CZ314397A3

CZ314397A3 - Cytostatika modifikovaná uhlohydráty, léčiva tyto látky obsahující a jejich použití

Info

Publication number: CZ314397A3
Application number: CZ973143A
Authority: CZ
Inventors: Hans-Georg Lerchen; Dem Bruch Karsten Von; Uwe Petersen; Jörg Baumgarten; Norbert Piel; Horst Peter Antonicek; Walter Weichel; Michael Sperzel; Klaus Dieter Bremm
Original assignee: Bayer Aktiengesellschaft
Priority date: 1995-04-04
Filing date: 1996-03-22
Publication date: 1998-01-14
Also published as: GR3032605T3; CA2217164A1; JPH11502860A; NO974564L; WO1996031532A1; PL183574B1; US6271342B1; AU5397696A; KR19980703591A; HUP9800513A2; UA61054C2; RU2170234C2; PL322681A1; DE59603678D1; DK0819135T3; BR9604825A; SK281785B6; NZ305855A; ES2140078T3; ATE186738T1

Description

Vynález se týká cytostatik, která jsou modifikací s uhlohydráty nádorově specifická. Vhodný spacer zaručuje sérovou stabilitu a současně intracelulární účinek.

Dosavadní stav techniky

Chemoterapie nádorových onemocnění je doprovázena většinou závažnými vedlejšími účinky, způsobenými toxicitou chemoterapeutik na proliferující buňky jiných tkání. Již mnoho let se zabývají vědci problémem zlepšení selektivity používaných účinných látek. Víekrát používaným krokem je syntesa prodrugu, který je více nebo méně selektivně uvolňován v cílové tkáni, například změnou hodnoty pH (Tietze a kol., například DE-4 229 903) , působením enzymů (například glukoronidáz; Jacquesy a kol., EP-511 917; Bosselt a kol'. , EP-595 133) nebo působením konjugátů protilátka-enzym (Bagshave a kol., VO 88/07378; Senter a kol,, US-PS 4 975 278; Bosslet a kol., EP-595 133). Problematická je při těchto aplikacích mimo jiné stabilita konjugátů v jiných tkáních a orgánech a obzvláště ubiquitární rozdělení účinné látky, které navazuje na extracelulární uvolňování účinné látky ve tkáni nádoru.

Význačný lektinový vzorek na povrchu nádorových buněk (Gabius; Onkologie 12, (1989), 175) otevírá principielní

toto • ·· *

možnost adresovat tyto cíleně na nádorové buňky připojením korespondujících uhlohydrátových stavebních prvků na tato cytostatika. Tato perspektiva je omezena tím, že se také v jiných tkáních, obzvláště v játrech, vyskytují lektiny S podobnými uhlohydrátovými specifitami (galaktosa, laktosa, mannosa, N-acetyl-glukosamin, fruktosa a podobně)(Ashvell a kol., Annu, Rev. Biochem. 46 (1982), 531; Stáhl a kol., Proč. Nati. Acad, Sci. USA 74 (1977), 1521; Hill a kol., J. Biool. Chem. 262 (1986), 7433; Jansen a kol., J. Biol. Chem. 266 (1991), 3343) . Vzhledem k tomu se musí počítat se značným obohacením účinnou látku obsahujících glykokonjugátů v játrech a jiných na lektin bohatých orgánech, když se použijí takovéto nemodifikované cukry.

Heterocyklický amin batracyklin vzorce 1 π

H,N

d) vykazuje v různých modelech rakoviny střeva dobrý protinádorový účinek (US-PS 4 757 072) .

Peptidové konjugáty sloučeniny vzorce 1 s dobrým účinkem in-vitro a se zlepšenou rozpustností (US-4 180 343) jsou.při pokusech na zvířatech hůře snášenlivé než batracyklin. Konjugáty s fruktosou, popsané v EP-501 250 , se obohacují velmi silně v játrech.

Chinolon-a vzorce 2 - kyselina 7[(3aRS,4RS,7aSR)-4-amino-1,3,3a,4,7,7a-hexahydro-isoindol-2-yl]-8-chlor-1-

• · • ♦	•	• · •	• ·· • · «	•		···· • ·
•	•	* ·	• ·	• ·	··	• ·
•	•	•	• ·	v		• *
·· · ·			·· · ··			♦

cyklopropyl-6-fluor-1, 4-dihydro-4-oxo-3-chinolinkarboxylová

(2) (Chinofon-a) vykazuje vedle své výrazné antibakteriální aktivity také velmi dobrou účinnost vůči různým nádorovým buněčným liniím (EP-520 240, JP-4 253 973) . Tomu jsou však na překážku značné toxikologické problémy, například genotoxicita, toxicita pro kostní dřeň, vysoká akutní toxicita in vivo a podobně).

Podstata vynálezu

Novou modifikací cytostatik byla nalezena překvapivě nová třída konjugátů, které se vyznačují následujícími vlastnostmi ; Nové spojení uhlohydrátů s cytostatiky (například batracylinem a chinolonem-a) vede ke glykokonjugátům, které jsou sérově stabilní. Účinek nezávisí na extracelulárním uvolňování účinné látky. Aktivity in-vitro vůči různým nádorovým buněčným liniím jsou srovnatelné s odpovídajícími cytostatiky. Buněčně specifický příjem je závislý na uhlohydrátu.

Regioselektivní modifikací v uhlohydrátové části popisovaných konjugátů se podstatně zlepší buněčná a tkáňová • 4 4444

4* 44 * «4 · 4 4 4444 «4 4

44* 4*4 *4 »

4« 44 44 4 4 4444

4** 4*4 44

444 «4 ♦·· 4* *· * selektivita (obzvláště nádor ku játrům).

In vivo se vyznačují konjugáty podle předloženého vynálezu podstatně zlepšenou snášenlivostí ve srovnání s odpovídající účinnou látkou a odpovídajícími peptidovými kon.j ugáty.

Kromě toho vykazují konjugáty podle předloženého vynálezu ve srovnání s odpovídajícími cytostatiky podstatně zlepšené vlastnosti při rozpouštění.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu je možno popsat pomocí následujícího obecného vzorce I

K - Sp - L - AA1 - AA2 - C (I) ve kterém

K značí nesubstituovaný nebo regioselektivní modifikovaný uhlohydrátový zbytek,

Sp značí popřípadě substituovanou arylenovou nebo alkylenovou skupinu značí skupinu JI —HN nebo

přičemž R značí atom chloru nebo hydroxyalkylaminoskupinu a přičemž spojení se Sp je provedeno přes NH-sku

00

0 0 0

0 0

0

00· pinu,

AAl značí zbytek aminokyseliny v D- nebo L-konfiguraci, který popřípadě nese druhou skupinu K-Sp-L- , ve které K , Sp a L mohou mít významy uvedené výše nezávislé na jiné skupině K-Sp-L- , nebo značí přímou vazbu. Aminokyselinový zbytek může být spojen s L jak přes α-aminoskupinu, tak také popřípadě přes aminofunkci nebo hydroxyfunkci v postranním řetězci a také přes obě funkce. Pokud AAl nese další funkční skupiny, tak se mohou tyto vyskytovat deblokované nebo chráněné známými ochrannými skupinami. Jako ochranné skupiny jsou vhodné například acetylová skupina, allyloxykarbonylová skupina, benzyloxykarbonylová skupina, fluorenylmethoxykarbonylová skupina, terč.-butoxykarbonylová skupina, allylová skupina, benzylová skupina, methylová skupina nebo terc.-butylová skupina.

AA2 značí aminokyselinový zbytek v D- nebo L-koní iguraci, který popřípadě nese druhou skupinu K-Sp-L- , ve které K , Sp a L mohou mít významy uvedené výše nezávislé na jiné skupině K-Sp-L- , nebo značí přímou , vazbu. Aminokyselinový zbytek může být spojen s AAl jak přes α-aminoskupinu, tak také popřípadě přes aminofunkci nebo hydroxyfunkci v postranním řetězci a také přes obě funkce. Pokud AA2 nese další funkční skupiny, tak se mohou tyto vyskytovat deblokované nebo chráněné známými ochrannými skupinami. Jako ochranné skupiny jsou vhodné například acetylová skupina, allyloxykarbonylová skupina, benzyloxykarbonylová skupina, fluorenylmethoxykarbonylová skupina, terč.-butoxykarbonylová skupina, allylová skupina,

- 6 ί·Μ 99

9 · ·· 9

I 9

I · 9

9 · ·

9 *

benzylová skupina, methylová skupina nebo terc.-butylova skupina.

C značí zbytek cytostatika nebo derivátu cytostatika, který může nést dodatečně aminoskupinu nebo bydroxyskupínu. C může být interkalierující substance, inhibitor topoisomerázy, antimetabolit, alkylance, tubulininhibitor, inhibitor tyrosínfosfokinázy, inhibitor proteinkinázy-C nebo účinná látka s jiným nebo neznámým cytostatickým nebo cytotoxickým účinným mechanismem. C může být například nukleosid, endiin-antibiotikum, kyselina chinolonkarboxylová, kyselina nafthyridonkarboxylová nebo cytotoxické antibiotikum, například ze třídy dolastatinů. C může být bactracylin, chinolon-a , 5-fluoracil, cytosinarabinosid, methotrexat, etoposid, camptothecin, daunomycin, doxorubicin, taxol, vinblastin, vincristin, dynemicin, calicheamycin, esperamycin, quercetin, suramin,, erbstatin, cyclophosphamid, mitomycin C, melphalan, cisplatin, bleomycin, staurosporin nebo jiná antineo- -plasticky aktivní.účinná látka. ’

Strukturní prvek -Sp-L-AA1-AA2- dohromady představuje spacer, který spojuje K a C ,

Výhodné jsou sloučeniny obecného vzorce Γ , ve kterém

K značí uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II

O — (Π),

· fe··· ·· fefe * «· fe··· · · · fe fe · · _ fefefe ······

- f · fefefe······ ··· · fefefe ··· fefe fefe·· ·« fefefe ·· fefe fe ve kterém

A značí methylovou skupinu, hydroxymethylovou skupinu, karboxyskupinu, jakož i od ní odvozené estery a amidy, alkoxymethylovou skupinu, acyloxymethylovou skupinu nebo karboxyalkyloxymethylovou skupinu, jakož i od ní odvozené estery a amidy. A může být také skupina CH2-B , přičemž B může být opět přes anomerní centrum připojený uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II a

R₂, R3 a R4 značí jednotlivě nebo společně stejně vodíkový atom, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, karboxyalkokyskupinu, jakož i od ní odvozené estery a amidy, hydroxyalkoxyskupinu,-amínoalkoxyskupinu, acyloxyskupinu, karboxyalkylkarbonyloxyskupinu, sulfátovou skupinu, fosfátovou skupinu, atom halogenu nebo další ve stejném rámci modifikovaný a přes anomerní centrum připojený uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II .

...... R₂ může značit dodatečně amínoskupinu nebo „acylamiiioskupinu. Dva ze zbytků R₂, R3, R4 mohou také společně značit epoxyskupinu.

Stereochemie na anomerním centru uhlohydrátového stavebního prvku může být a nebo β . Stereochemií na jiných centrech se může získat glukokonfigurace, mannokonfigurace, galaktokonfigurace, gulokonfigurace, rhamnokonfigurace nebo fruktokonfigurace.

Sp značí arylenový zbytek, který je modifikován v orthometa- nebo para-poloze s K a L a kromě toho může nést ještě 1 až 4 další substituenty, které mohou být

• 0 ··

0·· · 0 0 0

0 0 0 • 0 0 stejné nebo různé a značí vodíkový atom, methylovou skupinu, methoxyskupinu, hydroxyskupinu, karboxyskupinu, methyloxykarbonylovou skupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, atom halogenu, sulfonylovou skupinu neMůže také značit lineární bytek.

bo sulfonamidovou skupinu, nebo rozvětvený alkylenový z

L .značí skupinu

-κΛ

R

pncemz

R značí atom chloru nebo hydroxyalkylaminoskupinu,

AA1 značí zbytek aminokyseliny v D- nebo L-konfiguraci, který popřípadě nese druhou skupinu K-Sp-L- , ve které Κ , Sp a L mohou mít významy uvedené výše nezávislé na jiné skupině K-Sp-L- , nebo značí přímou vazbu. Aminokyselinový zbytek může být spojen s L _r . jak přes a-aminoskupinu, tak také popřípadě přes aminofunkci nebo hydroxyfunkci v postranním řetězci a také přes obě funkce. Pokud AA1 nese další funkční skupiny, tak se mohou tyto vyskytovat deblokované nebo chráněné známými ochrannými skupinami. Jako ochranné skupiny jsou vhodné například acetylová skupina, allyloxykarbonylová skupina, benzyloxykarbonylová skupina, fluorenylmethoxykarbonylová skupina, terč.-butoxykarbonylová skupina, allylová skupina, benzylová skupina, methylová skupina nebo terc.-butylová skupina.

·· »· · «· » « 9 « ··« » • · ♦ · · · • « * · · « · • · * · « · ·*·· ·· «·· ··

AA2 značí aminokyselinový zbytek v D- nebo L-konfiguraci , který popřípadě nese druhou skupinu K-Sp-L- , ve které K , Sp a L mohou mít významy uvedené výše nezávislé na jiné skupině K-Sp-L- , nebo značí přímou vazbu. Aminokyselinový zbytek může být spojen s AA1 jak přes a-aminoskupinu, tak také popřípadě přes aminofunkci nebo hydroxyfunkci v postranním řetězci a také přes obě funkce. Pokud AA2 nese další funkční skupiny, tak se mohou tyto vyskytovat deblokované nebo chráněné známými ochrannými skupinami. Jako ochranné skupiny jsou vhodné například acetylová skupina, allyloxykarbonylová skupina, benzyloxykarbonylová skupina, fluorenylmethoxykarbonylová skupina, terč.-butoxykarbonylová skupina, allylová skupina, benzylová skupina, methylová skupina nebo terc.-butylová skupina.

C značí například zbytek nukleosidu, endiin-antibiotika nebo cytotoxické antibiotikum, například ze třídy dolastinů, nebo může být jak de definováno dále kyselina chinolonkarboxylová nebo kyselina nafthyridonkarboxylová. C může být například bactracylin, 5-fluoracil, cytosinarabinosid, methotrexat, etoposid, camptothecin, daunomycin, doxorubicin, taxol, vinblastin, vincristin, dynemicin, calicheamycin, esperamycin, quercetin, suramin, erbstatin, cyclophosphamid, mitomycin C, melphalan, cisplatin, bleomycin, staurosporin nebo jiná antineoplasticky aktivní účinná látka. Cytostatikum je s AA2 spojeno přes aminofunkce nebo hydroxyfunkce.

Zcela obzvláště výhodné jsou sloučeniny obecného vzorce I ve kterém • * • •4

K značí uhlohydrátový zbytek obecného vzorce ΓΙ ♦ · ·· • · 9 • 9 9 9 • 9 9

9999 99

(Π), ve kterém

A značí methylovou skupinu, hydroxymethylovou skupinu, karboxyskupinu, jakož i skupinu Ct^-B , přičemž B může být opět přes anomerní centrum připojený uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II a

R2, R3 a R4 značí jednotlivě nebo společně stejně vodíkový . atom, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až uhlíkovými atomy, karboxyalkokyskupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy v alkoxylu, jakož i od ní odvozené

- alkylestery.s , 1. až 3 uhlíkovými atomy v.alkylu a_aiidy, hydroxyalkoxyskupinu, aminoalkoxyskupinu, acyloxyskupinu, karboxyalkylkarbonyloxyskupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy v alkylu, sulfátovou skupinu, nebo další ve stejném rámci modifikovaný a přes anomerní centrum připojený uhlohydrátový zbytek v posici R3 nebo R₄ . Dva ze zbytků R2, R3, R4 mohou také společně značit epoxyskupinu.

Stereochemie na anomernim centru uhlohydrátového stavebního prvku může být a nebo β , Stereochemií na jiných centrech se může získat L-glukokonfigurace, D-mannokonfigurace, D-galaktokonfigurace, L-gulokonfigurace, D-gluko11

konfigurace, L-rhamnokonfigurace nebo L-fruktokonfigurace.

Sp značí arylenový zbytek, který je modifikován v parapoloze s K a L a kromě toho může nést ještě další substituen, kterým může být methoxyskupina, nitroskupina nebo atom chloru,

R

přičemž

R značí atom chloru nebo hydroxyalkylaminoskupinu,

AA1 značí zbytek aminokyseliny, jako je lysin, alanin, kyselina asparagová, kyselina glutamová, glycin, ornithin, tyrosin, valin nebo serin, v D- nebo L-konfiguraci, nebo značí přímou vazbu. Aminokyselinový zbytek . ... . může . být .spojen s L jak přes a-aminoskupinu,. tak také popřípadě přes aminofunkci v postranním řetězci a také přes obě funkce a tedy nese popřípadě další skupinu K-Sp-L- , která je s první stejná nebo různá. Pokud nese AA1 další funkční skupiny, tak jsou tyto výhodně deblokované.

AA2 značí aminokyselinový zbytek, jako je lysin, alanin, glycin, serin, ornithin nebo kyselina diaminopropionová, v D- nebo L-konfigura- ci, nebo značí přímou vazbu. Aminokyselinový zbytek může být spojen s AA1 jak přes a-aminoskupinu, tak také popřípadě přes aminofunkce v postranním řetězci a také přes obě • · • 4 · ·· » 4 « · w ··»* *4 · 4 4 4 4 • 44 #49 44 ·

44 4> 4« 4444

444 444 44

4444 44 ·4· 4* 94 · funkce a tedy nese popřípadě další skupinu K-Sp-L-, která je s první stejná nebo různá. Pokud nese AA1 další funkční skupiny, tak jsou tyto výhodně deblokované.

C může značit bactracylin, methotrexat, chinolon-a, etoposid, camptothecin, daunomycin nebo doxorubicin, nebo dále definovanou chinolonkarboxylovou nebo nafthyridonkarboxylovou kyselinu Cytostatikum je s AA2 spojeno přes aminofunkci nebo hydroxyfunkci.

Jako edukty použité stavební prvky C , kyselina chinolonkarboxylová a kyselina nafthyridonkarboxylová, se dají znázornit obecnou strukturou vzorce III

T - Q , (III), ve kterém

Q značí zbytek vzorce

nebo »

• Φ Φ

Φ «

• ·Φφ

Φ

Φ · Φ ΦΦ přičemž

R^a značí popřípadě halogenem nebo hydroxyskupinou, jednou nebo dvakrát substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, vinylovou skupinu, popřípadě jedním nebo dvěma atomy fluoru substituovanou cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 uhlíkovými atomy, bicyklo[l.1.l]pent-l-ylovou skupinu, 1,l-dimethylpropargylovou skupinu, 3-oxetanylovou skupinu, methoxyskupinu, aminoskupinu, methylaminoskupinu, dimethylaminoskupinu, popřípadě halogenem, aminoskupinou nebo hydroxyskupinou, jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu, nebo může také společně s R^e tvořit také tam popsaný můstek,

R^ značí hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo nitromethylovou skupinu,

R^c značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo také může s R§ tvořit tam popsaný můstek,

R^ značí vodíkový atom, methylovou skupinu, fluormethylovou skupinu nebo methylenovou skupinu, χΐ značí vodíkový atom, atom halogenu, nebo nitroskupinu,

značí vodíkový atom, atom halogenu, áminoskupinu, hydroxyskupinu, methoxyskupinu, merkaptoskupinu, methylovou skupinu, halogenmethylovou skupinu nebo vinylovou skupinu, * 4 4 4

4 4

4 · » · 4 ···· ·· • ·

444

4

4«« • 4

Υ značí dusíkový atom nebo skupinu C-R^e , přičemž

R^e značí vodíkový atom, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu, methylovou skupinu, kyanoskupinu, ethylenovou skupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s R^a mohou tvořit můstek struktury -*o-ch₂-ch-ch₃ , -*s.ch₂ch₂- ,

-*S-CH₂-CH-CH₃ , -*CH₂-CH₂-CH-CH₃ nebo -*0-CH₂-N-R^ , přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým,atomem Y a přičemž f

R^x značí vodíkový atom, methylovou skupinu nebo formylovou skupinu a

D značí dusíkový atom nebo skupinu C-R® , přičemž

Rg značí vodíkový atom, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxy skupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně s R^c mohou tvořit můstek struktury -*o-ch₂- , -*nh-ch₂- , -*n(ch₃)-ch₂ ,

-*N(C₃H₃)-CH₂- nebo -*S-CH₂- , přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D , n značí číslo- 1, 2 nebo 3 a značí zbytek vzorce • φ· · ··

-CHj-N-R^ , přičemž značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a značí vodíkový atom, alkylovou skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo cyklopropylovou skupinu.

Obzvláště výhodné jako cytostatika jsou sloučeniny obecného vzorce III , ve kterém

Q značí zbytek vzorce

přičemž •4 444*

44

R^a značí popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou alkylovou skupinu se 2 až 4 uhlíkovými atomy, popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou cyklopropylovou skupinu nebo popřípadě fluorem jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu,

R.b značí hydroxyskupinu nebo alkoxyskupinu s 1 až 2 uhlíkovými atomy,

R^c značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo může společně s R^ tvořit tam popsaný můstek,

X·*· značí atom fluoru,

X značí vodíkový atom nebo amínoskupinu,

Y značí dusíkový atom nebo skupinu C-R^e , přičemž

R^e značí vodíkový atom, atom fluoru nebo chloru, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s R^amohou tvořit můstek struktury

-*O-CH₂-CH-CH₃ nebo -*O-CH₂-N-R^f , přičemž * označený atom je spojen.s uhlíkovým atomem Y a přičemž

-f

R znáči methylovou skupinu a

D značí dusíkový atom nebo skupinu C-R§ , přičemž

ΦΦ ΦΦ·Φ • · · · φ φ * · · · · · » φ « · • «φ φφφ φφφ φφ φφ φφ φφ φφφ · φ β · φφφ φφ φφφφφφ φφφ φ φ φφ φ

R® značí vodíkový atom, atom fluoru nebo chloru, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně s R^c mohou tvořit můstek struktury -*0-CH₂- , -*NH-CH₂- ,

-*N(CH₃)-CH₂ nebo -*S-CH₂- , přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D a

T značí zbytek vzorce

přičemž

R^¹ značí skupinu -N-R^ , přičemž

R^ značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu.

Rovněž obzvláště výhodné jsou glykokonjugáty s camptothecinem nebo jeho deriváty.

Obzvláštní význam maj í dále sloučeniny obecného vzorce I , ve kterém značí K, Sp a L vodíkový atom a C značí camptothecin. Tyto látky jsou nové, mohou se jako meziprodukty nechat reagovat na další deriváty sloučenin obecného vzorce I a vykazují samy již zajímavé spektrum farmaceutického účinku, obzvláště jako cytostatika.

φ φ · · φ φ ' φ φ φ φφ · φ · φ φ φφφ « · φ · φ · * φ φ» φφ φφ ΦΦΦΦ φφφ φφφ φφ φφφφφφ φφφ#· φφ φ

Sloučeniny podle předloženého vynálezu se mohou vyskytovat ve stereoisomerních formách, například jako enantiomery nebo diastereomery nebo jako jejich směsi, například jako racemát. Vynález se týká jak čistých stereoisomerů, tak také jejich směsí.

Směsi stereoisomerů se mohou, pokud je to potřebné, dělit pomocí známých způsobů na stereoisomerně jednotné součásti, například chromatografií nebo krystalisačními postupy.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu se mohou vyskytovat také ve formě svých směsí. Všeobecně je zde možno uvést soli s organickými nebo anorganickými basemi nebo kyselinami, jakož i inertní soli.

Ke kyselinám, které se mohou adovat, patří výhodně halogenovodíkové kyseliny, jako je například kyselina chlorovodíková a kyselina bromovodíková, obzvláště kyselina chlorovodíková, dále kyselina fosforečná, kyselina dusičná, kyselina sírová, mortofunkční a bifunkční karboxylové kyseliny a hydroxykarboxylové kyseliny, jako je například kyše- „ lina octová, kyselina maleinová, kyselina malonová, kyselina šfavelová, kyselina glukonová, kyselina jantarová, kyselina fumarová, kyselina vinná, kyselina citrónová, kyselina salicylová, kyselina sorbová a kyselina mléčná, jakož i kyseliny sulfonové, jako je například kyselina p-toluensulfonová, kyselina 1,5-naftalendisulfonová nebo kyselina camfersulfonová.

Fyziologicky neškodné soli mohou být stejně tak kovové jako amoniové soli sloučenin podle předloženého vynálezu,

to*	« to	to «·	·· «···

•	v	»	to ·	to	• to
*	•	• to	» to	to ·	··· *
*	•	•	to to	to	« ·
v«to·	• to		toto	• to	toto ·

které mají volné karboxylové skupiny. Obzvláště výhodné jsou například sodné, draselné, hořečnaté nebo vápenaté soli, jakož i soli amoniové, které jsou odvozené od amoniaku nebo organických aminů, jako je například ethylamin, diethylamin, triethylamin, diethanolamin, triethanolamin, dicyklohexylamin, dimethylaminoethanol, arginin, lysin, ethylendiamin nebo fenethylamin.

Příklady provedení vynálezu

Serie A : Biologické testy

P ř í k 1 a d A.l

Test inhíbice růstu pro stanovení cytotoxických vlastností glykokonjugátů bátracylinu a chinolonu-a

Buněčné linie lidského tlustého střeva SV 480 a HT 29 (ATCC-Nr. CCL 228 a HBT-38)^ , jakož i buněčná linie myšího melanomu B 16 F 10 se dají do misek roux do RPMI 1640 media za přídavku 10 % FCS . Potom se trypsinují a v RPMI plus 10 % FCS se nastaví počet buněk na 50 000 buněk/ml,

100 μΐ suspense buněk se dá do mikrotitrační destičky s 96 miskami a inkubuje se po dobu jednoho dne při teplotě 37 °C v atmosféře oxidu uhličitého v pomnožovací komoře. Potom se přidá dalších 100 μΐ RPMI media a 1 μΐ DMSO se zkoušenou látkou. Růst se kontroluje po třetím a šestém dnu. K tomu se ke každé mikromisce přidá 40 μΐ roztoku MTT [3-(4,5-dimethylthíazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolinbromid] s výchozí koncentrací 5 mg/ml H2O . Inkubuje se po dobu 5 hodin v atmosféře oxidu uhličitého v pomnožovací komoře. Potom se medium odsaje a přidá se 100 μΐ isopropylalkoholu na ·· ·· jednu misku. Po třicetiminutovém třepání se 100 μΐ vody se měří extinkce při 540 nm za použití Titertek Multiskan MCC/340 (Flov).

Cytotoxický účinek popsaných glykokonjugátů batracylinu je uveden v tabulce la jako hodnota IC^q pro buněčné linie SV 480 a HT 29 .

V tabulce lb jsou shrnuty hodnoty IC^q pro glykokonj ugáty chinolonu-a na buněčných liniích SV 480 , HT 29 a B 16 F 10 .

9999

9

Tabulka la

9999 9*

9 9 9

látka	IC 50 [μΜ] SW 480	IC 50 [μΜ] HT 29
Batracyiin	25	20
3.2 .	100	75
3.4	100	65
3.7	55	n.g.
3.9	40	55
3.10	100	125
3.11	85	n.g.
3.14	40	n.g.
3.18	15	n.g.
3.19	75	n.g.
3.20	100	n.g.
3.21 · ' .....	* - 90 '.......	n.g. '
3.23	50	n.g.
3.24	95	n.g.
3.26	50	n.g.
3.27	110	n.g.
3.28	60	n.g.
3.29	110	n.g.
3.30	>250	n.g.
3.33	. 90	70
4.1	25.	30
4.3	20	20

·· ··»

Tabulka la (pokračování) **·* ··

látka	1C 50 [μΜ] SW 480	IC 50 [μΜ] . HT 29
4.4	30	25
4.5	15	15
4.6	10	10
4.7	15	15
4.S	50	40
4.9	20	30
4.10	30	30
4.11	15	' 15
4.12	15	9
5.1	55	45
5.2	20	55
5.6 - -	>250.......	' n’g. -· '
5.8	100	>250
5.9	70	70
5:12	20	20
5.13	’ 20	40
5.14	20	30
5.15	>250	70
5.19	35	25
5.20	50	30
'5.21	⁶⁰	80
5.22	30	40
5.23	25	35

0000

0*0 0

0 0

00* »

0

0 »·

Tabulka la (pokračování) ··

0 0 0 0

0 0

0 0 0

0 0

0000 00 0

látka	IC 50 [μΜ] SW 480	IC 50 [μΜ] HT 29
6.2	40	50
6.3	70	105
6.7	60	>250
6.10	50	50
6.12	35	50
6.15	>250 .	>250
6.20	80	n.g.
6.21	¹⁵⁰	n.g.
6.23	107	45
6.25	50	40
6.28	40	25.
6.29	95	130
6.30	⁶⁰	70
6.32	60	60
6.34	50	n.g.
6.35	20	n.g.
6.36	70 ·	70
6.40	170	60
6.43	I 90	so
6.46	120	100
6.59	50	50 .
. 6.60	50	40
6.80	40	25

4444

Tabulka la (pokračování)

44 • 4 · · • 4

4 · 4 · 4

4444 *4 • 4 • · 4 · 4 • 4 4 4 · • 4 · 444»

4 ·4.

• 4 «4 4

látka	IC 50 [μΜ] SW 480	IC 50 [μΜ] HT 29
6.81	30	30
6.82	125	n.g-
6.83	90	. n.g.
6.85	22	n.g.
7.1	40	40
7.2	40	30
7.3	50.	n.g. .
7.5	80	n.g.
7.7	100	>250
7.8	40	30
⁷¹¹	30	25
7.12	- - _iQ - .	10
8.10	70	n.g.
8.11	45'	n.g.
8.12	30'	n.g.

• 0 «000 • 0 • 0

0« · * 0 0

0

0 0 000 0

0

Tabulka lb

látka _	IC 50 [μΜ] SW 480	IC 50 [μΜ] HT 29	IC 50 [μΜ] B 16 F 10
10.1	50	>250	15
10.2	4	3	5
10.3	5	4	0,7
11.2	30	n.g.	9
11.6	8	9	5
11.7	12	13	15
11.S	12	16	15
11.9	12	12	9
11.10	8	20	2
11.16	10	10	1,5
11.17	75	75	8
11.18	4,5	......3,5 -	' / 0,5
12.1	1	1,5	0,1 ,
12.2	4	n.d.	0,8
12.3	2	n.d.	0,3
12.5	1	4	0,2
12.6	. 4	7	0,3
12.7	60	>250	20
12.8	8	7	1
12.9	4 .	8	2
12,10	15	15 '	4
12,11	2	2	0,5

• 0

Tabulka lb (pokračování)

0 0 • 0 0 0

0 0

0*00 *0 ·0 00 0000 00*0 0· 0

0*0 · · 0 * * 00 «0*0

0 0 ·0

00« *· ** *

látka	IC 50 [μΜ] SW 480	IC 50 [μΜ] HT 29	IC 50 [μΜ] B 16 F 10
• 12.12	8	13	0,5
12.13	35	100	1
12.14	1	2	0,3
12.15	0,3	1	0,1
14.1	0,8	1	1,5
14.2	1	6	1,5
14.3	8	4	4
14.4	1,5	1	0,4
15.1	20	20	2
15.2	50	70	15
16.1 -	50	100	200
16.2	50	60	80
17.1	10	5	5
17.2	4	4	4
18.1 .	0,03	0,01	0,2
18.2	0,02	0,02	0,2
18.4	0,02	0,02	0,3
18.5	0,2	0,2	1
18.9	0,08	0,06	0,7
18.14	0,015	0,01	0,08

• 9 ···

9 9 * · · 9

«99 9 • «9

Závislost biologického účinku na uhlohydrátu je dodatečně doložena neúčinností srovnávacích sloučenin bez uhlohydrátů podle příkladů 5, 6 a 11 , totiž

N-[N^alfa,N^eP^silon-bis-(4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl)-lysyl] -batracylinu, N- [N^a-'-^^a,N^eps-’-^^on-bis- (4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl) -lysyl-D-alanyl] -batracylinu a N- [N^al^^a,N^eP^s:’-^lon-bis- (4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl) -D-lysyl-chinolonu-a (hodnoty ÍC^q > 250) .

Příklad A.2

Zkouška in-vitro štěpitelnosti glykokonjugátů

Kinetika štěpení s lidskou krví

1,225 ml lidské krve se inkubuje s 1,25 ml PBS a 25 μΐ základního roztoku substrátu (1 mg/ml ve 3% DMSO v PBS) při teplotě 37 °C . Po jedné hodině a 24 hodinách se odeberou vzorky 1 ml, smísí se s 1 ml ethylalkoholu a nechají se stát po dobu 20 minut při teplotě 4 °C . Po centrifugací (5 minut při 3500 otáčkách za minutu) ( se odebere lob μΐ kapaliny pro HPLC-analysu.

Kinetika štěpení s buňkami

2,25 ml PBS se inkubuje společně se 225 μΐ buněčné suspense (30 mg/ml) a 25 μΐ základního roztoku substrátu (1 mg/ml ve 3% DMSO v PBS) při teplotě 37 °C . Po jedné hodině a 24 hodinách se odeberou vzorky 1 ml, smísí se s 1 ml ethylalkoholu a nechají se stát po dobu 20 minut při teplotě 4 °C . Po centrifugací (5 minut při 3500 otáčkách za minutu) se ode- bere 100 μΐ kapaliny pro HPLC-analysu.

4 4 4 4 4

4« *4

4 4 ·

4 4

444» 44 • v • 4 *

44 4

4

Podmínky HPLC

Přístroj : sloupec : eluent :

tok :

vlnová délka gradient :

zařízení Vaters

Bischoff Hypersil OCS RP 18 5 gm 250x4 mm A : 10 mM kaliumfosfátového pufru pH 4,5 B : 80 % acetonitril/20 % voda ml/min

372 nm
0	min
10	min
15	min
18	min
20	min

% B 60 % B 60 % B 10 % B 60 % B

Eluent pro konjugáty chinolonu-a :

A : 100 % methylalkohol

B : 10 mM kaliumfosfátový pufr pH 2,2 mM kyselina heptansulfonová.

Tabulk.a 2a

Př.	% štěpení v lidské krvi	% štěpení v SW-480	% štěpení v hepatoma
1 h	24 h	1 h	24 h	1 h	24 h
3,4	n.d.	n.d.	74*	n.d.	98*	n.d.
3,9	0	54*	28*	100*	32*	100*
4,4	0	0	0	0	0	0
5,9	0	0	0	0	0	0
6,2	n.d.	n.d.	0	0	0	0
6,12 .	n.d.	n.d.	0	0	0	0
7,3	0	0	0	0	0	0

«· fe··· ·· ··

I · · « • ·· • · · · · · · ···.·· « ·· ·· ···· • · · · · ··♦ ·· ·· · * produkt štěpení je N-[D-alanyl]-batracylin

Tabulka 2b

Př.	% štěpení v lidské krvi	% štěpení v SW-480	% štěpení v hepatoma
1 h	24 h	.lh	24 h	1 li	24 h
Π,2	0	0	0	0	0	0
. 11,6	0	11%	0	8%	0	12%
11,7	0	0	0	0	0	0
12,1	0	0	0	0	0	0
12,3	0	0	0	0	0	0
12,8	0	0	0	0	0	0

P ř í k 1 a d A.3

Zkouška rzptýleni v orgánech

Pro všechny experimenty se používají athymické lysé myši (kmen NMRI nu/nu), které byly vypěstovány v Drug Development Laboratory, Oncotest GmbH prof. Η.H. Fiebigem, Freiburg. Zvířata byla udržována v macrolonových klecích za podmínek laminar flow. Jako nádorový materiál se použije tkáň buněčné linie SV 480 , která byla předem zpracována v několika pasážích v lysých myších.

až 8 týdnů starým lysým myším se pro každé zvíře implantují dva nádory subcutánně do obou slabin. Až do okamžiku randomisace se zvířata ponechají 26 až 27 dnů. Střední velikost nádoru je potom 500 mg , což odpovídá průměru nádoru asi 10 mm.

- 30 «9 9 «9 99 999*

99 »9 99 9 · 9 9 *9«

99 · 9 99 9999

9 9 9 9 « 9 · 9 · 9 9 · 9 9

Farmakokinexika samotná probíhá následujícím způsobem :

Lysým myším se injikuje zkoušená substance a myši se potom až do odběru vzorků po . 1/2 h , popřípadě po 4 h umístí do klece. Odběr vzorku samotný začíná odběrem krve. K tomu se myši umrtví pomocí etheru pro narkosu (doba 1/2 až 1 minuta) . 0,5 h , popřípadě 4 h po injekci substance se otevře břišní otvor a myš se v narkose zbaví krve přes véna cava caudalis během 1 až 2 minut, načež se usmrtí zlomením vazu. Tím dochází ke klidovému stavu centrálního oběhu a k zastaveni perfuse orgánů. Potom se odpreparují a vyjmou jednotlivé orgány, což je postup, který zabere asi 5 minut.

Ihned potom se vzorky orgánů a potom zbylé tělo zváží a zmrazí se v kapalném dusíku.

Substance konjugát 1 se aplikuje v dávce 300 mg/kg tělesné hmotnosti i.p. a substance kinjugát 2 se aplikuje v dávce 100 mg/kg tělesné hmotnosti i.v., do ocasní tepny. Pro každou substanci a časový úsek se použije vždy 5 zvířat.

Souhrn výsledků pro konjugát 1 je uveden v tabulce 3 a pro konjugát 2 v tabulce 4 .

A. Kalibrační řada :

5, 10, 50, 100 a 200 μg substance, rozpuštěných ve směsi ethylalkoholu a vody (1:1 v/v), se přidá k 1 g hovězích jater, načež se směs rozetře s 1 g mořského písku a 2,5 ml ochlazené směsi ethylalkoholu a vody (1 : 1 v/v) a vzorky se odstředí po dobu 2 minut při 3500 otáčkách za minutu. Po odebrání kapaliny se zbytek znovu rozmíchá se

2,5 ml směsi ethylalkoholu a vody, odstředí se a kapaliny se v νι·

9 9 9 · 9 9 · 9 9 9 «99 9«9 99 « «99 9«« 99

9999 99 9·9 9« ·· ·

spojí. Potom se odebere 100 μΐ a analysuje HPLC . Podmínky HPLC :	se pomocí
Přístroj :	zařízení	Vaters
sloupec :	Bischoff	Hypersil ODS RP18	5 μπι 250x4 mm
eluent :	A : 80 %	acetonitril, 20 %	voda
	B : 10 mM kaliumfosfátového	pufru pH 4,5
gradient :	0 min	90 % B
	10 min	40 % B
	15 min	40 % B
	18 min	90 % B
	20 min	90 % B
tok	1 ml/min
vlnová délka :	372 nm .
B. Zpracování	orgánů

Zpracování orgánů se provádí analogicky jako je popsáno v odstavci A. , přičemž se všechny orgány zpracují se 2,5 ml směsi ethylalkoholu a vody a extrahují se.

C. Zpracování krve

Odebrané množství krve se smísí se 2 ml směsi ethylalkoholu a vody (1:1, v/v) , odstředí se po dobu 2 minut při 3500 otáčkách za minutu a kapalina se oddekantuje. Ke zbytku se znovu přidají 2 ml směsi ethylalkoholu a vody (1:1, v/v) , odstředí se a kapaliny se spojí. 100 μΐ těchto spojených kapalin se analysuje pomocí HPLC za podmínek, používaných v odstavci A .

• · · · · ·

NaOOC

OH *4 ··♦

Tabulka 3

vyhodnocení vzorků orgánů
orgán	látka	střední hodnota 1 h (Ug/g orgán)	střední hodnota 4 h (pg/g orgán)
krev	konjugát 1	31,2
	batracylin	-	-
nádor	konjutát 1	56,6	24,4
	batracylin	-	-
játra	konjugát 1	770	126
	batracylin	34,1	22,4
ledviny	konjugát 1	81	78,4
	batracylin	26,1	27,5
mozek	konjugát 1	-	-
	. batracylin		-

Tabulka 4

vyhodnocení vzorků orgánů
orgán	látka	„ střední hodnota 0,5. h (pg/g orgán)	střední hodnota 4 h , . (pg/g orgán)
krev	konjugát 2	6,5
	batracylin	-	-
nádor	konjutát 2	2,0	-
	batracylin	2,5	3,12
játra	konjugát 2	0,9	1,2
	batracylin	-	-
ledviny	konjugát 2	17,5	0,5
	batracylin	10,7	0,8
mozek	konjugát 2	-	-
	batracylin	-	-

99 « 4 4 9

9 «

Φ Φ · ·

Φ Φ

ΦΦΦΦ Φ· • 9

Φ« >φΦ

ΦΦΦ

ΦΦΦ ·Φ

Příklad Α.4

Stanovení akutní toxicity glykokonjugátů batracylinu (jednorázová aplikace)

Akutní toxicita derivátů batracylinu se stanovuje na nu/nu lysých myších.

Intravenosně aplikované substance se vstřikují jako vodné roztoky a intraperitoneálně aplikované substance se vstřikuji jako DMSO-roztoky v koncentracích až 400 mg substance pro kg myši.

Tolerovaná jednorázová dávka se kalkuluje na základě úbytku hmotnosti zvířat až do 21, dne po aplikaci a podle počtu přežitých zvířat.

Tolerovatelné jednorázové dávky substancí jsou uvedené v tabulce 5 .

Tyto tolerovatelné dávky jsou pro substance 3.16 ,

3.33 , 3.9 , 6.12 , 6.14 , 6.2 , 6,81 a 8.2 přes 200 mg pro kg myši. U substancí 3.33 , 6.12 , 6.14 , 6.2 a 6.81 nelze ještě při dávce 400 mg/kg prokázat žádnou akutní toxicitu.

Naproti tomu je cukru prostý lysyl-D-alanyl-batracylin (2.13) již při jednorázové dávce 25 a 50 mg/kg myši zřetelně toxický.

φφ. φφ φ φ φ φ φ φφ

ΦΦ ΦΦΦΦ φφ

Tabulka 5

Maximálně tolerovatelná jednorázová dávka derivátů batracylinu a chinolonu-a

' Př. '	ř tolerovaná jednorázová dávka v mg/kg myši
	i.p. i.v.
2.13	50	25
3.4	200 .	<100 (2 zvířata zahynula)
3.9	200	200
3.16	>200	n.d.
3.33	n.g.	>400
6.2	>400	n.g.
6.12	n.g.	>400
6.14	>400	n.g.
6.81	n.g.	>400
8.2	>200	n.d.
Chinolon-a	n.d.	<25
12.3	n.d.	>200

* · · · * · • · · · • · · • · · · · · ·· ·

Příklad A.5

Stanovení akutní toxicity po vícenásobné aplikaci

Substance se aplikuje zčásti i.v. a zčásti i.p. , buď ve dnech 1 až 4 a 7 až 10 , nebo ve dnech 1, 5 a 9 . Dávkování činí 400, 200 a 100 mg/kg/den. Vyhodnocení se provádí podle úbytku hmotnosti až do 21. dne a podle počtu přežívajících zvířat. Při pokusech se pro každou substanci a dávku použije 5 zvířat. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 6 .

Tabulka 6

Maximálně tolerovatelná dávka při vícenásobné aplikaci

	aplikace	dávek za den	MTD mg/kg/ den
3.9	i.v.	1-4,7-10 1-4	l l ►*-· ΐ_Λ O o o
3.33	i.v.	1,5,9	>400
6.2	i.p.	1-4, 7-10 1, 5, 9	-400 >400
6.12	i.v. .	1-4, 7-10 1,5,9	>400 >400
6.14	i.p.	1,5,9	>400
6.81	i.v.	1-4, 7-10 1, 5,9	-200 >400
Batracylin	i.p.	1,5,9	-100

·· 4 44 4 · ·· • · · ·

4 · • 4 4 4

4 ·

444« 44

44 · 4 4· · • · 4 · 4 4 · 44 444· · · 4 4 • 44 44 ·4 4

Příklad A.6

Hematopoetická aktivita glykokonjugátů chinolonu-a ve srovnání s odpovídající účinnou látkou

Materiál a metody in vitro :

Buňky kostní dřeně se spláchnou ze stehenní kosti myši. 10$ buněk se.inkubuje v McCoy 5A-mediu (0,3 % agaru) společně s rekombinantním murinním GM-CSF (Genenzyme; tvorba kolonii základních buněk) a se substancemi (10~^ až 100 gg/ml) pří teplotě 37 °C a 7 % C0₂ · Po 7 dnech se spočítají kolonie (> 50 buněk) a shluky (17 až 50 buněk).

in vivo :

Myši se subkutánně ošetří 1, 3, 10 a 30 substancí. V různých časových obdobích (3, 24 hodin po injekci) se stehenní kost odstraní a mg/kg , 48 a 72 isolují se buňky kostní dřeně. 2 x 10$ buněk se inkubuje jak je popsáno výše s GM-CSF a po 7 dnech se spočítají kolonie a shluky.

Výsledky :

Jak je patrno z tabulky 7 , vykazují zkoušené glykokonjugáty inhibici proliferace základních buněk kostní dřeně, sníženou ve srovnání s chinolonem-a o faktor 10^ až 10³ .

«· 9·*4 • · · · • · ···· ··

Také in vivo'se nepozoruje ve srovnání s chinolonem-a žádná inhibice proliferace základních buněk sloučeninou

12.3 až 30 mg/kg . Již se 3 mg/kg chinolonu-a se indukuje masivní suprese proliferace základních buněk.

Tabulka 7

CSF-indukovaná proliferace základních buněk kostní dřeně

Příklady Chinoton-a	1C_5O 0,0002	[pg/mf]
11.2	22,5
11.7	2,9
¹²¹	0,21
12.3	0,27
12,6	0,3
12.S	0,3
14.1	2,9
14.2	3,6
14.4	3,6

Přík.lad A.7

Antineoplastická aktivita chinolon-a-konjugátů

In-vitro-aktivita glykokonjugátů chinolonu-a se stanovuje na lidském tumorxenograftu v systému dvouvrstvé kultury měkkého agaru podle Hamburgera a Salomona (Science 197: 461-463) .

t« ···♦ » · * • · · • •o « • · ·« « • · ·· 4· • · · • · • · ·*· »·

• «

Solidní nádory se nejprve pasážují v athymických lysých myších (NMRI nu/nu) , operativně se získají a mechanicky se rozmělní. Jednotlivé buňky se potom získají inkubací v enzymové směsi kollagenázy 0,05 % , DNA-ázy 0,07 % a hyaluronidázy 0,1 % v RPMI při teplotě 37 °C po dobu 30 minut. Buňky se dvakrát promyjí a potom se převedou přes síto se 200 gm a vzdálenností ok 20 gm .

Použije se následující kultivační metoda :

Spodní vrstva obsahujem 0,2 ml Iscóves’s Modifíed Dulbeccos Medium se 20 % fetálního telecího séra a 0,7 % agaru. Na tuto vrstvu se nanese ve 24 nádobkové plotně 40 000 až 200 000 buněk v 0,2 ml toho samého media a 0,4 % agaru. Cytostatické substance se přidávají v 0,2 ml media.

Kultury se inkubují při teplotě 37 °C v 7% atmosféře oxidu uhličitého po dobu 6 až 15 dnů. Potom se vzrostlé kolonie spočítají v invertmikroskopu, přičemž se 24 hodin před vyhodnocením vybarví žijící kolonie pomocí terazoliumchloridového barvivá.

Efekt účinné látky se vyjadřuje v procentech přežívajících kolonií ve srovnání s počtem kolonií neošetřených ploten (T/C = počet kolonií ošetřených x 100/počet kolonií neošetřených)

Substance je aktivní, když hodnota T/C £ 30 % .

V následující tabulce 8 je tato hodnota jako hodnota ^IC70 ^v Ag/^ml · ·· · · · • · · · • · « • * · * * « ·*♦· ··

Tabulka 8

	^IC70 ¹
Př.	11.7	12.1	12.3	12.5	Chino! on-a
CXF 280	>100	70	5	<0,3	0 ;<
HT 29	56	6	5	11	20
SW 480	18	8	11	10	3
LXFL 529	4	0.9.	2	2	-i
LXFS 538	18	0,4	'0,5	<0,3	<0,3
MEXF 989	Λ J	<0,3	<0,3	0,5	<0,3
OVXF 899	234	45	162	55	2
OVXF 1023	136	12	10	9	0,5

Příklad A.8

Pokusy ín-vivo :

Metoda :

Myši se v den 0 inokulují 5 x 10^ nádorových buněk B16F10 . Nádory transplantovaná zvířata vyvíjejí solidní perítoneální nádory a ošetřují se potom denně testovanými substancemi, popřípadě se ošetřují vehikulem jako kontrola. V kontrolní skupině pojde normálně 50 % zvířat mezi dnem 14 a 20 . Testované substance se aplikují v pufru nebo v systému organických rozpouštědel, sestávajícím ze 20 % methylalkoholu a 20 % dimethylsulfoxidu v 0,7% roztoku chloridu sodného.

Dávka vehikula nevykazuje žádný vliv na přežití • to toto · ·· ·* ···· ···· · · · to ·· · oa· · · · ·« to ·· ·· ·· ·· ···· • to to ··· toto • •••toto to · · ·« to· * zvířat. Terapeutický úspěch vyplývá z prodloužení doby přežití ošetřených zvířat. Snášenlivost sloučenin se paralelně analysuje na zvířatech, která nenesou nádor. Ze snášenlivosti a prodloužení doby přežití se může odvodit terapeutický index.

Tabulka 9 % přežívajících

	den 0	den 20	den ; 25	den 30	den 35
kontrola	100	70	30	10	10
11.12 1 mg/kg	100	90	60	30	30
11.12 (lOOmg/kg)	100	100	100	90	90
Chinolon-a. (0,1 mg/kg)	100	100	100	60	40
Etoposid (5mg/kg)	100	, .90	80 ..	. 80	-70

Tabulka 9 ukazuje terapeutickou účinnost sloučenin z příkladu 11.12 na myších, kterým byl transplantován nádor B16F10 .

Příklad A.9

In-vivo inhíbice růstu nádoru za použití modelu lysých myší

999« «« ·* • · · ♦

Q » · • 9 9 9

9 ·

9··· 99

I 99 99 4 » * < 9 · 99

Materiál :

Pro všechny in-vivo experimenty pro zkoumání inhibice růstu nádorů se používají athymické lysé myši (kmen NMRI nu/nu). Zvolený velkobuněčný karcinom plic LXFL 529 se vyvine sériovým pasážovánim na lysých myších. Lidský původ nádoru je doložen isoenzymatickými a imunohistochemickými metodami.

Stavba experimentu :

Nádor se implantuje do obou slabin lysých myší nu/nu o stáří 6 až 8 týdnů. Ošetření se nastartuje jakmile nádory dosáhnou průměru 5 až 7 mm. Myši se zařadí do skupiny pro ošetření a kontrolní skupiny (5 myši pro skupinu s 8 až 10 vyhodnotitelnými nádory) randomisací. Jednotlivé nádory kontrolní skupiny rostou všechny progresivně. Velikost nádorů se měří ve dvou rozměrech pomocí posuvného měřítka. Objem nádorů, který dobře koreluje s počtem buněk, se potom použije pro všechna vyhodnocení. Objem se počítá podle vzorce délka x šířka x šířka/2 ([a x b^]/2 ; a a b j sou dva pravoúhle měřené průměry).

Hodnoty relativního objemu nádoru (RTV) se počítají pro jednotlivý nádor dělením velikosti nádoru v den X velikostí nádoru v den 0 (v okamžiku randomisace). Střední hodnoty RTV se potom použijí pro další vyhodnocení.

inhibice přírůstků objemu nádoru (objem nádoru testované skupiny/kontrolní skupiny, T/C, v procentech) je závěrečná měrná hodnota.

«9 9999

MM 91 » 9 «

9 *

Ošetření :

Všechny sloučeniny se podle plánu aplikují v den 1, 5 a 9 . Dále se všechny sloučeniny aplikují intraperitoneálně (i.p.) za použití vody jako rozpouštědla.

Tabulka

terapie	látka^a) [mg/kg/den]	doba přežití [dny]	počet nádorů	relativní objem nádoru [% ze dne 0]^b)	optimální : T/C^b)
Kontrolt- gruppc	-	19 >21 14	>21 >21	10	1552'	100 %
		23	>26
12.6	100	26	>26	8	300.7	19.4 %
		>26				-
		>21	>21
12.8	50	>21	>21	9	502.2..,. . .	32.31.% _
		>21
		23	>26'
12.14	25	19	26	8	519.5	33.5%
L-		. >26

a) maximálně tolerovaná dávka (MTD)

b) v den 19

Camptothecin-sloučeniny serie příkladů 18 vykazují v tomto testu zpravidla srovnatelný nebo lepší účinek.

V ·	4 4		4	« 4	* a	4 4« 4
4 4	4	4	44 «	•	4* ·
4	•	* 4	»' 4	4 4	444	4
•	4	4	4 «	4	4	4
«44*	4*		44 4	4	4 4	4

Serie příkladů B

Příklady syntesy

Příklad 1.1 p-Aminofeny1- 2-Q-methy1-β-L-fúkosid

OH Me

1.1. a) p-Nitrofenyl-3,4-0-isopropyliden-p-L-fukosid

Roztok p-nitrofenyl-p-L-fukosidu (750 mg, 2,63 mmol) ve 40 ml směsi dimethylf ormamidu a dioxanu (1 ; 2) se pří teplotě 0 °C smísí se 65 mg kyseliny p-toluensulfonové a ve třicetiminutových intervalech s 5 x 10 μΐ 2-methoxyprópenu. Po šestnáctihodinovém míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie (díchlormethan/methylalkohol 99 : 1) . Po zahuštění se získá 710 mg .(83 %) bílé pevné látky.

1.1. b) p-Nitrof enyl-2-0-methyl-3,4-0-isopropyliden^-L“fukosid

100 mg (0,307 mmol) sloučeniny z příkladu 1.1.a) se předloží společně s 96 μΐ methyljodidu do 10 ml tetrahydrofuranu a potom se po částech smísí s 11 mg hydridu sodného (80%) . Po tříhodinovém mícháni při teplotě 20 °C

- 45 ΦΦΦΦ φφ φφ φφ · · φφ φφφφ · φ a φφφ a φ > φφφ φ φ * · φ φφφ φ φ » se ještě jednou přidá 96 μΐ methyl jodidu a 11 mg hydridu sodného. Po dalších 16 hodinách míchání při teplotě 20 °C se přidá malé množství vody a 100 ml dichlormethanu.

Vsázka se dvakrát vytřepe vodou, organická fáze se zahustí a produkt se potom čistí pomocí sloupcové chromatografie za použití směsi petroletheru a ethylesteru kyseliny octové ' (8:1).

Výtěžek : 78 mg (75 %) .

1.1) p-Aminofenyl-2-0-methyl-p-L-fukosid mg (0,23 mmol) p-nitrofenyl-2-0-methyl-3,4-0-isopropyliden-p-L-fukosidu se míchá po dobu 16 hodin při teplotě 20 °C ve 3 ml 80% kyseliny octové. Potom se kyselina octová ve vakuu odstraní, vsázka se smísí s 10 ml methylalkoholu a po přídavku oxidu platiěitého se hydrogenuje ve vodíkové atmosféže za mírného přetlaku. Získaná suspense se potom přefiltruje přes celíte a filtrační koláč se promyje methylalkoholem. Po chromatografickém čištění za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (97,5 : 2,5) se získá 77 mg (80 %) v názvu uvedeného produktu (ĎC: dichlorměthan/methýlalkohol 9 : 1 ; Rj? = 0,42) .

Přiklad l.2 p-Aminofenyl-3-0-methyl-P-L-fukosid

Me, O °

HO

OH

NH.

OMe • · • ·

1.2.a) p-Nitrof enyl-3-0-methyl.-^-L-fukosid g (21 mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukosidu ve 300 ml absolutního methylalkoholu se smísí se 7,84 g (31,5 mmol) dibutylcínoxidu a reakční směs se zahřívá po dobu 2 hodin k varu pod zpětným chladičem. Potom se zahustí, získaný zbytek se vysuší a potom se vyjme do 300 ml dimethylformamidu. Po přídavku 15,7 ml methyljodidu se vsázka míchá po dobu 40 hodin při teplotě 70 °C . Rozpouštědlo se potom ve vakuu odstraní a získaný zbytek se vyjme do 300 ml dichlormethanu. Suspense se přefiltruje, zbylý roztok se znovu zahustí a podrobí se mžikové chromatografií za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu 99 : 1 . Po zahuštění se získá 3815 mg (61 %) v názvu uvedené slouče-. niny.

1.2) p-Aminofenyl-3-0-methyl-p-L-fukosid

3,81 g (12,73 mmol) p-nitrofenyl-3-0-methyl-p-L-fukosidu se hydrogenuje analogicky jako je popsáno v příkladě

1.1) . Výtěžek : 3 g (88 %) [DC: dichlormethan/methylalkohol 9 : 1 ; R_f = 0,53) .

t

Přiklad 1.3 p-Aminofenyl-3-0-methyl-a-L-fukosid

OMe

ΦΦ *φφφ • φ · · * φ φ φ · · • φ

ΦΦΦΦ φ φ

Výroba se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 1.2 , přičemž se vychází z p-nitrofenyl-a-L-fukosidu. Výtěžek : 63 % přes dva stupně. [DC: dichlormethan/methylalkohol 9 : 1 ; Rf = 0,39) .

Příklad 1.4 p-Aminofenyl-4-O-methyl-p-L-fukosid

OH

1.4.a) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-4-0-acetyl-p-L-fukosid g (3,5 mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukosidu ve 100 ml absolutního tetrahydrofuranu se smísí se 31 mg kyseliny p-toluensulfonové a 1134 mg (7 mmol) triethylorthoacetátu._ Po patnáctiminutovém míchání při teplotě 20 °C se rozpouštědlo ve vakuu oddestiluje, získaný zbytek se vyjme do 50 ml tetrahydrofuranu a 3 ml dimethylformamidu a smísí se se 4165 μΐ benzylbromidu a 210 mg hydridu sodného (60%). Po jednohodinovém míchání při teplotě 20 °C se přidá 10 ml 80% kyseliny octové, zahustí se a získaný zbytek se čistí

I ' pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (99 : 1) . Po zahuštění a usušení se získá 1236 mg (85 %) v názvu uvedené sloučeniny.

1.4 . b) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3-0-acetyl-4-0-tnethyl-p-L-fukosid •9 9999 • 9 '99

9 9 « 9 9 9

9 9 «*«· «9 • 9

1000 mg (2,39 mmol)- p-nitrofenyl-2-0-benzyl-4-0-acetyl-β-L-fukosidu se rozpustí v 60 ml benzenu. Po přídavku 2988 μΐ rnethyljodidu a 1109 mg oxidu stříbrného se reakční směs zahřívá po dobu 8 hodin k varu pod zpětným chladičem. Vzniklá směs produktů se rozdělí na komponenty pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (99 : 1) . Vedle 653 mg (63 %) isomerního p-nitrofenyl-2-0-benzyl-3-0-methyl-4-0-acetyl-β-L-fukosidu se jako bílá pevná látka Isoluje 239 mg (23 %) p-ni trof enyl-2-0-benzyl -3-0-acetyl- 4-0-methyl- β-L-fukosidu .

1.4) p-Aminofenyl-4-0-methyl^-L-fukosid

224 mg (0,52 mmol) p-nitrofenyl-2-0-benzyl-3-0-acetyl-4-0-methyl-p-L-fukosidu se rozpustí ve 20 ml methylalkoholu a smísí se se 390 μΐ 1 N roztoku methylátu sodného. Po šestnáctihodinovém míchání při teplotě 20 °C se směs neutralisuje 80% kyselinou octovou, zahustí se a vyjme se do dichlormethanu. Organická fáze se promyje 1 N roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší se a zahustí. Získaný zbytek se vyjme do 20 ml methylalkoholu a hydrogenuje se na palladiu na aktivním uhlí analogicky jako je popsáno v příkladě 1.1) . Po zahuštění se produkt vyjme do vody a lyofilisuje se. Isoluje se takto 119 mg (88 %) bílé amorfní pevné látky [DC: dichlormethan/methylalkohol 9:1; =0,38).

*0 0000

0 0 • 00

0 · « • 0

0* ·

00 • 0 0

0 • * * •000 00

0

Příklad 1.5 p-Aminofenyl-3-O-n-propyl-β-L-fukosid

1.5. a) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3-0-n-propyl-4-0-acetyl-p-L-fukosid

Analogicky jako je popsáno v příkladě 1.4.b) se vyrobí ze sloučeniny 1.4.a) s propyljodidem isomerní produkty 3- a 4-propylace a oddělí se chromatograficky. Získá se takto p-nitrofenyl-2-0-benzyl-3-0-n-propyl-4-0-acetyl^-L-fukosid ve 49% výtěžku vedle p-nitrofenyl-2-0-benzyl-3_T-0-acetyl-4-0-n-propyl-p-L-fukosidu ve ,29% výtěžku.

1.5.b) p-Aminofenyl-3-0-n-propyl-P-L-fukosid

Syntesa se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 1.4) z produktu z příkladu 1.5.a) frakce 1 . Výtěžek : 78 % [DC: dichlormethan/methylalkohol 9 : 1 ; Rf = = 0,42) .

Příklad 1.6 p-Aminofenyl-3-desoxy-β-L-fukosid

- 50 » 9 9 * • 9 · «9 · 9

9 9

999 9« «* 999* • · 9 9 9 e 9 9 » V « 99 999 9

9 ·9 «9 99 9

1.6.a) p-Nitrofenyl-3,6-dídesoxy-3-chlor-4-0-acetyl-p-L-gulosid g (3,5 mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukosidu ve 100 ml tetrahydrofuranu se smísí se 31 mg kyseliny p-toluensulfonové a 1134 mg (7 mmol) triethylorthoacetátu. Po patnáct iminutovém míchání při teplotě 20 °C se rozpouštědlo ve vakuu oddestiluje a přidá se 100 ml nasyceného roztoku chlorovodíku v dichlormethanu. Po reakční době 10 minut se směs zahustí a produkt se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (99 :

1) . Získá se takto 793 mg (65 %) v názvu uvedeného produktu. [DC: dichlormethan/methylalkohol 9 : 1 ; =

0,36) ,

l.ó.b) p-Nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-p-L-gulosid

375 mg (1,08 mmol) p-nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-4-0-acetyl-p-L-gulosidu se rozpustí ve 25 ml methylalkoholu a smísí se s 10 kapkami 1 N roztoku methylátu sodného. Po 20 minutách se okyselí kyselinou octovou, zahustí se a rozdělí se mezi 400 ml dichlormethanu a 60 ml vody. Organická fáze se vysuší, zahusti a vysráží se ze směsi dichlormethanu a diethyletheru. Získá se takto 315 mg (96 %) v názvu uvedeného produktu.

'4 4 «

• · · 4444 44

44 4* 4444

4 · · 4 4

4 4 4 4 4 > 44 444 4

4 4 4 4 «44 4« 44 4

1.6) p-Aminofenyl-3-desoxy-β-L-fukosid

315 mg (1,04 mmol) p-nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-3-L-gulosidu se rozpustí ve 40 ml methylalkoholu, smísí se se 200 mg palladia na aktivním uhlí a se 290 μΐ triethylaminu a hydrogenuje se ve vodíkové atmosféře při nepatrném přetlaku po dobu 4 dnů. Suspense se potom přefiltruje, promyje, zahustí a produkt se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (97,5 : 2,5). Získá se takto 160 mg (65 %) desoxysloučeniny [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 , R_f = 0,18] .

Přikladl.7 p-Áminofenyl-3,4-didesoxy-β-L-fukosid

400 mg (1,16 mmol) p-nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-4-0-acetyl~p-L-gulosidu (příklad 1.6.a)) se rozpustí v 55 ml methylalkoholu, smísí se se 323 μΐ triethylaminu a hydrogenuje se ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku za použití palladia na aktivním uhlí (10%). Po šestnáctihodinovém míchání při teplotě 20 °C se směs přefiltruje přes celíte, promyje se, zahustí a znovu se vyjme do 100 ml methylalkoholu. Potom se přidá 1,5 ml 1 N roztoku methylátu sodného a míchá se po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se zneutralisuje kyselinou

4' 4 4 4

·.· •

4'

4 4 4 • 4 • 4 444

4

Ο · ··♦ 4 ·

4« octovou, zahustí se a vzniklé produkty se rozdělí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (97,5 ; 2,5) . Po zahuštění odpovídajících frakcí a přesrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá 120 mg (46 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 , Rf = 0,31] vedle 77 mg (28 %) p-aminofenyl-3-desoxy-p-L-fukosidu [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 ; 5 , Rf = 0,18] .

Přikladl.8 p-Aminofenyl-3,4-epoxy-p-L-fukosid

mg (0,23 mmol) p-nitrofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-4-0-acetyl-p-L-gulosidu (příklad 1.6.a)) se vyjme do 10 ml methylalkoholu á smísí se se 345 μΐ 1 N roztoku methylátu sodného. Po jednohodinovém zpracování ultrazvukem se směs okyselí 80% kyselinou octovou, Zahustí se a chromatograf uje sě za pomoci směsi dichlormethanu a methylalkoholu (99 : 1) . Po zahuštění relevantních frakcí se získaný zbytek vyjme do methylalkoholu a hydrogenuje se na palladiu na aktivním uhlí analogicky jako je uvedeno v příkladě »

1.1). Získá se takto 46 mg (75 %) v názvu uvedené sloučeniny (FAB-MS ; m/e = 238 = M + 1) .

toto ···· toto · to o' · ♦ toto to » · • to · • to to» • to · *

Oto to • « · • · · ···· ·· ό

to

Příklad 1.9 p-Aminofenyl-4-desoxy-β-L-fukosid

OH

Tato sloučenina se vyrobí analogicky jako je popsáno v předpisu T. Lindhorsta a J. Thiema v Carbohydr. Res. 209 (1991), 119 , když se vychází z p-nitrofenyl-p-L-fukosidu přes p-nítrofenyl-2,3-di-0-benzoyl-4,6-didesoxy-4-jodo-β-L-fukosid [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 , R^ = = 0,3] ·

Přikladl. 10 p-Aminofenyl-3-O-karboxymethyl-β-L-fukosid

1.10.a) p-Nitrofenyl-3-0-methoxykarbonylmethyl-p-L-fukosid g (3,5 mmol) p-nitrofenyl^-L-fukosidu a 1,3 g ·· ···· v » » · · · * β · * * · · · • · · ··«· ·· · ·· • · · · «ο © · • » · ©·· • · · φ ·· · (5,2 mmol) dibutylcínoxidu se zahřívá v 50 ml methylalkoholu po dobu 2 hodin k varu pod zpětným chladičem. Roztok se potom zahustí, získaný zbytek se vyjme do 50 ml dioxanu, smísí se se 2 ml methylesteru kyseliny bromoctové a 100 ml tetrabutylamoniumjodidu a zahřívá se po dobu 16 hodin k varu pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo se potom odpaří a získaný produkt se čistí pomocí mžikové chromatografíe za pouřití směsi dichlormethanu a methylalkoholu 99 : 1 . Po zahuštění odpovídajících frakcí a přesrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá 455 mg (37 %) v názvu uvedené sloučeniny.

1.10) p-Aminofenyl-3-0-karboxymethyl-p-L-fukosid

282 mg (0,79 mmol) p-nitrofenyl-3-methoxykarbonylmethyl-p-L-fukosidu se rozpustí ve 20 ml methylalkoholu a smísí se se 440 μΐ 2 N roztoku hydroxidu lithného. Po dvouhodinovém míchání při teplotě 20 °C se hodnota pH směsi nastaví pomocí kyselého iontoměniČe SC108 na 3m a přefiltruje se. K filtrátu se přidá 250 mg palladia na aktivním uhlí, hydrogenuje se po dobu 1,5 hodiny vodíkem za mírného přetlaku a katalysátor se oddělí a promyje se methylalkoholem. Po zahuštění, vyjmutí do vody a lyofilisaci se získá v názvu uvedená sloučenina v 86% výtěžku (212 mg) [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , R^ = = 0,24] .

Příklad 1.11 p-Aminofenyl-3-0-methoxykarbonylmethyl-p-L-fukosid ·· ·· • « · · « · · • · ♦ · · *··« *· « ·· ** ···· Μ I · · · · β α Ο Οι Φ • · ·· ··· ο • · · · · ««· ·· · ·

COOMe

250 mg (0,7 mmol) p-nitrofenyl-3-methoxykarbonylmethyl-p-L-fukosidu (příklad 1.10.a)) se rozpustí ve 20 ml methylalkoholu a po dobu 1,5 hodiny se hydrogenuj e vodíkem za mírného přetlaku na palladiu na aktivním uhlí. Katalysátor se potom oddělí a promyje se methylalkoholem.

Po zahuštění, vyjmutí do vody a lyofilisaci se získá 195 mg (85 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 , R^ = = 0,43 ; FAB-MS : m/e = 328 = M+.l] .

Příklad 1.12 p-Aminofenyl-3-0-hydroxyethyl-fl-L-fukosid

.....' ... ..., · - - - · ' ’ ” - - ’ '*··

1.12.a) p-Nitrofenyl-3-0-hydroxyethyl-p-L-fukosid

1000 mg (2,8 mmol) p-nitrofenyl-3-methoxykarbonyl·· V«44

444 4

160 ml tetrahydronatr iumborhydr idu. získaný zbytek se methyl-β-L-fukosidu se rozpustí ve směsi furanu a 40 ml vody a smísí se s 53 mg Po 10 minutách se rozpouštědlo odpaří a čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (95 : 5). Po zahuštění odpovídajících frakci, vyjmutí do vody a lyofilisaci se získá 362 mg (40 %) v názvu uvedené sloučeniny.

1.12) p-Aminofenyl-3-0-hydroxyethyl-p-L-fukosid

Po hydrogenaci 362 mg sloučeniny z příkladu 1.12a) se analogicky jako je popsáno v příkladě 1.1 získá 270 mg (82 .%) v názvu uvedené sloučeniny [DC : Acetonitril/ voda 10 : 1 ; = 0,43] .

Příklad 1.13 p-Amínofenyl-2-0-karboxymethyl-p-L-fukosid

1.13, a) p-Nitrofenyl-2-0-methoxykarbonylmethyl-p-L-fukosid

250 mg (0,88 mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukosidu se rozpustí ve 25 ml absolutního tetrahydrofuranu a 3 ml dimethylformamidu, přidá se 80 mg (2,64 mmol) 80% hydřídu sodného a po desetiminutovém míchání při teplotě 20 °C 35 μΐ benzylesteru kyseliny bromoctové. V desetiminutových « 9* 9 · 9 9 9 9 9 · ·

99· · ' 9 · · · « « 9 9. 9 ·9·* ti ··« ·· · intervalech se provede třikrát vždy přídavek 35 μΐ benzylesteru kyseliny bromoctové, načež se reakční směs míchá po dobu 30 minut a zředí se methylalkoholem. Po dalších 10 minutách se okyselí 5 ml 80% kyseliny octové. Potom se zahustí a destiluje se s dichlormethanem. Čištění pomocí mžikové chromatografie se začíná s pohyblivou fází dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 : 1, později stoupá ve stejném systému poměr na 80 : 20 : 2 . Po zahuštění odpovídajících frakcí se zbytky digerují s diethyletherem a z odpovídajícího eluátu se získá 157 mg (42 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , = = 0,65] . Z pozdějších eluátů se získají isoměry 3-0-alkylované sloučeniny (33 %) [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , R_f = 0,54] .

1.13.) p-Aminofenyl-2-0-karbOxymethyl-p-L-fukosid

Zmýdelnění a hydrogenace 150 mg p-nitrofenyl-2-0^J - Γ i τ

-methoxykarbonylmethyl-p-L-fukosidů se provádí metodou; popsanou v příkladě 1.10) s 83% výtěžkem na 109 mg v názvu uvedené sloučeniny [DC acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , R^ = 0,35] .

Příklad 1.14.a)

Syntesa regioisomerních produktů monosukcinylace p-nitrofenyl-p-L-fukosidu

1100 mg (3,86 mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukosidu se • · · · • · · • fe fefe • · · fetfe· ·· • · * • fefefe • · fefefe fe • · · ·· · fe ·· rozpustí v 50 ml pyridinu a smísí se s 580 mg (5,79 mmol) anhydridu kyseliny jantarové. Po šestnáctihodinovém míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a dvakrát se destiluje s dichlormethanem. Vysráží se ze směsi dichlormethanu a diethyletheru a získá se 1 g nedělitelné směsi látek. Tato se vyjme do směsi methylalkoholu a vody a smísí se s 846 mg (2,6 mmol) uhličitanu česného, rozpouštědlo se odpaří a destiluje se s dimethylformamidem. získaný zbytek se vyjme do dimethylformamidu a smísí se s 618 μΐ benzylbromidu. Po jednohodinovém zpracování ultrazvukem se bromid česný odfiltruje a filtrát se zahustí, získaný Zbytek se rozdělí mezi 500 ml ethylesteru kyseliny octové a 50 ml vodyOrganická fáze se potom vysuší a zahustí. Při dělení komponent pomocí mžikové chromatografie za použití pohyblivé fáze dichlormethan/methylalkohol (99 : 1) se získá :

Frakce 1 : 87 mg (4,8 %) p-nitrofenyl-3-0-(3-benzyloxykarbonylpropionyl)-β-L-fukosidu [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 , Rf = 0,45]

Frakce 2 : 27 mg (1,5 %) p-nitrofenyl-2-0-(3-benzyloxykarbonylpropionyl)-β-L-fukosidu [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 , Rf - 0,34]

Frakce 3 : 190 mg (10,3 %) p-nitrofenyl-4-O-(3-benzyloxykarbonylpropionyl)-β-L-fukosidu [DC : dichlor. methan/methylalkohol 95 ; 5 , Rf = 0,28].

Příklad

1.14.

p-Aminofenyl-3-0-sukcinyl^-L-fukosid • ·

4

4 • 4 4 · 4

COOH mg (0,17 mmol) frakce 1 z příkladu 1.13.a) se rozpustí v 5 ml tetrahydrofuranu a 1 ml vody, přidá se 20 mg oxidu platičitého a hydrogenuje se po dobu 8 hodin. Katalysátor se potom odfiltruje, promyje se směsí tetrahydrofuranu a vody a filtrát se zahustí. získaný zbytek se vyjme do vody a lyofilisuje se. Získá se takto 57 mg (94 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , = 0,65] .

Příklad 1.15 p-Aminofenyl-2-0-sukcinyl-β-L-fukosid

Ό00Η

Frakce 2 z příkladu 1.14.a) se hydrogenuje analogicky jako je uvedeno v příkladě 1.14) . Výtěžek činí 16 mg (87 %) [DC : acetonitril/vodá/ledová kyselina octová

00 • β * • ♦ * ♦ « · ·

0000 «Φ *0 σ ♦ •00 ·0 : 1 : 0,2 , R_f = 0,62]

Příklad 1.16 ρ-Aminofenyl-4-0-sukcinyl-p-L-fukosid

NH_n

Frakce 2 z příkladu 1:14.a) se hydrogenuje analogicky jako je uvedeno v příkladě 1.14) . Výtěžek činí 125 mg (88 %) [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , R_f = 0,63] .

Příklad 1.17 p-Aminofenyl-3,4-di-0-methyl-p-L-fukosid

Me O .0.

, NH.

1.17 .a) p-Nítrofenyl-2-0-benzyl-3,4-0-ísopropyliden-p-L-fukosid

377 mg (1,16 mmol) sloučeniny z příkladu 1.1.a) se ·' rozpustí ve 30 ml absolutního tetrahydrofuranu, postupně se smísí se 690 μΐ benzylbromidu a 52 mg hydridů sodného a míchá se při teplotě 20 °C . Po 4 hodinách a 6 hodinách se přidá ještě 690 gl benzylbromidu a hydrid sodný. Reakční směs se zpracuje analogicky jako je popsáno v příkladě 1.1.b) a získá se takto 245 mg (51 %) v názvu uvedené sloučeniny.

1.17 . b) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4-di-o-methyl-β-L-f ukosid

245 mg (0,59 mmol) p-nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4-0-isopropyliden-p-L-fukosidu se míchá po dobu 16 hodin při teplotě 20 °C v 80% kyselině octové. Potom se reakční směs zahustí a získaný zbytek se rozmíchá se směsí diethyletheru a pentanu. Po odsátí a vysušení se zbylý produkt vyjme do 20 ml absolutního tetrahydrofuranu, přidá se 45 mg 80% hydridů sodného a po 15 minutách se vstříkne 160 μΐ methyljodidu. Po dvacetihodinovém míchání při teplotě 20 °C se přidá methylalkohol a ledová kyselina octová, zahustí se a získaný zbytek se rozdělí mezi dichlormethan a vodu. Organická fáze se vysuší a potom se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (100 : 1). Po zahuštění a vysušení odpovídajících frakcí se 2íská 188 mg (79 %) v názvu uvedené sloučeniny.

1,17) p-Aminofenyl-3,4-di-0-methyl-p-L-fukosid

180 mg (0,45 mmol) sloučeniny z příkladu 1.17.b) se ve směsi 15 ml methylalkoholu a 3 ml dichlormethanu po přídavku 50 mg palladia na aktivním uhlí hydrogenuje po dobu dvou dnů při teplotě místnosti. Katalysátor se potom odfiltruje, filtrát se zahustí a čistí se pomocí mžikové

99 • 9	9	9«	9	« • 9 9	99 9	9 9 V 9 9V 9 9 9
9	9		9 9	9 9	9 9	9« « 9
9	•		9	9 9	9	• «
• 999		99		• 99	• 9	9 9 9

chromatografie za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (97,5 : 2,5). Získá se takto 86 mg (68 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 , R_f = 0,21].

Příklad 1.18 p-Aminofenyl-3-0-karbamoylmethy1-β-L-fukosid

r° conh₂ •t .100 mg (0,305 mmol) sloučeniny z· příkladu 1.11) se rozpustí v 10 ml methylalkoholu a smísí se s 0,5 ml 17% roztoku hydroxidu amonného. Po 4 hodinách se reakční směs zahustí, vyjme se do vody a lyofilisuje se. Získá se takto 95 mg (kvantitativní výtěžek) v názvu uvedené sloučeniny [DC : acetonitril/voda 10 : 1 ; R^ = 0,43] .

Příklad 1.19 p-Aminofenyl-2-O-hydroxyethyl-p-L-fukosid

Me

HO

OH

• 9 9 ·	• 9 9 · 9 9	9 9« 9 9 9 • 9	• 9	9 9 9 9 *
9	9 9	9 »	9	9
9*9 9	9 9	999 99		99.

Tato sloučenina se vyrobí tak, že se vychází ze 200 mg (0,56 mmol) p-nitrofenyl-2-0-methoxykarbonylmethyl-p-L-fukosidu (příklad 1.13,a)) , přičemž se postupuje analogicky jako je popsáno v příkladech 1.12.a) a 1.12) . Výtěžek činí 76 mg (45 % přes 2 stupně) [DC : dichlormethan/methylalkohol 9 : 1 , R^ = 0,2],

Příklad 1.20 p-Aminofenyl-3,6-didesoxy-3-chlor-p-L-gulosid

mg (0,165 mmol) sloučeniny z příkladu l.ó.b) se hydrogenuje v 5 ml methylalkoholu na palladiu na aktivním uhlí po dobu jedné hodiny. Katalysátor se potom odfiltruje, promyje se, .filtrát se zahustí, získaný zbytek se vyjme,do vody a lyofilisuje se. Získá se takto 45 mg (89 %) v názvu uvedené sloučeniny [DC : dichlormethan/methylalkohol 9 : 1 , R_f = 0,35],

Příklad 1.21 .

p-Aminofenyl-α-L-rhamnos i d

NH

OH

fl 1	*4	♦ ·»		WWW

»	*			• 4		4	4 4	4
•	4		4 4	4 4		• 4	44 4	9
«	•		4	• 4		•	4	•
·«· ·		• 4		4 4 4	4 4		44	4

Tato sloučenina se vyrobí analogicky jako je uvedeno v příkladě 1.1), když se vychází ze 300 mg p-nitrofenyl-α-rhamnosidu (Sigma). Výtěžek : 96 % .

Příklad 1.22 p-Aminofenyl-3-0-karboxymethyl-a-L-rhamnos i d

1.22.a) p-Nitrofenyl-3-O-methoxykarbonylmethyl-a-L-rhamnosid

481 mg (1,63 mmol) p-nitrofenyl-a-L-rhamnosidu se vyjme do 30 ml methylalkoholu a smísí se se 629 mg (2,45 mmol) dibutylcínoxidu. Reakční směs se zahřívá po dobu 2 hodin k varu pod zpětným chladičem, načež se zahustí a vyjme se do 30 ml dioxanu. Potom se přidá 85 mg tetrabutylamoniumjodidu a 950 μΐ methylesteru kyseliny bromoctové a zahřívá se po dobu 16 hodin k varu pod zpětným chladičem. Popřípadě se ještě jednou přidá 1 ml methylesteru kyseliny bromoctové a reakční doba se prodlouží. Potom se směs zahustí a získaný zbytek se Čistí pomocí mžikové chromatografie. Směsí dichlormethanu a methylalkoholu (99 : 1) se eluuje p-nitrofenyl-3-0-methoxykarbonylmethyl-a-rhamnosid a po usušení se získá 408 mg (70 %) této látky [DC : dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 , R^ = 0,36].

*· ·· Φ ΦΦ w.--Φ φ Φ Φ · · φ · Φ * Φ

ΦΦΦ ΦφΦ ΦΦΦ

ΦΦ ΦΦ » φ ΦΦ ΦΦΦΦ

ΦΦΦ Φ«Φ ΦΦ

ΦΦΦΦ ΦΦ ΦΦΦ ΦΦ ·Φ Φ

1.22) p-Aminofenyl-3-O-karboxymethyl-a-L-rhamnosid

Syntesa probíhá zcela analogicky jako je popsáno v příkladě 1.10) , když se vychází z p-nitrofenyl-3-0-methoxy-karbonylmethyl-a-L-rhamnosidu. Získá se konečný produkt v 80% výtěžku. [DC : acetonitril/voda/ledová kyselina Octová 5 : 1 : 0,2 , R^ = 0,26] .

Přikladl.23 p-Aminofenyl-p-D-galaktopyranosid

3,0 g (10 mmol) p-nítrofenyl-p-D-galaktopyranosidu se rozpustí v 50 ml směsi methylalkoholu a vody (1:1) a po přídavku palladia na aktivním uhlí (10 % Pd, 200 mg) se hydrogenuje po dobu 3 hodin ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku. Suspense se přefiltruje přes celíte a filtrační koláč se promyje 100 ml horké směsi methylalkoholu a vody (1:1). Po zahuštění filtrátu ve vakuu a krystalisaci z methylalkoholu se získá bezbarvá krystalická látka (211 g , 78 %) ; DC [methylalkohol] : R^ = 0,62 ; [α]^θ= = -39,5° (c = l,0/H₂O) ; t.t. = 166 °C .

·	w V	w	v*	W. www

• 4	4	• 4 ·	4 ·	4
•	• ·	• 4 · ·	• 44	4
• ·	4	4 4 ·	4	4
«••v	44	44 4 4 4	44	4

Příklad 1.24 p-Aminofenyl-2-0-methyl-p-D-galaktopyranosid

1.24. a) p-Nitrofenyl-6-0-trifenylmethyl-p-D-galaktopyrano. sid

Roztok p-nitrófenyl-p-D-galaktopyranosidu (9,0 g, 30 mmol) , chlortrifenylmethanu (16,7 g, 60 mmol) a N,N-dimethylaminopyridinu (609 mg, 5 mmol) v absolutním pyridinu 100 ml) se zahřívá po dobu 4 hodin na teplotu 60 °C . Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek. Čistí pomocí mžikové chromatografie (petrolether/ethylacetát 2 : 1 -> 3 : 2 , vždy s 0,5% triethylaminu). Získá se takto bezbarvá krystalická látka (9,23 g, 57 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :.3 : 0,2] : Rf = 0,55 ; t.t.

= 82 °C .

1.24. b) p-Nitrofenyl-3,4-0-isopropyliden-6-0-trifenylmethyl-p-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (8,7 g, 16 mmol) se smísí s dimethoxypropanem (400 ml) a katalytickým množstvím kyseliny (±)-camfer-10-sulfonové (400 mg, 1,7 mmol). Po jedné hodině při teplotě místnosti, se reakce ukončí přídavkem trietrhylaminu (240 ml, 1,7 mmol) a reakční směs se ve

444

4«

44 « 4 4 · ·

4 4 ♦ · · 4

4«4

4·* · 44 « vakuu zahustí. Po mžikové chroatografii (petrolether/ethylacetát 1:1) se získá bezbarvá pěnovítá látka (6,2 g, 66 %) ; DC [petroletber/ethylacetát 1 : 1] ; R^ = 0,46 ; [α]^2θ= ₌ _₄₂₁ o (_c = 0,94/CH₂Cl₂) .

1.24. c) p-Nitrofenyl-2-0-methyl-3,4-O-isopropyliden-ó-O-trifenylmethyl-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.24.b) (5,83 g, 10 mmol) se rozpustí v dimethylformamidu (100 ml) , smísí se s methyljodidem (25 ml, 40 mmol) a po částech s 80% suspensí hydridu sodného v minerálním oleji (450 mg, 15 mmol). Po 2 hodinách při teplotě místnosti se reakce ukončí přikapáním methylalkoholu (10 ml) a reakční směs se ve vakuu zahustí. Získaný zbytek se vyjme do dichlormethanu (1000 ml) a tento roztok se silně rozmíchá s vodou (500 ml) . Organická fáze se vysuší pomocí síranu hořečnatého (50 g) , ve vakuu se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie (petrolether /ethylacetát 12 : 1 -> 8 : 1) . Získá se bezbarvá pěnovitá látka (4,72 g, 79 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1] : R_f = 0,72 ; [a]²⁰= = -35,7 ° (c = 1,0/CH₃OH) .

1.24. d) p-Nitrofenyl-2-0-methyl-p-D-galaktopyranosid

Roztok výše uvedené sloučeniny (4,48 g, 7,5 mmol) v dichlormethanum (200 ml) se smísí s 99% kyselinou trifluoroctovou (20 ml) a míchá se po dobu 3 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek čistí pomocí mžikové chromatografie (petrolether/ethylester kyseliny octové 5 : 1 - > 2 : 1) . Získá se takto produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,09 g, 46 %) .; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2];

R_f = 0,42 ; t.t. = 177 °C .

1.24) p-Aminofenyl-2-0-methyl-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.24.d) (946 mg, 3 mmol) se rozpustí v methylalkoholu (50 ml) a po přídavku vody (0,5 ml) a basického Raneyova niklu (asi 200 mg) se hydrogenuje po dobu 2 hodin ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku. Suspense se potom přefiltruje přes celíte a filtrační koláč se důkladně promyje methylalkoholem (100 ml). Zahuštěním filtrátu ve vakuu se získá hnědá pénovitá látka (579 mg, 68 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) : 3 ; 0,2];' R_f = 0,28 ; [α]^2θ= -39,3 ° (c = l,5/CH₃0H).

Příklad 1.25 p-Aminofenyl-3-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

1.25.a) p-Nítrofenyl-3-0-methyl-p-D-galaktopyranosid

Roztok p-nitrofenyl-p-D-galaktopyranosidu (1,5 g, 5,0 mmol) v absolutním methylalkoholu (40 ml) se smísí s dibutylcínoxidem (1,87 g, 7,5 mmol) a reakční směs se zahřívá pod zpětným chladičem. Po 3 hodinách se ve vakuu odpaří a získaný zbytek se suší jednu hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Potom se vyjme do absolutního dioxanu (40 ml), získaný roztok se smísí s methyljodidem (1,9 ml, 30 mmol) • 0

0 0 » 0 « 0 0 0 0 • 0 00 0000

0 «0

00 00 0 a vsázka se míchá po dobu 16 hodin při teplotě lázně 100 °C . Potom se rozpouštědlo ve vakuu oddestiluje a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/ petrolether 2 : 1 -> ethylacetát). Získá se takto produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,32 g, 84 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]; Rf =

0,34 ; t.t. = 196 °C ; [α]^2θ= -53,3 ° (c = l,0/CH₃0H).

1,25) p-Aminofenyl-3-0-methyl-p-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (946 mg, 3 mmol) se redukuje a zpracuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.24). Získá se takto hnědavá krystalická látka (656 mg, 77 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 :

0,2]: R_f = 0,21 ; t.t. = 196 °C ; [<x]²⁰= -25,2 ° (c = l,0/CH₃0H).

Příklad 1.26 p-Aminofenyl-4-0-methyl-p-D-galaktopyranosid, acetát

1.26.a) p-Nxtrofenyl-3-O-benzyl-p-D-galaktopyranosid

Roztok p-nitrofenyl-p-D-galaktopyranosidu (1,5 g, 5,0 mmol) v absolutním dioxanu (40 ml) se smísí s dibutylcínoxidem (1,87 g, 7,5 mmol) a zahřívá se k varu pod zpětným chladičem. Po 3 hodinách se získaný roztok smísí s benzyl• » • © ·· ·· • © · • · • « • · · ··©· ·· « · • ©· bromidem (3,6 ml, 30 mmol) a reakční směs se míchá po dobu dalších 48 hodin za varu pod zpětným chladičem. Potom se rozpouštědlo ve vakuu oddestíluje a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografíe (ethylacetát/ petrolether 2 : 1 -> 1 : 1). Získá se takto produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,58 g, 81 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]; Rf = 0,69 ; t.t. = 127 °C .

1.26. b) p-Nitrofenyl-3-0-benzyl-4,6-0-isopropyliden-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.26.a) (6,26 g, 16 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.b) a produkt se čistí pomocí mžikové chromatografíe (ethylacetát/ petrolether 1 : 5 -> 1 : 3). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (6,54 g, 95 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]; Rf = 0,34 ; [α]^θ= -25,2° (c = i,o/ch₂ci₂).

1.26. c) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-benzyl-4,6-0-isopropyliden-β-D-galaktopyranosid ,

Sloučenina 1.26.b) (4,31 g, 10 mmol) se rozpustí v dimethylformamidu (100 ml) , smísí se s benzylbromidem (12 ml, 100 mmol) a po Částech se smísí s 80% suspensi hydridu sodného v minerálním oleji (450 mg, 15 mmol) . Po 2 hodinách při teplotě místnosti se reakce ukončí přikapáním methylalkoholu (10 ml) a směs se ve vakuu zahustí.

Získaný zbytek se vyjme do dichlormethanu (1000 ml) a roztok se důkladně rozmíchá s vodou (500 ml) . Organická fáze se potom vysuší pomocí bezvodého síranu horečnatého (50 g), ve vakuu se zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografíe (ethylacetát/petrolether 1 : 20 -> 1 : 15 -> 1 . 10). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé • to · to to · • · to · ·· · · ·«·· ·· * to « ·« • to « · · « « to · • to toto to · to * ««· toto ·· «·· olej ovité látky (2,72 g, 52 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]; Rf = 0,62 .

1.26 . d) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-benzyl-p-D-galaktopyran.osid

Výše uvedená sloučenina (2,6 g, 5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.d). Po zahuštění ve vakuu a rozvařením získaného zbytku s diethyletherem se získá produkt ve formě bezbarvých krystalů (805 mg, 33 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]; Rf = 0,23 ; t.t.= 160 °C .

1.26. e) p-Nitrofenyl-2,3-di-O-benzyl-6-O-trifenylmethyl-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.26.d) (722 mg, 1,5 mmol) se trityluje stejně, jako je popsáno v příkladě' 1.24.a) . Po čištění pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1 : 15 -> 1 : 10 -> 1 : 5) se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (880 mg, 81 %) ; DC [petrolether/ ethylacetát 2 : 1]; R_f = 0,79 ; [α]^2θ= -25,3° (c = 0,3/ CH₂C1₂). ’’ ” ’ ‘ '

1.26. e) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-benzyl-4-0-methyl-6-0-trifenylmethyl-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.26.e) (724 mg, 1 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c) .Po čištění pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1 : 10 -> 1 : 5) se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (662 mg, 90 %) ; DC [petrolether/ ethylacetát 5 : 1]; R_f = 0,66 ;.[α]^2θ= -38,7 ° (c = 0,2/ ch₂ci₂).

0 0 0

0- 0

0 0 0 0«

0000 00

0 0 0 0 0 0 ' 0.0 0 0 0 0 00 0:0 000 0 0 0 0 ·0

00# 00 00 0

1.-26) p-Aminofenyl-4-0-methyl-p-galaktopyranosid, acetát

Výše uvedená sloučenina (590 mg, 0,8 mmol) se rozpustí v 90% kyselině octové (50 ml) a po přídavku palladia na aktivním uhlí (10 % Pd, 200 mg) se hydrogenuje po dobu 16 hodin ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku. Suspense se potom přefiltruje přes celíte a filtrační koláč se důkladně promyje methylalkoholem (100 ml). Po zahuštění filtrátu ve vakuu a přesrážení získaného zbytku ze směsi diethyletheru a petroletheru se získá produkt ve formě bezbarvých krystalů (253 mg, 92 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1) : R_f = 0,12 .

Příklad 1.27 p-Aminofenyl-6-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

OH

1.27,a) Benzyláce sloučeniny 1.24.b):

Sloučenina 1.24,b) (5,84 g, 10 mmol) se benzyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.c) . Pó čištění pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1 : 15 ->. 1 : 10 -> 1 : 5 , vždy s 0,5 % triethylaminu) se získají dvě frakce produktu :

ΦΦ · ·· · • Φ 9 ' Φ • ·' Φ • Φ * • « Φ

ΦΦΦΦ Φ«

Φ Φ: Φ

Frakce 1 : p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4-0-isopropyliden-6-0-trifenylmethyl-p-D-galaktopyranosid; žlutavá pěnovitá látka (1,71 g, 25 %) ; DC [petrolether/ ethylacetát 2 : 1]; R_f = 0,72 ; [a]²⁰= -8,1 ° (c = l,0/CH₂Cl₂).

Frakce 2 : p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4-0-isopropyliden-p-D-galaktopyranosid ; žlutavá olej ovitá látka (806 mg, 19 %) ; DC [petrolether/ ethylacetát 2 : 1]; =

0,45; [α]^2θ= +2,8 ° (c = l,2/CH₃0H).

1.27. b) p-Nitrofen.yl-2-0-benzyl-3,4-0-isopropyliden-6-0-methy1- p - D -galaktopyranos i d

Frakce 2 z příkladu 1.27.a) (777 mg, 1,8 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po čištění pomocí mžikové chromatografie (ethylacetát/petrolether 1 : 10 -> 1 : 8) se získá produkt ve formě hnědavé olej ovité látky (730 mg, 91 %) ; DC [petrolether/ ethylacetát 2 : 1]; R_f = 0,54 ; [a]²⁰= -11,6 ° (c = 1,1/

CH₂C1₂).

1.27. c). p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-6-0-methyl-p-Ď-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (668 mg, 1,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.d). Po zahuštění ve vakuu a rozvaření získaného zbytku s malým množstvím diethyletheru se získá po ochlazení na teplotu místnosti produkt ve formě světle žlutých krystalů (388 mg, 64 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]; =0,15 ;

t.t.= 143 °C .

9999 ·· *

9 9 ·

1.27) p-Aminofenyl-6-0-methyl-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.27.c) (324 mg, 0,8 mmol) se redukuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.24) po dobu 16 hodin. Po zahuštění filtrátu ve vakuu a rozvaření získaného zbytku s malým množstvím diethyletheru se získá produkt ve formě béžových krystalů (184 mg, 81 %') ; DC [ethylacetát]: R-j? = 0,05 ; t.t.= 115 °C (rozklad) .

Příklad 1.28 p-Aminofenyl-2,3-di-0-methyl^-D-galaktopyranosid

OH

1.28.a) Isopropylidenace p-nitrofenyl-p-D-galaktopyranosidu „ . „ , #··»...Roztok p-nitrofenyl^-D-galaktopyranosidu (7,5 g, 25 mmol) v absolutním acetonu (1000 ml) se smísí s bezvodou kyselinou toluensulfonovou (500 mg) . Za normálního tlaku se během 30 minut oddestiluje aceton (250 ml) a zneutralisuje se potom ihned přídavkem uhličitanu draselného (500 mg). Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek rozmíchá s diethyletherem (1000 ml) , přefiltruje se a filtrát se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ ethylacetát 2 : 1->1 : l->3 : 2]. Při tom vypdanou dvě frakce produktů :

9« · »» w-w:

♦ · 9' 9 9 9 9· 9-9 9 • 9 9. 9' · 9 99 9

9 99 9.9 ·. 9' 999 9

999 99· 9 9 *999 99 99.9 9« 99 9

Frakce 1 : p-Nitrofenyl-3,4-0-isopropyliden-p-D-galaktopyranosid ; bezbarvá pěnovitá látka (3,74 g, 44

%); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :

: 0,2]: R_f = 0,59 ; [a]²⁰= -54,2 ° (c = 0,38/CH₃0H).

Frakce 2 : p-Nitrofenyl-4,6-0-isopropyliden-p-D-galaktopyranosid ; bezbarvá pěnovitá látka (4,3 g, 50

%); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :

: 0,2]: R_f = 0,54 ; [α]^2θ= -81,0 ° (c = 0,31/CH₃0H).

1.28. b) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-methyl-4,6-0-isopropyliden-β-D-galaktopyranosid

Frakce 2 z příkladu 1.28.a) (4,1 g, 12 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 5 : 1 -> 2:1] se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (2,3 g, 66 %) ; DC [petrolether/ ethylácetát 1 : 1]: Rf = 0,42 ; [α]^2θ= -52,6 ° (c = 0,34/ CH₃OH).

«i

1.28. c) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (2,77 g, 7,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.d). Po jedné hodině při teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny za vakua olejové vývěvy. Digerací se směsi diethyletheru a petroletheru 1 : 1 (100 ml) se získá produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,11 g, 45 %) ; DC [ethylácetát] : Rf = 0,24; t.t. = 156 °C .

φφφ φ • φ φ φ

Φ· *» V V» • · · * φφφφ » » * Φ 9 · • · φ φ φ φ φ • φ · φ φ · φφφφ φφ φφφ φφ

1.28) p-Aminofenyl-ě,3-di-0-methyl^-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.38.c) (989 mg, 3 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé olej ovité kapaliny (396 mg, 44 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: R_f = 0,50 ; [a]²⁰= -19,4 ° (c = 0,ló/CH₃0H).

Příklad 1.29 p-Aminofenyl-2,4-di-0-methyl-β-D-galaktopyranosid

OH

NH,

OH CH,

1.29.a) Tritylace sloučeniny 1.26.a)

Sloučenina 1.26.a) (11,7 g, 30 mmol) ‘ se trityluje ’ stejněě, jako je uvedeno v příkladě 1.24.a) . Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 10 : 1 -> 7 : 1 -> 5:1, vždy s 0,5 % triethylaminu] se získají dva produkty :

Frakce 1 : Trifenylmethyl-2-0-(p-nitrofenyl)-3-0-benzyl-6-0-trifenyImethyl-β-D-galaktopyranosid, bezbarvá pěnovitá látka (8,5 g, 32 %) ; DC [petrolether/ ethylacetát 2 : 1]: R_f = 0,68 ; [α]^2θ= +42,8 ° (c = 1,0/ CH₂C1₂).

Frakce 2 : p-Nitrofenyl)-3-O-benzyl-6-O-trifenylmethyl^-D77

4 4 4 44 * 4 4 4

4 4 4 « 4 · 4 4

4 4 4 ·4<· 444 4 • 44 44* 4«

4444 44 444 44 44 4

-galaktopyranosíd, bezbarvá pěnovitá látka (9,0 g, 47 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1]: Rf = 0,22 ; [α]^2θ= -22,6 ° (c = 1,03/ CH₂C1₂).

1.29. b) p-Nitrofenyl-2,4-di-0-methyl-3-0-benzyl-6-0-trifenylmethy1-β-D-galaktopyrános i d

Frakce 2 z příkladu 1.29.a) (7,6 g, 12 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 15 : 1 ->

: 1] se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (7,07 g, 89 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1]: Rf =

0,79 ; [α]^2θ= -35,8 ° (c = 1,09/ CH₃OH).

1.29. c) p-Aminofenyl-2,4-di-0-methyl-3-0-benzyl^-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (6,0 g, 9 mmol) se hydrogenuje po dobu 48 hodin, jak je popsáno v příkladě 1.26),

Získá se takto produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,39 g, 40 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1]: Rf = 0,20 ; t.t. = 148 °C .' ' ' ý - ' ' ’ > 1.29) p-Aminofenyl-2,4-di-0-methyl-3-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.29.c) (779 mg, 2 mmol) se hydrogenuje po dobu 5 dnů stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24).

Po odpaření spojených filtrátů ve vakuu a rozvaření získaného zbytku s diethyletherem (2 x 50 ml) se získá lehce zelenavá krystalická látka (391 mg, 65 %) ; DC [ethylacetát]: Rf = 0,16 ; t.t. = 260 °C (rozklad).

9« 9 99

9 9 * ·♦ · 9 9« · · · « 9 · 99 9 •999 9999 ··· 9 • 99 · 9 9 ··

9·99 99 9·9 99 99 9

Příklad 1.30 p-Aminofenyl-2,6-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosid

1.30.a) p-Nitrofenyl-2,6-di-O-merhyl-3,4-0-isopropyliden-β-D-galaktopyranosi d

Frakce 1 z příkladu 1.28.a) (4,1 g, 12 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 10 : 1 ->

: 1 -> 5 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé olejovité látky (3,25 g, 73 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 :

1]: R_f = 0,65 . . . . _r. .

1.30.b) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-methyl^-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (2,77 g, 7,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.d) . Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 1:2] se získá produkt ve formě bezbarvých krystalů (1,63 g, 66 %) ; DC [ethylacetát]: R^ = 0,31 ; t.t. = 222 °C .

1.30) p-Aminofenyl-2,6-di-0-methyl-3-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.30.b) (989 mg, 3 mmol) se redukuje φφ φφφφ φ φ φ φφφ φ · · φφ φφ φφ φφ φφφφ φφφ φφφ φφ φφφφ φ φ φφφφφ φφ φ stejně, jako je popsáno v příkladě 1,24). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé olejovité látky (597 mg, 66 %) ;

DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 :

0,2]: R_f = 0,56 ; [α]^2θ= -53,1 ° (c = 0,49/CH₃0H).

Příklad 1.31 p-Aminofenyl-3,4-di-O-methyl-β-D-galaktopyranosid, acetát

OH

ch₃cooh

1.31. a) p-Nitrofenyl-2,6-di-O-benzyl-3,4-0-isopropylíděn;

-β-D-gylaktopyranosid

Frakce 1 z příkladu 1.28.a) (4,1 g, 12 mmol) se benzyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.c). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 6:1] se. získá produkt ve formě žlutavé olej ovité látky (5,3 g, 85 %) ; DC [ethylacetát/petrolether 2:1] : R^ = 0,76 ;

[α]^2θ= +8,8 ° (c = l,3/CH₃0H).

1.31. b) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-benzyl-β-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (4,69 g, 9 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.d) . Po 30 minutách při teplotě místnosti se ve vakuu zahustí a získaný, zbytek se suší po dobu jedné hodiny za vakua olejové

9« 9 99 ·· 9·9*

9999 99 «· 9 · 9 «99 999 · 9

999999 99999 99 9 vývěvy. rekrystalisací z ethylalkoholu se získá bezbarvá krystalická látka (2,89 g, 67 %) ; DC [ethylacetát/petrólether 2:1] : R_f = 0,42 ; t.t. = 133 °C ; [α]^2θ= -64,2 ° (c = l,0/CH₃0H).

1,31.c) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-benzyl-3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosid výše uvedená sloučenina (2,4 g, 5 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c) . Po rekrystalisaci ze směsi ethylalkoholu a n-hexanu se získá bezbarvá krystalická látka (1,74 g, 69 %) ; DC [ethylacetát/petrolether 1 : 1] : R^ = 0,74 ; t.t. = 149 °C .

1.31) p-Amiiiofenyl-3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosid , acetát

Sloučenina 1.31.c) (1,52 g, 3 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26). bezbarvá krystalická látka (664 mg, 62 %) methan/methylalkohpl/amoniak (2596) 15 : .3

0,47 7 t.t. = 140 °C (rozklad) . ” se hydrogenuje Získá se takto ; DC [dichlor: 0.21: Rf =

Příklad 1.32

fefe ··· » ·

I · · ··· · • · • fe fe • · « · • fe fefe * fefe • · • · • · ·· · · · ·

1.32. a) p-Nitrofenyl-3-0-methyl-6-0-(terč.-butyl-dimethylsilyl)-β-D-galaktopyranosid

Roztok sloučeniny 1.25.a) (1,58 g, 5 mmol) v dimethylformamidu (150 ml) se smísí s imidazolem (1 g, 15 mmol) a terč.-butyldimethylsilyl-chloridem (1,25 g, 8 mmol) a míchá se po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Potom se reakce přídavkem vody (100 ml) ukončí. Reakční směs se zředí dichlormethanem (1000 ml) , organická fáze se promyje vodou (2 x 1000 ml) , vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého (20 g) a ve vakuu se zahustí. Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 15 : 1 -> 10 : 1 -> 5 : 1] se získá produkt ve formě žlutavé pěnovité látky (826 mg, 38 %) , která je ještě lehce znečištěná ; DC [ethylacetát]: Rf = 0,65 ; [α]^θ= -56,3 ° (c = Ι,Ο/Ο^Ο^)·

1.32. b) p-Nitrofenyl-2,4-di-0-benžyl-3-0-methyl-6-0-(terč.-butyldimethylsilyl)-β-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (446 mg, 0,9.mmol) se benzy-, luje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.c) Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 30 : 1 .

5:1] se získá produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (810 mg, 74 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 5 : 1]: Rf 0,58 .

1.32. c) p-Nitrofenyl-2,4-di-0-benzyl-3-O-methyl^-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.32.b) (732 mg, 1,2 mmol) se rozpustí v tetrahydrofuranu (6 ml)m a při teplotě 0 °C se Smísí s 1 M roztokem tetrabutylamoniumfluořidu v tetrahydrofuranu

• 0	00	0 0·	00 0000
• *	•			0 0 0	0	• 0 ·
0	•		•	0 0	0	• 0 0

	•		0	« 0	•	0 0
0 0 0 0		ll		00 0	00	0 0 0

(2,4 ml). Reakční směs se míchá po dobu 40 minut při teplotě místnosti a potom se ve vakuu zahustí. Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 5 : 1 -> 3 : 1 -> 2:1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (512 mg, 86 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf = 0,58 ; t.t.= 177 °C .

1.32.d) p-Nitrofenyl-2,4-di-0-benzyl-3,6-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosi d

Výše uvedená sloučenina (446 mg, 0,9 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c) . Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 20 : 1 -> 10 : 1 -> 8 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé olejovité látky (410.mg, 87 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: R_f = 0,70 ; [a]²⁰= -56,5 ° (c = 0,96/CH₂Cl₂).

1.32) ρ-Aminofenyl-3,6-di-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.32.d) (357 mg, 0,7 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Po odpaření spojených filtrátů vé vakuu a rozvařeni získaného zbytku s diethyletherem (20 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (207 mg, 99 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: Rf = 0,02 ; t.t.=> 280 °C (rozklad) .

• * 0 00 0 «0 00 0* 00 0000 0 0 0 0 · · 000 «00 ·* 00 00 00 00 000«

0«0 000 0· 000000 000·· 00 0

Příklad 1.33 p-Aminofenyl-4,6-di-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

1.33.a) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-benzyl-4,ó-di-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.26.d) (2,4 g, 5 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 5 : 1 -> 3 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (1,89 g,

%) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: = 0,76 ;

t.t.= 100 °c .

ή ů· * ' ¹

1.33) p-Aminofenyl-4,6-di-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.33.a) (1,53 g, 3 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Získá se tekto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (890 mg, 99 %); DC [methylalkohol/ethylacetát 1 : 1]: R£ = 0,71 ; t.t.= 180 °C (rozklad) .

Příklad.1.34 p-Aminofenyl-2,3,4-tri-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

9949 • 9 • 4 • 9 * · * « · 4

9 · ♦

4 ·

9499 ♦· *

9 4 · 9

9»·· _β · 449 4 • 4 · ·

44 99 9

OH'

1.34 . a) p-Nítrofenyl-2 „ 3,4-ΐΓΪ-Ο-πιβΐ1ιγ1-6-Ο-ΐΓΪί€ηγ1ιηβΐ1ιγ1-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.24.a) (1,63 g, 3 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 5 : 1 -> 3 : 1] se ziská produkt ve formě bezbarvé pěnovité látky (1,24 g, 71 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: = 0,54 ;

[α]^2θ= -53,6° (c= 0,3/CH₃OH).

1.34 . b) p-Ni trof eny 1-2,3,4-tr.i.-O-methyl-p-D-galaktopyranosíd

Výše uvedená sloučenina ¢1,17 g, 2 mmol) se nechá reagovat stejně, jako-je popsáno v příkladě 1.24.d) . Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 3 : 1 -> 2:1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (čžá mg, 68 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]: R^ = 0,12 ; t.t.= 104 °C ; [α]^2θ= -68,2 ° (c = 0,47/CH₃OH) .

1.34) p-Aminofenyl-2,3,4-tri-0-methyl-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.34.b) (343 mg, 1 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Získá se tekto produkt ve formě béžové krystalické látky (224 mg, 71 %); DC

»* 4 4	«4	« 44	«« 4444 • « «
«	4	44 ·	•
»	•	• 4	4 4	4	44> 4
4 • 4*4	•	• 4 4	• 4 44«	• 44	4 4 «4 *

[dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 ; 3 : 0,2]: Rf = 0,67 ; t.t.= 138 °C .

Příklad 1.35 p-Aminofenyl-2,3 , 6-tri-0-methyl-fJ-D-galaktopyranosid

ch₃ h₃c

1.35.a) p-Nitromethyl-2,3,6-tri-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.30.b) (2,63 g, 3 mmol) se selektivně methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.25.a). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 5 : 1 -> 2:1] še získá produkt ve formě hnědavé olejovité látky (890 mg, 32 %) ; DC [ethylacetát]: Rf = 0,37 ; [α]²θ=

-63,3'° (c = O,9/CH₂C1₂).

1.35) p-Aminofenyl-2,3,ó-tri-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (858 mg, 2,5 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Získá se tekto produkt ve formě béžové pěnovité látky (519 mg, 66 %); DC [ethylacetát]: R_f = 0,23 ; [α]^2θ= -34,5 ° (c =0,86/ CH₃OH) .

4444 ····

Příklad 1.36 p-Aminofenyl-2,3,4-tri-0-methyl-p-D-galaktopyranosid

1.36.a) p-Nitrofenyl-2,4,6-tri-O-methyl-3-0-benzyl-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.26.a) (1,96 g, 5 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 10 : 1 -> 8 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (1,47 g, 68 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 2 : 1]: R^ = 0,46 ; t.t.= 164 °C .

1.36) p-Aminofenyl-2,4,6-tri-0-methyl-P-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (1,3 g, 3 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26) . Získá se tekto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (642 mg, 68 %); DC [ethylacetát/petrolether 2 : 1]: R^ = 0,12 ; t.t.= 147 °C (rozklad) .

Pří kladl.37 p-Aminofenyl-3,4,ó-tri-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

*· « ·	•	»·	•	• ··	·« •	M ♦·*· • · ·
*	•		• ·	• ·	•	• · · · ·
•	•		•	• ·	•	• »
·<♦·		··		·*·	··

1.37. a) p-Nitromethyl-2-0-benzyl-p-D-galaktopyranosid

Frakce 1 z příkladu 1.27.a) (1,17 g, 2 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě l,24.d) . Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 3 : 1 -> 2 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (468 mg, 68 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1]

R_f = 0,12 ; t.t.- 104 °C ; [α]^2θ= -68,2 ° (c = 0,47/

CH₃0H) .

1.37. b) p-Nitrofenyl-2-0-benzyl-3,4,6-tri-O-methyl-p-D-galaktopyranosid ' Výše uvedená sloučenina- (391-mg, 1 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 10 : 1 ->

: 1] se získá produkt ve formě světle žluté krystalické látky (303 mg, 70 %) ; DC [ethylacetát]: R^ = 0,81 ; [α]²θ= -76,5 ° (c = 1,1/ CH₂C1₂) .

1.37) p-Aminofeny1-3,4, 6-tri-0-methyl-p-D-galáktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (260 mg, 0,6 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Získá se tekto produkt ve formě béžové krystalické látky (161 mg, 86 %) ; DC [ethylacetát]: R^ = 0,20 ; t.t.= 132 °C .

0'

0000

Příklad 1.38 p-Aminofenyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

1.38.a) p-Nitrofenyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl-p-D-galaktopyranosid *

p-Nitrofenyl-p-D-galaktopyranosid (904 mg, 3 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c) . Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 8 : 1 ->

: 1 -> 4 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé voskovité látky (633 mg, 59 %) ; DC [ethylacetát]: Rf = 0,67 ; [a]²⁰= -55,7 ° (c = 0,9/CH₂Cl₂) .

1.38) p-Aminofenyl-2,3,4,6-tetrá-O-methyl-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.33. a) (536 mg, 1,5 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Po odpaření spojených filtrátů ve vakuu a vyvaření získaného zbytku s diethyletherem (20 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (412 mg, 84 %) ; DC [ethylacetát]: Rf = =0,42 ; t.t.= 204 °C (rozklad) .

• · » • · · ··» · • * ·· * « · * * ·· · » · · · » ♦ • · «· · · · * • · · · · · ···· *· ·♦ ··

Příklad 1.39 p-Aminofeny1-α-mannopyranos i d

p-Nitrofenyl-a-D-mannopyranosid (3,0 g, 10 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je uvedeno v příkladě 1.23) . Vysrážením ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá bezbarvá krystalická látkám (2,03 g, 75 %); DC [methylalkohol}: R_f = 0,69 ; [a]²⁰ = +102,7 ° (c = 1,0/H₂0) ; t.t.=

161 °C .

Příklad 1.40 p-Aminofenyl-3-O-methyl-a-D-mannopyranosid

1.40 . a) p-Nitrofenyl-ó-O-trifenylmethyl-a-D-mannopyranosid p-Nitrofenyl-a-D-mannopyranosid (30 g, 10 mmol) se trityluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.a). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (4,35 ♦··· • 4 4 4 • 4 4 • 4 4 4

4 4

444 44

4 4

4 • 4 4 g, 80 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) : 3 : 0,2]: R_f = 0,52 ; [a]²⁰= +104,0 ° (c = l,0/CH₃0H); t.t.= 102 až 104 °C .

1.40 . b) p-Nitromethyl-3-0-methyl-6-0-trifenylmethyl-a-D-mannopyranosid

Výše uvedená sloučenina (2,72 g, 5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.a) s methyljodidem (2 ml, 30 mmol) . Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 2:1] a přesrážení ze směsi ethylalkoholu a hexanu se získá bezbarvá krystalická látka (1,83 g, 66 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniák (25%) 15 : 3 : 0,2]: R_f = 0,68 ; [α]^2θ= +106,4 ⁰ (c = l,0/CH₃0H); t.t.= 104 °C .

1.40) p-Aminofenyl-3-0-methyl-a-D-mannopyranosíd

Sloučenina 1.40.b (1,4 g, 2,5 mmol) se rozpustí v methylalkoholu (50 ml) a po přídavku palladia na aktivním uhlí . (10 % Pd, 300 mg) se hydrogenuje po dobu 24 hodin ve vodíkové atmosféře za mírného přetlaku. Suspense se přefiltruje přes celíte a filtrační koláč se důkladně promyje . methylalkoholem (100 ml) . Po zahuštění filtrátu ve vakuu se získaný zbytek vyjme do vody (50 ml) , přefiltruje se a filtrát se lyofilisuje. Získá se takto hnědavá amfoterní pevná látka (709 mg, 99 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: R_f = 0,33 ; [α]^2θ= +92,9 ° (c « l,l/CH₃0H) .

Příklad

1.41 p-Aminofenyl-2,3-di-O-methyl-a-D-mannopyranosid

0000

II ι· • 0 0 ·

0 0 0 0 0 ··· ·

0

1.41. a) p-Nitrofenyl-4,6-0-benzyliden-a-D-mánnopyranosid

Roztok p-nítrofenyl-a-D-mannopyranosidu (6,0 g, 20 mmol) v dimethylformamidu (120 ml) se smísí s benzaldehyd-dimethylacetalem (3,2 ml, 21,4 mmol) a 54% roztokem kyseliny tetrafluorborité v diethyletheru (2,7 ml, 20 mmol). Reakční' směs se míchá po dobu 5 hodin při teplotě místnosti, potom se reakce ukončí přídavkem triethylaminu (2,8 ml, 20 mmol) a ve vakuu se zahustí. Po mžikové chromatograf ii [toluen -> toluen/ethylalkohol 20 : 1] se získá bezbarvá krystalická látka . (6,48 g, 83 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf =

0,82 ; [α]^2θ= +170,7 9 (c = 1,O/CH₂C1₂) ; t.t.= 116 °C . .

1.41. b) p-Nitrofenyl-2,3-di-0-methyl-4,6-0-benzyliden-a-D-mannopyranos i d

Výše uvedená sloučenina (3,9 g, 10 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.C . Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 20 : 1 -> 7 : 1] a přesrážení ze směsi ethylalkoholu a hexanu se získá bezbarvá pěnovitá látka (3,2 g, 77 %) ; DC [ethylacetát/petrolether 2 : 1]: R_f = 0,67 ; [a]²⁰= +167,3 ° (c = 1,05/ CH₃0H) .

1.41) p-Aminofenyl-2,3-di-O-methyl-a-D-mannopyranosid ·· >* • · » · « · * • · · · • · · ··· ·♦ t· • · · 9 · « · · · · • · * ·*· * • · · · • *« »« »

Sloučenina l,41.b) (1,25 g, 3 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26). Po mžikové chromatograf ii [ethylacetát/petrolether 2 : 1 -> ethylacetát se vždy 0,5 % triethylaminu] se získá produkt ve formě červenavě hnědé pěnovité látky (480 mg, 53 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf = 0,31 ; [α]^2θ= +83,6 ° (c = O,7ó/CH₃OH) .

Příklad 1.42 p-Aminof enyl -3 -0-methoxykarbonylmethyl- β-D-galaktopyranosid

OH

1.42 . a) p-Nitrofenyl-3-0-methoxykarbonylmethyl^-D-galaktopyranosid

Roztok p-nitrofenyl^-D-galaktopyranosidu (7,53 g, 25 mmol) v absolutním dioxanu (180 ml) se smísí s dibutylcínoxidem (9,3 g, 37,5 mmol) a reakční směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Po 4 hodinách se získaný roztok smísí s methylesterem kyseliny bromoctové (8,3 ml, 90 mmol) a tetrabutylamoniumjodidem (9,25 g, 25 mmol) a vsázka se míchá další 3 hodiny za varu pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo se potom ve vakuu oddestiluje a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormet0«

00 0 0 0 Φ

0 0

0*0 *000 0· ** 0 0 0 0 0 0*0 0* 0 * 0 00 00· 0

0 0 0 0

000 *· «0 i han/methylalkohol 50 : 1 -> 20 : 1] . Vedle některých vedlejších produktů se získá sloučenina 1.42.a) ve formě bezbarvé krystalické látky (4,05 g, 43 %) ; DC [dichlorme than/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: =

0,54 ; [α]^2θ= -62,0 ° (c = 1,0/CH₃OH) ; t.t.= 176 °C .

1.42) p-Aminofenyl-3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galakto pyranosid

Sloučenina 1.42.a) (3,73 g, 10 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je uvedeno v příkladě 1,24) . Vysrážením ze směsi ethylalkoholu a n-hexanu se získá bezbarvá krystalická látka (2,98 g, 87 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: R_f = 0,39 ; [ce]²⁰ = -36,3 ° (c =

1,07/CH₃OH) ; t.t.= 155 °C .

Příklad 1.43 p-Aminofenyl-3-O-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosid, sodná sůl

1.43 . a) p-Nitrofenyl-3-0-karboxýmethyl-p-D-galaktopyranosid, sodná sůl

Roztok sloučeniny +.42.a) (3,73 g, 10 mmol) v met94

«9	99	9 99		9 ·	•1
♦	9 9	9 ·	9	9 9	9
•	f * ♦	• I	9 9	99 9	9
9	t 9	9 9	9	9	9
• 9 9 9	9 ·	999 99		»9	9

hylalkoholu se smísí s roztokem hydroxidu sodného (400 mg, 10 mmol) ve vodě (5 ml) a míchá se po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek suší po dobu 2 hodin ve vakuu olejové vývěvy a potom se smísí s ethylalkoholem (100 ml) . Reakční směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 5 minut, po ochlazení v ledové lázni se přefiltruje a získá se bezbarvá krystalická látka (366 g, 96%) ; DC [methylalkohol]: R^ = 0,62 ; [<x]²⁰ = -50,0 ° (c = 1,0/CH₃OH) ; t.t.= 180 až 185 °C .

1.43) ρ-Aminofenyl-3-0-karboxymethyl-β-D-galaktopyranosid, sodná sůl

Výše uvedená sloučenina (3,05 g, 8 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Po vyvaření s ethylalkoholem (50 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (2,03 g, 72 %) ; DC [methylalkohol] : R_f = 0,70 ; [a]²⁰ = -22,4 ° (c = 1,0/CH₃OH) ; t.t.= 180 až 182 °C .

Přikladl.44 . .

p-Aminofenyl-3-0-karbamoylmethyl~p-D-galaktopyranosid

«4 444»

Μ ·· «4 4

4 4 «44

4 4

444« ·♦

4 4 • 4 4 4 * 4 • 4 4 4 0 » 4 φ · 4 > 4 4 4

44* >4 44

4'

1.44. a) p-Nitrof enyl-3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyrariosid

Roztok sloučeniny 1.42.a) (373 mg, 1 mmol) v methylalkoholu (30 ml) se smísí s 25% vodným roztokem amoniaku (10 ml) a reakční směs se míchá po dobu 15 minut při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek suší po dobu 2 hodin za vakua olejové vývěvy a potom se smísí s ethylalkoholem (30 ml). Potom se vaří po dobu 5 minut pod zpětným chladičem, po ochlazení na ledové lázni se přefiltruje a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (306 mg, 85 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf = 0,14 ;

[α]^2θ ₌ __41j7 o (_c = 1,0/CH₃OH) ; t.t.= 229 °C (rozklad) .

1.44) p-Aminofenyl-3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (287 mg, 0,8 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Po vysrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (207 mg, 79 %) ;DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 :

0,2]: R_f = 0,10 ; t.t.= 205 °C (rozklad) .

Příklad 1.45 p-Aminof enyl-3-0- (N-methyl-karbamoylmethyl) -β-D-galaktopyranosid

vv	w	* ftft

•	•	•	• «		• · ·
•	«	i ·	• ft	ft ft	·· · »
·'	*	ft	ft ·	»	* 5
··· *	··		··· ftft		·· »

Η

1.45.a) p-Nitrofenyl-3-0-(N-methyl-karbamoylmethyl)-p-D-galaktopyranosid

Roztok sloučeniny 1.42.a) (373 mg, 1 mmol) v methylalkoholu (30 ml) se smísí se 30% vodným roztokem methylaminu (10 ml) a míchá se po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek suší po dobu 2. hodin ve vakuu olejové vývěvy a potom se překrystalisuje z ethylalkoholu. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (372 mg, 100. %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rj = 0,33 ; [a]²⁰ = .-36,7 ° (c = l,0/CH₃0H). ;.t.t.= 205 °C .

1.45) p-Aminofenyl-3-0-(N-methyl-karbamoylmethyl)-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.45.a) (298 mg, 0,8 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Po vysrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (180 mg, 66 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 :

0,2]: R_f = 0,16 ; t.t.= 239 °C .

	• to·	« v v « v
• · * to		to	to ·	· · ·
• » » ·		•	to	• i
··· ·	·· ·	« ·		• to <5

Příklad 1,46 p-Aminofenyl-3-0-(N-propyl-karbamoylmethyl)-β-D-galaktopyranosid

H

1,46.a) p-Nitrofenyl-3-0-(N-propyl-karbamoylmethyl)-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.42,a) (373 mg, 1 mmol) se nechá stejně jako je popsáno v příkladě 1.45.a) reagovat s n-propylaminem (823 μΐ, 10 mmol) . Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek přesráží ve směsi ethylalkoholu a_rn-hexanu. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (340 mg, 85 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : .

: 0,2]: R_f = 0,49 ; [a]²⁰ = -32,4 ° (c = l,0/CH₃0H) ; t.t.= 155 °C .

1.46) p-Aminofenyl-3-0-(N-própyl-karbamoylmethyl)-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.46.a) (320 mg, 0,8 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Po vysrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (188 mg, 63 %);

DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 :

0,2]: R_f = 0,31 ; t.t.= 154 °C .

Příklad 1.47 . ν* «V V » W WWW • 0 0 * 00 0 0 00 0 p-Aminofenyl-3-0-(N-butyl-karbamoylmethyl)-β-D-galaktopyranosid

H

1.47.a) p-Nitrofenyl-3-0-(N-butyl-karbampylmethyl)-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.42.a) (373 mg, 1 mmol) se nechá stejně jako je popsáno v příkladě 1.45.a) reagovat s n-butylaminem (900 gl, 10 mmol) . Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek přěsráží ve směsi ethylalkoholu a n-hexanu. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (413 mg, 100 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :

: 0,2]: R_f = 0,51 ; [<x]²⁰ = -26,8 ° (c = 1,0/CH₃OH) ; t.t.= 92 °C .

1.47) p-Aminofenyl-3-0-(N-butyl-karbamoylmethyl)-p-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.47.a) (332 mg, 0,8 mmol) se hydro• 4 *4 __ 4 4 4 4

- 99 - .·· Ϊ

4 •444 44

44 ·· ·*·* ·· 4 · * · ·

4 4 4 · 4 · 4 · 4 ··* * · 4 · ·

444 44 ·· * genuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Po vysrážení ze směsi ethylalkoholu a n-hexanu se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (105 mg, 34 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]:

R_f = 0,32 ; t.t.= 135 °C ,

Příklad 1.48 p - Aminof ěnyl - 3 - O - methoxykarbonylmethyl - a - D -mannopy r anos i d

1.48.a) p-Nitrofenyl-3-0-methoxykarbonylmethyl-a-D-mannopyránosid

Sloučenina 1.40.a) (13,6 g, 25 mmol) se nechá reago-. vat stejně jako je popsáno v příkladě 1.42. a) . Po mžikové chromatografií se získá takto vedle některých vedlejších produktů produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (2,79 g, 18 %); DC [ethylacetát/petrolether 2 : 1]: Rf = 0,50 ; t.t.= 95 až 97 °C .

1.48) p-Aminofenyl-3-O-methoxykarbonylmethyl-a-D-mannopyranósid

Sloučenina 1.48.a) (1,23 g, 2 mmol) se hydrogenuje

4444 * ·

4 . «

4 4 4 4 • ·

4« «,.

100 4 » I

444· 44 a zpracuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.40) . Získá se takto produkt ve formě hnědavé amorfní pevné látky (250 mg, 36 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) : 3 : 0,2]: R_f = 0,45 .

Přikladl.49 p-Ami nofeny1-3-0-kar b oxyme thy1-a-D-mannopyrano s i d

1.49.a) p-Nitrofenyl-3-0-benzoxykarbonylmethyl-6-0-trifenylmethy1-a-D-mannopyranosid

Sloučenina 1.40.a) (13,6 g,.25 mmol) se nechá reagovat stejně jako je popsáno v příkladě 1.42.a) s benzyleste-. rem kyseliny bromoctové (14,4 ml, 90 mmol) . Po mžikové chromatografií [petrolether/ethylacetát 20 : 1 -> 10 : 1] se získá takto vedle některých vedlejších produktů produkt ve formě žlutavé pěnovité látky (5,0 g, 29 %); DC [ethylacetát/petrolether 2 : 1]: R_f = 0,66 ; [α]²θ = +74,8 ⁰ (c = i,o/ch₂Ci₂) .

1.49) p-Aminofenyl-3-0-karboxymethyl-a-D-mannopyranosid

Sloučenina 1.49.a) (2,08 g, 3 mmol) se hydrogenuje • · 9 9

101 * .99 ·: 9 99 9 9 9» · 9 «99 9 9 ·«·»·· 9« 9 9 · « « 9 stejně, jako je popsáno v příkladě 1.40) po dobu 36 hodin.

Po zahuštění filtrátu se získaný zytek přesráží ze směsi ethylalkoholu a n-hexanu. Promytím ethylacetátem a novým přesrážením ze směsi ethylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (495 mg, 50 %) ; DC [methylalkohol]: Rf = 0,53 ; t.t.= 205 až 207 °C .

Příklad 1.50 p-Aminofenyl-3 - 0 -karbamoylmethy1-a-D-mannopyranos i d

1.50.a) p-Nitrofenyl-3-0-karbamoylmethyl-6-0-trifenylmethyl-a-mannopyranosid

Sloučenina 1.49.a) (1,04 g, 1,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.44.a). Po usušení ve vakuu olejové vývěvy se získaný zbytek čistí pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 2:3] Získá sě takto produkt ve formě bílé krystalické látky (561 mg, 62 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] : R_f = 0,67 ; [a]²⁰ = +91,3 ° (c = 1,0/ CH₂C1₂) ; t.t.® 125 až 127 °C .

X • 9 9 99 9

- 102

99

9 9 9 9

9 9 ' * · 9

9 9.· «999 99 « »

9· «

1.50) ρ-Aminofenyl-3-O-karbamoylmethyl-a-D-mannopyranosid

Výše uvedená sloučenina (541 g, 0,9 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.40) po dobu 48 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek důkladně promyje methylalkoholem a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (134 mg, 45 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoníak (25%) 15 : 3 : 0,2] : Rf = 0,21 ; t.t.= 126 až 128 °C .

Přiklad 1.51 p-Aminofenyl-3-desoxy-p-D-galaktopyranosid

OH

1.51.a). p-Nitrofenyl-2,6-di-O-benzyl-4-O-acetyl-p-D-galak- topyranosid

Roztok sloučeniny 1.31.b) (2,7 g, 56 mmol) v dichlormethanu (20 ml) se smísí s triethylorthoacetátem (3 ml, 16,3 mmol) a kyselinou toluensulfonovou (20 mg) . Po 30 minutách při teplotě místnosti se vsázka zředí dichlormethanem (200 ml) , promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhliČitanu sodného (50 ml) , organická fáze se vysuší pomocí bezvodého síranu hořečnatého a po filtraci se ve vakuu zahustí. Získaná bezbarvá pěnovitá látka se rozpustí v 80% kyselině octové (15 ml) . Po dalších 30 minutách při teplotě místnosti se vlije vsázka do nasyceného roztoku

103

• · · * s ·

4. · · «44« 4 · •4 94 ·99« «994 4 • 4*44

4 9 494 4

4 4’ ·;

hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) , extrahuje se chloroformem (3 x 75 ml) , spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a po filtraci se ve vakuu zahustí. Vysrážením ze směsi ethylalkoholu a petroletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (2,43 g, 83 %) ; DC [ethylacetát/petrolether 2:1] : Rj? = 0,64 ; [α]²θ = -62,1 ° (c = 1,O/CH₂C1₂) ; t.t.= 83 °C .

1.51. b) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-benzyl-3-0-trifluormethansulf ony1-4-0-acetyl- β -D-galaktopyranosid

- Roztok sloučeniny 1.51.a) (2,3 g, 4,4 mmol) ve směsi dichlormethanu (30 ml) a pyridinu (3 ml) se pod argonovou atmosférou při teplotě -20 °C po kapkách smísí s roztokem anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové (2 ml,

11,8 mmol) v dichlormethanu (30 ml) . Po jedné hodině při teplotě -20 °C se vlije vsázka do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) , organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a po filtraci se ve vakuu zahustí. Po mžikové chromatografii získaného zbytku [toluen -> toluen/ethylacetát 20 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (2,39 g, 83 %) ;

DC [toluen/ethylacetát 5 : 1] : = 0,55 ; [α]²θ = -61,4 ° (c = 1,O/CH₂C1₂) ; t.t.= 105 °C .

1.51. c) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-benzyl-3-desoxy^-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (1,31 g, 2 mmol) se rozpustí v toluenu (25 ml) a smísí se s tetrabutylamonium-tetraborhydrátem (1,54 g, 6 mmol) . Po 2 hodinách při teplotě 80 °C se vsázka zředí dichlormethanem (200 ml) , promyje se

104 • · ·' jednou vodou (50 ml) , organická fáze se vysuší pomocí bezvodého síranu hořečnatého a po filtraci se ve vakuu zahustí. Po mžikové chromatografii získaného zbytku [toluen/ethylacetát 7 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (596 mg, 64 %) ; DC [toluen/ethylacetát 5 : 1] : Rf = 0,10 ; [a]²⁰ = -81,3 ° (c = 1,O/CH₂C1₂) ; t.t.= 14 °C .

1.51) p-Aminofenyl-3-desoxy-p-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (465 mg, 1 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.40) po dobu 6 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek přesráží ze směsi ethylalkoholu a petroletheru a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (206 mg, 81 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] :

Rf = 0,22 .

Přikladl.52 p-Aminofenyl-3,4-didesoxy-p-D-galaktopyranosid

OH

NH

1.52.a) p-Nitrofenyl-2,6-di-0-benzyl-3,4-di-O-trifluormethans ulfonyΙ-β-D-galaktopyranosid

Sloučenina 1.31.b) (2,12 g, 4,4 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.51.b) s anhydridem kyseliny trifluormethansulfonové (4 ml, 23,6 mmol) . Po

105 • ©l ··' • · © » • ·' • · » · • © · ·♦©· ·· © ·» ·· ···· ©····« · ♦ © » © ·' ♦ • · © · © · ·' · • · · * »· · ·© ·· © mžikové chromatografii získaného zbytku [toluen -> toluen/ ethylacetát 50 : 1] se získá produkt ve formě žlutavé olejovité látky (2,75 g, 84 %) ; DC [toluen/ethylacetát 5 : II : Rf = 0,67 ; [ce]²⁰ = -22,5 ° (c = 1,O/CH₂C1₂) .

1.52.b) p-Nitrofenyl-2,6-di-O-benzyl-3,4-didesoxy^-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (1,49 g, 2 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.51.o) , s tetrabutylamonium -tetraborhy drátem (2,31 g, 9 mmol) . Po mžikové chromatografii získaného zbytku [toluen -> toluen/ ethylacetát 50 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (629 mg, 70 %) ; DC [toluen/ethylacetát 5 : 1] : Rf = 0,53 [a]²⁰ = -79,1 ° (c = 1,O/CH₂C1₂) ;

t.t.= 89 °C .

1.52) p-Aminofenyl-3,4-didesoxy-p-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (450 mg, 1 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.40) po dobu 5 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek přesráží ze směsi ethylalkoholu a petroletheru a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (183 mg, 76 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] :

Rf = 0,22 ; [α]^2θ = -115,1 ° (c = l.O/CH^OH) ; t.t.=187 °C.

Příklad 1.53 p-Aminofenyl-6-0-acetyl-p-D-galaktopyranosid • fe fe fefe · • · fe' • fefe • · · fetvfe ·· ··'

106 ·’ fefe ·· ···· • fe, · · · · fe • - · · ·· · ♦ • · fe · · · · *' fe · · fefe fe·· fe· fefe ·

1.53,a) p-Nitrofenyl-6-0-acetyl-p-D-galaktopyranosid

Roztok p-nitrofenyl-p-D-galaktopyranosidu (7,53 g, 25 mmol) v absolutním acetonitrilu (80 ml) se při teplotě 0 °C po kapkách smísí s čerstvě připraveným roztokem z pyridinu (2 ml, 25 mmol) a acetylchloridu (1,85 ml, 26 mmol) v acetonitrilu (20 ml) . Reakční směs se míchá po dobu 30 minut při teplotě 0 °C a potom se ve vakuu zahustí. Po mžikové chromatografií získaného zbytku [dichlormethan/methylalkohol 50 : 1 -> 20 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (4,02 g, 47 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] : Rf = 0,50 - 1.53) p-Aminofenyl-6-O-acetyl-p-D-galaktopyranosid

Výše uvedená sloučenina (1,72 g, 5 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.40) po dobu 2 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek přesráží ze směsi methylalkoholu a diethyletheru a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (1,34 g, 86 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] : R_f = 0,34 ; [a]²⁰ = -41,0 ° (c = 0,56/CH₃OH) ; t.t.= 187 °C (rozklad).

•4 444*

107 ·· *> · 4 4 * 4 · 4 · 1« · · 4 4 · 4 · V | * 4 4 4 « · 4'ί· , ·'>- * 4 4- ·· · > · · .4 4 · ·

4444 44 444 44 «4 4

Příklad 1.54 p-Aminofenyl-3,4-di-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosid

1.54.a) Acylace sloučeniny 1.24.a)

Sloučenina 1.24.a) (1,36 g, 3 mmol) se rozpustí v dimethylformamidu (25 ml) a smísí se s methylesterem kyseliny bromoctové (1 ml, 10,6 mmol) a po částech s 80% suspensí hydridu sodného v minerálním oleji (300 mg, 10 mmol). Po 3,5 hodinách při teplotě ístnosti se přidá znovu methylester kyseliny octové (250 μΐ, 2,65 mmol) a hyd- , ríd sodný v minerálním oleji (75 mg, 2,5 mmol) . Po dalších 2 hodinách se reakce ukončí přikapáním methylalkoholu (5 ml) a ve vakuu se reakční směs zahustí. Získaný zbytek se vyjme do dichlormethanu (250 ml) a roztok se důkladně rozmíchá s vodou (100 ml) . Organicá fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu horečnatého (10 g) , zahustí se ve vakuu a čistí se pomocí mžikové chromatografie [petrolether /ethylacetát 10 : 1 -> 7 : 1 -> 5 : 1 -> 3 : 1]. Získají se takto tři frakce produktů :

φφ φφ

Φ¹ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ) φ · Φφφ··* ΦΦ φ*' φφφφ108 φφφ Φ · φ • φ Φ ΦΦ· ♦ φφφ · · φφφ »φ φφ φ

Frakce 1 : p-Nitrofenyl-2,3,4-tri-0-methoxykarbonylmethy 1-β-D-galaktopyranosid ; bezbarvá pěnovitá látka (401 mg, 21 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1] R_f = 0,47 ; [a]²⁰ = -51,9 ° (c = 0,26/ CH₃0H) .

Frakce 2 : neidentifikováno ; bezbarvá pěnovitá látka (88 mg) ; DC [petrolether/ethylacetát 1:1] : R^ = 0,39 : [a]²⁰ = -61,5 ° (c = 0,26/CH₃OH) .

Frakce 3 : p-Nitrofenyl-3,4-di-0-methoxykarbonylmethyl-β-D-galaktopyranosid ; bezbarvá pěnovitá látka (275 mg, 16 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1] : R_f = 0,30 ; [<x]²⁰ = -38,6 ° (c = 0,28/ ch₃oh) .

1.54) p-Aminofenyl-3,4-di-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosid

Frakce 3. z příkladu 1.54.a) (206 mg, 0,3 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.40) po dobu 16 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek rozvaří s diethyletherem (20 ml) a získá se takto produkt ve formě šedé krystalické látky (45,6 mg, 37 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 1] : R^ = 0,22 ; t.t.= 155 °C (rozklad).

Příklad 1.55 p-Aminof enyl-2,3, 4-tri-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosid

0« 0·00 • 0 ·

0 0

000 0

0 *

00' 00

0' 0 0 0 •1·

109

0000 0·

OH

Frakce 1 z příkladu 1.54.a) (380 mg, 0,5 mmol) se hydrogenuje stejně jako je popsáno v příkladě 1.40) po dobu 16 hodin. Po zahuštění filtrátu se získaný zbytek rozvaří s diethyletherem (20 ml) a získá se takto produkt ve formě žlutohnědé olej ovité látky (46,8 mg, 19 %) ; DC [petrolether/ethylacetát 1 : 1] : Rf = 0,29 ; t.t.= 106 °C (rozklad).

Příklad 1.56 p-Aminofenyl-4₇0-(β-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid *

p-Nitrofenyl-4-0-(β-D-galaktopyranosyl)-β-D-galaktopyranosid (4,63 g, 10 mmol) se hydrogenuje stejně, jako je

110 popsáno v příkladě 1.23). Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (3,04 g, 70 %) ; DC [methylalkohol] : Rf = 0,55 ; t.t. = 235 až 237 °C (rozklad).

Příklad 1.57 p-Aminofenyl-4-0-(3’-sulfát-p-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid, sodná sůl

1.57.a) p-Nitrofenyl-4-0-(3’,4’-0-isopropyliden-p-D-galak- topyranosyl)-β-D-glukopyranosid < -.

p-Nitrofenyl-4-0-(β-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid (23,2 g, 50 mmol) se smísí s dimethoxypropanem (400 ml) a katalytickým množstvím kyseliny (±)-camfer-10-sulfonové (400 mg, 1,7 mmol) . Po 3 dnech při teplotě místnosti se reakce ukončí přídavkem trimethylaminu (240 μΐ, 1,7 mmol), ve vakuu se. zahustí a získaný zbytek se suší po dobu 2 hodin ve vakuu olejové vývěvy. Získaná krystalická látka se vyjme do směsi methylalkoholu a vody 10 : 1 (500 ml). a vaří se po dobu 6 hodin pod zpětným chladičem. Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografií získaného zbytku [dichlormethan/methylalkohol 25 : 1 -> 10 : 1 , vždy ·« * «Γ 0 0 Φ

0* ·

0·

0» 0000 00

111

s 0,5 % triethylaminu] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (15,2 g, 60 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,49 ; t.t.= 253 až 255 °C (rozklad) .

1.57.b) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-0-benzoyl-4-0-(2’,6’-di-0-benzoyl-3’,4’-O-isopropyliden-p-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid

K roztoku sloučeniny 1.57.a) (15,1 g, 30 mmol) v pyridinu (300 ml) se při teplotě 0 °C pomalu přikape v průběhu 30 minut benzoylchlorid (50 ml, 430 mmol) . Reakční směs se nechá míchat po dobu 2 hodin při teplotě místnosti a potom se vlije za míchání do ledové vody (2000 ml) . Po 15 minutách se vysrážené krystaly odfiltrují a vyjmou se do dichlormethanu (1500 ml) . Roztok se potom promyje vodou (2x 500 ml) a 1 N roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x 500 ml) , organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého (50 g) , zahustí se ve vakuu a čistí se krystalisaci z methylalkoholu. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (26,7 g, 87 %) ; < DC (dichlormethan/methylalkohol 50 : 1] : Rf = 0,49 ; [α]²θ =+23,6 ° (c = l,08/CH₂Cl₂) ; t.t.= 272 až 274 °C .

1.57.c) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-0-benzoyl-4-0-(2’,6’-di-0-benzoyl-β-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid

Roztok sloučeniny 1.57.b) (20,5 g, 20 mmol) v dichlormethanu (400 ml) se smísí s 99% kyselinou trifluoroctovou (20 ml) a reakční směs se míchá po dobu 20 minut při teplotě místnosti. Potom se promyje 1 N roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x 200 ml) , organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého (10 «» ·· a »· ·· ·»»

9 9 · * * 9 · »9

1-4--1 999 9_é9e99 ” ilZ «·9» 99 99 «9* 9

99· · · 9 99

9999 ♦· ·· »9 99 9

g) , zahustí se ve vakuu a získaný zbytek se čistí přesrážením ze směsi dichlormethanu a diethyletheru. Získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (18,0 g, 91 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1] : Rf =

0,18 ; t.t.® 234 °C .

1.57.d) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-0-benzoyl-4-0-(2’,6’-di-0-benzoyl-4’-O-acetyl-p-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid

Sloučenina 1.57.c) (5,5 g, 5,6 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.51.a) a po mžikové chromatografii [petrolether/ethylacetát 3 : 1 -> 1 : 1] se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (4,03 g, 70 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1] :

Rf = 0,67 ; t.t.= 118 °C .

1.57.d) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri;-0-benzoyl-4-0-(2 ’ ,6’-di-0-benzoyl-3’-sulfát-4’-O-acetyl-p-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid, sodná sůl

Roztok sloučeniny 1.57.d) (3,59 g, 3,5 mmol) v pyridinu (200 ml) se smísí s komplexem oxid sírový-pyridin . (4,5 g, 28 mmol) a míchá se nejprve po dobu 2 hodin při teplotě 60 °C a potom po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se reakce ukončí přikapáním methylalkoholu (50 ml.) a. reakční , směs se ve. vakuu zahustí. Získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 ; 1] . Získá se takto pevný produkt, který se vyjme do směsi dichlormethanu a methylalkoholu 1 : 1 (200 ml) a smísí se s Amberlite 1R120 (Na⁺-forma, 10 g) . Tato směs se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti, přefiltruje se a filtrát se ve vakuu zahustí. Získá se v »»

4 4 4

4 4

4 4 4

4 *

4444 44

113 v 4V « w·»» • 4 4 4 · · ·

4« 4 · 4 * « 4 ·♦· · « 4 4 · · >4« 44 4· * takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (3,64 g, 92 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,87; t.t.= 168 °C .

1.57 . f) p-Nitrofenyl-4-0-(3’-sulfát-p-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid, sodná sůl

Sloučenina 1.57.e) (3,4 g, 3 mmol) se rozpustí v absolutním methylalkoholu (150 ml) , smísí se s methylátem sodným (200 mg) a míchá se po dobu 7 hodin při teplotě 60 °C . Po ochlazení na teplotu místnosti se neutralisuje pomocí Lewatitu SC108 (H⁺-forma) a potom se přefiltruje. Hodnota pH filtrátu se zvýší přikapáním 1 N hydroxidu sodného na pH 7 až 8 , ve vakuu se odpaří a vysrážením ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě lehce nahnědlé krystalické látky (1,30 g, 77 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,55 ; t.t.= 230 °C (rozklad) .

1.57) p-Aminofenyl-4-0-(3’-sulfát-p-D-galaktopyranosyl) -β-D-glukopyranosid, sodná sůl

Výše uvedená sloučenina (1,13 g, 2 mmol) se redukur, je stejně jako je popsáno v příkladě 1.24) Po rozvaření s diethyletherem (50 ml) a získá se takto produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (983 mg, 92 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,22 ; t.t.= 176 °C (rozklad).

Příklad 1.58 p-Aminofenyl-4-0-(3’-O-methyl-β-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid ·· ···♦

H₃C

1.58.a) Selektivní methyláce p-nitrofenyl-4-0-(β-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid p-Nitrofenyl-4-0-(β-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid (2,3 g, 5 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.25.a) . Pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 -> 10 : 1 -> 5 : 1] sé získají dva produkty :

Frakce 1 : p-Nitrofenyl-2-0-methyl-4-G-(3’-O-methyl^-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid ; bezbarvé ; krystaly . (264 mg, 11 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,46 ; [α]²θ = -73,9 ° (c = 1,0/CH₃OH) ; t.t.= 228 °C (rozklad) .

Frakce 2 : p-Nitrofenyl-4-0-(3’-0-methyl-β-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid ; bezbarvé krystaly (1,0 g_, 11 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : R_f = 0,29 ; [a]²⁰ = -65,3 ⁰ (c = 1,1/ CH₃OH) ; t.t.= 220 °C .

1.58) p-Aminofenyl-4-0- (3 ’ -O-methyl^-D-galaktopyranosyl) -β-D-glukopyrános i d

- 115 •444 44

4« 44 44·4 ·· 4 · »4 · • 4 4 «44 • 4 44 444 · · « 4 4 ·«· 44 44 *

Frakce 2 z příkladu 1.58.a) (955 mg, 2 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Po promytí diethyletherem (50 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (894 mg, 100 %) ; DC [dichlorraethan/methylalkohol 5 : l] : Rf = 0,08 ; t.t.= 129 °C (rozklad) .

Příklad 1.59 p-Aminofenyl-2-O-methyl-4-0-(3’-0-methyl-177-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid

Frakce z příkladu 1.58.a) (246 mg, 0,5 mmol) se redukuje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24) . Po promytí diethyletherem (50 ml) se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (186 mg, 81 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,13 ; [α]²θ = -3,6 ° (c = 1,0/CH₃OH) ; t.t.= 105 °C .

Příklad 1.60 p-Aminofenyl-4-0-(3’,4’-di-O-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid «4 9999

116

OH

99 9 99

4 4 · · * 9 9 9 9 4

4·· ♦ · « 9 · ·

4 44 4« *4 4444

444 444 4*

4444 ·4 444 «· 44 4

1.60. a) p-Nitrofenyl-2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(2’,6’-di-O-benzyl-3’ , 4 ’-O-isopropyliden-p-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid

Sloučenina 1.57.a) (5,0 g, 10 mmol) se nechá reagovat s benzylbromidem (30 ml, 250 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 1.26.c) po dobu 16 hodin. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vyjme do ethylesteru kyseliny octové (300 ml) a získaný roztok se promyje vodou (200 ml) . Organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého (10 g) ,, zahustí se ve vakuu a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/petrolether 5 : 1 -> dichlormethan] . Získá se takto produkt ve formě hnědavé olejovité látky (5,3 g, 56 %) ; DC [díchlormethan/methylalkohol 50 : 1] : Rf = 0,70 ; [a]²⁰ = -23,2 ° (c = 1,O/CH₂C1₂)

1.60. bj p-NitrofenyÍ-2,3,6-tri-0-benzyÍ-4-0-(2’,6’-di-O-benzyl-β-D-galaktopyranosy1)-β-D-glukopyranos i d

Výše uvedená sloučenina (4,77.g, 5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 1.57.c). Po zahuštění ve vakuu a přesrážení ze směsi diethyletheru a

- 117

0* ·' 0 0* 00 000 0 00·· · 0 · »0 0 • · · 0 0 « * · · • 0 ·0 0 · « · 0000

0 0 000 0 · • 000 00 000 *0 0* 0 petroletheru se takto získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (3,94 g, 86 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 50 : 1] : R_f = 0,36 ; t.t.= 116 °C .

1.60.c) p-Nitrofehyl-2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(2’,6’-di-O-benzyl-3’,4’-O-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid

Výše uvedená sloučenina (1,8 g, 2 mmol) se methyluje stejně, jako je popsáno v příkladě 1.24.c). Po zahuštění ve vakuu a přesrážení ze směsi dichlormethanu a petroletheru se získá produkt ve formě bezbarvé krystalické látky (1,55 g, 82 %)_; ; DC [dichlormethan/methylalkohol 50 : 1] : Rf = 0,74 ; t.t.= 161 až 162 °C .

1.60) p-Aminofenyl-4-0- (3’ ,4’ -di-O-methyl^-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosid

Sloučenina 1.60.c) (1,41 g, 1,5 mmol) se rozpustí v methylalkoholu (50 ml) a po přídavku hydroxidu palladnatého na uhlím (vlhký, 20 % Pd, 500 mg) se hydrogenuje po dobu 6 dnů ve vodíkové atmosféře za nepatrného přetlaku. Suspense se přefiltruje přes celíte a filtrát se důkladně promyje methylalkoholem (100 ml) . Po zahuštění filtrátu ve vakuu a promytí získaného zbytku dichlormethanem se získá produkt ve formě hnědavé krystalické látky (425 mg, 61 %) ; t.t. = 124 °C (rozklad) .

118

Příklad 2.1

N-Alanyl-batracylin h₂n ch₃ h o

2.1.a) N- [N-(terč.-butoxykarbonyl)-alanyl]-batracylin

N- (terč.-butoxykarbonyl)-alanin (3,3 g ,‘ 17,5 mmol) a 2-isobutoxy-l-isobutoxykarbonyl-l, 2-dihydro-chinolin (6,8 ml, 23 mmol) se rozpustí ve 100 ml díchlormethanu. Po dvacetiminutovém míchání při teplotě místnosti se přidá roztok batracylinu (4,1 g, 16,5 mmol) v absolutním dimethylformamidu (350 ml) a vsázka se míchá po dobu 48 hodin při teplotě místnosti. Potom se ve vakuu zahustí na objem

50..ml, doplní se ethylesterem kyseliny octové na objem 300 ml a ihned se zahřeje na 10 minut k varu. Potom se nechá vychladnout na teplotu místnosti, přefiltruje se a filtrační koláč se znovu vyvaří s ethylesterem kyseliny octové (200 ml) . Ochlazením za míchání na teplotu 0 °C a po filtraci se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (6.,.18 ..g, 84 %) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,57 ; t.t. = 246 až 247 °C (rozklad) .

2.1) N-Alanyl-batracylin

Roztok sloučeniny 2.1.a) (10,5 g, 25 mmol) v bezvodé kyselině trifluoroctové (150 ml) se míchá po dobu 15 mi119 «« « «I • 4 4 · ·* *

9 * 4 9 ♦ * * * · • « · · ·

4·4· 44 ··! 4· «4 ·4·

4

4 • · 4 β nut při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu na objem 30 ml se vsázka za silného míchání vlije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (1000 ml) . Míchá se ještě dále po dobu 10 minut, načež se směs promyje vodou, malým množstvím isopropylalkoholu a diethyletheru. . Produkt vypadne ve formě žluté krystalické látky (7,15 g, 89 %) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,06 ; t.t. = 261 až 262 °C (rozklad) .

P ř í k I a d 2.2

N-(Lysyl-alanyl)-batracylin, di-trifluoracetát

CFjCOOH H₂N

2.2.a) N-[Ň^alf^a,N^eP^sil°ⁿ-di(terč.-butoxykarbonyl)-lysyl-alanyl]-batracylin

N,N-Di-(terč.-butoxykarbonyl)-lysin (2,1 g, 6 mmol) a 2-isobutoxy-l-isobutoxykarbonyl-1,2-dihydro-chinolín (2,4 ml, 8 mmol) se rozpustí ve 20 ml dichlormethanu. Po dvacetiminutovém míchání při teplotě místnosti se přidá roztok sloučeniny 2.1) (1,6 g, 5 mmol) v dimethylformamidu (40 ml) a reakční směs se míchá po dobu dalších 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 2 : 1 -> 1 : 1 -> ethylacetát]. Získá se takto • 4 444«

120

4 4 4 4 4*· 4 * 4 · · · 4 *· ·4 «· *4 · · 4 ·

44* 4*4 44

4*44 4 4 * 4 · «« I* 4 produkt ve formě žluté krystalické látky (2,89 g, 89 %) ;

DC [ethylacetát] : Rf = 0,52 ; t.t. = 203 až 204 °C .

2.2)' N-(Lysyl-alanyl)-batracylin, di-trifluoracetát

Suspense výše uvedené sloučeniny (2,6 g, 4 mmol) v dichlormethanu (25 ml) se smísí s bevodou kyselinou trifluofcoctovou (10 ml) a získaný roztok se míchá po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vykrystalisuje přídavkem diethyletheru (100 ml) Sraženina se potom odfiltruje a důkladně se promyje diethyletherem. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (2,68 g, 99 %) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,05 ; t.t. = 144 až 146 °C (rozklad) .

? i 1

P ř i k 1 a d 2.3

N-(D-Alanyl)-batracylin

2.3.a) N-(N-benzyloxykarbonyl-D-alanyl)-batracylin

N-Běnzyloxykarbonyl-D-alanin (3,9 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat a zpracuje stejně, jako je popsáno v příkladě

2.1.a) . Získaná žlutá krystalická látka (6,4 g, 80 %) se oddělí filtrací a spojené filtráty se po zahuštění ve vakuu čistí pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethyláce-

	- 121 -	«0 00 0 « 0 « 0 0 0 0 0 0 0 0· •000 0·	0 00 00 000 ••«0 0 0 0 0· 0· · • 0 0 00 0000 0 0 0 ·· 000 00 00 0
tát 3	: 2 -> 1 : 1] . Získá se takto	dalších 1	,35 g pro-
duktu	(17 %) ; DC [ethylacetát] : R^	=0,45 ;	[a]²⁰ =
+75,1	° (c = l,0/CH₂Cl₂ + 0,5 % C₃OH)
2.3)	N-(D-Alanyl)-batracylin

Sloučenina 2.3.a) (11,4 g, 25 mmol) se rozpustí ve 33% roztoku bromovodíku v ledové kyselině octové (100 ml) . Po 30 minutách při teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu zahustí na objem 30 ml, načež se za silného míchání vlije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (1000 ml) . Reakční směs se míchá dalších 10 minut, produkt se odfiltruje a promyje se vodou, malým množstvím isopropylalkoholu a diethyletherem. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (7,87 g, 98 %) ; DC [ethylacetát] : R^ = 0,06 ; t.t. = 267 °C (rozklad) .

Příklad . 2,4 *

N- [N^a4^^a- (terč. -butoxykarbónyl) -lysyl-D-alanyl]-batracylin

2.4. a) N- [N-^al^^a- (terč. -butoxykarbonyl) -N^ePsil°ⁿ_ (f luoreny 1 - 9 -methoxykarbony 1) - lysyl-D-alanyl ] - batracylin jqalfa_ (-|-_erc - butoxykarbonyl)-N^eP^s^^^on-(fl_UOrenyl-9 φφ φφφφ

122 «φφ φ

φ *

-methoxykarbonyl)-lysin (5,3 g, 11,3 mmol) a 2-isobutoxy-1-isobutoxykarbonyl-l,2-dihydro-chinolin (4 ml, 14 mmol) se rozpustí ve 40 ml dichlormethanu. Po dvacetiminutovém míchání při teplotě místnosti se přidá roztok sloučeniny

2.3) (3,2 g, 10 mmol) v dimethylformamidu (80 ml) a reakční směs se míchá po dobu dalších 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suspenduje v dichlormethanu (100 ml) . Získaná suspense se doplní diethyletherem na objem 300 ml. Po odfiltrování a promytí filtračního koláče diethyletherem se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (5,65 g, 65 %); DC [ethylacetát] : Rf = 0,45 ; t.t. = 186 °C .

2.4) N- [N^a^^a- (terč. -butoxykarbonyl) -lysyl-D-alanyl] -batracylin

Výše uvedená sloučenina (5,6 g, 7,3 mmol) se rozpustí v dimethylformamidu (50 ml) . Po přídavku piperidinu (50 ml) se míchá po dobu 3 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/ amoniak (25%) 15 : 3 : 0,1 -> 15 : 5 : 0,1] . Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (2,5 g, 62 %) ; t.t. = 217 °C (rozklad) .

P ř i k 1 ad 2.5.................. ” ⁷

N- [N^alfa- (fluorenyl-9-methoxykarbonyl) -lysyl-D-alanyl] -batracylin, trifluoracetát

99

9 «

123 «••9 9· • 99 *99«·· ·· · * 9 · · • · « 9 9 9

9 *9 «99 9 • · 9 9 9 • ·9 99 . 99 ·

2.5 , a) Ν- [N^a3-^^a- (fluorenyl-9-methoxykarbonyl) -N^eP^sil°ⁿ-(terč.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracyiin j^alfa_ (f i_uoxenyi_9_methoxykarbonyl) -N^eP^sil°ⁿ- (terč. butoxykarbonyl)-lysin (5,3 g, 11,3 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.4.a) Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (7,0 g,

%) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,51 ; t.t. = 223 °C .

2.5) N-[N^a-*-^^a-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl ]-batracyiin, trifluořacetát

Sloučenina 2.5.a) (6,17 g, 8 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2) . Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vysráží ze směsi dichlormethanu a diethyletheru a produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (6,08 g, 97 %) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,05 ; t.t. = 224 °C (rozklad) .

Příklad 2.6

N-[N^eP^sil°ⁿ_(fluorenyl-9-méthoxykarboňyl)-lysyl-D-alanyl]batracyiin, trifluořacetát

124 ♦· ····.

Sloučenina 2.4.a) (6,17 g, 8 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2) . Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vysráží ze směsi dichlormethanu a diethyletheru a produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (5,97 g, 95 %) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,04 ; t.t. = 188 °C (rozklad) .

Příklad 2.7

N-(Lysyl-D-asparagyl)-batracylin, di-trifluoracetát

2.7.a) Ν-[N-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-D-asparagyl-(β-terc;-butylester)]-batracylin

N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-D-asparagyl-(β-terc.φφ φφ φ φ φ φ φ φ · φφφ φ φ · ·« φ · φ φ φφφ φφ φφ «φ. ΦΦΦΦ

125 φ φ * φφφ • φ φ ·

φ. φ.

φφ φ butylester) (7,2 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1) . Po zahuštěni ve vakuu se získaný, zbytek vyjme do dichlormethanu (1000 ml) a promyje se 1 N kyselinou chlorovodíkovou (2x 200 ml) a 1 N roztokem hydrogenuhličitanu sodného (lx 200 ml) . Po vysušení pomocí bezvodého síranu hořečnatého (20 g) , filtraci, zahuštění na objem 100 ml a přídavku petroletheru vypadne sloučenina 2.7.a) ve formě žluté krystalické látky (9,7 g, 86 %) ; DC [ethylacetát] : R_f = 0,71 ; t.t.

= 195 °C .

2.7. b) N-[D-Asparagyl-(β-terc.-butylester)]-batracylin

Výše uvedená sloučenina (6,4 g, 10 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (100 ml) . Po přídavku morfolinu (50 ml) se reakční směs míchá po dobu 5 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové Chromatografie [ethylacetát/petrolether 4 : 1 -> ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 109 : 1) . Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (3,44 g,,82 %) ; DC.[ethylacetát] : R_f = 0,21 ; t.t. = 209 °C /

2.7. c) N-[N^a^^^a,N^eP^silon-di-(terč.-butoxykarbony1)-lysyl-D-asparagyl-(β-terc.-butylester)]-batracylin

Sloučenina 2.7.b) (2,1 g, 5 mmol) še nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2.a) . Produkt se t * získá ve formě žluté krystalické látky (1,71 g, 46 %) ; DC [ethylacetát] : = 0,61 ; t.t. = 142 °C .

2.7) N-(Lysyl-D-asparagyl)-batracylin, di-trifluoracetát

4.

9

126

444 ' «' 4

4·

Sloučenina 2.7.c) (1,65 g, 2,2 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2) . Produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (1,5 g, 95 %) ; DC [methylalkohol/kyselina octová 10 : 1] : Rf = 0,29; t.t. = 154 až 155 °C (rozklad) .

Příklad 2.8

N-(lysyl-D-glutamyl)-batracylin, di-hydrobromid

2,8 . a) Ν-[N-(terč.-butoxykarbonyl)-D-glutamyl-(β-benzylester)]-batracylin

N- (Terč. -butoxykarbonyl) -D-glutamyl- (β-benzylester) (5,9 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a) . Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek čistí pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 1:1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (9,45 g, 95 %) ; DC [ethylacetát]: Rf = 0,61 ; [a]²⁰ =+53,1 ° (c = 1,O/CH₂C1₂) ; t.t. = 159 °C.

127 fe 9.

«··· fefe ♦ ♦ · ♦ · · • · * fe · • fe fefefefe • * • . · • •fe ♦ « fe • fe ·,

2.8.b) N-[D-Glutamyl-(β-benzylester)]-batracylin

Sloučenina 2.8.a) (9,1 g, 10 mmol) se rozpustí v kyselině mravenčí (100 ml) a roztok se míchá po dobu 6 ' hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek vyjme do methylalkoholu (100 ml) a hodnota pH roztoku se upraví opatrným přídavkem 25% vodného roztoku amoniaku na 8 Po novém zahuštění ve vakuu a následuj ící mžikové chromatografií [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1] se získá produkt ve formě žluté olejovité kapaliny (4,2 g, 56 %) ; DC [ethylacetát]: Rf = 0,06 .

2.8.c) N-[N^alfa,N^epsilon-Di-(terč.-butoxykarbonyl)-lysylD-glutamyl-(β-benzylester)]-batracylin

Výše uvedená součenina (3,75 g, 8 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2.a) . Produkt se získá ve⁽formě žluté amorfní látky (2,26 g, 35' %) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,40 ; [α]²θ = +32,1 ° (c = 1,2/CH₂C1₂) .

i. <<·'- ^J

2.8) N-(lysyl-D-glutamyl)-batracylin, di-hydrobromid

Sloučenina 2.8.c) (2,0 g, 2,5 mmol) se rozpustí ve

33% roztoku bromovodíku v ledové kyselině octové (50 ml) .

Po jedné hodině při.teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu zahustí a získaný zbytek se důkladně promyje diethyletherem. Produkt se vysráží ve formě žlutočervených krystalů (1,63 g, 98 %j ; t.t. = 207 až 209 °C (rozklad).

Příklád2.9

N-[Lysyl-glycyl]-batracylin, di-trifluoracetát

128

9999 • 9 9ι

9 9 • •9 9

9· • · ·

O

Η

CF.COOH h₂n cf₃cooh h₂n

2.9. a) N-[N-(terč,-butoxykarbonyl)-glycyl]-batracylin

N-(Terč.-butoxykarbony1)-glycin (3,07 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Po 3 dnech při teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu . odpaří a získaný zbytek se vyjme do ethylalkoholu (200 ml) . Po třicetiminutovém míchání za varu pod zpětným chladičem a filtraci po ochlazení se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (4,73 g, 66 %) ; DC [ethylacetát]: Rf = 0,44 ; t.t. = 279 °C.

2.9. b) N-Glycyl-batracylin, hydrochlorid

Výše uvedená sloučenina (4,1 g, 10 mmol) se za zahřátí rozpustí v ultrazvukové lázni v dichlormethanu (1200 ml) . Po přídavku chlorovodíku v diethyletheru (100 ml) se reakční směs míchá po dobu 30 minut při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se smísí s ethylalkoholem (2ΌΌ~ ml) ( Po déšětiriiinutovém míchání za varu pod zpětným chladičem a filtraci po ochlazení se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (3,21 g, 94 %) ; t.t. = 297 až 299 °C (rozklad) .

«» ♦ © • © ·' • · • · ♦ ·©·« ©·

129 • © ··' ©·©· I · » · · • · © · · • © · · © © ©‘ • © · · ©« ·· ·

2.9.c) N-[N^a^^^a,N^eP^sil^on-Di-(terč.-butoxykarbonyl)-lysyl-glycyl]-batracylin

N,N-di(terč.-butoxykarbonyl)-lysin (2.1 g, 6 mmol) a 2-isobutoxy-l-isobutoxykarbonyl-l,2-dihydro-chinolin (2,4 ml, 8 mmol) se rozpustí ve 20 ml dichlormethanu. Po dvacetiminutovém míchání při teplotě místnosti se přidá roztok sloučeniny 2.9.b) (1,71 g, 5 mmol) , ethyldiisopropylaminu (0,86 ml, 5 mmol) a dimethylformamidu (40 ml) a reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek še čisti pomocí mžikové chromatografíe [ethylacetát/petrolether 1 : 1 -> ethylacetát) . Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (1,69 g, 53 %) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,31 ; t.t. =211 °C (rozklad) .

2.9) N-[Lysyl-glycyl]-batracylin, di-trifluoracetát

Výše uvedená součenina (1,4 g, 2,2 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2) . Produkt se získá ve formě žluté krystalické látky.. (1,33 g, .... 91 %) ; t.t. = 153 °C (rozklad) .

Příklad 2.10

N-[Lysyl-seryl]-batracylin, di-trifluoracetát

·· φφφ*

130 •Φ φφ · φφ

Φ··· ·« Φ Β Φ Φ «Φ· · · Φ «ΦΦ

ΦΦ ·· Φ· ΦΦ β·ΦΦ

ΦΦ* Φ » ·Φ

Φφφφ φΦ φφφ ·φ φφ φ

2.10. a) Ν-[Ν-(terč.-butoxykarbonyl)-serylJ-batracylin

Ν- (Terč--hutaxykarbonyl)-serin (3_r6 g, 17_r5 mmal) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Po 48 hodinách při teplotě místnosti se reakční směs ve vakuu odpaří na objem 100 ml a získaný zbytek se smísí se 21 dichlormethanu. Získaný roztok se promyje vodou (lx 500 ml} , 0,5 N kyselinou chlorovodíkovou- 2x 250 ml} a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (lx 250 ml) . Po vysušení pomocí bezvodého síranu hořečnatého (50 g) , oddestilování rozpouštědla ve vakuu a mžikové chromatografií získaného zbytku [petrolether/ethylacetát 1:1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (4,6 g, 64 %) ; DC [ethylacetát/kyselína octová 100 : 1]: Rf = 0,38 ; t.t. =

219 °C (rozklad) ; [a]²⁰ = -61 _r0 ° (c = Q_r5/CH₂C1₂ + Q_r5 % CH₃OH) .

2.10. b) N-Seryl-batracylin, hydrochlorid

Suspense výše uvedené sloučeniny (4,6 g, 10,4 mmol) v dioxanu (70 ml) se za míchání smísí s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (10 ml) a potom se reakční směs míchá po dobu 60 minut při teplotě místnosti, načež se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu 2 hodin za vakua olejové vývěvy. Po přídavku ethylalkoholeu (100 ml) se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 15 minut.

Po ochlazení a filtraci získá produkt ve formě oranžové krystalické látky (1,97 g, 96 %) ; DC [ethylacetát] ; Rf =0,05 ; [a]²⁰ = +51,8 ° (c = l,0/H₂O ; t.t. > 270 °C (rozklad) .

·· to· • · · • · • · • · « ·· · · t

131 • ·· ·· ·«« ·«···· · • a · · · · • · « · ··· • · · · · ··· »· ·· ·

2.10.c) N-[N^alfa,N^eP^silon-Di- (terč.-butoxykarbonyl)-lysyl-seryl]-batracylin

Sloučenina 2.10,b) (1,86 g, 5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.9.c). Po mžikové chromatografii [ethylacetát/petroleiher 2 : 1 -> ethylacetát) se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (1,18 g, 36 %) ; DC [ethylacetát/kyselina octová 100 : 1] : Rf = 0,24 ; t.t. = 188 °C (rozklad) ; [a]²⁰ = -13,1° (c = O,5/CH₂C1₂ + 0,5 % CH₃0H) .

2.10) N-[Lysyl-sercyl]-batracylin, di-trifluoracetát

Výše uvedená součenina (1,0 g, 1,5 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 2.2) . Produkt se získá ve formě žluté krystalické látky (1,0 g, 96 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 :

: 0,2]: R_f = 0,10 ; t.t. = 188 až 190 °C (rozklad) .

Příklad 2.11

N-[Lysyl-D-seryl]-batracylin, di-hydrobromid

132 *· *· • »· ’ • · · • a · · a · · *··· *· • *» ·· ···· ····*« * * a · a a a a a a · ««a a a a « a a aaa >a · a

2.11. a) N-[N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-O-(terč.-butyl) -D-seryl]-batracylin

N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-0-(terč.-butyl)-D-serin (6,7 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografií získaného zbytku [petrolether/ethylacetát 1:1] se získá sloučenina 2.11.a) (5,64 g, 52 %) ve formě žluté krystalické látky ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: R_f = 0,87 ; t.t. = 225 až 226 °C (rozklad).

2.11. b) N-.[0- (terč. -butyl) -D-seryl] -batracylin

Výše uvedená sloučenina (2,89 g, 4,7 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.7.b). Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografií získaného zbytku [petrolether/ethylacetát 3;: 2 -> ethylacetát] se získá sloučenina 2.11.b) (1,15 g, 62 %) ve formě žluté krystalické látky ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,11 ; t.t. » 197 °C .

2.11. c) N-[N^alfa,N^eP^silon-Di-(terč -butoxykarbonyl)-lysyl-0-(terč.-butyl)-D-seryl]-batracylin

Výše uvedená sloučenina (1,1 g, 2,8 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.2.a). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (1,94 g,

%) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,59 ; t.t. = 208 °C .

2.11. d) N-[Lysyl-O-(terč.-butyl)-D-seryl]-batracylin, di-trifluoracetát

Výše uvedená sloučenina (1,08 g, 1,5 mmol) se nechá ·*··

133

444« 4·

4 4 4 · · ·

44 444

44 44 4 reagovat a čistit stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.2). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (1,1 g, 98 %) ; DC [methylalkohol/kyselina octová 10 : 1] : R_f = 0,30 ; t.t. = 128 °C .

2.11) N-[Lysyl-D-seryl]-batracylin, di-hydrobromid

Výše uvedená sloučenina (1,05 g, 1,4 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.8). Získá se takto produkt ve formě žlutočervené krystalické látky (846 mg, 96 %) ; t.t. = 247 - 248 °C .

Příklad 2.12

N-[Lysyl-D-threonyl]-batracylin, di-hydróbromid

2.12.a) N- [N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-0-(terč.-butyl) -D-threonyl]-batracylin

N-(Fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-O-(terč.-butyl)-D-threonin (6,96 g, 17,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.1.a). Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografií získaného zbytku [petrolether/et*·«« ··

134 hylacetát 1:1] se získá sloučenina 2.12.a) (7,45 g, 68 %) ve formě žluté krystalické látky ; DC [ethylacetát] : Rf =0,63 ; t.t. = 225 až 226 °C .

2.12. b) N-[O-(terč.-butyl)-D-threonyl]-batracylin

Výše uvedená sloučenina (3,8 g, 6 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 2.7.b). Po zahuštění ve vakuu se získá sloučenina 2.11.b) (1,9 g, 78 %) ve formě žluté krystalické látky ; DC [ethylacetát] : Rf =0,21 ; t.t. = 110 až 111 °C .

2.12. c) N-[N^alfa,N^eP^silon-Di-(terč.-butoxykarbonyl)-lysyl-0-(terč.-butyl)-D-threonyl]-batracylin

Výše uvedená sloučenina (1,8 g, 4,5 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.2.a). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (2,6 g,

%) ; DC [ethylacetát] : Rf = 0,59 ; t.t. = 212 °C .

2.12. d). N-[Lysyl-O-(terč.-butyl)-D-threonyl]-batracylin, di-trifluoracetát

Výše uvedená sloučenina (2,5 g, 3,4 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.2). Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (2,5 g, 96 %) ; DC [methylalkohol/kyselina octová 10 : 1] : Rf = 0,30 ; t.t. = 142 °C (rozklad) .

2.11) N-[Lysyl-D-threonyl]-batracylin, di-hydrobromid

Výše uvedená sloučenina (2,29 g, 3 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je uvedeno v příkladě 2.8).

«9 4 ·9·

135 • 9 « * »· 9 9

9 · · 9 · • » · · · « · • 9 · ♦ 9 •••99« ··· 94

Získá se takto produkt ve formě žlutočervené krystalické látky (1,86 g, 97 %) ; t.t. = 232 °C (rozklad) .

Příklad 2.13

N-[Lysyl-D-alanyl]-batracylin, di-trifluoracetát

2.13 . a) N- [N^al-f^a,N^eP^sil^on-bis- (terč. -butoxykarbonyl) -lysyl-D-alanyl]-batracylin g (17,3 mmol) N^alfa,N^eP^sil°ⁿ-bis-.(terc .-butoxykarbonyl) - lysinu se rozpustí v 75 ml dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se smísí se 3 g (26 mmol) N-hydroxysukcinimidu a 4,29 g (20,8 mmol) N,N’-dicyklohexylkarbodiimidu. Po 3 hodinách se vytvořená močovina odfiltruje, k filtrátu se přidá 5 g (15,6 mmol) N-[D-alanyl]-batracylinu (př. 2.3)) a reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě 20 °C . Potom se odfiltruje ještě zbylá močovina, filtrát se zahusti a získaný zbytek se rozmíchá s methylalkoholem a znovu přefiltruje. Filtrát se znovu zahustí a zpracuje methylalkoholem. Opět se přefiltruje a filtrační koláče se spojí, načež se rozpustí ve směsi dichlormethanu a methylalkoholu 10 : 1 a vysráží se diethyl136 v a • a · · a a a a a 4 · a • a a ·♦·* ·· * •a »··«

4 • 44

4#4 4

4 4 etherem. Získá se takto 8,22 g (81 %) krystalického produktu.

2.13) N-[Lysyl-D-alanyl]-batracylin, di-trifluoracetát

Z 8,2 g sloučeniny 2.13.a) se analogicky jako je popsáno v příkladě 2.2) získá 7,58 g (89 %) produktu.

Příklad 2.14

N- [N^eP^s:*-l°ⁿ_ (fluorenyl-9-methoxykarbonyl) - lysyl] -batracylin, trifluoracetát

2.14. a) N-[N^a^^a-(terč.-butoxykarbonyl)-N^eP^sil°ⁿ-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin

Příprava se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 2.4.a) z N^al^^a-(terc.-butoxykarbonyl)-N^eP^s^l°ⁿ-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysinu a batracylinu. Výtěžek činí 78 % .

- 137 «· «* 9 ·« 9*9999

*9 ·· 9* «· 99· · · · ·99 99 • 99« 9· 99« *9 *· *

2.14) N- [N^eP^s*^2ori- (fluorenyl-9-methoxykarbonyl) -lysyl] -batracylin, trifluořacetát

Příprava se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 2.5) ze sloučeniny z příkladu 2.14.a) , Výtěžek činí 90 % .

Příklad 2.15

N-[Lysyl’N^eP^silon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin, di-trifluořacetát

CF₃COOH ni_j₂

2:15 .a) N- [N^a'*'^^a,N^eP^s^^^on-di- (terč. - butoxykarbonyl) - lysyl -N^eP^sil°ⁿ_(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-batracylin

3240 mg (4,54 mmol) sloučeniny 2.14) se rozpustí v ml dimethylformamidu a smísí se se 2550 mg (5,45 mmol) p^alfa ^epsilon^f_(terč.-butoxykarbonyl)-lysin-p-nitrofenylesteru a s 938 μΐ ethyldiisopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě 20 °C , načež se

Φ φ ·

- 138 ·· ·

Φ

ΦΦ ·· φ · • · » · φ « * · · ♦ · ·

Φ ΦΦ φ Φ Φ zahustí a získaný zbytek se rozmíchá s diethyletherem. Směs se přefiltruje a zbytek na filtru se ještě jednou rozmíchá se směsí methylalkoholu a diethyletheru 1:1. Po odsátí a vysušeni se takto získá 3811 mg (92 %) produktu.

2,15) N- [Lysyl-N^eP^sil°ⁿ- (f iu_orenyi_9__me-thoxyka_rbonyl) -lysyl]-batracylin, di-trifluoracetát

Deblokace sloučeniny 2.15.a) pomocí směsi bezvodé kyseliny trifluoroctové a dichlormethanu 1:1 se provede analogicky, jako je popsáno v příkladě 2.2) s výtěžkem 95 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 6 : 0,6 : Rf = 0,08 .

Přiklad 2.16

N-[lysyl-N^^eta-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-a, β-diaminopropionyl]-batracylin, di-trifluoracetát

Tento peptidový konjugát se vyrobí analogicky jako je popsáno v příkladech 2.14) a 2.15) přes čtyři stupně z batracylinu a N^a^^a- (terč.-butoxykarbonyl)-N^^eXa- (f luorenyl99 ·9 99

139 • » 1* • 9 9 ·

9 9

9 9 • v * «99 9 9 9

9 9

9*9

-9-methoxykarbonyl)-diaminopropionové kyseliny ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ ledová kyselina octová 5:1: 0,2] : Rf ® 0,15 .

Příklad 2.17

N-[lysy1]-batracylin

nh₂

Odštěpení Fmoc se provádí analogicky, jako je popsáno v příkladě 2.4) z N-[N^eP^si^^on-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin trifluoracetátu (příklad 2.14)). Výtěžek činí 65 % . ' - *·

Příklad 2.18

N-[seryl-D-alanyl]-batracylin, trifuoracetát

O ·· ·· « · · · ·

4

4 · «4 ! ·· ·Η»

140

2,18 .a) Ν- [Ν- (terč. -butoxykarbonyl) seryl-D-alanyl]-batracylin

Příprava probíhá analogicky jako je uvedeno v příkladě

2.13.a) z N-(terč.-butoxykarbonyl)-šeřinu a N-[D-alanyl]-batracylinu (příklad 2.3)) . Výtěžek činí 77 % .

2.18) N-[seryl-D-alanyl]-batracylin, trifluoracetát

Příprava probíhá analogicky jako je uvedeno v příkladě

2.2) ze sloučeniny 2.18.a) . Výtěžek činí 98 % .

Příklad 2.19

N-[D-alanyl-D-alanyl]-batracylin, trifluoracetát cf₃cooh

Příprava probíhá ve dvou stupních analogicky jako je popsáno v příkladě 2.18).

Pří klad -2.20

N-[Glutamyl-D-alanyl]-batracylin

O

999

141 tt 94 9 9· • 9 4 · * · · 4 9 · · · 9 · 9» •9 94 4« · « 4499

9 · 9 9 9 · · • «49 99 99« «« «4 9

Příprava probíhá ve dvou stupních analogicky jako je popsáno v příkladě 2.18) , když se vychází z N-terc.-butoxykarbonyl-glutamyl-S-terc.-butylesteru a N-(D-álanyl)-batracylinu (příklad 2.3)). Po odštěpení Boc se reakční směs zahustí, získaný zbytek se vyjme do vody, hodnota pH se upraví pomocí 0,1 N hydroxidu sodného na 7 a betain se odsaje.

Příklad 3.1 - 3.34

Obecný vzorec

Příklad 3.1

N-(N^eP^sil°ⁿ-[0-(β-L-Fukosyl)-4-hydroxy-fenylaminothio-karbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

3.1.a) N-{N^al^^a(terc.-butoxykarbonyl)-N^eP^síl°ⁿ-[0-(β-L-fúkosy1)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

A Φ φ Φ Φ Φφφ···

- 142 - φφ ····· • φ φ· φ · ·· «·· φφ* Φ·· ·φ φφφφ ·· φφφ φφ φφ * mg (0,22 mmol) p-aminofenyl-β-L-fukosidu se v 10 ml směsi dioxanu a vody 1:1 za míchání smísí s thiofos- genem (34 μΐ, 0,44 mmol) . Po 10 minutách se reakční směs zahustí ve vakuu a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny za vysokého vakua. Získaná olejovitá látka se potom v absolutním dimethylformamidu kopuluje se 109 mg (0,21 mmol)

N-[N^a^^^a-(terč.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylinera (příklad 2.4)) za přítomnosti 115 gl ethyldiisopropylaminu. Po dvojnásobném vysrážení surového produktu ze směsi methylalkoholu a isopropylalkoholu se získá 132 mg (75 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [dichlormethan/methylalkohol 9 : 1] : Rf = 0,15 .

3.1) N- {N^ePSilon_ j-q_ (β-L-fukosyl) -4-hydroxy-fehylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

127 mg (0,15 mmol) sloučeniny z příkladu 3.1.a) se v 10 ml dichlormethanu míchá se 6 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové po dobu 2 hodin při teplotě 0 °C . Reakční směs se potom zahustí, třikrát se destiluje s 5 ml dichlormethanu a chromatografuje se za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 . Po následující lyofilisaci se získá 80 mg (71 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) : 4 : 0,4] : R_f = 0,3 .

Analogicky jako je popsáno v příkladě 3.1) se z částečně chráněného peptidového konjugátu z příkladu 2.4) , popřípadě z analogicky vyrobeného isomerního N-[N^{ax a}-(terč.-butoxykarbonyl)-lysýl-alanyl]-batracylinu vyrobí

1« 4444

143 ·« «· « 49

4 9 9 99 44 «4 4

949 494 * 4 ·

94 9» 44 9449

9 4' · 9 4 9 4 »9 4 4 4 44* 94 44 4 následující glykokonjugáty :

Příklad 3.2

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0-(2-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.1) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 a konečného stupně dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 ; výtěžek : 55 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,4 .

Příklad 3.3

N-{N^eP^sil-^on- [0- (2-0-methyl-P-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-alanyl}-batračylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.1) Čištění mezistupně pomocí, srážení ze' směsi dichlormethan/ methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 ; výtěžek : 65 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 5:2: 0,2] : Rf = 0,21 .

Příklad 3.4

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0-(3-0-methyl-β-L-fúkosy1)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát • 0 0· •0 ·00· • ·

144

0 0 0 0

0 0 0

0000 • 0*

0 0 0 0 0

0 0 * · ·

0 0 0 000 0

0 0 0 0

000 ·· 00 ·

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.2) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 97,5 : 2,5 a srážení konečného stupně z methylalkoholu pomocí diethyletheru ; výtěžek : 59 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] : R_f = 0,19 .

Příklad 3.5

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysy1-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.2) .

Čištění mezistupně pomocí srážení ze směsi dichlormethan/. methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 ; výtěžek : 36 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 5:2: 0,2] : R_f = 0,57 .

P ř í k 1 a d 3.6

N-{N^eP^s43-^on_ [0- (3-0-methyl-a-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.3) .

Čištění mezistupně pomocí srážení z methylalkoholu pomocí diethyletheru a konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 ; výtěžek : 44 % ; DC [dichlormethan/ methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] : = 0,15 .

0· *000 • 0

145 ··'

0 0 0 * • 0 0 • 0 · 0

0*

0*00 00 0

0

0 *

*0

0 · 0 0 · 000 0 0 0 00 0

Příklad 3.7

Ν-{N^eP^s41°ⁿ_ [Ο- (3-O-desoxy-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysy1-D-alanyl}-batracylín, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z přikladu 1.6) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 a sráženi konečného stupně z methylalkoholu pomocí diethyletheru ; výtěžek : 35 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : R_f = 0,42 .

Příklad 3.-8

N-{N^eP^s*l°ⁿ^[0-(3,4-epoxy-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylín, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z přikladu 1.8) .

Čištění mezistupně pomoci mžikové chromatografie za použití ·“ K · směsi dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 'a vícenásobné srážení konečného stupně z methylalkoholu pomocí diethyletheru 'a následující rozmíchání s ethylesterem kyseliny octové ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,49 . '

Příklad 3.9

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0-(3,O-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl

Edukt :

uhlohydrát z příkladu 1.10) .

147 φφ • φφφ · φ φ. φ φ φ · φφφ

ΦΦΦΦ φφ φ

ΦΦ φφ φ·' ···· • φ φ φ · φφφφφ • φ φ φφφ φ • φ -φ φ φ' φφ φφ φ směsi dichlormethan/methylalkohol 95 : 5 a konečného stupně pomocí směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) . Po zahuštění se získaný zbytek smísí s ekvivalentem ledové kyseliny octové a 10 ml vody a lyofilisuje se. Výtěžek :

% ; DC [acetonitril/voda/lédová kyselina octová 5:1: 0,2] : R_f = 0,43 .

FAB-MS : m/z = 760 = M+l

Příklad 3.12

N-{N^epsil°n[0-(a-D-glukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : p-aminofenyl-a-glukosid .

Čištění mezistupně i konečného stupně rozmícháním v methylalkoholu a srážením pomocí diethyletheru. Výtěžek : 83 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 158: 0,8 :

R_f = 0,48 .

Příklad 3.13 *N-{N^eP^sil°ⁿ-[O-(α-D-glukosyl)-4-hydróxy-fenylamino-thiokarboriyl]-lysýl-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : p-aminofenyl-a-glukosid.

Výroba probíhá analogicky jako je uvedeno v příkladě 3.12) .

Příklad 3.14

N-{N^eP^sil°ⁿ- [0- (3-0-methyl^-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

3.14. a) Ν- (terč. - but oxykar bony 1) -N^eP^s·*·^·⁰¹¹- [O- (3-0146 *© ·· • © r © © · • « · · • · · ©··© ·· * ©· ·· ©♦·· ♦ · · · · . · ·

•. © © © · © • © · » ·«· · © © © · ©· ··· ·© ·· ©

Čištění mezistupně rozmícháním v methylalkoholu a srážením pomocí diethyletheru a konečného stupně pomocí mžikové chromatografíe za použití směsi dichlormethan/methylalkohol /amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3 , později ve stejném systému 15 : 6 : 0,6 . Odpovídající frakce se zahustí, vyjmou se do vody a hodnota pH se upraví pomocí 0,1 N hydroxidu sodného na 7 . Odsaje se, zbytek na filtru se vyjme do směsi dimethyíformamidu a vody 1:3a přidá se ekvivalent 0,1 N hydroxidu Sodného. Potom se směs zahustí, sodná sůl se vyjme do vody a lyofilisuje se. Vvýtěžek : 43 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] :

Rf = 0,15 .

Příklad 3.10

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0-(3,O-karbamoylmethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.18)

Čištění mezistupně rozmícháním v methylalkoholu a srážením «ΐ* <

pomocí diethyletheru'á konečného stupně’pomocí mžikové chromatografíe za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoníak (17%) 15 : 2 : 0,2 ; DC [dichlorměthan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3] : Rf = 0,38 ; t.t.= 190 °C (rozklad) .

Příklad 3.11

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0- (4,O-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, acetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.4) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografíe za použití ·· fefefefe • ·' ♦

148 • · fe··· «fe • · • fe ··' ·< ·

• · fe fefefe • fefe « fe · • fe fe

-methyl-β-D-galaktopyranosyl)- 4-hydroxy-feny lamino- thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Roztok sloučeniny 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1:1 se za míchání smísí s thiofosgenem (33,5 ml, 0,44 mmol) . Po 10 minutách se Směs zahustí ve vakuu a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný isothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 2.4) (109,7 mg, 0,2 mmol) a s ethyldiisopropylaminem (0,5 ml) . Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie (dichlormethan/methylalkohol 20 : 1] . Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (108,3 mg, 62 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,42 ; t.t.= 194 až 195 °C (rozklad) .

3.14) N-{N^eP^sí^^ori- [0- (3-0-methyl^-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl} -batracylin, trif luoracetát . . ,

Ze sloučeniny 3.14.a) (105,1 mg, 0,12 mmol) se odštěpí analogicky jako je popsáno v příkladě 2.2) terc.butoxykarbonylová skupina. Po zahuštění ve vakuu a přesrážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (57,4 mg, 54 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : R_f = 0,16 ; t.t.= 188 až 189 °C (rozklad) .

Analogicky jako je popsáno v příkladech 3.14.a) a 3.14) se z peptidového konjugátu 2.4) (vždy 109,7 mg, 0,2 to* ···· • ·' · • · · ··· · ·< · toto «

149 «· ·· ·. -*· • · to · * ·.· · · to · » tol· · · • to «to · , ’. » to • · « · · » ···· toto ··· toto mmol) vyrobí následující glykokonjugáty :

Příklad 3.15

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0-(β-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl·}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.23) (59,7 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky . (79,5 mg, 46 %) ; DC [methylalkohol] : Rf = 0,74 ; t.t.= 182 °C .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (77,1 mg, 44 %) ; DC [methylalkohol] : Rf = 0,27 ; t.t.= 191 až 192 °C (rozklad) .

Příklad 3.16

N- {_N ^eP^silon- [0- (3,4-di-0-methyl^-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.31) (79 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použiti směsi dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 -> 20 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (150,7 mg, 85 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : Rf = 0,35 ; t.t.= 197 až 199 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté

150

44 • 4 4

4 Β 4

4

44*4 «4 *1·*· • 4*

4 4 4 4 4 > 4 4 4 4 *

4 · 4* *444 • 4 4 ··

444 ** 44 4 krystalické látky (137 mg, 76 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : Rf = 0,13 ; t.t.= 184 až 186 °C (rozklad) .

Příklad 3.17

N-{N^eP^silon_[q_(3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl} -batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.42) (75,5 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 -> 25 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (124,1 mg, 66 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 :

0,2]: Rf = 0,50 ; t.t.= 165 °C .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (107 mg, 57 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1] : Rf = 0,53 ; t.t.= 183 °C (rozklad) .

Příklad 3.18

N- {N^eP^S;’-^^on- [0- (3-Ó-karbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonylj - lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : sloučenina z příkladu 1.43) (77,3 mg,

0,22 mmol) ,

Čištění mezistupně pomocí srážení za použití směsi ethylalkohol/diethylether poskytne sodnou sůl ve formě žluté krystalické látky (172 mg, 91 %); DC [methylalkohol]: Rf

0000

000

151

0 ·

0 0

0« 000 0 0 0

0 0 0 0 0 • »· 0

0

0 = 0,71 ; t.t.= 225 až 228 °C .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (136,5 mg, 73 %) ; DC [methylalkohol] :

R_f = 0,12 ; t.t.= 217 až 220 °C (rozklad) .

Příklad 3.19

N- {N^eP^S;*-l^on- [0- (3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.44) (72,2 mg,

0,22 mmol) ,

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (137,7 mg, 75 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1] : Rf = 0,41 ; t.t.= 198 až 201 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (140,2 mg, 75 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 4 : 1] : Rf = 0,16 ; t.t.= 188 až 190 °C (roz₇klad) .

Příklad 3.20

N- {N^eP^s^^^on- [0- (3-0- (N-Methyl-karbamoylmethyl) -β-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl} -batracylin, trifluoracetát

Edukt :

uhlohydrát z příkladu. 1.45) (75,3 mg,

0,22 mmol) .

4« • 4 · · • · ·

4 4 4

4 · ·»4· ♦· ·« ····

152 «4

4 4 4 · ·

4 · 4 4 4 >4 4·· 4

4 4 ·· *44 44 44 4

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 7 : 1 : 0,1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (158,4 mg, 85 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: R_f = 0,25 ; t.t.= 161 až 163 °C (rozklad) . Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3,14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (132,5 mg, 70 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] : Rf = 0,10 ; t.t.=191 až 193 °C (rozklad) .

Příklad 3.21

N-{N^eP^síl°ⁿ- [0- (3-0- (N-propyl-karbamoylmethyl) -β-D-galaktopyranosyl)-4-hýdroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.46) (81,5 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 8 : 1 : 0,1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (153,1 mg, 80 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/arooniak (25%) 15 : 3 : 0,2]:. R_f = 0,33 ; t.t.= 187 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (154,9 mg, 79 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] : Rf « 0,21 ; t.t.= 179 °C .

Příklad 3.22

N-{N^eP^sil°ⁿ- [0- (3-0- (N-butyl-karbamoylmethyl) -β-D-galakto153 • 9 9

9f* «9«9 ♦ « • 9 999*

9 9 9'

99« 99 9 pyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl} -batracyiin, trifluořacetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.47) (84,6 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 12 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (132,7 mg, 68 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf = 0,54 ; t.t.= 180 až 182 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (115,2 mg, 58 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] : Rf = 0,30 ; t.t.= 176 °C .

Příklad 3.23

N-{N^eP^síl°ⁿ-[0-(3,4-didesoxy-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracyiin, trifluořacetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.52) (52,6 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 25 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (127,4 mg, 77 %); DC [dichlormethan/methylalkohol/amóniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf =0,60 ; t.t.= 166 až 167 °C .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (103,1 mg, 61 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] : Rf = 0,44 ;

154 •Φ φφφφ φφφφ φ φ φφφ φ

φφ

ΐ.ΐ.= 173 až 175 °C (rozklad) .

Příklad 3.24

N-{N^eP^si-l-^on- [0- (6-0-acetyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.53) (78,2 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 25 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (88,3 mg, 49 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf = 0,61 ; t.t.= 196 až 199 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (89,6 mg, 49 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 4 : 1] : Rf = 0,31 ; t.t.= 186 °C (rozklad) .

Příklad 3.25 - ··

N-{N^eP^sl2·⁰¹¹- [0- (a-D-mannopyranošyl) -4-hydroxy-fenylamino-1hiokarbony1]-lysy1-D-alany1}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.39) (59,7 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (101,7 mg, 59 %); DC [methylalkohol]: Rf = 0,79 : t.t.= 180 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté •9 999* *9 *9 * 9 9 «

9 *

9 9 9

9·· *999 *· • 9

155 krystalické látky (103,1 mg, 59 %) ; DC [methylalkohol] :

Rf = 0,34 ; t.t.= 177 až 178 °C (rozklad) .

Příklad 3.26

N-{N^eP^síl°ⁿ-[0-(3-0-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trif-luoracetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1,40) (62,8 mg,

0,22 mmol) ,

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (56,6 mg, 32 %); DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1]: Rf = 0,38 ; t.t.= 191 až 192 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (46,6 mg, 26 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf ® 0,13 ; t.t.= 190 až 191 °C (rozklad) .

Příklad 3.27

N-{N^eP^s^^^on-[O-(2,3-di-O-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.41) (66 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 25 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (77,8 mg, 44 %); DC [dí- 156 • I *· · · 4 »4 4 «4 4 9

4 · «444 44

4

4· «III

4

9 4 4 • 4

4 chlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf = 0,65 ; ΐ.ΐ.= 182 až 183 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,1 mg, 37 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1] : Rf =0,40 ; t.t.= 181 °C .

Příklad 3.28

N-{N^eP^sll°ⁿ-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-a-D-mannopyranosyl)--4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohydrát.z příkladu 1.48) (75,5 mg, _v 0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol 18 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (62,1 mg, 33 %);.DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2]: Rf · = 0,66 ; t.t.= 165 °C .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno;, v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (57,6 mg, 30 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] : Rf = 0,43 ; t.t.=

183 až 184 °C .

Příklad 3.29

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0-(3-0-karboxymethyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt :

uhlohydrát z příkladu 1.49) (77,3 mg,

157 * · · 44 * · · * ·

4 4 4 4 4 44 · • 4 4' 4 · 4 β 4444

0,22 mmol) ,

Čištění mezistupně pomocí srážení ze směsi ethylalkoholu a diethyletheru poskytne sodnou sůl ve formě žluté krystalické látky (173,4 mg, 92 96); DC [methylalkohol]: Rf =

0,57 ; t.t.= 201 až 205 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (171,7 mg, 92 %) ; DC [methylalkohol] :

Rf = 0,29 ; t.t.= 196 až 198 °C (rozklad) .

Příklad 3.30

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0-(3-0-karbamoylmethyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt : uhlohyďrát z příkladu 1.50) (72,2 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně pomoci mžikové chromatografie za použití, směsi dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 poskytne produkt ve formě žluté krystalické látky (106,6 mg, 58 96); DC [dichlormethan/methylalkohol 4 : 1]: Rf = 0,34 ; t.t.= 192 až 194 °C .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.14) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (107,7 mg, 58 96) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 4 : 1] : Rf = 0,13 ; t.t.= 186 až 187 °C .

Příklad 3,31

N-{N^eP^s.^^^on- [0- (3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin,

- 158 ·· «* * · · · «· · • * · « · · •φφ· ·* φφ·φ φ

3.31.a) Ν-{N^a^^^a-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-N^eP^síl°ⁿ- [0- (3,4-di-0-methyl-g-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin,

Roztok sloučeniny 1.31 (79 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1 : 1 (10 ml) se za míchání smísí s thiofosgenem (33,5 ml, 0,44 mmol) Po 10 minutách se reakční směs ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný isothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 2.5) (157 mg, 0,2 mmol) a s ethyldiisopropylaminem (0,5 ml) . Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se zahustí ve vakuu a vyjme se do směsi dichlormethanu a methylalkoholu 1:1. Produkt se vysráží přídavkem diethyletheru a promyje se malým množstvím ledového methylalkoholu. Získá se takto produkt ve formě žlutých krystalů (191 mg, 94 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : Rf = 0,35 ; t.t.=

203 °C (rozklad) .

3.31) N-{N^eP^si3-°ⁿ_ [0_ (3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Ze sloučeniny 3.31.a) (182,2 mg, 0,18 mmol) se stejně, jako je popsáno v příkladě 2.4) , odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina. Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi dichlormethanu a methylalkoholu 1:1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (127,1 mg, 89 %) ; DC [methylalkohol] : Rf = 0,46 ; t.t.= 158 °C .

159 • · • 4 · tttt ··

Analogicky jako je popsáno v příkladech 3.31.a) a

3.31 se z prptidového konjugátu 2.5) (vždy 157 mg, 0,2 mmol) vyrobí následující glykokonjugáty :

Příklad 3.32

N-{N^eP^silon-[0-(3-0-(pi perídyl.-N) -karbonylmethyl-β-ϋ-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.42) (75,5 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (191,2 mg, 91 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,28 ; t.t.= 208 °C (rozklad) . Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.31) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (155,8 mg, 88 %) ; DC [methylalkohol] :

R_f = 0/47 ; t.t.= 12Ó °C (rozklad) '.

Příklad 3.33

N-{N^eps^^lon-[0-(3-0-karbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.43) (77,3 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté ····

160 «9 • · · 9 · 9 • 9 9

9 9

9999 ·· krystalické látky (192 mg, 90 %) ; DC. [ethylalkohol/ methylalkohol 1 : 1]: R_f = 0,05 ; t.t.= 211 až 213 °C (rozklad) .

Čištění konečného produktu se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.31) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky. (110,6 mg, 66 %) ; DC [methylalkohol] :

Rf = 0,33 ; t.t.= 233 až 235 °C (rozklad) .

Příklad 3.34

N-{N^eP^si^lon-[0-(3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin ·

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.44) (72,2 mg,

0,22 mmol) .

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (159,2 mg, 76 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 10 : 1]: Rf = 0,04 ; t.t.= 177 °C (rozklad) . Čištění konečného produktu'se provádí stejně jako je popsáno v příkladě 3.31) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (125,1 mg, 76 %) ; DC [methylalkohol] :

Rf = 0,48 ;-t.t.= 106 °C (rozklad) .

Příklad

4.1 - 4.12

Obecný vzorec

O

O •0 0000

161 • a aa « 00 * · * · ··>· • · · · 0 · • · a · 0 · · • · · «00 ··«« ** 000 00

0· 0 • · 0

00« 0 0 0 »· *

Příklad 4.1

4.1.a) N-{N^a^^^a-[O-(β-L-fukosyl)-4rhydroxy-fenylaniino-thiokarbonyl] -N^eP^si4°ⁿ_ (f luorenyl-9-methoxy-karbonyl)-lysyl-D-alanyl}-batracylin

140 mg (0,55 mmol) p-aminofenyl-β-L-fukosidu se nejprve převede podle předpisu v příkladě 3.1.a) na hořčičný olej a potom se se 430 mg (0,55 mmol) N-[N^eP^s^^^on- (fluorenyl-9-methoxykarbonyl) -lysyl-D-alanyl] -batracylinu, trifluoracetátu (příklad 2.5)) kopuluje za přítomnosti 375 μΐ ethyldiisopropylaminu. Po sražení surového produktu ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu se tento čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi acetonitrilu a vody 10 : 1 . Po rozmícháni získaného zbytku s diethyletherem se získá 358 mg (67 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [acetonitril/voda 10 : 1] : Rf = 0,48'.

4.1) Ν-{Na-[0-(β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

356 mg (0,37 mmol) sloučeniny.z příkladu 4.1.a) se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a 5 ml piperidinu a reakční směs se potom míchá po dobu jedné hodiny při teplotě 20 °C . Potom se zahustí a získaný zbytek se chromatografuje za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 6 : 0,6 . Produkt se získá ve 46% výtěžku ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ámoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] :

Rf = 0,11 .

Analogicky jako je popsáno v příkladě 4.1) se vyrobí z částečně chráněného peptidového konjugátu 2.5) následující glykokonjugáty :

162 • « ·· ·· • · · » « * φ φ · * *Φ·· φφ φ*φ φφ φφφφ

Příklad 4.2

Ν-(N^al^^a-[Ο-(3-O-methyl-0-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiůkarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.10)

Chromatografické čištění mezistupně se provádí pomocí směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3 ; později se stejným systémem 15 : 4 : 0,5 .

Čištěni konečného produktu na stupni betainu se provádí rozmícháním s vodou; následuje převedení na sodnou sůl pomocí 0,1 N hydroxidu sodného a lyofilisace ze směsi dioxan/voda. Výtěžek činí 65 % ; t.t.= 220 °C .

Příklad 4.3

N-{N^al-f^a- [O- (4-O-methyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.2)

Čištění mezistupně se provádí srážením z dichlormethanu pomocí diethyletheru.

Čištění konečného produktu se provádí několikanásobným srážením z dimethylformamidu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 88 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : R_f = 0,28 .

Příklad 4.4

N- {N^a^^a- [0- (3,4-O-methyl-0-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin ·* · ·*

163 «· « ♦· • · * *« » • · ·. 000 00 * · · · 0 · · 0 *0 ·

000 000 00 0000·· 00000 00 0

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.4)

Čištění mezistupně se provádí vícenásobným srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru.

Čištění konečného produktu pomocí sloupcové chromatografie se provádí za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ amoniak (17%) 15 : 8 : 0,8 a srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 74 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 10 :

: 1] : Rf = 0,19 .

Příklad 4.5

N-{N^al*^a- [0- (3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

4.5. a) N-(N^a^^^a- [0- (3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl-N^eP^sil°ⁿ- (fluorenyl-9-methoxykarbonyl)]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Roztok sloučeniny 1.31 (79 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1 : 1 (10 ml) se, za míchání smísí s thiofosgenem (33,5 ml, 0,44 mmol) . Po 10 minutách se reakční směs ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný isothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a potom se smísí se sloučeninou 2.6) (157 mg, 0,2 mmol) a s ethyldiisopropylaminem (0,5 ml) . Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, načež se ve vakuu zahustí. Vícenásobným přesrážením získaného zbytku ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1:1 pomocí'diethyletheru a závěrečným promytím malým množstvím ledového methylalkoholu se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (19.8 mg, 98 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10

00 • · · 0

0 0

0 ·

0 0

0000 ·· »0 0000

164 : 1] : Rf = 0,23 ; ΐ.ΐ.= 175 °C .

4.5) N-{N^al^^a-[0-(3,4-di-O-methyl-β-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin

Ze sloučeniny 4.5.a) (172,1 mg, 0,17 mmol) se stejně, jako je popsáno v příkladě 2.4) fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina. Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění ve směsi methylalkohol/díchlormethan 1 : 1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (114,5 mg, 85 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 0 : 1] : Rf = 0,16 ; t.t.= 206 °C (rozklad) .

Analogicky jako je popsáno v příkladech 4.5.a) a 4,5) se z peptidového konjugátu 2.6) (vždy 157 mg, 0,2 mmol) vyrobí následující glykokonjugáty :

Příklad 4.6

N-{N^a^^^a-[0-(β-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.23 (59,7 mg,

0,22 mmol)

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (185,8 mg, 94 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 10 1] : Rf = 0,09 ; t.t.= 182 °C (rozklad).

Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsá* ·

165 • to toto • ♦ · • · • to · · to··· ·♦ • · ·· toto»· ·· · to · · · • to · · · · • · to · toto· to • « to · · ··· toto ·» · no v příkladě 4.5) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (134,3 mg, 88 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 1 : 1] : Rf = 0,04 ; t,t.= 221 °C (rozklad).

Příklad 4.7

N-{N^a^^^a- [0- (3-O-methyl-β-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.25 (62,8 mg,

0,22 mmol)

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkládě 4.5.a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (193,5 mg, 97 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : Rf = 0,27 ; t.t.= 178 °C (rozklad).

Čištění konečného produktu se provádí pomocí mžikové chromatograf ie [dichlormethan/methylalkohol 2 : 1 -> 1 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (130,5 mg, 84 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 1:1]: R_f = 0,09 ; t.t.= 206 °C (rozklad).

.···*

P ř í k 1 a d ’ ' 4.8

N-{N^al^^a- [0- (3-Q-methoxykarbonylmethyl^-D-galaktopyrano -syl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.42 (75,5 mg,

0,22 mmol)

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (209,8 mg, 99 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : R_f = 0,32 ; t.t.= 235 °C (rozklad).

	fefe ♦♦ • fefe *	fe' fefe fefe* ·	fefe' fefe·· • · fe.
166 -	·· ·	fefefe	»1 fe *
	• fefe	fefefe	• ·
	,,·· ··	fefefe fefe	• fe fe

166

Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (164,3 mg, 99 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1] : Rf = 0,05 ; t.t.= 217 °C (rozklad).

Příklad 4.9

N-(N^a^^^a-[0-(3-0-karbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.43 (77,3 mg,

0,22 mmol)

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krys_Ttalické látky (210,3 mg, 99 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : R_f = 0,02 ; t.t.= 183 °C .

Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5) , přičemž se získaný zbytek suspenduje ve vodě (10 ml) a suspense se za míchání po kapkách smíchá s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10) . Po lyofilisaci přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (150,8 mg, 90 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1] : Rf = 0,04 .

Příklad 4.10

N- {N^a^^a- [0- (3-O-karbonylmethyl-fJ-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt :

uhlohydrát z příkladu 1.44 (72,2 mg,

167 • · ·· » 4 · ·

*4*4 ··

4' 4 4 »4 4« ♦ r * · « 4 « *

444 4* «

* 4· · *

♦ ·

0,22 mmol)

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5.a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (152,7 mg, 73 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : R_f = 0,11 ; t.t.= 229 °C (rozklad) . Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5) , přičemž se získaný zbytek suspenduje ve směsi voda/dioxan 1 : 1 (20 ml) . Po lyofilisaci přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (98,4 mg, 61 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 1 : 1] : Rf = 0,10 ; [α]²θ= +44,9 ° (c = 0,2/ h₂o) .

Příklad 4.11

N-{N^a7^^a-[0-(α-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.39 (59,7 mg, ,

0,22 mmol)

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno-v příkladě 4.5.a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (179,6 mg, 91 %) ; DC [dichlormethan/methyl- . alkohol 10 : 1] : Rf = 0,07 ; t.t.= 176 °C (rozklad) . Čištění konečného produktu se.provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (137,5 mg, 90 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1] : Rf=0,09 ; t.t.= 213 °C (rozklad).

Příklad 4.12

N-{N^a^^^a-[0-(3-0-raethyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fe168

9« 99 9 «9 99 ···

9 9 9 9 9 · » 9'· • 99 »·»9 9· «9 99 9« 99 9999

999 9*9 ·9

99999« 99999 9* * nylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracyiin

Edukt : uhlohydrát z příkladu 1.40 ¢62,8 mg,

0,22 mmol)

Čištění mezistupně se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4. 5. a) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (94,2 mg, 48 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : Rf = 0,13 ; t.t.= 173 °C (rozklad) . Čištění konečného produktu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 4.5) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,6 mg, 43 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1] : Rf = 0,07 t.t.= 215 °C (rozklad).

Příklad 5.1 až 5.23

Obecný vzorec

Příklad 5.1

N-{N^a2^^a- [0- (3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylaraino-thiokarbonyl] -N^eP^s-*-l°ⁿ- [O- (3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-ba169

II ·· • · · · «4 4 • 4 4 · · •449 ♦ 4 ·4»4 • 4« » 4 4 * 9 • · · · · • · «4 *4» · · 4 4

44» 94 ·· · tracylin mg (0,16 mmol) p-aminotenyl-3-O-karboxymethyl-p-L-fukosidu (příklad 1.10) se v 10 ml směsi dioxanu a vody 1 : 1 smísí za míchání se 30 μΐ (0,18 mmol) thiofosgenu. Po 10 minutách se reakční směs zahustí a suší se po dobu jedné hodiny za vysokého vakua. Získaná olej ovitá kapalina se potom v absolutním dimethylformamidu kopuluje se 109 mg (0,144 mmol) konjugátu z přikladu 3.4) za přítomnosti 82 gl ethyldiisopropylaminu. Potom se zahustí a +

čistí se pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17% 15 : 4 : 0,5] . Látka, získaná po zahuštění se lyofilisuje z vody. Výtěžek činí 89 mg (56 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%.15 : 6 : 0,6] : R_f = 0,22 .

Analogicky jako je popsáno v příkladě 5.1) se získají následující směsně substituované konjugáty :

Příklad 5.2

N-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-N^eP^si^lon-[0- (3-0-karboxymethyl-P-L-fukosyl)-4-hydroxyf eny lamino-thiokar bony 1] lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukty : uhlohydrát z příkladu 1.2) , konjugát z příkladu 3.10)

Čištění se provádí srážením surového produktu z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 78 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1:0,2] : Rf =

0,45 .

©· ·©··

170 «· ·· • · * · · • · · • © * © • · · ·»©© ©♦ © • © © · • » · • · ·· • · • · ©·© ··

Příklad 5.3

N-{N^alf^a-[O-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-N^eP^sl^^on-[4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukty : konjugát z příkladu 4.3) ,, 4-hydroxy-anilin

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] . Výtěžek činí 60 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) : 2 : 0,2] : R_f = 0,31 .

Příklad 5.4

N-{N^al-f^a- [0- (3-0-kárboxymethyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]_N^eP^sÍl°ⁿ_[4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukty j . konjugát z příkladu 4.2)’ 4-hydroxy- , . -anilin

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] . Potom se získaný zbytek rozmíchá se směsí methylalkoholu a diethyletheru. Výtěžek činí 55 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 6 : 0,6] : Rf = 0,3 .

P ř i k 1 a d 5.5

N-{Ň^a4^^a-[0-(4-O-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-N^eP^sil°ⁿ-[4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

•· 99·· · ·

171

9··

Edukty : konjugát z příkladu 4.4) , 4-hydroxy-anilín

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] . Potom se získaný zbytek sráží ze směsí methylalkoholu a dichlormethanu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 49 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] : Rf =

0,26 .

Příklad 5.6

N-{N^a^^^a- [4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl] -Ň^eP^si^lon- [O- (4-O-methyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl ] -lysyl-D-alanyl)-batracylin

Edukty : konjugát z příkladu 3.11) , 4-hydroxy-anilin .

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] , Potom se získaný zbytek lyofilisuje ze směsi vody a dioxanu. Výtěžek_ činí 50 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) : 2 t 0,2] : R_f = 0,29 .

Příklad 5.7

N-{N^al^^a- [4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-N^eP^s;’·^⁰¹¹- [O- (3-O-methyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukty : konjugát z příkladu 3.4) , 4-hydroxy-anilin

Čištění se provádí srážením z methylalkoholu pomocí diett « ·« ·

172 ·· · ·· • · » * · · r · • · · · · · * ♦ · * · ♦ · • » * · · · »··« «4 ··* ·· hyletheru. Výtěžek činí 76 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] : Rf = 0,26 .

Příklad 5.8

N-{N^a^^^a-[O-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl] -N^eP^s'*'^^on- [4-hydroxyethylamino-2- [O- (3-0-methyl-^-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamiňo-]triazin-6-yl]]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukty : konjugát z příkladu 8.10)., uhlohydrát z příkladu 1.2)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 ; 2 : 0,2] . Výtěžek činí 9 % ; FAB-MS : m/z = 1165 = M+l ; DC [dichlormethan/ methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3] : Rf = 0,27 .

Příklad 5.9

N-{N^alfa-[O-(3-O-karboxymethy1-β-L-fúkosy1)-4-hydroxyfeny1amino-thiokarbonyl] -N^eP^s:i^lon- [acetyl] lysyl-D-alanyl} -batracylin

Edukty : N-[\^eP^síl°ⁿ_(acetyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylin, uhlohydrát z příkladu 1.10)

Čištění se provádí pomoci mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 , později ve stejném systému 15 : 4 : 0,5] . Potom se získaný zbytek lyofilisuje z vody. Výtěžek činí 40 % ; DC [acetonitril/ voda/ledová kyselina octová 5 : 1 ; 0,2] : Rf = 0,31 .

173 *» ·· • · ♦ ·

• ·

PříkladS.lO

N- {N³^³- [O- (4-0-methyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl] -N^eP^sil°ⁿ- [acety 1] lysyl-D-alanyl}-batracylin mg (0,067 mmol) konjugátu z příkladu 4.4) se v 5 ml dimethylformamidu smísí s 10 μΐ acetanhydridu a míchá se pó dobu 30 minut při teplotě místnosti. Potom se reakční směs zahustí a sráží se z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 46 mg (86%) ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf s 0,6 .

Příklad 5.11

N-{N^a^^a-[0-(β-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino- -thiokarbonyl ] -N^eP^sil°ⁿ- [ succinyl ] lysyl-D-alanyl} -batracylin, sodná sůl ^{20 * * * * * 26} mg (0,027 mmol) konjugátu z příkladu 4.1) se ve ml dimethylformamidu smísí se 3 mg anhydridů kyseliny jantarové a míchá se po dobu 6 hodin-při teplotě místnosti . Potom se reakční směs zahustí a sráží se z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Získaný zbytek se vyjme do vody.

a přidá se 27 μΐ 0,1 N hydroxidu sodného. Výtěžek činí mg (86%) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 8 : 2 : 0,2] : Rf = 0,2 .

Příklad 5.12

N- {N^al^^a- [0- (3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl] -N^eP^sz*-l°ⁿ- [0- (3,4-di-O-methyl-p-D-galactopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

ΦΦ ····

174 φφ φφ φ φ φ φ φ · · Φφφ · φ φ · φφ Φφ φ φ ··φ φ φφφ φφφ φ ·

ΦΦΦΦ φφ φφφ φφ · φ φ

Uhlohydrát 1.42) (37,7 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , s peptidovým konjugátem 3.31) (79 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografii [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 -> 10 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (52,9 mg, 45 %) ; [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : - Rf = 0,14 ; t.t.= 178 °C (rozklad).

Příklad 5.13

N-{N^a^^^a-[0-(3-0-karboxylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-N^eP^sil°ⁿ-[0-(3,4-di-O-methyl-p-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thio -karbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl

I i Uhlohydrát 1.43) (38,6 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , s peptidovým konjugátem 3.31) (79 mg, 0,1 mmol) . ' Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 se.produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10). Lyofilisací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (87,9 mg, 74 %) ; DC [ethylalkohol] : R_f = 0,17 ; [a]²⁰= +56,0 ° (c = 0,1/ H₂0) .

Př i k 1 a d 5.14

N-{N^a-'-^^a- [0- (3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -N^eP^s-*-l°ⁿ- [0- (3,4-di-0-methyl-β-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thio- 175 4444 44

4 4 9· «499

4 4 4 · 4 • · * 4 4 9 ·· 44 9449 · 4 4 4 • •4 44 44 4 karbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Uhlohydrát 1.44) (36,1 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , s peptidovým konjugátem 3.31) (79 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění ve směsi dichlormethan/methylalkohol 1:1 se získá produkt vysráženim přídavkem diethyletheru ve formě žluté krystalické látky (45,9 mg, 39 %) ; DC [ethylalkohol] : R_f = 0,38 ; t.t.= 219 °C (rozklad).

Příklad 5.15

N-{N^alfa- [0- (3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -N^eP^s^l°ⁿ- [O- (3-0-(piperidyl-N) -karbonylmethyl-p-D-galactopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] lysyl-D-alanyl}-batracylin

Uhlohydrát 1.31) (.39,5 mg, 0, lí mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , s peptidovým konjugátem 3.32) (88,7 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografii.[dichlormethan/methylalkohól 20 : 1 -> 10 : 1 se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (38,8 mg, 32 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol] : R_f = 0,79 ; t.t.= 205 °C (rozklad).

Příklad 5.16

N-{N^alfa-[0-(3-O-karboxymethyl-β-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] ~N^eP^si-*-^on- [0- (3-0-(piperidyl-N)-karbonyImethyl-β-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thíokarbonyl] - lysyl-D-alanyl}-batracylin sodná sůl

176

4 4 «· ·

4 4 · • 4 4 • 4 · «

4 4

4444 44

4 *

« 4

4 • 44 4 4

Uhlohydrát 1.43) (38,6 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , s peptidovým konjugátem 3.32) (88,7 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1:1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH <

10). Lyofilisací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (90,3 mg, 71 %) ; DC [ethylalkohol] : R_f = 0,05 ; [a]²⁰= +39,0 ° (c = 0,1/ H₂O) .

Příklad 5.17

N- {N^a-'-^^a- [0- (3-O-karbamoylmethyl-p-D^galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-N^eP^sil°ⁿ-[0-(3-0-(piperidyl-N)-karbonylmethyl-p-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Uhlohydrát 1.44) (36,1 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) ., s peptidovým konjugátem 3.32) (88,7 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění ve směsi dichlormethan/methylalkohol 1:1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru ve formě žluté krystalické látky (44,8 mg, 36 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,06 ; t.t.= 223 °C (rozklad).'

Příklad 5.18

N-{N^a^^^a-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-N^eP^s^^^on-[0-(3-0-karboxymethyl-p-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl

177

4« «« · 4 4 44 # 4 44 · • 44 4 · 4 44 4

4« 4 * 44 444· ··· 4 * 4 4 4

4444 ·· 44a Μ «4 4 •4 4···

Uhlohydrát 1.31) (39,5 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31. a) , s peptidovým konjugátem 3.33) (84,2 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1:1 (20 ml) se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě' (10 ml) a suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý. roztok (pH < 10). Lyofilisaci přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (80,7 mg, 68 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,09 ; [a]²⁰= +35,0 ° (c = 0,1/ H₂0) .

Příklad 5.19

N-{N^alfa- [0- (3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-f eny lamino-thiokarbonyl ] -N^eP^s^^^on- [0- (3-0-karboxymethyl-β-D-galactopyranosyl) - 4-hydroxy-f enylaminó- thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin., sodná sůl

Uhlohydrát 1.42) (37,,7. mg, 0,11, mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , s peptidovým konjugátem 3.33) (84,2 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 (20 ml) se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10). Lyofilisaci přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (87,5 mg, 71 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,10 ; [α]²θ= +24,6 ° (c = 0,1/ H₂0) .

• a ·'

178 • 4 · • a 4

4 • 4 • 4

4444 44 ·· 44 4444

4«· 44 · · · « 4 a • a ·· aa 4 a 444 4*4

44a »4 «· *

Příklad 5,20

N-{N^a^^^a-[O- (3-0-karbamoyllinethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-N^eP^síl°ⁿ-[O-(3-0-karboxymethyl-β-D-galactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino -thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl

Uhlohydrát 1.44) (36,1 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , s peptidpvým konjugátem 3.33) (84,2 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 (20 ml) se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10). Lyofilisací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (78,6 mg, 65 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,11 ; [α]²θ= -44,0 ° (c = 0,13/H₂0).

Příklad 5.21

N- {N^alf^a- [Ó- (3,4-di-0-methyl^-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-N^eP^s^^^on-[0-(3-0-karbamoyImethyl-β-D-gálactopyranosyl)-4-hydroxy-fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Uhlohydrát 1.31) (39,5 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31.a) , s peptidovým konjugátem 3.34) (81,9 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a mžikové chromatografií [ethylalkohol -> ethylalkohol/methylalkohol 2:1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (17,4 mg, 15 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,20 ; t.t. > 205 °C (rozklad).

*0

0 0 0

0 0

0 0 0 • 0 0

0000 00

179

00 0000 • 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 000 0

0 0 0

0 00 ·

Příklad 5.22

N- {N^a^^^a- [O- (3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -N^eP^s^^on- [O- (3-0-karbamoylmethyl-p-D-galactopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl)-batracylin

Uhlohydrát 1.42) (37,7 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31. a) , s peptidovým konjugátem 3.34) (81,9 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1:1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (72 mg, 60 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf =0,21 ; t.t.= 222 °C .

Příklad 5.23

N-{N^a^^^a-[0-(3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -N^eP^sil°ⁿ- [0- (3-0-karbamoylmethyl-p-D-galactopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-D-alanyl)-batracylin, sodná sůl

Uhlohydrát 1.43) (38,6 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 3.31. a) , s peptidovým konjugátem 3.34) (81,9 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu a rozpuštění získaného' zbytku ve směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1:1 se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH <

10) . Lyofilisací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ·· 999

180 «9 99

9 9 » « • 9 9

9 · 9 · ·

999« ·> 9

9« • 9 9 9 9

99 999 9

9 ·9 • 9 99 9 ve formě žluté amorfní pevné látky (78,2 mg, 65 %) ; DC [ethylalkohol] : R_f = 0,07 ; [α]^2θ= +33,0 ° (c = 0,l/H₂O).

Příklad 6.1 až 6.89

Obecný vzorec

n (n = 1.0)

Příklad 6.1

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(2-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]lysyl-D-alanyl}-batracyiin

Roztok sloučeniny 1.1) dioxanu a vody 1 : 1 (10 ml) fosgenem (30 μΐ, 0,4 mmol) .

(50 mg, 0,19 mmol) ve směsi se za míchání smísí s thioPo 10 minutách se reakční směs ve vakuu zahustí a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný isothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 2.13) (61 mg, 0,09 mmol) a s ethyldiisopropylaminem (0,5 ml) . Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se zahustí ve vakuu

181 • 0 ·· • · ♦

0 • 0

0' 0

000 0«

00 000000 0 0'.. 0 0 · 0

0 0 0 Φ 0

00 000 0 0 0 0 · ·

000 0« 00 · a čistí se pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/ methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] . Získaný zbytek po zahuštění se z methylalkoholu vysráží pomocí diethyletheru. Získá se takto 48 mg (50 %) produktu ve formě žluté krystalické látky.

Analogicky jako je popsáno v příkladě 6.1) se z peptidového konjugátu z příkladu 2.13) , popřípadě z L-alanyl-isomeru (příklad 2.2)) , vyrobí následující glykokonjugáty :

P ř í k 1 a d 6.2

N-{N^a^^^a,N^eP^s-’’^^on-bis- [0- (3-Ο-πιβΐ1ιγ1-β-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] - lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : 100 mg (0,38 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1,2) vČištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 0,5 : 0,5 , později, ve stejném systému 15 : 1 : 0,1] a potom srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol/diethylether. Výtěžek : 59 % ; t,t.= 178 °C (rozklad) ; DC [acetonitril/voda 10 : 1] : Rf = 0,51 .

P ř í k 1 a d 6.3

N-{N^a^^^a,N^eP^sil°ⁿ-bis- [0- (4-0-methyl^-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : 115 mg (0,44 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.4)

4* ·· • 4 · ·

4

4 ·

4*44 44 • 4

182 • «4

4 · • 4 4

4' 4 4 » 4

444 4*

4. 44 4 4

4 4

444 4

4

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] a potom srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol (1 : l)/diethylether. Výtěžek : 58 % ; t.t.= 175 °C (rozklad) ; DC [acetonitril/voda 10 : 1] : Rf = 0,52 .

Příklad 6.4

N-{N^a7^^a,N^ef^)S^'''^on-bis- [O- (3-O-methyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-f enylamino-thiokarbonyl]lysyl-alanyl}-batracylin

Edukt : 115 mg (0,44 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2)

Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methyl„alkohol (1 : 1)/diethylether. Výtěžek : 93 % ; t.t.= 192 °C (rozklad) ; DC [acetonitril/voda 10·: 1] : Rf = 0,46 .

Příklad 6,5 _N__{Nalfa_)Nepsilon__big__[0_(₃_o__methyl-a-_L-f_ukosyl)-4-hydroxy-f enylamino- thiokarbonyl ] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : 100 mg (0,38 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.3)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 ; 0,1] a potom srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol (1 : 1)/diethylether. T.t.= 178 °C (rozklad) ; FAB-MS m/z = 1071 = M+l .

Příklad 6.6

N-N^eP^sil°ⁿ-bis-[0-(3-O-n-propyl-p-L-fukosyl)-4-hyd- 183

ΦΦ ·· φ' · φφ φ··· • * · · ·· · φ φ φ φ • · · φ » φ φ φ φ • * · φ ·’ φ φ.φ φφφ φ φ·· φφφ φφ φφφφ ·· φφφ φφ φφ φ roxy- f enylamino-thiokarbony 1 ] - lysyl-D-alanyl} - batracylin

Edukt : 38 mg (0,127 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.5)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1] a potom srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol (1 : l)/diethylether. Výtěžek : 42 % ; t.t.= 167 až 170 °C (rozklad) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%)] : Rf = 0,34 ;

Příklad 6.7

N-{N^alf^a,N^eP^sil°ⁿ-bis- [0- (3-desoxy-p-L-fukosyl) -4-hydroxy- f eny lamino- thi okar bony 1 ] - ly sy 1 - D- alanyl} - batracylin

Edukt : 40 mg (0,167 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.6)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] a potom srážením ze směsi methylalkoholu a diethyletheru. Výtěžek

H· « 1 ' · > ·» . r : 81 % ; DC [acétónitril/vodá 10 1]' : Rf~= 0,46 .

P ř í k 1 a d 6.8

N-{N^a^^^a,N^eP^s^^^on-bis-[0-(3,4-didesoxy-β-L-fukosyl)-4-hydroxy- feny lamino- thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : 41 mg (0,183 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.7)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 95 : 5] a potom lyofilisaci ze směsi vody a dioxanu. Výtěžek ; 60 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol 9 : 1] : R_f = 0,22 .

- 184 • fel fefe • fefe fe fefe · fefefe fefe· fefefefe ·· • fefe ·· fefefefe ♦ ·' · · · * « • fefe · · fe • · fe fefe fefefefe • fefe t · fefefe fefe fefe fe

Příklad 6.9

N-{N^a^^^a,N^eP^si^^on-bis-[O-(3-hydroxyethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino- thiokarbonyl ] lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : 75 mg (0,25 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.12)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 , později ve stejném systému 15 : 4 : 0,5] a potom srážením ze směsi methylalkohol/diethylether. Výtěžek : 66 % ; DC [acetonitril/voda 10 : 1] : Rf - 0,28 .

P ř i k 1 a d 6.10

N-{N^a^^^a,N^eP^sil°ⁿ-bis- [O- (2-hydroxyethyl~p-L-fukosyl) -4- hydroxy- feny lamino - thiokarbonyl ] lysyl - D - alany 1} - batracylin

Edukt : 50 mg (0,167 mmol) uhlohydrátu z pří* kladu 1.19)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3] a potom srážením ze směsi methylalkohol/diethylether a lyofilisaci ze směsi voda/acetonitril. Výtěžek : 72 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,39 .

Příklad 6.11

N-{N^al-f^a,N^epsíl°ⁿ-bis- [0- (2-O-karboxyméthyl-p-L-fukosyl) -4hydroxy-fenylamino-thiokarbonýl]lysyl-D-alanyl}-batracylin, dvoj sodná sůl

Edukt :

mg (0,16 mmol) uhlohydrátu z příφφ ΦΦΦΦ • Φ·

ΦΦΦ

ΦΦΦ Φ

Φ ·

Φ Φ

185 ·· ·· * ·φ • · · · ·» « I • * · ·&: φ »

Φ · · · · φ Φ

Φ · · Φφφ

ΦΦΦΦ Φ· ΦΦ· φφ . kladu 1.13)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 8 : 0,8 , později ve stejném systému 15 : 10 : 1] a potom se získaný zbytek digeruje s diethyletherem a lyofilisuje se ze směsi voda/ dioxan. Převedení na dvoj sodnou sůl se provede se 2 ekvivalenty 0,1 N hydroxidu sodného a lyofilisaci z vody. Výtěžek : 49 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,5] : R_f = 0,38 ; FAB : m/z = M - 2Na⁺ + H⁺ .

Příklad 6.12

N- {N^a^^^a,N^eP^S'’‘^^on-bis- [O- (3-0-karboxymethyl-p-L-fukosýl) -4-hydroxy- f enylamino-thiokarbonyl ] - lysyl-D- alanyl}- batracylin, dvoj sodná sůl

Edukt : 200 mg (0,64 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.10)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol /amoniak (17%) 15 :. 4 : 0,5 , později ve stejném systému 15 : 8 : 0,8 a nakonec 15 : 10 : 1]. a potom se získaný zbytek digeruje s diethyletherem a lyofilisuje se ze směsi voda/dioxan 1:1. Převedení na dvoj sodnou sůl se provede se 2 ekvivalenty 0,1 N hydroxidu sodného a lyofilisací z vody. Výtěžek : 59 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%)] : Rf = 0,1 .

Příklad 6.13

N-{N^a^’^^a,N^eP^s;*’^^on-bis- [0- (3-0-karboxymethyl-p-L-f ukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt :

mg (0,19 mmol) uhlohydrátu z pří186 toto ·· • · to to • to to • to · • · ·.

• · to toto ί

«to to toto· ··· to · kladu 1.18)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichíormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3] a potom srážením získaného zbytku ze směsi methylalkohol/dihlormethan 1 : 1 pomocí diethyletheru a lyofilisací ze směsi voda/ dioxan 1:1. Výtěžek : 36 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,46 ; t.t.— 190 °C (rozklad) .

Příklad 6.14

N- {N^a^^^a,N^eP^s^^^on-bis- [0- (β-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : 100 mg (0,39 mmol) p-aminofenyΙ-β-L-fukosidu

Čištění se provádí pomocí mžikové čhromatografie [dichíormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 , později ve stejném systému 15 : 4 : 0,5] a potom srážením získaného zbytku z dimethylformamidu pomocí diethyletheru. Výtěžek : 48 % ; t.t.= 195 až 198 °C .

Přiklad 6.15

N-{N^a^^^a,N^eP^s^^^on-bis-[0-(α-L-rhamnosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Edukt : 158 mg (0,61 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.21)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichíormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3 , později ve stejném systému 15 : 4 : 0,5] a potom lyofilisací získaného zbytku ze směsi vody a, dioxanu. Výtěžek : 87 % ; DC [di00 »00

187

0« ··

0 0 · • 0 0

0·

0 0

0000 00

0 0 · 0 0 • ' 0 0 0 0 • 0 0 · 0 ··· 0 0 0 0 · · 000 0« ♦· * chlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : Rf = 0,25 .

Příklad 6.16

N-{N^a^^^a,N^eP®^''^on-bis- [O- (3-O-karboxymethyl-a-L-rhamnosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, dvoj sodná sůl

Edukt : 208 mg (0,64 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.22)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5 , později ve stejném systému 15 : 8 : 0,8a nakonec 15 : 10 : 1] , následující digerací s diethyletherem a potom lyofilisací získaného zbytku ze směsi vody a dioxanu 1:1.

Analogicky jako je popsáno v příkladě 6.1) se z různých peptidových konjugátů batracylinú, které obsahují na aminovém konci úplně deblokovaný lysinový stavební prvek, vyrobí následující glykokonjugáty :

Příklad 6.17 _N-{N ^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin, dvoj sodná sůl

Edukty : 32 mg (0,1 mmol) uhlohydrátu z příkladu

1.10) , 32 mg (0,045 mmol) N-(lysyl-glycyl)-batracylin, di-trifluoracetátu (příklad 2.9) ···« ► · «

I 9 9

9»9 9

9

9· 9 [dichlorDozděii ve

- 188 - · :: :

♦ 9 9 • 9 · *·** *9

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie methan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 8 : 0,8 , stejném systému 15 : 15 : 1,5] , následujícím srážením ze směsi dimethylformamid/methylalkohol (1:1) s diethyletherem a potom lyofilisací získaného zbytku ze směsi vody a dioxanu. Převedení na dvoj sodnou sůl se provede pomocí 2 ekvivalentů 0,1 N hydroxidu sodného a lyofilisací z vody. Výtěžek : 25 % ; DC [ dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 8 : 0,8] : R_f = 0,19 ; FAB-MS : m/z = 1189 = = M+l ..

Příklad 6.18

N-{N^a-*’^^a,N^eP^s:‘--*'^on-bis- [0- (3-0-methyl-p-L-fukosyl) - 4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]lysyl-glycyl}-batracylin

Edukty : 60 mg (0,22 mmol) uhlohydrátu z příkladu

1.2) , 66 mg (0,1 mmol) N-(lysyl-glycyl)-batracylin, di-trifluoracetátu (příklad 2.9)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 : 1] , následujícím srážením z methylalkoholu pomocí diethyletheru a potom lyofilisací získaného zbytku ze směsi vody a dioxanu. Výtěžek : 68 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80 : 20 : 2] : Rf = 0,62 .

Příklad 6.19 _N__{Nalfa ^epsil°ⁿ_bi_s_[0-(β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-lysyl}-batracylin

4« • «4

189 • 4 4 · 9

4 4 *4 • 4 4

44*4 44 » •4 *4*4

4 4

4 · • 4* ·

4

4 ·

6.19.a) N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[O-(β-L-fúkosy1)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-N^eP^^^^on-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl}-batracylin

Edukty : 297 mg (1 mmol) p-aminofenyl-β-L-fukosidu , 66 mg (0,1 mmol) N-[lysyl-N^eP^sil°ⁿ-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl]-batracylin, di-trifluoracetátu (příklad 2.15)

Čištění se provádí dvojnásobným srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1:1] pomocí diethyletheru a promytím filtračního koláče diethyletherem. Výtěžek: 89 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] :

R_f = 0,31 .

6.19) N-{N^al^^a,N^eP^s‘’'*'^on-bis- [0-(β-L-fukosyl) -4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]lysyl-lycyl}-batracylin

515 mg (0,39 mmol) sloučeniny z příkladu 6.19.a) se rozpustí v 5 ml dimethylformamidu a 5 ml piperidinu a reakční směs se míchá po dobu 30 minut při teplotě 20 °C . Vsázka se potom zahustí a získaný zbytek se digeruje s diethyletherem,. načež se odsaje a filtrační koláč se vyjme do dimethylformamidu. Po srážení diethyletherem a promytí filtračního koláče se získá 335 mg (78 %) produktu ve formě krystalické látky. FAB-MS : m/z = 1100 = M+l .

Příklad 6.20

N-{N^a^^^a,N^eP^sil°ⁿ-bis-[O-(3-0-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-diaminopropionyl}-batracylin

9

9999

190

9 9 9

99 999

9*99 9·

999 99 **

6.20 . a) Ν- {N^alfa,N^eP^silon-bis- [Ο- (3-0-methyl-P-L-fukosyl) -4- hydr oxy-f eny lamino-thiokar bonyl ] lysyl-diaminopropi onyl}-batracyiin

Syntesa se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 6.19) .

Edukty : 60 mg (0,22 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2) , 100 mg (0,11 mmol) N-[lysyl - N^eP^s^l°ⁿ_ζfluorenyl-9-methoxykar bonyl)-diamino-propionyl]-batracyiin, di-trifluoracetátu (příklad 2.16), 76 μΐ ethyldiisopropylaminu

Čištění se provádí dvojnásobným srážením z methylalkoholu pomocí diethyletheru a promytím filtračního koláče diethyletherem. Výtěžek: 105 mg (73 %) .

6.20) N-{N^alfa.N^eP^sllon-bis- [0- (3-0-methyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-diaminopropionyl}-batracyiin

103 mg (0,079 mmol) sloučeniny z - příkladu 6.20.a) se deblokuje piperidinem analogicky, jako je popsáno v příkladě 6.19). Čištěni se provádí pomocí mžikové chromatograf ie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) : 3 : 0,3] , později ve stejném systému 15 : 6 : 0,6 a potom lyofilisací získaného zbytku ze směsi vody a dioxanu. Výtěžek : 21 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,32 .

Příklad 6.21

N-{N^al^^a,N^eP^si^2on-bis- [0- (3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl) -4- hydroxy- feny lamino- thiokar bony 1 ] - lysyl - diaminopropi ony 1} - 191 φ φ φφ φ φ φ φφφφφφ • φ * * · φ · » · · * φφφ φφφ φφ φ φ · φ φ · φ φ « φφ· ♦ ·Φ· ' · φ φ · · φφφφ φφ φφφ φφ φφ ·

-batracylin, dvoj sodná sůl

Tato sloučenina se vyrobí analogicky jako je popsáno v příkladě 6.20) přes dva stupně, přičemž se vychází z uhlohydrátu z příkladu 1.10) a peptidového konjugátu z příkladu 2.16). Chromatografické čištění může odpadnout, neboť vedlejší produkty se mohou odstranit digerací s methylalkoholem a diethyletherem. Potom se provede převedení na dvoj sodnou sůl se 2 ekvivalenty 0,1 N hydroxidu sodného. Výtěžek : 66 % přes dva stupně ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10 : 3 : 1,5] : Rf = 0,3 .

Příklad 6.22

N-{N^a^^^a,N^eP^s^^^on-bis- [0- (3-0-methyl^-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin

Edukty : 60 mg (0,22 mmol) uhlohydrátu z příkladu

1.2) , 76 mg (0,11 mmol) N-(lysyl-se, ryl)-batracylin, di-trifluoracetátu (příklad 2.10)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] a následujícím srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol/diethylether. Výtěžek : 26 % ; DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,39 .

Příklad 6.23 _N__{Nalfa _Nepsilon__bis__[Q_(3.ó-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-seryl}-batracylin • ·©»·

192 • •a· · ·· • · © * ·· « · · · • « ·< · · · · · · · · · · · ·*· · ··· · » · ©a

Edukty : 60 mg (0,22 mmol) uhlohydrátu z příkladu

1.2) , 69 mg (0,11 mmol) N-(lysyl-D-seryl)-batracylin, di-hydrobromidu (příklad 2.11)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] a následující lyofilisaci ze směsi dioxanu a vody. Výtěžek : 29 % ; DC [acetonitril/voda 10 : 1]: Rf = 0,36 .

Příklad 6.24

N_^alfa, j,(epsiloⁿ_bís- [0- (3-0-methyl.-(3-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-batracylin

Edukty : 80 mg (0,3 mmol) uhlohydrátu z příkladu

1.2) , 53 mg . (0,14 mmol) N-(lysyl)-batracylinu (příklad 2.17)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1 , později ve stejném systému 15 : 2 : 0,2] , následujícím srážením ze. směsi methylalkohol/diethylether. Výtěžek : 26 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] :

R_f = 0,22 .

Příklad 6.25

N-{N^a’L^^a,N^eP^s:’’’''^on-bis- [0- (3-0-karboxymethyl-β-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-batracylin

Edukty :

mg (0,19 mmol) uhlohydrátu z příkladu

1.10) , 24 mg (0,063 mmol) N-(lysyl)-batracylinu (příklad 2.17) tl ΦΦΦΦ

193 φφ «φ · φφ φ φ φ φ φ · φ φ φ · φφφ φφφ φφ φφ φφ φφ φφ φφ φ φ φφφ ·

ΦΦΦΦ «φ φφφ φφ ··

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 ; 2 : 0,2 , později ve stejném systému 15 : 4 : 0,5] a následujíc lyofilisací z vody. Výtěžek : 26 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,25 .

Příklad 6.26

N-{N^alf^a,N^eP^síl°ⁿ-bis-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galakto-pyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-batracylin

Roztok sloučeniny 1.31) (79 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1 : 1 (10 ml) se za míchání smísí s thiofosgenem (33,5 μΐ, 0,44 mmol) . Pé 10 minutách se reakční směs zahustí ve vakuu a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný isothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 2.17) (37,7 mg, 0,1 mmol) a s ethyldiisopropylaminem (0,5 ml). Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a. získaný zbytek se čistí pomoci mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 -> 20 : 1 -> 10 : 1].

Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (56,7 mg, 53 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2:1] : Rf = 0,72 ; t.t.= 125 °C (rozklaď) .

Příklad 6.27

N-{N^a^^^a,N^epsilon_ bi_s_[Q_(3-O-methoxykarbonylmethy1-β-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl}-batracylin • 4 »♦*· ·· ·4 » 4 4 1

194 • 44 4 »« • 4 • 4 • 4 · « • 4

4

Sloučenina 1,42) (75,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.17) (37,7 mg, 0,1 mmol) . Čištěním mžikovou chromatografií [dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 20 : 1 -> 10 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (51,1 mg, 44 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,80 ; t.t.= 176 °C (rozklad) .

Příklad 6.28

N-{N^aÍ-f^a,N^eP^síl°ⁿ-bis- [0- (3-0-karboxmethyl-|3-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl ] - lysyl}-batracylin, dvoj sodná sůl

Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) , s peptidovým konjugátem 2.17) (37,7 mg, 0,1 mmol) . Čištěním srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 za použití diethyletheru se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (53 mg, 47 %) ; DC [methylalkohol] : Rf = 0,75 ;· t.t.= > 260 °C (rozklad) .

Příklad 6.29

N_{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-0-karbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-batracylin

Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) , s peptidovým konjugátem 2.17) (37,7 mg, 0,1 mmol) . Čištěním srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 za použití diethyletheru se získá produkt ve formě žluté krysta- 195

4		44		4	44	4 4	4444
4	4		•	• · 4	4	• 4	4
•	4		4	4 4	4	• 4	♦
• 4	*	44	4	• · 4 44	4 4 4	• 44	4 4 4

lické látky (55,6 mg, 48 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf =

0,09 ; t.t.= 206 °C (rozklad) .

Příklad 6.30

N-{N^a-'-^^a,N®P^s:''^^on-bis- [0- (3-0-methyl-P-D-galaktopyranosyl) - 4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin

Sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) , s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění reakční směsi ve vakuu se získaný zbytek vyjme směsí dichlormethanu a methylalkoholu 1 : 1 (10 ml) , produkt se vysráší přídavkem diethyletheru (15 ml) a promyje se malým .množstvím ledového methylalkoholu. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (46 mg, 41 %) ; DC [ethylacetát /ethylalkohol 2:1] ; Rf = 0,12 ; t.t.= 190 až 191 °C ,

Příklad 6.31

N-{N^al^^a,N^eP^si^^on-bis-[0-(β-L-falaktopyránosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin p-Aminofenyl-p-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát -> ethylalkohol] a srážení ze směsi methylalkohol/dichlormethan 1 : 1 pomocí diethyletheru, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látkym (73,8 mg, 70 .%) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,15 ; t.t.= 123 °C .

196 -	·· 44 • · 4 · • · ·	4 4 4 4*4 4 <44	44 444· 4 4 4 4 · ·
	4 · · •«•4 ··	4 4 4 444 44	• 4 44 ·

Příklad 6.32 _N_{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin

Sloučenina 1.31) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol) . Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 7:1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (43,8 mg, 38 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 :

1] : R_f = 0,31 ; t.t.= 176 °C .

Příklad 6.33

N-{N^alf^a,N^eP^síl^on-bis-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin . Sloučenina 1.42) (75,5 mg, 0,22,mmol). se nechá rea- govat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol) . Čištěním mžikovou chromatografii [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 3:1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (46,2 mg, 37 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 :

1] : Rf = 0,12 ; t.t.= 161 °C .

Příklad 6.34

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis -[0-(3-0-karbxylmethyl-p-D-galaktopytanosy1)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-séry1}-batracylin, dvoj sodná sůl •0 ·*0·

Φ· 0· • · · · • 0

0

197

0 0·· 0 ·0

0 »·0 00« 0

Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol) . Čištěním uvedeným výše se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (39,2 mg, 31 %) ; DC [methylalkohol] : Rf = 0,77 ; t.t.= 213 až 215 °C (rozklad) .

Příklad 6.35

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis- [0- (3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin

Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol) . Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát/ethylalkohol 2:1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,1 mg,

%) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,14 ; t.t.= 192 °C (rozklad) .

Příklad 6.36

N-{N^a-'-^^a,N^eP^s'*'^^ori-bis- [0- (3-0-methyl-a-D-mannopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thi okarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin

Sloučenina 1.40) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol) . Ziská se takto produkt, ve formě žluté krystalické látky (48,9 mg, 44 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,10 ; t.t.= 204 °C .

«· ···* ·· ·· * ·« * • · »’ * · • · ·Μ· 0«

198 • 00 00 0 0

0 0

0*

000 00

0 0 • 0 0 0 00 · ·

0 00 ·

Příklad 6.37

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis- [O- (2,3-di-O-methyl-a-D -mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-lysyl-seryl}-batracylin

Sloučenina 1.41) (66 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol) . Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 7:1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (52 mg, 45 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,28 ; t.t.= 164 až 165 °C (rozklad)

Příklad 6.38. . .

N-{N^a^^:f^a,N^eP^s^^^on-bis- [O- (4-0- ^-D_Tgalaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-seryl}-batracylin

Sloučenina 1.56) (95,4 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.10) (69,3 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění reakční směsi ve vakuu se produkt důkladně promyje horkým methylalkoholem (50 ml) . Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (61,6 mg,. 44 %) ; DC [methylalkohol] : Rf = 0,32 ; t.t.= 222 °C (rozklad) .

Příklad 6.39

N_{N^alfa)Nepsil°ⁿ_bfs_[q_(β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy- , -fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-seryl}-batracylin

- 199

• I	4«	• 44	44	4444
• 4	•	4	44 4	4	9	4 4
4	•	4	4 «	4	·.	4 4
4	4	4	4 4	4		4 4
4444		4·	4·4	4 4	4·	4

p-Aminofenyl-p-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol) . Čištěním pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát -> ethylalkohol] a srážením získaného zbytku ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 pomocí diethyletheru se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (50,9 mg, 48 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf =0,14 ; t.t= 133 °C .

Příklad 6.40

N-{N^alfa,N^eP^sllon-bis-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosy1)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysy1-D-seryl}-batracylin

J ⁿ *

Sloučenina 1.31) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol) . Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 5 : 1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (53,8 mg, 47 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 :

1] : Rf = 0,38 ; t.t.=. 145 až 146 °C (rozklad) .

Příklad 6.41

N-{N^alfa,N^eP^s*^lon-bis-[0-(3-O-methoxykarbonylmethyl- β -D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-seryl}-batracylin

Sloučenina 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno'v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol) . Čištěním mži-

200 toto ·· kovou chromatografií [ethylacetát -> ethylacetát/ethylalkohol 3:1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (52,4 mg, 42 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 :

1] : R_f = 0,12 ; t.t.» 168 °C .

Příklad 6.42

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosy1)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbohy1]-lysyl-D-seryl }- batracylin, dvoj sodná sůl

Sloučenina 1.4š) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol) . Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky (69,2 mg, 55 %) ;,DC [methylalkohol] : R_f = 0,71 ; t.t.= 214 až 216 °C (rozklad) .

Přiklad 6.43

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopy-

-batracylin

Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) s peptidovým konjugátem 2.11) (62,6 mg, 0,1 mmol) . Čištěním mžikovou chromatografií [ethylacetát/ethylalkohol 2:1] se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (46,4 mg,

%) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,10 ; t.t.» 173 °C .

9 9 9

9··

201 • 9 9

9 9 9

9 9

9

Příklad 6 .44

N-{N^al^^a,N^eP^s*l°ⁿ-bis-[O-(β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy- fenylamino-thi okar bonyl] lysyl-D-asparagyl}-batracylin p-Aminofenyl^-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.7) (72,1 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 pomocí diethyletheru, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (69,4 mg, 64 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,14 ; t.t.= 185 až 187 °C .

Příklad 6.45

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3,4-di-0-methyl^-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-asparagyl}-batracylin

Sloučenina 1.31 (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.7) (72“, 1 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylácetát/kyselina octová 200 : 1 -> ethylacetát/ethylalkohol 3:1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (99,5 mg,

%) ; DC [ethylalkohol] : R_f = 0,59 ; t.t.= 145 °C (rozklad) .

Příklad 6.46

N- {N^al^^a,N^eP^síl°ⁿ-bis- [0-(3-0-karboxymethyl-β-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-asparagyl}-batracylin, dvoj sodná sůl

444·

44··

202

Sloučenina 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.7) (72,1 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu 1 : 1 pomocí diethyletheru, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (93,4 mg, 73 %) ; t.t.= 220 °C (rozklad).

Příklad 6.47

N-{N^a^^a,N^eP^sí-l-^on-bis- [O- (3-0-karboxymethyl-p~D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysy1- D-asparagyl}-batracylin

J I ’

Sloučenina 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reago‘ , J vat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.7) (72,1 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol/kyselina octová 400 : 100 ; 2] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (69,7 mg, 57 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,11 ; t.t.= 111 °C .

•ť

Příklad 6.48 *

N-{N^alfa,N^epsilon-bis-[0-(β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-asparagy1}-batracylin sodná sůl

Sloučenina 6.44) (21,7 mg, 20 mmol) se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspense se za míchání po kapkách smísí s

0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10) . Lyofilisaci přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (20,6 mg, 93 %) .

φφ φφφφ

203 φφ «« • φ · · • · · φφφ « · · ♦ ΦΦΦ ** • φφ φφ . · φ · · . φ φ ♦ * φφ φ · φφφ * φ φ · « · φφφ φφ ·♦ ·

Přiklad 6.49

N-{N^a^^^a,N^eP^s;Ílon-bis- [0-(3, 4-di-0-methyl-|3-D-galaktopyranosyl) - 4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl ] -lysyl-D-asparagyl} -batracylin, sodná sůl.

Sloučenina 6.45) (23,5 mg, 20 gmol) se nechá reagovat a zpracovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.48). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (23,9 mg, 100 %) .

Příklad 6.50

N- {N^a^^^a,N^eP^s-’‘^^on-bis- [0- (3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl ] lysyl-D-asparagyl}-batracylin, troj sodná sůl

Sloučenina 6.46 (25,6 mg, 20 gmol) se rozpustí ve vodě (10 ml) a tento roztok se za míchání po kapkách smísí s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud se nedosáhne pH 8 . Lyofilisací přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (24 mg, 92 %) .

Příklad 6.51

N-{N^a^^^a,N^eP^s^^^on-bis- [0- (3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosy 1) - 4 - hydroxy -fenylamino-thiokar bonyl ] lysyl -D-asparagyl}-batracylin, sodná sůl

Sloučenina 6.47) (24,7 mg, 20 gmol) se nechá reagovat ,a zpracovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.48). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky

- 204

It •	··	♦ · · • *	φ ·	• •	«« 4 · • ·
• •	* fc
Φ	•	Φ	*		•
		··		♦ ·

(23,0 mg, 92 %) .

Příklad 6.52

N-{N^a^^^a,N^eP^s:’‘^^OI1-bis- [O- (β-L-fukopyranosyl) -4-hydroxy- feny lamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-glutamyl}- batracylin p-Aminofenyl^-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.8) (66,8 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ kyselina octová 200 : 1 -> ethylacetát/ethylalkohol/kyselina octová 10 : 1 : 0,1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (39,5 mg, 36 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,09 ; t.t.= 138 až 139 °C (rozklad) .

Příklad 6.53

N-{N^al^^a,N^epsi^lon-bis-[0-(3-O-karboxymethyl-β-D-galakto-pyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokařbonyl]-lysyl-D-glutamyl}-batracylin, dvoj sodná sůl

Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 gmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.8) (66,8 mg, 0,1 mmol) a zpracovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (97,4 mg, 92 %) ; t.t.=180 °C (rozklad) .

Příklad 6.54

N- {N^alfa,N^epsi-^Lon-bis- [0- (3-O-karboxymethyl-β-D-galakto-pyřanosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-glutamyl}-batracylin, troj sodná sůl • ·

205 • fe fefe • fefe * 9 ♦ » • · * ·«· » fefe fe fefe fefe fefefefe ·· · · « · · • fefe «· · • · fefe ·»· · • fefe <· ·«· fefe fefe ·

Sloučenina 6.53) (25,6 mg, 20 pmol) se nechá reagovat a zpracovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.50). Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (24,3 mg, 92 %) ; [α]^2θ= +20,0 ° (c = 0,26/H₂O) .

Příklad 6.55 _N-{N^al^^a,N^eP^silon-bis- [0- (β-L-fukopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]l-ysyl-glycyl}-batracylin p-Aminofenyl-p-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovýra konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát -> ethylalkohol] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (62,2 mg, 60 %) ; DC [ethylalkohol] : R_f= 0,12 ; r.t.= 176 °C .

Příklad 6.56

N-{N^al;fa,N^eP^silon-bis- [0- (3-0-methyl-p-D-galakto-pyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-glycy1}-batracy1in

Sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ěthylacetát/ethylalkohol 10 : 1 -> 2 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (56,2 mg, 52 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2:1] : R_f = 0,22 ; t.t.= 197 °C .

• 4

4«

4 4

Příklad 6.57

N-{N^a^^^a,Ň^eP^s^^^on-bis-[O-(3,4-di-O-methyl-p-D-galakto-pyranosyl) -4-hydroxy-f enylamino-thiokarbonyl] -lysyl-glycy1}-batracylin

206 ·« * 4 4 · • 4 4

4 · 4 · ·

4494 49

Sloučenina 1.31) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1 -> 2 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (26,2 mg, 23 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,39 ; t.t.= 209 °C .

Příklad 6.58

N-(N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-O-methoxykarbonylmethy1-β-D- galakt opyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-glycy1}-batracylin

Sloučenina 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (22 mg, 18 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2:1]:

Rf = 0,06 ; t.t.= 194 až 195 °C (rozklad) .

Příklad 6.59 _N__{Nalfa_tNepsilon__bis__[0_₍₃_₀__{karboxyraethyl}__p__Dgalaktopy_ ranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-glycyl) -batracylin, dvojsodná sůl

207

00	« »	• 00	0 0	0 0 0 0

0	•	0	0 0	0	0 0	0
•	0	0 0	• 0	0 0	000	0
0	0	0	0 ·	•	0	0
0000		00	0«0 *0		*0	0

Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu se získaný produkt důkladně promyje methylalkoholem, dichlormethanem a diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (86,8 mg, 71 %) ; t.t.=

230 až 232 °C (rozklad) .

Příklad 6.60

N- (N^a^^^a, N^eP^sil°ⁿ-bis- [0- (3-0-karbomoylmethyl-P-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl ] - lysyl-glycyl) -batracylin

Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu se získaný produkt důkladně promyje methylalkoholem, dichlormethanem a diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (40,9 mg, 35 %) ; DC [ethylácetát/ethylalkohol 2 : 1]: R_f = 0,05 ; t.t.= 214 až 216 °C (rozklad) .

Příklad 6.61

N- {N^a^^^a,N^eP^s^-*-^on-bis- [0- (3-0-methyl-a-D-mannopyranosyl) - 4- hydroxy- feny lamino- thiokar bonyl ] - lysy 1 - glycy1} - batracy lin

Sloučenina 1.40) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí

208 ·· 9· • · · · 4 • · 4 • · · · · · » « · · · 4 ·«···· 44« ·« • · 4« • •4 • 4 pomoci mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1 -> 2 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (72,2 mg, 66 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1] : R_f = 0,18 ; t.t.= 175 °C .

Příklad 6.62

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(2,3-dí-0-methyl-a-D -mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-glycyl}-batracylin

Sloučenina 1.41) (66 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.9) (66,2 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/ethylalkohol 10 : 1 -> 3 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,6 mg, 60 %) ; DC [ethylacetát/ethylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,41 ; t.t.= 173 °C .

Příklad 6.63

N-{N^alf^a,_N ^eP^s^loⁿ-bis-[0-(p-L-fukopyranosyl·)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-threonyl}-batracylin p-Aminofenyl-p-L-fukopyranosid (56,2 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.12) (64 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát -> ethylalkohol] a přesrážením produktu ze seměsi methylalkohol/dichlormethan 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (30,5 mg, 28 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf =0,10 ; t.t.= 172 °C .

209 φφ φφ φ φ φ φ φ φ φ φφφ φ φ φφφφ φφ φφ φφφφ φφφ φ

* ·

Příklad 6,64

N-{N^a^^^a ,N^eP^s^^^on-.bis- [Ο- (β-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] - lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1:23) (59,7 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomoci mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 -> 1 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (68,3 mg, 64 %) ; DC [dichlormethan/ methylalkohol 1 : 1] : Rf = 0,49 ; t.t.= 222 až 224 °C (rozklad) .

P ř í k 1 a d 6.65

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(2-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.24) (62,8 mg, 0,22 .mmol) , se.nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg,.0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 ; 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (69,6 mg, 63 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf =

0,24 ; t.t.= 208 °C (rozklad) .

Příklad 6.66 _N__{Nalfa_Nepsilon__bis_₍₀__(3-0inethyl_p__D__galaktopyra_ nosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl ]-lysyl-D-alanyl}-batracylin ·· ·· © · · · * · © • « © * © ···· ·· • · · ·*

Sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol 15 : 1 -> 10 : 1 -> 5 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (94,3 mg, 85 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,16 ; t.t.= 212 °C (rozklad) .

Příklad 6.67

N-(N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(4-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.26) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol 15 : 1 -> 10 : 1 -> 5 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (52,6 mg, 48 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,88 ; t,t.= 192 °C (rozklad) .

Příklad 6.68

N- (N^a^^^a ,N^eP^s^^^on-bis- [0- (ó-O-methyl-Q-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.27) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým

49 » · * 4 · · 4 4 ·

211

4444 44

4 · «4« « · 4

4« 4 4 konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (96,7 mg, 88 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : R_f = 0,04 ; t.t.= 210 °C (rozklad) .

Příklad 6.69

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(2,3-di-0-methyl^-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.28) (65,9 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (57,4 mg, 51 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,40 ; t.t.= 148 °C (rozklad) .

Příklad 6.70 . .

N-{N^a-'-^^a,N^eP^s^’^I’^On-bis- [0- (2,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.29) (65,9 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6,26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 -> 15 : 1 -> 10 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (74,2 mg, 65 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,40 ; t.t.= 140 °C

212 • 4 44 * 4 4

4 « • · 4 4 • 4 · · · · ·· • 4 4·· ·

4 · · 4

4*4 44 ·

4« 44 4444 a 4 4 4 «44 v« ·· a (rozklad) .

P ř i k 1 a d 6.71

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(2,6-di-0nnethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.30) (65,9 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 -> 15 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté, krystalické látky (43,9 mg, 40 %)- DC [dichlormethan/ methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,43 ; t.t.=229 °C (rozklad) .

-i L '1 »'·

Příklad 6.72.

.. * ··

N-{N^alfa,N^epsilon-bis- [0- (3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.31)' (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí;mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (66,2 mg, 59 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3” : 0,2] : Rf = 0,39 ; t.t.= 184 °C.

Příklad 6.73

N- {N^a^^^a,N^eP^s'*'^^on-bxs- [0- (3 , ó-di-O-methyl-β-D-galaktopyra00 000·

213 · « ·0 • 000 ·0 « · ··· 0 · 0 · ♦ · 0 t 0

0 · 0 · ·

0000 00 000 0· nosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.32) (65,9mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) * (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 15 1 -> 10 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (57,1 mg, 50 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,42 ; t.t.= 190 °C.

Příklad 6.74

N-{N^a^^^a,N^eP^s^‘'-^on-bis- [O- (4,6-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl} -batracylin

Sloučenina 1.33) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1 -> 10 1--> 5:1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (47,0 mg, 42 %) ; DC [dichlortnethan/methylalkohol 5 .: 1] : Rf = 0,39 ; t.t.= 169 °C.

Příklad 6.75

N-{N^alfa,N^eP^silori-bis- [0- (2,3,4-tri-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-f eny lamino-thi okarbonyl ] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.34) (69 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí ·* 444* • 4

214 • 4 ··

4 4 4 • 4 *

4 4

4444 44

4 4

4»

44· 4

4

4 pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 30 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (83,8 mg, 72 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : Rf = 0,36 ; t.t.« 165 °C (rozklad) .

Příklad 6.76

N-{N^alfa,N^epsilon-bis-[0-(2,3,6 -tri-O-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.35) (69 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (105 mg, 91 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf=0,48 ; t.t.= 194 °C (rozklad) .

Příklad 6.77

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(2,4,6-tri-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.36) (69 mg_t 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 30 : 1 -> 10 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (67 mg, 58 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1) : Rf = 0,54 ; t.t.= 228 °C (rozklad) .

• to tototo to

215 • to toto to toto · • to to to · to • · · «··« ··

Příklad 6.78

N-{N^alf^a,N^eP^si^^on-bis-[0-(3,4,6-tri-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.37) (69 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se .provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (109,3 mg, 94 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,52 ; t.t.= 180 °C (rozklad) .

Přiklad 6.79

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(2,3,4,6-tetra-O-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.38) (69 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 ; 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (99,2 mg, 84 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : Rf = 0,73 ; t.t.= 188 °C (rozklad) .

Příklad 6.80

N-{N^alfa,N^eP^sí^lon-bis -[0-(3-O-methoxykarbonylmethyl-β-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

9 9 9 9 9

216

9« ·· .9 9 9 9 9 9 9 9 · • 9 · 9 9 9 9 9 9

9 ·9 9« 9 9 · 9 9 9 • · 9 9 9 99

9999 99 9999« 99 9

Sloučenina 1.42) (75,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6,26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (22 mg, 18 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,33 ; t.t.= 194 až 195 °C (rozklad) .

Příklad 6.81

N- {N^a-'-^^a,N^eP^s^^^on-bis- [0- (3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracyiin, dvoj sodná sůl

Sloučenina 1.43) (77,3 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2,13) (67,7 mg, 0,1 mmol) .. Čištění se provádí tam uvedeným způsobem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (99,7 mg, 81 %) ; DC [methylalkohol] : Rf = 0,80 ; t.t.= 230 °C (rozklad) . . .

Příklad 6.82

N-{N^al£^a,N^eP^si^lonrbis-[0-(3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracyiin

Sloučenina 1.44) (72,2 mg, 0,22 mmol) sě nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 7:1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické • ·

217 ·· • 4 · • 4 • 4

4

4444 «4 *4 4444 ♦ 44 • 4 4 4 ·4 4 • 4 4 4 4 4

4 44 4444

4*4 44 • •4 44 44 4 látky (29,4 mg, 25 %) ; DC [díchlormethan/methylalkohol 3 : 1] : Rf = 0,23 ; t.t.= 201 až 202 °C .

Příklad 6.83

N- {N^al-f^a,N^eP^sil°ⁿ-bis- [O- (3,4-didesoxy-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.52) (52,6 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s péptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [díchlormethan/methylalkohol 17 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (38,8 mg, 37 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 : 3 : 0,2] : Rf = 0,40 ; t.t.= 175 °C.

Příklad 6.84

N-{N^a-^^a,N^epsil°ⁿ-bis-[O-(a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.39) (59,7 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s péptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [díchlormethan/methylalkohol 10 : 1 -> 1 : 1] ., přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (52 mg, 48 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1] : Rf = 0,19 ; t.t.= 196 °C.

Příklade.85

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyra4« 444·

4* 44

218 • 4 4 · ·

4 4

4444 44 • 44

4 4 4 4 » 4 4 4

4< 44 4·· «44 ·

444 44 44 nosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.31) (79 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.2) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (77,6 mg, 69 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 15 ; 3 : 0,2] : Rf = 0,33 ; t.t.= 186 °C.

Příklad 6.86

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(4-0-methyl-(β-D-galaktopyranosyl) 4-hydroxy-fenylamino- thi okarbony1]-lysy1-D-alanyl}-batracylin, dvoj sodná sůl

Sloučenina 1.56) (95,4 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek důkladně promyje horkým methylalkoholem (50 ml) , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (102,8 mg, 73 %) ; DC [methylalkohol] :

Rf = 0,27 ; t.t.= 225 až 226 °C .

Příklad 6.87

N-{N^a^^^a,N^eP^s;’'^^on-bis- [0- (4-0- (3’ -sulfát^-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, dvojsodná sůl

Sloučenina 1.57) , (117,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým

0* **·<

I

S 0

0 0 »

219

0 «••0 00 > 0 · ř 0

0 0 konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (152,8 mg, 95 %) ; t.t.= 232 °C (rozklad) .

Příklad 6.88

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(4-0-(3’-O-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.58) (98,4 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (118,2 mg,'83.%) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 1 : 1] : Rf = 0,58 ; t.t.= 221 °C (rozklad) .

Příklad 6.89

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[O-72-Ó-methyl-4-O-(3’-0-methyl-β-D-galaktopyranosyl)-β-D-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbónyl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.59) (101,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26), s peptidovým — konjugátem 2.13) (67,7 mg, 0,1-mmol) Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol i

; 1 -> 10 : 1 -> 5 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (101,3 mg, 70 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,58 ; t.t.= 233 °C (rozklad) .

220 ·· ·« • ♦ Φ * · ♦ · · * · * ♦ • Φ Φ • · · · * · φ • · φφφφ • * · • · Φ

ΦΦΦ Φ • Φ

ΦΦ ♦

Příklad 7.1 až 7.13

Obecný vzorec

η (η = 0,1,2)

Když se vychází z jiných aminokyselinových nebo peptidových konjugátů batracylinu nebo z batracylinu, vyrobí se analogicky, jako je popsáno v příkladě 4,1.a) , následující glykokonjugáty :

Příklad 7.1

N-{N-[0-(3-0-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin

Edukty : uhlohydrát z příkladu 1.2) , aminokyselinový konjugát z příkladu 2.3)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1) a lyofilisace ze směsi dioxanu a vody. Výtěžek : 42 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] : Rf = 0,31 .

• Μ

221

Příklad 7.2

Ν-{Ν-[Ο-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl

Edukty : uhlohydrát z příkladu 1.10) , aminokyselinový konjugát z příkladu 2.3)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3) a lyofilisace ze směsí dioxanu a vody. Následující převedení na sodnou sůl se provádí pomocí 0,1 N hydroxidu sodného. Výtěžek : 43 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : R_f = 0,14 .

Příklad7.3

N-{N-[O-(β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-seryl-D-alanyl}-batracylin

Edukty : „p-Aminofenyl^-L-fukosid , aminokyselinový konjugát z příkladu 2.18)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 3 : 0,3) a lyofilisace ze směsi dioxanu a vody. Výtěžek : 93 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/araoniak (17%) 15 : 3 : 0,3] :

R_f = 0,28 ; FAB-MS : m/z = 705 = M+l .

Příklad 7.4

N-(N-[0-(β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl-D-alanyl}-batracylin

4444 • 4

4444 44

222

Edukty : p-Aminofenyl-β-L-fukosid , aminokyselinový konjugát z příkladu 2.19)

Čištění se provádí digerací s methylalkoholem a srážením ze směsi methylalkoholu a dichlormethanu etherem. Výtěžek :

% ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1: 0,2] : R_f = 0,78 .

Příklad 7.5

N-{N-[0- (β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylaminó-thiokarbonyl]-glutamyl-D-alanyl}-batracylin

Edukty : ρ-Aminofenyl-p-L-fukosid , aminokyselinový konjugát z příkladu 2.20)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5 a později stejný systém 15 : 6 : 0,6] a lyofilisace ze směsi dioxanu . a vody. Výtěžek : 93 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ · 'amoniak (17%) 1.5 : 8 : 0,8] : Rf = 0,55 .

Příklad 7.6 .

N-[0- (3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-batracylin

250 mg (1 mmol) batracylinu se rozpustí v 50 ml dioxanu a po přídavku 184 μΐ thiofosgenu se reakční směs míchá po dobu 2 hodin při teplotě 20 °C . Potom se zahustí, digeruje še diethyletherem a přefiltruje se. Zbytek na filtru se suší po dobu 16 hodin za vysokého vakua a

223 • · '· · · «· · • · · · ♦ ·· ··«· ·· · ·« ·· ··*· • a « · · ·· fefefe • fefe «·« fe • fe fefe potom se vyjme do 30 ml dimethylformamidu. Přidá se 312 mg (1 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.10) a 500 μΐ ethyldiisopropylaminu a reakční směs se zpracovává po dobu 4 hodin ultrazvukem. Potom se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 , později ve stejném systému 15 : 6 : 0,6] . Relevantní frakce se zahustí a lyofilísují se ze směsi dioxanu a vody. Výtěžek : 363 mg (60 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 6 : 0,6] : Rf = 0,38 .

Příklad 7.7

N-[O-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-batracylin

Výroba probíhá analogicky jako je popsáno v příkladě

7.6) , přičemž se vychází z batracylínu a ž uhlohydrátu z příkladu 1.2) Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dióhlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1] . Výtěžek : .58 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] : R_f = 0,39 ; FAB-MS : m/z 561 = M+l .

P ř i k 1 a d 7.8

N-{N-[0-(3,4-di-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.31) (37,5 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/ • 0 00

0 0 0 • 0 0

0* · 0

0000 00

0

···

224 «00 methylalkohol 30 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (49,3 mg, 75 %) ; DC [ethylacetát/ ethylalkohol 2 : 1] : Rf = 0,81 ; t.t.= 185 °C (rozklad) .

Příklad 7.9

Ν-{N-[0-(2,3,4-tri-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.34) (34,5 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/ methylalkohol 40 : 1 -> 15 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (54,9 mg, 81 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 20 : 1] : Rf = 0,15 ; t.t.= 190 °C (rozklad) .

Příklad 7.10

N-{N-[0-(3-0-methoxykarbonylmethyl-p-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin

Sloučenina 1.42) (37,8 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/ methylalkohol 20 : 1 -> 10 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky ’(44,3 mg, 63 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf = 0,85 ; t.t.= 195 °C (rozklad) .

Příklad .7.11

Ν-{N-[0-(3-0-karboxymethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy225

-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin, sodná sůl

Sloučenina 1.43) (38,6 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) provádí srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 :

diethyletherem, přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (63,8 mg, 89 %) ; DC [ethylalkohol] : Rf =0,15 ; t.t.= 217 °C (rozklad) .

Příklad 7.12

Ν-{N-[O-(3-0-karbamoylmethyl-p-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin,

Sloučenina 1.44) (37,8 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/ methylalkohol 20 : 1 -> 10 : 1 -> 5 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (20 mg, 29 %) ; DC [ethylalkohol] : R_f = 0,15 ; t.t.=^L184 °C (rozklad) .

Příklad 7.13

Ν- {N-[0-(β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-batracylin, p-Aminofenyl^-L-fukopyranosid (28,1 mg, 0,11 mmol) se nechá reagovat s peptidovým konjugátem 2.3) (32 mg, 0,1 mmol) stejně, jako je popsáno v příkladě 6.26) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [ethylacetát/prtrolether 2 : 1 -> 5 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (49,8 mg, 81 %) ; DC [ethylalkohol]

226

4« ΦΦ ·ΦΦ· Φ

Φ Φ Φ

Φ Φ Φ Φ

ΦΦΦ

ΦΦΦ Φ ΦΦ «

Φ Φ

ΦΦΦ

Φ

ΦΦ

ΦΦ ΦΦΦΦ : Rf = 0,50 ; t.t.= 173 °C

Příklad 8.1 až 8.12

Obecný vzorec

P ř í k 1 a d 8.1

N-{N^eP^s-*-l°ⁿ- [2-chlor-4- [O- (3-O-methyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát8.1.a) N-{N^a^^a-[terč.-butroxykarbonyl]_N^eP^sil°ⁿ_

-[2-chlor-4-[O-(3-O-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

265 mg (0,98 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-p-L-fukosidu (příklad 1.2)) a 181 mg (0,98 mmol) kyanurchloridu se rozpustí v 50 ml směsi dioxanu a vody 1:1, ochladí se na teplotu -5 °C a po přídavku 83 mg hydrogenuhličitanu sodného se při této teplotě míchá po dobu 15 minut. Potom se přidá 538 mg (0,98 mmol) N-[N^a-’-^^a-(térc.-buto00 ·♦·· · · * «

227

0« 00 • 0 ·

0 0 0 « 0 0 ·

0000 00 '»«

0.00 • 0 · ··· · 0· 0 0

00 · xykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-batracylinu (příklad 2.4)) , rozpuštěných ve 14 ml dimethylformamidu a dalších 83 mg hydrogenuhličitanu sodného a reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti. Po 16 hodinách míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a získaný zbytek se zpracuje s vodou. Směs se odsaje a zbytek na filtru se za vysokého vakua usuší, přičemž se získá 890 mg (96 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : R_f = 0,26 .

8.1) N-{N^eP^silon-[2-chlor-4-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

100 mg (0,11 mmol) sloučeniny z příkladu 8.1.a) se rozpustí ve 3 ml dioxanu, načež se přidá 60 mg uhličitanu draselného a 6,5 ml 0,1 N roztoku ethanolaminu v dioxanu.' a reakční směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 80 °G . Potom se zahustí

Příklad 8.2

N-{N^ePsilon_[4_hydroxyethylamino-2-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

8.2.a) N-{N^alfa-[terč.-butroxykarbonyl]-N^eP^silon-[4-hydroxyfenylamino-2-[0-(3-O-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin

100 mg rozpustí ve draselného a (0,11 mmol) sloučeniny z příkladu 8.1.a) se 3 ml dioxanu, přidá se 60 mg uhličitanu

228 • ·* ·· © · • « · • · · v * © · « · · ·· ** ♦ ··© ♦ · © ♦ · · v · © • · «· © a reakční směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 80 °C . Potom se zahustí a získaný zbytek se rozmíchá s vodou, přefiltruje se a zbytek na filtru se čistí pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1) . Po zahuštění relevantních frakcí a vysušení získaného zbytku za vysokého vakua se získá 83 mg (80 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] : Rf = 0,23 .

8.2) N-{N^eP^sí4°ⁿ_[4-hydroxyfenylamino-2-[0-(3-0-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát .67 mg (0,07 mmol) sloučeniny z příkladu 8.2.a) se deblokuje analogicky, jako je popsáno v příkladě 8.1) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlořmethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2] ( Následující srážení ze směsi methylalkoholu a diethyletheru vede k produktu v 90% výtěžku ; FAB-MS m/z - 854 = M+l .

Analogicky jako je-popsáno v příkladě 8.1) ' se vyrobí ¹následující glykokoňjugáty :

P ř i k 1 a d 8.3

N-{N^eP^silon-[2-chlor-4-[0-(2-0-methyl^-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-tříazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, triíluoracetát

Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.1) ;

Výtěžek : 76 % ; FAB-MS : m/z = 829 = M+l .

φ φ φ φ φ φ • φ φφ

Příklad. 8.4 _Ν-{_N ^eP^silon-[2-chlor-4-[Ο-(β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

229 * * φ φ φ> φ φ φφφ • φ φ φφφφ- φφ

Φφφ

Edukt: p-Áminofenyl^-L-fukosid ;

Výtěžek : 76 % ; FAB-MS : m/z = 815 = M+l ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : R_f = 0,44 .

N-{N^eP^síl°ⁿ- [2-chlor-4- [0- (3-desoxy^-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.6)' ;

Výtěžek : 56 % ; FAB-MS : m/z = 799 = M+l ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : R_f = 0,54 .

Analogicky jako je uvedeno v příkladech 8.1.a), 8.2.a) a 8.2) se z peptidového konjugátu batracylinu z příkladu

2.4) , popřípadě z odpovídajícím způsobem vyrobitelných L-alanyl-isomerů, vyrobí následující glykokonjugáty :

Příklad 8.6

N-(N^eP^siloⁿ_[4-hydroxyethylamino-2-[0-(2-0-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát «9 44 » · 4 4

4' 9 4 « 4

4 4 »444 44

230 • 4 4444

4«

4 4 4

4 9 4

4 >4 44 4 4

Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.1) ;

Výtěžek : 78 % ; FAB-MS : m/z = 854 = M+l ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : R_f = 0,33 .

Příklad 8.7

N-{N^eP^sil°ⁿ-[4-hydroxyethylamino-2-[O-(4-O-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.4) ;

Výtěžek : 38 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : Rf = 0,4 .

Příklad 8.8

N-{N^eP^sí·!⁰¹¹- [4-hydroxyethylamino-2- [0- (3-desoxy-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl] -lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.6)

Výtěžek : 78 % ; FAB-MS : m/z = 824 = M+l ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : R_T = 0,37 .

Příklad

8.9

N- {N^eP^s^l°ⁿ_[4-hydroxyethylamino-2-[0-(β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl} -batracylin, trifluoracetát

- 231 • 4 44 · · 4 4

4-4 4

4 4 • 44

4444 4«

44 ·* 4444

4 4 4 4 4

4 · · · ·

44 444 4 • 4 4 4 4 «4 4· ·

Edukt: p-aminofenyl-p-L-fukosid ;

Výtěžek : 52 % ; FAB-MS : m/z = 820 = M+l ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%)' 15 : 4 : 0,5] : R_f = 0,37 .

Příklad 8.10

N-{N^eP^sil°ⁿ_[4-hydroxyethylamino-2-[O-(3-O-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.2) ;

Výtěžek : 88 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : Rf = 0,35

Příklad 8.11

N-{N^eP^sil°ⁿ-[4-hydroxyethylamino-2-[0-(2-0-methyl-β-L-fúkosy1)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt:. Výtěžek uhlohydrát· z příkladu 1.1) ; - - % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : Rf = 0,40 .

Příklad 8.12

N-{N^eP^sil°ⁿ-[4-hydroxyethylamino-2-[O-(4-0-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino]-triazin-6-yl]-lysyl-D-alanyl}-batracylin, trifluoracetát

Edukt: uhlohydrát z příkladu 1.4) ;

Výtěžek : 88 % ; FAB-MS m/z = 854 = M+l ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) «· φφφφ

232 φ

• φφφ φφφ

ή.φ φφ* : 4 ; 0,5] : R_f = 0,37 .

Příklad 9.1

Ν-[D-alanyl]-chinolon-a, trifluoracetát

Ν-[N-(terč.-butoxykarbonyl)-D-alanyl]-chinolon-a

Ve 200 ml dimethylformamidu se rozpustí n-(terč.-butoxykarbonyl) -D-alanin (3,6 g, 19,2 mmol) a 2-isobutoxy-l-isobutoxykarbonyl-l,2-dihydro-chinolin (5,8 g, 19,2 mmol) a po osmihodinovém míchání při teplotě místnosti se přidá chinolin-a (4 g, 9,6 mmol) a 3,3 ml ethyldiisopropylaminu a vsázka se zpracuje po dobu 10 hodin ultrazvukem. Potom se zahustí, získaný zbytek se vyjme do dichlormethanu a vysráží se diethyletherem. po filtraci, promytí diethyletherem a vysušení za vysokého vakua se získá 4,58 g (81 %) v názvu uvedené sloučeniny, která se nechá bez dalšího čištění dále reagovat.

9.1) N-[D-alanyl]-chinolon-a, trifluoracetát

4,56 g (7,75 mmol) sloučeniny z příkladu 9.1.a) se «9

9 9 9

9 9 «99

9*

233

9 9999 '9 9 9 9 9 , 9 · * · 9 « 99 999 9

9 · 9

99 9« 9 při teplotě 0 °C rozpustí v 50 ml dichlormethanu a 50 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové a reakční směs se míchá při této teplotě po dobu jedné hodiny. Potom se zahustí, destiluje se s dichlormethanem a vysráží se z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Získá se takto 4,07 g (87 %) krystalické látky uvedené v názvu DC [acetonitril/vody/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,34 .

Příklad 9.2

N-[alanyl]-chinolon-a, trifluořacetát

Syntesa se provádí stejně, jako syntesa isomeru v příkladě 9.1)

Příklad 9.3

N-[lysyl-D-alanyl]-chinolon-a, di-trifluořacetát

234 • ·♦·

CF-jCOOH _ΝΗ,

COOH

9.3.a) N-[N^alfa,N ^ePSÍlon._bis -(terč-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-chinolon-a

341 mg (9,84 mmol) N^alfa,N^eP^silon-bis- (terč-butoxykarbonyl) -lysinu se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se smísí se 200 mg (1,48 mmol) N-hydroxybenzotriazolu a 227 mg (1,18 mmol) N’-(3-dimethylaminopropyl)-N-ethylkarbodiimidu hydrochloridu. Po tříhodinovém míchání při teplotě 10 °C se přidá 432 mg (0,82 mmol) sloučeniny z příkladu 9.1 a reakční směs se míchá po dobu dalších 2 hodin při teplotě 20 °C . Potom se zahustí, získaný zbytek se promíchá třikrát s 50 ml vody, načež se vyjme do dichlormethanu a vysuší se pomocí bezvodého síranu sodného. Srážení se provádí pomocí diethyletheru, přičemž se získá 516 mg (78 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [acetonitril/voda 10 : 1] : Rf = 0,55 .

9.3) N-[-lysyl-D-alanyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát

Provede se deblokace 512 mg (0,63 mmol) sloučeniny z příkladu 9.3.a) z ethylesteru kyseliny octové pomocí di235

44 • 4	•	• 4 4	*4 4	• 4 4	44 »444 4 4 4
*	«	4 4	4 4	4 4·	4«4 4
•	4	4	4 4	4	4 4
4 · 4		4 4	4 · 4	4 4	«4 4

ethyletheru, analogicky jako je popsáno v příkladě 9.1) , přičemž se dosáhne výtěžku 479 mg (90 %) ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10 : 3 : 1,5] : Rf = 0,3 .

Příklad 9.4

N-[-lysyl-alanyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát

Syntesa se provádí stejně, jako syntesa isomeru v příkladě 9.3) .

Příklad 9.5

N-[N^a^^^a-(terč.-butoxykarbonyl)-lysyl-alanyl]-chinolon-a

COOH

9.5 . a) N- [N^a^^^a- (terč, -butoxykarbonyl) -N^eP^s-’··'·⁰¹¹- (fluorenyl9-methoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-chinolon-a

1,57 g (3,36 mmol) N^al^^a-(terč.-butoxy-karbonyl)_N^eP^sll°ⁿ_(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysinu se rozpustí ve 25 ml dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se smísí se 600 mg (5,04 mmol) N-hydroxysukcinimidu a 820 mg (4,03

4« «444

236

44 * 4 4 4

4 4

4 4 4

4 4 • «44 *4

44

4 4 · 4

44« «·

4 4

44· 4 ' 4 4

4 mmol) Ν,Ν’-dicyklohexylkarbodiímidu. Po 3 hodinách se odfiltruje vzniklá močovina, k filtrátu se přidá 1,5 g (2,86 mmol) sloučeniny z příkladu 9.1) a reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Zbytek močoviny se odfiltruje a filtrát se čistí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 97,5 : 2,5 , později ve stejném systému 90 : 10] , načež se vysráží ze směsi dichlormethan/diethylether 1 : 1 pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 1,5 g (56 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 9:1] : R_f = 0,47 .

9.5) N- [N^a^^a- (terč. -butoxykarbonyl) -lysyl-D-alanyl ] -chínolon-a

Odštěpení Fmoc ze sloučeniny z příkladu 9.5.a) se provádí pomocí piperidinu v dimethylformamidu. Srážení surového produktu z dimethylformamidu se provádí pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 72 % DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf =0,43 .

Příklad 9.6

N- [N^eP^si^^on- (f luorenyl- 9-methoxykarbonyl) - lysyl-D-alanyl ] -chinolon-a, trifluoracetát

Cl

O

1/ /,

COOH

- 237 • fe fefe * ♦ * fe fefe · • · fefe • · · fefefefe fefe fefe fefe fefefefe

I · fe · · » fe fefefe b fefe fefe · · • · · fe ·· ·

Odštěpení Boc ze sloučeniny z příkladu 9.5.a) se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 9.1) . Sráze ní surového produktu se provádí ze směsi methylalkohol/diethylether. Výtěžek činí 80 % ; DC [dichlormethan/methylalkoholamoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : Rf = 0,36 .

Příklad 9.7

N-[N^a^^^a-(terč.-butoxykarbonyl)-lysy1-alany1]-chinolon-a

Syntesa se provádí stejně, jako syntesa isomeru v příkladě 9.5) .

Příklad 9.8

N-[lysyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát cf₃cooh

COOH

9.8. a) N- [N^a'*'^^a,N^eP^s-’-^^on-bis- (terč. -butoxykarbonyl) -lysyl] -chinolon-a «44*

238 • 4 44 • · e a •444 44

1317 mg (3,8 mmol) N^a^^a,N^eP^s^^^on-bis- (terč.-butoxykarbonyl) -lysinu se spojí podle předpisu v příkladě 9.1) s ehinolonem-a . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [díchlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1] . Získá se takto 1010 mg (71 %) v názvu uvedené sloučeniny.

>

9.8) N-[lysyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát

1005 mg (1,347 mmol) sloučeniny z příkladu 9.8.a) se deblokuje stejně, jako je uvedeno v příkladě 9.1) . Po srážení ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru se získá 966 mg (93 %) v názvu uvedené sloučeniny ve formě krystalické látky DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10 : 5 : 3] : Rf = 0,33 .

Příklad 9.9 , . . . , 7 . '' / -...... · - ~ .

N-[D-lysyl]-chinolon-a, di-trifluoracetát

Syntesa se provádí stejně, jako syntesa isomeru v příkladě 9.8) .

Příklad 9.10

N-[N^alfa

-(terč.-butoxykarbonyl)-lysyl]-chinolon-a,

0000

239 ·

0 0 0 0« 0

0 0 0 «00

0000 0«

0 0 •*0 0 •00 • · 0 0

0 0

000 0« • 0 0 0

0

COOH

9.10 . a) N- [N^a^'^a- (terč. -butoxykarbonyl) -N^eP^s^^on- (fluorenyl-9-mehoxykarbonyl)-lysyl]-chinolon-a

1350 mg (2,88 mmol) N^a^^^aterc.-butoxykarbonyl)_N^eP^sil°ⁿ_(fl_Uorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysinu se spojí podle předpisu v příkladě 9.1) s chínolonem-a . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylaikohol/amoniak (17%) 15 : 1 : 0,1, později ve stejném systému 15 : 2 : 0,2] . Získá se takto 1025 mg (82 %) v názvu uvedené sloučeniny.

9.10) N- [N^al^^a- (terč. -butoxykarbonyl) -lysyl] -chinolon-a

Odštěpení Fmoc ze sloučeniny z příkladu 9.10.a) se provádí pomocí analogicky, jako je popsáno v příkladě 9.5). Dvojnásobné srážení surového produktu z methylalkoholu se provádí pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 86 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf =

0,48 .

44«·

240 • 9 94 * ·· * · · ·· » · 99 4 · 9 499 49 9

9« 44 ·· 99 9994

94» 9·· 99

4494 44 444 44 44 4

Ρ ř ί k 1 a d 9.11

N-[N^eP^sí^^on-(fluorenyl-9-mehoxykarbonyl)-lysyl]-chinolon-a, trifluoracetát

COOH se

SrážeOdštěpení Boc ze sloučeniny z příkladu 9.10.a) provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 9.1) . ní surového'produktu se provádí ze směsimethylalkohol/di- _.··♦·· ethylether. Výtěžek činí 92 % ; DC [dichlormethan/methylalkoholamoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : Rf = 0,44 .

P ř i k 1 a d 10.1 - 10.3

Obecný vzorec «· ····

241

Příklad

10.1

N-{N^eP^sil°ⁿ-[O-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-chinolon-a

10.1. a) N- {N^a^^^a(terc. -butoxykarbonyl) -N^eP^s-*-^^on- [O- (3-0-karboxymethyl-β-L-fúkosy1)-4-hydroxyfenylamino- thiokarbonyl ]. - lysyl - D-alanyl} - chinolon- a mg (0,25 mmol) p-aminofenyl-3-0-karboxymethyl-β-L-f.ukosidu (příklad 1.10)) se v 15 ml směsi dioxanu a vody 1 : 1 smísí za míchání se 47 μΐ (0,28 mmol) thiofosgenu. Po desetiminutovém míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a suší se po dobu jedné odiny za vysokého vakua. Získaná olej ovitá látka se potom spojí v absolutním dimethylformamidu se 180 mg (0,25 mmol)

N-[N^a^^a-(terč.-butoxykarbonyl)-lysyl-D-alanyl]-chinolonu-a (příklad 9.5)) za přítomnosti 86 μΐ ethyldiisopropylaminu. Po dvojnásobném srážení surového produktu ze směsi dichlormethanu a diethyletheru a následujícím rozmíchání s vodou a lyofilisací ze směsi dioxanu a vody se získá 210 mg (78

9*99 • 9

242

99

%) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,62 .

10.1) N-{N^eP^sil°ⁿ-[O-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4hydroxy- fenylaminothiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-chínolon-a

208 mg (0,193 mmol) sloučeniny z příkladu 10.1.a) se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě 0 °C v 10 ml dichlormethanu a 10 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové. Potom se reakční směs zahustí, destiluje se s 15 ml methylalkoholu a chromatografuje se za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 10 : 10 : 0,8. Po následujícím srážení z dimethylformamidu za použití diethyletheru se získá 52 mg (28 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,53 .

Analogicky jako je popsáno v příkladě 10.1) se z částečně chráněných peptidových konjugátů podle příkladů

9.5) , 9.7) , popřípadě 9.10) , vyrobí následující glykokonjugáty :

Příklad 10.2

N-{N^eP^s^^^ori- [0- (3-0-methyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxyfenyl-amino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-chinolon-a

Edukty : uhlohydrát z příkladu 1.2) ; peptidový konjugát z příkladu 9.7) .

Čištění mezistupně se provádí vícenásobným srážením ·· *414 »·*« «*

243 z methylalkoholu pomoci dimethyletheru. Čištěním konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) , později se stejným systémem 15 : 8 : 0,8 se získá v názvu uvedená sloučenina ve výtěžku 20 % ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 8 : 0,8] : R_f = 0,15 .

Příklad 10.3

N-{N^eP^sil°ⁿ-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxyfenylJ

-amino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a

Čištění mezistupně se provádí srážením z methylalkoholu pomocí dimethyletheru. Čištěním konečného stupně pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) , se získá v názvu uvedená sloučenina ve výtěžku 39 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,33 .

Příklad 11.1 - 11.18

Obecný vzorec

n = 0,1 • to toto * toto to • to ···♦

244 • · totototo toto • to to ♦ toto • · to ·« · «« ·» toto»· , to to · ·· ··· ·· to· ·

Příklad 11.1

N-{N^a^^^a,N^eP^s:‘’^^on-bis-[0-(3-0-iiiethyl-P-L'fukosyl)-4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl-D-alanyl}-chinolon-a mg (0,19 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-p-L-fuko* sidu (příklad 1.2)) se podle předpisu z příkladu 10.1.a) nejprve převede na olejovitou látku a potom se nechá reagovat v 5 ml dimethylformamidu se 68 mg (0,08 mmol)

N-(lysyl-D-alanyl)-chinolonu a, di-trifluoracetátu (příklad 9.3) za přítomnosti 55 μΐ ethyldiisopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti , načež se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatograf ie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 85 : 15 : 1,5 . Srážením z methylalkoholu za použití diethyletheru se získá 62 mg (63 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80 : 20 : 2] : Rf = 0,5 ; MS-MALDI : m/z = = 1242 = M+l Analogicky jako je popsáno v,příkladě 11.1) se z peptidových konjugátů podle příkladů 9.3) , 9,4) , 9.8) , popřípadě 9,9) , vyrobí následující glykokonjugáty : '

I

Příklad 11.2

N-{N^a'*'^:^^a,N^eP^s^^^on-bis- [0- (3-O-methyl-p-L-fukosyl) -4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-chinolon-a

Edukty : 50 mg (0,19 mmol) uhlohydrát z příkladu

1.2) ; 0,08 mmol peptidový konjugát φφ φφφ Φ

245 • · Φ Φ φ · · «

ΦΦΦ Φ « φ φ Φ ·

Φ · · · · · · · ΦΦΦΦ

ΦΦΦ Φ·« ΦΦ • ΦΦΦ ΦΦ ΦΦΦ ΦΦ φ· · z příkladu 9.4) .

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 : 1 a srážením z methylalkoholu pomocí diethyletheru se získá v názvu uvedená sloučenina ve výtěžku % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1:

0,2] : R_f = 0,42 .

Příklad 11.3

N-{N^a^^^a,N^eP^s^^^on-bis-[0-(3-O-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-chinolón-a

Edukty : 52 mg (0,166 mmol) uhlohydrát z příkladu

1.10) ; 0,07jnmol peptidový konjugát . z příkladu 9.4) ..

Čištění, se provádí pomocí mžikové chromatograf ie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80 : 20 :- 2 a rozmícháním.získaného zbytku.s methylalkoholem ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10 : 3 : 1,5] : R_f = 0,62 .

Příklad 11.4

N-{N^al^^a,N^eP^sil°ⁿ-bis-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4hydr óx y-fenylamino-thi okarbony1]-D-lysyl-alany1}-chinolon - a

Edukty : 44 mg (0,14 mmol) uhlohydrát z příkladu

1.10) ; 0,Ó6 mmol peptidový konjugát z příkladu 9.3) .

0000 00

246 ««

0* 00 0000 0 0 0 0 0 0 ·

0 0 0 0 0 00 00 0000 0 0 0 0 0

000 00 00 >

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80 : 20 : 2 a rozmícháním získaného zbytku s methylalkoholem. Výtěžek činí 57 % ; DC [acetonitril/voda/ ledová kyselina octová 10 : 3 : 1,5] : Rf = 0,62 .

Příklad 11.5

N-{N^al-f-^a,N^eP^sil°ⁿ-bis- [0- (a-L-rhamnosyl)-4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-chinolon-a

Edukty : 44 mg (0,166 mmol) uhlohydrát z příkladu

1.21) ; 0,07 mmol peptidový konjugát z příkladu 9.4) .

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 80 : 20 : 1 a rozmícháním získaného zbytku se směsí methylalkohol/diethylether. Výtěžek činí 90 mg (89 %) ; DC [acetonitril/voda/ ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf =0,62 ; MS-ESI : m/z = 1212 = M+l .

Příklad. 11.6

N_{N^alfa,Ň^eP^silon-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a

Edukty : 70 mg (0,258 mmol) uhlohydrát z příkladu

1.2) ; 0,11 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.8) .

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina φ φ φφ • φ φ φ φ · · φφφ φφφ ··' φφφφ

247 φφ φφφφ · • φ φ · φ φ φ φφφ φ φ φ · φ φφ φφ φ octová 90 : 10 : 1 , srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a rozmícháním získaného zbytku s vodou. Výtěžek činí 41 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,65.

Příklad 11.7

N-{N^a^^^a,N^eP^s:*’^^orL-bis- [0- (3-0-methyl-p-L-fukosyl) -4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-a

Edukty : 50 mg (0,19 mmol) uhlohydrát z příkladu

1.2) ; 0,08 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.9) .

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 : 1 , srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru a rozmícháním získaného zbytku s vodou. Výtěžek činí 67 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf =

0,65, MS-EAB : m/z = 1169 « M+l .

Příklad, 11.8

N- {N^a^^a,N^eP^sil^on-bis- [O- (3-O-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, dvoj sodná sůl

Edukty : 50 mg (0,16 mmol) uhlohydrát z příkladu

1.10) ; 0,07 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.8) .

Po zahuštění reakční směsi, vyjmutí do 10 ml dimet99 44

9 4 • 4

4

4444 49 •9 99«4

9

248 • 9

4

44

9

9 9 9

9

9 hylformamidu a přídavku 8 ml 0,1 N hydroxidu sodného se reakční směs míchá po dobu 2 hodin, při teplotě 20 °C . Po novém zahuštění se vyjme získaný zbytek do vody a hodnota pH se nastaví na 5 . Potom se lyofilisuje a digeruje s methylalkoholem a potom se směsí methylalkohol/diethylether. Získá se takto 68 mg (65 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,.26 .

Přiklad 11.9

N-(N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-O-karboxymethyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thio-karbonyl]-D-lysyl)-chinolon-a, dvoj sodná sůl

Edukty : 100 mg (0,32 mmol) uhlohydrát z příkladů

1.10) ; 0,13 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 12.9) .

Po zahuštění reakční směsi, vyjmutí do 10 ml dimethylformamidu a přídavku 16 ml 0,1 N hydroxidu sodného se· reakční směs míchá po dobu 2 hodin při teplotě 20 °C . Po novém zahuštění se vyjme získaný zbytek do vody a hodnota pH. se nastaví na 5 . Potom se lyofilisuje a digeruje s methylalkoholem a potom se směsí methylalkohol/diethylether. Získá se takto 160 mg (77 %) v názvu uvedené sloučeniny ; t.t.= 218 až 220 °C ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10 : 3 : 1,5] : Rf = 0,69 .

P ř i k lad 11.10

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-0-methyl-a-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl)-chinolon-a »· 0 0 00

Edukty : 50 mg . (0,19 mmol) uhlohydrát z příkladu

1.3) ; 0,08 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.9) .

249

04 ♦ 0 « 4 4 • ♦ · · · ·

0« •000 ·0 0 • 4 · · « 0 0 0 « · 0 000 0 • 4 0 0

00 4

Příprava probíhá analogicky jako je popsáno v příkladě 11.7) . Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [diohlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 10 : 10 : 1] a následujícím srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 diethyletherem ; výtěžek : 66 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,62 .

Příklad 11.11

N-{N^a^^^a,N^eP^s:’'^^on-bis- [0- (α-L-rhamnosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-a

Edukty : 50 mg (0,19 mmol) uhlohydrát z příkladu

1.21) ; 0,08 mmol aminokyselinový konjugát z příkladu 9.9) .

Příprava probíhá analogicky jako je popsáno v příkladě 11.7) ; výtěžek : 57 % ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselí-, na octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,63 .

Příklad 11,12

N-{N^a-J*f^a,N^eP^sil°ⁿ-bis- [O- (3-0-methyl-|}-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-D-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl58 mg (0,05 mmol) sloučeniny z příkladu 11.7) se suspenduje ve vodě a převede se s jedním ekvivalentem 0,1 N

Příklad 11.13

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl

Roztok sloučeniny 1,25) (62,8 mg, 0,22 mmol) ve směsi dioxanu a vody 1 : 1 (10 ml) se za míchání smísí, s thiofosgenem (33,5 ml, 0,44 mmol) . Po 10 minutách se reakční směs zahustí ve vakuu a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny ve vakuu olejové vývěvy. Získaný isothiokyanát se rozpustí v absolutním dimethylformamidu (10 ml) a smísí se se sloučeninou 9.8) (77,4 mg, 0,1 mmol) a s ethyldiisopropylaminem (0,5 ml) , načež se reakční směs míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, zahustí se ve vakuu a čistí se pomocí mžikové chromatografíe [dichlormethan/methylalkohol /amoniak (25%) 10 : 10 : 1 -> methylalkohol/amoniak (25%) 20 : 1] . Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, která se suspenduje ve vodě (10 ml). Suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,05 N hydroxidem sodným, dokud nevznikne čirý roztok (pH < 10) .

Lyofilisaci filtrátu tohoto roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (39,7 mg, 32 %) ; [α]ρ²θ= +25,8 ° (c = 0,26/H₂0) .

P ř i k 1 a d 11.14

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(4-0-(3’-O-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-b-D-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl φ Φ φ φ φ φ

251 φφφ φ φ · · • · · · φφ φ φ · φ β φ φφφ φφφ φφ ···· Φ Φ · * Φ ν » ·

Sloučenina 1.58) (98,4 mg, 0,22 mmol) se.nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 11.13) ,

S peptidovým konjugátem 9.8) (77,4 mg, 0,1 mmol) . Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (62,5 mg, 40 %) ; [a]_D ²⁰= +12,9 ° (c = 0,26/H₂0) .

Příklad 11.15

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(2-0-methyl-4-0-(3’-O-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-b-D-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl

Sloučenina 1.59^} (101,5 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat stejně, jako je popsáno v příkladě 11.13) , s peptidovým konjugátem 9.8) (77,4 mg, 0,1 mmol) . Čištění se provádí srážením ze směsi methylalkohol/dichlormethan 1 : 1 pomocí diethyletheru a vyvařením s ethylalkoholem. Získá se takto žlutá krystalická látka, která se převede výše uvedeným způsobem na sodnou sůl, přičemž se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (51,1 mg, 32 %) ; [α]ρ²θ= +27,9 ° (c = 0,24/H₂0) .

Příklad 11.16

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-b-D-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl

Sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 11,13) , s peptidovým konjugátem 9.9) (77,4 mg, 0,1 mmol) . Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (77,3

252 • · · fefe·· · · · • · · ·«···· • fe · · fefe fefe fefefe·' ··· fefefe fefe fefefe · fefe fefefe fefe fefefe fefe·· mg, 63 %) ; [α]_β ^2θ= -23,8 ° (c = 0,63/H₂0) .

Příklad 11.17

N-{N^alf^a,N^eP^sil°ⁿ-bis-[O-(3-O-methyl-a-D-mannopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl

Sloučenina 1.40) (62,8 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě 11.13) , s peptidovým konjugátem 9.9) (77,4 mg, 0,1 mmol) . Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (33,6 mg, 27 %) ; [a]_D ²⁰= +0,7 ° (c = 0,28/H₂0) .

Příklad 1.18

T>

N-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(4-0-(3’-O-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fénylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-a, sodná sůl

Sloučenina 1.58) (98,4 mg, 0,22 mmol) se nechá reagovat a čistit stejně, jako je popsáno v příkladě ϊί.13) , s peptidovým konjugátem 9.9) (77,4 mg, 0,1 mmol) . Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (63,0 mg, 41 %) ; [a]_D ²°= -21,8 ° (c = 0,22/H₂0) .

Příklad 12.1 12.15

Obecný vzorec

253

Příklad 12.1

N-{N’-[O-(3-O-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-chinolon-a

447 mg (1,66 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-p-L-fukosidu (příklad 1.2)) se podle předpisu podle příkladu

10.1,a) nejprve převede na olej ovitou látku a potom se ve 40 ml dimethylformamidu nechá reagovat s 1 g (1,66 mmol)

N-(D-alanyl)-chinoloriu-a, trifluoracetátu (příklad 9.1)) za* přítomnosti 568 μΐ ethyldiisopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 2 hodin při teplotě místnosti, načež se zahustí a čistí několikanásobným Srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru. Potom se získaný zbytek na filtru rozmíchá ještě dvakrát s vodou.

Získá se takto 876 mg (66 %) v názvu uvedené sloučeniny; t.t.= 198 °C ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : R_f = 0,63 .

Analogicky jako je popsáno v příkladě 12.1) se z aminokyselinových koríjugátů z příkladů 9.1) , popřípadě 9.2) ,

- 254 • •Φφ «φ vyrobí následující glykokonjugáty :

Příklad 12.2

N-{N’-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thi okarbony1]-alanyl}-chinolon-a

Edukt : 25 mg (0,092 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.2)

Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/ledová kyselina octová 90 : 10 :

1] , srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 1 pomocí diethyletheru a rozmícháním zbytku na filtru s vodou. Výtěžek činí 53 mg (52 %) ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,65 .

Příklad 12.3

Ν-{Ν’ -[O-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-chinolon-a, monosodná sůl

Edukty : 523 mg (1,67 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.10) , 840 mg (1,39 mmol) sloučenina z příkladu 12.1)

Po šestihodinové reakční době se reakční směs zahustí a rozmíchá se s vodou. Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) : 8 : 0,8 _ý později ve stejném systému 10 : 1 : 1] a lyofilisace ze směsi dioxan/voda . Potom se vyjme získaný zbytek do vody a smísí se s jedním ekvivalentem 0,1 N hyd• 4 ·· * 4· ♦·«»··

ΛΓζ · » · * ····» 4 — ZJJ ^— 4 · · 4 4 4 · 4 4 • · ·· ♦ 4 49 4444

4»· ·« 9 ·

444· 49 ··· · «9 9 roxidu sodného a znovu se lyofilisuje. Výtěžek činí 525 mg (45 %) ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : R_f = 0,39 .

Příklad 12,4

N-{N’-[0-(α-L-rhamnosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-chinolon-a,

Edukt ; 20 mg (0,076 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.21)

Čištění se.provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol /ledová kyselina octová 90 : 10 :

1] a srážením z methylalkoholu pomocí diethyletheru. Výtěžek činí 20 mg (34 %) ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] : Rf = 0,42 .

Z částečně chráněných N-(lysyl)-chinolon-a-konjugátů, popřípadě N- (lysyl-D-alanyl)-chinolon-a-konjugátů, sevyrobí následující glykokonjugáty :

Přiklad 12.5

N-{N^a^^^a- [0- (3-O-methyl^-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-N^eP^s^^^on-[fluorenyl-9methoxykarbonyl]-lysyl}-chinolon-a,

12.5.a) N-{N^a^^^a-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy- feny lamino-thiokarbonyl ]-N^eP^si3-^on_[f luorenyl- 9methoxykarbonyl]-lysyl}-chinolon-a,

44

4 4 4

4 4

4

44 4 44

4 4 4 4 4

256

4 4 4 4 • · 44 4444

4 4 4 4

444 44 44 4 mg (0,34 mmol) p-aminofenyl-3-O-methyl-β-L-fukosidu (příklad 1.2)) se podle předpisu podle příkladu

10.1.a) nejprve převede na olejovitou látku a potom se ve 20 ml dimethylformamidu nechá reagovat se 300 mg (0,34 mmol) N-[N^eP^s^^^on-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysylJchinolonu-a, trifluoracetátu (příklad 9.11)) za přítomnosti 116 μΐ ethyldiisopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, načež se zahusti a čistí srážením z dichlormethanu pomocí diethyletheru. ' Potom se získaný zbytek na filtru rozmíchá ještě s vodou a lyofilisuje se ze směsi dioxanu a vody. Získá se takto 290 mg (79 %) v názvu uvedené sloučeniny; DC [acetonitril/voda 10 : 1] : Rf = 0,6 .

12.5) N-{N^alf^a-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a,

288 mg (0,267 mmol) sloučeniny z příkladu 12.5.a) . se rozpustí ve 20 ml dichlormethanu a smísí se s 8 ml pyridinu. Po třicetiminutovém míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zahustí a získaný zbytek se sráží z dichlormethanu pomocí diethyletheru. Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 10 : 10 : 2], Získaný zbytek se rozmíchá s diethyletherem a lyofilisuje se z vody. Získá se takto 90 mg (39 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 1Ů : 10 : 5] : Rf = 0,4 ,

Analogicky jako je popsáno v příkladě 12.5) se z konjugátů z příkladů 9.11) , popřípadě 9.6) , vyrobí následující glykokonjugáty :

»444

Příklad 12.6

N- {N^a^^a- [O- (3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, dvoj sodná sůl

257 • 44 · 4 4 4 • 4 4 4 '4 · * 4 4 ·*··

4 4 4 4 >44 4« 44 4

Edukty : 63 mg (0,2 mmol) uhlohydrát z příkladu 1.10) , 158 mg (0,18 mmol) sloučenina z příkladu 9,11)

Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5 , později ve stejném systému 10 : 10 : 1] a v konečném stupni vícenásobným rozmícháním s methylalkoholem a promytím zbytku na filtru diethyletherem. Výtěžek činí 44 %. Získaný zbytek se suspenduje ve vodě a smíšením se dvěma ekvivalenty 0,1 N hydroxidu sodného se vyrobí dvoj sodná sůl a roztok se lyofilisuje. DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 10 : 3 : 1,5] : R_f * 0,39 .

P ř i k 1 a d 12.7

N- {N^a-'-^^a- [O- (3-0-karboxymethyl-p-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-D-alanyl}-chinolon-a,

Edukty : 147 mg (0,47 mmol) , uhlohydrát z příkladu 1.10) , 448 mg (0,47 mmol) sloučenina z příkladu 9.6)

Čištění meziproduktu se provádí pomocí dvojnásobného srážení ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1:1, pomocí diethyletheru a rozmícháním zbytku na filtru s vodou. Výtěžek činí 92 %. Čištěni konečného stupně se provádí pomocí

4· ·· • 4 4 4

4 4

4 · •444 4

4444

258

44 ·· · 4 4 4 4 * 4 4 4 4 • · 4 444 4 · « « «

44» 44 44 4 mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 10 : 10 : 2] a srážením z dimethylformamidu pomocí diethyletheru. ^T Výtěžek činí 59 % ; DC [acetonitril/voda/ ledová kyselina octová 10 : 3 : 1,5] : Rf = 0,4 .

P ř í k 1 a d 12.8

N-{N^a^^a- [0- (3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, hydrochlorid

Edukty : 62,8 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.25) , 180 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 9.11) „ A

Čištěni meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatograf ie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 - > 7 : 1 -> 2 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (145,7 mg, 67 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] Rf = 0,48 . Potom se stejně, jako je uvedeno v příkladě 4.5) , odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a provede se čištění.. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, kterýse suspenduje ve vodě’ (10 ml) . Tato suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou, dokud nevznikne čirý roztok (pH > 3) . Lyofilisaci zfiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (119,4 mg, 66 %). ; [a]_D ²⁰= +33,8 ° (c = 0,28/H₂O) .

Příklad 12;9

N-(N^a-^L^^a- [0-(3,6-di-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl) 4-hydroxy- -fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, hydrochlorid

259

9» ·· 9 ·« • · · · 99«« «· « ·9· -9 » » « · « •999 9·«· ·«· 9 • · · 999 ·9

9999 99 ««· ·· «· «

Edukty ; 65,9 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.32) , 180 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 9.11)

Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol 10 : l->7 : l->2 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (115,0 mg, 52 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,44 . Potom se stejně, jako je uvedeno v příkladě 4.5) , odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a provede sě čištění. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, který se suspenduje ve vodě (10 ml) . Tato suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou, dokud nevznikne čirý roztok (pH >3) . Lyofilisací zfiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (94,3 mg,

%) ; (a]_D ²⁰= +4.4,2 ° (c = 0,34/H₂0) .

Přiklaď 12.10 '

N-{N^a*'^^a- [0- (3-0-methyl-a-D-mannopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -lysyl}-chinolon-a; ⁷¹ ’ “ hydrochlorid

Edukty : 62,8 mg (0,22 mmol) sloučenina z přikladu 1,40) , 180 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 9.11)

Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatograf ie [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1 - > 5 : 1 -> 1:1], přičemž se získá produkt ve formě žluté krystalické látky (96,7 mg, 44 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol 5 : 1] : Rf = 0,47 . Potom še stejně, jako je uvedeno v příkladě ,4.5) , odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina * 9, 9 9 9 9

0000

260 ♦ 0 00 · ··

0 0 00 0 000 0·· · 0 ·

00 00 β · 000 0

0·· 00« 00

000000 00000 00 0 a provede se čištění. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, který se suspenduje ve vodě (10 ml) .

Tato suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou, dokud nevznikne Čirý roztok (pH > 3) . Lyofilisací zfiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (78,2 mg, 43 %) ;

[a]_D ²⁰ = -157,2 ° (c = 0,30/H₂0) .

Příklad 12.11

N- {N^a^-^^a- [0- (4-0- (3 ’ -O-methyl-b-D-galaktopyranosyl) -b-Dglukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, hydrochlorid

Edukty : 98,4 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.58) , 180 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 9.11)

Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 20 : 10 : 1 - > 10 : 10 : 1 -> methylalkohol/amoniak (25%) 20 : 1] , přičemž se získá produkt ve formě béžové krystalické látky (132,1 mg, 53 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 10 : 10 : 3] : Rf = 0,60 . Potom se stejně, jako je uvedeno v příkladě 4.5) , odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a provede se Čištění. Získá se takto produkt ve formě žluté krystalické látky, který se suspenduje ve vodě (10 ml) . Tato suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou, dokud nevznikne čirý roztok (pH > 3) . Lyofilisací zfiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (90,0 mg, 42 %) ; [a]_D ²⁰ = +192,2 ° (c = 0,27/H₂0) .

·« ·» « ·« · • * · • 4 · 4

4 9

4449 44

261

4* 44 4444

4 * 4 * * * 4 4 4 4 *

4· 44« · * 4 4 4 4 • 44 *» 49 9

Když se vychází z nesubstituovaného chinolonu-a , vyrobí se podle předpisu podle příkladu 12.1) následující glykokonj ugáty :

Příklad 12.12

N- [0- (3-0-karboxymethyl-|&-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-chinolon-a, dvoj sodná sůl

Edukty : 78,5 mg (0,25 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.10 ; 70 mg (0,167 mmol) chinolon-a

Po šestihodinové reakční době se reakční směs zahustí, vyjme se do dimethylformamidu a smíchá se se 4 ml 0,1 N hydroxidu sodného. Čištění se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 :

: 0,5] . Potom se hodnota pH nastaví pomocí 0,1 N hydroxidu sodného na pH 7 a lyofilisuje se. Výtěžek činí 60 mg (44 %) ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 :

: 0,2] : R_f = 0,42 ; FAB-MS : m/z = 773 = M-2Na⁺+3H⁺._

Příklad 12.13

N- [0- (3-0-methyl^-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-chinolon-a

Edukty : 32 mg (0,12 mmol) uhlohydrátu z příkladu 1.2) ; 50 mg (0,12 mmol) chinolon-a

Po dvouhodinové reakční době se čištění provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/ledová «9 9*9*

262 • 9 99 • 9 9 9

9 · « 9 9

9 9

999« 99 kyselina octová 90 : 10 : 1] a srážením ze směsi methan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru. činí 59 mg (51 %) ; DC [acetonitril/voda 10 : 1 0,43 .

•9 · « 9 ♦

9 9 9 *9 • 9 · · · · 9 · »

9. 9 9 ·

999 99 99 9 dichlorVýtěžek ] : R_f =

Příklad 12.14

N-{N^a^^^a-[0-(3-0-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-a, hydróchlorid mg (0,1 mmol) sloučeniny z příkladu 12.5) se vyjme do vody a převede se s jedním ekvivalentem 0,1 N kyseliny chorovodíkové na sůl. Po lyofilisací se získá 88 mg v názvu uvedené sloučeniny.

Příklad 12.15

N- {N^a^^^a- [O- (3-O-methyl^-L-fukosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-diamino-prop ionoy1}-chinolon- a, hydróchlorid

Když se vychází z kyseliny N^ai^^a-(terč.-butoxykarbonyl) -N^^eXa-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-diaminopropionové a chinolonu-a , tak se vyrobí analogicky jako je popsáno v příkladě 12.14) přes více stupňů glykokonjugát 12.15) ;

DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2] :

Rf = 0,3 ...

263

9999 ·4

9999 · · • · • · *

Příklad 13

Obecný vzorec

COOH

Přiklad 13.1

N-{N‘-[0-(3-0-methyl-p-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-chinolon-a

13.1.a) Chínolon b: 4-amino-7-[(3aRS, 4RS,7aSR)-4-amino-l,3,3a,4,7,7a-hexahydro-isoindol-2-yl] - l-cyklopropyl-6-fluor-l, 4'-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3 chinolinkarbonová kyselina

310 mg ,(1 mmol) kyseliny 5-amino-l-cyklopropyl-6,7-difluor-1,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-chinolinkarboxylové se ve směsi 4 ml acetonitrilu a 2 ml dimethylformamidu smísí se 170 ml (1,5 mmol) 1,4-diazabicyklo[2.2.2]oktanu a 152 mg (1,1 mmol) (3aRS, 4RS, 7aSR)-4-amino-1,3,3a,4,7, 7a-hexahydro-isoindolu a reakční směs se zahřívá po dobu jedné hodiny k varu pod zpětným chladičem. Směs se potom ve vakuu zahustí, získaný zbytek se rozmíchá v asi 20 ml vody

000· • 0

0 0

264 »0 00 0 0· 0

0 0

0 0 0

0 0

0000 0* a vysrážený zbytek se odsaje a vysuší se při.teplotě 100 °C ve vakuu. Výtěžek činí 301 mg (70 % teorie) % t.t.= 237 až 239 °C (rozklad) .

13.1.b), N-[D-alanyl]-chinolon-b, trifluoracetát

Když se vychází ze sloučeniny 13.1.a) a N-(terc,-butoxykarbonyl)-D-alaninu, tak se analogicky, jako je popsáno v příkladě 9.1) , vyrobí v názvu uvedená sloučenina.

13.1) Ν-{Ν’ -[0-(3-0-methyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-chinolon-b

Když se vychází ze sloučeniny 13.1.b) nyl-3-0-methyl^-L-fukosidu (příklad 1.2)) logicky, jako je popsáno v příkladě 12.1) , uvedená sloučenina.

a p-aminofe, tak se anavyrobí v názvu

Příklad 14

Obecný vzorec

COOH *· ·Μ·

265

B fl 0 0 0 0

Ch.inolon.-c : kyselina 8-(2-amino-5-methyl-8-azabicyklo[4.3.

0]non-3-en-8-yl)-l-methyl-7-fluoro-5-oxo-5H-thiazolo[3,2-a]chinolin-4-karboxylová

P r í k lad. 14.1

N-{N^alf^a-[O-(3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-c, hydrochlorid

14.1.a) N-[N^eP^síl°ⁿ-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl-lysyl]chinolon-c, trifluoracetát

Edukty : ]^alfa_ (terč.-butoxy kar bony 1) -N^eP^s^^^on-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysin (1,4 g, 3?0 mmol) ; chinolon-c (820 mg, 1,9 mmol)

Výroba meziproduktu se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 9.1.a) . Přesrážením ze směsi ethylalkohol/diethylether se získá produkt ve formě světle žluté krystalické látky (1,37 g, 82 %) ,.ze které se analogicky, jako je popsáno v příkladě.9.1.b) , uvolní sloučenina

14.1.a) .m Získá se takto produkt ve formě oranžové _rkrystalické látky (1,25 g, 74 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30 : 10 : 1] : Rf « 0,7 ; t.t.=

180 °C .

14.1) N-{N^a^'f^a- [0- (3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl) -4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-c, hydrochlorid

Analogicky jako jé popsáno v příkladě 12.5) se nechá reagovat sloučenina 1,25) (62,8 mg, 0,22 mmol) s peptido- 266 φφφφ φφ * φ · φφ φ φ φ φ φφφφ φ φ φ φφφ φ φ φ φ φ φφ φφφφ Φ · Β Φ Φ

ΦΦΦ ΦΦ «Φ Φ vým konjugátem 14.1.a) (178,4 mg, 0,2 mmol) . Čištěni mezistupně se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methy lalkohol/amoniak (25%) 30 : 6 : 1 -> 30 : 10 :

1] . Získá se takto produkt ve formě světle žluté krystalické látky (97,0 mg, 44 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30 : 10 : 1] : Rf = 0,23 . Potom se , jak je popsáno, odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina. Získá se produkt ve formě žluté krystalické látky, která se suspenduje ve vodě (10 ml) , načež se suspense za míchání po kapkách smísí s 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou, dokud se nezíská čirý roztok (pH > 3) . Lyofilisaci přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (75,8 mg, 41 %) ; [a]p²®= +12,5 ° (c =

0,27/H₂O) .

Analogicky jako je popsáno v příkladě 14.1) se z peptidového konjugátu 14.1.a) vyrobí následující glykokonjugáty :

Příklad 14.2

N-{N^a^^a-[0-(3-O-methyl-b-L-fukopyranosyl)-4-hydřoxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-c, hydrochlorid

Edukty : 59,5 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.2), 178 4 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 4.1.a)

Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatografie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30 : 6 .

: 1 - > 30 : 10 : 1], přičemž se získá produkt ve formě světle žluté krystalické látky (146,6 mg, 67 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 30 : 6 : 1] : Rf • · · · to to

267 • · · · to*·· · · **· ··· ·· • · · · ·· toto ·♦· · • · · *·· ·« • •toto toto ··« ·» ·· « =0,48 . Potom se stejně, jako je uvedeno výše, odštěpí fluorenyl-9-raethoxykarbonylová skupina a převede se na hydrochlorid. Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní látky (107,7 mg, 60 %) ; [a]_D ²⁰ = +51,6 ° (c = 0,36/H₂O) .

Příklad 14.3

N-{N^a^^^a-[0-(3-O-karboxymethyl-β-L-fukosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl}-chinolon-c, dvojsodná sůl

Když se vychází ze sloučeniny 14.1.a) , tak se analogicky, jako je popsáno v příkladě 12.6) , vyrobí přes několik stupňů glykokonjugát 14.4) ; FAB-MS : m/z = 911 = M-2Na+3h .

Příklad 14.4

N-{N^a^^a-(0- (3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl}-chinolon-c, hydrochlorid

Konjugát se vyrobí analogicky jako isomer v příkladu

14.2) ; FAB-MS : m/z = 867 = M+H .

Příklad 15

Obecný vzorec

COOH ·* ····

268 ·· ·· • · ♦ · ···» * * * ··· ··* * · · • · *· · · ··*· • · · ··· · · ···· ·· «» ,, ,. ,

Chinolon-d : kyselina 4-(2-amino-8-azabicyklo[4.3.0]ηοη-4-en-8-yl)-l-cyklopropyl-6,8-difluoro-l,4-dihydro-4-oxo-chinolin-3-karboxylová

Příklad 15.1

N- {N^a4-^^a- [0- (3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl) -4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl] -lysyl}-chinolon-d, hydrochlorid

15.1. a) N-[N^eP^si4°ⁿ-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl}-chinolon-d, triíluoracetát ^alfa_A(_terCi-butoxykarbonyl)_N^eP^sil°ⁿ_(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysin (1,4 g, 3,0 mmol) se nechá reagovat, stejně, jako je popsáno v příkladě 9.1.a) , s chinolonem-d, hydrochloridem (1,28 mg, 2,8 mmol) . Srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol 1 : 1 pomocí diethyletheru se získá produkt ve formě béžové krystalické látky (1,97 g, 83 %) , ze které se analogicky, jako je popsáno v příkladě 9.1.b) ,. uvolní sloučenina 15.1) . Získá se takto produkt ve formě béžové krystalické látky (1,7 g, 70 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 28 : 14 : 1] : R_f =0,60 ; t.t.= 215 °C .

15.1) N-{N^a^^^a-[0-(3-0-methyl-b-D-galaktopyranosyl)-4-hydroxy-f enylamino-thiokar bonyl] - lysyl} - chinolon-d, hydrochlorid

Analogicky jako je popsáno v příkladě 12,5) se nechá reagovat sloučenina 1.25) (62,8 mg, 0,22 mmol) s peptidovým konjugátem 15.1.a) (173,2 mg, 0,2 mmol) . Čištění mezistupně se provádí pomocí mžikové chromatografíe [dichlorΦΦ φφφφ «Φ ΦΦ « · Φ φ φ Φ φ φ φ Φ φ φ Φ φφφφ φφ

269 ·* · φ · φ · φ φ φ φ φ · • φ φφ φφ» φ φφφ φ φ φφφ φφ φφ φ methan/methylalkohol/amoniak (25%) 28 : 14 : 1 -> methylalkohol /amoniak (25%) 20 : 1] . Získá se takto produkt ve formě béžové krystalické látky (140,8 mg, 65 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 28 : 14 : 1] : Rf =0,06 . Potom se odštěpí, jak je uvedeno výše, fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina a produkt se čistí. Získá se takto béžová krystalická látka, která se suspenduje ve vodě (10 ml) a suspense se za míchání po kapkách smísí s 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou, dokud nevznikne čirý roztok (pH > 3) . Lyofilisaci přefiltrovaného roztoku se získá produkt ve formě žluté amorfní pevné látky (102,6 mg, 57 %) : [a]_D ²⁰= -49,0 ° (c = 0,26/H₂0) .

Analogicky, jako je popsáno v příkladě 15.1) , se z peptidového konjugátu 15.1.a) vyrobí následující glykokonjugáty :

P ř i k 1 a d 15..2

N- {N³·¹·^³- [0- (4-0- (3 ’ -0-methyl-b-D-galaktopyranosyl) -b-D-glukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-. lysyl}-chinolon-d, hydrochlorid

Edukty : 98,4 mg (0,22 mmol) sloučenina z příkladu 1.58), 173 2 mg (0,2 mmol) peptidového konjugátu z příkladu 15.1.a)

Čištění meziproduktu se provádí pomocí mžikové chromatograf ie [dichlormethan/methylalkohol/amoniak-(25%) 20 : 10 : 1 - > 10 : 10 : 1 -> methylalkohol/amoniak (25%) 20 : i], přičemž se získá produkt ve.formě béžové krystalické látky (106,5 mg, 43 %) ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (25%) 10 : 10 : 3] : Rf = 0,51 ., Potom se stejně, jako je uvedeno výše, odštěpí fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina

- 270

4* 44	4 4 4	•4 4444

4 4 4	4 4 4	4 4 4

• 4 ·	• 4 4	• · i
4444 44	4« 4 « 4	• 5 4

a převede se na hydrochlorid. Získá se takto produkt ve formě žluté amorfní látky (82,0 mg, 39 %) ; [a]p²Q = +22,8 ° (c = 0,29/H₂O) .

Příklad 16

Glykolonjugáty s melfalanem

Obecný vzorec Cl

n = 1,2

Příklad 16.1

N-{N’-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-melfalan

16.1.a) Ň-terc.-butoxykarbonyl-d-alanyl-melfalan

114 mg (0,6 mmol) Ň-terc.-butoxykarbonyl-D-alaninu se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se smísí se 138 mg N* -(3-dimethylaminopropyl)-N-ethyl-karbodiimídu, hydrochloridu a s l-hydroxy-benzotriazolem.

Po 10 minutách se přidá 153 mg melfalanu a reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se

- 271 φ Φ · Φ r « · φ · φ φ φ ··« ····** · φφφ * φ φφφ • φ · · · * * φφ· · ·»· «·· φφ φφφφ φφ φφφ β· ** φ zahustí a rozdělí se mezi dichlormethan a vodu. Organická fáze se promyje, vysuší se pomoci bezvodého síranu sodného, zahustí a potom se čistí pomocí mžikové chromatografie za použití směsi dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 2 : 0,2 -> 15 : 4 : 0,5 . Získá se takto 134 mg (56 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [dichlormethan/methylalkohol/amoniak (17%) 15 : 4 : 0,5] : Rf = 0,45 .

16.1) N-{N’-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-alanyl}-melfalan

Odštěpení ochranné skupiny a populace s uhlohydrátem se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě 9.1) , popřípadě 12.1) ; DC [acetonitril/voda 10 : 1] : Rf = 0,26 ; FAB-MS : m/z = 685 = M+H .

Příklad 16.2

N-(Ν’ -[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-alany1}-melfalan

Tato sloučenina se může vyrobit přes několik stupňů analogicky, jako je popsáno v příkladě 16.1) ; DC [acetonitril/voda 10 : 1] : Rf = 0,2 ; FAB-MS : m/z = 756 = M+H .

Příklad 17

Glykokonjugáty s doxorubicinem (adriamycin)

Obecný vzorec

272 -

9 9'	• «>	• 99	9· <999

	•	9	9 ·	9	9 9 9
•	9	9 9	• 9	9 9	• 9« 9
•	9	9	9 9	*	A 9
		• «	« 9 ·	* 9	• 9 9

17.1

P ř í k lad

Ν-{Ν’ -[O-(3-O-methyl-β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-alanyl-alanylj-doxorubicin

17.1.a) N-[0-(3-0-methyl-P-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-alanyl-alanyl

160 mg (1 mmol) alanyl-alaninu se vyjme do 20 ml směsi dioxan/voda 1:1 a smísí se s 1 ml Hunnigovy base.

1,2 mmol p-aminofeyl-2-0-methyl-p-L-fukosidu (příklad 1.2)) se podle příkladu 10.1.a) nejprve přemění na olej ovitou látku a potom se přidá k roztoku dipeptidu. Reakční směs se nechá míchat po dobu 16 hodin při teplotě místnosti a potom se zahustí a získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatograf ie (acetonitril/voda 15 : 1) . Po zahuštění odpovídajících. frakcí se produkt vysráží ze směsi methylalkohol/ diethylether. Výtěžek činí 267 mg (57 %) .

- 273 • 9 99 * ·· 9 9 9 9 9

9999 · 9 9 · 99

999 9 Β 9 9*9 · 9 9 9 · » 9 · 9 ·

999 9 · 9 99

9999 99 99* 99 99 ·

17.1) Ν-{Ν’-[Ο-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-alanyl-alanyl}doxorubicin mg (0,1 mmol) sloučeniny z příkladu 17.1.a) se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a smísí se se 23,1 mg N’-(3-dimethylaminopropyl)-N-ethyl-karbodiimidu, hydrochloridu a se 21 mg 1-hydroxy-benzotriazolu. Po 5 minutách se přidá 30 mg doxorubicinu a 35 μΐ Hunnigovy base a reakční směs se míchá po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Potom se zahustí a čistí se pomocí mžikové chromatografie (dichlormethan/methylalkohol 88 : 12) . Odpovídající frakce se zahustí a lyofilisují se ze směsi dioxan/voda. Získá se takto 20 mg (40 %) v názvu uvedené sloučeniny ; DC [dichlormethan/methylalkohol 10 : 1] : Rf = 0,17 ; ESI : m/z = 997 = M+H .

Příklad 17.2 .

N-{N^al^^a,N^eP^sí^lon-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl-alanyl}-doxorubicin

17.2.a) N-(N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-0-methyl-3-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -D-lysyl-alanin

580 mg (1,31 mmol) bis-trifluóracetátu D-lysyl-alaninu se nechá reagovat stejně, jako je uvedeno v příkladě

17.1.a) , za přítomnosti 1,3 ml Hunnigovy base se 2,2 ekvivalenty uhlohydrátu z příkladu 1.2) . Po čištění pomocí mžikové chromatografie se směsí acetonitril/voda 10 : 1 se získá 446 mg (41 %) v názvu uvedené sloučeniny.

- 274 «4 · • · · · * 0 · 0

0 · 0

0 · · · 0 ·

4

0·«0 0 4 0 0 0 *

4 0

0

17.2) N-{N^a^^^a,N^eP^s'*'^^on-bis- [O- (3-0-methyl-β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-D-lysyl-alanyl}-doxorubicin

Reakce 59 mg sloučeniny z příkladu 17.2.a) se 20 mg doxorubicinu se provádí stejně, jako je popsáno v příkladě

17.1) , přičemž se získá 15 mg konjugátu ; DC [dichlormethan/methylalkohol 85 : 15] : Rf = 0,43 ; FAB : MS : m/z = 1365 = M+H .

Příklad 18

Glykokonj ugáty s camptothecinem

Obecný vzorec

Příklad 18.1

20-0-{N^a2^^a,N^eP^s^^^on-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)- 275

9*

9 9 9 49 « • 4 4 ' 9 » · 4 9 9 9

4 9 9 >

9 4 9 ·4 9 9 9 94 ···· «9 9 '4 • 4

9· 4

-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin

18.1. a) 20-0-(alanyl)-camtothecin, trifluoracetát

500 mg (1,44 mmol) camptohecinu se rozpustí ve 20 ml dimethylformamidu a potom se smísí s 50 mg 4-dimethylaminopyridinu a s N-terc.-butoxykarbonyl-alanin-N-karboxyanhydridu. Po 3 hodinách se přidá dalších 775 mg N-terc.“butoxykarbonyl-alanin-N-karboxy-anhydridu a.suspense se po dobu 16 hodin zpracovává ultrazvukem. Potom se zahustí, surový produkt se vyjme do 50 ml dichlormethanu a při teplotě 0 °C se přidá do 5 ml kyseliny trifluoroctové. po třicetiminutovém míchání se směs znovu zahustí a produkt se čistí pomocí mžikové chromatografie (acetonitril/voda 20 : 1) . Odpovídající frakce se spojí, zahustí a lyofilisují se ze směsi dioxanu a vody. Získá se takto 712 mg (93 %) v názvu uvedené sloučeniny ; FAB-MS : m/z = 420 = M+H .

18.1. b) 20-0-(lysyl-alanyl)-camptothecin, bis-trifluoracetát.

Konjugát z příkladu 18.1.a) se nechá reagovat podle standardního předpisu s N^a^^^a, N^eP^s^^^ori-bis (terč.-butoxykarbonyl)-lysinem a potom se deblokuje. Získá se takto v názvu uvedená sloučenina v 65% výtěžku.

18.1) 20-0-{N^alfa,N^eP^silon-bis-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin

Analogicky, jako je popsáno v příkladě li.l) , se nechá reagovat p-aminofenyl-3-0-methyl-p-L-fukosid (příklad ·· »♦··

- 276 • 44 4 ·· *··

4

1.2)) s konjugátem z příkladu 18.1.b) ; výtěžek : 40 % ; DC [acetonitril/voda 10 : 1] : Rf = 0,44 . _r

Příklad 18.2

20-0- {N^a'*'^^a- [O- (3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosyl) -4hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin

18.2. a) 20-0-[N^eP^sil°ⁿ-(fluorenyl-9-ineth.oxykarbonyl)-lysyl-alanyl]-camptothecin

Konjugát z příkladu 18.1.a) se podle standardního předpisu nechá reagovat s N^{a la}-(terč.-butoxykarbonyl)-N^eP^sil°ⁿ- (fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysinem a potom se na α-aminofunkci deblokuje. Získá se takto v názvu uvedená sloučenina ve 24% výtěžku ; DC [acetonitril/voda 20 : 1] : Rf = 0,15 .

18.2. b) 20-0-{N^a^^^a-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosyl-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl] -N^eP^s;b^^on-[fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysyl-alanyl]- . -camptothecin

Sloučenina z příkladu 18.1.a) se modifikuje analogicky, jako je popsáno v příkladě 12.6) , popřípadě 12.5) s derivátem uhlohydrátu z příkladu 1.10) . Surový produkt, »

který se dá čistit dígerací s vodou, se lyofilisuje ze směsi dioxan/voda a dá se použít bez další charakterisace v následujícím stupni.

; 2) 20-0-{Ν^Η1^^&- [0- (3-0-karboxymethyl-|J-L-fukopyranosyl) - . -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin

277 fe fefe « · · • fefefe ··*· fefe .··· «fe· «· fefe· · · · · • •fefe ·· fe·· fe· ·*

Konjugát 18.2.b) se deblokuje piperidinem v dimethylformamidu. Po 30 minutách se zahustí a získaný zbytek se digeruje dvakrát s dichlormethanem. Potom se vyjme do dimethylformamidu a sráží se pomocí směsi methylalkohol/diethylether . m Produkt se odsaje, promyje se diethyletherem á lyofilisuje se ze směsi dioxan/voda. Výtěžek činí 86 %; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1:0,2] :

Rf = 0,17 .

Příklad 18.3

20-0-{N^alfa- [0- (3-0-karboxymethyl-β-L-fukopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin, sodná sůl mg (0,074 mmol) konjugátu z příkladu 18.2) se vyjme do směsi dioxan/voda a převede se pomocí ekvivalentu 0,1 N hydroxidu sodného na sodnou sůl. Výtěžek je kvantitativní ; DC [acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 2 0,2] : Rf = 0,17 . .

Analogicky, jako je popsáno v příkladech 18.1) a 18.2), se vyrobí následující glykokonjugáty camptothecinu :

Příklad 18.4,

20-0-{N^a-^^a, N^eP^s^'^on-bis-[0-(S-O-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysylD-alanyl} -camptothecin

278 ·· * 44 •44* 4· 4

4 4 4 4 ♦ 4 · 4 4 4

4 · 4 4 «4*4 4« ·« 4*

4«·4

4 • 4

44* 4

4

Příklad 18.5

20-0-{N^alfa, N^eP^silon-bis-[O-(3-O-methyl-p-L-fukopyranosy1)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-valinyl}-camptothecin

Příklad 18.6

20-0-{N^a^^a-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosy1)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-valinyl}-camptothecin

Příklad 18.7

20-0-{N^a-*-^^a- [0- (3-0-methyl-Q-D-galaktopyranosyl-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-valinyl}-camptothecin

Příklad 18.8

20-0-(N^a^^^a-[O-(3-0-methyl-p-D-galaktopyranosyl-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin

Příklad 18.9

20-0- {N^a^^a- [0- (3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosyl-4-hydroxy-f enylamino-thiokarbonyl]-lysyl-valinyl}-camptothecin, hydrochlorid

Sloučenina 18.6) se převede s jedním ekvivalentem 0,1 N kyseliny chlorovodíkové na hydrochlorid.

279

4« 41 ·

44 4 4 4 4 · • · · 4»4

4 ·. » 4 « 4

4 * · · a

4444 44 444 44

44*4

Příklad 18.10

20-0-{N^alf^a-[O-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosyl-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin, hydrochlorid

Sloučenina 18.2) se převede s jedním ekvivalentem 0,1 .N kyseliny chlorovodíkové na hydrochlorid.

Příklad 18.11

20-0-{N^a^^^a-[0-(3-0-karboxymethyl-p-L-fukopyranosyl-4-hydroxy-f enylamino-thi okarbonyl]-lysyl-fenylalanyl}-camptothecin, hydrochlorid

Příklad 18.12

20-0- {N^al-f^a,N^eP^s^l°ⁿ-bis- [O- (3-0-karboxymethyl-β-L-fukopyranosyl-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin, sodná sůl

P ř í k 1 a d 18.13 '

20-0-{N^a^^^a,N^eP^s-’-''‘^on-bis- [0- (3-0-karboxymethyl-β-L-fukopyranosyl-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-valinyl}-camptothecin, sodná sůl

Příklad 18.14

20-0- {N^a^^^a-bis- [0- (3-0-methyl^-L-fukopyranosyl-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-lysyl-alanyl}-camptothecin, sodná sůl

Claims

W1H«* --- - - -advcKát - 280 í® co PRAHA i. HáEwwa i

44 44 • 4 4 4 4

4 4 4

4 4 4 4

4 · 4

4444 *4 4 « «· 4444

4 4 4 4 4 • 4 4 4 4

PATENTOVÉ

1.

Uhlohydráty modifikovaná cytostatika obecného vzorce I

K - Sp - L - AA1 - AA2 - C (I) ve kterém

K značí nesubstituovaný nebo regioselektivní modifikovaný uhlohydrátový zbytek,

Sp značí popřípadě substituovanou arylenovou nebo alkylenovou skupinu

L značí skupinu .„A nebo

R přičemž R značí atom chloru nebo hydroxyalkylaminoskupinu,

AA1 značí zbytek aminokyseliny v D- nebo L-konfiguraci, který popřípadě může nést ochranné skupiny nebo druhou skupinu K-Sp-L- , ve které K , Sp a L mohou mít významy uvedené výše nezávislé na jiné skupině K-Sp-L- , nebo značí přímou vazbu,

AA2 značí aminokyselinový zbytek v D- nebo L-konfiguraci, který popřípadě může nést druhou skupinu K-Sp-L-, ve které K , Sp a L mohou mít významy uvedené výše

0« ····

281

00 · *0 0 0 0 0 00 « 0 0 0 0 00» 00« ««· 0«*· 0000 ««0

000 ··« 00 0000 00 ··· «0 0« · nezávislé na jiné skupině K-Sp-L- , nebo značí přímou vazbu a

C značí cytotoxický zbytek nebo zbytek cytostatika nebo derivátu cytostatika, který může nést dodatečně aminoskupinu nebo hydroxyskupinu a jejich isomery a soli.
2. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 1 obecného vzorce I , ve kterém

K značí uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II ve kterém

A značí methylovou skupinu, hydroxymethylovou skupinu, karboxyskupinu, jakož i od ní odvozené estery a amidy, alkoxymethylovou skupinu, acyloxymethylovou skupinu nebo karboxyalkyloxymethylovou skupinu, jakož i od ní odvozené estery a amidy, nebo může značit také skupinu CH2-B , přičemž B může být opět přes anomerní centrum připojený uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II a ^3 ^a ^4 značí jednotlivě nebo společně stejně vodíkový atom, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, karboxyalkokyskupinu, jakož i od ní odvozené estery a amidy, ·« 4···

4 4 4 • 4

4 4'

282 • ·

4 4 hydroxyalkoxyskupinu, aminoalkoxyskupinu, acyloxyskupinu, karboxyalkylkarbonyloxyskupinu, sulfátovou skupinu, fosfátovou skupinu, atom halogenu nebo další ve stejném rámci modifikovaný a přes anomerní centrum připojený uhlohydrátový zbytek obecného vzorce II , přičemž R₂ může značit dodatečně také aminoskupinu nebo acylaminoskupinu, nebo dva ze zbytků R₂, R₃, R^ mohou také společně značit epoxyskupinu, a Sp , L , AA1 , ÁA2 a C mají výše uvedený význam, a jejich isomery a soli.
3. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 1 obecného vzorce I , ve kterém

Sp značíarylenový zbytek, který je modifikován v orthometa- nebo para-poloze s K. a L a kromě toho může nést.ještě 1 až 4 další substituenty, které mohou být stejné nebo různé a značí vodíkový atom, methylovou skupinu, methoxyskupinu, hydroxyskupinu, karboxyskupinu, methyloxykarbonylovou skupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, atom halogenu, sulfonylovou skupinu nebo sulfonamidovou skupinu, nebo může také značit lineární nebo rozvětvený alkylenový zbytek.

a K , L , AA1 , AA2 a C mají výše uvedený význam, a jejich isomery a soli.
4. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 1 obecného vzorce I , ve kterém

283 • 4 4» 4 44 44 4444

44 4 4 4 4 4

44« 4' 4 4 4 4 ·

4 4 « 4 ·' 4 44 ·»4 4 • 4 4' 4*4 ·'* «444 44 444 44 44 4

C značí nukleosid, endiin-antibiotikum, cytotoxické peptidové antibiotikum, kyselina chinolonkarboxylovou nebo kyselinu nafthyridonkarboxylovou, bactracylin,
5-fluorouracil, cytosinarabinosid, methotrexat, etoposid, camptothecin, daunomycin, doxorubicin, taxol, vinblastin, víncristin,. dynemicin, calicheamycin, esperamycin, quercetin, suramin, erbstatin, cyclophosphamid, mitomycin C, melphalan, cisplatin, bleomycin, staurosporin nebo jiné antineoplasticky aktivní účinné látky, a K , L , AA1 , AA2 a Sp mají výše uvedený význam, a jejich isomery a soli.

5. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 1 obecného vzorce I , ve kterém

AA1 značí zbytek aminokyseliny, odvozené od lysinu, alaninu, kyseliny asparagové, kyseliny glutamové, glycinu, ornithinu, tyrosinu, valinu nebo šeřinu, v D- nebo L-konfiguraci, který je popřípadě spojen s další skupinou K-Sp-L , nebo značí přímou vazbu, a K , L , C , AA2 a Sp maj i výše uvedený význam, a jejich isomery a soli.
6. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 1 obecného vzorce I , ve kterém

AA2 značí zbytek aminokyseliny, odvozené od lysinu, alaninu, glycinu, ornithinu, kyseliny diaminopropionové

284 • to ·· • to to to to · • · ·1ι· * · · •to·· 4· • to .,»··· • to ·' • ^; · · • toto ··:[· • ·· ·· · nebo šeřinu, v D- nebo L-konfiguraci, který je popřípadě spojen s další skupinou K-Sp-L , nebo značí přímou vazbu, a K , L , C , AA1 a Sp mají výše uvedený význam, a jejich isomery a soli.
7. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 1 obecného vzorce I , ve kterém

C značí zbytek obecného vzorce III

T - Q ve kterém značí zbytek vzorce nebo pricemz

CO-R

R^a značí popřípadě halogenem nebo hydroxyskupinou,

285 φ· ·» * φ φ φ « φ φ φ « φ * φ φ ···» φφ » φφ φφ φφφφ • Φ.φ φ φ φ φ φφφ φ φ · φ- φ φ '· φφφ . φ φ · φ φ φ φφφ. φφ φφ φ jednou nebo dvakrát substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, vinylovou skupinu, popřípadě jedním nebo dvěma atomy fluoru substituovanou cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 uhlíkovými atomy, bicyklo[1.1.1]pent-l-ylovou skupinu, 1,1-dimethylpropargylovou skupinu, 3-oxetanylovou skupinu, methoxyskupinu, aminoskupinu, methylaminoskupinu, dimethylamínoskupinu, popřípadě halogenem, aminoskupinou nebo hydroxyskupinou, jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu, nebo může také společně s R^e tvořit také tam popsaný můstek,

R^ značí hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo nitromethylovou skupinu,.

R^c značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo také může s R^ tvořit tam popsaný můstek,

R° značí vodíkový atom, methylovou skupinu, fluormethylovou skupinu nebo methylenovou skupinu, χΐ značí vodíkový atom, atom halogenu nebo nitroskupinu,

X značí vodíkový atom, atom halogenu, aminoskupinu,, hydroxyskupinu, methoxyskupinu, merkaptoskupinu, methylovou skupinu, halogenmethýlovou skupinu nebo vinylovou skupinu,

Y značí dusíkový atom nebo skupinu C-R^e , přičemž

00 000«

0 0 0'

0 0 «

00 0 «

0· 0'

00 0

286 «0 ·· 00 • •00 00 · «

0 0· ··« 0 0 0i:0ý 0' « 0

0 0 0 · · 0

0000 00 *0 0.' ««

R^e značí vodíkový atom, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu, methylovou skupinu, kyanoskupinu, ethylenovou skupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s R^a mohou tvořit můstek struktury -*o-ch₂-ch-ch₃ , -*s-ch₂ch₂- ,

-*S-CH₂-CH-CH₃ , -*CH₂-CH₂-CH-CH₃ nebo _p

-‘O-Cí^-N-R¹ , přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem Y a přičemž

R značí vodíkový atom, methylovou skupinu nebo formylovou skupinu a

D značí dusíkový atom nebo skupinu C-R® , přičemž i

R® značí vodíkový atom, atom halogenu, trlfluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně s R^c mohou tvořit můstek struktury -*o-ch₂-,, -*nh-ch₂- , -*N(CH₃)-CH₂ ,

-*N(C₃H₅)-CH₂- nebo -*S-CH₂- , přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D , n značí Číslo 1, 2 nebo 3 a

N• 0 ·· • 0 · 0

0 0 · * 0 01, «r • 0 0

0000 «0

- 287 • 0 00 0*1 0 · 0 0

0 0 0 0. 0

0' 0 ·.», 000-0 • 0 · 0

000 00 0 pncemz

R¹ značí skupiny -O- , -N-R¹*· - -CH₉-O- nebo

-CH₂-N-R^k , přičemž k

R značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a

R¹ značí vodíkový atom, alkylovou skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atomy nebo cyklopropylovou skupinu, a K , L , AA1 , AA2 a Sp mají výše uvedený význam, a jejich isomery a soli.
8. Uhlohydráty modifikovaná cytostatika podle nároku 7 obecného vzorce I , ve kterém T -rQ značí zbytek vzorce

CO-R nebo přičemž

R^a značí popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou alkylovou skupinu se 2 až 4 uhlíkovými »4 ·»·»

288

4« 44 » 44 * 4 '4 · ·· 4 4 4 4 4

4 4 4 · 4 4 4 « ·

4 4 4 <4l 4 · 4 4, · 4 · 4

4 4« 4 4 4 ·4

444« 44 ···. 44 ·4 atomy, popřípadě jedním atomem fluoru substituovanou cyklopropylovou skupinu nebo popřípadě fluorem jednou nebo dvakrát substituovanou fenylovou skupinu, nebo společně s R^e může tvořit tam popsaný můstek,

R^ značí hydroxyskupinu nebo alkoxyskupinu s 1 až 2 uhlíkovými atomy,

R^c značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu nebo může společně s Rg tvořit tam popsaný můstek,

X¹· značí atom fluoru, /

O '

X značí vodíkový atom nebo aminoskupinu,

Y značí dusíkový atom nebo skupinu C-R^e , přičemž

R^e značí vodíkový atom, atom fluoru nebo chloru, trifluormethylovou skupinu, methoxyskupinu, difluormethoxyskupinu nebo acetylenovou skupinu, nebo také společně s R^amohou tvořit můstek struktury

-*O-CH₂-CH-CH₃ nebo -*0-CH₂-N-R^f , přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem Y a přičemž

I

R-f značí methylovou skupinu a * υ

D značí dusíkový atom nebo skupinu C-R® , přičemž ^ϊ!,

R§ značí vodíkový atom, atom fluoru nebo í i

• *

289 φφ φφ φ φ φ • φ « φ • · Ι·Μ ·Φ

Φ ·Φ ΦΦ ···· b» « t · »' ·' φφφ · φ · • φ φ · φφφ φ φ · φ φ φ φφφ φφ φφ φ chloru, triíluormethylovou skupinu, metho xyskupinu nebo methylovou skupinu, nebo také společně s R^c mohou tvořit můstek struktury -*O-CH₂- , -*NH-CH₂- , -*N(CH₃)-CH₂ nebo -*S-CH₂- , přičemž * označený atom je spojen s uhlíkovým atomem D a

T . značí zbytek vzorce přičemž

H

R značí skupinu

-N-R^ - , přičemž k .

R značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a

R¹ značí vodíkový atom nebo methylovou skupinu a jejich isomery a soli.
9. Léčivo, obsahující jednu nebo několik sloučenin podle nároků 1 až 8 .
10. Použití sloučenin obecného vzorce I podle nároků 1 až 8 pro výrobu léčiv.