物1.57.a(15.1g，30mmol)在吡啶(300ml)中的溶液中。然后将混合物在室温下再搅拌2小时，随后将该批物料倒入冰水(2000ml)中并且搅拌，15分钟之后，将沉淀的结晶过滤并溶于二氯甲烷(1500ml)中。溶液用水(2×500ml)和1N碳酸氢钠溶液(2×500ml)洗涤，有机相用硫酸镁(50g)干燥并且在真空浓缩，剩余物通过用甲醇重结晶提纯。得到无色结晶(26.7g，87％)；TLC[二氯甲烷/甲醇50∶1]：Rf＝0.49；[α]20＝+23.6°(c＝1.08/CH2Cl2)；熔点＝272-274℃。
1.57.c)对-硝基苯基2，3，6-三-O-苯甲酰基-4-O-(2’，6’-二-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷：
将99％浓度的三氟乙酸(20ml)加入化合物1.57.b(20.5g，20mmol)在二氯甲烷(400ml)中的溶液中，混合物在室温下搅拌20分钟。然后将溶液用1N碳酸氢钠溶液(2×200ml)洗涤，有机相用硫酸镁(10g)干燥并且在真空浓缩，剩余物通过用二氯甲烷/乙醚再沉淀提纯。得到无色结晶(18.0g，91％)；TLC[二氯甲烷/甲醇20∶1]：Rf＝0.18；熔点＝234℃。
1.57.d)对-硝基苯基2，3，6-三-O-苯甲酰基-4-O-(2’，6’-二-O-苯甲酰基-4’-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷：
如实施例1.51.a中描述的那样将化合物1.57.c(5.5g，5.6mmol)反应。经过快速色谱[石油醚/乙酸乙酯3∶1→1∶1]之后，得到无色结晶(4.03g，70％)；TLC[二氯甲烷/甲醇20∶1]Rf＝0.67；熔点＝118℃。
1.57.e)对-硝基苯基2，3，6-三-O-苯甲酰基-4-O-(2’，6’-二-O-苯甲酰基-3’-硫酸根合-4’-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷钠盐：
将三氧化硫-吡啶配合物(4.5g，28mmol)加入化合物1.57.d(3.59g，3.5mmol)在吡啶(200ml)中的溶液中，混合物在60℃搅拌2小时，然后在室温下搅拌16小时。通过滴加甲醇(50ml)终止反应，混合物通过真空浓缩。剩余物通过快速色谱[二氯甲烷/甲醇10∶1]提纯。得到的固体产物溶于1∶1的二氯甲烷/甲醇(200ml)，加入Amberlite IR120(钠盐形式，10g)。该混合物在室温下搅拌1小时，过滤，真空浓缩滤液。得到无色结晶(3.64g，92％)；TLC[二氯甲烷/甲醇2∶1]：Rf＝0.87；熔点＝168℃。
1.57.f)对-硝基苯基4-O-(3’-硫酸根合-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷钠盐：
将化合物1.57.e(3.4g，3mmol)溶于无水甲醇(150ml)中，加入甲醇钠(200mg)，混合物在60℃搅拌7小时。冷却至室温之后，混合物用Lewatit SC108(酸形式)中和，然后过滤。通过滴加1N氢氧化钠溶液使滤液的pH值增加至pH7-8，真空蒸发混合物，剩余物从甲醇/乙醚再沉淀得到浅棕色结晶(1.30g，77％)；TLC[二氯甲烷/甲醇2∶1]：Rf＝0.55；熔点＝230℃(分解)。
1.57)对-氨基苯基4-O-(3’-硫酸根合-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷钠盐：
如实施例1.24中描述的那样将上面的化合物(1.13g，2mmol)还原。剩余物通过用乙醚(50ml)煮沸萃取之后，得到无色结晶(983mg，92％)；TLC[二氯甲烷/甲醇2∶1]：Rf＝0.22；熔点＝176℃(分解)。
实施例1.58
对-氨基苯基4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷
1.58.a)对-硝基苯基4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷的选择性甲基化：
如实施例1.25.a中描述的那样将对-硝基苯基4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(2.3g，5mmol)甲基化。通过快速色谱[二氯甲烷/甲醇20∶1→10∶1→5∶1]得到两个产物：
馏分1：对-硝基苯基2-O-甲基-4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷；无色结晶(264mg，11％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.46；[α]20＝-73.9°(c＝1.0/CH3OH)；熔点＝228℃(分解)。
馏分2：对-硝基苯基4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷；无色结晶(1.0g，42％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.29；[α]20＝-65.3°(＝1.1/CH3OH)；熔点＝220℃(分解)。
1.58)对-氨基苯基4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷：
如实施例1.24中描述的那样将来自实施例1.58.a的馏分2(955mg，2mmol)还原。用乙醚(50ml)洗涤之后，得到无色结晶(894mg，100％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.08；熔点＝129℃(分解)。
实施例1.59
对-氨基苯基2-O-甲基-4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷
Figure A9619418000741
如实施例1.24中描述的那样将来自实施例1.58.a的馏分1(246mg，0.5mmol)还原。用乙醚(20ml)洗涤之后，得到无色结晶(186mg，81％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.13；[α]20＝-3.6°(c＝1.0/CH3OH)熔点＝105℃(分解)。
实施例1.60
对-氨基苯基4-O-(3’，4’-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷
1.60.a)对-硝基苯基2，3，6-三-O-苯甲基-4-O-(2’，6’-二-O-苯甲基-3’，4’-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷：
如实施例1.26.c中描述的那样将化合物1.57.a(5.0g，10mmol)与溴化苄(30ml，250mmol)反应16小时。在真空中浓缩之后，将剩余物溶于乙酸乙酯(300ml)中，溶液用水(200ml)洗涤。有机相用硫酸镁(10g)干燥并且在真空中浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/石油醚5∶1→二氯甲烷]。得到棕色油(5.3g，56％)；TLC[二氯甲烷/甲醇50∶1]：Rf＝0.70；[α]20＝-23.2°(c＝1.08/CH2Cl2)。
1.60.b)对-硝基苯基2，3，6-三-O-苯甲基-4-O-(2’，6’-二-O-苯甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷：
如实施例1.57.c中描述的那样将上面的化合物(4.77g，5mmol)反应。在真空中浓缩和从乙醚/石油醚再沉淀之后，得到无色结晶(3.94g，86％)；TLC[二氯甲烷/甲醇50∶1]：Rf＝0.36；熔点＝116℃。
1.60.c)对-硝基苯基2，3，6-三-O-苯甲基-4-O-(2’，6’-二-O-苯甲基-3’，4’-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃萄萄糖苷：
如实施例1.24.c中描述的那样将化合物1.60.b(1.8g，2mmol)甲基化。从二氯甲烷/石油醚再沉淀得到无色结晶(1.55g，82％)：TLC[二氯甲烷/甲醇50∶1]：Rf＝0.74；熔点＝161-162℃。
1.60)对-氨基苯基4-O-(3’，4’-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷：
将化合物1.60.c(1.41g，1.5mmol)溶于甲醇(50ml)，加入氢氧化钯/活性炭(潮湿，20％的钯，500mg)之后，在氢气气氛下在稍加压下氢化6天。用硅藻土过滤悬浮液，用甲醇(100ml)彻底洗涤在滤器上的物料。真空浓缩滤液，用二氯甲烷洗涤剩余物得到棕色结晶(425mg，61％)；熔点＝124℃(分解)。
实施例2.1
N-丙氨酰-batracyline
Figure A9619418000761
2.1.a)N-[N-(叔丁氧基羰基)-丙氨酰]-batracyline：
将N-(叔丁氧基羰基)-丙氨酸(3.3g，17.5mmol)和2-异丁氧基-1-异丁氧基羰基-1，2-二氢-喹啉(6.8ml，23mmol)溶于100ml二氯甲烷中。混合物在室温下搅拌20分钟之后，加入batracyline(4.1g，16.5mmoL)在无水二甲基甲酰胺(350ml)中的溶液，将该批物料在室温下再搅拌48小时。然后真空浓缩至50ml，浓缩液中加入乙酸乙酯至300ml，迅速在其沸点上加热10分钟。然后将混合物冷却至室温并且过滤，滤器上的物料通过用乙酸乙酯(200ml)再次煮沸萃取。冷却至0℃并且搅拌，过滤得到黄色结晶(6.18g，84％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.57；熔点＝246-247℃(分解)。
2.1)N-丙氨酰-batracyline：
在室温下将化合物2.1.a(10.5g，25mmoL)在无水三氟乙酸(150ml)中的溶液搅拌15分钟。该批物料真空浓缩至30ml之后，倒入饱和碳酸氢钠溶液(1000ml)中并且同时剧烈搅拌。搅拌持续10分钟，过滤混合物，剩余物用水、少量异丙醇和乙醚洗涤。得到黄色结晶产物(7.15g，89％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.06；熔点＝261-262℃(分解)。
实施例2.2
N-[赖氨酰-丙氨酰]-batracyline的二-三氟乙酸盐
2.2.a)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-丙氨酰]-batracyline：
将N，N-二-(叔丁氧基羰基)赖氨酸(2.1g，6mmol)和2-异丁氧基-1-异丁氧基羰基-1，2-二氢-喹啉(2.4ml，8mmol)溶于20ml二氯甲烷中。混合物在室温下搅拌20分钟之后，加入化合物2.1(1.6g，5mmol)在二甲基甲酰胺(40ml)中的溶液，将该批物料在室温下再搅拌16小时。然后真空浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯2∶1→1∶1→乙酸乙酯]。得到黄色结晶(2.89g，89％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.52；熔点＝203-204℃。
2.2)N-[赖氨酰-丙氨酰]-batracyline的二-三氟乙酸盐：
将无水三氟乙酸(10ml)加入上面的化合物(2.6g，4mmol)在二氯甲烷(25ml)中的悬浮液中，得到的溶液在室温下搅拌30分钟。真空浓缩之后，剩余物通过加入乙醚(100ml)结晶。过滤沉淀并且用乙醚充分洗涤。得到黄色结晶(2.68g，99％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.05；熔点＝144-146℃(分解)。
实施例2.3
N-[D-丙氨酰]-batracyline
2.3.a)N-[N-苄氧基羰基-D-丙氨酰]-batracyline：
如实施例2.1.a中描述的那样将N-苄氧基羰基-D-丙氨酸(3.9g，17.5mmo1)反应并且处理产物。得到的黄色结晶(6.4g，80％)通过过滤分离，合并的滤液经真空浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯3∶2(1∶1]。再得到1.35g(17％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.45；熔点＝256℃；[α]20＝+75.1°(c＝1.0/CH2Cl2+0.5％CH3OH)。
2.3)N-[D-丙氨酰]-batracyline：
将化合物2.3.a(11.4g，25mmol)溶于溴化氢在冰醋酸(100ml)中的33％浓度的溶液中。室温下30分钟之后，真空浓缩该批物料至30ml，然后将浓缩液倒入饱和碳酸氢钠溶液(1000ml)中并且剧烈搅拌。搅拌持续10分钟，过滤混合物，剩余物用水、少量异丙醇和乙醚洗涤。得到黄色结晶产物(7.87g，98％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.06；熔点＝267℃(分解)。
实施例2.4
N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline
Figure A9619418000781
2.4.a)N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline：
将Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酸(5.3g，11.3mmol)和2-异丁氧基-1-异丁氧基羰基-1，2-二氢-喹啉(4ml，14mmol)溶于40ml二氯甲烷中。混合物在室温下搅拌20分钟之后，加入化合物2.3(3.2g，10mmol)在二甲基甲酰胺(80ml)中的溶液，该批物料在室温下再搅拌16小时。然后真空浓缩，剩余物悬浮于二氯甲烷中(100ml)。得到的悬浮液中加入乙醚(300ml)。过滤和用乙醚洗涤在滤器中的物料之后，得到黄色结晶(5.65g，65％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.45；熔点＝186℃。
2.4)N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]batracyline：
将上面的化合物(5.6g，7.3mmol)溶于二甲基甲酰胺(50ml)中。加入哌啶(50ml)之后，混合物在室温下搅拌3小时，然后真空浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.1→15∶5∶0.1]。得到黄色结晶(2.5g，62％)；熔点＝217℃(分解)。
实施例2.5
N-[Nα-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline的三氟乙酸盐
Figure A9619418000782
2.5.a)N-[Nα-(芴基-9-甲氧基羰基)-Nε-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline：
如实施例2.4.a中描述的那样将Nα-(芴基-9-甲氧基羰基)- Nε-(叔丁氧基羰基)-赖氨酸(5.3g，11.3mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(7.0g，80％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.51；熔点＝223℃。
2.5)N-[Nα-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline的三氟乙酸盐：
如实施例2.2中描述的那样将化合物2.5.a(6.17g，8mmol)反应。真空浓缩之后，剩余物从二氯甲烷/乙醚再沉淀得到黄色结晶(6.08g，97％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.05；熔点＝224℃(分解)。
实施例2.6
N-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline的三氟乙酸盐
如实施例2.2中描述的那样将化合物2.4.a(6.17g，8mmol)反应。真空浓缩之后，剩余物从二氯甲烷/乙醚再沉淀得到黄色结晶(5.97g，95％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.04；熔点＝188℃(分解)。
实施例2.7
N-[赖氨酰-D-天冬氨酰]-batracyline的双-三氟乙酸盐
Figure A9619418000792
2.7.a)N-[N-(芴基-9-甲氧基羰基)-D-天冬氨酰(β-叔丁基酯)]-batracyline：
如实施例2.1.a中描述的那样将N-(芴基-9-甲氧基羰基)-D-天冬氨酰(β-叔丁基酯)(7.2g，17.5mmol)反应。真空浓缩之后，剩余物溶于二氯甲烷(1000ml)，混合物用1N盐酸(2×200ml)和1N碳酸氢钠溶液(1×200ml)洗涤。硫酸镁(20g)干燥之后，过滤，浓缩至100ml，加入石油醚，以黄色结晶形式得到化合物2.7.a(9.7g，86％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.71；熔点＝195℃。
2.7.b)N-[D-天冬氨酰-(β-叔丁基酯)]-batracyline：
将上面的化合物(6.4g，10mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中。加入吗啉(50m1)之后，室温下搅拌混合物5小时，然后真空浓缩，剩余物用快速色谱提纯[乙酸乙酯/石油醚4∶1→乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙醇10∶1]。得到黄色结晶(3.44g，82％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.21；熔点＝209℃(分解)。
2.7.c)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-天冬氨酰-(β-叔丁基酯)]-batracyline：
如实施例2.2.a中描述的那样使化合物2.7.b(2.1g，5mmol)反应，得到黄色晶体(1.71g，46％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf：0.61；熔点：142℃。
2.7)N-[赖氨酰-D-天冬氨酰]-batracylme的双三氟乙酸盐：
如实施例2.2中描述的那样将化合物2.7.c(1.65g，2.2mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(1.5g，95％)；TLC[甲醇/乙酸10∶1]：Rf＝0.29；熔点＝154-155℃(分解)。
实施例2.8
N-[赖氨酰-D-谷氨酰]-batracyline的双-氢溴酸盐
Figure A9619418000801
2.8.a)N-[N-(叔丁氧基羰基)-D-谷氨酰(β-苄基酯)]-batracyline：
如实施例2.1.a中描述的那样将N-(叔丁氧基羰基)-D-谷氨酰(β-苄基酯)(5.9g，17.5mmol)反应。真空浓缩之后，剩余物用快速色谱提纯[石油醚/乙酸乙酯1∶1]得到黄色结晶(9.45g，86％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.61；[α]20＝+53.1°(c＝1.0/CH2Cl2)；熔点＝159℃。
2.8.b)N-[D-谷氨酰-(β-苄基酯)]-batracyline：
将化合物2.8.a(9.1g，10mmol)溶于甲酸(100ml)中，室温下搅拌溶液6小时。真空浓缩之后，剩余物溶于甲醇(100ml)，通过小心地加入25％浓度的氨水溶液将溶液的pH值升至8。重新在真空浓缩，随后用快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙醇10∶1]得到黄色油状物(4.2g，56％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.06。
2.8.c)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D谷氨酰-(β-苄基酯)]-batracyline：
如实施例2.2.a中描述的那样将上面的化合物(3.75g，8mmol)反应并提纯产物。得到黄色无定形固体(2.26g，35％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.40；[α]20＝+32.1°(c＝1.2/CH2Cl2)。
2.8)N-[赖氨酰-D-谷氨酰]-batracyline二氢溴酸盐：
将化合物2.8.c(2.0g，2.5mmol)溶于在冰醋酸(50ml)中的33％浓度的溴化氢溶液中。室温下1小时之后，将物料真空浓缩，剩余物用乙醚彻底洗涤。得到红黄色结晶产物(1.63g，98％)；熔点＝207-209℃(分解)。
实施例2.9
N-[赖氨酰-甘氨酰]-batracyline的双-三氟乙酸盐
Figure A9619418000811
2.9.a)N-[N-(叔丁氧基羰基)-甘氨酰]-batracyline：
如实施例2.1.a中描述的那样将N-(叔丁氧基羰基)-甘氨酰(3.07g，17.5mmol)反应。室温下3天之后，真空浓缩混合物，剩余物溶于乙醇(200ml)。混合物在回流条件下搅拌30分钟之后过滤，冷却之后以黄色结晶形式得到目标化合物(4.73g，66％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.44；熔点＝279℃(分解)。
2.9.b)N-甘氨酰-batracyline盐酸盐
将上面的化合物(4.1g，10mmol)溶于二氯甲烷(1200ml)中，同时在超声浴中加热。加入在乙醚(100ml)中的氯化氢之后，室温下搅拌混合物30分钟，真空浓缩，剩余物中加入乙醇(200ml)。混合物在回流条件下搅拌10分钟之后过滤，冷却之后以黄色结晶形式得到产物(3.21g，94％)；熔点＝297-299℃(分解)。
2.9.c)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-甘氨酰]-batracyline：
将N，N-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酸(2.1g，6mmol)和2异丁氧基-1-异丁氧基羰基-1，2-二氢-喹啉(2.4ml，8mmol)溶于20ml二氯甲烷中。室温下搅拌混合物20分钟之后，加入化合物2.9.b(1.71g，5mmol)，乙基二异丙基胺(0.86ml，5mmol)和二甲基甲酰胺(40ml)的溶液，室温下再搅拌物料16小时。然后真空浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/石油醚1∶1→乙酸乙酯]。得到黄色结晶(1.69g，53％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.31；熔点＝211℃(分解)。
2.9)N-[赖氨酰-甘氨酰]-batracyline双-三氟乙酸盐：
如实施例2.2中描述的那样将化合物2.9.c(1.4g，2.2mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(1.33g，91％)；熔点＝153℃(分解)。
实施例2.10
N-[赖氨酰-丝氨酰]-batracyline双-三氟乙酸盐
Figure A9619418000821
2.10.a)N-[N-(叔丁氧基羰基)-丝氨酰]-batracyline：
如实施例2.1.a中描述的那样将N-(叔丁氧基羰基)-丝氨酸(3.6g，17.5mmol)反应。48小时之后，真空浓缩混合物至100ml并且向浓缩物中加入2升二氯甲烷。得到的溶液用水(1×500ml)，用0.5N盐酸(2×250ml)和用饱和碳酸氢钠水溶液(1×250ml)洗涤。硫酸镁(50g)干燥，真空蒸出溶剂，剩余物经过快速色谱[石油醚/乙酸乙酯1∶1]以黄色结晶形式得到化合物2.10.a(4.6g，64％)；TLC[乙酸乙酯/乙酸100∶1]：Rf＝0.38；熔点＝219℃(分解)；[α]20＝-61.0°(c＝0.5/CH2Cl2+0.5％CH3OH)。
2.10.b)N-丝氨酰-batracyline盐酸盐
将浓盐酸(10ml)加入上面的化合物(4.6g，10.4mmol)在二氧杂环己烷(70ml)中的悬浮液中，同时搅拌，然后在室温下将混合物剧烈搅拌1小时。然后真空浓缩，剩余物在油泵真空下干燥2小时，加入乙醇(100ml)之后，混合物在回流下煮沸15分钟。冷却并且吸滤得到橙色结晶(1.97g，96％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.05；[α]20＝+51.8°(c＝1.0/H2O)；熔点大于270℃(分解)。
2.10.c)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-丝氨酰]-batracyline：
如实施例2.9.c中描述的那样将化合物2.10.b(1.86g，5mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/石油醚2∶1→乙酸乙酯]之后得到黄色结晶(1.18g，36％)；TLC[乙酸乙酯/乙酸100∶1]：Rf＝0.24；熔点＝188℃(分解)；[α]20＝-13.1°(c＝0.5/CH2Cl2+0.5％CH3OH)。
2.10)N-[赖氨酰-丝氨酰]-batracyline双-三氟乙酸盐：
如实施例2.2中描述的那样将化合物2.10.c(1.0g，1.5mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(1.0g，96％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.10；熔点＝188-190℃(分解)。
实施例2.11
N-[赖氨酰-D-丝氨酰]-batracyline二氢溴酸盐：
2.11.a)N-[N-(芴基-9-甲氧基羰基)-O-(叔丁基)-D-丝氨酰]-batracyline：
如实施例2.1.a中描述的那样将N-(芴基-9-甲氧基羰基)-O-(叔丁基)-D-丝氨酸(6.7g，17.5mmol)反应。经过真空浓缩和快速色谱[石油醚/乙酸乙酯1∶1]以黄色结晶形式得到化合物2.11.a(5.64g，52％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.87；熔点＝225-226℃(分解)。
2.11.b)N-[O-(叔丁基)-D-丝氨酰]-batracyline：
如实施例2.7.b中描述的那样将上面的化合物(2.89g，4.7mmol)反应。经过快速色谱[石油醚/乙酸乙酯3∶2→乙酸乙酯]以黄色结晶得到产物(1.15g，62％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.11；熔点＝197℃。
2.11.c)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-O-(叔丁基)-D-丝氨酰]-batracyline：
如实施例2.2.a中描述的那样将上面的化合物(1.1g，2.8mmol)反应。得到黄色结晶(1.94g，96％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.59；熔点＝208℃(分解)。
2.11.d)N-[赖氨酰-O-(叔丁基)-D-丝氨酰]-batracyline双-三氟乙酸盐：
如实施例2.2中描述的那样将化合物2.11.c(1.08g，1.5mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(1.1g，98％)；TLC[甲醇/乙酸10∶1]：Rf＝0.30；熔点＝128℃。
2.11)N-[赖氨酰-D-丝氨酰]-batracyline二-氢溴酸盐：
如实施例2.8中描述的那样将化合物2.11.d(1.05g，1.4mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(846mg，96％)；熔点＝247-248℃。
实施例2.12
N-[赖氨酰-D-苏氨酰]-batracyline二氢溴酸盐：
Figure A9619418000841
2.12.a)N-[N-(芴基-9-甲氧基羰基)-O-(叔丁基)-D-苏氨酰]-batraeyline：
如实施例2.1.a中描述的那样将N-(芴基-9-甲氧基羰基)-O-(叔丁基)-D-苏氨酸(6.96g，17.5mmol)反应。经过真空浓缩和快速色谱[石油醚/乙酸乙酯1∶1]以黄色结晶形式得到化合物2.12.a(745g，68％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.63；熔点＝225-226℃。
2.12.b)N-[O-(叔丁基)-D-苏氨酰]-batracyline：
如实施例2.7.b中描述的那样将化合物2.12.a(3.8g，6mmol)反应。真空浓缩之后，得到黄色结晶产物(1.9g，78％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.21；熔点＝110-111℃。
2.12.c)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-O-(叔丁基)-D-苏氨酰]-batracyline：
如实施例2.2.a中描述的那样将化合物2.12.b(1.8g，4.5mmol)反应。得到黄色结晶(2.6g，79％)；TLC[乙酸乙酯]：Rf＝0.59；熔点＝112℃，
2.12.d)N-[赖氨酰-O-(叔丁基)-D-苏氨酰]-batracyline双-三氟乙酸盐：
如实施例2.2中描述的那样将上面的化合物(2.5g，3.4mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(2.5g，96％)；TLC[甲醇/乙酸10∶1]：Rf＝0.30；熔点＝142℃(分解)。
2.12)N-[赖氨酰-D-苏氨酰]-batracyline二-氢溴酸盐：
如实施例2.8中描述的那样将化合物2.12.d(2.29g，3mmol)反应并提纯产物。得到红黄色结晶(1.86g，97％)；熔点＝232℃(分解)。
实施例2.13
N-[赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline双-三氟乙酸盐：
2.13.a)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline：
将6g(17.3mmol)Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酸溶于75ml二甲基甲酰胺，在0℃加入3g(26mmol)N-羟基琥珀酰亚胺和4.29g(20.8mmol)N，N’-二环己基碳化二亚胺。3小时之后，滤出生成的脲，滤液中加入5g(15.6mmol)N-[D-丙氨酰]-batracyline(实施例2.3)，混合物在20℃搅拌16小时。滤掉残余的脲并除去。浓缩滤液，剩余物与甲醇搅拌，过滤混合物。再浓缩滤液，剩余物再用甲醇处理。再过滤混合物，合并滤渣。将它们溶于二氯甲烷/甲醇10∶1，产物用乙醚沉淀。得到8.22g(81％)目标产物结晶。
2.13)N-[赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline二-三氟乙酸盐：
类似于实施例2.2从8.2g化合物2.13.a制备。
产量：7.58g(89％)。
实施例2.14
N-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-batracyline三氟乙酸盐
Figure A9619418000861
2.14.a)N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-batracyline：
类似于实施例2.4.a从Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酸和batracyline制备。产率：78％。
2.14)N-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-batracyline三氟乙酸盐：
类似于实施例2.5从化合物2.14.a制备。
产率：90％。
实施例2.15
N-[赖氨酰-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-batracyline双-三氟乙酸盐：
Figure A9619418000871
2.15.a)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-batracyline：
将3240mg(4.54mmol)化合物2.14溶于50ml二甲基甲酰胺，加入2550mg(5.45mmol)Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酸对-硝基苯基酯和938微升乙基二异丙基胺。在20℃搅拌混合物16小时，浓缩，剩余物开始与乙醚搅拌。过滤混合物，滤渣再与甲醇/乙醚1∶1进行搅拌。经过吸滤和干燥之后以这种方式得到目标产物3881mg(92％)。
2.15)N-[赖氨酸-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-batracyline双-三氟乙酸盐：
类似于实施例2.2用无水三氟乙酸/二氯甲烷1∶1脱保护化合物2.15.a。
产率：95％。
[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶6∶0.6 Rf＝0.08]
实施例2.16
N-[赖氨酰-Nβ-(芴基-9-甲氧基羰基)-α，β-二氨基丙酰基]-batracyline双-三氟乙酸盐：
Figure A9619418000881
类似于实施例2.14和2.15经过4步从batracyline和Nα-(叔丁氧基羰基)-Nβ-(芴基-9-甲氧基羰基)-二氨基丙酸制备该肽共轭体。
[TLC：二氯甲烷/甲醇/冰醋酸5∶1∶0.2  Rf＝0.15]
实施例2.17
N-[赖氨酰]-batracyline
Figure A9619418000882
类似于实施例2.4从N-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-batracyline三氟乙酸盐(实施例2.14)裂解Fmoc。产率：65％。
实施例2.18
N-[丝氨酰-D-丙氨酰]-batracyline三氟乙酸盐
Figure A9619418000891
2.18.a)N-[N-(叔丁氧基羰基)-丝氨酰-D-丙氨酰]-batracyline：
类似于实施例2.13.a从N-(叔丁氧基羰基)-丝氨酸和N-[D-丙氨酰]-batracyline(实施例2.3)制备。产率：77％。
2.18)N-[丝氨酰-D-丙氨酰]-batracyline三氟乙酸盐：
类似于实施例2.2从化合物2.18.a制备。产率：98％。
实施例2.19
N-[D-丙氨酰-D-丙氨酰]-batracyline三氟乙酸盐
Figure A9619418000892
类似于实施例2.18经过2步制备。
实施例2.20
N-[谷氨酰-D-丙氨酰]-batracyline
类似于实施例2.18从N-叔丁氧基羰基-谷氨酰-δ-叔丁基酯和N-[D-丙氨酰]-batracyline(实施例2.3)通过2步制备。裂解Boc之后，浓缩混合物，剩余物溶于水，用0.1N氢氧化钠溶液调节pH至7，吸滤甜菜碱。
实施例3.1-3.34
通式
Figure A9619418000901
实施例3.1
N-{Nε-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline
3.1.a)N-{Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracylinc：
将硫光气(34微升，0.44mmol)加入在10ml1∶1的二氧杂环己烷/水中的55mg(0.22mmol)对-氨基苯基β-L-岩藻糖苷中，同时搅拌。10分钟之后，真空浓缩混合物，剩余物在高真空度下干燥1小时。然后将得到的异硫氰酸酯在无水二甲基甲酰胺中在115微升乙基二异丙基胺存在下与109mg(0.21mmol)N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline(实施例2.4)偶合。将粗产物从甲醇/异丙醇沉淀两次之后，得到目标产物132mg(75％)。[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.15]。
3.1)N-{Nε-O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
在0℃将来自实施例3.1.a的化合物127mg(0.15mmol)在10ml二氯甲烷中与6ml无水三氟乙酸搅拌2小时。浓缩混合物，随后将剩余物与5ml二氯甲烷蒸馏3次，产物用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2色谱分离。冷冻干燥之后得到89mg(71％)目标产物。[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.4 Rf＝0.3]。
类似于实施例3.1，从实施例2.4中的部分被保护的肽共轭体或从被类似制备的异构体N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-丙氨酰]-batracyline制备下列的糖共轭体：
实施例3.2
N-{Nε-[O-(2-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例1.1的糖
用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇95∶5进行中间体提纯步骤和使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2进行最后的提纯步骤。产率：55％[TLC∶二氯甲烷/甲醇/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.4]。
实施例3.3
N-{Nε-[O-(2-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}batracyline：
离析物：来自实施例1.1的糖
通过从二氯甲烷/甲醇95∶5沉淀进行中间体提纯步骤和用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2进行最后的提纯步骤。产率：65％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.21]。
实施例3.4
N-{Nε-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：来自实施例1.2的糖
用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇97.5∶2.5进行中间体提纯步骤和用乙醚从甲醇进行最后的沉淀步骤；产率：59％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.19]。
实施例3.5
N-{Nε-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例1.2的糖
通过用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1沉淀进行中间体提纯步骤和用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2：进行最后的提纯步骤。产率：36％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.57]。
实施例3.6
N-{Nε-[O-(3-O-甲基-α-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例1.3的糖
通过用乙醚从甲醇沉淀进行中间体提纯步骤和用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2进行最后的提纯步骤。产率：44％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.15]。
实施例3.7
N-{Nε-[O-(3-脱氧-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐
离析物：来自实施例1.6的糖
用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇95∶5进行中间体提纯步骤和用乙醚从甲醇进行最后的沉淀步骤；产率：35％[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.42]。
实施例3.8
N-{Nε-[O-(3，4-环氧-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：来自实施例1.8的糖
用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇95∶5进行中间体提纯步骤。用乙醚从甲醇进行数次最后的沉淀步骤，随后用乙酸乙酯搅拌。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.49]。
实施例3.9
N-{Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
离析物：来自实施例1.10的糖
通过用甲醇搅拌和用乙醚完全沉淀进行中间体提纯步骤。用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3；然后用15∶6∶0.6的相同的系统进行最后的提纯步骤。浓缩相应的馏分，剩余物溶于水，用0.1N氢氧化钠溶液调节pH至7。吸滤混合物，滤渣溶于1∶3的二甲基甲酰胺/水，加入1当量的0.1N氢氧化钠溶液。浓缩混合物，钠盐溶于水并冷冻干燥。产率：43％。[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.15]。
实施例3.10
N-(Nε-[O-(3-0-氨基甲酰基甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
离析物：来自实施例1.18的糖
通过用甲醇搅拌和用乙醚完成沉淀进行中间体提纯步骤。用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2进行最后的提纯步骤。[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3 Rf＝0.38]。熔点：190℃(分解)。
实施例3.11
N-{Nε-[O-(4-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline乙酸盐
离析物：来自实施例1.4的糖
用快速色谱通过使用二氯甲烷/甲醇95∶5进行中间体提纯步骤和使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2进行最后的提纯步骤。浓缩之后，剩余物中加入1当量冰醋酸和10ml水，冷冻干燥混合物。产率：52％[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.43]。熔点。
FAB-MS：m/z＝760＝M+1。
实施例3.12
N-{Nε-[O-(α-D-葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：对-氨基苯基α-D-葡糖苷
通过用甲醇搅拌和用乙醚完全沉淀进行中间体提纯步骤和最后的提纯步骤。产率：83％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶8∶0.8 Rf＝0.48]。
实施例3.13
N-{Nε-[O-(α-D-葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：对-氨基苯基α-D-葡糖苷
类似于制备实施例3.12产物的异构体。
实施例3.14
N-{Nε-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐
3.14.a)N-{Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
将硫光气(33.5ml，0.44mmol)加入化合物1.25(62.8mg，0.22mmol)在1∶1的二氧杂环己烷/水(10ml)中的溶液中，同时搅拌。10分钟之后，真空浓缩混合物，剩余物在油泵真空下干燥1小时。将得到的异硫氰酸酯溶于无水二甲基甲酰胺(10ml)中，加入化合物2.4(109.7mg，0.2mmol)和乙基二异丙基胺(0.5ml)。混合物在室温下搅拌16小时，然后真空浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇20∶1]。得到黄色结晶(108.3mg，62％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]Rf＝0.42；熔点＝194-195℃(分解)。
3.14)N-{Nε-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
如实施例2.2中描述的那样从化合物3.14.a(105.1mg，0.12mmol)裂解叔丁氧基羰基。真空浓缩之后，从甲醇/乙醚再沉淀，得到黄色结晶(57.4mg，54％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.16；熔点＝188-189℃(分解)。
类似于实施例3.14.a和3.14，从肽共轭体24(在每种情况下109.7mg，0.2mmol)制备下列的糖共轭体：
实施例3.15
N-{Nε-[O-(β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.23(59.7mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇10∶1]得到黄色结晶(79.5mg，46％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.74；熔点＝182℃。
如实施例3.14中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(77.1mg，44％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.27；熔点＝191-192℃(分解)。
实施例3.16
N-{Nε-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.31(79mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇30∶1→20∶1]得到黄色结晶(150.7mg，85％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.35；熔点＝197-199℃(分解)。
如实施例3.14中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(137mg，76％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.13；熔点＝184-186℃(分解)。
实施例3.17
N-{Nε-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.42(75.5mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇30∶1→25∶1]得到黄色结晶(124.1mg，66％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.50；熔点＝165℃。
如实施例3.14中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(107.8mg，57％)；TLC[二氯甲烷/甲醇4∶1]：Rf＝0.53；熔点＝183℃(分解)。
实施例3.18
N-{Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.43(77.3mg，0.22mmol)
通过从乙醇/乙醚再沉淀进行中间体提纯步骤得到钠盐黄色结晶(172mg，91％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.71；熔点＝225-228℃。
如实施例3.14中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(1365mg，73％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.12；熔点＝217-220℃(分解)。
实施例3.19
N-(Nε-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.44(72.2mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇10∶1]得到黄色结晶(137.7mg，75％)；TLC[二氯甲烷/甲醇4∶1]：Rf＝0.41；熔点＝198-201℃(分解)。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(140.2mg，75％)；TLC[二氯甲烷/甲醇4∶1]：Rf＝0.16；熔点＝188-190℃(分解)。
实施例3.20
N-(Nε-[O-(3-O-(N-甲基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.45(75.3mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)7∶1∶0.1]得到黄色结晶(158.4mg，85％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.25；熔点＝161-163℃(分解)。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(132.5mg，70％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.10；熔点＝191-193℃(分解)。
实施例3.21
N-{Nε-[O-(3-O-(N-丙基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.46(81.35mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)8∶1∶0.1]得到黄色结晶(153.1mg，80％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.33；熔点＝1.87℃(分解)。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(154.9mg，79％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.21；熔点＝179℃。
实施例3.22
N-{Nε-[O-(3-O-(N-丁基-氨基甲酰基甲基)-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.47(84.6mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇12∶1]得到黄色结晶(132.7mg，68％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.54；熔点＝180-182℃。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(115.2mg，58％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.30；熔点＝176℃。
实施例3.23
N-{Nε-[O-(3，4-二脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.52(52.6mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇25∶1]得到黄色结晶(127.4mg，77％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.60；熔点＝166-167℃。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(1031.mg，61％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.44；熔点＝173-175℃(分解)。
实施例3.24
N-{Nε-[O-(6-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.53(78.2mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇25∶1]得到黄色结晶(88.3mg，49％)；TLC[二氯甲烷/甲醇4∶1]：Rf＝0.61；熔点＝196-199℃(分解)。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(89.6mg，49％)；TLC[二氯甲烷/甲醇4∶1]：Rf＝0.31；熔点＝186℃(分解)。
实施例3.25
N-{Nε-[O-(α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.39(59.7mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇10∶1]得到黄色结晶(101.7mg，59％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.79；熔点＝180℃(分解)。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(1031.mg，59％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.34；熔点＝177-178℃(分解)。
实施例3.26
N-{Nε-[O-(3-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.40(62.8mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇20∶1]得到黄色结晶(56.6mg，32％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.38；熔点＝191-192℃(分解)。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(46.6mg，26％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.13；熔点＝190-191℃(分解)。
实施例3.27
N-{Nε-[O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.41(66mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇25∶1]得到黄色结晶(77.8mg，44％)；TLC[二氯甲烷/甲醇4∶1]：Rf＝0.65；熔点＝182-183℃(分解)。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(66.1mg，37％)；TLC[二氯甲烷/甲醇4∶1]Rf＝0.40；熔点＝181℃。
实施例3.28
N-{Nε-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.48(75.5mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇18∶1]得到黄色结晶(62.1mg，33％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.66；熔点＝165℃。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(57.6mg，30％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.43；熔点＝183-184℃。
实施例3.29
N-{Nε-[O-(3-O-羧甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.49(77.3mg，0.22mmol)
通过从乙醇/乙醚再沉淀进行中间体提纯步骤得到钠盐黄色结晶(173.4mg，92％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.57；熔点＝201-205℃(分解)。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(171.7mg，92％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.29；熔点＝196-198℃(分解)。
实施例3.30
N-{Nε-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
离析物：糖1.50(72.2mg，0.22mmol)
用快速色谱进行中间体提纯步骤[二氯甲烷/甲醇10∶1]得到黄色结晶(106.6mg，58％)；TLC[二氯甲烷/甲醇4∶1]：Rf＝0.34；熔点＝192-194℃(分解)。
如实施例3.14中那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(107.7mg，58％)；TLC[二氯甲烷/甲醇4∶1]：Rf＝0.13；熔点＝186-187℃(分解)。
实施例3.31
N-{Nε-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline
3.31.a)N-{Nα-(芴基-9-甲氧基羰基)-Nε-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
将硫光气(33.5ml，0.44mmol)加入化合物1.31(79mg，0.22mmol)在1∶1的二氧杂环己烷/水(10ml)中的溶液中。10分钟之后，真空浓缩混合物，剩余物在油泵真空下干燥1小时。将得到的异硫氰酸酯溶于无水二甲基甲酰胺(10ml)中，加入化合物2.5(157mg，0.2mmol)和乙基二异丙基胺(0.5ml)。混合物在室温下搅拌16小时，然后真空浓缩，剩余物溶于1∶1的二氯甲烷/甲醇中。通过加入乙醚使产物沉淀，用少量冰冷的甲醇洗涤。得到黄色结晶(191mg，94％)：TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]Rf＝0.35；熔点＝203℃(分解)。
3.31)N-{Nε-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例2.4中描述的那样从化合物3.31.a(182.2mg，0.18mmol)裂解芴基-9-甲氧基羰基。真空浓缩之后溶于1∶1的甲醇/二氯甲烷，通过加入乙醚使产物沉淀。得到黄色结晶(127.1mg，89％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.46；熔点＝158℃。
类似于实施例3.31.a和3.31，从肽共轭体2.5(在每种情况下157mg，0.2mmol)制备下列的糖共轭体：
实施例3.32
N-{Nε-[O-(3-O-(哌啶基-N)-羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：糖1.42(75.5mg，0.22mmol)
如实施例3.31.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(191.2mg，91％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.28；熔点＝208℃(分解)。
如实施例3.31中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(155.8mg，88％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.47；熔点＝120℃(分解)。
实施例3.33
N-{Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
离析物：糖1.43(77.3mg，0.22mmol)
如实施例3.31.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(192mg，90％)；TLC[乙醇/甲醇1∶1]：Rf＝0.05；熔点＝211-213℃(分解)。
如实施例3.31中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(110.6mg，66％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.33；熔点＝233-235℃(分解)。
实施例3.34
N-(Nε-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：糖1.44(72.2mg，0.22mmol)
如实施例3.31.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(159.2mg，76％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.04；熔点＝177℃(分解)。
如实施例3.31中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(125.1mg，76％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.48；熔点＝106℃(分解)。
实施例4.1-4.12
通式
Figure A9619418001011
实施例4.1
4.1.a)N-{Nα-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
根据实施例3.1a中的方法首先将140mg(0.55mmol)对-氨基苯基β-L-岩藻糖苷转化成异硫氰酸酯，然后将产物与430mg(0.55mmol)N-[Nα-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline三氟乙酸盐(实施例2.5)在375微升乙基二异丙基胺存在下偶合。从甲醇/二氯甲烷沉淀之后，粗产物通过快速色谱(乙腈/水10∶1)提纯。剩余物与乙醚搅拌之后得到目标产物358mg(67％)。[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.48]。
4.1)N-{Nα-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
将来自实施例4.1.a的化合物356mg(0.37mmol)溶于10ml二甲基甲酰胺和5ml哌啶中，溶液在20℃搅拌1小时。浓缩混合物，剩余物用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶6∶0.6色谱分离。以46％的产率得到目标产物。[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.11]。
类似于实施例4.1，从部分被保护的肽共轭体2.5制备下列的糖共轭体：
实施例4.2
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
离析物：来自实施例1.10的糖
用色谱使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3；然后使用15∶4∶0.5的相同系统进行中间体提纯步骤。
在甜菜碱步骤通过与水搅拌提纯最终产物；随后用0.1N氢氧化钠溶液转化成钠盐，从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。产率：65％；熔点＝220℃。
实施例4.3
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例1.2的糖
通过用二氯甲烷和乙醚沉淀进行中间体提纯步骤；通过用乙醚从二甲基甲酰胺沉淀数次提纯最终产物。产率：88％[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.28]。
实施例4.4
N-{Nα-[O-(4-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例1.4的糖
通过用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1数次沉淀进行中间体提纯步骤；用柱色谱提纯最终产物[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶8∶0.8]，用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1沉淀。产率：74％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)10∶10∶1 Rf＝0.19]。
实施例4.5
N-{Nα-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline
4.5.a)N-{Nα-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
将硫光气(33.5ml，0.44mmol)加入化合物1.31(79mg，0.22mmol)在1∶1的二氧杂环己烷/水(10ml)中的溶液中。10分钟之后，真空浓缩混合物，剩余物在油泵真空下干燥1小时。将得到的异硫氰酸酯溶于无水二甲基甲酰胺(10ml)中，加入化合物2.6(157mg，0.2mmol)和乙基二异丙基胺(0.5ml)。混合物在室温下搅拌16小时，然后真空浓缩。剩余物从1∶1的二氯甲烷/甲醇中利用乙醚数次沉淀，最后用少量冰冷的甲醇洗涤得到黄色结晶(198mg，98％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]Rf＝0.23；熔点＝175℃。
4.5)N-{Nα-[O-(3，4-二-O)-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例2.4中描述的那样从化合物4.5.a(172.1mg，0.17mmol)裂解芴基-9-甲氧基羰基。真空浓缩之后溶于1∶1的甲醇/二氯甲烷，通过加入乙醚使产物沉淀。得到黄色结晶(114.5mg，85％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.16；熔点＝206℃(分解)。
类似于实施例4.5.a和4.5，从肽共轭体2.6(在每种情况下157mg，0.2mmol)制备下列的糖共轭体：
实施例4.6
N-{Nα-[O-(β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：糖1.23(59.7mg，0.22mmol)
如实施例4.5.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(185.8mg，94％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.09；熔点＝182℃(分解)。
如实施例4.5中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(134.3mg，88％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.04；熔点＝221℃(分解)。
实施例4.7
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：糖1.25(62.8mg，0.22mmol)
如实施例4.5.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(193.5mg，97％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.27；熔点＝178℃(分解)。
用快速色谱进行最终产物的提纯[二氯甲烷/甲醇2∶1→1∶1]得到黄色结晶(130.5mg，84％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.09；熔点＝206℃(分解)。
实施例4.8
N-{Nα-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：糖1.42(75.5mg，0.22mmol)
如实施例4.5.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(209.8mg，99％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.32；熔点＝235℃(分解)。
如实施例4.5中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(164.3mg，99％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.05；熔点＝217℃(分解)。
实施例4.9
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
离析物：糖1.43(77.3mg，0.22mmol)
如实施例4.5.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(210.3mg，99％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.02；熔点＝185℃。
如实施例4.5中描述的那样进行最终产物的提纯之后，剩余物悬浮于水(10ml)中，在搅拌下向悬浮液中滴加0.05N氢氧化钠溶液直到溶液变清(pH小于10)。将过滤后的溶液冷冻干燥得到黄色无定形固体(150.8mg，90％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.04。
实施例4.10
N-{Nα-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：糖1.44(72.2mg，0.22mmol)
如实施例4.5.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(152.7mg，73％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.11；熔点＝229℃(分解)。
如实施例4.5中描述的那样进行最终产物的提纯之后，剩余物悬浮于水/二氧杂环己烷1∶1(20ml)中。将过滤后的溶液冷冻干燥得到黄色无定形固体(98.4mg，61％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.10；[α]20＝+44.9°(c＝0.2/H2O)。
实施例4.11
N-{Nα-[O-(α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：糖1.39(59.7mg，0.22mmol)
如实施例4.5.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(179.6mg，91％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.07；熔点＝176℃(分解)。
如实施例4.5中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(137.5mg，90％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.09；熔点＝213℃(分解)。
实施例4.12
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：糖1.40(62.8mg，0.22mmol)
如实施例4.5.a中描述的那样进行中间体提纯步骤；得到黄色结晶(94.2mg，48％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.13；熔点＝173℃(分解)。
如实施例4.5中描述的那样进行最终产物的提纯得到黄色结晶(66.6mg，43％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.07；熔点＝215℃(分解)。
实施例5.1-5.23
通式
Figure A9619418001061
实施例5.1
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
将30微升(0.18mmol)硫光气加入在10ml1∶1的二氧杂环己烷/水中的50mg(0.16mmol)对-氨基苯基3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.10)中，同时搅拌。10分钟之后，真空浓缩混合物，剩余物在高真空度下干燥1小时。然后将得到的异硫氰酸酯在无水二甲基甲酰胺中在82微升乙基二异丙基胺存在下与109mg(0.144mmol)来自实施例3.4的共轭体偶合。浓缩混合物，剩余物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5]。将浓缩后得到的物质从水中冷冻干燥。产率：89mg(56％)。[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶6∶0.6 Rf＝0.22]。
类似于实施例5.1制备下列带有混合取代基的共轭体：
实施例5.2
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例1.2的糖，来自实施例3.10的共轭体
粗产物通过用乙醚从甲醇中沉淀提纯。产率：78％[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.45]。
实施例5.3
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[4-羟基苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例4.3的共轭体，4-羟基-苯胺
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2]；产率：60％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.31]。
实施例5.4
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[4-羟基苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例4.2的共轭体，4-羟基-苯胺
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5]。然后将剩余物与甲醇/乙醚搅拌。产率：55％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶6∶0.6 Rf＝0.3]。
实施例5.5
N-{Nα-[O-(4-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[4-羟基苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例4.4的共轭体，4-羟基-苯胺
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2]。然后将剩余物用乙醚从甲醇/二氯甲烷沉淀。产率：49％，熔点＝128℃[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.26]。
实施例5.6
N-{Nα-[4-羟基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(4-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例3.11的共轭体，4-羟基-苯胺
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2]。然后将剩余物从水/二氧杂环己烷冷冻干燥。产率：50％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.29]。
实施例5.7
N-{Nα-[4-羟基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例3.4的共轭体，4-羟基-苯胺
剩余物用乙醚从甲醇沉淀。产率：76％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.26]。
实施例5.8
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[4-羟基乙基氨基-2-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基苯基氨基]三嗪-6基]]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例8.10的共轭体，来自实施例1.2的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2]。产率：9％；FAB-MS：m/z＝1165＝M+1；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3 Rf＝0.27]。
实施例5.9
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[乙酰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：N-[Nε-(乙酰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline，来自实施例1.10的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2；然后用15∶4∶0.5的相同系统]。然后剩余物从水冷冻干燥。产率：46％[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.31]。
实施例5.10
N-{Nα-[O-(4-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[乙酰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
将10微升乙酸酐加入在5ml二甲基甲酰胺中的51mg(0.067mmol)来自实施例4.4的共轭体中，室温下搅拌混合物30分钟。浓缩，剩余物从甲醇中用乙醚沉淀。产率：46mg(86％)[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.6]。
实施例5.11
N-{Nα-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[琥珀酰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
将3mg琥珀酸酐加入在2ml二甲基甲酰胺中的20mg(0.027mmol)来自实施例4.1的共轭体中，室温下搅拌混合物6小时。浓缩，剩余物从甲醇中用乙醚沉淀。剩余物溶于水，加入27微升0.1N氢氧化钠溶液。产率：20mg(86％)[TLC：二氯甲烷/甲醇/冰醋酸80∶20∶2Rf＝0.2]。
实施例5.12
N-{Nα-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.42(37.7mg，0.11mmol)与肽共轭体3.31(79mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后用快速色谱分离[二氯甲烷/甲醇20∶1→10∶1]，得到黄色结晶(52.9mg，45％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.14；熔点＝178℃(分解)。
实施例5.13
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.43(38.6mg，0.11mmol)与肽共轭体3.31(79mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后溶于1∶1的甲醇/二氯甲烷中，通过加入乙醚使产物沉淀。剩余物悬浮于水(10ml)中，其中加入0.05N氢氧化钠溶液并且搅拌，直到溶液变清(pH小于10)。将过滤后的溶液冷冻干燥得到黄色无定形固体(87.9mg，74％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.17；[α]20＝+56.0°(c＝0.1/H2O)。
实施例5.14
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.44(36.1mg，0.11mmol)与肽共轭体3.31(79mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后溶于1∶1的甲醇/二氯甲烷中，通过加入乙醚使产物沉淀。得到黄色结晶(45.9mg，39％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.38；熔点＝219℃(分解)。
实施例5.15
N-{Nα-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-(哌啶基-N)-羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.31(39.5mg，0.11mmol)与肽共轭体3.32(88.7mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后用快速色谱分离[二氯甲烷/甲醇20∶1(10∶1]，得到黄色结晶(38.8mg，32％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.79；熔点＝205℃(分解)。
实施例5.16
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-(哌啶基-N)-羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.43(38.6mg，0.11mmol)与肽共轭体3.32(88.7mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后溶于1∶1的甲醇/二氯甲烷中，通过加入乙醚使产物沉淀。剩余物悬浮于水(10ml)中，其中加入0.05N氢氧化钠溶液并且搅拌，直到溶液变清(pH小于10)。将过滤后的溶液冷冻干燥得到黄色无定形固体(90.3mg，71％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.05；[α]20＝+39.0°(c＝0.1/H2O)。
实施例5.17
N-{Nα-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-(哌啶基-N)-羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.44(36.1mg，0.11mmol)与肽共轭体3.32(88.7mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后溶于1∶1的甲醇/二氯甲烷中，通过加入乙醚使产物沉淀。得到黄色结晶(44.8mg，36％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.06；熔点＝223℃(分解)。
实施例5.18
N-{Nα-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.31(39.5mg，0.11mmol)与肽共轭体3.33(84.2mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后，剩余物中加入1∶1的甲醇/二氯甲烷(20ml)，通过加入乙醚使产物沉淀。剩余物悬浮于水(10ml)中，其中加入0.05N氢氧化钠溶液并且搅拌，直到溶液变清(pH小于10)。将过滤后的溶液冷冻干燥得到黄色无定形固体(80.7mg，68％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.09；[α]20＝+35.0°(c＝0.1/H2O)。
实施例5.19
N-{Nα-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.42(37.7mg，0.11mmol)与肽共轭体3.33(84.2mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后，剩余物中加入1∶1的甲醇/二氯甲烷(20ml)，通过加入乙醚使产物沉淀。剩余物悬浮于水(10ml)中，其中加入0.05N氢氧化钠溶液并且搅拌，直到溶液变清(pH小于10)。将过滤后的溶液冷冻干燥得到黄色无定形固体(87.5mg，71％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.10；[α]20＝+24.6°(c＝0.1/H2O)。
实施例5.20
N-{Nα-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.44(36.1mg，0.11mmol)与肽共轭体3.33(84.2mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后，剩余物中加入1∶1的甲醇/二氯甲烷(20ml)，通过加入乙醚使产物沉淀。剩余物悬浮于水(10ml)中，其中加入0.05N氢氧化钠溶液并且搅拌，直到溶液变清(pH小于10)。将过滤后的溶液冷冻干燥得到黄色无定形固体(78.6mg，65％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.11；[α]20＝-44.0°(c＝0.13/H2O)。
实施例5.21
N-{Nα-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.31(39.5mg，0.11mmol)与肽共轭体3.34(81.9mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后用快速色谱提纯[乙醇→乙醇/甲醇2∶1]，得到黄色结晶(17.4mg，15％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.20；熔点大于290℃(分解)。
实施例5.22
N-{Nα-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.42(37.7mg，0.11mmol)与肽共轭体3.34(81.9mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后溶于甲醇/二氯甲烷1∶1中，通过加入乙醚使产物沉淀。得到黄色结晶(72mg，60％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.21；熔点＝222℃(分解)。
实施例5.23
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
如实施例3.31.a中描述的那样将糖1.43(38.6mg，0.11mmol)与肽共轭体3.34(81.9mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后溶于1∶1的甲醇/二氯甲烷中，通过加入乙醚使产物沉淀。剩余物悬浮于水(10ml)中，其中加入0.05N氧氧化钠溶液并且搅拌，直到溶液变清(pH小于10)。将过滤后的溶液冷冻干燥得到黄色无定形固体(78.2mg，65％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.07；[α]20＝+33.0°(c＝0.1/H2O)。
实施例6.1-6.89
通式
实施例6.1
N-{Nα，Nε-二-[O-(2-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
将硫光气(30微升，0.4mmol)加入化合物1.1(50mg，0.19ml)在1∶1的二氧杂环己烷/水(10ml)中溶液中，同时搅拌。10分钟之后，真空浓缩混合物，剩余物在油泵真空下干燥1小时。将得到的异硫氰酸酯溶于无水二甲基甲酰胺(10ml)中，加入化合物2.13(61mg，0.09mmol)和乙基二异丙基胺(0.5ml)。室温下搅拌混合物16小时，然后真空浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2]。剩余物用乙醚从甲醇中沉淀。得到48mg(50％)黄色结晶目标产物。
类似于实施例6.1从实施例2.13中的肽共轭体或其L-丙氨酰异构体(实施例2.2)制备下列糖共轭体：
实施例6.2
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：100mg(0.38mmol)来自实施例1.2的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶0.5∶0.05；然后用15∶1∶0.1相同的系统]；然后从二氯甲烷/甲醇/乙醚沉淀。产率：59％。熔点＝178℃(分解)[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.51]。
实施例6.3
N-{Nα，Nε-二-[O-(4-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：115mg(0.44mmol)来自实施例1.4的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2]；然后从二氯甲烷/甲醇(1∶1)/乙醚沉淀。产率：58％。熔点＝176℃(分解)[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.52]。
实施例6.4
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-batracyline：
离析物：115mg(0.44mmol)来自实施例1.2的糖
通过从二氯甲烷/甲醇(1∶1)/乙醚沉淀提纯。产率：93％。熔点＝192℃(分解)[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.46]。
实施例6.5
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-α-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：100mg(0.38mmol)来自实施例1.3的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶1∶0.1]；从二氯甲烷/甲醇(1∶1)/乙醚沉淀。熔点＝178℃(分解)；FAB-MS：m/z＝1071＝M+1。
实施例6.6
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-正丙基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-batracyline：
离析物：38mg(0.127mmol)来自实施例1.5的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶1∶0.1]；从二氯甲烷/甲醇(1∶1)/乙醚沉淀。产率：42％，熔点：167-170℃(分解)，[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)Rf＝0.34]。
实施例6.7
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-脱氧-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：40mg(0.167mmol)来自实施例1.6的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2]；从甲醇/乙醚沉淀。产率：81％。[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.46]。
实施例6.8
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-二脱氧-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：41mg(0.183mmol)来自实施例1.7的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇95∶5]；从水/二氧杂环己烷冷冻干燥。产率：60％[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.22]。
实施例6.9
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-羟基乙基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：75mg(0.25mmol)来自实施例1.12的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2；然后用15∶4∶0.5的相同的系统]。从甲醇/乙醚沉淀。产率：66％；[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.28]。
实施例6.10
N-{Nα，Nε-二-[O-(2-羟乙基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：50mg(0.167mmol)来自实施例1.19的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3]；从甲醇/乙醚沉淀；从水/二氧杂环己烷冷冻干燥。产率：72％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.39]。
实施例6.11
N-{Nα，Nε-二-[O-(2-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline二钠盐：
离析物：50mg(0.16mmol)来自实施例1.13的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶8∶0.8；然后用15∶10∶1的相同系统]。用乙醚浸提剩余物，然后从水/二氧杂环己烷冷冻干燥。用2当量0.1N氢氧化钠溶液转化成二钠盐，然后从水冷冻干燥。产率：49％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.5 Rf＝0.38]。MS-FAB：FAB-；m/z＝1157＝M-2Na++H+。
实施例6.12
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline二钠盐：
离析物：200mg(0.64mmol)来自实施例1.10的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5；然后用15∶8∶0.8；最后用15∶10∶1的相同系统]。用乙醚浸提剩余物，然后从水/二氧杂环己烷1∶1冷冻干燥。用2当量0.1N氢氧化钠溶液转化成二钠盐，然后从水冷冻干燥。产率：59％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)Rf＝0.1]。
实施例6.13
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：60mg(0.19mmol)来自实施例1.18的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3]。剩余物用乙醚从二氯甲烷/甲醇(1∶1)沉淀，吸滤，然后从水/二氧杂环己烷1∶1冷冻干燥。产率：36％[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.46]。熔点：190℃(分解)。
实施例6.14
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：100mg(0.39mmol)对-氨基苯基β-L-岩藻糖苷
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2；然后用15∶4∶0.5的相同系统]。剩余物用乙醚从二甲基甲酰胺沉淀，吸滤。产率：48％。熔点：195-198℃。
实施例6.15
N-{Nα，Nε-二-[O-(α-L-鼠李糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：158mg(0.61mmol)来自实施例1.21的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3；然后用15∶4∶0.5的相同系统]。剩余物从水/二氧杂环己烷冷冻干燥。产率：87％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.25]。
实施例6.16
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-α-L-鼠李糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline二钠盐：
离析物：200mg(0.64mmol)来自实施例1.22的糖
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5；然后用15∶8∶0.8；最后用15∶10∶1的相同系统]。用乙醚浸提剩余物，然后从水/二氧杂环己烷1∶1冷冻干燥。
类似于实施例6.1从batracyline的各种肽共轭体制备下列在氨基端含有完全被脱保护的赖氨酸结构单元的糖共轭体：
实施例6.17
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}-batracyline二钠盐：
离析物：32mg(0.1mmol)来自实施例1.10的糖
        32mg(0.045mmol)N-[赖氨酰-甘氨酰]-batracyline
双-三氟乙酸盐(实施例2.9)
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶8∶0.8；然后用15∶15∶1.5的相同系统]。用乙醚从二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)沉淀，然后从水/二氧杂环己烷冷冻干燥。用2当量0.1N氢氧化钠溶液转化成二钠盐，然后从水冷冻干燥。产率：25％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶8∶0.8 Rf＝0.19]。FAB-MS：m/z＝1189＝M+1。
实施例6.18
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}-batracyline：
离析物：60mg(0.22mmol)来自实施例1.2的糖
        66mg(0.1mmol)N-[赖氨酰-甘氨酰]-batracyline双
-三氟乙酸盐(实施例2.9)
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/冰醋酸90∶10∶1]。用乙醚从甲醇沉淀，然后从水/二氧杂环己烷冷冻干燥。产率：68％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/冰醋酸80∶20∶2 Rf＝0.62]。
实施例6.19
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-赖氨酰}-batracyline：
6.19.a)N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰}-batracyline：
离析物：297mg(1mmol)对-氨基苯基β-L-岩藻糖苷
        66mg(0.1mmol)N-[赖氨酰-Nε-(芴基-9-甲氧
基羰基)-赖氨酰]-batracyline双-三氟乙酸盐(实施例2.15)
        206微升乙基二异丙基胺
用乙醚从甲醇/二氯甲烷(1∶1)沉淀两次提纯，用乙醚洗涤滤渣。产率：89％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.31]。
6.19)N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-赖氨酰}-batracyline：
将515mg(0.39mmol)来自实施例6.19.a的化合物溶于5ml二甲基甲酰胺和5ml哌啶中，溶液在20℃搅拌30分钟。浓缩物料，剩余物用乙醚浸提。吸滤混合物，滤渣溶于二甲基甲酰胺中。用乙醚沉淀之后漂洗滤渣，剩下335mg(78％)目标产物结晶。FAB-MS：m/z＝1100＝M+1。
实施例6.20
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-二氨基丙酰}-batracyline：
6.20.a)N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-Nβ-(芴基-9-甲氧基羰基)-二氨基丙酰}-batracyline：
类似于实施例6.19合成：
离析物：60mg(0.22mmol)来自实施例1.2的糖
        100mg(0.11mmol)N-[赖氨酰-Nβ-(芴基-9-甲
氧基羰基)-二氨基丙酰]-batracyline双-三氟乙酸盐(实施
例2.16)
        76微升乙基二异丙基胺
用乙醚从甲醇沉淀两次提纯，用乙醚洗涤滤渣。产率：105mg(73％)。
6.20)N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-二氨基丙酰}-batracyline：
类似于实施例6.19将103mg(0.079mmol)来自实施例6.20.a的化合物用哌啶脱保护。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3；然后用15∶6∶0.6的相同系统]。从水/二氧杂环己烷冷冻干燥。产率：21％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.32]。
实施例6.21
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-二氨基丙酰}-batracyline二钠盐：
类似于实施例6.20经过2步由来自实施例1.10的糖和来自实施例2.16的肽共轭体制备该化合物。可以省略色谱提纯，因为副产物可以通过用甲醇和乙醚浸提除去。然后用2当量0.1N氢氧化钠溶液将产物转化成二钠盐。2步产率：66％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸10∶3∶1.5 Rf＝0.3]。
实施例6.22
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline：
离析物：60mg(0.22mmol)来自实施例1.2的糖
        76mg(0.11mmol)N-[赖氨酰-丝氨酰]-batracyline双
-三氟乙酸盐(实施例2.10)
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/甲醇(17％)15∶2∶0.2]。从二氯甲烷/甲醇/乙醚沉淀。产率：26％；[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.39]。
实施例6.23
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丝氨酰}-batracyline：
离析物：60mg(0.22mmol)来自实施例1.2的糖
        69mg(0.11mmol)N-[赖氨酰-D-丝氨酰]-
batracyline二氯溴酸盐(实施例2.11)
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/甲醇(17％)15∶2∶0.2]；从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。产率：29％。[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.36]
实施例6.24
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-batracyline：
离析物：80mg(0.3mmol)来自实施例1.2的糖
        53mg(0.14mmol)N-[赖氨酰]-batracyline(实施例
2.17)
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/甲醇(17％)15∶1∶0.1；然后用15∶2∶0.2的相同系统]。从甲醇/乙醚沉淀。产率：26％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.22]。
实施例6.25
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-batracyline：
离析物：60mg(0.19mmol)来自实施例1.10的糖
        24mg(0.063mmol)N-[赖氨酰]-batracyline(实施例
2.17)
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/甲醇(17％)15∶2∶0.2；然后用15∶4∶0.5的相同系统]；从水冷冻干燥。产率：26％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.25]。
实施例6.26
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-batracyline：
将硫光气(33.5微升，0.44mmol)加入化合物1.31(79mg，0.22mmol)在1∶1的二氧杂环己烷/水(10ml)中溶液中，同时搅拌。10分钟之后，真空浓缩混合物，剩余物在油泵真空下干燥1小时。将得到的异硫氰酸酯溶于无水二甲基甲酰胺(10ml)中，加入化合物2.17(37.7mg，0.1mmol)和乙基二异丙基胺(0.5ml)。室温下搅拌混合物16小时，然后真空浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇30∶1→20∶1→10∶1]。得到黄色结晶(57.7mg，53％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.72；熔点＝125℃(分解)。
实施例6.27
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.42(75.5mg，0.22mmol)与肽共轭体2.17(37.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇30∶1(20∶1(10∶1]得到黄色结晶(51.1mg，44％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.80；熔点＝176℃(分解)。
实施例6.28
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-batracyline二钠盐：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.43(77.3mg，0.22mmol)与肽共轭体2.17(37.7mg，0.1mmol)反应。用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1再沉淀提纯得到黄色结晶(53mg，47％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.75；熔点大于260℃(分解)。
实施例6.29
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.44(72.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.17(37.7mg，0.1mmol)反应。用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶l再沉淀提纯得到黄色结晶(55.6mg，48％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.09；熔点＝206℃(分解)。
实施例6.30
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.25(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体2.10(69.3mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后，剩余物溶于二氯甲烷/甲醇1∶1(10ml)，加入乙醚(15ml)使产物沉淀，用少量冰冷的甲醇洗涤。得到黄色结晶(46mg，41％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇]：Rf＝0.12；熔点＝190-191℃。
实施例6.31
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将对-氨基苯基β-L-吡喃岩藻糖苷(56.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.10(69.3mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯→乙醇]，用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1再沉淀得到黄色结晶(73.8mg，70％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.15；熔点＝123℃。
实施例6.32
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.31(79mg，0.22mmol)与肽共轭体2.10(69.3mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙醇7∶1]得到黄色结晶(43.8mg，38％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.31；熔点＝176℃。
实施例6.33
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.42(75.5mg，0.22mmol)与肽共轭体2.10(69.3mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙醇3∶1]得到黄色结晶(46.2mg，37％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.12；熔点＝161℃。
实施例6.34
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline二钠盐：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.43(77.3mg，0.22mmol)与肽共轭体2.10(69.3mg，0.1mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(39.2mg，31％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.77；熔点＝213-215℃{分解)。
实施例6.35
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.44(72.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.10(69.3mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙醇2∶1]得到黄色结晶(66.1mg，53％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.14；熔点＝192℃(分解)。
实施例6.36
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.40(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体2.10(69.3mg，0.1mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(48.9mg，44％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.10；熔点＝204℃。
实施例6.37
N-{Nα，Nε-二-[O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.41(66mg，0.22mmol)与肽共轭体2.10(69.3mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙醇7∶1]得到黄色结晶(52mg，45％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.28；熔点＝164-165℃。
实施例6.38
N-{Nα，Nε-二-[O-(4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.56(95.4mg，0.22mmol)与肽共轭体2.10(69.3mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后，产物用热甲醇(50ml)彻底洗涤。得到黄色结晶(6.16mg，44％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.32；熔点＝222℃(分解)。
实施例6.39
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将对-氨基苯基β-L-吡喃岩藻糖苷(56.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.11(62.6mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯→乙醇]，用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1再沉淀得到黄色结晶(50.9mg，48％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.14；熔点＝133℃。
实施例6.40
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-二-O-甲基-β-L-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.31(79mg，0.22mmol)与肽共轭体2.11(62.6mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙醇5∶1]得到黄色结晶(53.8mg，47％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.38；熔点＝146℃。
实施例6.41
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.42(75.5mg，0.22mmol)与肽共轭体2.11(62.6mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙醇3∶1]得到黄色结晶(52.4mg，42％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.12；熔点＝168℃。
实施例6.42
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丝氨酰}-batracyline二钠盐：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.43(77.3mg，0.22mmol)与肽共轭体2.11(62.6mg，0.1mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(69.2mg，55％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.71；熔点＝214-216℃(分解)。
实施例6.43
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丝氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.44(72.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.11(62.6mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙醇2∶1]得到黄色结晶(46.4mg，38％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.10；熔点＝173℃。
实施例6.44
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-天冬氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将对-氨基苯基β-L-吡喃岩藻糖苷(56.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.11(72.1mg，0.1mmol)反应。用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1再沉淀提纯得到黄色结晶(69.4mg，64％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.14；熔点＝185-187℃。
实施例6.45
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-天冬氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.31(79mg，0.22mmol)与肽共轭体2.7(72.1mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙酸200∶1→乙酸乙酯/乙醇3∶1]得到黄色结晶(99.5mg，85％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.59；熔点＝149℃(分解)。
实施例6.46
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-天冬氨酰}-batracyline二钠盐：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.43(77.3mg，0.22mmol)与肽共轭体2.7(72.1mg，0.1mmol)反应。用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1再沉淀提纯得到黄色结晶(93.4mg，73％)；熔点＝220℃(分解)。
实施例6.47
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-天冬氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.44(72.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.7(72.1mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙醇/乙酸400∶100∶2]得到黄色结晶(69.7mg，57％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.11；熔点＝111℃。
实施例6.48
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-天冬氨酰}-batracyline钠盐：
将化合物6.44(21.7mg，20mmol)悬浮于水(10ml)中，其中滴加0.05N氢氧化钠溶液并且搅拌，直到溶液变清(pH小于10)。冷冻干燥过滤的溶液得到黄色无定形固体(20.6mg，93％)。
实施例6.49
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-天冬氨酰}-batracyline钠盐：
如实施例6.48中描述的那样将化合物6.45(23.5mg，20μmo1)反应并且处理产物。得到黄色无定形固体(23.9mg，100％)。
实施例6.50
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-天冬氨酰}-batracyline三钠盐：
将化合物6.46(25.6mg，20mmol)溶于水(10ml)中，其中滴加0.05N氢氧化钠溶液并且搅拌，直到溶液pH至8。冷冻干燥过滤的溶液得到黄色无定形固体(24mg，92％)。
实施例6.51
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-天冬氨酰}-batracyline钠盐：
如实施例6.48中描述的那样将化合物6.47(24.7mg，20μmol)反应并且处理产物。得到黄色无定形固体(23.0mg，92％)。
实施例6.52
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-谷氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将对-氨基苯基β-L-吡喃岩藻糖苷(56.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.8(66.8mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙酸200∶1→乙酸乙酯/乙醇/乙酸10∶1∶0.1]得到黄色结晶(39.5mg，36％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.09；熔点＝138-139℃(分解)。
实施例6.53
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-谷氨酰}-batracyline二钠盐：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.43(77.3mg，0.22mmol)与肽共轭体2.8(66.8mg，0.1mmol)反应并且提纯产物。得到黄色结晶(97.4mg，75％)；熔点＝180℃(分解)。
实施例6.54
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-谷氨酰}-batracyline三钠盐：
如实施例6.50中描述的那样将化合物6.53(25.6mg，20μmol)反应并且处理产物。得到黄色无定形固体(24.3mg，92％)；[α]20＝+20.0°(c＝0.26/H2O)。
实施例6.55
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将对-氨基苯基β-L-吡喃岩藻糖苷与肽共轭体2.9(66.2mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯→乙醇]得到黄色结晶(62.2mg，60％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.12；熔点＝176℃。
实施例6.56
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.25(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体2.9(66.2mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙醇10∶1→2∶1]得到黄色结晶(56.2mg，52％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.22；熔点＝197℃。
实施例6.57
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.31(79mg，0.22mmol)与肽共轭体2.9(66.2mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙醇10∶1→3∶1]得到黄色结晶(26.2mg，23％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.39；熔点＝209℃。
实施例6.58
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.42(75.5mg，0.22mmol)与肽共轭体2.9(66.2mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙醇→10∶1]得到黄色结晶(22mg，18％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.06；熔点＝194-195℃(分解)。
实施例6.59
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}-batracyline二钠盐：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.43(77.3mg，0.22mmol)与肽共轭体2.9(66.2mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后，用甲醇、二氯甲烷和乙醚彻底洗涤产物。得到黄色结晶(86.8mg，71％)；熔点＝230-232℃(分解)。
实施例6.60
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.44(72 2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.9(66.2mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后，用甲醇、二氯甲烷和乙醚彻底洗涤产物，得到黄色结晶(40.9mg，35％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.05；熔点＝214-216℃(分解)。
实施例6.61
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.40(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体2.9(66.2mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙醇10∶1→2∶1]得到黄色结晶(72.2mg，66％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.18；熔点＝175℃。
实施例6.62
N-{Nα，Nε-二-[O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-甘氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.41(66mg，0.22mmol)与肽共轭体2.9(66.2mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/乙醇10∶1→3∶1]得到黄色结晶(66.6mg，60％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.41；熔点＝173℃。
实施例6.63
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-苏氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将对-氨基苯基β-L-吡喃岩藻糖苷(56.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.12(64mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯→乙醇]和用乙醚使产物从甲醇/二氯甲烷1∶1中再沉淀得到黄色结晶(30.5mg，28％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.10；熔点＝172℃。
实施例6.64
N-{Nα，Nε-二-[O-(β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-笨基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.23(59.7mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇10∶1→1∶1]得到黄色结晶(68.3mg，64％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.49；熔点＝222-224℃(分解)。
实施例6.65
N-{Nα，Nε-二-[O-(2-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.24(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1再沉淀提纯得到黄色结晶(69.6mg，63％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.24；熔点＝208℃(分解)。
实施例6.66
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.25(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇15∶1→10∶1→5∶1]得到黄色结晶(94.3mg，85％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.16；熔点＝212℃(分解)。
实施例6.67
N-{Nα，Nε-二-[O-(4-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.26(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇15∶1→10∶1→5∶1]得到黄色结晶(52.6mg，48％)；TLC[二氯甲烷/甲醇]：Rf＝0.88；熔点＝192℃(分解)。
实施例6.68
N-{Nα，Nε-二-[O-(6-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.27(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1中再沉淀提纯得到黄色结晶(96.7mg，88％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.04；熔点＝210℃(分解)。
实施例6.69
N-{Nα，Nε-二-[O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.28(65.9mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇20∶1]得到黄色结晶(57.4mg，51％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.40；熔点＝148℃(分解)。
实施例6.70
N-{Nα，Nε-二-[O-(2，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.29(65.9mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇20∶1→15∶1→10∶1]得到黄色结晶(74.2mg，65％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝O.40；熔点＝140℃(分解)。
实施例6.71
N-{Nα，Nε-二-[O-(2，6-二-O-甲基-β-D吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.30(65.9mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇20∶1→15∶1]得到黄色结晶(43.9mg，40％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.43；熔点＝229℃(分解)。
实施例6.72
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.31(79mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇10∶1]得到黄色结晶(66.2mg，59％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.39；熔点＝184℃。
实施例6.73
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，6-二-O-甲基-β-D吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.32(65.9mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇15∶1→10∶1]得到黄色结晶(57.1mg，50％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.42；熔点＝190℃(分解)。
实施例6.74
N-{Nα，Nε-二-[O-(4，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.33(79mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇20∶1→15∶1→10∶1]得到黄色结晶(47.0mg，42％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.39；熔点＝169℃。
实施例6.75
N-{Nα，Nε-二-[O-(2，3，4-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.34(69mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇30∶1]得到黄色结晶(83.8mg，72％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.36；熔点＝165℃(分解)。
实施例6.76
N-{Nα，Nε-二-[O-(2，3，6-三-O-甲基-β}-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.35(69mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1中再沉淀提纯得到黄色结晶(105mg，91％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.48；熔点＝194℃(分解)。
实施例6.77
N-{Nα，Nε-二-[O-(2，4，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.36(69mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇30∶1→10∶1]得到黄色结晶(67mg，58％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.54；熔点＝228℃(分解)。
实施例6.78
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4，6-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.37(69mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1中再沉淀提纯得到黄色结晶(109.3mg，94％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.52；熔点＝180℃(分解)。
实施例6.79
N-{Nα，Nε-二-[O-(2，3，4，6-四-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.38(69mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1中再沉淀提纯得到黄色结晶(99.2mg，84％)；TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.73；熔点＝188℃(分解)。
实施例6.80
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.42(75.5mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1中再沉淀提纯得到黄色结晶(22mg，18％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]Rf＝0.33；熔点＝194-195℃(分解)。
实施例6.81
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline二钠盐：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.43(77.3mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应并提纯产物。得到黄色结晶(99.7mg，81％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.80；熔点＝230℃(分解)。
实施例6.82
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.44(72.2mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇7∶1]得到黄色结晶(29.4mg，25％)；TLC[二氯甲烷/甲醇3∶1]：Rf＝0.23；熔点＝201-202℃。
实施例6.83
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-O)-二脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.52(52.6mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇17∶1]得到黄色结晶(38.8mg，37％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.40；熔点＝175℃。
实施例6.84
N-{Nα，Nε-二-[O-(α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.39(59.7mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇10∶1→1∶1]得到黄色结晶(52mg，48％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.19；熔点＝196℃。
实施例6.85
N-{Nα，Nε-二-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.31(79mg，0.22mmol)与肽共轭体2.2(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇10∶1]得到黄色结晶(77.6mg，69％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)15∶3∶0.2]：Rf＝0.33；熔点＝186℃。
实施例6.86
N-{Nα，Nε-二-[O-(4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.56(95.4mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。真空浓缩之后，剩余物用热甲醇(50ml)彻底洗涤。得到黄色结晶(102.8mg，73％)；TLC[甲醇]：Rf＝0.27；熔点＝225-226℃(分解)。
实施例6.87
N-{Nα，Nε-二-[O-(4-O-(3’-硫酸根合-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline二钠盐：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.57(117.8mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1中再沉淀提纯得到黄色结晶(152.8mg，95％)；熔点＝232℃(分解)。
实施例6.88
N-{Nα，Nε-二-[O-(4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.58(98.4mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1中再沉淀提纯得到黄色结晶(118.2mg，83％)；TLC[二氯甲烷/甲醇1∶1]：Rf＝0.58；熔点＝221℃(分解)。
实施例6.89
N-{Nα，Nε-二-[O-(2-O-甲基-4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.59(101.5mg，0.22mmol)与肽共轭体2.13(67.7mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇15∶1→10∶1→5∶1]得到黄色结晶(101.03mg，70％)；TLC[二氯甲烷/甲醇2∶1]：Rf＝0.58；熔点＝233℃(分解)。
实施例7.1-7.13
通式
类似于实施例4.1.a)从batracyline其他氨基酸或肽共轭体或从batracyline开始制备下列的肽共轭体：
实施例7.1
N-{N-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：来自实施例1.2的糖，来自实施例2.3的氨基酸共轭体
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶1∶0.1]。从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。产率：42％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2Rf＝0.31]。
实施例7.2
N-{N-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
    离析物：来自实施例1.10的糖，来自实施例2.3的氨基酸
共轭体
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3]。从二氧杂环己烷/水冷冻干燥，然后用0.1N氢氧化钠溶液转化成钠盐。产率：43％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.14]。
实施例7.3
N-{N-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-丝氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：对-氨基苯基β-L-岩藻糖苷，来自实施例2.18
的氨基酸共轭体
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3]。从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。产率：93％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3 Rf＝0.28]。FAB-MS：m/z＝705＝M+1。
实施例7.4
N-{N-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：对-氨基苯基β-L-岩藻糖苷，来自实施例2.19
的氨基酸共轭体
通过用甲醇浸提和用乙醚从甲醇/二氯甲烷沉淀提纯。产率：65％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.78]。
实施例7.5
N-{N-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-谷氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
离析物：对-氨基苯基β-L-岩藻糖苷，来自实施例2.20
的氨基酸共轭体
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.4]。从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。产率：92％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶8∶0.8 Rf＝0.55]。
实施例7.6
N-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-batracyline：
将250mg(1mmol)batracyline溶于50ml二氧杂环己烷中，加入184微升硫光气之后，在20℃搅拌混合物2小时。浓缩，剩余物用乙醚浸提并过滤。滤渣在高真空下干燥16小时，然后溶于30ml二甲基甲酰胺。加入来自实施例1.10的糖312mg(1mmol)和500微升乙基二异丙基胺，混合物用超声处理4小时。然后浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2；然后用15∶6∶0.6的相同系统]。浓缩相应的馏分，从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。产率：363mg(60％)；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶6∶0.6 Rf＝0.38]。
实施例7.7
N-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-batracyline：
类似于实施例7.6从batracyline和来自实施例1.2的糖开始制备。
通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶1∶0.1]，产率：58％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.39]。FAB-MS：m/z＝561＝M+1。
实施例7.8
N-{N-[O-(3，4-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.31(37.5mg，0.11mmol)与肽共轭体2.3(32mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇30∶1]得到黄色结晶(49.3mg，75％)；TLC[乙酸乙酯/乙醇2∶1]：Rf＝0.81；熔点＝185℃(分解)。
实施例7.9
N-{N-[O-(2，3，4-三-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.34(34.5mg，0.11mmol)与肽共轭体2.3(32mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇40∶1→15∶1]得到黄色结晶(54.9mg，81％)；TLC[二氯甲烷甲醇20∶1]Rf＝0.15；熔点＝190℃(分解)。
实施例7.10
N-{N-[O-(3-O-甲氧基羰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.42(37.8mg，0.11mmol)与肽共轭体2.3(32mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇20∶1→10∶1]得到黄色结晶(44.3mg，63％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.85；熔点＝195℃(分解)。
实施例7.11
N-{N-[O-(3-O-羧甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-batracyline钠盐：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.43(38.6mg，0.11mmol)与肽共轭体2.3(32mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1中再沉淀得到黄色结晶(63.8mg，89％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.15；熔点＝217℃(分解)。
实施例7.12
N-{N-[O-(3-O-氨基甲酰基甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将化合物1.44(37.8mg，0.11mmol)与肽共轭体2.3(32mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇20∶1→10∶1→5∶1]得到黄色结晶(20mg，29％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.15；熔点＝184℃(分解)。
实施例7.13
N-{N-[O-(β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-batracyline：
如实施例6.26中描述的那样将对-氨基苯基β-L-吡喃岩藻糖苷(28.1mg，0.11mmol)与肽共轭体2.3(32mg，0.1mmol)反应。通过快速色谱提纯[乙酸乙酯/石油醚2∶1→5∶1]得到黄色结晶(49.8mg，81％)；TLC[乙醇]：Rf＝0.50；熔点＝173℃。
实施例8.1-8.12
通式
实施例8.1
N-{Nε-[2-氯-4-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐
8.1.a)N-{Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-[2-氯-4-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
将265mg(0.98mmol)对-氨基苯基3-O-甲基β-L-岩藻糖苷(实施例1.2)和181mg(0.98mmol)氰尿酰氯溶于50ml1∶1的二氧杂环已烷/水中的中，混合物冷却至-5℃，加入83mg碳酸氢钠之后，在该温度下搅拌15分钟。加入溶于14ml二甲基甲酰胺中的538mg(0.98mmol)N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-batracyline(实施例2.4)，然后再加入83mg碳酸氢钠，让混合物升至室温。在20℃搅拌16小时之后，浓缩混合物，剩余物用水处理。吸滤混合物，在高真空下干燥滤渣得到目标产物890mg(96％)。[TLC：二氯甲烷/甲醇10∶1 Rf＝0.26]。
8.1)N-{Nε-[2-氯-4-[O-(3-O-甲基-β-L岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
在0℃将来自实施例8.1.a的化合物100mg(0.11mmol)在5ml无水三氟乙酸和5ml二氯甲烷的混合物中搅拌30分钟。浓缩混合物，剩余物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶1.5∶0.15]。随后从甲醇/乙醚沉淀得到41mg(95％)目标产物。[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.26]。FAB-MS：m/z＝829＝M+1。
实施例8.2
N-{Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐
8.1.a)N-{Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline：
将100mg(0.11mmol)实施例8.1.a的化合物溶于3ml二氧杂环己烷中。加入60mg碳酸钾和0.1N乙醇胺在二氧杂环己烷中的溶液6.5ml，混合物在80℃搅拌18小时。然后浓缩，剩余物用水搅拌。过滤混合物，滤渣通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶1∶0.1]。浓缩相应的馏分之后，在高真空下干燥，得到目标产物83mg(80％)。[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2 Rf＝0.23]。
8.2)N-{Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
类似于实施例8.1将来自实施例8.2.a的化合物67mg(0.07mmol)脱保护。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2]。随后从甲醇/乙醚沉淀以90％的产率得到目标产物。FAB-MS：m/z＝854＝M+1。
类似于实施例8.1制备下列的糖共轭体：
实施例8.3
N-{Nε-[2-氯-4-[O-(2-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：来自实施例1.1的糖；
    产率：76％；FAB-MS：m/z＝829＝M+1。
实施例8.4
N-{Nε-[2-氯-4-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：对-氨基苯基β-L-岩藻糖苷；
    产率：36％；FAB-MS：m/z＝815＝M+1；
    [TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0 Rf＝0.44]。
实施例8.5
N-{Nε-[2-氯-4-[O-(3-脱氧-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：来自实施例1.6的糖；
    产率：56％；FAB-MS：m/z＝799＝M+1；
    [TLC：乙腈/水/冰醋酸15∶1∶0.2 Rf＝0.54]。
类似于实施例8.1.a，8.2.a和8.2从实施例2.4中的batracyline-肽共轭体或从以相应的方法制备的L-丙氨酰异构体制备下列的糖共轭体
实施例8.6
N-{Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(2-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：来自实施例1.1的糖；
    产率：78％；FAB-MS：m/z＝854＝M+1；
    [TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.33]。
实施例8.7
N-{Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(3-脱氧-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：来自实施例1.4的糖；
    产率：38％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝
0.4]。
实施例8.8
N-{Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(3-脱氧-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：来自实施例1.6的糖；
    产率：77％；FAB-MS：m/z＝824＝M+1；
    [TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.37]。
实施例8.9
N-{Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：对-氨基苯基β-L-岩藻糖苷；
    产率：52％；FAB-MS：m/z＝840＝M+1；
    [TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.30]。
实施例8.10
N-{Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：来自实施例1.2糖；
    产率：88％；
    [TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶3∶0.3 Rf＝0.35]。
实施例8.11
N-{Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(2-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：来自实施例1.1的糖；
    产率：58％；
    [TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.40]。
实施例8.12
N-{Nε-[4-羟乙基氨基-2-[O-(4-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基]-三嗪-6-基]-赖氨酰-丙氨酰}-batracyline三氟乙酸盐：
    离析物：来自实施例1.4的糖；
    产率：66％；
    FAB-MS：m/z＝854＝M+1；
    [TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶05 Rf＝0.37]。
实施例9.1
N-[D-丙氨酰]-喹诺酮-a三氟乙酸盐：
9.1.a)N-[N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酰]-喹诺酮-a：
将N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸(3.6g，19.2mmol)和2-异丁氧基-1-异丁氧基羰基1，2-二氢-喹啉(5.8g，19.2mmol)溶于200ml二甲基甲酰胺中。室温下搅拌混合物8小时之后，加入喹诺酮-a(4g，9.6mmol)和3.3ml乙基二异丙基胺，物料用超声处理10小时。浓缩，剩余物溶于二氯甲烷，产物用乙醚沉淀。过滤之后用乙醚洗涤，在高真空下干燥，得到4.58g(81％)目标产物，该产物不用进一步处理即可反应。
9.1)N-[D-丙氨酰]-喹诺酮-a三氟乙酸盐：
在0℃将4.56g(7.75mmol)来自实施例9.1.a的化合物溶于50ml二氯甲烷和50ml无水三氟乙酸中，在该温度下搅拌溶液1小时。浓缩，然后剩余物用二氯甲烷蒸馏，产物用乙醚从甲醇沉淀。得到4.07g(87％)目标产物结晶。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.34]。
实施例9.2
N-[丙氨酰]-喹诺酮-a三氟乙酸盐：
根据与实施例9.1中的异构体的相同方式进行合成。
实施例9.3
N-[赖氨酰-D-丙氨酰]-喹诺酮-a双-三氟乙酸盐：
Figure A9619418001452
9.3.a)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-喹诺酮-a：
将341mg(0.984mmol)Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酸溶于10ml二甲基甲酰胺中，在0℃加入200mg(1.48mmol)N-羟基苯并三唑和227mg(11.8mmol)N’-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳化二亚胺盐酸盐。在10℃搅拌混合物3小时之后，加入来自实施例9.1的化合物432mg(0.82mmol)，混合物在20℃再搅拌2小时。浓缩，剩余物与50ml水搅拌3次。然后剩余物溶于二氯甲烷，混合物用硫酸钠干燥。用乙醚沉淀得到516mg(78％)目标产物。[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.55]。
9.3)N-[赖氨酰-D-丙氨酰]-喹诺酮-a双-三氟乙酸盐：
类似于实施例9.1脱保护512mg(0.63mmol)来自实施例9.3.a的化合物。用乙醚从乙酸乙酯沉淀。产率：479mg(90％)；[TLC：乙腈/水/冰醋酸10∶3∶1.5 Rf＝0.3]。
实施例9.4
N-[赖氨酰-丙氨酰]-喹诺酮-a双-三氟乙酸盐：
根据与实施例9.3中的异构体的相同方式进行合成。
实施例9.5
N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-喹诺酮-a
Figure A9619418001461
9.5.a)N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-喹诺酮-a
将1.57g(3.36mmol)Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酸溶于25ml二甲基甲酰胺中，在0℃加入600mg(5.04mmol)N-羟基琥珀酰亚胺和820mg(4.03mmol)N，N’-二环己基碳化二亚胺。3小时之后，过滤生成的脲，滤液中加入来自实施例9.1的化合物1.5g(2.86mmol)，混合物在室温下搅拌16小时。过滤剩余的脲，滤液通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇97.5∶2.5；然后用90∶10的相同系统]。然后产物用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1沉淀。产率：1.5g(56％)；[TLC：二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.47]。
9.5)N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰］-喹诺酮-a：
在二甲基甲酰胺中用哌啶从实施例9.5.a)裂解Fmoc。粗产物用乙醚从二甲基甲酰胺沉淀提纯。产率：72％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2Rf＝0.43]。
实施例9.6
N-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-喹诺酮-a三氟乙酸盐：
Figure A9619418001471
类似于实施例9.1从实施例9.5.a)裂解Boc。粗产物从甲醇/乙醚沉淀。产率：80％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.36]。
实施例9.7
N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-丙氨酰]-喹诺酮-a：
根据与实施例9.5中的异构体的相同方式进行合成。
实施例9.8
N-[赖氨酰]-喹诺酮-a双-三氟乙酸盐
Figure A9619418001481
9.8.a)N-[Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰]-喹诺酮-a：
根据实施例9.1.a的方法将1317mg(3.8mmol)Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酸与喹诺酮-a连接。通过快速色谱进行提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶1∶0.1]。得到1010mg(71％)目标产物。
9.8)N-[赖氨酰]-喹诺酮-a双-三氟乙酸盐：
类似于实施例9.1将1005mg(1.347mmol)来自实施例9.8.a的化合物脱保护。用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1沉淀之后，得到966mg(93％)目标产物结晶。[TLC：乙腈/水/冰醋酸10∶5∶3 Rf＝0.33]。
实施例9.9
N-[D-赖氨酰]-喹诺酮-a双-三氟乙酸盐：
根据与实施例9.8中的异构体的相同方式进行合成。
实施例9.10
N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰]-喹诺酮-a
9.10.a)N-Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-喹诺酮-a：
根据实施例9.8.a的方法将1350mg(2.88mmol)Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酸与喹诺酮-a连接。用快速色谱进行提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶1∶0.1；然后用15∶2∶0.2的相同系统]。得到1025mg(82％)目标产物。
9.10)N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰]-喹诺酮-a：
类似于实施例9.5从实施例9.10.a)裂解Fmoc。粗产物用乙醚从甲醇沉淀两次。产率：86％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.48]。
实施例9.11
N-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-喹诺酮-a三氟乙酸盐：
Figure A9619418001491
类似于实施例9.1从实施例9.10.a)裂解Boc。粗产物从甲醇/乙醚沉淀两次。从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。产率：92％；[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5 Rf＝0.44]。
实施例10.1-10.3
通式
Figure A9619418001501
实施例10.1
N-{Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-喹诺酮-a：
10.1.a)N-{Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-喹诺酮-a：
将47微升(0.28mmol)硫光气加入在15ml1∶1的二氧杂环己烷/水中的78mg(0.25mmol)的对-氨基苯基3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.10)中，同时搅拌。混合物在20℃搅拌10分钟之后浓缩，剩余物在高真空度下干燥1小时。然后将得到的异硫氰酸酯在无水二甲基甲酰胺中在86微升乙基二异丙基胺存在下与180mg(0.25mmol)N-[Nα-(叔丁氧基羰基)-赖氨酰-D-丙氨酰]-喹诺酮-a(实施例9.5)偶合。将粗产物从二氯甲烷/乙醚沉淀两次之后，与水搅拌，从二氧杂环己烷/水冷冻干燥，得到210mg(78％)目标产物。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.62]。
10.1)N-{Nε-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-喹诺酮-a：
在0℃将来自实施例10.1.a的化合物208mg(0.193mmol)在10ml二氯甲烷中与10ml无水三氟乙酸搅拌1小时。浓缩混合物，随后将剩余物与15ml甲醇蒸馏，用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)10∶10∶0.8色谱分离。用乙醚从二甲基甲酰胺沉淀之后得到52mg(28％)目标产物。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.53]。
类似于实施例10.1，从实施例9.5，9.7和9.10中的部分被保护的肽共轭体制备下列糖共轭体：
实施例10.2
N-{Nε-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：来自实施例1.2的糖；来自实施例9.7的肽共轭体
用乙醚从甲醇数次沉淀进行中间体提纯步骤。用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5；然后用15∶8∶0.8的相同系统进行最后的提纯步骤。产率：20％[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶8∶0.8 Rf＝0.15]。
实施例10.3
N-{Nε-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：来自实施例1.2的糖；来自实施例9.10的氨基酸共轭体
用乙醚从甲醇沉淀进行中间体提纯步骤。用快速色谱使用二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶8∶0.8进行最后的提纯步骤。产率：39％[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.33]。
实施例11.1-11.18
通式
实施例11.1
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-喹诺酮-a：
根据实施例10.1.a的方法将50mg(0.19mmol)对-氨基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.2)先转化成异硫氰酸酯，然后将得到的产物在5ml二甲基甲酰胺中在55微升乙基二异丙基胺存在下与68mg(0.08mmol)N-[赖氨酰-[D-丙氨酰]-喹诺酮-a双-三氟乙酸盐(实施例9.3)偶合。室温下搅拌混合物16小时，浓缩，剩余物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/冰醋酸85∶15∶1.5]。然后用乙醚从甲醇沉淀得到62mg(63％)目标产物。[TLC：二氯甲烷/甲醇/冰醋酸80∶20∶2 Rf＝0.5]；MS-MALDI：m/z＝1242＝M+1。
类似于实施例11.1，从实施例9.3，9.4，9.8和9.9中的肽共轭体制备下列糖共轭体：
实施例11.2
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：50mg(0.19mmol)来自实施例1.2的糖；
        0.08mmol来自实施例9.4的肽共轭体
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨冰醋酸90∶10∶1]，用乙醚从甲醇沉淀。产率：79％[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.42]。
实施例11.3
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：52mg(0.166mmol)来自实施例1.10的糖；
        0.07mmol来自实施例9.4的肽共轭体
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨冰醋酸80∶20∶2]，剩余物与甲醇搅拌。[TLC：乙腈/水/冰醋酸10∶3∶1.5 Rf＝0.62]。
实施例11.4
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：44mg(0.14mmol)来自实施例1.10的糖；
    0.06mmol来自实施例9.3的肽共轭体
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨冰醋酸80∶20∶2]，剩余物与甲醇搅拌。产率：57％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸10∶3∶1.5 Rf＝0.62]。
实施例11.5
N-{Nα，Nε-二-[O-(α-L-鼠李糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：44mg(0.166mmol)来自实施例1.21的糖；
        0.07mmol来自实施例9.4的肽共轭体
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨冰醋酸80∶20∶1]，剩余物与甲醇/乙醚搅拌。产率：90mg(89％)；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.51]；MS-ESI：m/z＝1212＝M+1。
实施例11.6
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：70mg(0.258mmol)来自实施例1.2的糖；
        0.11mmol来自实施例9.8的氨基酸共轭体
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨冰醋酸90∶10∶1]，用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1沉淀。剩余物与水搅拌。产率：41％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.65]。
实施例11.7
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：50mg(0.19mmol)来自实施例1.2的糖；
        0.08mmol来自实施例9.9的氨基酸共轭体
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨冰醋酸90∶10∶1]，用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1沉淀。剩余物与水搅拌。产率：67％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.65]；MS-FAB：m/z＝1169＝M+1。
实施例11.8
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]赖氨酰}-喹诺酮-a二钠盐：
离析物：50mg(0.16mmol)来自实施例1.10的糖；
        0.07mmol来自实施例9.8的氨基酸共轭体
浓缩反应物料之后，剩余物溶于10ml二甲基甲酰胺中，加入8ml0.1N氢氧化钠溶液，混合物在20℃搅拌2小时。再次浓缩，然后将剩余物溶于水，其pH值调至5。冷冻干燥产物，用甲醇然后用甲醇/乙醚浸提。得到68mg(65％)目标产物。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.26]。
实施例11.9
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-a二钠盐：
离析物：100mg(0.32mmol)来自实施例1.10的糖；
        0.13mmol来自实施例12.9的氨基酸共轭体
浓缩反应物料之后，剩余物溶于10ml二甲基甲酰胺中，加入16ml0.1N氢氧化钠溶液，混合物在20℃搅拌2小时。再次浓缩，然后将剩余物溶于水，其pH值调至5。冷冻干燥产物，用甲醇然后用甲醇/乙醚浸提。得到160mg(77％)目标产物。熔点：218-220℃；[TLC：乙腈/水/冰醋酸10∶3∶1.5 Rf＝0.69]。
实施例11.10
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-α-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：50mg(0.19mmol)来自实施例1.3的糖；
        0.0gmmol来自实施例9.9的氨基酸共轭体
类似于实施例11.7制备。通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)10∶10∶1]，然后用乙醚从/甲醇1∶1沉淀。产率：66％。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.62]。
实施例11.11
N-{Nα，Nε-二-[O-(α-L-鼠李糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：50mg(0.19mmol)来自实施例1.21的糖；
        0.08mmol来自实施例9.9的氨基酸共轭体
类似于实施例11.7制备。产率：57％。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2Rf＝0.63]。
实施例11.12
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-a钠盐：
将58mg(0.05mmol)来自实施例11.7的化合物悬浮于水中，用1当量0.1N氢氧化钠溶液转化成钠盐。冷冻干燥之后，得到60mg目标产物。
实施例11.13
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a钠盐：
将硫光气(33.5ml，0.44mmol)加入化合物1.25(62.8mg，0.22mmol)在1∶1的二氧杂环己烷/水(10ml)中的溶液中，同时搅拌。10分钟之后真空浓缩混合物，剩余物在油泵真空下干燥1小时。然后将得到的异硫氰酸酯溶于无水二甲基甲酰胺(10ml)中，加入化合物9.8(77.4mg，0.1mmol)和乙基二异丙基胺(0.5ml)。室温下搅拌混合物16小时，然后真空浓缩，剩余物用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)10∶10∶1→甲醇/氨(25％)20∶1]。将得到的黄色结晶悬浮于水(10ml)中。其中滴加0.05N氢氧化钠溶液同时搅拌，直到溶液变清(pH小于10)。冷冻干燥过滤的溶液得到黄色无定形固体(39.7mg，32％)；[α]20＝+25.8°(c＝0.26/H2O)。
实施例11.14
N-{Nα，Nε-二-[O-(4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a钠盐：
如实施例11.13中描述的那样将化合物1.58(98.4mg，0.22mmol)与肽共轭体9.8(77.4mg，0.1mmol)反应并提纯产物。得到黄色无定形固体(62.5mg，40％)；[α]20＝+12.9°(c＝0.26/H2O)。
实施例11.15
N-{Nα，Nε-二-[O-(2-O--甲基-4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a钠盐：
如实施例11.13中描述的那样将化合物1.59(101.5mg，0.22mmol)与肽共轭体9.8(77.4mg，0.1mmol)反应。通过用乙醚从甲醇/二氯甲烷1∶1再沉淀提纯，通过用乙醇煮沸提取得到黄色结晶，将该结晶如所述那样转化成钠盐。得到黄色无定形固体(51.1mg，32％)；[α]20＝+27.9°(c＝0.24/H2O)。
实施例11.16
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-a钠盐：
如实施例11.13中描述的那样将化合物1.25(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体9.9(77.4mg，0.1mmol)反应并提纯产物。得到黄色无定形固体(77.3mg，63％)；[α]20＝-23.8°(c＝0.63/H2O)。
实施例11.17
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-a钠盐：
如实施例11.13中描述的那样将化合物1.40(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体9.9(77.4mg，0.1mmol)反应并提纯产物。得到黄色无定形固体(33.6mg，27％)；[α]20＝+0.7°(c ＝0.28/H2O)。
实施例11.18
N-{Nα，Nε-二-[O-(4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-a钠盐：
如实施例11.13中描述的那样将化合物1.58(98.4mg，0.22mmol)与肽共轭体9.9(77.4mg，0.1mmol)反应并提纯产物。得到黄色无定形固体(63.0mg，41％)；[α]20＝-21.8°(c＝0.22/H2O)。
实施例12.1-12.15
通式
Figure A9619418001571
实施例12.1
N-{N’-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-喹诺酮-a：
根据实施例10.1.a的方法将447mg(1.66mmol)对-氨基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.2)先转化成异硫氰酸酯。然后将产物在40ml二甲基甲酰胺中在586微升乙基二异丙基胺存在下与1g(1.66mmol)N-[D-丙氨酰]-喹诺酮-a三氟乙酸盐(实施例9.1)偶合。室温下搅拌混合物2小时，浓缩，剩余物用乙醚从二氯甲烷/甲醇沉淀数次提纯。然后滤渣与水再搅拌两次。得到876mg(66％)目标产物。熔点：198℃；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.63]。
类似于实施例12.1，从实施例9.1和9.2中的氨基酸共轭体制备下列糖共轭体：
实施例12.2
N-{N’-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-丙氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：25mg(0.092mmol)来自实施例1.2的糖
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/冰醋酸90∶10∶1]，用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1沉淀，剩余物与水搅拌。产率：53mg(52％)。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.65]。
实施例12.3
N-{N’-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-喹诺酮-a单钠盐：
离析物：523mg(1.67mmol)来自实施例1.10的糖；
        840mg(1.39mmol)来自实施例12.1的化合物
反应6小时之后浓缩混合物，剩余物与水搅拌。用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶8∶0.8；然后用10∶11的相同系统]，接着从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。产物溶于水中，加入1当量0.1N氢氧化钠溶液，再进行冷冻干燥。产率：525mg(45％)。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.39]。
实施例12.4
N-{N’-[O-(α-L-鼠李糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：20mg(0.076mmol)来自实施例1.21的糖
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/冰醋酸90∶10∶1]，用乙醚从甲醇沉淀。产率：20mg(34％)。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.42]。
从部分保护的N-(赖氨酰)-喹诺酮-a共轭体和N-(赖氨酰-D-丙氨酰)-喹诺酮-a共轭体制备下列糖共轭体：
实施例12.5
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a：
12.5.a)N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a：
根据实施例10.1.a的方法将92mg(0.34mmol)对-氨基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.2)先转化成异硫氰酸酯。然后将产物在20ml二甲基甲酰胺中在116微升乙基二异丙基胺存在下与300mg(0.34mmol)N-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-喹诺酮-a三氟乙酸盐(实施例9.11)偶合。室温下搅拌混合物16小时，浓缩，剩余物用乙醚从二氯甲烷沉淀提纯。然后滤渣再与水搅拌，从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。得到290mg(79％)目标产物。[TLC：乙腈/水10∶1：Rf＝0.6]。
12.5)N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a：
将288mg(0.267mmol)实施例12.5.a的化合物溶于20ml二氯甲烷中，加入8ml哌啶。在20℃搅拌混合物30分钟之后，浓缩，剩余物用乙醚从二氯甲烷中沉淀。产物通过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)10∶10∶2]。剩余物与乙醚搅拌，从水中冷冻干燥。得到90mg(39％)目标产物。[TLC：二氯甲烷/甲醇/氨(17％)10∶10∶5 Rf＝0.4]。
类似于实施例12.5，从实施例9.11和9.6中的共轭体制备下列糖共轭体：
实施例12.6
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a二钠盐：
离析物：63mg(0.2mmol)来自实施例1.10的糖；
        158mg(0.18mmol)来自实施例9.11的化合物
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5；然后用10∶10∶1的相同系统]进行中间体提纯步骤，与甲醇搅拌数次和用乙醚洗涤滤渣进行最后的提纯步骤。产率：44％。然后将产物悬浮于水，用2当量0.1N氢氧化钠溶液制备二钠盐，冷冻干燥溶液。[TLC：乙腈/水/冰醋酸10∶3∶1.5 Rf＝0.34]。
实施例12.7
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-喹诺酮-a：
离析物：147mg(0.47mmol)来自实施例1.10的糖；
        448mg(0.47mmol)来自实施例9.6的化合物
通过用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1两次沉淀进行中间体提纯步骤；滤渣与水搅拌(产率：92％)。用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)10∶10∶2]进行最后的提纯步骤，用乙醚从二甲基甲酰胺沉淀。产率：59％。[TLC：乙腈/水/冰醋酸10∶3∶1.5 Rf＝0.4]。
实施例12.8
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a盐酸盐：
离析物：化合物1.25(62.8mg，0.22mmol)；
        肽共轭体9.11(180.0mg，0.2mmol)
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇10∶1→7∶1→2∶1]进行中间体提纯步骤。得到黄色结晶(145.7mg，67％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.48。然后如实施例4.5中描述的那样将芴基-9-甲氧基羰基裂解并提纯产物。得到黄色结晶并将其悬浮于水(10ml)。其中滴加0.1N盐酸同时搅拌，直到溶液变清(pH大于3)。冷冻干燥过滤的溶液得到黄色无定形固体(119.4mg，66％)；[α]20＝+33.8°(c＝0.28/H2O)。
实施例12.9
N-{Nα-[O-(3，6-二-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a盐酸盐：
离析物：化合物1.32(65.9mg，0.22mmol)；
        肽共轭体9.11(180.0mg，0.2mmol)
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇10∶1→7∶1→2∶1]进行中间体提纯步骤。得到黄色结晶(115.0mg，52％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.44。然后如实施例4.5中描述的那样将芴基-9-甲氧基羰基裂解并提纯产物。得到黄色结晶并将其悬浮于水(10ml)。其中滴加0.1N盐酸同时搅拌，直到溶液变清(pH大于3)。冷冻干燥过滤的溶液得到黄色无定形固体(94.3mg，51％)；[α]20＝+44.2°(c＝0.34/H2O)。
实施例12.10
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-α-D-吡喃甘露糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a盐酸盐：
离析物：化合物1.40(62.8mg，0.22mmol)；
        肽共轭体9.11(180.0mg，0.2mmol)
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇10∶1→5∶1→1∶1]进行中间体提纯步骤。得到黄色结晶(96.7mg，44％)；TLC[二氯甲烷/甲醇5∶1]：Rf＝0.47。然后如实施例4.5中描述的那样将芴基-9-甲氧基羰基裂解并提纯产物。得到黄色结晶并将其悬浮于水(10ml)。其中滴加0.1N盐酸同时搅拌，直到溶液变清(pH大于3)。冷冻干燥过滤的溶液得到黄色无定形固体(78.2mg，43％)；[α]20＝-157.2°(c＝0.30/H2O)。
实施例12.11
N-{Nα-[O-(4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-a盐酸盐：
离析物：化合物1.58(98.4mg，0.22mmol)；
        肽共轭体9.11(180.0mg，0.2mmol)
用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)20∶10∶1→10∶10∶1→甲醇/氨(17％)20∶1]进行中间体提纯步骤。得到米黄色结晶(132.1mg，53％)； TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)10∶10∶3]：Rf＝0.60。然后如实施例4.5中描述的那样将芴基-9-甲氧基羰基裂解并提纯产物。得到黄色结晶并将其悬浮于水(10ml)。其中滴加0.1N盐酸同时搅拌，直到溶液变清(pH大于3)。冷冻干燥过滤的溶液得到黄色无定形固体(90.0mg，42％)；[α]20＝+192.2°(c＝0.27/H2O)。
根据实施例12.1的方法从未取代的喹诺酮-a开始制备下列糖共轭体：
实施例12.12
N-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-喹诺酮-a二钠盐：
离析物：78.5mg(0.25mmol)来自实施例1.10的糖；
        70mg(0.167mmol)喹诺酮-a
反应6小时之后浓缩混合物，剩余物溶于二甲基甲酰胺，混合物与4ml0.1N氢氧化钠溶液搅拌1小时。用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5]。用0.1N氢氧化钠溶液调节pH值至7，冷冻干燥。产率：60mg(44％)。[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.42]。FAB-MS：m/z＝773＝M-2Na++3H+。
实施例12.13
N-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-喹诺酮-a：
离析物：32mg(0.12mmol)来自实施例1.2的糖；
        50mg(0.12mmol)喹诺酮-a
反应时间为2小时；用快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/冰醋酸9∶10∶1]；用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1沉淀。产率：59mg(51％)。[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.43]。
实施例12.14
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-喹诺酮-a盐酸盐：
将86mg(0.1mmol)实施例12.5的化合物溶于水并且用1当量0.1N盐酸转化成盐。冷冻干燥得到88mg目标化合物。
实施例12.15
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-二氨基丙氨酰}-喹诺酮-a盐酸盐：
类似于实施例12.14经过几步反应从Nα-(叔丁氧基羰基)-Nβ-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-二氨基丙酸和喹诺酮-a制备糖共轭体12.5；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.3]。
实施例13
通式
Figure A9619418001621
实施例13.1
N-{N’-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-喹诺酮-b：
13.1a)喹诺酮-b：4-氨基-7-[(3aRS，4RS，7aSR)-4-氨基-1，3，3a，4，7，7a-六氢异氮杂茚-2-基]-1-环丙基-6-氟-1，4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉甲酸
将170mg(1.5mmol)1，4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷和152mg(1.1mmol)(3aRS，4RS，7aSR)-4-氨基-1，3，3a，4，7，7a-六氢异吲哚加入在4ml乙腈和2ml二甲基甲酰胺混合物中的310mg(1mmol)5-氨基-1-环丙基-6，7-二氟-1，4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉甲酸中，混合物加热回流1小时。真空浓缩，剩余物用约20ml水搅拌，吸滤沉淀的剩余物，真空下在100℃干燥。
产率：301mg(70％)，熔点：237-239℃(同时分解)。
13.1.b)N-[D-丙氨酰]-喹诺酮-b三氟乙酸盐：
类似于实施例9.1从化合物13.1.a和N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸开始制备目标化合物。
13.1)N-{N’-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-b：
类似于实施例12.1从化合物13.1.b和对氨基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.2)开始制备目标化合物。
实施例1.4：
通式
Figure A9619418001631
喹诺酮-c：8-(2-氨基-5-甲基-8-氮杂二环[4.3.0]壬-3-烯-8-基)-1-甲基-7-氟-5-氧代-5H-噻唑[3，2-a]喹啉-4-甲酸
实施例14.1
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-c盐酸盐：
14.1.a)N-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-喹诺酮-c三氟乙酸盐：
    离析物：Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧
基羰基)-赖氨酸(1.4g，3.0mmol)；
喹诺酮-c(820mg，1.9mmol)
类似于实施例9.1.a进行中间体产物的制备。从乙醇/乙醚再沉淀得到浅黄色结晶(1.37g，82％)，类似于实施例9.1.b从该产物游离出化合物14.1.a。得到橙色结晶(1.25g，74％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)30∶10∶1]：Rf＝0.7；熔点：180℃。
14.a)N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-c盐酸盐：
类似于实施例12.5将化合物1.25(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体14.1.a(178.4mg，0.2mmol)反应。用快速色谱[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)30∶6∶1→30∶10∶1]进行中间体提纯步骤。得到浅黄色结晶(97.0mg，44％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)30∶10∶1]：Rf＝0.23。然后如所描述的那样将芴基-9-甲氧基羰基裂解并提纯产物。得到黄色结晶并将其悬浮于水(10ml)。其中滴加0.1N盐酸同时搅拌，直到溶液变清(pH大于3)。冷冻干燥过滤的溶液得到黄色无定形固体(75.8mg，41％)；[α]20＝+12.5°(c＝0.27/H2O)。
类似于实施例14.1从肽共轭体14.1.a制备下列糖共轭体：
实施例14.2
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-c盐酸盐：
离析物：化合物1.2(59.5mg，0.22mmol)；
        肽共轭体14.1.a(178.4mg，0.2mmol)
用快速色谱[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)30∶6∶1→30∶10∶1]进行中间体提纯步骤。得到浅黄色结晶(146.6mg，67％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)30∶6∶1]：Rf＝0.48。然后如所描述的那样将芴基-9-甲氧基羰基裂解，将产物转化成盐酸盐。得到黄色无定形固体(107.7mg，60％)；[α]20＝+51.6°(c＝0.36/H2O)。
实施例14.3
N-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-c二钠盐：
类似于实施例12.6经过几步反应从化合物14.1.a开始制备糖共轭体14.4；[FAB-MS：m/z＝911＝M-2Na+3H]。
实施例14.4
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰}-喹诺酮-c盐酸盐：
类似于实施例14.2中的异构体制备该共轭体；[FAB-MS：m/z＝867＝M+H]。
实施例15：
通式
Figure A9619418001651
喹诺酮-d：4-(2-氨基-8-氮杂二环[4.3.0]壬-4-烯-8-基)-1-环丙基-6，8-二氟-1，4-二氢-4-氧代-喹啉-3-甲酸
实施例15.1
N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-d盐酸盐：
15.1.a)N-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰]-喹诺酮-d三氟乙酸盐：
如实施例9.1.a中描述的那样将Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酸(1.4g，3.0mmol)与喹诺酮-d盐酸盐(1.28mg，2.8mmol)反应。用乙醚从二氯甲烷/甲醇1∶1再沉淀得到米黄色结晶(1.97g，83％)，类似于实施例9.1.b从该产物游离出化合物15.1.a。得到米黄色结晶(1.7g，70％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)28∶14∶1]：Rf＝0.60；熔点＝215℃。
15.1)N-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-d盐酸盐：
类似于实施例12.5将化合物1.25(62.8mg，0.22mmol)与肽共轭体15.1.a(173.2mg，0.2mmol)反应。用快速色谱[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)28∶14∶1→甲醇/氨(25％)20∶1]进行中间体提纯步骤。得到米黄色结晶(140.8mg，65％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)28∶14∶1]：Rf＝0.06。然后如所描述的那样将芴基-9-甲氧基羰基裂解并提纯产物。得到黄色结晶并将其悬浮于水(10ml)。其中滴加0.1N盐酸同时搅拌，直到溶液变清(pH大于3)。冷冻干燥过滤的溶液得到黄色无定形固体(102.6mg，57％)；[α]20＝-49.0°(c＝0.26/H2O)。
类似于实施例15.1从肽共轭体15.1.a制备下列糖共轭体：
实施例15.2
N-{Nα-[O-(4-O-(3’-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃葡糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰}-喹诺酮-d盐酸盐：
离析物：化合物1.58(98.4mg，0.22mmol)；
        肽共轭体15.1.a(173.2mg，0.2mmol)
用快速色谱[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)20∶10∶1(10∶10∶1(甲醇/氨(25％)20∶1]进行中间体提纯步骤。得到米黄色结晶(106.6mg，43％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(25％)10∶10∶3]：Rf＝0.51。然后如所描述的那样将芴基-9-甲氧基羰基裂解，将产物转化成盐酸盐。得到黄色无定形固体(82.0mg，39％)；[α]20＝+22.8°(c＝0.29/H2O)。
实施例16：带有苯丙氨酸氮芥的糖共轭体
通式
实施例16.1
N-{N’-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-苯丙氨酸氮芥：
16.1.a)N-叔丁氧基羰基-D-丙氨酰-苯丙氨酸氮芥：
将114mg(0.6mmol)N-叔丁氧基羰基-D-丙氨酸溶于10ml二甲基甲酰胺中，在0℃加入138mgN’-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳化二亚胺盐酸盐和1-羟基-苯并三唑。10分钟之后，加入153mg苯丙氨酸氮芥，混合物在室温下搅拌16小时。浓缩，剩余物在二氯甲烷和水之间分配。洗涤有机相，用硫酸钠干燥，浓缩，剩余物经过快速色谱提纯[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶2∶0.2→15∶4∶0.5]。得到目标化合物134mg(56％)；TLC[二氯甲烷/甲醇/氨(17％)15∶4∶0.5]：Rf＝045。
16.1)N-{N’-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-丙氨酰}-苯丙氨酸氮芥：
如实施例9.1和12.1中描述的那样进行保护基的裂解和与糖偶合。
TLC[乙腈/水10∶1]：Rf＝0.26；FAB-MS：m/z＝685＝M-H。
实施例16.2
N-{N’-[O-(3-O-甲基-β-L-岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-丙氨酰-丙氨酰}-苯丙氨酸氮芥：
类似于实施例16.1经过几步反应可以制备该化合物。
TLC[乙腈/水10∶1 ]：Rf＝0.2；FAB-MS：m/z＝756＝M-H。
实施例17：带有阿霉素(亚德里亚霉素)的糖共轭体
通式
Figure A9619418001671
实施例17.1
N-{N’-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-丙氨酰-丙氨酰}-阿霉素：
17.1.a)N-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-丙氨酰-丙氨酸：
将160mg(1mmol)丙氨酰-丙氨酸溶于20ml二氧杂环己烷/水1∶1中，加入1mlHünig碱。根据10.1.a的方法先将1.2mmol对-氨基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.2)转化成异硫氰酸酯，然后将产物加入二肽溶液中。室温下搅拌混合物16小时，剩余物通过快速色谱提纯(乙腈/水15∶1)。浓缩相应的馏分之后，从甲醇/乙醚沉淀产物。产率：267mg(57％)。
17.1)N-{N’-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-丙氨酰-丙氨酰}-阿霉素：
将48mg(0.1mmol)来自实施例17.1.a的化合物溶于10ml二甲基甲酰胺中，加入23.1mgN’-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳化二亚胺盐酸盐和21mg 1-羟基-笨并三唑。5分钟之后，加入30mg阿霉素和35微升Hünig碱，室温下搅拌混合物30分钟。浓缩，剩余物通过快速色谱提纯(二氯甲烷/甲醇88∶12)。浓缩相应的馏分，剩余物从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。得到20mg(40％)目标化合物。TLC[二氯甲烷/甲醇10∶1]：Rf＝0.17；ESI：m/z＝997＝M+H。
实施例17.2
N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰-丙氨酰}-阿霉素：
17.2.a)Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰-丙氨酸：
如实施例17.1.a中描述的那样将580mg(1.31mmol)D-赖氨酰-丙氨酸的二-三氟乙酸盐与2.2当量来自实施例1.2的糖在1.3mlHünig碱存在下连接。通过快速色谱用乙腈/水10∶1进行提纯，得到446mg(41％)目标化合物。
17.2)N-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-D-赖氨酰-丙氨酰}-阿霉素：
如实施例17.1中描述的那样将59mg来自实施例17.2.a的化合物与20mg阿霉素连接。得到15mg共轭体。TLC[二氯甲烷/甲醇85∶15]：Rf＝0.43；FAB-MS：m/z＝1365＝M+H。
实施例18：带有喜树碱的糖共轭体
通式
Figure A9619418001691
实施例18.1
20-O-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱：
18.1.a)20-O-(丙氨酰)-喜树碱三氟乙酸盐：
将500mg(1.44mmol)喜树碱溶于20ml二甲基甲酰胺中，然后加入50mg4-二甲基氨基吡啶和N-叔丁氧基羰基-丙氨酸N-羧酸酐。3小时之后，再加入775mgN-叔丁氧基羰基-丙氨酸-N-羧酸酐，悬浮液用超声处理16小时。浓缩混合物，粗产物溶于50ml二氯甲烷，在0℃加入5ml三氟乙酸。搅拌混合物30分钟之后，再次浓缩，通过快速色谱提纯产物[乙腈/水20∶1]。收集相应的馏分并浓缩，剩余物从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。得到712mg(93％)目标化合物；[FAB-MS：m/z＝420＝M+H]。
18.1.b)20-O-(赖氨酰-丙氨酰)-喜树碱双-三氟乙酸盐：
根据标准的方法将来自实施例18.1.a的共轭体与Nα，Nε-二-(叔丁氧基羰基)-赖氨酸连接，然后将产物脱保护。以65％的产率得到目标化合物。
18.1)20-O-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-笨基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱：
类似于实施例11.1中的方法将对-氨基苯基3-O-甲基-β-L-岩藻糖苷(实施例1.2)与实施例18.1.b的共轭体连接。
产率：40％[TLC：乙腈/水10∶1 Rf＝0.44]。
实施例18.2
20-O-{Nα-[O  (3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱：
18.2.a)20-O-[Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酰丙氨酰]-喜树碱双-三氟乙酸盐：
根据标准的方法将来自实施例18.1.a的共轭体与Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-赖氨酸连接，然后将产物在α-氨基官能团上脱保护。以24％的产率得到目标化合物。[TLC：乙腈/水20∶1 Rf＝0.15]。
18.2.b)20-O-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱：
类似于实施例12.6和12.5将来自实施例18.1.a的化合物用来自实施例1.10的糖衍生物修饰。粗产物可以通过用水浸提提纯，然后从二氧杂环己烷/水冷冻干燥，不用进一步提纯即可用于下一步反应。
18.2)20-O-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱：
在二甲基甲酰胺中用哌啶将共轭体18.2.b脱保护。30分钟之后，浓缩混合物，剩余物用二氯甲烷浸提两次。然后溶于二甲基甲酰胺中，用甲醇/乙醚沉淀。吸滤产物，用乙醚洗涤，然后从二氧杂环己烷/水冷冻干燥。产率：86％；[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.17]。
实施例18.3
20-O-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱钠盐：
将62mg(0.074mmol)来自实施例18.2的共轭体溶于二氧杂环己烷/水中，并用1当量0.1N氢氧化钠溶液转化成钠盐。产率：定量[TLC：乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.17]。
类似于实施例18.1和18.2制备下列喜树碱的糖共轭体：
实施例18.4
20-O-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-D-丙氨酰}-喜树碱
实施例18.5
20-O-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-缬氨酰}-喜树碱
实施例18.6
20-O-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-缬氨酰}-喜树碱
实施例18.7
20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-缬氨酰}-喜树碱
实施例18.8
20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-D-吡喃半乳糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱
实施例18.9
20-O-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-缬氨酰}-喜树碱盐酸盐
用1当量0.01N盐酸将化合物18.6转化成盐酸盐。
实施例18.10
20-O-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱盐酸盐
用1当量0.01N盐酸将化合物18.2转化成盐酸盐。
实施例18.11
20-O-{Nα-[O-(3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-苯基丙氨酰}-喜树碱盐酸盐
实施例18.12
20-O-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱钠盐
实施例18.13
20-O-{Nα，Nε-二-[O-(3-O-羧甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-缬氨酰}-喜树碱钠盐
实施例18.14
20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-吡喃岩藻糖基)-4-羟基-苯基氨基硫代羰基]-赖氨酰-丙氨酰}-喜树碱盐酸盐

Claims (10)

1.通式(I)化合物及其异构体和盐，
K-Sp-L-AA1-AA2-C    (I)
其中
K＝未取代的或区域选择性修饰的糖基，
Sp＝任意取代的亚芳基或亚烷基，
其中R＝氯或羟基烷基氨基，
AA1是D或L构型的氨基酸基，它可以任意带有保护基或第二个K-Sp-L-基团，其中独立于第一个K-Sp-L-基团的K，Sp和L可以有上述涵义，或是一个直键，
AA2是D或L构型的氨基酸基，它可以任意带有保护基或第二个K-Sp-L-基团，其中独立于第一个K-Sp-L-基团的K，Sp和L可以有上述涵义，或是一个直键，及
C＝细胞毒性基团或细胞抑制基团或细胞抑制剂衍生的基团，它可以另外带有一个氨基或羟基。
2.权利要求1的通式(I)化合物及其并构体和盐，其中
K是通式(II)的糖基，
Figure A9619418000022
其中
A＝甲基，羟甲基，羧基及其衍生的酯和酰胺，烷氧基甲基，酰氧基甲基或羧基烷氧基甲基及其衍生的酯和酰胺；A也可以是CH2-B，其中B也可以是通过异头中心(anomeric centre)连接的通式(II)糖基，
R2，R3，R4＝分别或同时一起为H，羟基，烷氧基，羧基烷
氧基及其衍生的酯和酰胺，羟基烷氧基，氨基烷氧基，酰氧基，羧
基烷基羰氧基，硫酸根，磷酸根，卤素或在同一结构中被修饰并通
过异头中心连接的另外的糖基(II)，R2另外还可以是氨基或酰
氨基，
或者，R2，R3和R4中的两个一起代表一个环氧基，及
Sp，L，AA1，AA2和C的定义同权利要求1。
3.权利要求1的式(I)化合物及其异构体和盐，其中
Sp＝被K和L在邻-，间-或对位修饰，而且还可以带有1-4个取代基的亚芳基，这些取代基可以彼此不同或相同，可以是H，甲基，甲氧基，羟基，羧基，甲氧羰基，氰基，硝基，卤素，磺酰基或磺酰胺，或
Sp还可以是直链或支链亚烷基，及
K，L，AA1，AA2和C的定义同权利要求1。
4.权利要求1的通式(I)化合物及其异构体和盐，其中C是核苷，endiine抗菌素，或细胞毒性肽抗菌素，喹诺酮-或naphthyridone-羧酸或batracyline，5-氟尿嘧啶，胞嘧啶阿糖苷，甲氨蝶呤，鬼臼亚乙苷，喜树碱，道诺霉素，阿霉素，紫杉醇，长春花碱，长春新碱，动力霉素，刺孢霉素，埃斯波霉素，槲皮素，苏拉明，erbstatin，环磷酰胺，丝裂霉素C，苯丙氨酸氮芥，顺氯氨铂，博来霉素，星形孢菌素或其它有抗肿瘤活性的活性化合物，及
K，Sp，L，AA1和AA2的定义同权利要求1。
5.权利要求1的通式(I)化合物及其异构体和盐，其中AA1是从D或L构型的赖氨酸，丙氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，甘氨酸，鸟氨酸，酪氨酸，缬氨酸或丝氨酸衍生的氨基酸基团，并且可以任意与另一个K-Sp-L-基团连接，其中AA1表示一个键，及
K，Sp，L，AA1，AA2和C的定义同权利要求1。
6.权利要求1的通式(I)化合物及其异构体和盐，其中AA2是从D或L构型的赖氨酸，丙氨酸，甘氨酸，鸟氨酸，二氨基丙酸或丝氨酸衍生的氨基酸基团，并且可以任意与另一个K-Sp-L-基团连接，或者，其中AA2表示一个键，及
K，Sp，L，AA1和C的定义同权利要求1。
7.权利要求1的通式(I)化合物及其异构体和盐，其中C代表式(III)基团，
T-Q         (III)
其中
Q代表下列基团，
其中
Ra代表有1-4个碳原子并且任意被卤素或羟基一-或二-取代的烷基，乙烯基，有3-6个碳原子并且被1或2个氟原子任意取代的环烷基，双环[1.1.1]戊-1-基，1，1-二甲基炔丙基，3-氧杂环丁烷基(3-oxetanyl)，甲氧基，氨基，甲氨基，二甲氨基，或任意被卤素，氨基或羟基一-或二-取代的苯基，或与Re一起形成在Re定义中所述的桥，
Rb代表羟基，有1-3个碳原子的烷氧基或硝基甲基，
Rc代表氢或甲基，或者与Rg一起形成在Rg定义中所述的桥，
Rd代表氢，CH3，CH2F或＝CH2，
X1代表氢，卤素或硝基，
X2代表氢，卤素，氨基，羟基，甲氧基，巯基，甲基，卤代甲基或乙烯基，
Y代表N或C-Re，其中
    Re代表氢，卤素，CF3，OCH3，OCHF2，CH3，CN，
CH＝CH2或C＝CH，或者与Ra一起形成有下列结构的桥：
-*O-CH2-CH-CH3，-*S-CH2-CH2-，-*S-CH2-CH-CH3，-*CH2-CH2-CH-CH3
或-*O-CH2-N-Rf，其中带*的原子与Y的碳原子连接，其中
    Rf代表氢，甲基或甲酰基，及
D代表N或C-Rg，其中
    Rg代表氢，卤素，CF3，OCH3，OCHF2或CH3，或者与
Rc一起形成有下列结构的桥：-*O-CH2-，-*NH-CH2-，-*N(CH3)-CH2-
，-*N(C2H5)-CH2-，-*N(C3H5)-CH2-或-*S-CH2-，其中带*
的原子与D的碳原子连接，n代表1，2或3，及T代表下列基团：
其中
Rh代表-N-Rk，CH2-O-或-CH2-N-Rk，其中
    Rk代表氢或甲基，及
R1代表氢，C1-C3烷基或环丙基，及K，Sp，L，AA1和AA2的定义同权利要求1。
8.权利要求7的式(I)化合物及其异构体和盐，其中Q代表下列基团，
其中
Ra代表有2-4个碳原子并且任意被1个氟原子取代的烷基，任意被1个氟原子取代的环丙基，或任意被氟原子一-或二-取代的苯基，或与Re一起形成在Re定义中所述的桥，
Rb代表羟基或有1-2个碳原子的烷氧基，
Rc代表氢或甲基，或者与Rg一起形成在Rg定义中所述的桥，
X1代表氟，
X2代表氢或氨基，
Y代表N或C-Re，其中
    Re代表氢，氟，氯，CF3，OCH3，OCHF2或C≡CH，或
者与Ra一起形成有下列结构的桥：-*O-CH2-CH-CH3或
-*O-CH2-N-Rf，其中带*的原子与Y的碳原子连接，其中
    Rf代表甲基，及
D代表N或C-Rg，其中
    Rg代表氢，氟，氯，CF3，OCH3或CH3，或者与Re一起
形成有下列结构的桥：-*O-CH2-，-*NH-CH2-，-*N(CH3)-CH2-或
-*S-CH2-，其中带*的原子与D的碳原子连接，及T代表下列基团：
Figure A9619418000061
其中
Rh代表-N-Rk，其中
    Rk代表氢或甲基，及
Ri代表氢或甲基。
9.含有一种或多种权利要求1-8的化合物的药物。
10.权利要求1-8的式(I)化合物在制备药物中的应用。
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